CN103865839B

CN103865839B - 一种应用于水产养殖的微生态制剂

Info

Publication number: CN103865839B
Application number: CN201410014890.1A
Authority: CN
Inventors: 崔云龙
Original assignee: Qingdao Eastsea Pharmaceutical Co ltd
Current assignee: Qingdao Eastsea Pharmaceutical Co ltd
Priority date: 2014-01-03
Filing date: 2014-01-03
Publication date: 2017-12-26
Anticipated expiration: 2034-01-03
Also published as: CN103865839A

Abstract

本发明涉及一种应用于水产养殖的制剂，具体是由花域芽孢杆菌制成的制剂在水产养殖中预防疾病、提高饲料转化率或净化养殖水质中的应用。

Description

一种应用于水产养殖的微生态制剂

技术领域

背景技术

2006年底在全国爆发的大菱鲆药残事件给我们敲响了警钟。欧盟己于2006年全面禁止抗菌药作为饲料添加剂在养殖中的应用。为保证食品安全，美国等发达国家对肉类、海产品等抗菌药残留进行检测。随着中国加入世贸组织，名优产品出口被普遍看好。但由于国内养殖不科学使用抗生素等有害药物的现象严重，大大限制了产品的出口。开发抗菌药替代产品应用于养殖业是目前市场所需要的。

发明内容

本发明的目的是提供一种在水产养殖中预防疾病、提高饲料转化率或净化养殖水质的制剂，该制剂由花域芽孢杆菌制成。

本发明的制剂的制备优选是通过下述步骤实施的，但不局限于此制备工艺，公知的能实现的制备工艺均可以：采取含花域芽孢杆菌的样本，然后将样品置于灭菌瓶内，4℃保存，研究时从中取一定量样品加入18mL灭菌的稀释液中，充分混匀，在无菌操作台内，进行10^-1、10^-2、10^-3、10^-4，10^-5，10^-6，10^-7梯度稀释，取10^-5，10^-6，10^-7三个稀释梯度，分别涂布于花域芽孢杆菌选择性单菌落分离固体培养基上，置于培养箱内，30℃下培养48小时，选择长势良好的单菌落分别接种于花域芽孢杆菌液体扩增培养基中，30℃下扩增培养48小时。将所得培养液离心(12000rpm)分离出菌体后，将菌体冷冻真空干燥，调制出各菌种的干燥菌粉，然后根据《伯杰细菌鉴定手册》、相关细菌鉴定文献或16S rRNA序列对比分析进行花域芽孢杆菌菌种鉴定和毒性试验，将无毒性的花域芽孢杆菌干燥菌粉按需要比例添加辅料制成颗粒剂、片剂、胶囊、散剂、粉剂或液体制剂等各种剂型，或制成药品、兽药、饲料添加剂或水质净化剂，也可加入其他活菌或低聚果糖等低聚糖起到协同作用。

花域芽孢杆菌选择性单菌落分离固体培养基优选但不局限于：纯化水1L，蛋白胨10.0g，牛肉浸膏3.0g，NaCl5.0g，琼脂25.0g，调pH7.2，121℃，灭菌15分钟。

花域芽孢杆菌液体扩增培养基优选但不局限于：纯化水1L，蛋白胨5.0g，酵母粉1.0g，柠檬酸铁0.1g，氯化钠19.45g，氯化镁5.98g，硫酸钠3.24g，氯化钙1.8g，氯化钾0.55g，碳酸钠0.16g，溴化钾0.08g，氯化锶0.034g，硼酸0.022g，硅酸钠0.004g，氟化钠0.0024g，硝酸钠0.0016g，磷酸氢二0.008g，调pH7.4，121℃，灭菌15分钟。

为进一步具体说明本发明，发明人利用上述方法通过花域芽孢杆菌选择性单菌落分离固体培养基分离鉴定出了无毒性的花域芽孢杆菌，本发明所述花域芽孢杆菌并不局限于为说明本发明所述的花域芽孢杆菌，只要无毒性的花域芽孢杆菌均是本发明所述，均在本发明的保护范围内。

本发明所述花域芽孢杆菌优选但不限于花域芽孢杆菌DHH28保藏编号CGMCC8561，花域芽孢杆菌DHH06保藏编号CGMCC8566。

本发明实施说明中优选使用的花域芽孢杆菌的细菌学性质，本发明并不局限本发明所述细菌学性质，只是为说明本发明的优选：

1、为说明本发明，本发明利用上述方法分离的花域芽孢杆菌分别为花域芽孢杆菌DHH28保藏编号CGMCC8561，花域芽孢杆菌DHH06保藏编号CGMCC8566。

2、菌体和菌落形态

显微镜观察：长2.0-2.5微米，宽0.7-0.9微米，长杆状，革兰氏染色阳性，芽孢呈椭圆形中生。

菌落形态呈近圆形，边缘整齐且粘稠湿润，白色不透明。

3、生理生化鉴定

硫化氢：一；吲哚：一；明胶液化：+；硝酸盐还原：一。

4、糖酵解实验鉴定

葡萄糖：+。

本发明所述的花域芽孢杆菌指活生物个体。

本发明是以有效剂量的上述花域芽孢杆菌作为主要活性成份，按照一定的制剂工艺，加入常规的赋形剂、调味剂、崩解剂、防腐剂、润滑剂、湿润剂、黏合剂、溶剂、增稠剂、增溶剂等辅料，制成任何一种适合于使用的剂型，如片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、液体制剂、粉剂等剂型。

本发明所述以有效剂量的上述花域芽孢杆菌作为主要活性成份制成活菌制剂，也可以是上述花域芽孢杆菌与双歧杆菌、链球菌、枯草芽孢杆菌等益生菌中的一种或几种或其他活性成份组合制成活菌制剂，以起到协同作用，提高效果。

本发明所指有效剂量是指以上述花域芽孢杆菌根据上面所述单独或组合作为主要药物活性成份制成的固体活菌制剂包含的总活菌数不能低于1×10⁶CFU／g，一般在1×10⁹CFU／g以上，最高可达到1×10¹¹CFU／g或1×10¹¹CFU／g以上。

本发明所指有效剂量是指以上述花域芽孢杆菌根据上面所述单独或组合作为主要药物活性成份制成的液体活菌制剂包含的总活菌数不能低于1×10⁶CFU／mL，一般在1×10⁹CFU／mL以上，最高可达到1×10¹¹CFU／mL或1×10¹¹CFU／mL以上。

本发明首次公开花域芽孢杆菌在水产养殖中预防疾病、提高饲料转化率或净化养殖水质中的应用，因此含上述花域芽孢杆菌的制剂在上述中的应用均属于本发明的保护范围。

由于本发明首次公开了花域芽孢杆菌作为主要活性成份制成制剂在海参、虾、鲍鱼或鱼等养殖中的应用，因此含上述花域芽孢杆菌的制剂在海参、虾、鲍鱼或鱼等养殖中的应用均属于本发明的保护范围。

本发明所述的花域芽孢杆菌在制成任何一种剂型时，均具有在水产养殖中预防疾病、提高饲料转化率或净化养殖水质的作用。任何剂型，如果其组份中含有上述花域芽孢杆菌成份制备成制剂，在其包装或说明书等标识上或者在其他任何宣传品上只要注明或提示具有在水产养殖中预防疾病、提高饲料转化率或净化养殖水质的作用，则落入本发明的保护范围之内。

本发明所述的花域芽孢杆菌可以制成兽药、饲料添加剂或养殖水质净化剂。将上述花域芽孢杆菌制成的兽药、饲料添加剂或养殖水质净化剂应用于在水产养殖中预防疾病、提高饲料转化率或净化养殖水质，则落入本发明的保护范围之内。

具体实施方式

制备例说明：上述已经对花域芽孢杆菌制剂的制备进行说明，这里通过花域芽孢杆菌DHH28保藏编号CGMCC8561，花域芽孢杆菌DHH06保藏编号CGMCC8566颗粒剂为例进行具体说明，其他花域芽孢杆菌菌种制剂的制备方法本领域技术人员通过本实施例很容易掌握，其他剂型的制备方法本领域技术人员通过本实施很容易掌握，在此不再一一叙述说明。制备方法并不局限于本发明实施例所述，公知的能够达到制备目的的方法均可以，实施例的制备说明只是对本发明的说明，并不是对本发明保护范围的限制。

制备实施例花域芽孢杆菌活菌粉的制备

1菌粉的制备和菌种的鉴定

采取含有花域芽孢杆菌的样品(海参肠道内容物、海水)，然后将样品置于灭菌瓶内，迅速从中取部分样品加入18mL灭菌的稀释液中，充分混匀，在无菌操作台内，进行10^-1、10^-2、10^-3、10^-4，10^-5，10^-6，10^-7梯度稀释，取10^-5，10^-6，10^-7三个稀释梯度，80℃水浴13分钟，涂布于花域芽孢杆菌选择性单菌落分离固体培养基上，置于厌氧罐内，厌氧30℃下培养48小时，选择长势良好的单菌落分别接种到花域芽孢杆菌液体扩增培养基中，厌氧30℃下扩增培养48小时。将所得培养液离心(12000rpm)分离出菌体后，将菌体冷冻真空干燥，调制出干燥菌粉，活菌数均为1×10⁹CFU／g以上，然后根据《伯杰细菌鉴定手册》、相关细菌鉴定文献和分离菌株进行16S rRNA基因测序后用BLAST与GenBank和RDP数据库中的基因序列进行相似性分析，经鉴定为花域芽孢杆菌DHH28保藏编号CGMCC8561，花域芽孢杆菌DHH06保藏编号CGMCC8566。

2毒性试验

2.1动物及分组取30只SPF级别小鼠，6～8周龄，体重15～19g，随机分入花域芽孢杆菌CGMCC8561组、花域芽孢杆菌CGMCC8566组和未给药组，每组10只。

2.2制备菌液将上述不同的花域芽孢杆菌菌粉分别用纯化水调制为含菌数均为1×10⁹CFU／mL的菌液。

2.3方法各花域芽孢杆菌组和未给药组均给予相同的基础饲料，且饲养条件均一致，各花域芽孢杆菌组每天灌服花域芽孢杆菌菌液0.5mL，未给药组每天灌服纯化水0.5mL，饲喂6个月，观察体重及毒性反应。

2.4结果

各组小鼠均未出现异常情况，未发生振颤、痉挛、运动失调、姿态异常，无眼球突出，排尿正常，皮肤、呼吸正常，无死亡情况，且各花域芽孢杆菌组的体重增加显著高于未给药组(P<0.05)，表明花域芽孢杆菌菌种有促进生长发育作用，说明效果良好，未见中毒反应。

3制备成颗粒剂等剂型

根据上述步骤和方法分离鉴定后，经实验检验无毒性，就可将花域芽孢杆菌菌种制成菌粉，然后按照需要添加相关辅料制成各种剂型，优选据花域芽孢杆菌菌粉的活菌数，按比例添加粘合剂、沸石粉等制成颗粒剂，使活菌数不低于1×10⁹CFU／g，然后装袋。

应用效果实施例说明：本发明以花域芽孢杆菌DHH28保藏编号CGMCC8561，花域芽孢杆菌DHH06保藏编号CGMCC8566为代表说明花域芽孢杆菌在水产养殖中的应用效果。

应用效果实施例1：花域芽孢杆菌在海参养殖中的应用

1材料与方法

1.1材料

1.1.1试验产品

花域芽孢杆菌活菌粉剂，活菌数均为1×10⁹CFU／g以上。

1.1.2试验海参

将海参分为3组，每组50头。

1.2方法

1.2.1试验时间为30天。

1.2.2该试验采取海参常规饲料喂养，试验组每天添加花域芽孢杆菌活菌颗粒剂，保证水体浓度为1×10⁷CFU／L以上，对照组不加试验产品。

2试验结果

2.1对消化酶的影响

2.1.1对蛋白酶的影响

结果表明花域芽孢杆菌CGMCC8561组、花域芽孢杆菌CGMCC8566组与对照组相比，分别将蛋白酶的活性提高31.10％、31.31％，差别具有统计学意义(P<0.05)，但试验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。

2.1.2对淀粉酶的影响

结果表明花域芽孢杆菌CGMCC8561组、花域芽孢杆菌CGMCC8566组与对照组相比，分别将淀粉酶的活性提高25.02％、25.11％，差别具有统计学意义(P<0.05)，但试验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2对增强免疫的影响

2.2.1对超氧化物歧化酶的影响

结果表明花域芽孢杆菌CGMCC8561组、花域芽孢杆菌CGMCC8566组与对照组相比，分别将超氧化物歧化酶的活性提高11.16倍、11.61倍，差别具有统计学意义，但试验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2.2对溶菌酶的影响

结果表明花域芽孢杆菌CGMCC8561组、花域芽孢杆菌CGMCC8566组与对照组相比，分别将溶菌酶的活性提高19.03倍、19.10倍，差别具有统计学意义(P<0.05)，但试验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。

2.3对日增重的影响

结果表明花域芽孢杆菌CGMCC8561组、花域芽孢杆菌CGMCC8566组与对照组相比，分别将日增重提高31％、32％，差别具有统计学意义(P<0.05)，但试验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。

2.4死亡率

结果表明花域芽孢杆菌CGMCC8561组、花域芽孢杆菌CGMCC8566组死亡率均为0，低于对照组的3.15％(P<0.05)，但试验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。

2.5对养殖水质的影响

2.5.1对pH的影响

花域芽孢杆菌CGMCC8561组、花域芽孢杆菌CGMCC8566组的pH值在6.9～7.6之间变化，对照组pH值在6.2～7.8之间变化，试验组相比对照组变动幅度小，差异有统计学意义(P<0.05)，但试验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。2.5.2对亚硝酸盐、氨态氮的影响

各试验组亚硝酸盐、氨态氮低于对照组38％(P<0.05)，但试验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。

3结论

花域芽孢杆菌能够提高海参日增重、消化酶活性、超氧化物歧化酶活性、溶菌酶活性，并降低死亡率和改善水质，且试验组之间差异没有统计学意义，说明花域芽孢杆菌具有促进海参的生长，提高海参免疫力，防治海参疾病，提高饲料转化率或净化养殖水质的作用

应用效果实施例2：花域芽孢杆菌在虾养殖中的应用

1材料与方法

1.1材料

1.1.1试验产品

花域芽孢杆菌活菌粉剂，活菌数均为1×10⁹CFU／g以上。

1.1.2试验虾

将虾分为3组，每组90尾，每组设3个重复。

1.2方法

1.2.1试验时间为30天。

1.2.2该试验采取虾常规饲料喂养，试验组每天添加花域芽孢杆菌活菌颗粒剂，保证水体浓度为1×10⁷CFU／L以上，对照组不加试验产品。

2试验结果

2.1对促进生长的影响

结果表明花域芽孢杆菌CGMCC8561组、花域芽孢杆菌CGMCC8566组与对照组相比，分别将体重量提高18.11％、17.89％，差别具有统计学意义(P<0.05)，但试验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2对增强免疫的影响

2.2.1对超氧化物歧化酶的影响

结果表明花域芽孢杆菌CGMCC8561组、花域芽孢杆菌CGMCC8566组与对照组相比，分别将超氧化物歧化酶的活性提高10.65％、10.78％，差别具有统计学意义，但试验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2.2对溶菌酶的影响

结果表明花域芽孢杆菌CGMCC8561组、花域芽孢杆菌CGMCC8566组与对照组相比，分别将溶菌酶的活性提高9.52％、9.48％，差别具有统计学意义(P<0.05)，但试验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。

2.3死亡率

结果表明花域芽孢杆菌CGMCC8561组、花域芽孢杆菌CGMCC8566组死亡率分别为2.12％、2.31％，低于对照组的9.56％(P<0.05)，但试验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。

2.4对料重比的影响

结果表明花域芽孢杆菌CGMCC8561组、花域芽孢杆菌CGMCC8566组料重比分别为1.32、1.33，低于对照组的1.98(P<0.05)，但试验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。

2.5对养殖水质的影响

2.5.1对pH的影响

试验组的pH值在6.6～7.4之间变化，对照组pH值在6.1～7.9之间变化，试验组相比对照组变动幅度小，差异有统计学意义(P<0.05)，但试验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。

2.5.2对亚硝酸盐、氨态氮的影响

各试验组亚硝酸盐、氨态氮低于对照组36％(P<0.05)，但试验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。

3结论

花域芽孢杆菌能够提高虾体重量、超氧化物歧化酶活性、溶菌酶活性，并降低死亡率、料重比和改善水质，且试验组之间差异没有统计学意义，说明花域芽孢杆菌具有促进虾的生长，提高虾免疫力，防治虾疾病，提高饲料转化率或净化养殖水质的作用。

应用效果实施例3：花域芽孢杆菌在鲍鱼养殖中的应用

1材料与方法

1.1材料

1.1.1试验产品

花域芽孢杆菌活菌粉剂，活菌数均为1×10⁹CFU／g以上。

1.1.2试验鲍鱼

将鲍鱼分为3组，每组90头，每组设3个重复。

1.2方法

1.2.1试验时间为30天。

1.2.2该试验采取鲍鱼常规饲料喂养，试验组每天添加花域芽孢杆菌活菌颗粒剂，保证水体浓度为1×10⁷CFU／L以上，对照组不加试验产品。

2试验结果

2.1对促进生长的影响

结果表明花域芽孢杆菌CGMCC8561组、花域芽孢杆菌CGMCC8566组与对照组相比，分别将体重量提高13.32％、13.50％，差别具有统计学意义(P<0.05)，但试验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2对增强免疫的影响

2.2.1对超氧化物歧化酶的影响

结果表明花域芽孢杆菌CGMCC8561组、花域芽孢杆菌CGMCC8566组与对照组相比，分别将超氧化物歧化酶的活性提高15.58％、15.69％，差别具有统计学意义，但试验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2.2对溶菌酶的影响

结果表明花域芽孢杆菌CGMCC8561组、花域芽孢杆菌CGMCC8566组与对照组相比，分别将溶菌酶的活性提高12.23％、12.15％，差别具有统计学意义(P<0.05)，但试验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。

2.3死亡率

结果表明花域芽孢杆菌CGMCC8561组、花域芽孢杆菌CGMCC8566组死亡率分别为2.32％、2.10％，低于对照组的9.29％(P<0.05)，但试验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。

2.4对饲料与体重比的影响

结果表明花域芽孢杆菌CGMCC8561组、花域芽孢杆菌CGMCC8566组料重比分别为1.25、1.33，低于对照组的1.88(P<0.05)，但试验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。

2.5对养殖水质的影响

2.5.1对pH的影响

试验组的pH值在6.5～7.1之间变化，对照组pH值在6.1～7.8之间变化，试验组相比对照组变动幅度小，差异有统计学意义(P<0.05)，但试验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。

2.5.2对亚硝酸盐、氨态氮的影响

各试验组亚硝酸盐、氨态氮低于对照组32％(P<0.05)，但试验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。

3结论

花域芽孢杆菌能够提高鲍鱼体重量、超氧化物歧化酶活性、溶菌酶活性，并降低死亡率、料重比和改善水质，且试验组之间差异没有统计学意义，说明花域芽孢杆菌具有促进鲍鱼的生长，提高鲍鱼免疫力，防治鲍鱼疾病，提高饲料转化率或净化养殖水质的作用。

应用效果实施例4：花域芽孢杆菌在鲈鱼养殖中的应用

1材料与方法

1.1材料

1.1.1试验产品

花域芽孢杆菌活菌粉剂，活菌数均为1×10⁹CFU／g以上。

1.1.2试验鲍鱼

将鲈鱼分为3组，每组90头，每组设3个重复。

1.2方法

1.2.1试验时间为30天。

1.2.2该试验采取鲈鱼常规饲料喂养，试验组每天添加花域芽孢杆菌活菌颗粒剂，保证水体浓度为1×10⁷CFU／L以上，对照组不加试验产品。

2试验结果

2.1对促进生长的影响

结果表明花域芽孢杆菌CGMCC8561组、花域芽孢杆菌CGMCC8566组与对照组相比，分别将体重量提高30.58％、30.69％，差别具有统计学意义(P<0.05)，但试验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2对增强免疫的影响

2.2.1对超氧化物歧化酶的影响

结果表明花域芽孢杆菌CGMCC8561组、花域芽孢杆菌CGMCC8566组与对照组相比，分别将超氧化物歧化酶的活性提高13.51％、13.67％，差别具有统计学意义，但试验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2.2对溶菌酶的影响

结果表明花域芽孢杆菌CGMCC8561组、花域芽孢杆菌CGMCC8566组与对照组相比，分别将溶菌酶的活性提高50.12％、50.32％，差别具有统计学意义(P<0.05)，但试验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。

2.3死亡率

结果表明花域芽孢杆菌CGMCC8561组、花域芽孢杆菌CGMCC8566组死亡率分别为3.12％、3.10％，低于对照组的10.12％(P<0.05)，但试验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。

2.4对饲料与体重比的影响

结果表明花域芽孢杆菌CGMCC8561组、花域芽孢杆菌CGMCC8566组料重比分别为0.96、0.97，低于对照组的1.56(P<0.05)，但试验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。

2.5对养殖水质的影响

2.5.1对pH的影响

试验组的pH值在6.6～7.5之间变化，对照组pH值在6.2～7.8之间变化，试验组相比对照组变动幅度小，差异有统计学意义(P<0.05)，但试验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。

2.5.2对亚硝酸盐、氨态氮的影响

各试验组亚硝酸盐、氨态氮低于对照组35％(P<0.05)，但试验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。

3结论

花域芽孢杆菌能够提高鲈鱼体重量、超氧化物歧化酶活性、溶菌酶活性，并降低死亡率、料重比和改善水质，且试验组之间差异没有统计学意义，说明花域芽孢杆菌具有促进鲈鱼的生长，提高鲈鱼免疫力，防治鲈鱼疾病，提高饲料转化率或净化养殖水质的作用。

应用效果实施例5：花域芽孢杆菌在净化海水中的应用

取海水，分为三份，其中两份海水分别加入花域芽孢杆菌CGMCC8561、花域芽孢杆菌CGMCC8566，保证每天水体浓度为1×10⁷CFU／L以上，另份海水为对照组，不加任何活菌，放置于室温下7天，检测海水，各花域芽孢杆菌组亚硝酸盐、氨态氮低于对照组25％(P<0.05)，但各花域芽孢杆菌组之间差异无统计学意义(P>0.05)。提供了良好的养殖环境，预防疾病的发生。

本发明在实施过程中所使用的微生物菌种已于2013年12月06日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所邮编100101)保藏，共2个下述微生物菌种，但本发明所述的花域芽孢杆菌并不局限于这2微生物菌种。

(1)分类命名：花域芽孢杆菌Bacillus vallismortis，保存编号8561。

(2)分类命名：花域芽孢杆菌Bacillus vallismortis，保存编号8566。

上述2个微生物菌种经该微生物中心检测，检测结果均为存活。

Claims

1.花域芽孢杆菌在制备水产养殖制剂中的应用，其特征在于所述水产养殖制剂通过增强免疫防治疾病、由保藏编号为CGMCC No.8561的花域芽孢杆菌DHH28和/或保藏编号为CGMCC No.8566的花域芽孢杆菌DHHO6制成，其中所述水产养殖为海参、虾、鲍鱼或鱼养殖。

2.按权利要求1所述应用，其特征在于所述水产养殖制剂包括兽药、饲料添加剂。

3.按权利要求1所述应用，其特征在于花域芽孢杆菌指活的生物个体。

4.按权利要求1所述应用，其特征在于所述水产养殖制剂为固体制剂，其包含的总活菌数不低于1×10⁶CFU/g。

5.按权利要求1所述应用，其特征在于所述水产养殖制剂为固体制剂，其包含的总活菌数优选1×10⁹CFU/g及以上。

6.按权利要求1所述应用，其特征在于所述水产养殖制剂为固体制剂，其包含的总活菌数优选1×10¹¹CFU/g及以上。

7.按权利要求1所述应用，其特征在于所述水产养殖制剂为液体制剂，其包含的总活菌数不低于1×10⁶CFU/mL。

8.按权利要求1所述应用，其特征在于所述水产养殖制剂为液体制剂，其包含的总活菌数优选1×10⁹CFU/mL及以上。

9.按权利要求1所述应用，其特征在于所述水产养殖制剂为液体制剂，其包含的总活菌数优选1×10¹¹CFU/mL及以上。