CN103501800B - 美肌促进剂及其利用 - Google Patents

Abstract

本发明的课题在于提供一种对皮肤的干燥、弹性降低、皮肤粗糙等的皮肤状态进行改善和/或促进美肌的美肌促进剂、配合该美肌促进剂而形成且用于促进美肌的口服用组合物、以及用于改善皮肤状态和/或促进美肌的美容方法。提供了作为有效成分而含有胶原蛋白肽和血流改善剂的并用物的美肌促进剂、配合上述美肌促进剂而形成的口服用组合物、口服摄取上述美肌促进剂或上述组合物的方法，血流改善剂特别是从由山茶籽提取物、硫辛酸类、白藜芦醇类以及含有白藜芦醇类的植物提取物组成的组群中选择的一种或两种以上。

Description

美肌促进剂及其利用

技术领域

本发明涉及一种美肌促进剂、配合该美肌促进剂而形成的口服用组合物及其利用方法。其中，美肌促进剂的特征在于含有胶原蛋白肽和血流改善剂作为有效成分而形成，用于对皮肤的皱纹、湿润、紧致、松弛等的皮肤问题进行改善和/或用于形成更加美丽的肌肤。

背景技术

皮肤由表皮、真皮、皮下组织构成。表皮由角质层、颗粒层、棘层及基底层构成，大量含有角化细胞、黑色素细胞等的细胞，起到防止来自外界的有害物质或病原体入侵或抑制水分蒸发的作用。在真皮中与表皮不同，细胞少，被通过纤维芽细胞产生的胶原蛋白或弹性蛋白等的蛋白质、透明质酸或硫酸软骨素等的粘多糖类等细胞外成分所占据，形成基质结构而实现以下作用：支撑细胞及皮肤组织、保持细胞间隙中的水分、保持皮肤的润滑性及柔软性、从来自紫外线、干燥环境、机械性刺激或损伤、微生物感染等的外在因素保护皮肤组织(非专利文献1)。

但是，上述细胞外基质成分受到年龄的增加或日常紫外线的影响而变性、分解，并且根据纤维芽细胞的衰败，其合成量也降低。众所周知，上述细胞外基质的分解及合成量降低，会引起皮肤干燥、皮肤粗糙、弹性或柔软性降低、紧致感或光泽减少、增加皱纹、松弛、暗淡等的各种皮肤问题。因此，为了改善肌肤状态及/或维持增进美化肌肤，希望使肌肤细胞活性化、补充因年龄增加或紫外线减少的成分，并使其进一步增强。特别是，胶原蛋白占皮肤组织的干燥重量的约70％，与皮肤的粘弹性密切相关。并且，透明质酸是对皮肤组织的保湿有重大影响的物质，因此维持、增强皮肤组织中的胶原蛋白及透明质酸是至关重要的。

为了增强以胶原蛋白或透明质酸为代表的皮肤组织中的成分，或者抑制皮肤老化，至今研究了各种成分，目前提出了明胶及/或胶原蛋白的分解物(专利文献1)、N-乙酰葡糖胺(专利文献2)、神经鞘磷脂(专利文献3)、芫花素(专利文献4)、覆盆子(专利文献5)等。

但是，要在生物体内呈现以上材料所具有的生理作用，需要大量地摄取，并且即使经过长期摄取，根据个人效果也并不明确，且还有无法得到预定效果的情况，从实用性上能够呈现有效性的情况较少。因此，需要开发一种能够有效促进上述美肌的材料或组合物。

这里，血流改善剂是指对将血液搬运到生物体的各组织中的机能进行改善的改善剂。血液进行向末梢组织供给氧、营养成分、水分、荷尔蒙等，搬运免疫细胞、排出代谢物、调节体温等，在生物体组织的机能维持中承担了非常重要的角色。众所周知，通过改善血流，可以缓和动脉硬化症状、高血压症状、免疫力下降、脱发症状、疲劳、浮肿、肩酸、畏寒、手脚麻木、黑眼圈或肌肤黯淡等的症状。

作为改善血流的物质，提出有例如银杏叶提取物、红花提取物、胎盘提取物、辣椒提取物、辣椒素、人参精、日本獐牙菜提取物、褐藻素、维他命E及其衍生物(乙酸维生素E等)、泛酸及其盐(钙盐、钠盐等)、甘草酸或甘草次酸及它们的盐(钠盐、钾盐等)、斑叶钟花树提取物、精氨酸及其衍生物(精氨酸谷氨酸等)、烟酸及其衍生物(甲酯等)、迷迭香提取物、生姜提取物、姜烯酚、姜辣素、姜油酮、异黄酮、维他命B₃、姜黄提取物、葡萄的籽、叶、茎等的提取物、芦丁提取物、发酵大米胚芽提取物、当归提取物、大蒜萃取物、山椒提取物等。但是，并没有发现研究关于这些血流改善物质和上述肌肤老化抑制成分的组合对皮肤组织或肌肤状态引起的影响的报告。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2004-123637号公报

专利文献2：日本特开2001-48789号公报

专利文献3：日本特开2005-281257号公报

专利文献4：日本特开2004-137217号公报

专利文献5：日本特开2003-137801号公报

非专利文献

非专利文献1：服部道广，《皮肤护理的科学》，第6页～第14页，(株)裳华房，1997年2月25日发行

发明内容

技术问题

鉴于相关现状，本发明者们以下述内容为课题，即，开发美肌促进剂对肌肤干燥、弹性降低、皮肤粗糙等的肌肤状态进行改善及/或促进美肌，提供配合该美肌促进剂而形成的用于促进美肌的口服用组合物以及用于改善肌肤状态及/或促进美肌的方法。

技术方案

为了解决上述课题，本发明者们对各种多样的材料和美肌的关联性进行反复锐意讨论的结果发现，胶原蛋白肽和具有血流改善作用的物质的组合意外地产生显著效果，尤其在具有血流改善作用的物质中，从山茶籽提取物、硫辛酸类、白藜芦醇类以及含有白藜芦醇类的植物提取物中选择的至少一种与胶原蛋白肽一起使用特别有效。并且，还发现能够将其有效利用于饮食品、饲料、医药品、非药用品等的口服组合物中，从而完成了本发明。

即，本发明的特征在于作为有效成分而仅含有血流改善剂和胶原蛋白肽而形成美肌促进剂，该血流改善剂为从由山茶籽提取物、白藜芦醇类以及含有所述白藜芦醇类的植物提取物构成的组群中选择的一种或两种以上。在该美肌促进剂中，胶原蛋白肽优选为由胶原蛋白、明胶及胶原蛋白和明胶的加水分解物组成的组群中选出的一种或两种以上，上述加水分解物优选为其分子量(平均分子量，以下相同)为约200～约10000。

上述山茶籽提取物是含有通过水和/或低级醇对山茶籽的脱脂粕进行提取处理所得到的水性成分的提取物，优选为含有皂苷类的提取物，该皂苷类尤其优选为从山茶皂苷(Camelliasaponin)A1、山茶皂苷A2、山茶皂苷B1、山茶皂苷B2、山茶皂苷C1、以及山茶皂苷C2中选择的一种或两种以上。

并且，硫辛酸类优选为由硫辛酸(包含外消旋体)、其还原型、它们的盐、它们的酯化物、它们的酰胺、以及它们的环糊精包合物或脂质包覆物组成的组群中选择的一种或两种以上的化合物。

进一步地，白藜芦醇类优选为从由白藜芦醇的单体、或ε-葡萄素等的聚合物及它们的异构体及/或配糖物组成的组群中选出的一种或两种以上，更加优选其形态为葡萄科植物、蓼科植物或豆科植物的提取物。

本发明的其他特征在于，优选作为口服摄取或投与上述美肌促进剂的物质是口服用组合物，且该口服用组合物是饮食品。其他特征还在于，口服摄取胶原蛋白肽和血流改善剂、且用于对肌肤的干燥、弹性降低、皮肤粗糙等的肌肤状态进行改善及/或促进美肌的方法、尤其是美容方法。

有益效果

本发明的美肌促进剂含有胶原蛋白肽和血流改善剂而形成，品质等的稳定性优异，作用于皮肤细胞从而显著提高其增殖，促进胶原蛋白透明质酸等的皮肤成分的产生，恢复、维持、增强皮肤组织中的成分。通过将血流改善剂尤其从山茶籽提取物、硫辛酸类、白藜芦醇类中选择至少一种与胶原蛋白肽一起使用，使其作用增强。由此，产生以下效果，即，对肌肤的干燥、粗糙、弹性或柔软性的降低、光泽的降低、皱纹的增加、松弛的增加、暗淡的增加等的皮肤问题进行预防及/或改善，并进一步促进美肌。通过口服摄取或投与上述美肌促进剂而明显地发现相关的效果。因此，上述美肌促进剂特别是在饮食品、饲料、医药品、非药用品等的领域中，能够直接以上述制剂的形态或配合为以往的各种产品的形态而进行有效利用。并且，本发明提供一种口服摄取胶原蛋白肽和血流改善剂、且用于对肌肤的干燥、弹性降低、皮肤粗糙等的肌肤状态进行改善及/或促进美肌的美容方法。

具体实施方式

以下对本发明进行详细说明。首先，本发明的美肌促进剂其特征在于含有胶原蛋白肽和血流改善剂作为有效成分而形成。

本发明的美肌促进剂中使用的胶原蛋白肽是，将牛、猪、鸡、火鸡、鸵鸟等的畜类的皮、骨、软骨或腱等和金线鱼、鲑鱼、鲨鱼、鳕鱼、罗非鱼、尼罗河鲈鱼、鲤鱼、平鲉鱼、金枪鱼、鲶鱼、鳗鱼等的鱼类的皮、骨、软骨或鳞等作为原料，对通过常用方法进行处理而得到的胶原蛋白或使该胶原蛋白热变性后得到的明胶，通过酸、碱或酶进行加水分解而所得的肽。在此，本发明中所说的胶原蛋白肽包含胶原蛋白肽以及含胶原蛋白肽的提取物，并能够任意使用上述物质。对胶原蛋白肽利用市售品较为简便。

在本发明中，优选使用对胶原蛋白或明胶进行加水分解后的胶原蛋白肽，其分子量是约200～约10000，更加优选为约200～约5000，进一步优选为约200～约1000。

并且，根据本发明的美肌促进剂的血流改善剂，能够使用山茶籽的提取物、硫辛酸类、白藜芦醇类、含有白藜芦醇类的植物提取物、银杏叶提取物、红花提取物、胎盘提取物、辣椒提取物、辣椒素、人参精、日本獐牙菜提取物、褐藻素、维他命E及其衍生物(乙酸维生素E等)、泛酸及其盐(钙盐、钠盐等)、甘草酸或甘草次酸及它们的盐(钠盐、钾盐等)、斑叶钟花树提取物、精氨酸及其衍生物(精氨酸谷氨酸等)、烟酸及其衍生物(甲酯等)、迷迭香提取物、生姜提取物、姜烯酚、姜辣素、姜油酮、异黄酮、维他命B₃、姜黄提取物、葡萄的籽、叶、茎等的提取物、芦丁提取物、发酵大米胚芽提取物、当归提取物、大蒜萃取物、山椒提取物等，且并不限定于上述示例，能够使用一种或两种以上具有血流改善作用的物质。

与此相关地，本发明的发明者们对通过与胶原蛋白肽并用而能够发挥更加强效的美肌促进效果的血流改善剂进行进一步详细研究的结果发现，山茶籽的提取物、硫辛酸类、以及白藜芦醇类或含有白藜芦醇类的植物提取物极为有效。即，本发明优选的美肌促进剂的特点在于，作为有效成分而含有胶原蛋白肽和从由山茶籽提取物、硫辛酸类、白藜芦醇类以及含有白藜芦醇类的植物提取物组成的组群中选择的一种或两种以上而形成。

对涉及本发明的山茶籽提取物进行以下详细描述。山茶指属于山茶科(Theaceae)山茶属(Camellia)的山茶系的山茶(camellia japonica)，作为示例可列举：薮椿(C.japonica var.japonica)、雪山茶(C.japonica subsp.rusticana)、林檎椿(C.japonica var.macrocarpa)、凤凰山茶(C.japonica subsp.hozanensis)、香港山茶(C.hongkongenesis)、云南山茶(C.reticulata)、怒江山茶(C.saluenensis)、西南山茶类(C.pitardii var.pitardii)以及云南山茶类(C.pitardii var.yunnanica)、金花茶(C.nitidissima)、野生山茶(与薮椿同种)、山茶花(与薮椿同种)、屋久岛山茶(与林檎椿同种)等。这些山茶适宜利用在日本列岛、朝鲜半岛、中国山东半岛等地方自然生长或栽培而成的山茶。

为了制造根据本发明的山茶籽提取物，优选地，将上述山茶的果实和/或种子供应到压榨处理和使用了己烷或庚烷等的疏水性有机溶剂或液化二氧化碳、液化丙烷等的液化气体的超临界萃取处理等中，然后将通过常用方法提取油份进行分离的作为残渣的脱脂物(以下称为脱脂粕)作为原料。在此，山茶的果实和/或种子可以是早熟果实及成熟果实中的任意一种，也可以使用它们的种子，但是如果使用成熟果实或其种子，则脱脂物或/和有效成分的获取量会变多，因此优选这种方案。更优选为使用种子。作为优选方式，使用对从成熟果实中得到的种子在1～2周左右、通过日照等进行干燥而成的物质。

根据本发明的山茶籽提取物的活性成分优选为水性成分。该水性成分可以以上述脱脂粕作为原料而通过任意方法制造，但是优选为使用水和/或低级醇而进行提取处理。如果低级醇的碳原子数变大，则导致脱脂粕中的油性物质被提取的倾向会增大，因此低级醇优选为碳原子数最多5左右，能够列举甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇等。在使用碳原子数大的低级醇的情况下，为了抑制提取脱脂粕中的油性成分，可以提高含水率。例如，针对丙醇使含水率为约20～约50质量％，针对丁醇使含水率为约40～约70质量％。优选的提取溶剂为水、甲醇及乙醇、以及其含水醇，更加优选为水或含水率为50质量％以上的含水甲醇或含水乙醇，进一步优选为水。

在提取脱脂粕时，对于1质量份的脱脂粕加入约1～约30倍质量的上述提取溶剂，在常压下或约1～约5个大气压的加压下、常温～约120℃的温度下、约10分钟～约3个小时、根据需要搅拌而进行混合后，常温下冷却后过滤，通过减压干燥、喷雾干燥、冻结干燥等的适当的方法对滤液进行浓缩干燥。也可以对该干燥物进行适当的粉碎处理。这样能够得到作为本发明的山茶种子中含有的水溶性成分的淡黄色至橘黄色的固体。上述提取方法通过对一次提取处理后的提取残渣反复进行相同的提取处理，或在约1～约3个大气压的加压下，且在约100～约130℃下进行提取处理，可以增加本发明的水溶性成分的获取量，并且，对上述提取物进一步进行溶剂分提、通过填充了离子交换树脂、硅胶、活性氧化铝等的吸附剂的管柱的分级、通过液相色谱法分离等的众所周知的手段而能够对活性成分进行浓缩精制。该水溶性成分含有皂苷、单宁酸等。

作为上述水溶性成分中含有的皂苷，可列举如：作为3β-[2-O-β-D-吡喃半乳糖基-3-O-(2-O-β-D-吡喃葡萄糖基-α-L-吡喃阿拉伯糖基)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸氧基]齐墩果-12-烯-16α,22α,28-三醇22-[(Z)-2-甲基-2-丁烯酸酯](3β－[2－O－β－D－ガラクトピラノシル－3－O－(2－O－β－D－グルコピラノシル－α－L－アラビノピラノシル)－β－D－グルコピラヌロノシルオキシ]オレアナ－12－エン－16α，22α，28－トリオール22－[(Z)－2－メチル－2－ブテノアート])的山茶皂苷(Camelliasaponin)A1、作为3β-[2-O-β-D-吡喃半乳糖基-3-O-(2-O-β-D-吡喃葡萄糖基-α-L-吡喃阿拉伯糖基)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸氧基]齐墩果-12-烯-16α,22α,28-三醇22-[(E)-2-甲基-2-丁烯酸酯](3β－[2－O－β－D－ガラクトピラノシル－3－O－(2－O－β－D－グルコピラノシル－α－L－アラビノピラノシル)－β－D－グルコピラヌロノシルオキシ)オレアナ－12－エン－16α，22α，28－トリオール22－[(E)－2－メチル－2－ブテノアート])的山茶皂苷(Camelliasaponin)A2、作为3β-[2-O-β-D-吡喃半乳糖基-3-O-(2-O-β-D-吡喃葡萄糖基-α-L-吡喃阿拉伯糖基)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸氧基]-16α,28-二羟-22α-[[(Z)-2-甲基-2-丁烯酰基]氧基]齐墩果-12-烯-23-醛(3β－[2－O－β－D－ガラクトピラノシル－3－O－(2－O－β－D－グルコピラノシル－α－L－アラビノピラノシル)－β－D－グルコピラヌロノシルオキシ)－16α，28－ジヒドロキシ－22α－[[(Z)－2－メチル－2－ブテノイル]オキシ]オレアナ－12－エン－23－アール)的山茶皂苷(Camelliasaponin)B1、作为3β-[2-O-β-D-吡喃半乳糖基-3-O-(2-O-β-D-吡喃葡萄糖基-α-L-吡喃阿拉伯糖基)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸氧基]-16α,28-二羟-22α-[[(E)-2-甲基-2-丁烯酰基]氧基]齐墩果-12-烯-23-醛(3β－[[2－O－β－D－ガラクトピラノシル－3－O－(2－O－β－D－グルコピラノシル－α－L－アラビノピラノシル)－β－D－グルコピラヌロノシル)オキシ]－16α,28－ジヒドロキシ－22α－[[(E)－2－メチル－2－ブテノイル]オキシ]オレアナ－12－エン－23－アール)的山茶皂苷(Camelliasaponin)B2、作为3β-[2-O-β-D-吡喃半乳糖基-3-O-(2-O-β-D-吡喃葡萄糖基-α-L-吡喃阿拉伯糖基)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸氧基]齐墩果-12-烯-16α,22α,23,28-四醇22-[(Z)-2-甲基-2-丁烯酸酯](3β－[2－O－β－D－ガラクトピラノシル－3－O－(2－O－β－D－グルコピラノシル－α－L－アラビノピラノシル)－β－D－グルコピラヌロノシルオキシ]オレアナ－12－エン－16α，22α，23，28－テトラオール22－[(Z)－2－メチル－2－ブテノアート])的山茶皂苷(Camelliasaponin)C1、以及作为3β-[2-O-β-D-吡喃半乳糖基-3-O-(2-O-β-D-吡喃葡萄糖基-α-L-吡喃阿拉伯糖基)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸氧基]齐墩果-12-烯-16α,22α,23,28-四醇22-[(E)-2-甲基-2-丁烯酸酯](3β－[2－O－β－D－ガラクトピラノシル－3－O－(2－O－β－D－グルコピラノシル－α－L－アラビノピラノシル)－β－D－グルコピラヌロノシルオキシ]オレアナ－12－エン－16α，22α，23，28－テトラオール22－[(E)－2－メチル－2－ブテノアート])的山茶皂苷(Camelliasaponin)C2等。在山茶中特殊地含有这些皂苷类。

并且，根据本发明的硫辛酸类对其来源和种类并无特别限定，可以是对牛或猪的肝脏等脏器的天然提取物，或是对例如乙烯及己二酸酯为起始原料的化学合成品等，以公知的方法进行采取、制造的物质。在此，硫辛酸由于具有不对称碳原子，因此存在光学性质不同的镜像异构体(R-对映体及S-对映体)，但是根据本发明的硫辛酸可以是以上任意一种单独的对映体或上述对映体以任意比例的混合物，并且，还可以是外消旋体(外消旋混合物或外消旋化合物)(RS-硫辛酸)。在工业生产中实施时，利用价格低廉且容易得到的市售的外消旋体较为简便。由于当使用外消旋体时，使本发明所希望的效果更好地体现的倾向较大，因此优选使用外消旋体。

本发明的美肌促进剂中使用的硫辛酸类可以适宜地利用除上述硫辛酸以外的各种衍生物，优选为由硫辛酸、其还原型、它们的盐、它们的酯化物、它们的酰胺、以及它们的环糊精包合物组成的组群中选择一种或两种以上的物质。

作为硫辛酸的还原型的具体示例，可列举如：二氢硫辛酸(ジヒドロチオクト酸)、二氢硫辛酸(ジヒドロリポ酸)、6,8-二巯基辛酸、RS-二氢硫辛酸等。

作为盐可列举如：R-硫辛酸、S-硫辛酸、RS-硫辛酸、R-二氢硫辛酸、S-二氢硫辛酸、RS-二氢硫辛酸等的钾盐、钠盐、钙盐、镁盐等。

作为酯可列举如：使R-硫辛酸、S-硫辛酸、RS-硫辛酸、R-二氢硫辛酸、S-二氢硫辛酸、RS-二氢硫辛酸等与多元醇(乙二醇、丙二醇、丁二醇、新戊二醇、丙三醇、丁四醇、聚甘油等的单体或聚合物)形成的部分酯化产品或完全酯化产品、或与甘油酯类(单甘油酯、甘油二酯、甘油三酯)、或与碳原子数为10～22的高级醇类(正癸醇、月桂醇、肉豆蔻醇、鲸蜡醇、正十八烷醇、异十八烷醇、山萮醇等)形成的单酯等。

作为酰胺可列举如：使R-硫辛酸、S-硫辛酸、RS-硫辛酸、R-二氢硫辛酸、S-二氢硫辛酸、RS-二氢硫辛酸等的酰胺。

作为环糊精包合物可列举如：α－、β－、γ－、或δ－环糊精与上述硫辛酸或其衍生物所形成的包合物。

需要说明的是，本发明并不限定于以上示例。

在本发明中，作为硫辛酸类还包含：从由上述硫辛酸、其还原型、它们的盐、它们的酯化物、它们的酰胺、以及它们的环糊精包合物组成的组群中选择一种或两种以上的结晶、粉末和/或粒子的外表面被脂质类包覆而形成的物质，由于该形态对硫辛酸类的热变质(分解、聚合、变色等)、吸湿或氧化变性进行抑制，因此从实用性上更加优选该形态。

包覆上述硫辛酸类的结晶、粉末和/或粒子外表面的脂质类，可以是在利用本发明的产业领域中允许使用的物质，还能够对一般的食用油脂类或工业用油脂类、脂肪酸甘油酯类、脂肪酸类、脂肪酸酯类、脂肪酸酰胺类、高级醇类、蜡类、固醇类、糖脂质类、磷脂质类等进行单独或组合利用。以上列举的物质中，如果考虑包覆的操作性及包覆物的物性(稳定性、固化性、流动性、熔融性、溶解性等)，优选熔点为约30℃以上的脂质类。更加优选的形态是熔点为约40℃～约70℃的脂质类，进一步优选的形态是熔点为约40℃～约60℃的脂质类。如果低于约30℃，会有包覆物在其使用时无法维持固态的情况、形成块状物或有损流动性的情况出现。反之，如果高于约70℃，制造根据本发明的抑制剂或组合物时，由于加热处理或机械能的影响，会有硫辛酸类自身变坏的危险。

作为这样的脂质类的具体示例，可列举如：大豆油、菜籽油、玉米油、瓜子油、棉籽油、小麦胚芽油、米糠油、芝麻油、橄榄油、红花油、棕榈油、棕仁油、椰子油、亚麻籽油、花生油等的植物系油脂、牛油、猪油、鱼油等的动物系油脂、对以上油脂施加了分提、酯交换、脱色、除臭等的处理中的一种以上的加工油脂、对以上油脂进行了部分或完全加氢处理的各种硬化油、碳原子数为2～22的饱和脂肪酸(醋酸、酪酸、己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、十五烷酸、棕榈酸、硬脂酸、12-羟基硬脂酸、异硬脂酸、花生酸、山嵛酸等)或不饱和脂肪酸(棕榈油酸、油酸、亚油酸、α-亚麻酸γ-亚麻酸、蓖麻油酸、花生油酸、二十碳五烯酸(EPA)、芥酸、二十二碳六烯酸(DHA)等)、以上任意的脂肪酸的盐类(钠盐、钾盐、钙盐、镁盐等)、与一元醇(甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等)形成的酯类、与多元醇(乙二醇、丙二醇、丁二醇、新戊二醇、丙三醇、丁四醇、聚甘油等的非单体的聚合物)形成的部分酯化产品或完全酯化产品、或甘油酯类(单甘油酯、甘油二酯、甘油三酯)、或与碳原子数为10～22的高级醇类(正癸醇、月桂醇、肉豆蔻醇、鲸蜡醇、正十八烷醇、异十八烷醇、山萮醇等)、蜡类(棕梠蜡、米蜡(米糠蜡)、小烛树蜡等的来源于植物的蜡，蜂蜡、鲸蜡、紫胶蜡等来源于动物的蜡，石蜡、微晶蜡等来源于石油的蜡，褐煤蜡、地蜡等的来源于矿物的蜡，聚乙烯蜡、上述脂肪酸类和上述高级醇类形成的酯等的合成蜡)、固醇类(动物性的胆固醇，植物性的菜油甾醇、豆甾醇、谷甾醇等，来源于菌类的麦角甾醇、它们的衍生物)、糖脂质类(单糖基甘油二酯(モノグルコシルジグリセリド)、单半乳糖甘油二酯、双糖基单甘油酯(ジグルコシルモノグリセリド)、双半乳糖单甘油酯(ジガラクトシルモノグリセリド)、单糖基甘油二酯、双半乳糖甘油二酯、蔗糖脂肪酸酯等)。需要说明的是，本发明并非是被上述示例所限定的发明。

在本发明中可使用上述各种脂质类的任意一种或两种以上的混合物，但是优选的脂质类的种类是上述的食用油脂类或工业用油脂类、脂肪酸甘油酯类、脂肪酸酯类以及蜡类，进一步优选为食用油脂类和脂肪酸甘油脂类，并且，从包覆脂质的熔点调整、包覆膜的强化等的观点出发，更加优选为它们与从脂肪酸类、高级醇类、固醇类、糖脂质类或磷脂质类中选出的一种或两种以上物质进行组合的形态。

可以利用公知的方法使硫辛酸类的结晶、粉末和/或粒子的外表面被脂质类包覆。即，可以是以下方法：使用球磨机、冲刷式搅拌机(粉粒体混合机)、V型混合机、高速混合机、高速桨式混合机、加热熔融混合机、超声波过湿加液式混合机、滚筒式混合机、加压压出机等，使硫辛酸类的结晶、粉末和/或粒子与加热熔融的脂质类均匀混合、冷却而使其固化后将其粉碎的方法；将进行了适宜加热后的液态化脂质类喷雾或滴落而对上述形态的硫辛酸类进行包覆的方法；将上述形态的硫辛酸类与粒子状的脂质类进行高速搅拌使其混合，通过使两者接触或碰撞以使粒子状的脂质类均匀附着在硫辛酸类的结晶、粉末和/或粒子的整体表面而进行包覆的方法。在本发明中，上述方法中优选为，将硫辛酸类的结晶、粉末和/或粒子与上述特定熔点以上的粒子状脂质类进行高速搅拌使其混合，通过使两者接触或碰撞以使粒子状的脂质类均匀包覆在上述形态的硫辛酸类的整体表面上的方法。

在进行上述包覆处理时，根据硫辛酸类的结晶、粉末及粒子的形状或尺寸、脂质类的种类及熔点、包覆膜的厚度和性状等的因素，难以将硫辛酸类的结晶、粉末和/或粒子与脂质类的比例规定一致，但大致上，对于1质量份的硫辛酸类的结晶、粉末和/或粒子，脂质类为约0.05质量份～约10质量份,优选为约0.1质量份～约5质量份。如果脂质类小于约0.05质量份，包覆状态不充分而难以体现所希望的效果；反之，如果超过约10质量份，包覆物中的硫辛酸含量少，在利用包覆物的情况下受到配合率等的限制而会出现有损实用价值的情况。

在此，通过上述的硫辛酸类的脂质类的包覆物，与是否存在将其适用于饮料等的水系组合物中的情况无关，更进一步优选为使其外表面被亲水系物质包覆所形成的形态的物质。在此，所说的亲水系物质是指，进一步包覆来自脂质类的包覆物的外表面，能形成与水性物质具有亲和性的被包覆膜的物质，作为具体示例可列举如：多糖类(黄原胶、瓜尔豆胶、罗望子胶、车前子胶等)、淀粉及化工淀粉、酵母细胞壁成分、葡萄糖、甘露聚糖、虫胶、海藻酸钠、明胶、卡拉胶、支链淀粉、羧甲基纤维素、大豆蛋白、乳清蛋白、玉米蛋白等。更加优选为从多糖类、淀粉、酵母细胞壁成分、虫胶、明胶、大豆蛋白、玉米蛋白以及甘露聚糖组成的组群中选择一种或两种以上；进一步优选为从酵母细胞壁成分、虫胶及明胶组成的组群中选择一种或两种以上。

在通过相关的亲水系物质进行包覆时，可以采用按照上述的脂质类的包覆方法的方法。即，使上述亲水系物质适宜地溶解在水、乙醇、其他溶剂中形成液状物，使其附着在预先被脂质类包覆的硫辛酸类的外表面、干燥后能够形成亲水系物质的包覆膜。相关的包覆物形成以亲水系物质为最外层的双重包覆结构体，在将其利用于饮食品、饲料、化妆品、医药品等的情况下，提高与水性的原料或成分的亲和性，能够容易地将它们与水溶解性低的硫辛酸类配制为均质组合物。

在来自如上所述的硫辛酸类的脂质类的包覆物以及使该包覆物进一步被亲水系物质包覆的双重包覆物中，通过在它们中并用下述物质而使其共存，能够更进一步抑制硫辛酸类的热和/或氧化的变性或变差，得到稳定性优异的含硫辛酸类的包覆物，因此在本发明中更加优选相关形态的硫辛酸类，上述物质为：从藤黄果果皮、赤升麻根茎、番石榴叶及它们的提取物(通过水和/或亲水性有机溶剂(乙醇等低级一元醇、丙酮等)的抽提物、其分级物或溶剂分提物或精制物等)、肉毒碱组成的组群中选择一种或两种以上，更加优选为赤升麻根茎的提取物及肉毒碱，最优选为肉毒碱。

使前述的含硫辛酸类的包覆物含有上述的并用原料的形态可以是以下形态中的任意一种，也可以是这些形态的组合，即：(i)在使脂质类包覆在硫辛酸类的结晶、粉末和/或粒子上的包覆物中混合上述并用原料、(ii)在将硫辛酸类的结晶、粉末和/或粒子与上述并用原料进行混合后的物质上包覆脂质类、(iii)在硫辛酸类的结晶、粉末和/或粒子上包覆上述并用原料的一部分未被分散并使其溶解的脂质类、(iv)在硫辛酸类的结晶、粉末和/或粒子上包覆脂质类的包覆物上附着并用原料及上述亲水系物质的溶解液、分散液或乳化液并干燥而进行包覆。在本发明中，(i)及(iv)的形态达到本发明的效果、制造简便、包覆物的使用操作性好，但是(i)及(iii)的形态易于体现更强效的所希望的效果。

在相关的形态中，在硫辛酸类的结晶、粉末和/或粒子上包覆了脂质类或脂质类及亲水系物质的包覆物与上述并用原料的混合比例为：相对于该包覆物1质量份，上述并用的原料为约0.01～约10质量份，更优选为约0.1～约1质量份。在小于约0.01质量份的情况下，无法认可通过混合并用原料能够得到所希望的效果的提高；在超过约10质量份的情况下，上述包覆物中，尤其是使用其的组合物中的硫辛酸含量降低，进而会限制配合含有硫辛酸类组合物的各种产品中的硫辛酸含量，在该产品阶段中会无法期待硫辛酸自身所期望的效果。

根据本发明的白藜芦醇类的来源或种类并非特定的物质，可以是公知的有机化学的方法、或者是使用微生物或酵母等而采取、制造的物质，但是优选为从葡萄科、蓼科或豆科等的植物的果皮、茎、叶、蔓、新芽、种子、花、果实等的部位提取而获得的物质。

作为根据本发明的白藜芦醇类的来源，更加优选的植物为葡萄科葡萄属的植物，其品种并非特别限定的品种，但例如可列举如：阿依仑、阿里高特、瓦得奇、维欧尼、威尔殊雷司令、奥特加、赤霞珠、品丽珠、佳美、佳丽酿、卡尔卡耐卡、佳美娜、西诺玛罗、绿维特利纳、琼瑶浆、珍拿、甲州、歌伦巴、神索、圣格兰蒂诺、桑娇维塞、圣罗兰、莎斯拉、霞多丽、白诗南、施埃博、赛美蓉、长相思、丹拿、茨威格、丹魄、塔明娜、多切朵、丹菲红、莫尼耶皮诺、普萨、富尔民特、蓝葡萄牙人、麝香、马尔维萨、马尔白克、慕斯卡德、米勒-图尔高、幕维得尔、美陇、马里奥慕斯卡特、马斯卡丁、爱慕葡萄、安芸王后、威代尔、巨峰、桃太郎葡萄、苏维翁白(セイヴァル·ブラン)、底拉洼、尼亚加拉、新麝香、黑巴科、白巴科、皮奥奈、蓓蕾玫瑰、藤稔、罗马红宝石、甲斐路、甲州三尺等。它们可以适宜地利用在智利、日本、意大利、法国等地自然生长或栽培的葡萄，可以从上述示例的品种的各部位提取，更加优选从茎、蔓、新芽或花中提取。

根据本发明的白藜芦醇类可以通过任意方法制造，但可以是下述物质中的任意一种：即，使用上述示例的葡萄的茎、蔓、新芽或花自身、或将它们进行干燥、切细、粉碎处理了的物质，并将其在溶剂中浸渍预定时间或使其与加热回流中的提取溶剂接触而得到提取液，将从该提取液中除去溶剂的提取物、对该提取物进行使用硅胶、硅酸镁、离子交换树脂、活性氧化铝、纤维素、活性炭等的吸附剂的柱层析或溶剂分提等的精制处理的精制物、以及将这些通过冻结干燥、喷雾干燥等方法粉末化的物质。使用于食品用途的情况下，从便利性和制造成本的观点出发，优选为，对上述植物的部位进行干燥并适当粉碎后的粉末、通过水或亲水性有机溶剂对该干燥物的细碎片或粉末进行提取后的提取物。并且，在被利用于医药品用途的情况下，优选为上述提取液、提取物或高纯度的精制物。

作为亲水性有机溶剂可列举如：甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇等的低级一元醇类，丙二醇、1,3-丁二醇、丙三醇等的多元醇类，丙酮、甲基乙基酮、乙醚、石油醚、乙酸乙酯以及它们的含水物或混合物。在高效地得到用于产生本发明所希望的效果的提取物，优选为将乙醇、丙酮、乙酸乙酯以及它们的含水物作为提取用溶剂。对含水物的水分含量，例如，在乙醇的情况下，为约1～约99质量％，更优选为约50质量％以下；在丙酮的情况下，为约1～约50质量％，更优选为约10～约30质量％；在乙酸乙酯的情况下，为约80～约99质量％，更优选为约85～约95质量％。如果脱离上述范围，会降低本发明所希望的效果或降低提取物的产量。

根据本发明的白藜芦醇类以以下化合物为对象，即，反式白藜芦醇(白藜芦醇的单体)、或ε-葡萄素(二聚体)、还龄多酚(三聚体)等的聚合物、以及它们的异构体和/或配糖物等的芪类化合物。在此，从由上述植物得到的提取物的情况是以上述芪类化合物作为主要活性成分，有包含槲皮素、鞣花单宁、鞣花酸、矿物类(例如钾、钙、磷、镁)、维他命类的情况。

在本发明的美肌促进剂中，与胶原蛋白肽并用的血流改善剂的含量为该美肌促进剂全体的约0.01～约50质量％，优选为约0.1～约20质量％，更加优选为约0.5～约10质量％。如果低于约0.01质量％，则并用引起的效果小，反之，超过约50质量％的使用也无法期待更好的所希望的效果。需要说明的是，血流改善剂可以单独或组合而任意使用上述公知的物质或提取物，但是优选为从山茶籽提取物、硫辛酸类、白藜芦醇类以及含有白藜芦醇类的植物提取物中选择出的一种或两种以上，进一步优选为包含所有上述物质。在将山茶籽提取物、硫辛酸类、白藜芦醇类以及含有白藜芦醇类的植物提取物之中的两种以上一起使用的情况下的比例(质量基准)大致为：山茶籽提取物/硫辛酸类为20/80～30/70，更加优选为60/40～40/60；山茶籽提取物/白藜芦醇类为99/1～30/70，更加优选为80/20～50/50；硫辛酸类/白藜芦醇类为99/1～30/70，更加优选为80/20～50/50；并且，对山茶籽提取物/硫辛酸类/白藜芦醇类，各自血流改善剂的比例为美肌促进剂的总量的约1质量％以上，更加优选为含有约10质量％以上。需要说明的是，在含有白藜芦醇类的植物提取物的情况下，可以考虑该提取物中的白藜芦醇类的含量而进行设定。

上述美肌促进剂以胶原蛋白肽和血流改善剂(特别是从山茶籽提取物、硫辛酸类、白藜芦醇类以及含有白藜芦醇类的植物提取物中选择出的一种或两种以上)的并用物作为有效成分，可以直接使用，即，形成仅由上述有效成分组成的粉末状、固体状、糊状或液体状的形态，将其利用于饮食品、医药品、非药用品、饲料等的用途中。

本发明的美肌促进剂，还可以适当地并用能够利用其的上述用途中公知的添加物，通过一般方法使其含有而作为口服用组合物进行利用。在此，公知的添加物可以是为了口服摄取而通常使用的物质，例如，能够使用赋形剂、结合剂、崩解剂、混滑剂、湿润剂、流化剂、保存剂、表面活性剂、稳定剂、稀释剂、溶解剂、张度剂、杀菌剂、防腐剂、矫味剂、矫臭剂、着色剂、香料等的添加物质。进一步地，并不限定于上述现有技术文献中记载的物质，也可以与具有美肌作用和/或血流改善作用的已知成分或含该成分的原材料并用。本发明的美肌促进剂还可以作为饮食品、医药品、非药用品、饲料、其他产业领域的各种产品的配合原料的一部分而进行使用。特别优选地，作为用于美容等的产品。

在将本发明的美肌促进剂与公知的添加物并用而作为口服用组合物的情况下的形态，可以是为粉末剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、液剂等的类型的口服用制剂。根据并用原料的种类或含量等的因素，难以对相关的口服用组合物中的上述有效成分的含量规定一致，但大致为0.1～100质量％左右，更加优选为约10～约100质量％左右。如果上述含量低于约0.1质量％，将无法认可本发明所期望的效果。本发明的美肌促进剂通过口服摄取或投与的方法进行利用。在该情况下的本发明的口服用组合物适宜的摄取量或投与量的基准为：以该剂中含有的上述有效成分为基础，成年人(体重50kg)每日约100mg～约100000mg，优选为约500mg～约10000mg，更加优选为约1000mg～约5000mg。

本发明的美肌促进剂能够将其作为饮食品、医药品、非药用品、饲料等的公知的产品的配合原料的一部分而进行利用。以下对实用的产品进行描述，但是本发明并非受到该示例的任何限制。

作为饮食品的具体示例，可列举如：蔬菜汁、果汁饮料、清凉饮料、茶等的饮料类；蛋糕预混产品、面包、蛋糕、巧克力、糖果、橡皮糖、口香糖等的点心类；味噌、酱油、沙司、蛋黄酱、烤肉酱或面汁等的调味料；方便面、乌冬面、荞麦、意大利面等的面类；火腿或香肠等的畜肉鱼肉加工食品；牛奶、酸奶、奶油、黄油、涂味品或乳酪等的粉末状、固体状或液状的乳制品；撒在米饭上的调味食品、汉堡包、炸丸子、海味烹、果酱、果冻、布丁、色拉调料、植物性奶油、麦琪淋等的各种一般加工食品，除此之外还有粉末状、颗粒状、丸剂状、片剂状、软胶囊状、硬胶囊状、糊状或液体状的营养辅助食品、特定保健用品、功能性食品、健康食品、高密度流食或吞咽障碍用食品的治疗食物等。

在制造这些饮食品时，可以使用本发明的美肌促进剂和公知的原材料，或通过本发明的美肌促进剂置换公知的原材料的一部分，按照一般方法而制造即可。例如，根据需要将本发明的美肌促进剂与血糖、葡萄糖、糊精、乳糖、淀粉或其加工物、纤维素粉末等的赋形剂、维他命类、矿物类、动植物或鱼贝类的油脂、蛋白(包括来源于动植物或酵母的蛋白质、其加水分解物等)、糖质、色素、香料、抗氧化剂、表面活性剂、其他食品添加物、含有各种营养功能成分的粉末或抽提物类等的食用素材一起混合而加工为粉末、颗粒、糊状、片剂等的形状，或通过一般方法加工为上述示例的一般加工食品的形态，或通过明胶、海藻酸钠、羧甲基纤维素钠等的包覆剂对混合的粉末或液状物进行包覆而形成胶囊、或加工为饮料(饮品类)的形态，优选作为营养辅助食品或健康食品而进行利用。特别是优选为片剂、胶囊剂、饮剂的形态。需要说明的是，这些饮食品中含有的本发明的美肌促进剂的含量或摄取量与上述口服用组合物的情况大致相同。

对使用本发明的美肌促进剂的医药品及非药用品，可以在不违反本发明技术思想的范围内将药学上允许的公知赋形剂或添加物加入到上述口服美肌促进剂中，通过一般方法进行加工而成片剂、胶囊剂、颗粒剂、粉剂、液剂等的制剂。通过口服而适用于预防或治疗干燥、弹性降低、皮肤粗糙等。需要说明的是，这些医药品及非药用品中含有的本发明的美肌促进剂的含量或摄取量依照上述口服用组合物的情况。

并且，在使本发明的美肌促进剂适用于宠物食品或家畜用饲料中时，与上述饮食品的情况相同，可以配合到公知的各种饲料或饮用水中，或与公知的原材料、添加物一起加工为片剂状、颗粒状、胶囊状等的制剂形态。这些饲料中含有的本发明的美肌促进剂的含量或摄取量与上述口服用组合物的情况大致相同。

实施例

接着，列举实施例对本发明进行详细说明，但是本发明并非受到这些实施例的任何限制。在各示例中，％、份及比例除非特别标注，均为质量基准。

制造例1(胶原蛋白肽(1))

在除去了鲶鱼的肉身及骨的皮1kg中加入5L水，常压下、加热到85℃后适当搅拌1个小时而提取明胶。将明胶溶液冷却至50℃，添加蛋白质分解酶，进行2个小时酶反应。然后，使酶失活，过滤后分离滤液。减压下浓缩滤液，进行冻结干燥及粉碎，得到192g胶原蛋白肽(试料1)。通过一般方法对该胶原蛋白肽进行HPLC分析，平均分子量为约1000。

制造例2(胶原蛋白肽(2))

通过0.1N的盐酸对罗非鱼的鳞进行处理后，以大量水洗净，使其日照干燥。在干燥的鳞1kg中加入8L水，常压下、加热到85℃后适当搅拌1个小时而提取明胶。将明胶溶液冷却至50℃，添加蛋白质分解酶，进行1个小时酶反应。然后，使酶失活，过滤后分离滤液。减压下浓缩滤液、进行冻结干燥及粉碎，得到711g胶原蛋白肽(试料2)。通过一般方法对该胶原蛋白肽进行HPLC分析，平均分子量为约5000。

制造例3(山茶籽提取物(1))

将产于伊豆大岛的薮椿的干燥种子进行粗粉碎蒸煮后，进行压榨得到分离了压榨油的压榨粕。在该脱脂物1kg中加入3L水，常压下、加热到85℃后适当搅拌1个小时后，冷却至室温，过滤后分离滤液。在该过滤残渣中再次加入1L水后进行相同的加热、搅拌、冷却后，进行过滤而采取滤液。将两种滤液合并后进行减压浓缩、冻结干燥及粉碎，得到由水溶性成分组成的粉末状的山茶籽提取物(试料3)170g。通过一般方法对该提取物进行HPLC分析，该提取物含有7.5％山茶皂苷B2、5.8％山茶皂苷C2、2.4％的作为黄酮类的一种的山奈酚。

制造例4(山茶籽提取物(2))

在进行与制造例3相同处理而得到的脱脂物1kg中加入2L含水乙醇(含水率35％)，在80℃下加热回流1个小时后，冷却至室温，过滤后分离滤液。在该过滤残渣中再次加入2L含水乙醇(含水率35％)后进行相同的加热、冷却后，进行过滤而采取滤液。将两种滤液合并后在减压下进行浓缩，冻结干燥及粉碎后，得到含水溶性成分的粉末(试料4)12.1g。对该粉末进行与制造例3相同的HPLC分析后的结果为：含有8.3％山茶皂苷B2、5.9％山茶皂苷C2、2.6％的作为黄酮类的一种的山奈酚。

制造例5(硫辛酸的脂质包覆物)

在330g的结晶粉末的硫辛酸(德国来裕公司(ドイツ·アルツケム社)生产，商品名：ALIPURE(注册商标)，外消旋体)中加入加热熔融的200g氢化油菜籽油(川研精细化学株式会社(川研ファインケミカル(株))生产，熔点：67℃，片状)，充分混合而使其分散均匀后，室温下使其冷却固化。接着，通过高速搅拌机对该固化物进行粉碎，通过100目(泰勒标准网眼，以下相同)进行过筛后得到粒子直径为150μm以下的硫辛酸脂质包覆物(试料5)。

制造例6(硫辛酸的环糊精包合物)

使100g的结晶粉末的硫辛酸(德国来裕公司(ドイツ·アルツケム社)生产，商品名：ALIPURE(注册商标)，外消旋体)在50％的乙醇500mL中溶解，加入800g的α-环糊精(德国瓦克化学公司(ドイツ·ワッカーヘミー社)生产，商品名：CAVAMAX(注册商标)，(R)W6)，适当搅拌后，使其浓缩、喷雾干燥，得到硫辛酸环糊精包合物(试料6)。

制造例7(白藜芦醇提取物)

将葡萄(赤霞珠)的茎的日照干燥物500g通过2L的70％乙醇溶液进行回流提取后，进行过滤而分离滤液。在该过滤残渣中再次加入1L的70％的乙醇进行回流提取，进行过滤而分离滤液。将两种滤液合并后在减压下进行浓缩，在其中加入糊精后进行喷雾干燥，得到24g白藜芦醇提取物(试料7)。通过一般方法将该粉末进行HPLC分析后的结果为：含有6.2％的反式白藜芦醇、6.0％的ε-葡萄素。

实验例1(血流改善作用)

将得到同意参加以下所述实验的被实验者40位(24～65岁，男性20位、女性20位)按照5位一组进行分组，按照二重盲检法进行血流测定实验。首先，使被实验者进入控制温度为24±2℃、湿度为50±10％的恒温恒湿房间，安静等待10分钟。之后，使用激光多普勒仪(百灵威公司(Perimed社)生产，PeriScan PIMII)测定摄取实验试料之前的手背的血流量。接着，在对照组(安慰剂组)中让被试验者同100mL水一起摄取在被着色为被实验者无法根据颜色进行判别的硬胶囊(明胶制，以下相同)中填充了糊精的硬胶囊、在其他组中让被实验者同100mL水一起摄取在上述相同着色的硬胶囊中填充了各试验试料的硬胶囊，在30分钟后、60分钟后再次对手背的血流量进行与上述相同的测定。需要说明的是，将上述山茶籽提取物(试料3、试料4)、市售的硫辛酸、硫辛酸脂质包覆物(试料5)、白藜芦醇提取物(试料7)、市售的银杏叶提取物(优马生物技术公司(ビーエイチエヌ(株))生产)及人参精(丸善制药株式会社(丸善製薬(株))生产)作为了试验试料。

该结果如表1所示。在该表中，数值是以摄取安慰剂及被实验物质之前的值作为100时的相对值，通过平均值±标准偏差进行表示(n＝5，ANOVA分析)。从表1的数据，无法认为摄取了安慰剂的被实验者的手背及头皮的血流量显著变化，但是在摄取了试料3或试料4(山茶籽提取物)、硫辛酸或试料5(硫辛酸脂质包覆物)及试料7(白藜芦醇提取物)的情况下，血流促进作用与摄取了银杏叶提取物或人参精的情况达到相同程度，在摄取30分钟后及60分钟后的两个时间，均确认手背的血流量的值显著地提高。

【表1】

表1 对手背的血流促进(血流量)的影响

实验例2(皮肤纤维芽细胞增殖促进作用)

通过以下方法考察对皮肤纤维芽细胞的增殖的影响。即，使用有盖培养皿(φ10cm)，在添加D-MEM培养基(希格玛公司(シグマ社)生产，低血糖)的10％牛胎儿血清(第一化学药品株式会社(第一化学薬品(株))生产)中播种正常人的成人皮肤纤维芽细胞(仓敷纺织株式会社(クラボウ(株))生产，NHDF(NB)。以下仅称为细胞。)2×10⁵个，培养4天至变成近汇合(约80％密度)。接着，除去培养基，通过5mL的PBS清洗细胞两次，再通过0.02％的EDTA溶液5mL清洗细胞后，用0.25％的胰蛋白酶溶液(NACALAI TESQUE株式会社(ナカライテスク(株))生产)5mL回收细胞，离心分离(4℃，1000rpm，5分钟)后除去上清，通过PBS清洗2次后得到细胞。在上述条件下反复培养该细胞而进行继代培养。

使用96孔细胞培养板(0.32cm²，旭硝子株式会社(旭テクノグラス(株))生产)，在人皮肤纤维芽细胞增殖用低血清培养基(仓敷纺织株式会社(クラボウ(株))生产，在500mL的皮肤纤维芽细胞基础培养基(106S)中添加了10mL的低血清增殖添加剂(LSGS)的培养基)中播种1×10⁴个/孔的上述继代培养细胞，培养24个小时。接着，除去培养基，在添加了使最终浓度为5、10或20μg/mL的各试料的上述人皮肤纤维芽细胞增殖用低血清培养基再继续培养48个小时，之后，加入MTT溶液(使噻唑兰(希格玛公司(シグマ社)生产，试剂)溶解于PBS至浓度为5mg/mL)25μL培养1个小时。通过倾析将培养基完全除去后，加入100μL甲臜溶液(包含25％(v/v)0.45M醋酸缓冲溶液、25％(v/v)N,N-二甲基甲酰胺、10％(w/v)十二烷基硫酸钠。pH值为4.5)进行搅拌。室温下放置1夜后，测定590nm中的吸光度，评价细胞的增殖程度。需要说明的是，在上述方法中，D-MEM培养基及人皮肤纤维芽细胞增殖用低血清培养基是作为添加了青霉素(最终浓度100IU/mL)及链霉素(最终浓度0.1mg/mL)的培养基，细胞培养均在二氧化碳培养箱(37℃，5％CO₂的强化气相下)中进行。在此，将上述胶原蛋白肽(试料1、试料2)、山茶籽提取物(试料3、试料4)、市售的硫辛酸、硫辛酸脂质包覆物(试料5)、硫辛酸的环糊精包合物(试料6)、白藜芦醇提取物(试料7)、市售的银杏叶提取物(优马生物技术公司(ビーエイチエヌ(株))生产)、胡萝卜提取物(丸善制药株式会社(丸善製薬(株))生产)及试料1或试料2和各试料一起使用作为试验试料。

该结果如表2、表3、表4所示。该表中，数值通过以同时实施的对照试验(在不添加试料的情况下)的值作为100时的相对值表示。在表2中，试料1和试料2的最终浓度为50及100μg/mL，并且，将其他试料添加在培养基中，使最终浓度为5及10μg/mL。在表3及表4中，以试料1及试料2为50μg/mL，将其他试料在培养基中各添加为5μg/mL。

从表2的数据同时也认为在各添加浓度中，各试料使皮肤纤维芽细胞增殖的作用弱。

并且，从表3的数据，在试料1中一起使用试料3～7及硫辛酸的情况下，协同地使纤维芽细胞增殖的作用变得明显。通过进一步一起使用试料1和试料3、试料7及硫辛酸，该增殖效果得到增强。但是，对银杏叶提取物及胡萝卜提取物，无法确认提高纤维芽细胞的增殖的作用。

从表4的数据，也确认了提高纤维芽细胞的增殖的作用，但是认为与表3的数据的情况相比，该增殖效果有低的倾向。

需要说明的是，代替试料1或试料2而使用平均分子量为约300的胶原蛋白肽进行同样的实验结果是：根据一起使用物的纤维芽细胞增殖促进效果为与表3的数据的倾向等同或更高(省略数据)。

【表2】

表2 各试料对皮肤纤维芽细胞的增殖的影响

【表3】

表3 与试料1的组合对纤维芽细胞的增殖的影响

与试料1并用的试料	吸光度(590nm)
		对照	100±3
试料3	127±8
		试料4	125±9
试料5	120±3
		试料6	121±4
试料7	122±7
		硫辛酸	122±2
银杏叶提取物	105±1
		人参精	106±3
试料3+硫辛酸	146±8
		试料3+试料7	143±8
硫辛酸+试料7	141±8
		试料3+硫辛酸+试料7	161±8

【表4】

表4 与试料2的组合对纤维芽细胞的增殖的影响

与试料2并用的试料	吸光度(590nm)
		对照	100±3
试料3	118±4
		试料4	117±6
试料5	113±4
		试料6	114±2
试料7	111±5
		硫辛酸	116±5
银杏叶提取物	104±3
		人参精	104±3
试料3+硫辛酸	136±6
		试料3+试料7	132±9
硫辛酸+试料7	128±5
		试料3+硫辛酸+试料7	140±9

通过以上内容，明确了根据本发明的胶原蛋白肽和血流改善剂的组合、特别是通过山茶提取物、硫辛酸类、白藜芦醇具有显著的促进人皮肤纤维芽细胞的增殖的作用。

在此，虽然省略了实验数据，但是在本实验例中，将试料1或试料2与上述三种的血流改善作用成分并用的情况与将其分别单独使用的情况相比，确认了通过人皮肤纤维芽细胞的产生胶原蛋白的能力及产生透明质酸的能力显著提高。

实验例3(对人的美肌实验)

将得到同意参加以下所述实验、且皮肤弹性及水分量低下的志愿者成年女性60名(35岁～55岁，平均年龄：48.6岁)，按5位1组分开，使各组分别摄取各试料，将其持续6周。在摄取试料前后用皮肤粘弹性测定装置(德国，CK公司(Courage+Khazaka社)，商品名：CUTOMETER MPA580(R))对皮肤弹性进行测定，并且，对脸的预定部位的水分用水分测定装置(Corneometer(R)CM825)测定水分相对值。需要说明的是，本实验以上述试料1、试料3、试料7、硫辛酸及它们的组合、与上述相同的银杏叶提取物而进行。摄取量为：试料1是5g、除此以外的试料为200mg，在与试料1组合的情况下，试料1是5g、与除此以外的试料200mg一起使用。

该结果如表5所示。试料摄取前后的皮肤弹性及水分量是：在摄取了除银杏叶提取物以外的各试料的情况下，与摄取前相比较，发现在摄取后有一些改善作用，但与摄取前相比无大的差别。但是，在与试料1分别组合的情况下，皮肤弹性及水分量明显得到改善，明确了根据本发明的胶原蛋白肽和血流改善剂的组合、特别是通过与山茶提取物、硫辛酸类、白藜芦醇一起使用具有显著的促进美肌作用。

【表5】

表5 对人的皮肤的影响 (平均值±标准误差)

试作例1(软胶囊)

在上述的试料1及试料3(混合比：10/1)、试料1及试料7(混合比：10/1)、试料1及硫辛酸(混合比：10/1)、试料1及试料3及试料7及硫辛酸(混合比：10/1/1/1)中的任意一种200份中加入蜂蜡40份及月见草油(英国EFAMOL公司(英国エファモール社))50份，加热混合而均质化后，供给到胶囊填充机中，通过一般方法试作每1粒内容量为250mg的明胶包覆软胶囊制剂。该胶囊制剂能够作为可口服摄取的营养辅助食品、医药品或动物用饲料而被利用。

试作例2(硬胶囊)

将试料1及试料3(混合比：10/1)、试料1及试料4及试料6(混合比：10/3/1)、试料1及试料4及试料7(混合比：10/1/1)、试料1及试料4及试料5及试料7(混合比：10/2/1/1)中的任意一种供给到胶囊填充机中，通过一般方法试作每1粒内容量为200mg的明胶包覆硬胶囊制剂。该胶囊制剂能够作为可口服摄取的营养辅助食品、医药品或动物用饲料而被利用。

试作例3(饮料)

在100mL市售的营养饮品中分别加入：试料1及试料3(混合比：10/1)、试料1及试料7(混合比：10/1)、试料1及硫辛酸(混合比：10/1)各1000mL，充分混合并试作饮料。即使将其在冰箱中保存6个月也不会发现外观及风味异常及不自然。本品能够作为用于改善干燥、弹性降低、皮肤粗糙等的皮肤状态及/或促进美肌的饮料或饮剂而被利用。

产业上的可利用性

含有将胶原蛋白肽与从上述特定的三种血流改善剂中选出的一种或两种以上组成一起使用物作为有效成分的本发明的美肌促进剂，由于通过将其口服摄取或投与而具有改善皮肤的干燥、弹性降低、皮肤粗糙及/或促进美肌的作用，因此能够在饮食品、医药品、非药用品、饲料等的领域进行有效利用。

Claims (12)

1.一种美肌促进剂，其特征在于，作为有效成分而仅含有胶原蛋白肽和血流改善剂，其中，所述血流改善剂为从由白藜芦醇类和含有所述白藜芦醇类的植物提取物构成的组群中选择的一种或两种以上，或者，所述血流改善剂为从由白藜芦醇类和含有所述白藜芦醇类的植物提取物构成的组群中选择的一种或两种以上以及从山茶籽提取物和硫辛酸类构成的组群中选择的一种或两种以上。

2.根据权利要求1所述的美肌促进剂，其特征在于，所述胶原蛋白肽是胶原蛋白或明胶的加水分解物、且平均分子量为200～10000。

3.根据权利要求1所述的美肌促进剂，其特征在于，所述山茶籽提取物是通过水和/或低级醇对山茶籽的脱脂粕进行提取处理所得到的水性成分。

4.根据权利要求1或3所述的美肌促进剂，其特征在于，所述山茶籽提取物为含有皂苷类的提取物，所述皂苷类是含有由山茶皂苷A1、山茶皂苷A2、山茶皂苷B1、山茶皂苷B2、山茶皂苷C1、以及山茶皂苷C2组成的组群中选择的一种或两种以上的皂苷类。

5.根据权利要求1所述的美肌促进剂，其特征在于，所述硫辛酸类为从由硫辛酸、二氢硫辛酸、它们的盐、它们的酯化物、它们的酰胺、以及它们的环糊精包合物或脂质包覆物组成的组群中选择的一种或两种以上。

6.根据权利要求1所述的美肌促进剂，其特征在于，所述硫辛酸类是从由硫辛酸、二氢硫辛酸、它们的盐、它们的酯化物、它们的酰胺、以及它们的环糊精包合物或脂质包覆物组成的组群中选择的一种或两种以上的结晶、粉末和/或粒子的外表面被脂质类包覆而形成的物质。

7.根据权利要求5或6所述的美肌促进剂，其特征在于，所述硫辛酸和/或所述二氢硫辛酸为外消旋体。

8.根据权利要求1所述的美肌促进剂，其特征在于，所述白藜芦醇类是含有从由白藜芦醇、ε-葡萄素、以及它们的异构体和/或配糖物组成的组群中选出的一种或两种以上的组合物。

9.根据权利要求1所述的美肌促进剂，其特征在于，含有所述白藜芦醇类的植物提取物是将属于葡萄科葡萄属的植物的茎、蔓、新芽、或花为原料而得到的物质。

10.一种含有权利要求1～9任意一项中记载的美肌促进剂的口服用组合物，其中，所述血流改善剂为山茶籽提取物以及白藜芦醇类或含有白藜芦醇类的植物提取物。

11.根据权利要求10所述的口服用组合物，其特征在于，所述的口服用组合物为饮食品。

12.一种美容方法，用于对皮肤的干燥、弹性降低、皮肤粗糙的皮肤状态进行改善和/或促进美肌，其特征在于，口服摄取权利要求1～9任意一项中记载的美肌促进剂或权利要求10～11任意一项中记载的口服用组合物，其中，所述美容方法不包括皮肤疾病的治疗方法。