CN1029738C

CN1029738C - 阿扎霉素a的0-甲基衍生物的制备方法

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Publication number: CN1029738C
Application number: CN91104907A
Authority: CN
Inventors: 加里洁拉·科布雷赫尔; 斯洛博丹·乔吉科; 戈吉纳·拉扎斯金
Original assignee: Pliva Farmaceutska Kemijska Prehrambena I Kozmeticka Industrija dd
Current assignee: Smith Grasso Klein Research Center Zagreb Co ltd
Priority date: 1990-07-18
Filing date: 1991-07-18
Publication date: 1995-09-13
Anticipated expiration: 2006-07-18
Also published as: JPH05132497A; UA27105A1; DE69114198T2; HUT59935A; DE69114198D1; EP0467331B1; BG60593B1; SK279075B6; US5250518A; CN1059728A; GR3018330T3; HRP920491B1; HU912408D0; HU211659A9; CS219591A3; PL166379B1; HUT62307A; HU9802439D0; RU2045533C1; HU221803B1

Abstract

本发明涉及式I的阿扎霉素A的O-甲基衍生物，其与无机或有机酸的药用加成盐，制备它们的方法及将它们用于制备抗菌药物制剂，式中各基团定义详见说明书。

Description

本发明涉及新的含氮化物（azalide）系列的半合成大环内酯抗菌素，尤其是阿扎霉素A（Azithromycin A）的O-甲基衍生物和其药用盐，本发明还涉及制备该大环内酯抗菌素和其中间体的方法，及它们在药物制备（尤其是在制备抗微生物药物中）中的用途。

红霉素A是一大环内酯抗菌素，其结构特征为：有一个14员糖苷配基环，在C-9位有一酮基（Bunch R.L.et al，US Patent 2，653，899;9/1953）;目前它已作为大环内酯抗菌素用于治疗人类感染。然而在酸性介质中，红霉素A容易转变为脱水红霉素，其是具有螺缩酮结构的无活性C-6/C-12代谢物（Kurath P et al.，Experientia 1971，27 362）。现已知红霉素A的螺旋环化可通过C-9（S）和C-9（R）的化学转移得到C-9肟（Dzoki

S.et al.J.Org.Chem.1974，39.2492），或通过消除C-9酮基使糖苷配基环扩展（Kobrehel G. etal.US Patent 4，328，334;5/1982）。因此，红霉素A肟经贝克曼重排，拉着还原所得的亚氨醚（Djokic.et.al，J.Chem.Soc.Perkin Trans 1，1986，1881），生成11-氮杂-10-脱氧-10-二氢红霉素A（9-脱氧-9a-氮杂-9a-同-红霉素A），其是含氮化物系列的第一个15员大环内酯抗菌素。可在甲酸存在下通过用修饰的Eschwei ler-Clark步骤（KobrehelG.and DzokicS.，BE Patent 892，357;7/1982）用甲醛将糖苷配基环中新引入的仲氨基甲基化，或通过将该氨基先转变为其N-氧化物来保护，随后将所得N-氧化物进行烷基化和还原（Bright G.，US Patent 4，474，768;10/1984），从而得到N-甲基-11-氮杂-10-脱氧-10-二氢红霉素A（9-脱氧-9a-氮杂-9a-甲基-9a-同-红霉素A）（IUP AC Nomenclature of Organic Chemistry，1979，68-70。459，500-503），其是在阿扎霉素的非专有名称情况下进行临床实验的。与母核抗菌素相比，阿扎霉素除提高在酸性介质中的稳定性外，还显示出：提高了体外抗革兰氏阴性微生物的活性，在组织中有足够高的浓度，其甚至可用于一天剂量试验（Ratshema J.et al，Antimicrob。Agents Chemother.，1987，31，1939）。

进一步讲，现已知红霉素A的C-6/C-12螺旋环合可通过糖苷配基环上C-6位羟基的O-甲基化来抑制（Watanabe y.et al.，US Patent 4，331，803;5/1982），将红霉素A与氯甲酸苄酯反应，随后通过将所得2′-O，3′-N-双（苄氧羰基）-衍生物进行甲基化，消除2′-和3′-位上的保护基，及在还原条件下将3′-甲氨基进行N-甲基化，从而除了生成6-O-甲基红霉素A外，还生成足够量的11-O-甲基和6，11-二-O-甲基红霉素A（Morimoto S.et al.J.Antibiotics 1984，37.187）。可通过C-9酮的肟化和相应取代或未取代苄氧亚氨基衍生物的O-甲基化达到更高的选择性（Morimoto S.et al.US Patent 4，680，368;7/1987）。6-O-甲基-红霉素A是以非专有名称Clarithromycin进行临床试验的。与红霉素A相比，Clarithromylin在体外提高了抗革兰氏阳性微生物的活性（Kirist H.A.et al，Antimicrobial Agents and Chemother.，1989，1419）。

本申请人的检索表明，阿扎霉素A的O-甲基衍生物在本领域中没被披露过。

因此，本发明第一目的是新的式Ⅰ阿扎霉素A的O-甲基衍生物，

其中

Ⅰa R¹＝R²＝CO₂CH₂C₆H₅，R³＝CH₃，R⁴＝R⁵＝H

Ⅰb R¹＝R²＝CO₂CH₂C₆H₅，R³＝R⁴＝CH₃，R⁵＝H

Ⅰc R¹＝R²＝CO₂CH₂C₆H₅，R³＝R⁵＝H，R⁴＝CH₃

Ⅰd R¹＝R²＝CO₂CH₂C₆H₅，R³＝R⁴＝R⁵＝CH₃

Ⅰe R¹＝R²＝R⁴＝R⁵＝H，R³＝CH₃

Ⅰf R¹＝R²＝R⁵＝H，R³＝R⁴＝CH₃

Ⅰg R¹＝R²＝R³＝R⁵＝H，R⁴＝CH₃

Ⅰh R¹＝R²＝H，R³＝R⁴＝R⁵＝CH₃

Ⅰi R¹＝R⁴＝R⁵＝H，R²＝R³＝CH₃

Ⅰj R¹＝R⁵＝H，R²＝R³＝R⁴＝CH₃

Ⅰk R¹＝R³＝R⁵＝H，R²＝R⁴＝CH₃

Ⅰl R¹＝H，R²＝R³＝R⁴＝R⁵＝CH₃

和其药用酸加成盐。

本发明另一主题是制备式（Ⅰ）阿扎霉素A的O-甲基衍生物和其药用酸加成盐的方法，其中式Ⅱ的阿扎霉素或其二水水物（Djokic S.et al，J.Chem.Reserchis）1988，152-153;（M）1988 1239-12621）

（其中Ⅱa，R¹＝H，R²＝CH₃），在过量的适宜碱（如碳酸氢钠）存在下，于反应惰性溶性（如苯）中，在25°-60℃与氯甲酸苄酯反应3-24小时，随后将C-6，C-11和C-4″位羟基进行O-甲基化，生成新的，未被披露过的中间体式Ⅱb2′-O，3′-N-双-（苄氧羰基）-N-去甲基-阿扎霉素，其中R¹＝R²＝CO₂CH₂C₆H₅，将式（Ⅱb）与1-18摩尔过量的适宜甲基化试剂，如甲基碘，硫酸二甲酯，甲磺酸甲酯或对-甲苯磺酸甲酯，在适宜碱，如氢化钠，氢氧化钾或氢氧化钠水溶液，存在下，于适宜反应溶剂如二甲亚砜或N，N-二甲基甲酰胺，或它们与反应惰性溶剂（如四氢呋喃，乙腈，乙酸乙酯，1，2-二甲氧乙烷）的混合物中，在0℃-室温反应3-30小时，生成式Ⅰ的O-甲基-2′-O，3′-N-双-（苄氧羰基）-N-去甲基-阿扎霉素A，其中

Ⅰa R¹＝R²＝CO₂CH₂C₆H₅，R³＝CH₃，R⁴＝R⁵＝H

Ⅰb R¹＝R²＝CO₂CH₂C₆H₅，R³＝R⁴＝CH₃，R⁵＝H

Ⅰc R¹＝R²＝CO₂CH₂C₆H₅，R³＝R⁵＝H，R⁴＝CH₃

Ⅰd R¹＝R²＝CO₂CH₂C₆H₅，R³＝R⁴＝R⁵＝CH₃

将所得式（Ⅰ）化合物选择性进行

A）在硅胶柱（硅胶60，Merck Co.，70-230 mesh）上用溶剂系统CH₂cl₂/CH₃OH/NH₄OH（90∶9∶0.5）进行分离，生成色谱均一的Rf为0.660的（Ⅰa），Rf为0.811的（Ⅰb），Rf为0.843的（Ⅰc）和Rf为0.881的（Ⅰd），随后消除（Ⅰa）-（Ⅰd）的2′-和3′-位上的保护用苄氧羰基，方法是：在低级醇，如甲醇或乙醇，溶液中，在催化剂如钯黑或钯炭存在下，在氢气中，1-20巴压力下，于室温，伴随搅拌氢解2-10小时，滤掉催化剂，通过常规PH梯度提取法（PH5.0-PH9.0），由含适宜疏水溶剂（如氯仿，二氯甲烷，乙酸乙酯等）的水分离产物，结果得到式（Ⅰ）的O-甲基-N-去甲基-阿扎霉素A衍生物，其中

Ⅰe R¹＝R²＝R⁴＝R⁵＝H，R³＝CH₃

Ⅰf R¹＝R²＝R⁵＝H，R³＝R⁴＝CH₃

Ⅰg R¹＝R²＝R³＝R⁵＝H，R⁴＝CH₃

Ⅰh R¹＝R²＝H，R³＝R⁴＝R⁵＝CH₃

然后在等量或二倍量甲酸（98-100%）或另一氢离子源存在下，在选自卤代烃如氯仿，或低级醇如甲醇或乙醇，低级酮或丙酮的反应惰性溶剂中，在反应混合物的回流温度下，用1-3当量甲醛（37%）将3′-甲氨基进行还原N-甲基化2-8小时，通过常规PH梯度提取法（PH5.0-PH9.0）分离产物，得到式Ⅰ的O-甲基-阿扎霉素A衍生物，其中

Ⅰi R¹＝R⁴＝R⁵＝H，R²＝R³＝CH₃

Ⅰj R¹＝R⁵＝H，R²＝R³＝R⁴＝CH₃

Ⅰk R¹＝R³＝R⁵＝H，R²＝R⁴＝CH₃

Ⅰl R¹＝H，R²＝R³＝R⁴＝R⁵＝CH₃

或

B）如A）中所述通过氢解消除2′-和3′-位保护用的苄氧羰基，生成6-O-甲基-（Ⅰe），6，11-二-O-甲基（Ⅰf），11-O-甲基-（Ⅰg）和6，11，4″-三-O-甲基-N-脱甲基阿扎霉素A（Ⅰh）的混合物，然后如A）中所述，在甲酸（98-100%）或一些其它氢原子源的存在下，用甲醛（37%）进行还原N-甲基化，生成6-O-甲基-（Ⅰi），6-11-二-O-甲基-（Ⅰj），11-O-甲基-（Ⅰk）和6，11，4″-三-O-甲基-阿扎霉素A（Ⅰl）的混合物，将该混合物在硅胶柱上用溶剂系统CH₂cl₂/CH₃OH/NH₄OH（90∶9∶0.5）进行分离，生成色谱均一的（TLc，同一溶剂系统）Rf为0.346的阿扎霉素A（Ⅰi）的O-甲基衍生物，Rf 为0.393的（Ⅰj），Rf为0.428的（Ⅰk）和Rf为0.456的（Ⅰl）。

式（Ⅰ）化合物的药用加成盐是通过将阿扎霉素A（Ⅰ）的O-甲基衍生物与至少一等摩尔量的相应有机酸或无机酸在反应惰性溶剂中反应制备的，有机或无机酸选自氯化氢，碘化氢，硫酸，磷酸，乙酸，丙酸，三氟乙酸，马来酸，柠檬酸，乙基琥珀酸，琥珀酸，甲磺酸，苯磺酸，对甲苯磺酸，十二烷基磺酸等。如加成盐在所用反应惰性溶剂中不溶，则可通过过滤分离，或通过非溶剂法，最常采用的是冷冻干燥，来产生沉淀分离。

式（Ⅰi）-（Ⅰl）的阿扎霉素A的O-甲基衍生物和它们的药用加成盐具有很强的抗微生物活性。6-O-甲基-阿扎霉素A（Ⅰi）的体外初始抗菌活性是通过与红霉素A比较，用一系列革兰氏阳性和阴性试验菌及临床分离出的菌测定的。该测定是用“试管稀释”法进行的，在研究中，采用“标准菌株的脑心肉汤”中24小时培养及来自临床样品的新分离的菌株。结果用最小抑制浓度或杀菌浓度（分别为MIC和MBC，ug/ml）表示并表示在表1和2中，结果表明，与红霉素A比较，6-O-甲基-阿扎霉素A提高了抗所研究菌株的活性。

表3是与阿扎霉素比较，6-O-甲基-（Ⅰi），6，11-二-O-甲基-（Ⅰi），11-O-甲基-（Ⅰk）和6，11，4″-三-氧-甲基-阿扎霉素A（Ⅰl）的体外试验。在一系列标准菌株上测定的最小抑制浓度（MIC;ug/ml）表明：6-O-甲基-阿扎霉素A（Ⅰi）对枯草杆菌NCTC8241和腾黄八叠球菌ATCC9341的活性是阿扎霉素的二倍，对黄色微球菌ATCC6538P的活性是阿扎霉素的四倍。11-O-甲基-阿扎霉素A（Ⅰk）也显示出更高的活性。因此，本发明化合物与其母体抗菌素相比，对大多数试验中的菌株的敏感性是母体化合物的2-4倍。

本发明再一主题是提供含有效药用剂量的本发明新化合物的药物。化合物（Ⅰi）-（Ⅰl）及它们的药用盐可用做治疗剂来治疗由革兰氏阳性菌，枝原体或病原菌（这些菌对化合物（Ⅰi）-（Ⅰl）敏感）引起的人类或动物感染疾病。因此，化合物（Ⅰi）-（Ⅰl）和它们的药用加成盐可口服或非肠道给药，如以S.C或i.m形式，它们还可根据常规制药惯例配成注射剂，片剂，胶囊，散剂等。

表1

与红霉素A比较，6-0-甲基-

阿扎霉素A（Ⅰi）的体外抗菌活性

试验有机体红霉素A 6-O-甲基-阿扎霉素A（Ⅰi）

MIC MBC MIC MBC

金黄色葡萄球菌

ATCC6538-P 0.2 0.8 0.2 0.4

粪链球菌

ATCC-8043 0.2 0.8 0.2 0.4

藤黄八叠球菌

ATCC-9341 0.2 0.4 0.1 0.2

大肠杆菌

ATCC10536 50 ＞50 1.6 3.2

肺炎克氏杆菌

NCTC-10499 ＞50 ＞50 12.5 50

铜绿假单胞菌

NCTC-10490 ＞50 ＞50 ＞50 ＞50

基质：脑心肉汤

培养：24小时，37℃

MIC：最小抑制浓度（ug/mL）

MBC：最小杀菌浓度（ug/mL）

表2

与红霉素A比较，6-O-甲基-

阿扎霉素A（Ⅰi）于体外对临床分出的菌的

杀菌活性

红霉素A 6-O-甲基阿扎霉素A（Ⅰi）

试验有机体

MIC MBC MIC MBC

金黄色葡萄球菌

10099 0.1 0.2 0.05 0.1

腐生葡萄球菌

3947 0.4 0.8 0.4 0.8

粪链球菌

10390 0.8 3.1 0.8 3.1

金黄色葡萄球菌

10097 0.1 0.4 0.05 0.4

肺炎球菌

4050 0.1 0.4 0.025 0.1

流感嗜血菌

4028 0.05 0.2 0.05 0.2

基质：脑心肉汤

培养：24小时，37℃

MIC：最小抑制浓度（ug/mL）

MBC：最小杀菌浓度（ug/mL）

新的O-甲基-阿扎霉素A与

阿扎霉素在体外抗菌活性上的比较

试验菌株 MIC（μg/mL）

（Ⅱa）（Ⅰi）（Ⅰj）（Ⅰk）（Ⅰl）

黄色微球菌

ATCC6538P 1.56 0.39 1.56 0.2 3.125

干燥棒杆菌

NCTC9755 6.25 12.5 12.5 1.56 25.0

金黄色葡萄球菌

ATCC10240 0.39 0.79 0.78 0.1 3.125

枯草杆菌

NCTC8241 0.39 0.2 0.78 0.1 3.125

短小芽孢杆菌

NCTC8241 0.2 0.2 0.78 0.05 3.125

蜡状芽孢杆菌

NCTC10320 0.39 0.78 1.56 0.1 3.125

藤黄八叠球菌

ATCC9340 0.05 0.0125 0.05 0.0125 0.05

表皮葡萄球菌

ATCC12228 0.1 0.1 1.56 0.1 3.125

粪链球菌

ATCC8043 0.05 0.05 0.78 0.05 0.78

铜绿假单胞菌

NCTC10490 100.0 100.0 100.0 25.0 200.0

大肠杆菌

ATCC10536 0.78 3.125 6.25 0.78 6.25

基质：脑心肉汤

培养：24-48小时，37℃

接种：10-⁵-10-⁶cfu/mL

本发明通过下面实例进一步描述

实例1

2′-O，3′-N-双（苄氧羰基）-N-去甲基-阿扎霉素A（Ⅱb）

方法A

将NaHCO₃（48g）加到阿扎霉素二水合物（30g;0.038mole）的140ml无水苯溶液中，该混合物在搅拌下被加热到55-60℃，于1小时内往其中滴加25ml（89.63g;0.53mole）氯甲酸苄酯。反应混合物于该温度下保持搅拌3小时，然后于室温静置过夜。用150ml 0.25NHcl提取苯悬浮液三次，用Cacl₂干燥苯溶液，过滤，减压蒸发成稠油状物，所得残余物通过搅拌滴加到500ml冷却的石油醚中，反应悬浮液在冷却下搅拌4小时，过滤沉淀，用石油醚洗涤，干燥，生成27.5g（71.6%）标题产物，用乙醚/石油重结晶得m.p.148-154℃的产物。

EI-MS m/s1003（M⁺）

TLC，CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH（90∶9∶0.5）R_f0.704

IR（CHCl₃）：3510，3350，2960，1740，1690，1605，1450，1380，1330，1290，1255，1160，1115，1050，995cm^-1。

¹H NMR（CDCl₃）：2.301（3H，9a-NCH₃），2.844，2.802（3H，3′-NCH₃），3.397（3H，3″-OCH₃）。

¹³C NMR（CDCl₃）：177.260（C-1），100.115（C-1'），95.149（C-1″），75.028（C-6），74.607（C-12），69.415（C-9），64.617（C-10），36.964（9a-NCH₃）和26.016（C-8）ppm。

方法B

在搅拌下，将NaHCO₃（22g）加到氯甲酸苄酯（30ml;0.21mole）的50ml无水苯溶液中，于3小时内往其中加入15g（0.019mole）阿扎霉素，阿扎霉素加到其总量的3/4时，再加15ml（0.106mole）氯甲酸苄酯。该反应混合物于室温搅拌24小时，然后过滤，滤液用150ml0.25NHcl提取三次，用MgSO₄干燥，减压蒸发。加石油醚，沉淀出粗2′-O，3′-N-双（苄氧羰基）-N-去甲基-阿扎霉素A，过滤沉淀并马上在搅拌下悬浮在50ml冷乙醚中。室温下搅拌该反应悬浮液1小时，滤除沉淀，干燥，生成8.67g（43.09%）如方法A）所述的同样理化特征的均一产物（TLC）。

实施例2

2′-O，3′-N-双（苄氧羰基）-N-去甲基-阿扎霉素A（Ⅰa），（Ⅰb），（Ⅰc）和（Ⅰd）的O-甲基化

方法A

将甲基碘（6ml;0.106mole）加到实施例1产物（6g;0.006mole）的64ml二甲亚砜与四氢呋喃（1∶1）的溶液中，往其中再加甲基碘（6.6ml;0.106mole），然后于室温，在4小时内，往其中逐渐加入2.4g （约0.06mole）于油中的NaH（55.60%）。反应悬浮液再搅拌5小时，静置过夜，然后倾入饱和Nacl溶液（10ml）中，用100ml乙酸乙酯提取两次。合并有机提取液，用饱和Nacl溶液洗涤三次，用K₂CO₃干燥，蒸发，生成6.35g粗产物，将该粗产物按实施例9所述方法氢解，或，在硅胶柱上（硅胶60，Merch Co.，70-230mesh），用溶剂系统CH₂cl₂/CH₃OH/NH₄OH（90∶9∶0.5）进行选择性纯化。

将馏分Ff为0.881（TLC;同一溶剂系统）的1.5g粗产物浓缩，蒸发，得0.12g色谱纯的2′-O，3′-N-双（苄氧羰基）-N-去甲基-6，11-4″-三-O-甲基-阿扎霉素A（Ⅰd）。

¹H NMR（CDCl₃）：2.246（3H，9a-NCH₃），2.831，2.798（3H，3'-NCH₃），3.367（3H，3″-OCH₃），3.305（3H，6-OMe），3.465（3H，4″-OCH₃），和3.485（3H，11-OCH₃）ppm。

¹³C NMR（CDCl₃）：176.975（C-1），69.920（C-9），35.967（9a-NCH₃），79.1（C-6）.52.8（6-OCH₃），89.0（C-11），62.0（11-OCH₃）.87.357（C-4″），61.131（4″-OCH₃），49.176和49.526（3″-OCH₃）和36.457（3'-NCH₃）ppm。

合并并蒸发Rf为0.843的馏分，得0.32g色谱纯2′-O，3′-N-双-（苄氧羰基）-N-脱甲基-11-O-甲基-阿扎霉素A（Ⅰc）。

EI-MS m/s 1016（M⁺）

¹H NMR（CDCl₃）：2.239（3H，9a-NCH₃），2.805，2.847（3H，3'-NCH₃），3.374（3H，3″-OCH₃），和3.573（3H，11-OCH₃）ppm。

蒸发Rf为0.811的馏分，得0.316g2′-O，3′-N-双（苄氧羰基）-N-去甲基-6，11-二-O-甲基-阿扎霉素A（b）

IR（CHCl₃）：3570，3490，1740，1690，1455，1380，1330，1295，1260，1200，1160，1120，1095，1055，1005，990，980cm^-1。

¹H NMR（CDCl₃）：2.292（3H，9a-NCH₃），2.838，2.795（3H，3'-NCH₃），3.380（6H，6-OCH₃和3″-OCH₃）和3.488（3H，11-OCH₃）ppm。

¹³C NMR（CDCl₃）：177.939（C-1），69.471（C-9），35.271（9a-NCH₃），88.994（C-11），52.892（6-OCH₃），61.09（11-OCH₃），36.851（3'-NCH₃），和49.549，49.154（3″-OCH₃）ppm。

浓缩并蒸发Rf为0.661的馏分至干，得0.384g 2′-O，3′-N-双（苄氧羰基）-N-去甲基-6-O-甲基-阿扎霉素A（Ⅰa）：

EI-MS m/s 1016（M⁺）

IR（CHCl₃）：3570，3500，2960，2920，1740，1690，1450，1380，1325，1290，1255，1200，1160，1120，1050，995cm^-1。

¹H NMR（CDCl₃）：2.288（3H，9a-NCH₃），2.805，2.847（3H，3'-NCH₃），3.380（6H，6-OCH₃和3″-OCH₃）ppm。

¹³C NMR（CDCl₃）：177.764（C-1），69.850（C-9），34.851（9a-NCH₃），78.106（C-6），74.661（C-11），，73.873（C-12），和52.822（6-OCH₃）ppm。

方法B

于搅拌下，2小时内，0-5℃，将甲基碘和2.1gNaH（55-60%）加到实施例1产物（6g）的60ml二甲亚砜与四氢呋喃（1∶1）溶液中。反应混合物于0-5℃搅拌1小时，所得悬浮液倾到饱和Nacl溶液中，用乙酸乙酯提取。用饱和Nacl溶液洗涤有机提取液，用K₂CO₃干燥，减压蒸发至干。所得产品（2g）在硅胶柱上层析纯化，用溶剂系统CH₂cl₂/CH₃OH/NH₄OH（90∶9∶0.5），结果生成0.89g6-O-甲基衍生物（Ⅰa），0.11g6，11-二-O-甲基衍生物（Ⅰb）和0.48g11-O-甲基衍生物（Ⅰc）

方法C

将甲基碘（6ml）加到实施例1产物（6g）的N，N-二甲基甲酰胺中，于室温2小时内，伴随搅拌往其中加入2.4g NaH（55-60%）。反应混合物于室温再搅拌2小时，然后放置过夜。按方法A）所述步骤分离产物，得到4.54g6，11-二-O-甲基衍生物（Ⅰb）和6，11，4″-三-O-甲基衍生物（Ⅰd）的混合物。该混合物在NaOAc/HoAC缓冲液（PH5）存在下，在甲醇（60ml）中，用钯/碳（2g;5%）作为催化剂，按实施例3所述步骤进行氢解。

分离产物并于PH9.0下蒸发溶剂，则分离出Rf 0.220的 6，11-二-O-甲基-N-脱甲基-阿扎霉素A（Ⅰf）与Rf0.263的6，11，4″′-三-O-甲基-N-去甲基-阿扎霉素A（Ⅰh）的混合物（2.33g），将它们在硅胶柱上分离，溶剂系统为CH₂cl₂/CH₃OH/NH₄OH（90∶9∶0.5），生成色谱均一的产物（Ⅰf）和（Ⅰh）。

实施例3

6-O-甲基-N-去甲基-阿扎霉素A（Ⅰl）

将2.0g（0.002mole）2′-O，3′-N-双（苄氧羰基）-N-去甲基-6-O-甲基-阿扎霉素A（Ⅰa）溶于30ml乙醇。将含0.185ml乙酸，0.3g乙酸钠（PH5）和0.7g钯碳（10%）的水加入到该溶液中。在氢气压（10巴）下搅拌该反应混合物10小时，滤除催化剂，蒸发至干。残余物溶于CHcl₃（30ml），加（30ml）水，用1NHcl调节反应混合物的PH至5.0，分层，用CHcl₃提取水层两次（每次15ml）。

往反应混合物中加CHcl₃（30ml），搅拌下用2N NaOH调节PH至9.0，分层，水层再用CHcl₃提取两次（每次15ml）。合并的有机提取液（PH9.0）用K₂CO₃干燥，过滤，蒸发，得到1.03g（70%）标题产物。

EI-MS m/s 748

TLC，R_f0.182

IR（CHCl₃）：3670，3500，2960，2920，1725，1460，1375，1345，1320，1280，1260，1165，1120，1085，1045，1010，995，900cm^-1。

¹H NMR（CDCl₃）：2.278（3H，9a-NCH₃），2.406（3H，3'-NCH₃），3.312（3H，3″-OCH₃），3.384（3H，6-OCH₃）ppm。

实施例4

6，11-二-O-甲基-N-脱甲基-阿扎霉素A（Ⅰf）

按实施例3步骤，将0.165g（0.16mole）2′-O，3′-N-双（苄氧羰基）-N-去甲基-6，11-二-O-甲基-阿扎霉素A（Ⅰb）用钯/碳（10%）氢解，反应条件是：于乙醇中，在乙酸钠/乙酸缓冲液（PH5.0）存在下。从而得到0.093g（76.2%）色谱均一的标题产物，m.p.95-98℃。

EI-MS m/s 762

TLC，R_f0.331

¹H NMR（CDCl₃）：2.265（3H，9a-CH₃），2.422，（3H，3'-NCH₃），3.312（3H，3″-OCH₃），3.374（3H，6-OCH₃）和3.521（3H，11-OCH₃）ppm。

¹³C NMR（CDCl₃）：177.7（C-1），65.9（C-9），36.8（9a-NCH₃），79.3（C-6），88.9（C-11），52.7（6-OCH₃），62.0（11-OCH₃），33.1（3'-NCH₃），和49.7（3″-OCH₃）ppm。

实施例5

11-O-甲基-去甲基-阿扎霉素A（Ⅰg）

按实施例3步骤，于甲醇中，在乙酸钠/乙酸（PH5.0）缓冲液存在下，用钯/碳（10%）氢解0.250g（6.246mmmole）2′-O，3′-N-双（苄氧羰基）-N-去甲基-11-O-甲基-阿扎霉素A（Ⅰc）得到0.168g（89.5%）11-O-甲基-N-去甲基-阿扎霉素A（Ⅰg）。

TLC，R_f0.244

IR（CDCl₃）：3500，2970，2940，1736，1460，1380，1165cm^-1。

¹H NMR（CDCl₃）：2.44（3H，9a-NCH₃），2.458，（3H，3'-NCH₃），3.336（3H，3″-OCH₃）和3.590（3H，11-OCH₃）ppm。

¹³C NMR（CDCl₃）：177.6（C-1），70.7（C-9），35.8（9a-NCH₃），74.4（C-6），85.0（C-11），62.7（11-OCH₃），36.7（3'-NCH₃），和49.4（3″-OCH₃）ppm。

实施例6

6-O-甲基-阿扎霉素A（Ⅰi）

方法A

往0.78g（0.00104mole）6-O-甲基-N-去甲基-阿扎霉素A（Ⅰe）的CHcl₃（50ml）溶液中加入0.085ml（0.00113mole）甲醛（37%）和0.078ml（0.00203mole）甲酸（98-100%）。该反应混合物在回流下搅拌8小时，然后冷却到室温，倾入50ml水中。用1NHcl调节反应混合物的 PH至5.0，分层，用CHcl₃提取水层两次（每次20ml）。将CHcl₃（20ml）加到含水部分中，搅拌下用2NNaOH调节PH至9.0，分层，水层再用CHcl₃提取两次（每次20ml）。合并的CHcl₃提取液（PH9.0）用K₂CO₃干燥，蒸发，得0.495g（62.7%）标题产物，其可通过柱胶柱选择性纯化，溶剂系统为CH₂cl₂/CH₃OH/NH₄OH（90∶9∶0.5），生成色谱均一的（Ⅰi），m.p.103-109℃。

EI-MS m/s 762

TLC，R_fO.346

IR（KBr）：3500，2980，2940，1740，1462，1385，1330，1280，1260，1170，1112，1059，1018，和1055cm^-1。

¹H NMR（CDCl₃）：2.300（3H，9a-NCH₃），2.316（6H，3'-N（CH₃）₂），3.333（3H，3″-OCH₃）和3.384（3H，6-OCH₃）ppm。

¹³C NMR（CDCl₃）：177.540（C-1），68.850（C-9），36.8（9a-NCH₃），79.2（C-6），52.822（6-OCH₃），61.627（C-10），40.350（3'-N（CH₃）₂）和49.457（3″-OCH₃）ppm。

生物活性：1mg含754μg阿扎霉素

方法B

往0.5g（0.668mmole）6-O-甲基-N-甲基-阿扎霉素A的丙酮（30ml）溶液加入0.128ml（1.71mmole）甲醛（37%）和0.118ml（3.06mmole）甲酸（90-100%），所得混合物回流搅拌2小时。冷却反应混合物至室温，蒸除丙酮，得稠浆物。加 20ml水到产物中，按方法A）所述，用二氯甲烷，采用梯度PH提取法分离产物。

产量：0.46g（90.3%）。

实施例7

6，11-二-O-甲基-阿扎霉素A（Ⅰj）

按实施例6步骤，在甲酸（98-100%）存在下，用甲醛（37%;0.083ml）将0.49g（6.4mmole）6，11-二-O-甲基-N-去甲基-阿扎霉素A（Ⅰf）进行还原N-甲基化，得0.46g（92.3%）标题产物：

EI-MS m/s 776（M⁺）

TLC，R_f0.391

¹H NMR（CDCl₃）：2.295（3H，9a-NCH₃），2.316（6H，3'-N（CH₃）₂），3.321（3H，3″-OCH₃）3.38（3H，6-OCH₃）和3.524（3H，11-OCH₃）ppm。

¹³C NMR（CDCl₃）：177.540（C-1），68.237（C-9），36.739（9a-NCH₃），88.112（C-11），52.653（6-OCH₃）和61.852（11-OCH₃）ppm。

实施例8

11-O-甲基-阿扎霉素A（Ⅰk）

按实施例6步骤，在甲酸（98-100%）存在下，用甲醛（37%）对0.32g（0.42mmole）11-O-甲基-N-去甲基-阿扎霉素A（Ⅰg）进行还原甲基化，得0.238g（72.44%）标题11-O-甲基衍生物（Ⅰk）。

EI-MS m/s 762（M⁺）

TLC，R_f0.428

IR（KBr）：3510，2975，2940，1738，1460，1350，1165，1054cm^-1。

¹H NMR（CDCl₃）：2.246（3H，9a-NCH₃），2.307（6H，3'-N（CH₃）₂），3.352（3H，3″-OCH₃）和3.591（3H，11-OCH₃）ppm。

实施例9

6-O-甲基-阿扎霉素A（Ⅰi），6，11-二-O-甲基-阿扎霉素A（Ⅰj），11-O-甲基-阿扎霉素A（Ⅰk），和6，11，4′-三-O-甲基-阿扎霉素A（Ⅰl）。

1）往2.16g实施例2的粗产物的30ml乙醇溶液中加入含0.185ml乙酸和0.3g乙酸钠及0.7g钯/碳（10%）的10ml水，按实施例3所述将该反应混合物氢解。于PH9.0，得到0.98g 6-O-甲基-（Ⅰe），6，11-二-O-甲基-（Ⅰf），11-O-甲基-（Ⅰg），和6，11，4″-三-O-甲基-N-去甲基-阿扎霉素A（Ⅰh）的混合物。

2）将0.98g1）中所得混合物溶于CHcl（50ml）中，往其中加入0.106ml甲醛（37%）和0.096ml甲酸（98-100%），按实施例6所述进行N-甲基化。于PH9.0，分离出0.537g混合物，将其于硅胶柱（硅胶60，Merck co.70-230merh）上层析，用CH₂cl₂/CH₃OH/NH₄OH（90∶9∶0.5）作溶剂系统，得0.238g色谱均一的Rf为0.346的（Ⅰi），0.065gRf为0.391的（Ⅰj），0.105gRf为0.428的（Ⅰk）和0.094gRf为0.456的（Ⅰl）。

实施例10

将实施例3的步骤，在乙醇中，于乙酸钠/乙酸（PH5.0），缓冲液存在下，用钯/碳（10%;1g）对3.35g（3.21mmole）2′-O，3′-N-双（苄氧羰基）-N-去甲基-6，11，4″-三-O-甲基阿扎霉素A（Ⅰd）进行氢解，得1.41g（56.7%）标题产物，将其在硅胶柱上选择性层析，用CH₂cl₂/CH₃OH/NH₄OH（90∶9∶0.5）做溶剂系统，得到TLC均一的产物（Ⅰh）：

EI-MS m/s 775

TLC，R_fO.263

¹H NMR（CDCl₃）：2.262（3H，9a-NCH₃），2.393（3H，3'-NCH₃），3.308（6H，3″-OCH₃和6-OCH₃），3.475（4″-OCH₃）和;3.521（11-OCH₃）ppm。

¹³C NMR（CDCl₃）：175.0（C-1），64.8（C-9），79.8（C-6），50.6（6-OCH₃）86.1（C-11），59.1（11-OCH₃），87.7（C-4″）和60.9（4″-OCH₃）ppm。

实施例11

6，11-4″-三-O-甲基-阿扎霉素A（Ⅰl）

按实施例6步骤，用0.131ml甲醇（37%;1.71mmole）和0.121ml（3.5mmole）甲酸（98-100%）处理1.2g（1.55mmole）6，11，4″-三-O-甲基-N-去甲基-阿扎霉素A（h），得0.75g（64.4%）标题产物。

EI-MS m/s 789

TLC，R_fO.456

¹H NMR（CDCl₃）：2.216（3H，9a-NCH₃），2.311（6H，3'-N（CH₃）₂），3.321（3H，3″-OCH₃），3.302（6-OCH₃），3.482（4″-OCH₃）和3.521（11-OCH₃）ppm。

¹³C NMR（CDCl₃）：177.859（C-1），68.6（C-9），36.8（9a-NCH₃），80.7（C-6），51.0（6-OCH₃），89.0（C-11），62.0（11-OCH₃），87.3（C-4″）和61.3（4″-OCH₃）ppm。

Claims

1、制备式(Ⅰ)阿扎霉素A的O-甲基衍生物和其药用酸加成盐的方法，

其中：

Ⅰa R¹=R²=CO₂CH₂C₆H₅，R³=CH₃，R⁴=R⁵=H

Ⅰb R¹=R²=CO₂CH₂C₆H₅，R³=R⁴=CH₃，R⁵=H

Ⅰc R¹=R²=CO₂CH₂C₆H₅，R³=R⁵=H，R⁴=CH₃

Ⅰd R¹=R²=CO₂CH₂C₆H₅，R³=R⁴=R⁵=CH₃

Ⅰe R¹=R²=R⁴=R⁵=H，R³=CH₃

Ⅰf R¹=R²=R⁵=H，R³=R⁴=CH₃

Ⅰg R¹=R²=R³=R⁵=H，R⁴=CH₃

Ⅰh R¹=R²=H，R³=R⁴=R⁵=CH₃

Ⅰi R¹=R⁴=R⁵=H，R²=R³=CH₃

Ⅰj R¹=R⁵=H，R²=R³=R⁴=CH₃

Ⅰk R¹=R³=R⁵=H，R²=R⁴=CH₃

Ⅰl R¹=H，R²=R³=R⁴=R⁵=CH₃

该方法特征在于：将式Ⅱ.阿扎霉素或

其二水合物(Ⅱa，R¹=H，R²=CH₃)在过量碳酸氢钠存在下，在反应惰性溶剂苯中，在25℃-60℃，与氯甲酸苄酯反应3-24小时，随后在氢化钠存在下，于二甲亚砜和四氢呋喃混合物中，于0℃一室温，用1-18摩尔过量碘甲烷将式Ⅱ中间体2′-O，3′-N-双(苄氧羰基)-N-去甲基-红霉素A(其中Ⅱb，R¹=R²=CO₂CH₂C₆H₅)的C-6，C-11和C-4″位置上的羟基O-甲基化3-30小时，产生式Ⅰ的2′-O，3′-N-双(苄氧羰基)-N-去甲基-阿扎霉素A的混合物，其中

Ⅰa R¹=R²=CO₂CH₂C₆H₅，R³=CH₃，R⁴=R⁵=H

Ⅰb R¹=R²=CO₂CH₂C₆H₅，R³=R⁴=CH₃，R⁵=H

Ⅰc R¹=R²=CO₂CH₂C₆H₅，R³=R⁵=H，R⁴=CH₃

Ⅰd R¹=R²=CO₂CH₂C₆H₅，R³=R⁴=R⁵=CH₃

对所得式(Ⅰ)混合物选择性进行

A)在硅胶柱上分离，得到色谱均一的化合物(Ⅰa)-(Ⅰd)，随后在乙醇溶液中，在钯炭存在下，于1-20巴氢气压下，于室温及搅拌下，将(Ⅰa)-(Ⅰd)化合物氢解2-10小时以除去2′-和3′-位上的保护基，生成式(Ⅰ)O-甲基-N-去甲基-阿扎霉素A衍生物，其中

Ⅰe R¹=R²=R⁴=R⁵=H，R³=CH₃

Ⅰf R¹=R²=R⁵=H，R³=R⁴=CH₃

Ⅰg R¹=R²=R³=R⁵=H，R⁴=CH₃

Ⅰh R¹=R²=H，R³=R⁴=R⁵=CH₃

然后在氯仿中，在反应混合物的回流温度下，用1-3当量甲醛(37%)和等量或二倍量的甲酸(98-100%)或其它氢气源对(Ⅰe)-(Ⅰh)化合物的N-甲基化的3′-甲氨基还原2-8小时，生成式(Ⅰ)的O-甲基阿扎霉素A衍生物，其中

Ⅰi R¹=R⁴=R⁵=H，R²=R³=CH₃

Ⅰj R¹=R⁵=H，R²=R³=R⁴=CH₃

Ⅰk R¹=R³=R⁵=H，R²=R⁴=CH₃

Ⅰl R¹=H，R²=R³=R⁴=R⁵=CH₃或

B)如A)所述，通过氢解除去2′-3′一位的保护基-苄氧羰基，生成式Ⅰ的O-甲基-阿扎霉素A衍生物，

其中

Ⅰi R¹=R⁴=R⁵=H，R²=R³=CH₃

Ⅰj R¹=R⁵=H，R²=R³=R⁴=CH₃

Ⅰk R¹=R³=R⁵=H，R²=R⁴=CH₃

Ⅰl R¹=H，R²=R³=R⁴=R⁵=CH₃

将所生式Ⅰi-Ⅰl混合物在硅胶柱上分离，生成色谱均一的阿扎霉素A(Ⅰi)-(Ⅰl)的O-甲基衍生物，然后将它们与至少一当量无机或有机酸反应生成药用加成盐。