CN102274228A - 复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂及其制备 - Google Patents

Abstract

本发明属于抗菌类兽药技术领域，特别涉及一种复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂，该该纳米乳制剂为水包油型，粒径在1～100nm之间，由甲氧苄啶、琥珀酸钠氟苯尼考、表面活性剂、助表面活性剂、油和蒸馏水制成。本发明的复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂外观透明，可用于治疗畜禽由敏感菌引起的各类感染。

Description

复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂及其制备

技术领域 

本发明属于抗菌类兽药技术领域，具体涉及一种复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂及其制备方法。

背景技术

抗菌药在治疗动物感染性疾病上具有起效快、生产成本低等优点，使其在兽医临床上有着广泛的的应用巨大的作用。但传统剂型的局限性以及耐药性的逐渐增加使其治疗成本上升和治疗效果下降。为此，临床实践中常采用联合使用两种或多种抗菌药物，以达到扩大抗菌谱，增强疗效，减少用药量，降低或避免毒副作用，减少或延缓耐药菌株的产生的目的。

甲氧苄啶（TMP）属于合成的广谱抗菌剂，为亲脂性弱碱，对多种革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌均有抗菌作用。单用易产生耐药性，其耐药机理可能是细菌改变代谢途径，例如产生较多的二氢叶酸合成酶，或是直接利用外源性叶酸。细菌产生耐药性后，不但使疗效降低，而且会造成耐药菌株的传播，给治疗带来困难。琥珀酸钠氟苯尼考系为氟苯尼考的衍生物，根据前药的原理设计而成，它对多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌及支原体等均有作用，为广谱抑菌药，高浓度具有杀菌作用。本药临床耐药现象严重，常见耐药菌为葡萄球菌等革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌。细菌产生耐药性后，不但使疗效降低，而且会造成耐药菌株的传播，给治疗带来困难。因此，如何通过联合用药和开发新剂型来解决甲氧苄啶和琥珀酸钠氟苯尼考以上存在的缺点，提高两药临床用药疗效已经成为当前急需解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂及其制备方法。

本发明采用以下技术方案：

一种复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂，该纳米乳制剂为水包油型，粒径在1～100 nm之间，由下述重量百分比的原料制成：

甲氧苄啶                  0.01～1.75%

琥珀酸钠氟苯尼考            0.04～6.99%

表面活性剂                21.82～35.69%

助表面活性剂              7.94～11.90%

油                        3.49～4.76%

蒸馏水                    47.59～63.54%

上述原料的总重量百分比为100%。

     所述的表面活性剂是吐温-80或蓖麻油聚氧乙烯；所述助表面活性剂是乙醇或1，2-丙二醇；所述油是肉豆蔻酸异丙酯或乙酸乙酯。

所述的表面活性剂和助表面活性剂质量比为2-3：1；所述表面活性剂和助表面活性剂质量之和与油的质量比为9:1～7:3。

一种制备复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂的方法，具体包括以下步骤：

1）按比例取各原料； 

2）将甲氧苄啶原料药溶于助表面活性剂中，加入表面活性剂和油相混匀；

3）将琥珀酸钠氟苯尼考溶于蒸馏水中；

4）常温下滴加步骤3）的溶液至步骤2）制备的溶液中，搅拌直至形成均匀透明的体系，即复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂。

本发明的复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂使用时，每100kg水加本发明复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂100ml，自由饮水，三天为一疗程。

本发明复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂的组成原理及其科学依据：由于甲氧苄啶原料药难溶于水，琥珀酸钠氟苯尼考易溶于水，因此将琥珀酸钠氟苯尼考原料药的水溶液作为水相部分，将甲氧苄啶作为油相部分。

本发明复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂的原料中选用吐温-80或蓖麻油聚氧乙烯作为表面活性剂，是因为吐温-80和蓖麻油聚氧乙烯毒性相对较小，不易受电解质、无机盐类及酸碱的影响；选用乙醇或1，2-丙二醇作为助表面活性剂时，形成的纳米乳制剂不但稳定，而且作为甲氧苄啶的溶剂，提高了甲氧苄啶在该复方纳米乳中的含量；肉豆蔻酸异丙酯或乙酸乙酯作为油，是因为肉豆蔻酸异丙酯、乙酸乙酯与吐温-80的HLB值接近，易形成稳定的纳米乳。

当表面活性剂和助表面活性剂质量比为2-3：1时，表面活性剂和助表面活性剂之和与油的质量比例为9:1～7:3时形成的纳米乳区最大，最稳定，载药量最高。 

本发明的复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂外观透明，粒径介于1～100 nm，其粘稠度可根据需要加入任意比例的蒸馏水调整，方便临床给药，两种原料药甲氧苄啶和琥珀酸钠氟苯尼考的结构均未发生变化。

本发明的复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂可用于治疗畜禽由敏感菌引起的各类感染。与现有技术相比，本发明的复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂具有以下优点：

1）安全、高效、耐药性低；

2）吸收迅速，生物利用度高；靶向释药，副作用低；粒径小且均匀，透膜吸收好；

3）黏度低，注射时疼痛小；

4）稳定性良好，可过滤除菌，易于保存。

具体实施方式

实施例 1  

蓖麻油聚氧乙烯                         9.0g

1，2-丙二醇                            3.0g

甲氧苄啶                               0.003g

琥珀酸钠氟苯尼考                       0.012g

肉豆蔻酸异丙酯                         1.2g

蒸馏水                                 12g

具体操作步骤是：

1）按比例取各原料； 

2）将甲氧苄啶原料药溶于1，2-丙二醇中，加入蓖麻油聚氧乙烯和肉豆蔻酸异丙酯混匀；

3）将琥珀酸钠氟苯尼考溶于蒸馏水中；

4）常温下滴加步骤3）的溶液至步骤2）制备的溶液中，搅拌直至形成均匀透明的体系，即粒径为1～100 nm、外观透明的复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂。

实施例 2 

原料配方如下：

          吐温-80                       3.0g

乙醇                          1.0g

甲氧苄啶                      0.03 g

琥珀酸钠氟苯尼考              0.12 g

乙酸乙酯                      0..44g

蒸馏水                        8.0g

具体操作步骤是：

1）按比例取各原料； 

2）将甲氧苄啶原料药溶于乙醇中，加入吐温-80和乙酸乙酯混匀；

3）将琥珀酸钠氟苯尼考溶于蒸馏水中；

4）常温下滴加步骤3）的溶液至步骤2）制备的溶液中，搅拌直至形成均匀透明的体系，即粒径为1～100 nm、外观透明的复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂。

实施例 3 

原料配方如下：

吐温-80                      6.0 g

1，2-丙二醇                  2.0g

甲氧苄啶                     0.4g

琥珀酸钠氟苯尼考             1.6 g

肉豆蔻酸异丙酯               0.88g

蒸馏水                       12 g

具体操作步骤是：

1）按比例取各原料； 

2）将甲氧苄啶原料药溶于1，2-丙二醇中，加入吐温-80和肉豆蔻酸异丙酯混匀；

3）将琥珀酸钠氟苯尼考溶于蒸馏水中；

4）常温下滴加步骤3）的溶液至步骤2）制备的溶液中，搅拌直至形成均匀透明的体系，即粒径为1～100 nm、外观透明的复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂。

实施例 4 

原料配方如下：

吐温-80                      6.0 g

乙醇                         3.0g

甲氧苄啶                     0.5g

琥珀酸钠氟苯尼考             2.0g

乙酸乙酯                     1.0g

蒸馏水                       15.0 g

具体操作步骤是：

1）按比例取各原料； 

2）将甲氧苄啶原料药溶于乙醇中，加入吐温-80和乙酸乙酯混匀；

3）将琥珀酸钠氟苯尼考溶于蒸馏水中；

4）常温下滴加步骤3）的溶液至步骤2）制备的溶液中，搅拌直至形成均匀透明的体系，即粒径为1～100 nm、外观透明的复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂。

采用实施例1的复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂进行以下试验。

试验1

利用油溶性染料苏丹红和水溶性染料亚甲基蓝在实施例1制得的复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂中扩散的快慢来判断纳米乳的类型，发现亚甲基蓝溶液在实施例1制得的复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂中有扩散，苏丹红溶液在实施例1制得的复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂中则没有扩散，表明所制备的复方纳米乳是水包油型（O/W）。

试验2  稳定性试验

1）离心加速试验

取实施例1制备的复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂，以20 000 r/min离心，10 min后观察纳米乳液外观仍保持澄清透明，未出现油水分层现象。

2）光稳定性试验

将实施例1制备的复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂适量装入玻璃瓶内，密封后（4500±500）lx光照条件下室温放置，分别于0 d、5 d、10 d取样观察。结果表明，乳液保持澄清透明外观，未见分层和破乳等现象。

3）温度稳定性试验

将实施例1制备的复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂分装于玻璃瓶内，密封后分别置于4 ℃、25 ℃、37 ℃、60 ℃条件下留样考察3个月，每隔10 d取样观察。结果表明，乳液在此四种温度条件下均保持澄清透明外观，未见分层和破乳等现象。

试验3 复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳的联合药敏试验

1）单药纸片搭桥试验  

制备的甲氧苄啶药敏纸片含甲氧苄啶5 μg/片，琥珀酸钠氟苯尼考药敏纸片含甲氧苄啶30 μg/片。试验菌株为金黄色葡萄球菌ATCC₂₅₉₂₃和大肠杆菌ATCC₂₅₉₂₂ 。

将浓度为1/2麦氏标准比浊管的菌液接种到MHA培养基上，然后将上述两种药敏纸片各一张分别贴在MHA培养基表面，间距2～3 mm，35℃培养18 h后观察两纸片间的抑菌圈直径和形态。结果表明，两种抗菌药物对金黄色葡萄球菌ATCC₂₅₉₂₃和大肠杆菌ATCC₂₅₉₂₂的抑菌圈交界角平直，表示甲氧苄啶和琥珀酸钠氟苯尼考呈协同抗菌作用。

2）肉汤稀释棋盘试验

根据所测得的单药甲氧苄啶和琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳对金黄色葡萄球菌ATCC₂₅₉₂₃和大肠杆菌ATCC₂₅₉₂₂的最低抑菌浓度MIC值，采用微量肉汤稀释棋盘法进行药物的联合抗菌试验。

采用实施例1制备的复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂，分别用MHB倍比稀释成一系列浓度，然后将不同浓度的两种抗菌药物按棋盘法设计，两两组合加入96孔平板中，每种抗菌药物取50 μL，再将1.5×10⁵ CFU/mL的菌液100 μL加入孔中，37 ℃孵育24 h。记录两药单独应用时的MIC，和两药联合用药时各自的MIC，并计算FIC指数。试验过程重复5次，取众数为MIC值，结果见表1。

表1为甲氧苄啶和琥珀酸钠氟苯尼考单用和联用的MIC（mg/L）和FIC指数：

表1

                                                 

由表1可知，甲氧苄啶和琥珀酸钠氟苯尼考对金黄色葡萄球菌ATCC₂₅₉₂₃联用时的MIC均为单用时的1/16和1/4倍，对大肠杆菌ATCC₂₅₉₂₂联用时的MIC均是为单用时的1/8倍，二者联用对金黄色葡萄球菌ATCC₂₅₉₂₃和大肠杆菌ATCC₂₅₉₂₂ 的FIC指数均不大于0.5。结果提示，本发明复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂能提高甲氧苄啶和琥珀酸钠氟苯尼考的抗菌活性，增强药物疗效，从而可降低用药量，减少药物残留，延缓或减少细菌耐药。

Claims (4)

1.一种复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂，其特征在于，该纳米乳制剂为水包油型，粒径在1～100 nm之间，由下述重量百分比的原料制成：

甲氧苄啶                  0.01～1.75%

琥珀酸钠氟苯尼考    0.04～6.99%

表面活性剂                21.82～35.69%

助表面活性剂              7.94～11.90%

油                           3.49～4.76%

蒸馏水                      47.59～63.54%

上述原料的总重量百分比为100%。

2.如权利要求1所述的复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂，其特征在于，所述的表面活性剂是吐温-80或蓖麻油聚氧乙烯；所述助表面活性剂是乙醇或1，2-丙二醇；所述油是肉豆蔻酸异丙酯或乙酸乙酯。

3.如权利要求1或2所述的复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂，其特征在于：所述的表面活性剂和助表面活性剂质量比为2-3：1；所述表面活性剂和助表面活性剂质量之和与油的质量比为9:1～7:3。

4.一种制备权利要求1所述的复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

1）按比例取各原料； 

2）将甲氧苄啶原料药溶于助表面活性剂中，加入表面活性剂和油相混匀；

3）将琥珀酸钠氟苯尼考溶于蒸馏水中；

4）常温下滴加步骤3）的溶液至步骤2）制备的溶液中，搅拌直至形成均匀透明的体系，即复方甲氧苄啶与琥珀酸钠氟苯尼考纳米乳制剂。