CN101506659B - 抗药物抗体测定法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了与食蟹猴IgG特异性结合的抗体，特征在于其不与人IgG结合，以及用双抗原桥联免疫测定法对猴种样品中药物抗体(DA)和针对所述药物抗体的抗体(抗药物抗体，ADA)的免疫复合物(DA/ADA复合物)进行免疫测定的方法。

Description

抗药物抗体测定法

发明领域

本发明包含测定抗药物抗体的方法，和用于这样的测定法的试剂盒。

发明背景

使用单克隆抗体的标准固相免疫测定法涉及在吸附在固相上的抗体(捕获抗体)、抗原、和针对抗原另一表位、缀合了酶或可检测标记的抗体(示踪抗体)之间形成复合物。由此形成夹心体：固相-捕获抗体-抗原-示踪抗体。在夹心体中，抗体缀合的酶活性(或可检测标记的量)与孵育介质中的抗原浓度成比例。一种夹心测定法为双抗原桥联免疫测定法(double antigen bridging immunoassay)，其中捕获和示踪抗体与抗原的不同表位结合。Hoesel，W.等人在J.Immunol.Methods 294(2004)101-110中报道了抗EPO双抗原桥联测定法，使用了与氨基和与糖基偶联的固定化rhEPO的混合物。免疫测定法如双抗原桥联ELISA是在研究患者对于抗体药物的免疫原性反应中所通常应用的测定法类型。Mire-Sluis，A.R.等人，在J.Immunol.Methods 289(2004)1-16中，总结了设计和优化检测针对生物技术产品的宿主抗体的免疫测定法的建议。根据Mire-Sluis等人所述，众所周知的抗药物抗体测定法形式显示出不少缺点。抗药物抗体测定法在例如WO 2005/045058和WO 90/006515中有所提及。抗独特型抗体测定法在例如US 5,219,730、WO 87/002778、EP 0139389和EP 0170302中有所提及。Wadhwa，M.等人在J.Immunol.Methods 278(2003)1-17中报道了检测、测量和表征由治疗性生物制品诱导的不必要抗体的方法。PCT/EP2007/001935中描述了用双抗原桥联免疫测定法对样品中针对药物抗体的抗体进行免疫测定的免疫测定法。WO 2006/066912中描述了测定猴中的人抗体的免疫测定法。本领域中(例如US 2003/0068664)能够检测活性治疗性抗体的测定系统同样公知。这样的系统需要抗原与固相结合，治疗性抗体与此结合的抗原结合，及检测通过抗原而与固相结合的治疗性抗体。

发明简述

本发明提供了与食蟹猴(Cynomolgus)IgG特异性结合、不与人IgG结合的抗体。优选所述抗体为单克隆抗体。

在优选实施方案中，根据本发明的抗体用细胞系3.25.12(DSMACC2799)、3.29.15(DSM ACC2800)、4.38.30(DSM ACC2801)、7.57.41(DSM ACC2802)或7.72.32(DSM ACC2803)生产。

本发明提供了用夹心测定法，即双抗原桥联免疫测定法对猴种的样品中药物抗体(DA)和针对所述药物抗体的抗体(抗药物抗体，ADA)的免疫复合物进行免疫测定的方法。

所述免疫复合物进一步缩写为DA/ADA复合物。

本发明提供了免疫测定样品中DA/ADA复合物的方法，其使用包含捕获抗体和示踪抗体的夹心型或双抗原桥联免疫测定法，特征在于所述抗体之一，即示踪抗体或捕获抗体，是与食蟹猴IgG特异性结合的抗体，另一抗体是与人免疫球蛋白特异性结合的抗体。

在本发明的优选实施方案中，捕获抗体为与人免疫球蛋白特异性结合的抗人Ig抗体，示踪抗体为与食蟹猴IgG特异性结合的抗食蟹猴IgG抗体。在本发明的优选实施方案中，捕获抗体为与食蟹猴IgG特异性结合的抗食蟹猴IgG抗体，示踪抗体为与人Ig特异性结合的抗人Ig抗体。

优选抗人Ig抗体与人IgG特异性结合。优选抗食蟹猴IgG抗体和/或抗人Ig抗体为单克隆抗体。优选所述特异性结合人免疫球蛋白的抗体不与食蟹猴IgG结合。优选所述结合人免疫球蛋白的抗体由细胞系DSMACC2708生产。优选所述结合食蟹猴IgG的抗体不与人IgG结合。优选所述结合食蟹猴IgG的抗体由细胞系3.25.12(DSM ACC2799)、3.29.15(DSM ACC2800)、4.38.30(DSM ACC2801)、7.57.41(DSM ACC2802)或7.72.32(DSM ACC2803)生产。

在所述测定过程中，在抗食蟹猴IgG抗体、DA/ADA复合物和抗人Ig抗体之间形成复合物，形成的复合物的量与DA/ADA复合物、DA和/或ADA的浓度相关联。

根据本发明，对于形成的DA/ADA复合物的检测可以进行直接的样品分析。在这样的测定法中，只有样品中含有药物抗体和抗药物抗体两者才能见到阳性信号。

根据本发明，可选地，样品分析(可以)在与预定量的药物抗体预孵育之后进行。在这样的测定法中，如果样品中含有抗药物抗体，就可以见到阳性信号，而不依赖于样品中存在/不存在药物抗体。

优选捕获抗体通过被动吸附与固相缀合，因此至少在两个不同的抗体位点与固相缀合。例如Butler，J.E.，Solid Phases in Immunoassay，于：Immunoassay，Diamandis，E.P.和Christopoulos，T.K.(编)学术出版社，圣地亚哥(1996)，205-225页中对被动吸附有所描述。

在本发明的优选实施方案中，捕获抗体通过特异性结合对固定化。这样的结合对(第一组分/第二组分)为，例如抗生蛋白链菌素或抗生物素蛋白/生物素、抗体/抗原(见例如Hermanson，G.T.等人，BioconjugateTechniques，学术出版社，1996)、凝集素/多糖、类固醇/类固醇结合蛋白、激素/激素受体、酶/底物、IgG/蛋白A和/或G等。优选捕获抗体与生物素缀合，通过固定化抗生物素蛋白或抗生蛋白链菌素进行固定。

优选抗体与其缀合配偶体的缀合是通过化学结合实现，经由N端和/或ε-氨基(赖氨酸)、不同赖氨酸的ε-氨基、抗体氨基酸骨架的羧基、巯基、羟基和/或酚官能团和/或抗体糖结构的糖醇基进行结合。

在本发明的优选实施方案中，示踪抗体与可检测的标记缀合，优选通过特异性结合对缀合。这样的结合对(第一组分/第二组分)为，例如抗生蛋白链菌素或抗生物素蛋白/生物素、抗体/抗原、凝集素/多糖、类固醇/类固醇结合蛋白、激素/激素受体、酶/底物、IgG/蛋白A和/或G等。优选示踪抗体通过洋地黄毒苷和针对洋地黄毒苷的抗体与可检测的标记缀合。可选地，示踪抗体与电化学发光标记缀合，如钌联吡啶络合物。

本发明的其它实施方案中提供了用夹心型或双抗原桥联免疫测定法免疫测定猴种样品中针对药物抗体的抗体(抗药物抗体，ADA)的方法。

本发明提供了免疫测定样品中ADA的方法，使用包含捕获抗体和示踪抗体的夹心型或双抗原桥联免疫测定法，特征在于所述抗体之一是与食蟹猴IgG特异性结合、不与人IgG结合的抗体，另一抗体为药物抗体。

在免疫测定ADA的优选实施方案中，捕获抗体为药物抗体，示踪抗体为与食蟹猴IgG特异性结合、不与人IgG结合的抗食蟹猴IgG抗体。在免疫测定ADA的其它优选实施方案中，捕获抗体为与食蟹猴IgG特异性结合、不与人IgG结合的抗食蟹猴IgG抗体，示踪抗体为药物抗体。在所述测定过程中，在药物抗体、ADA和抗食蟹猴IgG抗体之间形成复合物，形成的所述复合物的量与ADA的浓度相关联。在免疫测定ADA的优选实施方案中，所述抗食蟹猴IgG抗体为单克隆抗体(抗食蟹猴mAb)。

本发明的另一实施方案为杂交瘤细胞系3.25.12(DSM ACC2799)、3.29.15(DSM ACC2800)、4.38.30(DSM ACC2801)、7.57.41(DSMACC2802)、7.72.32(DSM ACC2803)。

本发明的另一方面是用于根据本发明的方法的抗体组合物，包含由细胞系DSM ACC2799、细胞系DSM ACC2800、细胞系DSM ACC2801、细胞系DSM ACC 2802和/或细胞系DSM ACC2803生产的抗体的混合物。

发明详述

本发明提供了与食蟹猴IgG特异性结合、不与人IgG结合的抗体。

根据本发明，术语“药物抗体”表示能够对个体施用以治疗疾病的抗体。在根据本发明进行的一种测定法中，药物抗体和捕获抗体，或药物抗体和示踪抗体，分别包含“相同的”抗体分子，例如用相同的表达载体重组生产，并包含相同的氨基酸序列。药物抗体(治疗性单克隆抗体)广泛应用于治疗多种疾病如肿瘤疾病(例如血液和实体恶性肿瘤，包括非霍奇金淋巴瘤、乳腺癌和结直肠癌)、免疫性疾病、中枢神经疾病、血管疾病或传染病。例如在Levene，A.P.等人，Journal of the Royal Society ofMedicine 98(2005)145-152对这样的抗体有所描述。这样的抗体为例如针对CD20、CD22、HLA-DR、CD33、CD52、EGFR、G250、GD3、HER2、PSMA、CD56、VEGF、VEGF2、CEA、Levis Y抗原、IL-6受体或IGF-1受体的抗体。治疗性抗体在Groner，B.等人，Curr.Mol.Meth.4(2004)539-547；Harris，M.，Lancet Oncol.(2004)292-302中也有所描述。

治疗性/药物抗体的实例(优选单克隆抗体)为针对IL-6受体的抗体(mAb IL-6R)。这样的抗体在例如Mihara，M.等人，Clin.Immunol.98(2001)319-326；Nishimoto，N.等人，Blood 106(2005)2627-2632；临床实验NCT00046774；WO 2004/096274中有所描述。

治疗性/药物抗体的实例(优选单克隆)为针对IGF-1受体的抗体(mAbIGF-1R)。这样的抗体在例如WO 2004/087756，WO 2005/005635中有所描述。

“抗药物抗体”为抗体，其可以针对药物抗体的任何区域，例如药物抗体的可变结构域、恒定结构域或糖结构。这样的抗药物抗体可能在抗体治疗过程中作为患者的免疫原性反应出现(见Pan，Y.等人，FASEB J.9(1995)43-49)。多数“抗药物抗体”与药物抗体的一个或多个互补决定区结合。抗药物抗体与其药物抗体的抗原之间的亲和力通常低于药物抗体与其靶抗原的亲和力。

“抗食蟹猴IgG抗体”为与食蟹猴IgG(食蟹猴免疫球蛋白G)特异性结合的抗体，优选为单克隆抗体(即单克隆抗食蟹猴抗体，mAb<CynoIgG>)。这样的抗体与食蟹猴IgG结合的解离常数(＝KDiss.)为至少10^-9mol/L，更优选KDiss.为少10^-10mol/L。同时，通过10^-8mol/L或更差的KDiss.例如10^-5mol/L确保其不与人IgG结合的性质。同样优选地，与食蟹猴IgG结合、不与人IgG结合的抗体，分别对食蟹猴IgG和人IgG的反应性之间KDiss.的差异为至少100倍。

优选抗食蟹猴IgG抗体还与绒猴IgG、恒河猴IgG和狒狒IgG结合，解离常数(＝KDiss.)为至少10^-8mol/l，优选为10^-9mol/L，更优选KDiss.为至少10^-10mol/L。

在一个实施方案中，根据本发明的抗体为单克隆抗体。在本申请中使用的术语“单克隆”表示由单种细胞或其子代生产的抗体群，并且与其靶抗原的单个抗原决定簇结合。在本申请中使用的术语“不与人IgG结合”或其等同语法用语表示不与人IgG特异性结合的抗体，即其KDiss.为10^-7mol/L或更差，例如10^-5mol/L。这不包括食蟹猴这样的多克隆抗体群，其已与人免疫球蛋白交叉吸附以除去与人IgG结合的食蟹猴IgG。由于此过程中形成的结合平衡，交叉吸附不提供不与人IgG结合的多克隆抗体群，更不必说单克隆抗体。因为此平衡下许多与人IgG结合的抗体不交叉吸附，而留在溶液中，于是留在得到的抗体制品中。因此，免疫球蛋白一旦与人IgG交叉吸附，不会完全排除任何抗人IgG的结合，而仍然显示人IgG结合。

本发明的其它方面为细胞系DSM ACC2799、细胞系DSM ACC2800、细胞系DSM ACC2801、细胞系DSM ACC 2802、细胞系DSM ACC2803，以及由细胞系DSM ACC2799、或细胞系DSM ACC2800、或细胞系DSMACC2801、或细胞系DSM ACC 2802、或细胞系DSM ACC2803生产的单克隆抗体。本发明的另一方面为抗体组合物，包含由细胞系DSMACC2799、细胞系DSM ACC2800、细胞系DSM ACC2801、细胞系DSMACC 2802和/或细胞系DSM ACC2803生产的抗体的混合物。本发明还包含组合物，其包含由细胞系DSM ACC2799、或细胞系DSM ACC2800、或细胞系DSM ACC2801、或细胞系DSM ACC 2802、或细胞系DSMACC2803生产的抗体。

使用根据本发明的抗体，能够最小化或甚至排除个体人血清的背景变化。

根据本发明，术语“猴”指食蟹猴、绒猴、恒河猴和狒狒。“猴”优选表示食蟹猴、恒河猴和狒狒。

优选抗人Ig抗体(Ig表示免疫球蛋白)为这样的抗体，其与不存在于食蟹猴免疫球蛋白上的表位特异性结合，在WO 2006/066912中对此有所描述。此表位的特征在于其与MAB<H-Fcγpan>M-R10Z8E9，也称MAB<h-Fc gamma>M-R10Z8E9，或简称MAB M-R10Z8E9结合。在根据本发明的优选实施方案中，抗人Ig抗体进一步的特征在于，其结合的表位与MAB M-R10Z8E9相同。MAB M-R10Z8E9由这样的细胞系生产，该细胞系于2004年12月22日保藏于德国微生物保藏中心(DSMZ)，保藏号为DSM ACC2708。优选抗人Ig抗体包含MAB M-R10Z8E9的可变重链和轻链结构域。更优选抗人Ig抗体包含MAB M-R10Z8E9可变重链和轻链结构域的CDR区和非人框架。优选抗人Ig抗体为单克隆抗体(抗人Ig mAb)。

优选用

仪器评估抗体的结合性质，特别是KDiss.。在此方法中，通过表面等离子体共振(SPR)的变化评价结合性质。可方便地将所研究的抗体结合到固相(称为芯片)上，并评估单克隆抗体、多克隆抗体、或甚至包含IgG的血清与此包被的芯片的结合。

根据本发明，用于免疫测定法的固相支持物在本领域现有技术中有广泛描述(见例如Butler，J.E.，Methods 22(2000)4-23)。

例如Hage，D.S.，于Anal.Chem.71(1999)294R-304R中描述了不同免疫测定法的原理。Lu，B.等人，于Analyst.121(1996)29R-32R中报道了抗体的定向固定，以用于免疫测定法。例如Wilchek，M.和Bayer，E.A.，Methods Enzymol.184(1990)467-469报道了抗生物素蛋白-生物素介导的免疫测定法。

本发明中使用的术语“双抗原桥联免疫测定法”表示夹心型免疫测定法，其中抗原与两种不同抗体结合，其各自与抗原中不相重叠或干扰的不同表位结合。在此测定法中，形成包含捕获抗体、抗原和示踪抗体的夹心体，抗原由此将与之结合的两种抗体桥联起来。

作为蛋白质，单克隆抗体和其恒定结构域包含许多反应性侧链与结合配偶体偶联，结合配偶体如表面、蛋白质、聚合物(例如PEG)、纤维素、或聚苯乙烯、酶、或结合对的成员。抗体的化学反应基团为例如，氨基(赖氨酸的ε-氨基、α-氨基)、硫醇基(胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸)、羧酸基(天冬氨酸、谷氨酸)和糖醇基。例如Aslam，M.和Dent，A.，Bioconjuation，麦考林出版公司(MacMillan Ref.Ltd.)(1999)，50-100页，对这样的方法有所描述。

术语“样品”包括来自猴的任意量的物质。这样的物质包括但不限于来自这样的个体的全血、血清或血浆，这些是在临床前例程中最广泛使用的样品来源。

术语“固相”指非流体物质，包括：颗粒(包括微粒和珠子)，其由如诸如聚合物、金属(顺磁、铁磁性颗粒)、玻璃和陶瓷等材料制成；凝胶物质如硅胶、氧化铝和聚合物凝胶；毛细管，其可以由聚合物、金属、玻璃和/或陶瓷制成；沸石和其它多孔物质；电极；微孔板；固体检测条(strip)；比色皿、管或其它分光计样品容器。测定法中的固相元件与测定法中可能接触到的惰性固体表面的不同之处在于，“固相”元件表面包含至少一个预期与捕获抗体相互作用的部分。固相可以是固定元件，如管、条、比色皿或微孔板，或可以是不固定的元件，如珠子和微粒。微粒还可以作为固相用于匀相测定法形式。可以使用允许蛋白质和其它物质非共价或共价附着的多种微粒。这样的颗粒包括：聚合物颗粒如聚苯乙烯和聚甲基丙烯酸甲酯；金颗粒如金纳米颗粒和金溶胶；和陶瓷颗粒如硅胶、玻璃和金属氧化物颗粒。见例如Martin，C.R.等人，Analytical Chemistry-News&Features70(1998)322A-327A，其通过引用并入本文。

可检测的标记的实例为色原(荧光或发光基团和染料)、酶、NMR-活性基团或金属颗粒、半抗原，例如洋地黄毒苷。可检测的标记还可以是光活化交联基团，例如叠氮基或吖丙啶基(azirine)。可以用电化学发光检测的金属螯合物也是优选的信号发射基团，特别优选钌螯合物，例如钌(联吡啶)₃ ²⁺螯合物。例如EP 0580979、WO 90/05301、WO 90/11511和WO92/14138中描述了适合的钌标记基团。

免疫测定法为技术人员所熟知。相关的教科书中总结了实施这样的测定法的方法，以及实际用途和操作。相关教科书的实例有Tijssen，P.，Preparation of enzyme-antibody or other enzyme-macromoleculeconjugates，于：Practice and theory of enzyme immunoassay，Burdon，R.H.和v.Knippenberg，P.H.(编)，爱思唯尔公司(Elsevier)，阿姆斯特丹(1990)221-278页；Colowick，S.P.和Caplan，N.O.(编)，“Methodsin Enzymology”，学术出版社，中涉及免疫检测方法的多卷，特别是卷70、73、74、84、92和121。

根据本发明的抗体可以由杂交瘤细胞系3.25.12(DSM ACC2799)、3.29.15(DSM ACC2800)、4.38.30(DSM ACC2801)、7.57.41(DSMACC2802)、7.72.32(DSM ACC2803)生产，这些杂交瘤细胞系本身也是本发明的一方面。根据本发明的其它抗体，即与食蟹猴IgG特异性结合、不与人IgG结合的抗体，可以用例如实施例3中概述的方法得到。

可选地，例如可以使用这样的方法，其中第一步先用竞争试验系统测定与同一靶抗原结合的两种抗体的表位重叠。为此目的，例如借助酶免疫测定法，测试所研究的抗体与已知抗体竞争结合固定化靶抗原的程度，例如根据本发明的细胞系生产的抗体的竞争结合程度。为此目的，将适当地固定化的靶抗原与标记形式的已知抗体和过量所研究的抗体进行孵育。通过测定在所研究的抗体存在和不存在的情况下，标记形式的抗体结合的量，能够评估所研究的抗体能够置换已知抗体的结合的程度。如果在同样的浓度置换多于20％，优选多于30％；或者所研究的抗体在更高的浓度，优选10³-10⁵倍过量于已知抗体时，如果置换多于70％，优选多于80％，则为发生表位重叠，两种抗体均与同一表位的相同或重叠部分结合。在所述方法的第二步中使用这样鉴定的抗体。此时测定第一步中鉴定的抗体与人IgG的结合。可以用例如ELISA、免疫测定法或用表面等离子体共振进行这样的测定。如果测定其不与人IgG结合，则定义这样的抗体为与食蟹猴IgG特异性结合、不与人IgG结合的抗体。可选地，根据本发明的抗体可以通过分别测定其对于食蟹猴IgG和人IgG的KDiss.并对比这些数值而得到鉴定。

本发明报道了测定药物抗体和抗药物抗体的复合物的免疫测定方法，所述复合物在下文中表示为DA/ADA复合物。更详细地，本发明包含用夹心型免疫测定法对猴种样品中药物抗体(DA)和针对所述药物抗体的抗体(抗药物抗体，ADA)的免疫复合物(DA/ADA复合物)进行免疫测定的方法，该方法包含捕获抗体和示踪抗体，其中所述抗体之一为与食蟹猴IgG特异性结合、优选不与人IgG结合的抗体，另一所述抗体为与人IgG特异性结合、优选不与食蟹猴IgG结合的抗体。在一个实施方案中，捕获抗体为与人IgG特异性结合、不与食蟹猴IgG结合的抗体，示踪抗体为与食蟹猴IgG特异性结合、不与人IgG结合的抗体。在不同的实施方案中，捕获抗体为与食蟹猴IgG特异性结合、不与人IgG结合的抗体，示踪抗体为与人IgG特异性结合、不与食蟹猴IgG结合的抗体。本发明的另一实施方案中，与食蟹猴IgG特异性结合的抗体和/或与人IgG特异性结合的抗体为单克隆抗体。

在本方法的优选实施方案中，样品与预定量的药物抗体预孵育。这使得无论样品中是否存在药物抗体，均可检测抗药物抗体，因为本方法检测的是DA/ADA复合物(见例如图5和6)。

根据人或人源化药物抗体和食蟹猴IgG之间的高度同一性，药物抗体的主要抗原决定簇为其互补决定区。抗药物抗体优选识别这些抗原决定簇。于是，多数抗药物抗体识别相应药物抗体的互补决定区、并从而与之结合。抗药物抗体-药物抗体复合物的形成屏蔽抗原表位，从而对抗夹心测定法中对所述复合物的测定。

例如如在WO 2006/066912中所描述的那样，抗人IgG抗体是与这样的表位特异性结合的抗体，所述表位不存在于从食蟹猴中得到的免疫球蛋白上。在优选实施方案中，抗人IgG抗体的进一步特征在于，其与由细胞系DSM ACC 2708生产的抗体结合的表位相同，也就是与这样的表位结合，所述表位存在于G类人免疫球蛋白的所有亚类中，而除了存在于黑猩猩的IgG上，在多数实验动物的免疫球蛋白上都不存在。在其它优选实施方案中，抗人IgG抗体是由细胞系DSM ACC2708生产的抗体。

令人吃惊地发现，使用根据本发明的方法防止了对于抗药物抗体的不完全检测。例如，如果捕获分子和抗药物抗体结合相同的抗原决定簇，即药物抗体的CDR，则药物抗体与捕获分子的结合会封闭这些表位，即将它们相对于抗药物抗体屏蔽起来，从而阻止了抗药物抗体的结合和被检测到。这导致对样品中的抗药物抗体的不完全检测。抗药物抗体通常对于药物抗体具有低结合亲和力，因此结合药物抗体需要抗药物抗体的两个抗原结合区的合作。于是，不能与捕获分子结合也可能导致对抗药物抗体的低检测。因此，通过抗药物抗体的CDR进行捕获不适合用于测定。

因此，本发明的一方面是用包含捕获抗体和示踪抗体的夹心免疫测定法对猴种样品中药物抗体(DA)和针对所述药物抗体的抗体(抗药物抗体，ADA)的免疫复合物(DA/ADA复合物)进行免疫测定的方法，其中所述抗体之一为与食蟹猴IgG特异性结合、不与人IgG结合的抗体，另一抗体为与人IgG特异性结合、不与食蟹猴IgG结合的抗体。在此方面的一个实施方案中，与食蟹猴IgG特异性结合、不与人IgG结合的抗体由细胞系DSM ACC2799或DSM ACC2800或DSM ACC2801或DSM ACC2802或DSM ACC2803生产。在此方面的另一实施方案中，与人IgG特异性结合、不与食蟹猴IgG结合的抗体由细胞系DSM ACC2708生产。

在本方法的一个实施方案中，形成的复合物的量与DA/ADA复合物、DA和/或ADA的浓度相关联。

在另一实施方案中，捕获抗体与抗药物抗体或DA/ADA复合物结合，不与抗药物抗体的CDR、或在序列上或几何结构上与CDR紧邻的框架区结合。

本发明的另一方面是用包含捕获抗体和示踪抗体的夹心免疫测定法对猴种样品中针对药物抗体的抗体(抗药物抗体，ADA)进行免疫测定的方法，其中捕获抗体为与食蟹猴IgG特异性结合、不与人IgG结合的抗体，示踪抗体为药物抗体。还有一方面是用包含捕获抗体和示踪抗体的夹心免疫测定法对猴种样品中针对药物抗体的抗体(抗药物抗体，ADA)进行免疫测定的方法，其中示踪抗体为与食蟹猴IgG特异性结合、不与人IgG结合的抗体，捕获抗体为药物抗体。

根据本发明的优选杂交瘤细胞系3.25.12、3.29.15、4.38.30、7.57.41、和7.72.32依据国际承认用于专利程序的微生物保存布达佩斯条约保藏于德国微生物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen undZellkulturen GmbH，DSMZ)：

克隆	保藏号	保藏日
			3.25.12	DSM ACC2799	2006.08.24
3.29.15	DSM ACC2800	2006.08.24
			4.38.30	DSM ACC2801	2006.08.24
7.57.41	DSM ACC2802	2006.08.24
			7.72.32	DSM ACC2803	2006.08.24
MAB M-R10Z8E9	DSM ACC2708	22.12.2004

由所述细胞系可得的抗体是本发明的实施方案。

提供下文的实施例和附图以帮助对本发明的理解，本发明的真正范围由随附的权利要求书阐明。应理解在不偏离本发明精神的情况下可以对列出的方法做出修改。

附图说明

图1：检测DA/ADA复合物的测定法——不加入DA。

将生物素化的抗人Ig抗体固定到抗生蛋白链菌素包被的微孔板(SA-MTP)上。药物抗体/抗药物抗体(DA/ADA)复合物被固定化抗人Ig抗体(Bi；生物素化的)所捕获。用洋地黄毒苷标记的(Dig；洋地黄毒苷化的)抗食蟹猴IgG抗体和抗洋地黄毒苷抗体辣根过氧化物酶(POD)缀合物(多克隆抗DIG抗体与POD缀合，pAb<Dig>POD)检测结合的DA/ADA复合物。用与食蟹猴IgG化学缀合的人IgG作为标准。

图2：检测DA/ADA复合物的测定法——加入DA。

在样品分析之前，用基于PBS的缓冲液稀释猴血清样品，掺加药物抗体。15分钟预孵育之后，用上述ELISA分析样品(见图1的说明)。

图3：用抗食蟹猴抗体检测ADA的测定法。

将生物素化的药物抗体与抗生蛋白链菌素包被的微孔板(SA-MTP)结合(Bi；生物素化的)。抗药物抗体(ADA)与固定化药物抗体结合。用洋地黄毒苷标记的(Dig；洋地黄毒苷化的)抗食蟹猴IgG抗体和抗洋地黄毒苷抗体辣根过氧化物酶缀合物(pAb<Dig>POD)检测结合的ADA。用与食蟹猴IgG化学缀合的抗人IgG抗体作为标准。

图4：DA/ADA复合物测定法的标准曲线。

用含有1％(v/v)食蟹猴血清的基于PBS的缓冲液稀释与食蟹猴IgG化学缀合的人IgG，图中给出了其在多个浓度下的光密度(OD)。

图5：在食蟹猴中进行HuMab<IGF-1R>单剂量药物动力学研究(3mg/kg；静脉注射)，检测该研究样品中的DA/ADA复合物。

在给药后0h和1176h之间的8个时间点，收集血清样品，用ELISA分析(如图1所示)，不加入药物抗体。将DA/ADA复合物的量(405nm的OD信号)相对于给药后的时间作图。

图6：在食蟹猴中进行HuMab<IGF-1R>单剂量药物动力学研究(3mg/kg；静脉注射)，检测该研究样品中的DA/ADA复合物。

在给药后0h和1176h之间的8个时间点，收集血清样品，用ELISA分析(如图2所示)，加入药物抗体。将DA/ADA复合物的量(405nm的OD信号)相对于给药后的时间作图。

图7：单克隆抗食蟹猴IgG和多克隆食蟹猴IgG对于食蟹猴IgG检测的对比。

用含有1％(v/v)食蟹猴血清的基于PBS的缓冲液稀释与食蟹猴IgG化学缀合的人IgG，图中给出了其在多个浓度下的光密度(信号(中位值))。

实施例

实施例1

制备食蟹猴IgG和食蟹猴Fc片断

a)制备食蟹猴IgG

食蟹猴血清经

380脱脂，用硫酸铵(ad 2.0M)沉淀。将沉淀在磷酸盐缓冲液均质化，以磷酸盐缓冲液，pH 7.0透析。用DEAE离子交换色谱在pH 7.0分离混合物，通过凝胶过滤浓缩纯化流出液中的IgG。

b)制备食蟹猴Fc

在15mM半胱氨酸存在下，在37℃，pH 7.0用木瓜蛋白酶(4mU木瓜蛋白酶每mg IgG)将a)中纯化的IgG片断化。80分钟后，将混合物与碘乙酰胺(ad 30mM)在25℃孵育，随后以含30mM NaCl，pH 7.5的10mM HEPES缓冲液透析。用Q-琼脂糖离子交换色谱分离混合物。Fab级分在流出液中，用浓度达1M氯化钠的盐梯度洗脱Fc级分。最后，将Fc级分以磷酸盐缓冲液透析，通过凝胶过滤纯化。

实施例2

产生单克隆抗食蟹猴IgG抗体

a)免疫小鼠

用100μg食蟹猴IgG(食蟹猴免疫球蛋白G)或与CFA(弗氏完全佐剂)混合的食蟹猴Fc，对8-12周龄的雌性Balb/c或NMRI小鼠分别进行腹膜内初次免疫。在4、7和10周后，每只小鼠用100μg与IFA(弗氏不完全佐剂)混合的食蟹猴IgG再进行三次腹膜内免疫步骤。然后在融合前三天，各用100μg处于PBS(磷酸缓冲盐溶液；加入抗组胺和肾上腺素)中的食蟹猴IgG进行静脉内加强免疫。

b)融合和克隆

根据Galfré，G.和Milstein，C.，Methods Enzymol.73(1981)3-46将按照a)免疫的小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合。将约1×10⁸脾细胞与约2×10⁷骨髓瘤细胞(P3x63-Ag8.653，ATCC CRL1580)混合，离心(10分钟，300×g，4℃)。之后用无FCS(胎牛血清)的RPMI 1640培养基洗涤细胞一次，在50mL尖底管中以400×g再次离心。此后，加入1mL PEG(聚乙二醇，分子量4,000g/mol)，通过吸液进行混合。在37℃水浴1分钟后，逐滴加入5mL无FCS的RPMI 1640，混合悬液，用含10％(v/v)FCS的RPMI 1640加满至50mL，然后离心。沉淀的细胞用含10％FCS的RPMI1640重悬，在含生长因子白介素6(IL-6，100U/mL)的次黄嘌呤-重氮丝氨酸选择培养基(100mmol/L次黄嘌呤，1μg/mL重氮丝氨酸，处于含10％FCS的RPMI 1640中)中铺板。约10天之后，测定原代培养物的特定抗体合成(参见实施例3)。将显示与食蟹猴IgG结合、且不与人正常IgG交叉反应的原代培养物用流式细胞仪(FACSAria，BD生物科学公司(BD Biosciences))通过单细胞沉积至96孔细胞培养板内而进行个体化，培养基中含生长因子白介素6(100U/mL)。依照此实验方案产生保藏的克隆(表1)。用于本发明的细胞系保藏在德国微生物保藏中心(DSMZ)(表1)。

表1：

抗食蟹猴mAb克隆

克隆	IgG类和亚类	免疫原	保藏号	保藏日
					3.25.12	IgG1，κ	IgG	DSM ACC2799	2006.08.24
3.29.15	IgG1，κ	IgG	DSM ACC2800	2006.08.24
					4.38.30	IgG1，κ	IgG	DSM ACC2801	2006.08.24
7.57.41	IgG2a，κ	Fc	DSM ACC2802	2006.08.24
					7.72.32	IgG1，κ	Fc	DSM ACC2803	2006.08.24

c)由细胞培养物上清生产免疫球蛋白

产生的杂交瘤细胞系以1.0×10⁵到2.2×10⁵个细胞每mL(取决于个体细胞系)的初始细胞密度(活细胞)在补加10％FCS的RPMI 1640培养基中接种，用搅拌技术扩增9到16天(取决于个体细胞系)的时间。在收获的培养物上清中，单克隆抗体浓度达到每mL 36到61μg。培养物上清得到的抗体的纯化根据标准蛋白质化学方法例如根据Bruck，C.等人，Methods Enzymol.121(1986)587-596进行。

实施例3

检测抗食蟹猴IgG抗体的筛选法

a)初步筛选与食蟹猴IgG优先结合的抗体

为测定杂交瘤细胞培养物上清中抗体的特异性，将重组抗生蛋白链菌素(MicroCoat，Bernried公司，批次MC 1098)预包被的MTP(微孔板)分别用处于补加1.0％(w/v)BSA II的PBS中的生物素化的食蟹猴IgG，250ng/mL或生物素化的人IgG，250ng/mL进行包被(100μL每孔，室温孵育60分钟，伴随振荡)，之后用0.9％(w/v)NaCl/0.05％

20洗涤三次。下一步，每孔加入100μL待测的抗体溶液(培养物上清)，室温孵育60分钟，伴随振荡。经过用0.9％(w/v)NaCl/0.05％

20洗涤三次的步骤之后，每孔加入100μL辣根过氧化物酶标记的多克隆绵羊抗小鼠Fcγ抗体的F(ab’)₂片断，以检测结合的样品抗体，室温孵育60分钟，伴随振荡。随后，按上文进行洗涤。最后，每孔加入100μL

(德国罗氏诊断产品有限公司(Roche Diagnostics GmbH)，目录号1684302)。室温孵育30分钟后，在商用微孔板ELISA读板器中测量405和492nm[405/492]处的消光(OD)。此筛选选出与食蟹猴IgG很好结合且对人IgG显示无/低交叉反应性的抗体。选出的抗体继续进行步骤b)的测定。

b)筛选对人IgG没有可检测的交叉反应性的抗体

为了从初步筛选a)中选出的抗体中鉴定出对人IgG显示没有可检测的交叉反应性的抗体，进行下文描述的测定法。将重组抗生蛋白链菌素(MicroCoat，Bernried公司，批次MC 1098)预包被的MTP用处于含1.0％BSA II的PBS(磷酸缓冲盐溶液)中的生物素化的食蟹猴IgG，250ng/mL进行包被(100μL每孔，室温孵育60分钟，伴随振荡)，随后用0.9％(w/v)NaCl/0.05％

20洗涤三次。下一步，分别加入每孔100μL待测的抗体溶液(培养物上清)，和50μL PBS(参照信号)，或50μL人IgG溶液(80mg/mL；测定法中的终浓度：27mg/mL；测定信号)，室温孵育60分钟，伴随振荡。经过用0.9％(w/v)NaCl/0.05％

20洗涤三次的步骤之后，每孔加入100μL辣根过氧化物酶标记的多克隆绵羊抗小鼠Fcγ抗体的F(ab’)₂片断，以检测结合的样品抗体，室温孵育60分钟，伴随振荡。随后，按上文进行洗涤。最后，每孔加入100μL

(德国罗氏诊断产品有限公司，目录号1684302)。室温孵育30分钟后，在商用微孔板ELISA读板器中测量[405/492]nm处的消光。选择测定信号显示与相关的参照信号没有显著差异的抗体作进一步用途。以量化角度而言，这等于与人IgG的交叉反应性估计为＜0.001％。

(“没有显著差异”的定义：测定信号＝参照信号的90-110％。)

实施例4

制备食蟹猴IgG(Cyno-IgG)和人IgG(H-IgG)的缀合物

a)制备Cyno-IgG-SATP

从食蟹猴血清中通过离子交换色谱法和凝胶过滤纯化的食蟹猴IgG以30mM磷酸钾缓冲液，pH 7.1透析，调整得到的蛋白质溶液至蛋白质浓度为约10mg/ml。将N-琥珀酰亚胺-3-乙酰硫代丙酸酯(SATP)溶于DMSO，以1∶5(IgG∶SATP)的摩尔比加入抗体溶液中。混合物在25℃，pH 7.1孵育60分钟。通过加入L-赖氨酸至终浓度为10mM停止反应，将pH调整为pH 6.1，以含200mM NaCl和1mM EDTA，pH 6.1的10mM磷酸钾缓冲液进行透析，除去过量的SATP。

b)制备H-IgG-MH

从人血清中通过离子交换色谱法纯化的人IgG以30mM磷酸钾缓冲液，pH 7.1透析，调整得到的蛋白质溶液至蛋白质浓度为约20mg/ml。将马来酰亚胺己酰-N-羟基琥珀酰亚胺酯(Maleimidohexanoyl-N-hydroxysuccinimide ester，MHS)溶于DMSO，以1∶6(IgG∶MHS)的摩尔比加入抗体溶液中。混合物在25℃，pH 7.1孵育60分钟。通过加入L-赖氨酸至终浓度为10mM停止反应，将pH调整为pH 6.1，以含200mMNaCl和1mM EDTA，pH 6.1的10mM磷酸钾缓冲液进行透析，除去过量的MHS。

c)缀合Cyno-IgG-SATP和H-IgG-MH

加入2.5％(v/v)1M羟胺溶液，pH 7.5，在25℃孵育60分钟，将Cyno-IgG-SATP去乙酰化为Cyno-IgG-SH。去乙酰化的抗体与H-IgG-MH混合(Cyno-IgG-SH∶H-IgG-MH的摩尔比＝1∶1)至总IgG的终浓度为约7mg/ml。将pH调整为7.1，在25℃孵育混合物。用分析性凝胶过滤柱(例如TSK 3000)分析缀合过程。一般而言，在40分钟后通过加入半胱氨酸至终浓度为2mM停止缀合过程。孵育30分钟后，加入N-甲基马来酰亚胺(NMM)至终浓度为5mM，将pH调整为7.5。在25℃孵育60分钟后，用丙烯葡聚糖凝胶S-300通过凝胶过滤色谱法分离缀合物，除去未缀合的抗体。

实施例5

制备洋地黄毒苷化的单克隆抗食蟹猴Fc抗体

a)制备单克隆抗食蟹猴Fc抗体

将单克隆抗食蟹猴Fc抗体的发酵上清浓缩约10倍，移至含20mMTRIS，1M硫酸铵，pH 9.0的缓冲液，上样至蛋白A-琼脂糖柱。将用0.2M柠檬酸钠，pH 3.0洗脱的洗脱液以磷酸盐缓冲液，pH 7.5进行透析。通过用针对牛IgG的固定化抗体进行免疫吸附分离牛IgG污染物(来自发酵液中的FCS)。

b)单克隆抗食蟹猴Fc抗体的洋地黄毒苷化

将处于磷酸盐缓冲液中的单克隆抗食蟹猴Fc抗体溶液调整为pH 8.1，浓度为约2mg/ml。将洋地黄毒苷-3-O-甲基羰基-ε-氨基己酸-N-羟基琥珀酰亚胺酯溶于DMSO，以1∶5的摩尔比加入抗体溶液中。60分钟后通过加入L-赖氨酸停止反应，以含150mM NaCl，pH 7.5的50mM磷酸钾缓冲液透析除去过量的标记试剂。

实施例6

通过

系统评估抗体的结合/特异性

所有的测量均用使用CM5芯片的

2000仪器进行。通过标准胺偶联实现抗体对芯片的包被。除非另有说明，所有的孵育步骤均于25℃在HBS缓冲液(HEPES，NaCl，pH 7.4)中进行。将饱和量的不同单克隆抗食蟹猴IgG抗体、MAB M-R10Z8E9和多克隆抗人Fcγ抗体(Dianova公司，德国)，通过胺偶联分别固定在同一CM5芯片的不同槽(channel)上。所有的动物血清均在含1mg/ml羧甲基葡聚糖的HBS缓冲液中稀释至终浓度为1％。通过注入1比100稀释的血清并孵育60秒分析结合。通过用HBS缓冲液洗涤芯片表面180秒测量解离。用

的BIAevaluation软件，以1∶1兰米尔拟合模型(Langmuir fitting model)计算解离常数值(＝KDiss.)。对于所有动物血清，此计算都基于IgG水平为15mg/ml的假设。选择开始注入测试抗体80秒后的信号值用于对比结合的IgG的量(表2中的RU)。

表2：

动物血清与单克隆抗食蟹猴IgG抗体和多克隆抗人Fcγ抗血清的结合信号[RU]

表2显示单克隆抗食蟹猴IgG抗体不与人血清交叉反应。只检测到了其与食蟹猴、恒河猴和狒狒血清包含的IgG的结合。与单克隆抗食蟹猴IgG抗体不同，多克隆抗人Fc抗体显示与人、狗和所有测试猴种的血清的高反应性。

实施例7

测定DA/ADA复合物——不加入DA

在第一步中，生物素化的MAB M-R10Z8E9结合至抗生蛋白链菌素包被的微孔板(SA-MTP)的孔中。通过洗涤除去过量的未结合抗体。之后，在孔中孵育猴血清样品和参照标准(人IgG与掺加在1％食蟹猴血清中的食蟹猴IgG化学缀合)。洗去未结合的物质之后，结合的DA/ADA复合物用洋地黄毒苷化的抗食蟹猴抗体检测，而后与辣根过氧化物酶标记的抗洋地黄毒苷抗体进行孵育。抗体-酶缀合物催化

底物的显色反应。用ELISA读板器在波长405nm处(参照波长：490nm([405/490]nm))测量信号。以一式两份测定各血清样品的吸光值。图1显示例示此测试系统的方案。

实施例8

测定DA/ADA复合物——加入DA

样品分析之前，将猴血清样品在基于PBS的缓冲液中稀释，掺加药物抗体。15分钟预孵育之后，通过上述ELISA分析样品。图2显示例示此测试系统的方案。

实施例9

检测食蟹猴药物动力学研究样品中的DA/ADA复合物

用针对IGF-1R(WO 2005/005635；3mg/kg；iv)的人抗体进行食蟹猴血清样品单剂量药物动力学研究(PK＝药物动力学)，用上述ELISA进行分析：i)检测DA/ADA复合物，不加入药物抗体(图5)，和ii)检测DA/ADA复合物，加入药物抗体(图6)。在给药后0h和1176h之间的8个时间点，收集血清样品并分析。将DA/ADA复合物的量(405nm处的OD信号)相对于给药后的时间作图。如图5所示，如果体内形成AD/ADA复合物，而未经体外加入药物抗体，则血清样品中仅在336h和672h之间(峰形)检测到阳性信号。不存在抗药物抗体的情况下，没有免疫复合物形成，检测不到阳性信号(336h之前的时间点)。给药后672h或之后，由于样品中不存在药物，不能检测到复合物。当在血清样品中加入药物抗体作为预孵育步骤时，均能检测到/可检测到体内形成和体外形成的DA/ADA复合物。如图6所示，阳性信号仅依赖于ADA的产生。两幅图(图5和6)均与药物-时间曲线很好地相关。

实施例10

用抗食蟹猴抗体进行ADA检测的测定法

在第一步中，将生物素化的药物抗体(针对IGF-1R的人抗体)结合到抗生蛋白链菌素包被的微孔板(SA-MTP)的孔中。洗涤除去过量未结合的抗体。之后，孵育猴血清样品(在基于PBS的缓冲液中稀释20倍)和参照标准。洗去未结合的物质之后，用洋地黄毒苷化的抗食蟹猴抗体检测结合的抗药物抗体(ADA)，而后用辣根过氧化物酶标记的抗洋地黄毒苷抗体孵育。抗体-酶缀合物催化

底物的显色反应。用ELISA读板器测量波长405nm处的信号(参照波长：490nm)。以一式三份测定各血清样品的吸光值。图3显示例示此测试系统的方案。

实施例11

制备针对食蟹猴IgG的多克隆抗体

a)从兔血清中纯化多克隆抗体

根据标准方法，已经用食蟹猴Fc对兔进行免疫。对于来自五只用食蟹猴Fc免疫的兔的原始血清，用Aerosil(1.5％(w/v))脱脂除去其中的脂成分，用硫酸铵(1.7M)沉淀免疫球蛋白。经酸处理(30min.，pH 5.5)并以补加50mM NaCl，pH 7.0的15mM磷酸钾缓冲液透析之后，用DEAE离子交换色谱法于pH 7.0分离混合物，将流出液中的IgG级分(＝兔多克隆抗食蟹猴IgG抗体)浓缩至约25mg/ml。

b)制备亲和纯化的多克隆兔抗食蟹猴IgG抗体(pAb<Cyno-IgG>)，其对人IgG没有交叉反应性

将步骤a)的浓缩IgG级分移至补加150mM NaCl，pH 7.5的50mM磷酸钾缓冲液系统(PBS)。用现有技术将食蟹猴IgG与NHS琼脂糖缀合，制备得到具有固定化食蟹猴IgG的免疫吸附剂，填充到柱中，用补加150mM NaCl pH 7.5的50mM磷酸钾缓冲液平衡。

将10mg IgG/ml免疫吸附剂上样至用PBS平衡的柱中。依次用PBS、补加0.05％(w/v)

20的0.5M NaCl和30mM NaCl洗柱。用3mMHCl和1M丙酸洗脱与亲和基质特异性结合的IgG，以PBS透析。

为除去对人IgG具有交叉反应性的抗体，将亲和纯化的抗体上样至具有固定化人IgG的亲和柱中，该亲和柱为用现有技术将非特异性人IgG与NHS琼脂糖缀合制备而得。用PBS平衡柱。将约6mg IgG/ml免疫吸附剂上样至柱中。特异性多克隆IgG级分在流出液中。用补加0.05％(w/v)

20的0.5M NaCl、30mM NaCl、1M丙酸和PBS令柱再生后，重复进行两次对于非特异性结合的IgG的免疫吸附，以完全除去对人IgG具有交叉反应性的抗体。

将得到的对人IgG不具有交叉反应性的纯化多克隆抗食蟹猴IgG抗体浓缩至约4mg/ml，储存于-80℃。

实施例12

用

系统评估多克隆兔抗食蟹猴Fc抗体(pAb<Cyno-Fc>)的抗体结合/特异性

全部的测量均用使用CM5芯片的

2000仪器进行。通过标准胺偶联实现抗体对此芯片的包被。除非另有说明，所有的孵育均在HBS缓冲液(HEPES，NaCl，pH 7.4)中在25℃进行。将饱和量的多克隆抗食蟹猴IgG抗体通过胺偶联固定在CM5芯片。所有的动物血清均在含1mg/ml羧甲基葡聚糖的HBS缓冲液中稀释至终浓度为1％。通过注入1比100稀释的血清并孵育60秒分析结合。通过用HBS缓冲液洗涤芯片表面180秒测量解离。用

的BIAevaluation软件，以1∶1兰米尔拟合模型计算解离常数值(＝KDiss.)。对于所有动物血清，此计算都基于IgG水平为15mg/ml的假设。选择开始注入测试抗体80秒后的信号值用于对比结合的IgG的量(表3中的RU)

表3：

动物血清与多克隆抗食蟹猴IgG抗体的结合信号[RU]

表3显示多克隆抗食蟹猴IgG抗体不与人血清交叉反应。只检测到了其与绒猴、食蟹猴、恒河猴和狒狒血清包含的猴IgG的结合。与单克隆抗食蟹猴IgG抗体不同，多克隆抗食蟹猴IgG抗体显示与NMRI小鼠血清的反应性。而且多克隆抗食蟹猴IgG抗体不与人IgG结合，且与猴IgG和小鼠IgG之间的反应性的差异至少为100倍。

Claims (15)

1.单克隆抗体，其由细胞系DSM ACC2799、或细胞系DSMACC2800、或细胞系DSM ACC 2801、或细胞系DSM ACC2802、或细胞系DSM ACC2803生产。

2.用包含捕获抗体和示踪抗体的双抗原桥联免疫测定法对猴种样品中人或人源化抗体和针对所述人或人源化抗体的抗体的免疫复合物进行免疫测定的非诊断目的的方法，特征在于所述捕获抗体或示踪抗体之一是权利要求1所述的抗体，另一抗体是与人免疫球蛋白特异性结合且不与食蟹猴IgG结合的抗体。

3.权利要求2所述的方法，特征在于捕获抗体为与人IgG特异性结合且不与食蟹猴IgG结合的抗体，示踪抗体为权利要求1所述的抗体。

4.权利要求2所述的方法，特征在于捕获抗体为权利要求1所述的抗体，示踪抗体为与人IgG特异性结合且不与食蟹猴IgG结合的抗体。

5.权利要求2到4任一项所述的方法，特征在于所述权利要求1所述的抗体和/或所述与人免疫球蛋白特异性结合且不与食蟹猴IgG结合的抗体为单克隆抗体。

6.权利要求2到4任一项所述的方法，特征在于形成的复合物的量与DA/ADA复合物、DA和/或ADA的浓度相关联，其中所述DA/ADA复合物是人或人源化抗体和针对所述人或人源化抗体的抗体的免疫复合物，DA是人或人源化抗体，且ADA是针对所述人或人源化抗体的抗体。

7.权利要求2到4任一项所述的方法，特征在于样品与预定量的所述人或人源化抗体预孵育。

8.用包含捕获抗体和示踪抗体的双抗原桥联免疫测定法对猴种样品中针对人或人源化抗体的抗体进行免疫测定的非诊断目的的方法，特征在于捕获抗体为权利要求1所述的抗体，示踪抗体为人或人源化抗体。

9.用包含捕获抗体和示踪抗体的双抗原桥联免疫测定法对猴种样品中针对人或人源化抗体的抗体进行免疫测定的非诊断目的的方法，特征在于示踪抗体为权利要求1所述的抗体，捕获抗体为人或人源化抗体。

10.权利要求2、8或9任一项所述的方法，特征在于捕获抗体通过特异性结合对固定化。

11.权利要求10所述的方法，特征在于捕获抗体与生物素缀合，通过固定化抗生物素蛋白或抗生蛋白链菌素进行固定。

12.权利要求2、8或9任一项所述的方法，特征在于示踪抗体通过特异性结合对与可检测的标记缀合。

13.权利要求12所述的方法，特征在于示踪抗体与洋地黄毒苷缀合，通过针对洋地黄毒苷的抗体实现与可检测的标记连接。

14.杂交瘤细胞系，其选自细胞系DSM ACC2799、DSM ACC2800、DSM ACC2801、DSM ACC2802、DSM ACC2803。

15.用于权利要求3到14任一项所述的方法的抗体组合物，特征在于其包含由细胞系DSM ACC2799、细胞系DSM ACC2800、细胞系DSMACC2801、细胞系DSM ACC 2802和/或细胞系DSM ACC2803生产的抗体的混合物。

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