CN101389330A - 采用氨基异吲哚啉化合物治疗皮肤狼疮的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了治疗人皮肤狼疮的方法。具体的方法包括单独或联合第二活性试剂施用(+)－2－[1－(3－乙氧基－4－甲氧基苯基)－2－甲基磺酰乙基]－4－乙酰氨基异吲哚啉－1，3－二酮、4－(氨基)－2－(2，6－二氧代(3－哌啶))－异吲哚啉－1，3－二酮(ACTIMID^TM)、3－(4－氨基－1－氧代－1，3－二氢－异吲哚－2－基)－哌啶－2，6－二酮(REVLIMID^)或环丙基{2－[(1S)－1－(3－乙氧基－4－甲氧基苯基)－2－(甲基磺酰)乙基]－3－氧代异吲哚啉－4－基}甲酰胺。

Description

采用氨基异吲哚啉化合物治疗皮肤狼疮的方法

本申请主张于2005年12月29日提交的美国临时申请60/754,795，于2005年12月29日提交的美国临时申请60/755,246，以及于2006年3月30日提交的美国临时申请60/787,436的权益，其内容在此全文引用作为参考。

1.技术领域

本发明提供了通过单独或在替代实施方式中联合其它治疗法施用(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮、4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶))-异吲哚啉-1，3-二酮(ACTIMID^TM)、3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮

或环丙基{2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰)乙基]-3-氧代异吲哚啉-4-基}甲酰胺治疗、预防和/或控制皮肤狼疮的方法。

本发明还提供了在治疗、预防和/或控制皮肤狼疮的方法中采用的单用或与其它治疗法联用的包含(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮、4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶))-异吲哚啉-1，3-二酮、3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮或环丙基{2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰)乙基]-3-氧代异吲哚啉-4-基}甲酰胺的药物组合物和剂型。

2.背景技术

狼疮或红斑狼疮是能够在身体不同部位，尤其是皮肤、关节、血液和肾中引起慢性炎症的自身免疫性疾病。正常情况下身体的免疫系统可生成称为抗体的蛋白，以使身体抵御病毒、细菌和其它外来物质(即抗原)。在如狼疮等自身免疫性疾病中，免疫系统失去了辨别抗原与其自身细胞和组织的差别的能力，并能使抗体直接针对其自身细胞和组织形成免疫复合物。这些免疫复合物可在组织中累积并引起组织炎症、损伤和/或疼痛。狼疮的三种最常见的类型包括系统性红斑狼疮(SLE)、皮肤型红斑狼疮(CLE)和药物诱导型狼疮。对狼疮和红斑狼疮更具体的描述可参见Wallace，2000，The Lupus Book：AGuide for Patients and Their Families，Oxford University Press，修订和扩充版，其全文在此引用作为参考。

系统性红斑狼疮(SLE)是一种临床定义的涉及多器官系统的自身免疫疾病，并涉及直接针对细胞核的抗体。SLE可作用于包括关节、皮肤、肺、心脏、血液、肾或神经系统在内的身体任意系统或器官。SLE的症状可以从微小的不方便到非常严重，甚至威胁生命。例如，SLE患者可能经历(a)没有疼痛或极度疼痛，特别在关节处；(b)没有皮肤表现或毁损状的皮疹；和/或(c)不涉及器官或严重的器官破坏。如上文讨论，SLE的许多临床表现由免疫复合物对各种组织或细胞表面成分的作用所引起。然而，目前仍然不清楚是否存在多克隆B细胞激活或对特定抗原的应答。尽管如此，针对SLE形成的遗传倾向可能确实存在。更详细的描述可参见Lahita，1999，Systemic LupusErythematosus，Academic Press，第三版，其内容在此全文引用作为参考。

药物诱导型狼疮通常在特定处方药物的使用后出现。药物诱导型狼疮的症状与SLE类似。通常与药物诱导型狼疮有关的药物为肼苯哒嗪(用于治疗高血压或)和普鲁卡因胺(用于治疗心率不规则)。然而，服用该药物的人中仅有极少数会形成外显的药物诱导型狼疮。该症状通常会随药物的停用而消退。

皮肤狼疮或皮肤型红斑狼疮主要影响皮肤并通常以皮肤炎症、皮肤皮疹和皮肤出血为特征。皮肤狼疮还可以影响头发和黏膜，但通常不影响内部器官，如SLE。皮肤狼疮可被分类为包括急性皮肤型红斑狼疮(ACLE)、亚急性皮肤型红斑狼疮(SCLE)、慢性皮肤型红斑狼疮(CCLE)或盘状红斑狼疮(DLE)以及新生儿红斑狼疮(NLE)的组。对皮肤狼疮或皮肤型红斑狼疮的更具体描述可参见Kuhn等人，2004，Cutaneous Lupus Erythematosus，Springer，第一版，其全文在此引用作为参考。

ACLE通常是一种光敏感性皮肤病。它可以表现为红色皮肤无光泽区域，类似于持久晒伤或有类似皮疹的外观。ACLE可能在面部中央以蝴蝶模式爆发和/或在包括手臂、腿部和身体的其它部位以一般模式爆发。ACLE的病因据认为是多因子的，其中包括遗传、环境和激素因子。对于具有遗传易患病的患者，ACLE可被病毒(例如，EBV)或在紫外光下暴露诱发。

SCLE是一种无疤痕无萎缩生成的光敏感性皮肤病。在某些情况下，SCLE表现为通常在阳光暴露后在上背部和胸部的不发痒的环形干式皮疹。SCLE可发生于患有系统性红斑狼疮患者，

综合征以及补体成分2(C2d)缺陷的患者，或者可被药物诱导。SCLE通常发生于遗传易患病的个体，更通常发生于具有人白细胞抗原B8(HLA-B8)、人白细胞抗原DR3(HLA-DR3)、人白细胞抗原DRw52(HLA-DRw52)以及人白细胞抗原DQ1(HLA-DQ1)的患者。SCLE与抗-Ro(SS-A)自体抗体强烈相关。SCLE通常在紫外光暴露后显现，但还涉及其它诱发或刺激因素。

CCLE或DLE是慢性的有疤痕有萎缩生成的光敏感性皮肤病。DLE通常表现为可留下白色疤痕的红色鳞状斑块。DLE主要作用于脸颊和鼻子，但有时涉及上背部、颈部、手背、头皮裸露部分以及嘴唇。DLE可发生于患有系统性红斑狼疮(SLE)的患者。部分患者还具有SCLE病灶，部分可具有颊部红斑。遮光剂、局部皮质类固醇和抗疟药物具有治疗效果。DLE可能发生于遗传易患病的个体，但确切的遗传联系未得到确定。DLE的病理生理学尚未得到很好的理解。据提示角化细胞中热休克蛋白在紫外线(UV)光照或应力下被诱导，该蛋白可作为γδT-细胞-介导的表皮细胞细胞毒性的靶标。

疣状DLE、深部狼疮、黏膜DLE、手掌-足底DLE和狼疮性肿胀是DLE的部分具体形式。疣状DLE指具有可形成较厚鳞片的病灶的DLE。深部狼疮指具有可能与皮肤下脂肪组织中的坚硬肿块同时发生的病灶的DLE。黏膜DLE指在口部，鼻部和眼部的黏膜偶发的病灶。手掌-足底DLE指在手部和足部偶发的病灶。狼疮性肿胀表现为在可能瘙痒并具有较小尺度的头部和颈部的光滑、有光泽、红紫色的病斑。狼疮性肿胀病变通常清楚无疤痕，并可在其原来的分布处复发。

NLE是在儿童中罕见的病症并通常表现为无疤痕、无萎缩生成的病灶。在某些情况下，患有SCLE的母亲生下的新生婴儿可能患上具有短时环状或环形皮疹的NLE。据认为NLE与各种因素相关，其中包括遗传倾向、病毒感染和其它未知因素。NLE可作用于皮肤、心脏、肝脏、血液形成元件或脾脏。

儿童红斑狼疮(LE)与遗传因素有关，并可能与其它环境事件有关。儿童LE可作用于皮肤或可能显示为系统性LE并作用于体内任意器官系统，通常为肾脏、关节和血液。

皮肤狼疮通常以抗疟疾剂和皮质类固醇进行治疗。然而，这些药物可能对治疗部分皮肤狼疮无效或它们可能在长期连续使用时具有严重的副作用。因此，有必要开发治疗皮肤狼疮的新型方法。

3.发明综述

一方面，本发明提供了治疗、预防和/或控制人皮肤狼疮，包括但不限于急性皮肤型红斑狼疮(ACLE)、亚急性皮肤型红斑狼疮(SCLE)、新生儿红斑狼疮(NLE)、儿童红斑狼疮以及慢性皮肤型红斑狼疮(CCLE)或者盘状红斑狼疮(DLE)(例如疣状DLE、深部狼疮、黏膜DLE、手掌-足底DLE和狼疮性肿胀)的方法。本发明提供了治疗、预防和/或控制人，包括但不限于男人、女人及儿童皮肤狼疮的方法。

一方面，所述方法包含了向需要该种治疗、预防或控制的患者施用治疗或预防有效量的基本不含其(-)对映体的(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮，或其药学上可接受的盐或溶剂化物(例如，水合物)。在优选的实施方式中，该化合物的盐或溶剂化物可取代该游离化合物进行使用。

一方面，本发明提供了向需要该种治疗、预防或控制的患者施用治疗或预防有效量的4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶))-异吲哚啉-1，3-二酮，或其药学可接受的前药、代谢物、多晶形、盐、溶剂化物(例如水合物)、立体异构体或笼形化合物的方法。在优选的实施方式中，可采用该化合物的盐或溶剂化物。

一方面，本发明提供了向需要该种治疗、预防或控制的患者施用治疗或预防有效量的3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮，或其药学可接受的前药、代谢物、多晶形、盐、溶剂化物(例如水合物)、立体异构体或笼形化合物的方法。在优选的实施方式中，可采用该化合物的盐或溶剂化物。

一方面，本发明提供了以基本不含其(R)对映体的环丙基{2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰)乙基]-3-氧代异吲哚啉-4-基}甲酰胺，或其药学上可接受的盐或溶剂化物(例如水合物)治疗、预防和/或控制皮肤狼疮的方法。在其它实施方式中，该化合物的盐或溶剂化物可取代该游离化合物进行使用。

在部分实施方式中，本发明进一步包含了施用治疗有效量的至少一种第二活性试剂，其可以是如非类固醇药剂(例如水杨酸)或皮质类固醇类(例如地塞米松)等抗炎剂、抗疟药、免疫抑制剂、抗生素、抗病毒剂、免疫增强药、激素、PGE2或其组合。

在另一实施方式中，本发明的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体可通过包括但不限于油膏、乳膏、凝胶、糊剂、粉剂、洗剂、喷雾、擦剂、泥敷剂、气雾剂、溶液、乳状液、悬浮液及其组合的剂型进行局部施用。

在更进一步的实施方式中，本发明的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体可通过肠胃外或口服或控释方式施用。

4.附图说明

图1显示了CD51/61和ICAM-1在非刺激状态下在HUVEC中的细胞表达；

图2显示了E-选择素和P-选择素在非刺激状态下在HUVEC中的细胞表达；

图3显示了E-选择素和P-选择素在TNF-α-刺激状态下在HUVEC中的细胞表达；

图4显示了VE-钙粘蛋白和CD44在TNF-α-刺激状态下在HUVEC中的细胞表达；

图5显示了CD51/61、ICAM-1、ICAM-2、VCAM-1、E-选择素、P-选择素、HLA I类和HLA II类在TNF-α-刺激状态下在HUVEC中的细胞表达；

图6显示了E-选择素在TNF-α-刺激状态下在HUVEC中的细胞表达，其中E-选择素通过ELISA进行检测；

图7显示了对人角化细胞在紫外B诱导下生成TNF-α的研究；

图8显示了对人角化细胞在紫外B诱导下生成TNF-α的研究；

图9显示了对人角化细胞在紫外B诱导下生成TNF-α的研究。

5.发明详述

本发明的一方面包含了治疗、控制和/或预防皮肤狼疮的方法，其包括向皮肤狼疮患者施用治疗或预防有效量的基本不含其(-)对映体的(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

本发明的另一方面包括治疗、控制和/或预防皮肤狼疮的方法，其包括向患有皮肤狼疮的患者施用治疗或预防有效量的4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶))-异吲哚啉-1，3-二酮或其药学可接受的前药、代谢物、多晶形、盐、溶剂化物(例如，水合物)、立体异构体或笼形化合物。

本发明的另一方面包括治疗、控制和/或预防皮肤狼疮的方法，其包括向患有皮肤狼疮的患者施用治疗或预防有效量的3-(4氨基-1-氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮或其药学可接受的前药、代谢物、多晶形、盐、溶剂化物(例如，水合物)、立体异构体或笼形化合物。

本发明的另一方面包括治疗、控制和/或预防皮肤狼疮的方法，其包括向皮肤狼疮患者施用治疗或预防有效量的基本不含其(R)对映体的{2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰)乙基]-3-氧代异吲哚啉-4-基}甲酰胺，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在本发明范围内的皮肤狼疮的范例包括但不限于：急性皮肤型红斑狼疮(ACLE)、亚急性皮肤型红斑狼疮(SCLE)、新生儿红斑狼疮(NLE)、儿童红斑狼疮、以及盘状红斑狼疮(DLE)包括疣状DLE、深部狼疮、黏膜DLE、手掌-足底DLE和狼疮性肿胀。

此外，待治疗的患者包括哺乳动物，特别是人。儿童和成年人可通过此处披露的方法和组合物进行治疗。也可对免疫低下患者进行治疗。本发明预期可以治疗未采用其它疗法的患者，已采用其它疗法的患者以及对上述皮肤狼疮等狼疮的疗法具有难治性的患者。在部分实施方式中，该患者为女性。在部分实施方式中，该患者为男性。在更进一步的实施方式中，该患者为儿童。

5.1 定义

除非另行指明，此处所用的术语“本发明的化合物”包括但不限于：(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮、4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶))-异吲哚啉-1，3-二酮、3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮或环丙基{2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰)乙基]-3-氧代异吲哚啉-4-基}甲酰胺，或其药学可接受的前药、代谢物、多晶形、盐、溶剂化物(例如，水合物)、立体异构体或笼形化合物。

除非另行指明，此处所用的术语“药学上可接受的盐”包括但不限于：可存在于本发明的化合物中的酸或碱性基团的盐。在特定的酸性条件下，本发明的化合物可与各种无机和有机酸形成各种盐。可用于制备该种碱性化合物的药学上可接受的盐的酸为可形成包含药理学可接受阴离子的盐的酸，该盐包括但不限于：醋酸盐、苯磺酸盐、安息香酸盐、重碳酸盐、酒石酸氢盐、溴化物、乙二胺四乙酸钙、右旋樟脑磺酸盐、碳酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、柠檬酸盐、二氢氯化物、乙二胺四乙酸盐、乙二磺酸盐、依托酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、谷氨酸盐、乙二醇阿散酸盐、己基间苯二酚盐、海巴明、羟萘酸盐、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、muscate、萘磺酸盐、硝酸盐、泛酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、聚半乳糖醛酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、丹宁酸盐、酒石酸盐、8-氯茶碱盐、乙碘化合物和扑酸盐。在碱性条件下，本发明的化合物可与各种药理学可接受的阳离子形成碱性盐。该种盐的非限制性范例包括碱金属或碱土金属，特别包括钙、镁、钠、锂、锌、钾和铁盐。

除非另行指明，此处所用的术语“水合物”指还包含通过非共价分子间力结合的化学计量量或非化学计量量的水的本发明化合物或其盐。

除非另行指明，此处所用的术语“溶剂化物”指由一个或多个溶剂分子与本发明的化合物结合形成的溶剂化物。术语“溶剂化物”包括水合物(例如，单水合物、二水合物、三水合物、四水合物等)。

除非另行指明，此处所用的术语“多晶形”指本发明的化合物及其复合物的固体晶粒形式。相同化合物的不同多晶形可显示不同的物理、化学和/或光谱性能。

除非另行指明，此处所用的术语“前药”指能在生物条件下(体外或体内)水解、氧化或以其它方式反应而提供所述化合物的该化合物衍生物。前药的范例包括但不限于：包括如可生物水解酰胺、可生物水解酯、可生物水解氨基甲酸酯、可生物水解碳酸酯、可生物水解酰脲以及可生物水解磷酸酯等可生物水解部分的(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮、4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶))-异吲哚啉-1，3-二酮、3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮或环丙基{2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰)乙基]-3-氧代异吲哚啉-4-基}甲酰胺的衍生物和代谢物。前药通常可采用本领域公知的方法进行制备，例如该方法可参见1Burger′s Medicinal Chemistry and Drug Discovery，172-178，949-982(Manfred E.Wolff编，第5版，1995)。

除非另行指明，此处所用的术语“可生物水解氨基甲酸酯”、“可生物水解碳酸酯”、“可生物水解酰脲”、以及“可生物水解磷酸酯”分别指化合物的氨基甲酸酯、碳酸酯、酰脲以及磷酸酯，其1)不干扰该化合物的生物活性，但在体内可赋予该化合物有利属性，如摄取、作用期限或作用发生；或者2)无生物活性但在体内可转化为生物活性化合物。可生物水解氨基甲酸酯的非限制性范例包括低级烷基胺、取代乙基二乙酰胺、氨基酸、羟基烷胺、杂环及芳杂环胺以及聚醚胺。

除非另行指明，此处所用的术语“立体异构体”包括所有的光学/立体异构纯的和光学/立体异构富集的本发明的化合物。

除非另行指明，此处所用的术语“立体异构纯的”或“光学纯的”指包含一种立体异构体，且基本不含其相反立体异构体或对映体的化合物。例如，当一种化合物包含80％、90％或95％或更多的一种立体异构体，并包含20％、10％或5％或更少的相反立体异构体时，该化合物为立体异构或光学纯的。在部分情况下，当本发明的化合物相对一个手性中心具有约80％或更大的ee(对映体过量百分比)，优选相对该特定手性中心等于或大于90％的ee，或更优选相对该特定的手性中心具有95％的ee时，可认为该化合物具有光学活性的或为立体异构/光学纯的(例如，基本为R构型或基本为S构型)。

除非另行指明，此处所用的术语“基本不含其(R)-对映体”指根据化合物的总重量，(S)-对映体的纯度等于或大于80％。在部分情况下，术语“基本不含其(R)-对映体”指根据化合物的总重量，(S)-对映体的纯度等于或大于85％、90％、95％或99％。

除非另行指明，此处所用的术语“基本不含其(-)对映体”指根据化合物的总重量，(+)对映体的纯度等于或大于80％。在部分情况下，术语基本不含其“(-)对映体”指根据化合物的总重量，(+)对映体的纯度等于或大于85％、90％、95％或99％。

除非另行指明，此处所用的术语“立体异构富集的”或“光学富集的”包括本发明化合物的特定立体异构体的混合物(例如，R/S＝30/70、35/65、65/35以及70/30)。

除非另行指明，此处所用的术语“治疗”指在患者患有特定疾病或病症时，可减少该疾病或病症的严重性或者能防止或减缓该疾病或病症的进展或症状的行为。

除非另行指明，此处所用的术语“治疗有效量”包括上述剂量和给药频率方案。如本领域普通技术人员所了解，不同的治疗有效量可适用于不同的狼疮病症和症状。类似地，上述剂量和给药频率方案还包括足以治疗或预防该病症，但不足以引起，或足以减少与本发明的化合物相关的副作用的量。

除非另行指明，此处所用的术语“预防”指在患者患有特定疾病或病症之前，可抑制或减少该疾病或病症的严重性或症状的行为。

除非另行指明，此处所用的术语“控制”指预防特定疾病或病症在患有该病或病症的患者体内复发，和/或延长患有该疾病或病症的患者的缓解期。该术语包括调节疾病或病症的阈值、该疾病或病症的形成和/或持续时间，或改变患者对该疾病或病症的应答方式。

除非另行指明，此处所用的术语“增强”在涉及免疫应答时，指在向曾接受或正接受本发明化合物治疗的对象施用抗原性或免疫原性药剂时，与仅施用等量的抗原性或免疫原性药剂的对象相比，通过本领域已知的常规抗体水平测定方法(例如，浊度法、免疫电泳、放射性免疫测定以及ELISA)测定到抗体形成上升。在部分实施方式中，当采用本发明的方法时，与未采用该方法时所得的抗体形成相比，其抗体形成上升了约5％、10％、20％、50％或100％或更多。

5.2 本发明的化合物

(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉 -1.3-二酮

本发明提供了治疗、控制或预防皮肤狼疮的方法，其包括向需要该种治疗、控制或预防的患者施用治疗或预防有效量的(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮的(+)对映体。

不希望受限于理论，该(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮的(+)对映体可认为是(S)-{2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮}[化合物(I)]，其具有如下结构：

因此，(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮可用于描述由化合物(I)表示的化合物。化合物(I)的制备可参照于2005年11月8日公告的题为“(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮：其使用方法和组合物((+)-2-[1-(3-Ethoxy-4-methoxyphenyl)-2-methylsulfonylethyl]-4-acetylaminoisoindoline-1，3-dione：Methods Of Using And Compositions Thereof)”的美国专利6,962,940中描述的方法。在具体方法中，化合物(I)可由3-乙酰氨基酞酸酐和(S)-2-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-1-(甲基磺酰基)-乙-2-基胺的手性氨基酸盐合成得到。(S)-2-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-1-(甲基磺酰基)-乙-2-基胺的手性氨基酸盐的范例包括但不限于与丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、鸟氨酸、4-氨基丁酸、2-氨基异丁酸、3-氨基异丁酸、鸟氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、羟脯氨酸、肌氨酸、瓜氨酸、磺酸、叔丁基甘氨酸、叔丁基丙氨酸、苯基甘氨酸、环己基丙氨酸、以及N-乙酰-L-亮氨酸的L异构体形成的盐。特定的手性氨基酸盐为由2-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-1-(甲基磺酰基)-乙-2-基胺和N-乙酰-L-亮氨酸在甲醇中转化得到的(S)-2-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-1-(甲基磺酰基)-乙-2-基胺N-乙酰-L-亮氨酸盐。

可替代地，化合物(I)可通过本领域已知的分离技术由外消旋的2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮分离得到。该外消旋化合物可参照美国专利6,020,358(在此引用作为参考)的实施例12中的方法进行简单地制备。适用的分离技术的范例包括但不限于：形成手性盐、使用手性或高压液相色谱“HPLC”以及形成和结晶手性盐。例如，参见Jacques，J.，等人，Enantiomers，Racemates and Resolutions(Wiley Interscience，New York，1981)；Wilen，S.H.，等人，Tetrahedron 33:2725(1977)；Eliel，E.L.，Stereochemistry of Carbon Compounds(McGraw Hill，NY，1962)；以及Wilen，S.H.，Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions p.268(E.L.Eliel编，Univ.of Notre Dame Press，Notre Dame，IN，1972)。

4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶)-异吲哚啉-1，3-二酮和3-(4-氨基-1-氧代-1，3- 二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮

本发明提供了治疗、控制或预防皮肤狼疮的方法，其包括向需要该种治疗、控制或预防的患者施用治疗或预防有效量的具有下式的4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶))-异吲哚啉-1，3-二酮(ACTIMID^TM)：

或具有如下化学结构的3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮

或其药学可接受的前药、代谢物、多晶形、盐、溶剂化物、立体异构体或笼形化合物。

该化合物可从Celgene Corporation，Summit，NJ购得。该化合物可通过标准合成方法获取(例如参见美国专利5,635,517，在此引用作为参考)。4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶))-异吲哚啉-1，3-二酮的特定制备方法披露于2006年6月29日提交的美国专利非临时申请11/479,823以及2005年6月30日提交的题为“4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶))-异吲哚啉-1，3-二酮化合物的制备方法(Processes for the preparation of 4-amino-2-(2，6-dioxopiperidin-3-yl)-isoindoline-1，3-dione compounds)”的美国专利临时申请60/696,224中，其内容在此引用作为参考。

在一个实施方式中，4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶))-异吲哚啉-1，3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮为光学纯的。在更进一步的实施方式中，4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶))-异吲哚啉-1，3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮为R-对映体。在更进一步的实施方式中，4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶))-异吲哚啉-1，3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮为S-对映体。在更进一步的实施方式中，4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶))-异吲哚啉-1，3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮为外消旋混合物。

在更进一步的实施方式中，本发明中采用的特定化合物为4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶))-异吲哚啉-1，3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮的多晶型体。3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮的特定多晶型体(如A、B、C、D、E、F、G和H型)披露于2003年9月4日提交的美国临时申请60/499,723以及2004年9月3日提交的美国非临时申请10/934,863(公开号2005/0096351)中，其全文在此引用作为参考。

例如，3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮的A型为非溶剂化结晶物，其可由非水性溶剂系统获得。A型的X射线粉末衍射图谱在约8、14.5、16、17.5、20.5、24和26度2θ处包含明显峰，且具有约270℃的最大差示扫描量热熔融温度。3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮的B型为半水合结晶物，其可从各种溶剂系统包括但不限于己烷、甲苯和水中获得。B型的X射线粉末衍射图谱在约16、18、22和27度2θ处包含明显峰，且具有约268℃的最大差示扫描量热熔融温度。

环丙基{2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰)乙基]-3-氧代异吲 哚啉-4-基}甲酰胺

本发明提供了治疗、控制或预防皮肤狼疮的方法，其包括向需要该种治疗、控制或预防的患者施用治疗或预防有效量的环丙基{2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰)乙基]-3-氧代异吲哚啉-4-基}甲酰胺或N-[2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰)乙基]-2，3-二氢-3-氧代-1H-异吲哚-4-基]-环丙烷甲酰胺。

环丙基{2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰)乙基]-3-氧代异吲哚啉-4-基}甲酰胺或N-[2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰)乙基]-2，3-二氢-3-氧代-1H-异吲哚-4-基]-环丙烷甲酰胺[即，化合物(II)]具有如下结构：

化合物(II)。

化合物(II)可参照2003年12月23日公告的题为“药物学活性的异吲哚啉衍生物(Pharmaceutically Active Isoindoline Derivatives)”的美国专利6,667,316描述的方法进行制备，其全文在此引用作为参考。在一个特定的实施方式中，化合物(II)可通过在四氢呋喃中加热7-氨基-2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰)乙基]异吲哚啉-1-酮和环丙烷碳酰氯的混合物制备得到。

此外，化合物(II)可通过本领域普通技术人员已知的分离技术从相应的外消旋环丙基{2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰)乙基]-3-氧代异吲哚啉-4-基}甲酰胺分离得到。该外消旋化合物可参照美国专利6,667,316(在此引用作为参考)的实施例55中的方法进行简单地制备。适用的分离技术的范例包括但不限于：形成手性盐以及使用手性或高效液相色谱“HPLC”以及形成和结晶手性盐。例如，参见Rex W.Souter，Chromatographic Separations ofStereoisomers，(CRC Press，Boca Raton，1985)；Jacques，J.，等人，Enantiomers，Racemates and Resolutions(Wiley Interscience，New York，1981)；Wilen，S.H.，等人，Tetrahedron 33:2725(1977)；Eliel，E.L.，Stereochemistry of CarbonCompounds(McGraw Hill，NY，1962)；以及Wilen，S.H.，Tables of ResolvingAgents and Optical Resolutions p.268(E.L.Eliel编，Univ.of Notre Dame Press，Notre Dame，IN，1972)。

5.3 治疗和预防的方法

本发明提供了治疗、预防和/或控制皮肤狼疮的方法。在本发明的方法范围内的皮肤狼疮的非限制性范例包括但不限于：皮肤型红斑狼疮(CLE)、急性皮肤型红斑狼疮(ACLE)、亚急性皮肤型红斑狼疮(SCLE)、慢性皮肤型红斑狼疮(CCLE)或盘状红斑狼疮(DLE)、新生儿红斑狼疮(NLE)、疣状DLE、深部狼疮、黏膜DLE、手掌-足底DLE和狼疮性肿胀。

在部分实施方式中，本发明提供了治疗ACLE的方法。ACLE通常是一种光敏感性皮肤病。它可以表现为红色皮肤无光泽区域，类似于持久晒伤或有类似皮疹的外观。ACLE可能面部中央以蝴蝶模式爆发和/或在包括手臂、腿部和身体的其它部位以一般模式爆发。ACLE的病因据认为是多因子的，其中包括遗传、环境和激素因子。因此，本发明包括了对先兆遗传性或暴露至自然紫外光辐照的患者的治疗。

在更进一步的实施方式中，本发明提供了治疗SCLE的方法。SCLE是一种无疤痕无萎缩生成的光敏感性皮肤病。在某些情况下，SCLE表现为通常在阳光暴露后在上背部和胸部的不发痒的环形干式皮疹。SCLE可发生于患有系统性红斑狼疮患者，

综合征以及补体成分2(C2d)缺陷的患者，或者可被药物诱导。SCLE通常发生于遗传易患病的个体，更通常发生于具有人白细胞抗原B8(HLA-B8)、人白细胞抗原DR3(HLA-DR3)、人白细胞抗原DRw52(HLA-DRw52)以及人白细胞抗原DQ1(HLA-DQ1)的患者。SCLE与抗-Ro(SS-A)自体抗体强烈相关。因此，在特定的实施方式中，本发明包括了对该类患者群体的治疗。

在更进一步的实施方式中，本发明提供了治疗CCLE或DLE的方法。CCLE或DLE是慢性的有疤痕有萎缩生成的光敏感性皮肤病。DLE通常表现为可留下白色疤痕的红色鳞状斑块。DLE主要作用于脸颊和鼻子，但有时涉及上背部、颈部、手背、头皮裸露部分以及嘴唇。DLE可发生于患有系统性红斑狼疮(SLE)的患者。部分患者还具有SCLE病斑，部分可具有颊部红斑。DLE可能发生于遗传易患病的个体。因此，在特定的实施方式中，本发明包括了对该类患者群体的治疗。

在更进一步的实施方式中，本发明提供了通过口服或局部施用治疗人疣状DLE的方法。疣状DLE是DLE的一种特定形式，指具有可形成极厚鳞片的病灶的DLE。

在更进一步的实施方式中，本发明提供了通过口服或局部施用治疗人深部狼疮的方法。深部狼疮是DLE的一种特定形式，指具有可能与皮肤下脂肪组织中的坚硬肿块同时发生的病灶的DLE。

在更进一步的实施方式中，本发明提供了通过口服或局部施用治疗人黏膜DLE的方法。黏膜DLE是DLE的一种特定形式，指在口部、鼻部和眼部的黏膜偶发的病灶。

在更进一步的实施方式中，本发明提供了通过口服或局部施用治疗人手掌-足底DLE的方法。手掌-足底DLE是DLE的一种特定形式，指在手部和足部偶发的病灶。

在更进一步的实施方式中，本发明提供了通过口服或局部施用治疗人狼疮性肿胀的方法。狼疮性肿胀是DLE的一种特定形式，并表现为在可能瘙痒并具有较小尺度的头部和颈部的光滑、有光泽、红紫色的病灶。狼疮性肿胀病变通常清楚无疤痕，并可在其原来的分布处复发。

在更进一步的实施方式中，本发明提供了治疗NLE的方法。NLE是在儿童中罕见的病症并通常表现为无疤痕、无萎缩生成病灶。在特定的实施方式中，本方法包括了对患有SCLE的母亲的新生婴儿的口服和/或局部治疗。据认为NLE与各种因素相关，其中包括遗传倾向、病毒感染和其它未知因素。

在更进一步的实施方式中，本发明提供了治疗儿童红斑狼疮(LE)的方法。在特定的实施方式中，对包括由于遗传因素以及其它可能的环境时间而易患病的儿童的红斑狼疮(LE)进行了治疗。

本发明还包括采用本发明的化合物来在患者体内调节免疫系统，以防止其产生不平衡并形成炎症和自身免疫性疾病，例如狼疮。因此，在另一实施方式中，本发明包括增强对免疫原的免疫应答的方法，其包括向需要该种增强的患者施用治疗或预防有效量的(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮、4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶))-异吲哚啉-1，3-二酮、3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮、或环丙基2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰)乙基]-3-氧代异吲哚啉-4-基}甲酰胺，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体。该化合物可在患者暴露至免疫原之前、同时或之后进行施用。

5.3.1 与第二活性试剂的组合疗法

在本实施方式包含的特定方法中，本发明的化合物在治疗、控制和/或预防皮肤狼疮的方法中与另一药物(“第二活性试剂”)联合施用。该第二活性试剂包括但不限于：非类固醇药剂或皮质类固醇类等抗炎剂、抗疟药、免疫抑制剂、抗生素、抗病毒剂、免疫增强药、激素、PGE2及其组合。可用于与本发明的化合物联合施用的方法或疗法的非限制性范例包括抗体注射或灌输，以及干细胞移植。

本发明的化合物至少可与一种第二活性试剂在此处披露的发明的方法中联用。本发明包括治疗、预防和/或控制皮肤狼疮的协同组合。本发明的化合物还可用于减轻某些第二活性试剂的不良或不明作用，相反地，部分第二活性试剂可用于减轻本发明化合物的不良或不明作用。

在部分令人感兴趣的实施方式中，该第二活性试剂可包括但不限于：抗炎剂，例如但不限于对乙酰氨基酚(例如，

)、5-氨基水杨酸衍生物、水杨酸类、皮质类固醇以及非类固醇类抗炎药物。5-氨基水杨酸衍生物的一个非限制性范例为柳氮磺胺吡啶(例如，)。水杨酸类的一个非限制性范例为乙酰水杨酸(例如，

)。

皮质类固醇类的非限制性范例包括地塞米松(例如，

或

)、氢化可的松(例如，

或

)、倍氯米松(例如，

)、布地奈德(例如，

)、氟替卡松(例如，

或

)、甲基强的松龙(例如，

或

)、糠酸莫米松(例如，

或

)、强的松(例如，

或

)以及去炎松(例如，

)。

非类固醇类抗炎药物的非限制性范例包括双氯芬酸(例如，

)、二氟尼柳(例如，

)、依托度酸(例如，)、非诺洛芬(例如，

)、布洛芬(例如，

CHILDREN′S

或PEDIACARE

)，吲哚美辛(例如，

)、酮洛芬(例如，)、酮咯酸(例如，

)、磷霉素氨丁三醇(例如，

)、甲氯芬那酸(例如，)、萘丁美酮(例如，

)、萘普生(例如，

DS、

或

)、奥沙普秦(例如，

)、吡罗昔康(例如，

)、舒林酸(如，

)和托美汀(例如，

DS或

)。

在其它令人感兴趣的实施方式中，该第二活性试剂可包括但不限于：抗疟剂，如氯喹(例如，

)和羟氯喹(例如，

)等；免疫抑制剂，如硫唑嘌呤(例如，

)、环磷酰胺(例如，

)、苯丁酸氮芥(例如，

)和马法兰(例如，

)；和免疫调节化合物，如硫唑嘌呤(例如，

)、环磷酰胺(例如，

)、甲氨蝶呤(例如，

)和环孢素(例如，

或

)。

在更进一步的令人感兴趣的实施方式中，该第二活性试剂可包括但不限于：抗生素(治疗或预防)，例如但不限于氨苄西林(例如，)、四环素(例如，

或

)、青霉素(例如，

或

)、头孢菌素类(例如，

或)、链霉素(例如，

)、卡那霉素(例如，

)和红霉素(例如，

或

)；抗病毒类，例如但不仅限于金刚烷胺(例如，

)、金刚乙胺(例如，

)、无环鸟苷(例如，

)和利巴韦林(例如，)；免疫球蛋白；免疫增强药，例如但不仅限于左旋咪唑(例如，)和异丙肌苷(

)；生物类，例如但不仅限于丙种球蛋白、转移因子、白细胞介素和干扰素；激素类，包括但不仅限于胸腺激素；以及其他免疫剂，例如但不仅限于B细胞刺激因子(例如，BAFF/BlyS)、细胞因子(如IL-2、IL-4和IL-5)、生长因子(例如，TGF-β)，抗体(例如，抗-CD40和IgM抗体)、含有未甲基化CpG基序的寡聚核苷酸(例如，TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT)和疫苗(例如，病毒和肿瘤肽疫苗)。

在另一实施方式中，本发明的方法可与用于治疗、预防和/或控制皮肤狼疮的其它方法组合使用。其它方法的范例包括但不限于：干细胞移植、采用例如结合了聚乙二醇的牛腺苷脱氨酶(PEG-ADA)等的酶替代疗法、胎儿胸腺移植、培养的新生儿胸腺移植、胸腺上皮细胞移植以及胎儿肝移植。

本发明的特定方法包括至少联合一种第二活性试剂或其它疗法施用(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮、4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶))-异吲哚啉-1，3-二酮、3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮或环丙基2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰)乙基]-3-氧代异吲哚啉-4-基}甲酰胺，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体。

本发明化合物和至少一种第二活性试剂可通过相同或不同的给药途径同时或顺序向患者施用。对于特定第二活性试剂的特定施用途径的适宜性将取决于该第二活性试剂本身(例如，它是否可以进行局部或口服给药而不会在进入血流前分解)和待治疗的疾病。本发明的化合物的特定施用途径为局部施用。本发明的第二活性试剂或成分的特定给药途径为本领域技术人员所公知。例如，参见The Merck Manual，430-431(第17版，1999)。

第二活性试剂的施用量可根据所采用的特定药剂、被治疗或控制的疾病类型、疾病的严重性和阶段以及同时向患者施用的本发明化合物和任意附加第二活性试剂的量来决定。本领域的技术人员可参照本领域已知的常规技术决定具体的量。首先，可从在该疗法中常规使用的第二活性试剂的量起始并参照上述因素调整该量。例如，参见Physician′s Desk Reference(第56版，2004)。此外，此处披露的用于治疗、预防和/或控制皮肤狼疮的第二活性试剂的施用量和方法披露于如Physician′s Desk Reference(第56版，2004)等文献，其在此引用作为参考。

5.3.2 周期疗法

在部分实施方式中，本发明的化合物可向患者周期施用。周期疗法包括在一段时间内施用本发明的化合物，随后停用一段时间，然后重复该次序施用。周期疗法可减少对一种或多种疗法形成抗性，避免或减少其中一种疗法的副作用，和/或提高治疗的功效。

因此，在本发明的一个特定实施方式中，本发明的化合物在四至六周的周期中以每日单一剂量或分开剂量给药，并停药一至两周。本发明还允许增加剂量周期的频率、数量和长度。因此，本发明的另一特定实施方式包括比单独施用的通常情况施用更多周期的本发明的合物。在本发明的另一个特定实施方式中，本发明的化合物施用比在也没有施用第二活性成分的患者中通常会引起剂量限制性毒性的周期数更多的周期数。

在一种实施方式中，(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮以约10至约200mg/天的剂量每日施用，持续三或四周，接着停药一或两周。在另一实施方式中，4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶))-异吲哚啉-1，3-二酮以约0.1至约5mg/天的剂量每日施用，持续三或四周，接着停药一或两周。在一个特定实施方式中，在一个四或六周的周期中，3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮以约5、10、25或约50mg/天，优选约25mg/天的量施用三至四周，接着停药一周或两周。在另一实施方式中，环丙基(2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰)乙基]-3-氧代异吲哚啉-4-基}甲酰胺以约10至约200mg/天的剂量每日施用，持续三或四周，接着停药一或两周。

在本发明的另一实施方式中，在一个四至六周的周期中，本发明的化合物与第二活性成分通过口服施用，本发明化合物在第二活性成分施用前30至60分钟施用。在本发明的另一实施方式中，本发明的化合物与第二活性成分的组合在每个周期中以约90分钟的静脉输注施用。在一个特定实施方式中，一个周期包括每日施用约0.1至约200mg/天的本发明化合物以及约50至约200mg/m²/天的第二活性成分，持续三至四周，然后停药一或两周。在另一特定实施方式中，一个周期包括每日施用约1至约25mg/天的本发明化合物以及约50至约200mg/m²/天的第二活性成分，持续三至四周，然后停药一或两周。向患者施用联合治疗的周期数通常为约1个至约24个周期，更通常为约2个至约16个周期，更通常为约4个至约3个周期。

根据本发明施用的药物组合物的量将取决于被治疗的对象、疾病或病症的症状的严重性、施用方式、施用频率以及处方医师的判断。

施用的频率介于每小时剂量和每月剂量之间。在特定的实施方式中，施用为每天8次至每隔一天1次，或每天1至3次。在特定的实施方式中，本发明的药物组合物长期(例如，每天)施用。

如本领域普通技术人员可以理解，在部分情况下该活性成分的剂量需要超越此处披露的范围。此外，应当注意临床医师或治疗医师结合个体患者的应答可知道如何和何时中止、调整或终止治疗。

5.4 剂量

在本发明的一个实施方式中，(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮可以以每天约1mg至约1000mg的量以单一的或分开的日剂量口服，该日剂量作为每天一次的单一剂量给予，优选作为每天的分开剂量给予。更具体地，(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮的日剂量以等分的分开剂量每日两次施用。具体地，(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮的日剂量为每天约5mg至约500mg，更优选地，为每天约10mg至约200mg。具体地，(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮的日剂量可以以5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、50mg或100mg的剂型施用。在控制所述患者时，该疗法应该以较低的剂量起始，可以是约1mg至约25mg，并根据患者的总体应答在需要时提高到每天约200mg至约1000mg，作为单一剂量或分开剂量。可替代地，该日剂量为0.01mg/kg至100mg/kg。

在一个实施方式中，4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶))-异吲哚啉-1，3-二酮可以约0.1至约100mg的量施用。在特定的实施方式中，4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶))-异吲哚啉-1，3-二酮可以每天约1mg至约100mg的量施用。在具体的实施方式中，4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶))-异吲哚啉-1，3-二酮可以每天约0.1mg至约2mg、或以每天约0.1mg至约5mg的量施用。在特定的实施方式中，4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶))-异吲哚啉-1，3-二酮可以每天约0.5mg至约2mg、或以每天约5mg的量施用。

在一个实施方式中，3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮可以约1mg至约150mg的量施用。在特定的实施方式中，3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮可以每天约5mg至约25mg、或以每隔一天约10mg至约50mg的量施用。

在本发明更进一步的实施方式中，环丙基{2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰)乙基]-3-氧代异吲哚啉-4-基}甲酰胺可以以单一或分开的日剂量口服施用，日剂量为每天约1mg至约1000mg，作为一天一次的单一剂量，优选作为一天内的分次剂量。更具体地，环丙基(2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰)乙基]-3-氧代异吲哚啉-4-基}甲酰胺的日剂量以等分的剂量每日两次施用。具体地，环丙基(2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰)乙基]-3-氧代异吲哚啉-4-基}甲酰胺的日剂量介于每天约5mg至约500mg，更具体地，介于每天约10mg至约200mg。具体地，环丙基(2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰)乙基]-3-氧代异吲哚啉-4-基}甲酰胺的日剂量可以5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、50mg或100mg的剂量形式施用。在控制患者时，该疗法应当从低剂量起始，可以为约1mg至约25mg，并根据患者的总体应答在需要时作为单独剂量或分次剂量提高到每天约200mg至约1000mg。可替代地，该日剂量介于0.01mg/kg至100mg/kg。

本发明各种剂型的讨论可参见下文第5.5节。在一个实施方式中，本发明的典型剂型包含量为约0.10至约1000mg、约0.10至约800mg、约0.10至约600mg、约0.10至约500mg、约0.10至约400mg、约0.10至约300mg、约0.10至约200mg、约0.10至约100mg的(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮或环丙基{2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰)乙基]-3-氧代异吲哚啉-4-基}甲酰胺。在一个实施方式中，典型的剂型包含量为约1、2、5、10、25、50、100、150、200、250、300、350、400、450或500mg的所述化合物。

在一个实施方式中，本发明的典型剂型包含量为约0.1至约150mg的4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶))-异吲哚啉-1，3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮。在具体的实施方式中，该剂型包含量约为0.1、1、2或5mg的4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶))-异吲哚啉-1，3-二酮。在具体的实施方式中，该剂型包含量约为5、10、15、25或50mg的3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮。

在一个实施方式中，典型剂型包含量为约1至约1000mg、约5至约500mg、约10至约350mg、约50至约200mg的第二活性成分。当然，该药剂的具体量将取决于所用的特定药剂、被治疗或控制的疾病或病症的类型以及同时向该患者施用的本发明化合物以及任选的附加第二活性试剂的量。

5.5 药物组合物及剂型

药物组合物可用于制备单个的、单一的单位剂型。本发明的药物组合物和剂型包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体，和任选的第二活性试剂。任选的第二活性试剂的例子在本说明书中有公开(例如，参见5.3.1节)。本发明的药物组合物或剂型可进一步包含一种或多种载体、赋形剂或稀释剂。

本发明的单一单位剂型适用于通过口服、粘膜(例如舌下、鼻部、阴道、胆囊、直肠、包皮、眼部、口腔或耳部)、肠胃外(例如皮下、静脉内、弹丸注射、肌肉内或动脉内)、局部(例如眼部滴剂或其它眼药)、透皮或经皮向患者给药。剂型的非限制性范例包括片剂；囊片；胶囊如软凝胶胶囊；扁囊剂；锭剂；糖锭；分散剂；栓剂；粉末；气溶胶(例如，鼻腔喷雾剂或吸入剂)；凝胶；适于向患者进行口服或黏膜施用的液体剂型，包括悬浮剂(例如水性或非水性液体悬浮剂、水包油型乳剂、或油包水型乳剂)，溶液和酏剂；适于肠胃外施用至患者的液体剂型；适于局部施用的滴眼液或其它眼科制剂；以及可以重配成可通过肠胃外施用至患者的液体剂型的无菌固体(例如结晶或非晶质固体)。

本发明的剂型的组成、形状和类型通常根据其用途而变化。例如，用于疾病的短期治疗的剂型可比用于同种疾病的长期治疗的剂型包含更大量的一种或多种活性成分。类似地，肠胃外剂型可比用于治疗同种疾病的口服剂型包含更少量的一种或多种其所包含的活性成分。本发明所包括的特定剂型彼此之间的变化方式对本领域的技术人员而言是显而易见的。例如，参见Remington′s Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack Publishing，Easton PA(1990)。

典型的药物组合物和剂型包含一种或多种赋形剂。适用的赋形剂已为制药领域技术人员所公知，且不限于此处所提供的适用赋形剂例子。一种特定赋形剂是否适合用于药物组合物或剂型取决于本领域公知的多种因素，其包括但不限于：该剂型向患者施用的途径。例如，如片剂等口服剂型可包含不适用于肠胃外剂型的赋形剂。特定赋形剂的适用性还取决于剂型中的特定活性成分。例如，某些活性成分可通过如乳糖等赋形剂或在暴露至水中时加速分解。包含伯胺或仲胺的活性成分特别容易产生该种加速分解。因此，本发明包括包含极少量乳糖或其它单或双糖的药物组合物和剂型。此处所用的术语“无乳糖”指当存在乳糖时其量不足以提高活性成分的降解速率。

本发明的无乳糖组合物可包含本领域公知的以及如在美国药典(USP)25-NF20(2002)中列举的赋形剂。一般而言，无乳糖组合物包含药学相容且药学可接受量的活性成分、结合剂/填充剂以及润滑剂。特定的无乳糖剂型包含活性成分、微晶纤维素、预胶化淀粉以及硬脂酸镁。

由于水可以促进一些化合物的降解，所以本发明进一步包括包含活性成分的无水药物组合物和剂型。例如，添加水(例如，5％)是制药领域广泛采用的一种模拟长期贮存以测定如保质期或制剂长期稳定性等特性的方法。例如，参见Jens T.Carstensen，Drug Stability：Principles & Practice，第2版，MarcelDekker，NY，NY，1995，第379-80页。水和热会产生加速一些化合物的分解的效果。因此，水对制剂可能具有非常重要的影响，因为在制剂的生产、处理、包装、贮存、运输以及使用中常会遇到水分和/或湿气。

本发明的无水药物组合物和剂型可采用无水或低含水量的成分并在低水分或低湿度条件下制备。如果在生产、包装和/或贮存过程中可能遇到水分和/或湿气，则包含乳糖和至少一种具有伯胺或仲胺的活性成分的药物组合物和剂型优选是无水的。

无水药物组合物的制备和贮存应当保持其无水性质。相应地，无水组合物优选使用本领域已知的防水材料进行包装从而使它们可包含到适当的制剂试剂盒中。适当包装的非限制性范例包括密封箔、塑胶、单位剂量容器(例如，小药水瓶)、泡罩包装以及条状包装。

本发明进一步包括包含一种或多种能降低活性成分分解速率的化合物的药物组合物和剂型。该种在此成为“稳定剂”的化合物包括但不限于：如抗坏血酸等抗氧化剂、pH缓冲液或盐缓冲液。与赋形剂的量和类型相似，一种剂型中活性成分的量和特定类型可取决于多种因素，例如但不限于向患者给药的途径。

5.5.1 口服剂型

可进行口服给药的本发明的药物组合物可作为分散剂型提供，例如但不限于：片剂(例如，咀嚼片)、囊片、胶囊和液体(例如，风味糖浆)。该种剂型包含预定量的活性成分，并可通过本领域技术人员公知的制药方法制备。一般可参见Remington′s Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack Publishing，Easton PA(1990)。

本发明的典型口服剂型可通过将活性成分与至少一种赋形剂参照传统药物配制技术充分混合进行制备。赋形剂可根据给药所期望的制剂形式采取多种形式。适用于口服液体或气雾剂剂型的赋形剂的非限制性范例包括水、乙二醇、油、醇、风味剂、防腐剂以及着色剂。适用于固体口服剂型的赋形剂(例如，粉末、片剂、胶囊和囊片)的非限制性范例包括淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、成粒剂、润滑剂、结合剂以及崩解剂。

片剂和胶囊由于其便于施用而代表最有利的口服单位剂型，其中采用固体赋形剂。如果需要，可通过标准水性或非水性技术对片剂进行包衣。该种剂型可通过任何制药方法进行制备。一般而言，药物组合物和剂型可通过将活性成分与液体载体、细颗粒固体载体或两种载体均匀充分混合后根据需要将产物定形来制备。

例如，片剂可通过压制或成型进行制备。压制片可通过将活性成分以粉末或颗粒等自由流动形式(根据需要与赋形剂混合)在合适的机器中压制进行制备。成型片可通过将惰性液体稀释剂润湿的粉末状化合物在合适的机器机器中成型进行制备。

可用于本发明口服剂型的赋形剂的非限制性范例包括结合剂、填充剂、崩解剂和润滑剂。适用于药物组合物和剂型的结合剂的非限制性包括玉米淀粉、马铃薯淀粉或其它淀粉、凝胶、阿拉伯树胶等天然和合成树胶、藻酸钠、海藻酸、其它藻酸盐、粉状黄芪胶、瓜儿胶、纤维素及其衍生物(例如，乙基纤维素、醋酸纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠)、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、预胶化淀粉、羟丙基甲基纤维素(例如，2208、2906、2910)、微晶纤维素及其混合物。

微晶纤维素的适用形式的非限制性范例包括商品名为AVICEL-PH-101、AVICEL-PH-103、AVICEL RC-581、AVICEL-PH105(可从FMC Corporation，American Viscose Division，Avicel Sales，Marcus Hook，PA购得)的材料及其混合物。一种特定结合剂为商品名为AVICEL RC-581的微晶纤维素和羧甲基纤维素钠的混合物。适用的无水或低水分赋形剂或添加剂包括AVICEL-PH-103^TM和淀粉1500LM。

适用于此处披露的药物组合物和剂型的填充剂的非限定性范例包括：滑石、碳酸钙(例如，颗粒或粉末)、微晶纤维素、粉末状纤维素、葡聚糖、高岭土、甘露醇、硅酸、山梨醇、淀粉、预胶化淀粉及其混合物。本发明药物组合物的结合剂或填充剂通常占该药物组合物或剂型重量的约百分之五十至约百分之九十九。

本发明的组合物中采用崩解剂以提供在水环境中崩解的片剂。含有过多崩解剂的片剂可能在贮存时崩解，而包含过少崩解剂的片剂在目标条件下不能以目标速率崩解。因此，本发明的固体口服剂型中应采用既不过多也不太少的足量崩解剂以有利地改变活性成分的释放。崩解剂的量取决于制剂的类型且本领域的普通技术人员可简单确定。典型的药物组合物包含重量百分比为从约0.5至约15的崩解剂，优选重量百分比为从约1至约5的崩解剂。

可用于本发明药物组合物和剂型的崩解剂的非限制性范例包括琼脂、海藻酸、碳酸钙、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、波拉克林钾、羟乙酸淀粉钠、马铃薯或木薯淀粉、其它淀粉、预胶化淀粉、其它淀粉、粘土、其它褐藻胶、其它纤维素、树胶及其混合物。

可用于本发明药物组合物和剂型的润滑剂的非限制性范例包括硬脂酸钙、硬脂酸镁、矿物油、轻矿物油、丙三醇、山梨醇、甘露醇、聚乙二醇、其它乙二醇、硬脂酸、十二醇硫酸钠、滑石、氢化植物油(例如，花生油、棉花籽油、葵花籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油以及大豆油)、硬脂酸锌、油酸乙酯、月桂酸乙酯、琼脂及其混合物。其它润滑剂包括，例如，syloid硅胶(AEROSIL200，由Baltimore，MD的W.R.Grace Co.生产)、合成二氧化硅的凝结气雾剂(由Piano，TX的Degussa Co.销售)、CAB-O-SIL(由Boston，MA的Cabot Co.销售的一种焦化二氧化硅产品)及其混合物。在使用时，润滑剂在药物组合物或剂型中的量少于约百分之一重量。

本发明的特定固体口服剂型包含了本发明的化合物(例如，(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮、4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶))-异吲哚啉-1，3-二酮、3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮或环丙基{2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰)乙基]-3-氧代异吲哚啉-4-基}甲酰胺)、无水乳糖、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、硬脂酸、胶状无水二氧化硅以及明胶。

5.5.2 缓释剂型

本发明活性试剂可以通过控释装置或本领域所属技术人员众所周知的递送装置给药。控释装置或递送装置的非限定性实例包括在以下专利中描述的那些：美国专利3,845,770、3,916,899、3,536,809、3,598,123、4,008,719、5,674,533、5,059,595、5,591,767、5,120,548、5,073,543、5,639,476、5,354,556和5,733,566，其分别被纳入本文作为参考。通过使用例如羟丙基甲基纤维素、其它聚合物基质、凝胶、可渗透性膜、等渗系统、多层包衣、微颗粒、脂质体、微球或其组合来产生不同比例的理想释放效果，这种剂型可用来缓释或控释一种或多种活性试剂。本领域所属技术人员已知的合适的控释制剂，包括本文所述的那些，可易于选择与本发明的活性成分一起使用。因此本发明包括适于口服给药的单一单位剂型，包括但不限于适于受控释放的片剂、胶囊、凝胶药丸和囊片剂。

所有控释药物产品都具有以下共同目标：相对于其非控释产品，改善药物治疗效果。理想地，在医疗中使用最优设计的控释制剂的特征在于，采用最少药物，在最短时间内治愈或控制病症。控释制剂的优点包括延长药物活性、降低给药频率和提高患者依从性。此外，控释制剂可用于影响作用开始的时间或其它特征，例如药物的血液水平，以及由此影响副作用(例如不利副作用)的发生率。

大部分控释制剂被设计成在开始时释放能迅速产生所需疗效的药物(活性试剂)的量，并且逐渐和连续释放其它药物的量以在延长的时间内维持该水平的治疗或预防效果。为了在体内保持恒定的药物水平，药物必须以这样的速度从剂型中释放，即能够弥补代谢以及从体内排泄的药物的量。活性成分的控释可通过各种条件来刺激，包括但不限于pH、温度、酶、水或其它生理条件或化合物。

5.5.3 肠胃外剂型

胃肠外剂型可通过多种途径，包括但不限于皮下、静脉内(包括弹丸注射)、肌肉内和动脉内途径来对患者给药。由于其给药一般绕过了患者抗污染物的自然防御，所以胃肠外剂型优选是无菌的，或者能够在对患者给药之前灭菌。胃肠外剂型的实例包括但不限于注射溶液、可溶解或悬浮在药学上可接受的运载体中以用于注射的干燥产品、注射悬浮液和乳剂。

可用于提供本发明胃肠外剂型的合适的运载体是本领域所属技术人员众所周知的。合适的运载体的非限定性实例包括：USP注射用水；水性运载体，例如但不限于氯化钠注射液、林格注射液、葡萄糖注射液、葡萄糖和氯化钠注射液和乳酸化林格注射液；可与水混溶的运载体，例如但不限于乙醇、聚乙二醇和聚丙二醇；以及非水性运载体例如但不限于玉米油、棉籽油、花生油、蓖麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯和苯甲酸苄酯。

还可以将能够提高本文所公开的一种或多种活性成分的溶解度的化合物掺入本发明胃肠外剂型中。例如，可以使用环式糊精及其衍生物来提高本发明化合物及其衍生物的溶解度。

5.5.4 局部、透皮和粘膜剂型

药物可局部应用于皮肤及其附件或应用于多种粘膜。可供采用的途径包括局部、透皮、舌下、鼻部、阴道、胆囊、直肠、包皮、眼部、口腔或耳部。人们已开发了多种剂型来将有效成分传递至应用位点以产生局部效果。本发明的透皮、局部和粘膜剂型包括但不限于：眼科溶液、喷雾剂、气雾剂、乳膏、洗剂、软膏、凝胶、溶液、乳剂、悬浮剂或其它本领域技术人员已知的形式。例如，参见Remington′s Pharmaceutical Sciences，第16和18版，MackPublishing，Easton PA(1980 & 1990)；以及Introduction to PharmaceuticalDosage Forms，第4版，Lea & Febiger，Philadelphia(1985)。适用于在口腔内治疗粘膜组织的剂型可制成漱剂或口服凝胶剂。此外，透皮剂型包括“贮库型”或“基质型”药膏，其可应用于皮肤并附着一定的时间以允许所需量的活性成分穿透。

可用于提供本发明的透皮、局部和粘膜剂型的合适赋形剂(例如，载体和稀释剂)以及其它原料已为制药领域技术人员所公知，并且取决于将施用给定药物组合物或剂型的特定组织。事实上，典型赋形剂包括但不限于：水、丙酮、乙醇、乙二醇、丙二醇、丁烷基-1，3-二醇、肉豆蔻酸异丙酯、异丙基棕榈酸酯、矿物油及其混合物，从而形成无毒和药学可接受的洗剂、酊剂、乳膏、乳剂、凝胶或油膏。也可根据需要向药物组合物和剂型添加如闭塞剂、润湿剂、润滑剂和蛋白再生剂等保湿剂。该种附加成分的范例已为本领域公知。例如，参见，Remington′s Pharmaceutical Sciences，第16和18版，MackPublishing，Easton PA(1980 & 1990)。

闭塞剂为物理阻断水份从角质层损失的物质。闭塞剂的非限制性范例包括凡士林、羊毛脂、矿物油、有机硅如二甲基硅油、氧化锌及其组合。优选地，该闭塞剂为凡士林和羊毛脂，更优选最低浓度为5％的凡士林。

润湿剂为可在应用于皮肤时锁住水份，并理论上可提高角质层水合的物质。然而，进入皮肤的水来自于其它细胞，而非大气中的水。采用该种类型的保湿剂时，皮肤上的蒸发仍然持续且实际上会使干燥加剧。润湿剂的非限制性范例包括甘油、山梨醇、尿素、α-羟基酸、糖类及其组合。优选地，该润湿剂为α-羟基酸，例如乙醇酸、乳酸、果酸、柠檬酸和酒石酸。

润滑剂为可通过油滴填充皮肤鳞片之间的空隙以使皮肤光滑，但如非大量使用不会闭塞的物质。在与乳化剂结合使用时，它们可帮助角质层锁定油和水份。维生素E是常见的添加剂，它除了作为润滑剂外不具有任何作用。同样地，还可添加其它的维生素(例如，A和D)，但它们的作用尚存疑问。润滑剂的非限制性范例包括矿物油、羊毛脂、脂肪酸、胆固醇、角鲨烯、结构脂类及其组合。

蛋白再生剂为通过补充必须的蛋白使皮肤再生的物质。蛋白再生剂的非限制性范例包括胶原蛋白、角蛋白、弹性蛋白及其组合。

根据待治疗的特定组织，可在以本发明的活性成分进行治疗之前、同时或之后使用附加成分。例如，透皮促进剂可用于协助将活性成分传递至组织。适用的透皮促进剂包括但不限于：丙酮；各种醇，如乙醇、油醇、四氢呋喃；烷基亚砜如二甲亚砜；二甲基乙酰胺；二甲基甲酰胺；聚乙二醇；吡咯烷酮如聚乙烯吡咯烷酮；科利当(聚维酮、聚乙烯吡咯烷酮)；尿素；各种水溶性或水不溶糖脂如Tween 80(聚山梨醇酯80)和Span 60(山梨醇酐单硬脂酸酯)。

也可对药物组合物或剂型的pH进行调整以提高一种或多种活性成分的传递。类似地，可调整溶剂载体的极性、其离子强度或渗透压以促进传递。例如，可通过敷料、敷擦法或以二甲亚砜作为载体来增强透皮吸收。还可向药物组合物或剂型添加如金属硬脂酸盐(例如，硬脂酸钙、硬脂酸锌、硬脂酸镁、硬脂酸钠、硬脂酸锂、硬脂酸钾等)等化合物，从而有利地改变一种或多种活性成分的亲水性或亲脂性以促进传递。就此而言，硬脂酸盐可用作制剂的脂质载体、用作乳化剂或表面活性剂以及用作传递增强或渗透增强剂。活性成分的不同的盐、水合物或溶剂化物也可用于进一步调整所得组合物的性质。

6. 实施例

本发明的一些实施方式通过以下非限制性实施例得以阐述。该实施例不应解释为对其范围的限制。本发明的范围仅由所附权利要求书限定。

实施例1   (+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮[化合物(1)]的制备

3-氨基酞酸的制备。将10％Pd/C(2.5g)、3-硝基酞酸(75.0g，355mmol)和乙醇(1.5L)的混合物在氮气下加入到2.5 L Parr氢化器后，将氢气充入反应容器直至55psi(379kPa)。将混合物震荡13小时，同时将氢气压力保持在50psi(245kPa)和55psi(379kPa)之间。释放氢气，以氮气清洗混合物3次。以硅藻土床过滤悬浮液并以甲醇洗涤。真空浓缩滤除液以获得固体。使用乙醚悬浮固体，并用真空过滤分离。真空干燥固体至恒重，从而获得黄色产品54g(84％产率)的3-氨基酞酸。以¹H NMR光谱鉴定于DMSO-d₆中的产品显示了如下化学位移(δ，ppm)：3.17(s，2H)，6.67(d，1H)，6.82(d，1H)，7.17(t，1H)，8-10(brs，2H)。以¹³C-NMR光谱鉴定于DMSO-d₆中的产品显示了如下化学位移(δ，ppm)：112.00，115.32，118.20，131.28，135.86，148.82，169.15，170.09。

3-乙酰氨基酞酸酐的制备。将3-氨基酞酸(108g，596mmol)和乙酸酐(550mL)的混合物加入到配备了机械搅拌器、温度计和冷凝器的1L3口圆底烧瓶中。将反应混合物回流3小时，冷却至室温，并在0-5℃下再维持1小时。真空过滤采集结晶的固体并以醚洗涤。在室温下将固体产物真空干燥至恒重，从而获得75g(61％产率)的白色产品3-乙酰氨基酞酸酐。以¹H NMR光谱鉴定于CDCl₃中的产品显示了如下化学位移(δ，ppm)：2.21(s，3H)，7.76(d，1H)，7.94(t，1H)，8.42(d，1H)，9.84(s，1H)。

2-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-1-(甲基磺酰)-乙-2-基胺的拆分。将2-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-1-(甲基磺酰基)-乙醚-2-基胺(137.0g，500mmol)、N-乙酰-L-亮氨酸(52g，300mmol)和甲醇(1.0L)的混合物加入到配备了机械搅拌器、温度计和冷凝器的3L3口圆底烧瓶中。反应混合物回流1小时后，将混合物冷却至室温，然后在室温下继续搅拌3小时。过滤浆液并以甲醇(250L)洗涤。风干固体，然后在室温下真空干燥至恒重，从而得到109.5g(98％产率)的粗产品(85.8％ee)。将固体粗产品(55.0g)和甲醇(440mL)回流1小时，冷却至室温并在室温下继续搅拌3小时。过滤浆水，以甲醇(200mL)洗涤滤饼。吹干固体，然后在30℃下真空干燥至恒重，以获得49.6g(90％回收率)的(S)-2-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-1-(甲基磺酰基)-乙醚-2-基胺-N-乙酰-L-亮氨酸盐(98.4％ee)。手性HPLC(1/99 EtOH/20mM KH2PO4@pH 7.0，Ultron Chiral ES-OVS购自Agilent Technologies，150mm×4.6mm，0.5mL/min，@240nm)：18.4min(S-异构体，99.2％)，25.5min(R-异构体，0.8％)。

(+)-2-[l-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1.3-二酮的制备。以机械搅拌器、温度计和冷凝器装备500mL 3口圆底烧瓶。向反应容器中添加(S)-2-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-1-(甲基磺酰基)-乙-2-基胺N-乙酰-L-亮氨酸盐(25g，56mmol，98％ee)、3-乙酰氨基酞酸酐(12.1g，58.8mmol)、和冰醋酸(250mL)。将混合物回流过夜然后冷却至<50℃。真空去除溶剂后，以乙酸乙酯溶解残余物。以水(250mL×2)、饱和水NaHCO₃(250mL×2)和盐水(250mL×2)洗涤所得溶液，然后使用无水硫酸钠进行干燥。真空蒸发溶剂后，以含有乙醇(150mL)和丙酮(75mL)的二元溶剂对残余物重结晶。通过真空过滤分离该固体并以乙醇洗涤(100mL×2)。在60℃下将产物真空干燥至恒重，从而获得19.4g(75％产率)98％ee的(S)-{2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰乙基]-4-异吲哚啉-1，3-二酮。手性HPLC(15/85EtOH/20mMKH2PO4@pH.5，Ultron Chiral ES-OVS购自Agilent Technologies，150mm×4.6mm，0.4mL/min，@240nm)：25.4min(S-异构体，98.7％)，29.5min(R-异构体，1.2％)。以¹H NMR光谱鉴定于CDCl₃中的产品显示了如下化学位移(δ，ppm)：1.47(t，3H)，2.26(s，3H)，2.87(s，3H)₅ 3.68-3.75(dd，1H)，3.85(s，3H)，4.07-4.15(q，2H)，4.51-4.61(dd，1H)，5.84-5.90(dd，1H)，6.82-8.77(m，6H)，9.46(s，1H)。以¹³C NMR光谱鉴定于DMSO-d₆中的产品显示了如下化学位移(δ，ppm)：14.66，24.92，41.61，48.53，54.46，55.91，64.51，111.44，112.40，115.10，118.20，120.28，124.94，129.22，131.02，136.09，137.60，148.62，149.74，167.46，169.14，169.48。

实施例2    4-氨基-2-(2，6-二氧代-3-哌啶)异吲哚啉-1，3-二酮[化合物(2)]的制备

将乙腈(42L)和N-(3-氨基邻苯二甲酰)-谷氨酰胺(2120g，7.28摩尔)的混合物添加入配备了机械搅拌器、冷凝器、氮气入口以及加热台的圆底烧瓶中。搅拌混合物后加热至40-45℃，并添加1，1’-羰基二咪唑(1290g，7.95摩尔)。将反应混合物搅拌并回流4.5小时。反应的进展可通过HPLC进行监测，其条件为：采用Waters Nova-Pak C18柱(3.9×150mm，粒径＝4微米，UV波长＝240nm，保留时间＝3.64分钟)，以体积比为20/80的乙腈和0.1％H₃PO₄水溶液混合物作为洗脱液，流速为1mL/min。冷却至室温后，过滤反应混合物以得到黄色固体，随后以乙腈洗涤(6.5L)。将黄色固体风干，然后在60℃和<1mm的压力下真空干燥以得到1760g(88％)的产品。通过HPLC测得产品的纯度为99.57％，HPLC条件为采用Waters Nova-Pak C18柱(3.9×150mm，粒径＝4微米，UV波长＝240nm，保留时间＝3.64分钟)，以体积比为20/80的乙腈和0.1％H₃PO₄水溶液混合物作为洗脱液，流速为1mL/min。以¹H NMR光谱鉴定于DMSO-d₆中的产品显示了如下化学位移(δ，ppm)：11.10(s，1H)，7.47(t，J＝7.9Hz，1H)，7.03-6.99(dd，J＝4.8和8.4Hz，2H)，6.52(s，2H)，5.09-5.02(dd，J＝5.3和12.4Hz，1H)，2.96-2.82(m，1H)，2.62-2.46(m，2H)，2.07-2.00(m，1H)；而以¹³CNMR光谱鉴定显示了如下化学位移(δ，ppm)：172.82，170.11，168.57，167.37，146.71，135.46，131.99，121.70，110.97，108.52，48.47，30.97，22.14。该产物的熔点为315.5-317.5℃。由元素分析可得到如下以重量百分比显示的结果：C，56.98；H，3.86；N，15.35，其与由C₁₃H₁₁N₃O₄计算得到的以重量百分比显示的值：C，57.14；H，4.06；N，15.38相当。

实施例3   环丙基{2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰)乙基]-3-氧代异吲哚啉-4-基}甲酰胺的制备

环丙基{2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰)乙基]-3-氧代异吲哚啉-4-基}甲酰胺可参照美国专利6,667,316中实施例57的制备方法进行制备。在四氢呋喃(10mL)中将搅拌的7-氨基-2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰)乙基]异吲哚啉-1-酮(1.7g，4.2mmol)与环丙烷碳酰氯(0.46mL，5.1mmol)的混合物搅拌并加热回流15分钟。在室温下向混合物添加甲醇(4mL)，搅拌混合物10分钟。真空去除溶剂以得到油。将油用乙醇(20mL)重结晶以得到白色固体状的化合物(1)(1.4g，71％产率)：熔点：172-174℃；¹HNMR(CDCl₃)δ：0.86-0.93(m，2H，2CHH)，1.07-1.14(m，2H，2CHH)，1.46(t，1＝6.9Hz，3H，CH₃)，1.63-1.73(m，1H，CH)，2.95(s，3H，CH₃)，3.68(dd，J＝4.4，14.3Hz，1H，CHH)，3.86(s，3H，CH₃)，4.07(q，J＝7.1Hz，2H，CH₂)，4.20(d，J＝16.7Hz，1H，CHH)，4.21(dd，J＝9.9，14.3Hz，1H，CHH)，4.44(d，J＝16.7Hz，1H，CHH)，5.73(dd，J＝4.3，9.9Hz，1H，NCH)，6.84-7.02(m，4H，Ar)，7.44(t，J＝7.8Hz，1H，Ar)，8.43(d，J＝8.3Hz，1H，Ar)，10.46(s，1H，NH)；¹³C NMR(CDCl₃)δ：8.24，14.61，16.10，41.43，47.81，51.55，55.75，55.88，64.56，111.46，112.09，116.69，116.99，117.76，119.17，129.27，133.54，138.06，141.22，148.84，149.67，169.96，172.59；由C₂₄H₂₈N₂O₆S分析计算得到：C，61.00；H，5.97；N，5.93。实测：C，60.87；H，6.13；N，6.12。

实施例4

分别包含50毫克活性成分的片剂可以如下方式制备：

首先将固体成分强制通过网格宽度为0.6mm的筛网。然后混合活性成分、乳糖、滑石、硬脂酸镁和一半淀粉。该活性成分为本发明的化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体。将另一半淀粉悬浮于40毫升水中，将悬浮液添加至含聚乙二醇的100毫升水的沸腾溶液中。将所得糊状物添加至粉状物质，将混合物制成颗粒，必要时添加水。将颗粒在35℃下干燥过夜，强制通过网格宽度为1.2mm的筛网，并压制成两侧凹陷的直径约为6mm的片剂。

实施例5

分别包含100毫克活性成分的片剂可以如下方式制备：

首先将所有固体成分强制通过网格宽度为0.6mm的筛网。然后混合活性成分、乳糖、硬脂酸镁和一半淀粉。将另一半淀粉悬浮于40毫升水中，将悬浮液添加至100毫升沸水中。将所得糊状物添加至粉状物质，将混合物制成颗粒，必要时添加水。将颗粒在35℃下干燥过夜，强制通过网格宽度为1.2mm的筛网，并压制成两侧凹陷的直径约为6mm的片剂。

实施例6

分别包含75毫克活性成分的咀嚼片可以如下方式制备：

首先将所有固体成分强制通过网格宽度为0.25mm的筛网。混合甘露醇和乳糖，通过添加明胶溶液制成颗粒，强制通过网格宽度为2mm的筛网，将颗粒在50℃下干燥过夜，强制通过网格宽度为1.7mm的筛网。小心混合活性成分、甘氨酸和糖精。添加甘露醇、乳糖颗粒、硬脂酸和滑石，将所有成分充分混合，并压制成两侧凹陷并在上侧具有断裂槽的直径约为10mm的片剂。

实施例7

分别包含10毫克活性成分的片剂可以如下方式制备：

首先将固体成分强制通过网格宽度为0.6mm的筛网。然后充分混合活性成分、乳糖、滑石、硬脂酸镁和一半淀粉。将另一半淀粉悬浮于65毫升水中，将悬浮液添加至含聚乙二醇的260毫升水的沸腾溶液中。将所得糊状物添加至粉状物质，完全混合并制成颗粒，必要时添加水。将颗粒在35℃下干燥过夜，强制通过网格宽度为1.2mm的筛网，并压制成两侧凹陷并在上侧具有断裂缺口的直径约为10mm的片剂。

实施例8

分别包含100毫克活性成分的凝胶干式填充胶囊可以如下方式制备：

将十二醇硫酸钠通过网格宽度为0.2mm的筛网过筛进入活性成分，将两个组分充分混合10分钟。将微晶纤维素通过网格宽度为0.9mm的筛网进行添加，并全体再次混合10分钟。最后，将硬脂酸镁通过网格宽度为0.8mm的筛网进行添加，继续混合3分钟后，将每份140毫克的混合物分别导入0号尺寸(加长)的凝胶干式填充胶囊。

实施例9

0.2％的注射或灌输溶液可以如下示范方式进行制备：

将活性成分溶解于1000毫升水中，并用微孔过滤器过滤。添加缓冲溶液，将整个溶液定容至2500毫升。为制备单位剂型，可将每份1.0或2.5毫升分别导入玻璃安瓿(分别包含2.0或5.0毫克的活性成分)。

实施例10

局部使用的油膏可以如下示范方式进行制备：

采用常规混合器或匀浆机通过震荡或超声将上述成分均匀混合以形成油膏。

实施例11

局部使用的凝胶可以如下示范方式进行制备：

采用常规混合器或匀浆机通过震荡或超声将上述成分均匀混合以形成凝胶。

实施例12

局部使用的糊剂可以如下示范方式进行制备：

采用常规混合器或匀浆机通过震荡或超声将上述成分均匀混合以形成糊剂。

实施例13

局部使用的液体组合物可以如下示范方式进行制备：

采用常规混合器或匀浆机通过震荡或超声将将固体成分均匀分散/溶解于液体成分中以形成液体。

实施例14

局部使用的喷雾剂可以如下示范方式进行制备：

将液体组合物与氟利昂114填充入覆有Teflon的铝制喷雾容器中。

实施例15   以人脐静脉内皮细胞进行试验

A)材料人脐静脉内皮细胞(HUVEC)来自于LifeBank，用多种吸附分子在实验A-K中进行了测试。测试的吸附分子为：CD51/CD61 FITC(购自BDPharMingen，San Diego，CA；目录编号555505)；ICAM-1 PE，也称为CD54(购自BD PharMingen，San Diego，CA；目录编号555511)；ICAM-2，也称为CD 102(购自Research Diagnostics Inc.，Concord，MA；目录编号RDI-CBL539FT)；VCAM-1(购自BD PharMingen.San Diego，CA；目录编号555647)；P-选择素FITC(购自R&D Systems，Inc.，Minneapolis，MN；目录编号BBA34)；E-选择素FITC(购自R&D Systems，Inc.，Minneapolis，MN；目录编号BBA21)；HLA I类FITC(购自BD PharMingen，San Diego，CA；目录编号555553)；HLA II类PE(购自BD PharMingen，San Diego，CA；目录编号555558)；CD44 FITC(购自BD PharMingen，San Diego，CA；目录编号347943)；CD 144(钙粘素VE)(购自CHEMICON International，Inc.，Temecula，CA；目录编号MAB1989)；IgG2aFITC(购自BD PharMingen，San Diego，CA；目录编号556652)；Ms IgG2a(购自CHEMICON International，Inc.，Temecula，CA；目录编号PP102)；IgG1 FITC(购自BD PharMingen，San Diego，CA；目录编号349041)以及IgG1 PE(购自BDPharMingen，San Diego，CA；目录编号349043)。

化合物(1)((+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮)和化合物(2)(4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶))-异吲哚啉-1，3-二酮)参照本说明书所描述的制备方法制备得到。16，16-二甲基-PGE2(以下称为PGE2)购自BIOMOL International，L.P.(Plymouth Meeting，PA；目录编号PG-021)。TNF-α购自Pierce Biotechnology(Rockford，IL；目录编号RTNFA10)。

B)方法将HUVEC以1×10⁵细胞/孔的浓度涂布在6孔板上的3ml

内皮基础培养基(购自Cambrex Corporation，East Rutherford，New Jersey；目录编号CC-3121)和singlequots培养基(购自Cambrex Corporation，EastRutherford，New Jersey；目录编号CC-4133)中。将细胞在37℃下并含有5％CO₂的增湿培养箱中孵育过夜以允许细胞附着。次日去除旧培养基并以3ml新鲜

内皮基础培养基替换。然后，将10mM的化合物(1)、化合物(2)、PGE2以及化合物(1)与PGE2的混合物的3μl样本分别以一式两份地添加到板上的各孔中以得到10μM的终浓度。分别一式两份地添加非刺激的DMSO对照和TNF-α-刺激对照。将这些平板在37℃下并含有5％ CO₂的增湿培养箱中孵育1小时。向除了DMSO对照孔外的各孔添加3μl的TNF-α(1μg/ml)以得到1μg/ml的终浓度。将该平板在37℃下并含有5％ CO₂的增湿培养箱中孵育过夜。该细胞还在无TNF-α的情况下测试。次日去除培养基并以3ml磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤各孔。然后向各孔添加3ml含1mM EDTA(乙二胺四乙酸)的PBS以使细胞脱附。一旦细胞脱附后，将其轻柔刮取并置于4.5ml Falcon管中。将管子在4℃下1200RPM离心8分钟。小心去除上清液。然后，按如下方式向所有的管子中添加50μl PBS-FACS缓冲液(5％胎牛血清(FBS)，0.02％叠氮化钠的PBS溶液)以及20μl抗体：

            实验A和B

 

非刺激(DMSO)	刺激(TNF)	化合物(1)+TNF	PGE2+TNF	化合物(2)+TNF	PGE2+化合物(1)+TNF
						ICAM-1PE	CD51/61FITC	CD51/61FITC	CD51/61FITC	CD51/61FITC	CD51/61FITC
CD51/61FITC	ICAM-1 PE	ICAM-1 PE	ICAM-1 PE	ICAM-1 PE	ICAM-1 PE

           实验C、D和E

 

非刺激(DMSO)	刺激(TNF)	化合物(1)+TNF	PGE2+TNF	化合物(2)+TNF	PGE2+化合物(1)+TNF
						IgG1FITC	E选择素FITC	E选择素FITC	E选择素FITC	E选择素FITC	E选择素FITC
E选择素FITC	P选择素FITC	P选择素FITC	P选择素FITC	P选择素FITC	P选择素FITC

             实验F、G和H

 

非刺激(DMSO)	刺激(TNF)	化合物(1)+TNF	PGE2+TNF	化合物(2)+TNF	PGE2+化合物(1)+TNF
						IgG1 PE	HLA I类PE	HLA I类PE	HLA I类PE	HLA I类PE	HLA I类PE
IgG2a FITC	HLA II类PE	HLA II类PE	HLA II类PE	HLA II类PE	HLA II类PE

          实验F和G

 

非刺激(DMSO)	刺激(TNF)	化合物(1)+TNF	PGE2+TNF	化合物(2)+TNF	PGE2+化合物(1)+TNF
						IgG1 PE	VCAM-1PE	VCAM-1PE	VCAM-1PE	VCAM-1PE	VCAM-1PE

         实验H

 

非刺激

刺激

化合物(1)+

PGE2+TNF

化合物(2)+

PGE2+化

 

(DMSO)	(TNF)	TNF		TNF	合物(1)+TNF
						IgG1 PE	VCAM-1PE	VCAM-1PE	VCAM-1PE	VCAM-1PE	VCAM-1PE
VCAM-1PE	ICAM-2FITC	ICAM-2FITC	ICAM-2FITC	ICAM-2FITC	ICAM-2FITC

            实验E

 

非刺激(DMSO)	刺激(TNF)	化合物(1)+TNF	PGE2+TNF	化合物(2)+TNF	PGE2+化合物(1)+TNF
						IgG1 FITC	E选择素	E选择素	E选择素	E选择素	E选择素
E选择素FITC	P选择素	P选择素	P选择素	P选择素	P选择素
						P选择素FITC	CD51/61	CD51/61	CD51/61	CD51/61	CD51/61

           实验I

 

非刺激(DMSO)	刺激(TNF)	化合物(1)+TNF	PGE2+TNF	化合物(2)+TNF	PGE2+化合物(1)+TNF
						IgG2a FITC	HLA II类	HLA II类	HLA II类	HLA II类	HLA II类
IgG1PE	ICAM-1	ICAM-1	ICAM-1	ICAM-1	ICAM-1
						HLA II类FITC	ICAM-2	ICAM-2	ICAM-2	ICAM-2	ICAM-2

              实验J

 

非刺激(DMSO)	刺激(TNF)	化合物(1)+TNF	PGE2+TNF	化合物(2)+TNF	PGE2+化合物(1)+TNF
						Ms IgG2a	ICAM-2FITC	ICAM-2FITC	ICAM-2FITC	ICAM-2FITC	ICAM-2FITC
IgG1 FITC	CD144	CD144	CD144	CD144	CD144
						ICAM-2FITC	CD44	CD44	CD44	CD44	CD44

         实验K和L

 

非刺激(DMSO)	刺激(TNF)	化合物(1)+TNF	PGE2+TNF	化合物(2)+TNF	PGE2+化合物(1)+TNF
						Ms IgG2a	CD144	CD144	CD144	CD144	CD144
IgG1 FITC	CD44	CD44	CD44	CD44	CD44

添加抗体后，将管子在冰上孵育30分钟并以铝箔覆盖。然后，将管子在4℃下1200 RPM离心8分钟。小心去除上清液。将细胞重悬浮于2ml的PBS-FACS缓冲液中并按上述步骤再次离心。再次小心去除上清液并将细胞在500μl的PBS-FACS缓冲液中重悬浮。使用流式细胞仪分析管子。对各吸附分子试验两或三次，每次采用不同的HUVEC供体。

C)结果在非刺激情况下和用化合物(1)(10μM)、PGE2(10μM)、化合物(2)(10μM)或以化合物(1)(10μM)和PGE2(10μM)的混合物进行处理的情况下检测在HUVEC上表达的吸附标记CD51/61、ICAM-1、E-选择素和P-选择素。在非刺激情况下，与未处理情况相比CD51/61细胞表面表达未受到化合物(1)或化合物(2)的影响。PGE2以及化合物(1)和PEG2混合物处理可导致CD51/61细胞表面表达下降20％。ICAM-1的细胞表面表达在化合物(1)和化合物(2)处理时均显示了10-20％的适度升高。化合物(1)和PEG2的混合物增强了约25-30％的ICAM-1的细胞表面表达，尽管其增强少于单用PGE2所观察到的结果(参见图1)。

可能由于灵敏度不足，E-选择素细胞表面表达水平较小。然而，化合物(1)和化合物(2)抑制了E-选择素表达，而PEG2似乎阻断了化合物(1)诱导抑制，而将E-选择素表达水平恢复至基线值。化合物(1)和化合物(2)同样可以分别抑制约55％和35％的P-选择素表达。PGE2在与化合物(1)合用时可将化合物(1)的抑制水平由约55％减少至27％，然而剩余的表达水平与PGE2单用时类似(参见图2)。

对于TNF-α(1ng/ml)刺激的情况，粘附分子的细胞表面表达水平被归一为TNF-α-刺激表达的百分比(100％)。在该情况下，TNF-α-刺激的E-选择素细胞表面表达未受到化合物(1)的影响，而化合物(2)(10μM)抑制了约20％的TNF-α-诱导的E-选择素表达。单用PGE2可导致TNF-α-诱导的E-选择素表达下降50％。化合物(1)的添加减少了PGE2介导的E-选择素阻断(参见图3)。化合物(1)和化合物(2)使TNF-α-诱导的P-选择素细胞表达分别提高到基线以上40％和>2倍。化合物(1)和PGE2的混合物将TNF-α-刺激的P-选择素细胞表达提高至与PGE2单用相当的水平(参见图3)。

TNF-α-刺激的VE-钙粘素细胞表面表达未受到化合物(1)、化合物(2)、PGE2或化合物(1)和PGE2混合物的影响(参见图4)。然而，TNF-α-刺激的CD44细胞表面表达被化合物(1)和化合物(2)均抑制了约30％。尽管单用PGE2未见可检测的作用，但化合物(1)和PGE2的混合物消除了单用化合物(1)时所观察到的30％抑制，并使表达水平恢复至单用PGE2时与基线水平相当的水平(参见图4)。

在TNF-α刺激情况下结合化合物(1)(10μM)、PGE2(10μM)、化合物(2)(10μM)或化合物(1)(10μM)和PGE2(10μM)的混合物对HUVEC上表达的多种吸附标记进行了检测。在测试组中，化合物(1)处理使ICAM-1和P-选择素细胞表面表达上升了约35％，并使VCAM表达下降了30％。采用相同的测试标记时，化合物(2)使P-选择素的表达提升了将近2倍。PGE2以及化合物(1)和PGE2的混合物显著提高了VCAM以及E-选择素的细胞表面表达。所观察到的下降与PGE2单用时相当，这表明机制与化合物(1)磷酸二酯酶抑制无关(参见图5)。

在TNF-α刺激后采用ELISA检测HUVEC中E-选择素细胞表面表达显示化合物(1)和PGE2(10μM)的混合物与各药剂单用时相比在0.25、0.5和1ng/ml的TNF-α时明显抑制表达。在该测定中，化合物(1)和PGE2的混合物显示出了协同作用。此外，化合物(2)对于TNF-α-刺激的E-选择素细胞表面表达显示出了抑制作用(参见图6)。

实施例16    对紫外B诱导下人角化细胞生成TNF-α的研究

皮肤狼疮患者常在暴露至紫外(UV)光时病情加重。据认为这是由于UVB-诱导人角化细胞生成TNF-α。已经表明角化细胞在体外暴露至低水平UVB辐射时可释放细胞因子，包括TNF-α(Takashima，1996)。我们进行了皮肤狼疮体外研究以考察本发明的化合物如何影响人角化细胞生成TNF-α。

人新生儿表皮角化细胞(HEKn细胞)得自Cascade Biologies并培养于添加了生长因子的无血清培养基中。当细胞汇合达80％时，对其进行胰蛋白酶化并以1×10⁵细胞/孔涂布于6孔板上。将平板孵育24小时以使细胞附着。为优化TNF-α的释放条件，可通过不同暴露程度的UVB辐射处理细胞(1、4和24小时)。然后采集上清液并在TNF-α ELISA中进行测试。

图7显示了以0、10、50、100或300mJ/cm²UVB辐射处理HEKn细胞。在暴露后1小时(无图案的图块)、4小时(带线条的图块)或24小时(带方格的图块)采集上清液并以TNF-α ELISA进行测验。所得结果为两个试验的平均值。图7的结果显示，HEKn细胞暴露至UVB后24小时采集的上清液具有最高水平的TNF-α。在暴露至10、50或100mJ/cm²后，细胞仍然附着至微孔且未观察到细胞损伤。300mJ/cm²UVB暴露对HEKn细胞而言过高，许多细胞受损并从微孔底部脱附。基于这些结果，后面的试验将集中测试本发明的化合物对HEKn细胞暴露至50mJ/cm²辐射24小时后的TNF-α水平的影响。

细胞以0.1μM、1μM或10μM的(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮(化合物名为10004)或环丙基{2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰)乙基]-3-氧代异吲哚啉-4-基}甲酰胺(化合物名为11050)处理4小时。吸出培养基洗涤细胞并暴露至50mJ/cm²UVB辐射。添加新鲜培养基并将细胞孵育24小时。去除上清液并用购自Pierce Biotechnology的TNF-α ELISA试剂盒进行测试。经化合物处理的细胞在UVB暴露后显示TNF-α释放水平呈剂量依赖性下降。(图8)。以10μM的(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮(化合物名为10004)进行处理对TNF-α水平具有更大的影响，显示出与非经辐射处理的细胞相似的TNF-α水平。(图8)。

在另一实施方式中，以0.1μM或1μM的3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮(化合物名为5013)、(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮(化合物名为10004)或名为16057的化合物处理细胞4小时。以(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮(化合物名为10004)处理的细胞在UVB暴露后显示TNF-α释放水平呈剂量依赖性下降。(图9)。3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮(化合物名为5013)对TNF-α水平具有更大的影响，以0.1μM进行的处理显示出比非经辐射处理的细胞更低的TNF-α水平。(图9)。

以上所述的本发明的实施例目的仅在于举例，且本领域的技术人员采用不超出常规的试验将可以识别、或能够确定许多等同的特定化合物、材料和方法。所有的该种等效物被认为在本发明的范围内且包含在附加权利要求书中。

Claims (35)

1.治疗人皮肤狼疮的方法，其包括向皮肤狼疮患者施用治疗有效量的基本不含其(-)对映体的(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1，3-二酮，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

2.治疗皮肤狼疮的方法，其包括向皮肤狼疮患者施用治疗有效量的4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-异吲哚啉-1，3-二酮，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体。

3.治疗皮肤狼疮的方法，其包括向皮肤狼疮患者施用治疗有效量的3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体。

4.治疗人皮肤狼疮的方法，其包括向皮肤狼疮患者施用治疗有效量的基本不含其(R)对映体的环丙基{2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰)乙基]-3-氧代异吲哚啉-4-基}甲酰胺，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

5.如权利要求1、2、3或4所述的方法，其中所述化合物以药学上可接受的盐施用。

6.如权利要求1、2、3或4所述的方法，其中所述化合物以药学上可接受的溶剂化物施用。

7.如权利要求6所述的方法，其中所述溶剂化物为水合物。

8.如权利要求2或3所述的方法，其中所述化合物为R-对映体。

9.如权利要求2或3所述的方法，其中所述化合物为S-对映体。

10.如权利要求1、2、3或4所述的方法，其中所述皮肤狼疮为急性皮肤型红斑狼疮。

11.如权利要求1、2、3或4所述的方法，其中所述皮肤狼疮为亚急性皮肤型红斑狼疮。

12.如权利要求1、2、3或4所述的方法，其中所述皮肤狼疮为盘状红斑狼疮。

13.如权利要求1、2、3或4所述的方法，其中所述皮肤狼疮为新生儿红斑狼疮。

14.如权利要求1、2、3或4所述的方法，其中所述皮肤狼疮为儿童红斑狼疮。

15.如权利要求1、2、3或4所述的方法，还包括向所述患者施用治疗有效量的第二活性试剂。

16.如权利要求15所述的方法，其中所述第二活性试剂为抗炎剂、免疫调节化合物、抗疟药、免疫抑制剂、抗生素、抗病毒剂、免疫球蛋白、免疫增强药、激素、PGE2或其组合。

17.如权利要求16所述的方法，其中所述第二活性试剂为PGE2。

18.如权利要求1、2、3或4所述的方法，其中所述化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体通过口服施用。

19.如权利要求1、2、3或4所述的方法，其中所述化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体通过肠胃外施用。

20.如权利要求1、2、3或4所述的方法，其中所述化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体通过局部施用。

21.如权利要求20所述的方法，其中所述化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体以油膏、乳膏、凝胶、糊剂、粉剂、洗剂、喷雾、擦剂、泥敷剂、气雾剂、溶液、乳状液或悬浮液的剂型局部施用。

22.如权利要求1、2、3或4所述的方法，其中所述化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体以片剂或胶囊的剂型口服施用。

23.如权利要求22所述的方法，其中所述化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体以5mg、10mg、15mg或25mg的片剂或胶囊剂口服施用。

24.如权利要求1或4所述的方法，其中所述治疗有效量为每天约1mg至约1000mg。

25.如权利要求24所述的方法，其中所述治疗有效量为每天约5mg至约500mg。

26.如权利要求25所述的方法，其中所述治疗有效量为每天约10mg至约200mg。

27.如权利要求2或3所述的方法，其中所述治疗有效量为每天约0.1mg至约150mg。

28.如权利要求27所述的方法，其中所述治疗有效量为每天约1mg至约100mg。

29.如权利要求27所述的方法，其中所述治疗有效量为每天约0.1mg、1mg、2mg、5mg、10mg或25mg。

30.如权利要求2所述的方法，其中所述治疗有效量为每天约0.5mg至约2mg。

31.如权利要求2所述的方法，其中所述治疗有效量为每隔一天约5mg。

32.如权利要求3所述的方法，其中所述治疗有效量为每天约5mg至约25mg。

33.如权利要求3所述的方法，其中所述治疗有效量为每隔一天约25mg或50mg。

34.如权利要求1、2、3或4所述的方法，其中所述化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体每天施用一次或两次。

35.如权利要求1、2、3或4所述的方法，其中所述化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体周期性施用。

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