CN101233149A

CN101233149A - 补体C3a衍生的肽及其用途

Info

Publication number: CN101233149A
Application number: CNA2006800273731A
Authority: CN
Inventors: 伊斯雷尔·派茨特; 安娜·埃代
Original assignee: Yeda Research and Development Co Ltd
Current assignee: Yeda Research and Development Co Ltd
Priority date: 2005-07-27
Filing date: 2006-07-27
Publication date: 2008-07-30

Abstract

部分对应于补体成分C3a肽序列的55－64位的肽能够通过抑制IgE或IgG介导的触发和/或通过抑制FcεRI和/或FcγR诱导的分泌反应来预防和治疗肥大细胞和嗜碱性粒细胞介导的疾病，而无过敏毒性反应。这些肽可用于预防和/或治疗其中涉及粘膜型和/或浆膜型肥大细胞和/或嗜碱性粒细胞的变态反应性疾病，例如哮喘、变态反应性皮肤病和胃肠变态反应。

Description

补体C3a衍生的肽及其用途

技术领域

本发明涉及衍生自补体C3a的氨基酸序列的肽，及其在预防和治疗由肥大细胞或嗜碱性粒细胞介导的变态反应性疾病特别是肺变态反应例如哮喘中的用途。

背景技术

肥大细胞和嗜碱性粒细胞在炎性和速发型超敏反应中起到重要作用。存在于肥大细胞和嗜碱性粒细胞的质膜中的I型Fcε受体(FcεRI)的聚集启动了在炎性介质(包括组胺、5-羟色胺、蛋白酶、白三烯以及几种细胞因子)的分泌中达到高潮的偶联级联。在过去几年，已经对由FcεRI聚集启动的信号转导的分子机制进行了深入研究。src家族蛋白酪氨酸激酶(PTK)Lyn与受体复合物的β亚单位相互作用，并且由于FcεRI聚集而进行磷酸化和激活。Lyn至基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)-磷酸化受体亚单位的募集导致Syk PTK的激活，Syk PTK的激活又引起磷脂酶C-γ(PLC-γ)激活，磷脂酰基-肌醇磷脂-4，5-二磷酸酯(PIP2)的水解和游离的胞质[Ca2+]_i的瞬时增加。这又诱导了最后在介质分泌中达到高潮的蛋白激酶C的激活。

肥大细胞祖先表现为单谱系，当迁移至不同组织时产生两种不同的表型；所谓的浆膜型(结缔组织类型)肥大细胞存在于浆膜腔、皮肤和呼吸道中；粘膜型肥大细胞主要存在于胃肠粘膜表面。尽管如此，肥大细胞的组织依赖性分化是可逆的；成纤维细胞衍生的因子将粘膜型肥大细胞改变成浆膜型，而IL-3有利于粘膜表型。除了组织分布外，寿命及其细胞内颗粒的介质含量也不同。两种类型均在其细胞膜上表达FcεRI，FcεRI的聚集激发分泌反应。

与肥大细胞的FcεRI介导的触发不同，肥大细胞激活的肽能途径仅在浆膜型肥大细胞中发生。通过大鼠腹膜或人皮肤肥大细胞建立浆膜型肥大细胞的实验模型。通过暴露于多胺或阳离子肽例如P物质或补体激活产物C3a和C5a来触发肽能刺激(Mousli等，Immunopharmcol.27：1-11，1995)。后者的补体衍生的过敏毒素为(浆膜型)肥大细胞分泌反应的最有效的肽能激活剂。相比之下，粘膜型肥大细胞，例如大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞系(RBL-2H3)，不应答所述阳离子肽。据证明，C3a及其某些衍生物抑制IgE介导的RBL-2H3细胞的脱颗粒，而C5a对该过程无作用(Erdei等，Int.Immunol.7：1433-1439，1995；Erdei等，Immunol.Lett.68：79-82，1999)。

C3a不适于用作抗变态反应药物，这是因为它对浆膜型肥大细胞具有过敏毒性，即它能够诱导肥大细胞的介质分泌。

授予本发明的申请人的美国专利6,682,740公开了部分或完全对应于人补体衍生肽C3a序列的50-77位的肽及其类似物，所述肽能够抑制IgE介导的触发和/或FcεRI诱导的粘膜型肥大细胞的分泌反应。

对于可用于预防或治疗与嗜碱性粒细胞和浆膜型以及粘膜型肥大细胞介导的脱颗粒有关的变态反应性疾病的短肽以及含有所述短肽的组合物的需要仍未得到满足。

发明内容

根据本发明已发现，衍生自和部分对应于人补体成分C3a的55-64位氨基酸序列的某些肽及其类似物可有效抑制FcεRI诱导的粘膜型和浆膜型肥大细胞以及嗜碱性粒细胞的分泌反应并缓解并发症状，而没有C3a的过敏毒性作用。

已发现这些肽的抑制作用提供了对FcεRI刺激反应偶联级联的邻近事件(如FcεRIβ亚单位和酪氨酸激酶Lyn的蛋白磷酸化)的抑制，以及对之后的事件(例如游离的胞质钙离子的瞬时增加)的抑制。

首次公开了部分对应于人补体成分C3a的55-64位的氨基酸序列的C3a衍生肽及其类似物能够减轻动物模型的被动全身性过敏反应和哮喘症状。

本发明公开的新型肽衍生自已知的人补体成分C3a，该人补体成分C3a为具有下列序列的77-mer肽(SEQ ID NO：1)：

Ser-Val-Gln-Leu-Thr-Glu-Lys-Arg-Met-Asp-Lys-Val-Gly-Lys-Tyr-Pro-Lys-Glu-Leu-Arg-Lys-Cys-Cys-Glu-Asp-Gly-Met-Arg-Glu-Asn-Pro-Met-Arg-Phe-Ser-Cys-Gln-Arg-Arg-Thr-Arg-Phe-Ile-Ser-Leu-Gly-Glu-Ala-Cys-Lys-Lys-Val-Phe-Leu-Asp-Cys-Cys-Asn-Tyr-Ile-Thr-Glu-Leu-Arg-Arg-Gln-His-Ala-Arg-Ala-Ser-His-Leu-Gly-Leu-Ala-Arg。

本发明涉及衍生自和部分对应于人补体C3a肽的55-64位氨基酸序列的具有如下SEQ ID NO：2序列的肽：

Asp-Cys-Cys-Asn-Tyr-Ile-Thr-Glu-Leu-Arg，还涉及其类似物、化学衍生物及盐，它们能够抑制细胞的分泌反应，其中所述细胞为粘膜型肥大细胞、浆膜型肥大细胞和/或嗜碱性粒细胞；且其中所述分泌反应由选自(i)IgE或IgG介导的触发和/或(ii)FcεRI或FcγR聚集的刺激所诱导。

一方面，本发明提供了衍生自人补体C3a的55-64位氨基酸序列(SEQID NO：2)的肽，或其类似物、化学衍生物或药学上可接受的盐，其中所述肽具有下列通式的氨基酸序列：

X1-Asp-X2-Asn-Tyr-Ile-Thr-X3(SEQ ID NO：3至10)，

其中

X1选自氢、低级烷酰基、Cys、Ser、D-Ala以及D-Ala-D-Ala；

X2选自Ser-Ser和Val-Val；且

X3选自Arg、Arg-NH2、Glu-Cys-Arg以及Glu-Cys-Arg-NH2；

条件是，当X1是氢或低级烷酰基且X3是Arg或Arg-NH2时，那么X2是Val-Val。

本发明的新型肽能够抑制选自粘膜型肥大细胞、浆膜型肥大细胞以及嗜碱性粒细胞的细胞的分泌反应。所述分泌反应由选自(i)IgE或IgG介导的触发和/或(ii)FcεRI或FcγR聚集的刺激所诱导。

在某些实施方案中，本发明提供了具有选自下列序列的氨基酸序列的肽：

(a)D-Ala-D-Ala-Asp-Ser-Ser-Asn-Tyr-Ile-Thr-Arg-Z(SEQ ID NO：7)；

(b)Ser-Asp-Ser-Ser-Asn-Tyr-Ile-Thr-Arg-Z(SEQ ID NO：11)；

(c)Asp-Val-Val-Asn-Tyr-Ile-Thr-Arg-Z(SEQ ID NO：12)；

(d)Cys-Asp-Ser-Ser-Asn-Tyr-Ile-Thr-Arg-Z(SEQ ID NO：13)；

(e)Ser-Asp-Ser-Ser-Asn-Tyr-Ile-Thr-Glu-Cys-Arg-Z(SEQ ID NO：14)；

(f)(a)、(b)、(c)、(d)或(e)的类似物；

(g)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)或(f)的化学衍生物；以及

(h)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)或(g)的盐，

其中Z表示端羧酸、酰胺或醇。

术语D-Ala是指丙氨酸的D异构体构象。

根据某些实施方案，本发明的肽具有约8至约12个氨基酸残基。在具体的实施方案中，本发明的肽具有约8至约10个氨基酸残基。

根据某些实施方案，所述肽具有SEQ ID NO：7所列的氨基酸序列，其中所述Z是羧基端酰胺。根据某些实施方案，所述肽具有SEQ ID NO：11所列的氨基酸序列，其中所述Z是羧基端酰胺。

根据某些示例的实施方案，所述Z是酰胺，所述肽选自下列序列：

(a)D-Ala-D-Ala-Asp-Ser-Ser-Asn-Tyr-Ile-Thr-Arg-NH2，本文中被称为C3a32(SEQ ID NO：7)；

(b)Ser-Asp-Ser-Ser-Asn-Tyr-Ile-Thr-Arg-NH2，本文中被称为C3a31(SEQ ID NO：11)；

(c)Asp-Val-Val-Asn-Tyr-Ile-Thr-Arg-NH2，本文中被称为C3a14(SEQID NO：12)；

(d)Cys-Asp-Ser-Ser-Asn-Tyr-Ile-Thr-Arg-NH2，本文中被称为C3a29(SEQ ID NO：13)；

(e)Ser-Asp-Ser-Ser-Asn-Tyr-Ile-Thr-Glu-Cys-Arg-NH2，本文中被称为C3a35(SEQ ID NO：14)。

根据另一方面，本发明提供了药物组合物，它含有根据本发明原理作为活性剂的衍生自人补体C3a的55-64位氨基酸序列的至少一种肽，或其类似物、化学衍生物或药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。根据某些实施方案，所述药物组合物中的肽具有选自SEQ ID NO：3至SEQ IDNO：14的氨基酸序列。在某些实施方案中，所述药物组合物具有SEQ IDNO：7所列的氨基酸序列，其中羧基端任选为羧基端酰胺。在其他实施方案中，所述药物组合物中的肽具有SEQ ID NO：11所列的氨基酸序列，其中羧基端任选为羧基端酰胺。

根据另一方面，本发明提供了至少一种肽或其类似物、化学衍生物或药学上可接受的盐和药学上可接受的载体在制备用于预防和/或治疗变态反应性疾病的药剂中的用途，其中所述肽、其类似物、化学衍生物或盐具有选自SEQ ID NO：3至SEQ ID NO：14的氨基酸序列。在某些实施方案中，所述肽具有SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：11所列的氨基酸序列，其中羧基端任选为羧基端酰胺。根据某些实施方案，所述变态反应性疾病是嗜碱性粒细胞和/或粘膜型和/或浆膜型肥大细胞介导的疾病。根据一示例的实施方案，所述变态反应性疾病是哮喘。

根据又一方面，本发明提供了用于预防和/或治疗变态反应性疾病的方法，所述方法包括为需要其的受治疗者施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物含有作为活性剂的具有选自SEQ ID NO：3至SEQ ID NO：14的氨基酸序列的肽或其类似物、化学衍生物或药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体，由此预防或治疗变态反应性疾病。根据某些实施方案，所述肽选自SEQ ID NO：3至14。根据某些实施方案，所述肽具有SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：11所列的氨基酸序列，其中羧基端任选为羧基端酰胺。

在某些实施方案中，所述变态反应性疾病因IgE或IgG介导的超敏反应(I型或III型)和/或FcεRI或FcγR诱导的分泌反应而产生。根据其他实施方案，所述变态反应性疾病由选自粘膜型肥大细胞、浆膜型肥大细胞和嗜碱性粒细胞的细胞类型介导。可使用本发明的药物组合物治疗和/或预防的变态反应性疾病的实例包括但不限于：变态反应性鼻炎，包括季节性鼻炎和鼻窦炎；肺部疾病，例如哮喘；变态反应性皮肤病，例如荨麻疹、血管性水肿、湿疹、特应性皮炎以及接触性皮炎；变态反应性结膜炎；胃肠变态反应，例如食物或药物引起的胃肠变态反应；痉挛；恶心；呕吐；腹泻；应激性肠病；眼变态反应；唇炎；外阴炎；眼葡萄膜炎；以及过敏反应。根据一示例的实施方案，所述变态反应性疾病是哮喘。

根据另一方面，本发明涉及用于预防和/或治疗由选自浆膜型肥大细胞和嗜碱性粒细胞的细胞类型介导的变态反应性疾病的方法，所述方法包括为需要其的受治疗者施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物含有作为活性剂的选自下列序列的肽，其类似物、化学衍生物和药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体：

(a)X1-Cys-Asn-R1-X4(SEQ ID NO：15至20)；

(b)X2-Lys-Val-Phe-Leu-Asp-X3(SEQ ID NO：21至23)；以及

(c)X5-Asp-Ser-Ser-Asn-Tyr-Ile-R7(SEQ ID NO：24)；

其中

X1选自氢、低级烷酰基、Cys、Asp-Cys以及Arg-Arg-Cys；

X2选自氢、低级烷酰基以及Lys；

X3选自

(i)Ala-Ala-Asn-R1-Ile-Thr-R2-Leu-R3-R4；

(ii)Cys-Cys-Asn-R1-Ile-Thr-R2-Leu-R3；以及

(iii)Cys-Cys-Asn-R1-Ile-Thr-R2-Leu-R3-R4-Gln-His-R5-R6；

X4选自Ile-Thr-R2-Leu-R3；和Ile-Thr-Arg-R7；

X5选自低级烷酰基和Leu；

R1选自芳香族氨基酸残基；

R2选自Glu和Lys；

R3选自带正电荷的氨基酸残基；

R4选自Arg和Glu；

R5选自Ala和Arg；

R6选自Arg和Lys；

R7选自羟基(OH)、Arg、Arg-NH2以及Agm(胍丁胺)。

在其他实施方案中，所述肽选自下列序列：

(a)Cys-Cys-Asn-Tyr-Ile-Thr-Glu-Leu-Arg(SEQ ID NO：25)；

(b)Asp-Cys-Cys-Asn-Tyr-Ile-Thr-Arg(SEQ ID NO：26)；

(c)Asp-Ser-Ser-Asn-Tyr-Ile-Arg，本文中被称为C3a11(SEQ IDNO：27)；

(d)Lys-Val-Phe-Leu-Asp-Cys-Cys-Asn-Tyr-Ile-Thr-Glu-Leu-Arg，本文中被称为C3a4(SEQ ID NO：28)；

(e)Lys-Lys-Val-Phe-Leu-Asp-Cys-Cys-Asn-Tyr-Ile-Thr-Glu-Leu-Arg-Arg-Gln-His-Ala-Arg，本文中被称为C3a5(SEQ ID NO：29)；

(f)Lys-Val-Phe-Leu-Asp-Ala-Ala-Asn-Tyr-Ile-Thr-Glu-Leu-Arg-Arg，本文中被称为C3a6(SEQ ID NO：30)；

(g)Arg-Arg-Cys-Cys-Asn-Tyr-Ile-Thr-Arg-Arg，本文中被称为C3a10(SEQ ID NO：31)；

(h)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)或(g)的类似物；

(i)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)或(h)的化学衍生物；以及

(g)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)或(i)的盐。

在某些实施方案中，所述肽具有SEQ ID NO：25至SEQ ID NO：31任一氨基酸序列，其中羧基端任选为羧基端酰胺。在具体实施方案中，所述肽选自下列序列：

(a)Cys-Cys-Asn-Tyr-Ile-Thr-Glu-Leu-Arg-NH2，本文中被称为C3a7(SEQ ID NO：25)；

(b)Asp-Cys-Cys-Asn-Tyr-Ile-Thr-Arg-NH2，本文中被称为C3a9(SEQID NO：26。

在某些实施方案中，使用含有选自SEQ ID NO：15至31的肽的药物组合物治疗和/或预防的变态反应性疾病，因IgE或IgG介导的超敏反应(I型或III型)和/或FcεRI或FcγR诱导的浆膜型肥大细胞和/或嗜碱性粒细胞的分泌反应而产生。可被治疗的变态反应性疾病的实例包括但不限于：胃肠变态反应，例如食物或药物引起的胃肠变态反应；痉挛；恶心；呕吐；腹泻以及外阴炎。应知道美国专利6,682,740公开了用于治疗其中涉及粘膜型肥大细胞的IgE介导的超敏反应(I型)引起的变态反应性疾病的方法，所述方法包括为需要其的受治疗者施用具有SEQ ID NO：15至31任一氨基酸序列的肽或其类似物或衍生物。本发明首次公开了用于治疗或预防其中涉及浆膜型肥大细胞和/或嗜碱性粒细胞的变态反应性疾病的方法，所述方法包括为需要其的受治疗者施用具有SEQ ID NO：15至31任一氨基酸序列的肽或其类似物或衍生物。

根据下文的附图、说明、实施例以及权利要求，本发明的这些和其他实施方案将更好理解。

附图简述

图1A-C描述了具有类似C3a伸展的序列的合成肽对IgE介导的RBL-2H3细胞的分泌反应的抑制能力。

图1A描述了不同浓度的C3a7或C3a9对IgE介导的颗粒酶、β-氨基己糖苷酶从RBL-2H3细胞的释放的影响。

图1B描述了250μg的C3a31、C3a32或C3a35对IgE介导的β-氨基己糖苷酶从RBL-2H3细胞的释放的影响。

图1C描述了C3a7和C3a9对RBL-2H3的TNF-α细胞因子分泌的影响。

图2A-B描述了C3a7和C3a9对Lyn、FcεRI的β亚单位和PI-3K的酪氨酸磷酸化的抑制。

图2A，RBL-2H3细胞的一般磷酸化模式。

图2B，Lyn、FcεRI的β链和PI-3K的磷酸化。使用抗-肌动蛋白(底行)对所有细胞裂解物进行免疫印迹，以证明负载了相同量的蛋白。

图3描述了肽C3a7和C3a9对肥大细胞中的游离的胞质Ca²⁺离子的抗原诱导性增加的抑制。

图4A-E描述了C3a与高亲和性IgE受体的β-链的相互作用。

图4A通过Western印迹使用FcεRIβ链的特异性抗体检测骨髓衍生的肥大细胞上的C3a和FcεRIβ链的共价复合物(泳道1)。在对照样品中(泳道2)，没有C3a存在。

图4B和4C显示了表面等离子体共振(SPR)测量结果：在SPR-传感芯片上固定表示大鼠(B)和人(C)FcεRIβ链的第1细胞外环的生物素酰化的肽，并实时跟踪它们与C3a的相互作用(结合和解离)，用作分析物。

图4D，使用Cy3-IgE和Cy5-C3a9荧光标记的RBL-2H3细胞的共焦显微镜影像。显示了典型细胞的中纬线切片(上行)和细胞顶部的三个光学切片(低行)的合成。

图4E，FITC-C3a9(供体)和与RBL-2H3细胞结合的Cy3-IgE(接纳体)之间荧光共振能量转移(FRET)效率的直方图。

图5描述了C3a31及其对照的逆序列肽C3a55对暴露于被动全身性过敏反应的小鼠的血组胺水平的影响。

图6描述了通过鼠哮喘模型的肺功能测量的C3a31与其对照的被称为C3a55的逆序列肽比较的保护能力。

本发明详细说明

本发明涉及基于人补体C3a的C端序列的合成肽，其类似物、化学衍生物以及药学上可接受的盐。所述肽可用于抑制IgE或IgG介导的超敏反应(I型和III型)和/或FcεRI或FcγR诱导的分泌反应，其中所述反应由粘膜型和浆膜型肥大细胞以及嗜碱性粒细胞介导。

本发明的肽衍生自和部分对应于下列SEQ ID NO：2所列的人补体C3a的55-64位氨基酸序列：Asp-Cys-Cys-Asn-Tyr-Ile-Thr-Glu-Leu-Arg，及其类似物、化学衍生物和药学上可接受的盐。本发明的肽的C端可为其游离的羧基形式，或优选地，它可被酰胺化以增加所述肽的稳定性，例如增加所述肽对生物体中酶裂解的抵抗力。羧基端还可以以增加其溶解性的方式进行修饰。

本发明的肽

本发明提供了可用于抑制FcεRI或FcγR诱导的分泌反应和/或IgE或IgG介导的肥大细胞和嗜碱性粒细胞的超敏反应(I型或III型)的新型肽。所述肥大细胞包括粘膜型和浆膜型肥大细胞。

根据一方面，本发明提供了衍生自下列通式I的氨基酸序列的人补体C3a的55-64位氨基酸序列(SEQ ID NO：2)的肽或其类似物、化学衍生物或药学可接受的盐：

X1-Asp-X2-Asn-Tyr-Ile-Thr-X3(SEQ ID NO：3至10)；

其中

X1选自氢、低级烷酰基、Cys、Ser、D-Ala以及D-Ala-D-Ala；

X2选自Ser-Ser和Val-Val；且

X3选自Arg、Arg-NH2、Glu-Cys-Arg以及Glu-Cys-Arg-NH2；

在某些实施方案中，本发明提供了选自下列序列的氨基酸序列：

(a)D-Ala-D-Ala-Asp-Ser-Ser-Asn-Tyr-Ile-Thr-Arg-Z(SEQ ID NO：7)；

(b)Ser-Asp-Ser-Ser-Asn-Tyr-Ile-Thr-Arg-Z(SEQ ID NO：11)；

(c)Asp-Val-Val-Asn-Tyr-Ile-Thr-Arg-Z(SEQ ID NO：12)；

(d)Cys-Asp-Ser-Ser-Asn-Tyr-Ile-Thr-Arg-Z(SEQ ID NO：13)；

(e)Ser-Asp-Ser-Ser-Asn-Tyr-Ile-Thr-Glu-Cys-Arg-Z(SEQ ID NO：14)；

(f)(a)、(b)、(c)、(d)或(e)的类似物；

(g)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)或(f)的化学衍生物；以及

(h)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)或(g)的盐，

其中Z表示末端羧酸、酰胺或醇。

术语D-Ala是指丙氨酸的D异构体构象。

在一个实施方案中，本发明的肽是本申请中鉴定为C3a32肽的SEQ IDNO：7序列：D-Ala-D-Ala-Asp-Ser-Ser-Asn-Tyr-Ile-Thr-Arg-NH2所列的肽，它是衍生自人补体C3a肽的53-62序列的10-mer肽，其中羧基端是羧基端酰胺。

在另一个实施方案中，本发明的肽是本申请中鉴定为C3a31肽的SEQID NO：11：Ser-Asp-Ser-Ser-Asn-Tyr-Ile-Thr-Arg-NH2所列的肽，它是衍生自序列人补体C3a肽的54-62序列的9-mer肽，其中羧基端是羧基端酰胺。

在其他实施方案中，本发明的肽包括本申请中被称为C3a14的肽、本申请中被称为C3a29的9-mer肽以及本申请中被称为C3a35的肽，其中羧基端是羧基酰胺，前述三种肽的序列为：

C3a14：Asp-Val-Val-Asn-Tyr-Ile-Thr-Arg-NH2(SEQ ID NO：12)；

C3a29：Cys-Asp-Ser-Ser-Asn-Tyr-Ile-Thr-Arg-NH2(SEQ ID NO：13)；

C3a35：Ser-Asp-Ser-Ser-Asn-Tyr-Ile-Thr-Glu-Cys-Arg-NH2(SEQ IDNO：14)。

本发明包括本发明的肽、片段、类似物以及化学衍生物的盐。如本文所使用，术语“盐”是指肽分子的羧基盐和氨基酸加成盐。羧基盐可通过本领域已知的方法生成，包括无机盐，例如铝、铵、钙、铜、铁、亚铁、锂、镁、锰、亚锰、钾、钠、锌等。衍生自药学上可接受的有机无毒性碱的盐包括如下物质的盐：伯胺、仲胺和叔胺；取代胺，包括天然存在的取代胺；环胺；以及碱离子交换树脂，例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N，N′-二苄乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、氨基乙醇、乙二胺、N-乙基-吗啉、N-乙基哌啶、还原葡糖胺、葡萄糖胺、组氨酸、哈胺、异丙胺、赖氨酸、泛影葡胺、吗啉、哌嗪、哌啶、多胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨基丁三醇等)。

酸加成盐包括无机酸的盐，所述无机酸例如乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、反丁烯二酸、葡萄糖酸、谷氨酸、氢溴酸、氢氯酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、双羟萘酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸。

本文所使用的术语“肽”意于包括通过肽键或非肽键相互连接的天然、非天然和/或化学修饰的氨基酸残基。在整个说明书和权利要求书中，如本领域公知的，通过一或三字母代码来表示氨基酸残基。本发明的化合物包括线形肽和环形肽及其衍生物和类似物。

本文所使用的“化学衍生物”是指含有通常不是肽分子一部分的另外的化学部分的肽，所述化学部分例如游离羧基的酯和酰胺，游离氨基的酰基和烷基衍生物，游离羟基的酯和醚。通过使肽的靶氨基酸残基与能够与所选的侧链或末端残基反应的有机衍生剂反应来将所述修饰引入所述肽中。

肽类似物包括使用天然或非天然氨基酸残基的氨基酸取代和/或添加。肽类似物包括肽模拟物。肽模拟物或“拟肽”是模拟肽生物活性但本质不完全是肽的分子。无论完全或部分是非肽，根据本发明的拟肽提供了近似该拟肽所基于的肽的基团的三维排布的化学部分的空间排布。由于该相似的活性位点结构，拟肽对生物系统具有影响，这类似于肽的生物活性。

所述肽的盐、类似物和化学衍生物优选用于改变所述肽的与例如稳定性、可溶性等有关的药学性质。

药物组合物

本发明还包括药物组合物，所述药物组合物含有本发明的肽，其类似物、化学衍生物或药学上可接受盐，以及药学上可接受的载体。

不希望与任何理论相联系，FcεRI-β亚单位可调节或调控FcεRI和FcγR的信号传导或激活(参见例如Dombrowicz等，Immunity 8：517-529，1998)。因此，本发明包括由肥大细胞和/或嗜碱性粒细胞的分泌反应引起的变态反应性疾病，如本领域已知，所述分泌反应由FcR亚型介导并由FcεRI-β亚单位调节。

除了其他考虑因素外，本发明的新型活性成分为肽、肽类似物、肽衍生物或其盐的事实要求所述制剂应适于递送这些类型的化合物。通常情况下，肽很少适于口服给药，这是由于其对胃酸或肠酶敏感，但现在公开了根据本发明的组合物可口服给药。本发明的药物组合物可通过任何合适的途径给药，例如局部、鼻内、皮下、肌肉内、静脉内、动脉内、关节内、损伤内或胃肠外。通过吸入给药包括在本发明的范围内。

作为活性成分的本发明的肽使用公知的药学上可接受的并与所述活性成分相容的稀释剂或赋形剂溶解、分散或混合。合适的载体或赋形剂为例如水、盐水、磷酸盐缓冲盐水(PBS)、葡萄糖、丙三醇、乙醇等及其组合形式。其他合适的载体为本领域技术人员公知的。另外，如果需要，所述组合物可含有较小量的助剂，例如湿润剂、乳化剂、pH缓冲剂、稳定剂，粘合剂(如聚乙烯吡咯酮、明胶、羟丙基甲基纤维素)、润滑剂、崩解剂(如淀粉羟乙酸钠、交联的聚乙烯吡咯酮、交联的羧甲基纤维素钠)，表面活性剂、增稠剂、抗氧化剂等。

本发明的药物组合物可通过本领域公知的方法制备，例如通过常规的混合、溶解、制粒、碾磨、磨粉、制糖衣、磨细、乳化、包胶、包埋或冻干方法。

根据本发明应用的药物组合物可通过常规方法使用一种或多种生理学上可接受的载体或赋形剂(包括助剂)来配制，它们可促进所述活性成分加工成可在药学上使用的制剂。合适的制剂取决于所选的给药途径。

对于通过吸入给药，根据本发明的药物组合物可以采用含有或不含有适当推进剂的加压包或喷雾器的气溶胶喷雾形式来递送，所述推进剂例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷或二氧化碳。在加压气溶胶的情况中，可通过提供递送测定量的阀来确定剂量单位。可配制含有所述肽和合适的粉末基质(如乳糖或淀粉)的粉末混合物的胶囊和药筒(如用于吸入器或吹入器的明胶)。

可口服使用的药物组合物，包括明胶制成的推合(push-fit)式胶囊以及明胶和增塑剂(如丙三醇或山梨糖醇)制成的软封装胶囊。推合式胶囊可含有与诸如乳糖的填充剂、诸如淀粉的粘合剂、诸如滑石或硬脂酸镁的润滑剂以及任选的稳定剂相混合的活性成分。在软胶囊中，活性化合物可溶解或悬浮于合适的液体如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇。另外，可添加稳定剂。所有用于口服给药的制剂可为适于所选给药途径的剂量。对于口腔给药，所述组合物可采用以常规方法配制的片剂或锭剂的形式。

锭剂核使用合适的包衣提供。为此目的，可使用浓缩的糖溶液，所述糖溶液可任选含有阿拉伯胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚羧乙烯胶、聚乙二醇、二氧化钛、漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。可添加染料或颜料至片剂或锭剂包衣以用于识别或表征活性化合物剂量的不同组合。

对于注射，可使用水溶液来配制本发明的化合物，优选使用生理学上相容的缓冲液如汉克氏溶液、林格氏溶液或生理盐水缓冲液。对于经粘膜给药，在制剂中使用适于穿透屏障的渗透剂。渗透剂如聚乙二醇为本领域公知。

胃肠外给药的药物组合物包括水溶液形式的活性成分的水溶液。另外，可将活性化合物的悬浮液配制为合适的含油注射悬浮液。合适的天然或合成的载体为本领域公知(Pillai等，Curr.Opin.Chem.Biol.5，447，2001)。任选地，所述悬浮液还可含有增加活性成分的可溶性的合适的稳定剂或试剂，以允许制备高度浓缩的溶液。可选地，所述活性成分可为粉末形式，在使用前使用合适的载体如无菌无热原水重溶。

本发明的药物组合物还可以使用例如常规的栓剂基质(例如可可脂或其他甘油酯)以直肠组合物形式配制，例如栓剂或保留灌肠剂。

适用于本发明的药物组合物包括其中以有效获得预期目的的量含有活性成分的组合物。更特别地，“治疗有效量”意思是可有效预防、延迟、减轻或缓解受治疗者的变态反应性疾病的症状的化合物的量。治疗有效量的确定在本领域技术人员的能力范围内。

本文所述的肽及其类似物、衍生物或盐的毒性和治疗功效可通过在细胞培养物或实验动物中的标准药学方法来确定，例如通过测定受试肽的IC50(提供50％抑制的浓度)。从这些细胞培养物测定和动物研究获得的数据可用于确定用于人的剂量范围。所述剂量可根据所应用的剂型和使用的给药途径而不同。各医师可根据患者的病症选择确切的制剂、给药途径和剂量(如Fingl等，1975，“The Pharmacological Basis of Therapeutics”中第1章第1页)。

根据待治疗的病症的严重性，给药还可以为缓释组合物的单次给药，疗程持续几天至几周或直到获得治愈或获得疾病状态的减弱。当然，待给药的组合物的量可取决于受治疗者的免疫状况和健康状况，疾病或病症的严重性，给药方法，或其他相关的因素。

制剂和给药方法意在说明而非限制。应理解，使用本文提供的教导内容，可容易设计其他合适的制剂和给药方式。

根据本发明的某些实施方案，C3a衍生的肽或类似物的治疗有效量为在约0.02mg/kg至约10mg/kg的范围的剂量。优选地，本发明的所述肽、衍生物或类似物的剂量在约0.05mg/kg至约2mg/kg的范围，更优选地，所述肽、衍生物或类似物的剂量在约0.1mg/kg至约1mg/kg的范围。应理解所述剂量可为递增剂量，使得可首先给予低剂量，接着给予较高剂量，直到获得合适的反应。另外，可以在治疗过程中以多次给药将所述组合物的剂量给药于受治疗者，其中在每次给药时给予所述剂量的一部分。

在某些实施方案中，本发明的肽及其衍生物和类似物作为经修饰的肽递送至细胞。在一个实施方案中，本发明的肽连接于细胞穿透肽(CPP)。在一个优选的实施方案中，CPP是含有果蝇触角足蛋白(ANTP)结构域或其片段的氨基酸序列。

治疗用途

本发明的肽及其类似物、化学衍生物和盐可用于制备用于预防性或治疗性治疗哺乳动物的变态反应性疾病的药物组合物或药剂。

本发明涉及用于预防和/或治疗由选自粘膜型肥大细胞、浆膜型肥大细胞和/或嗜碱性粒细胞的细胞类型介导的变态反应性疾病而不诱导过敏毒性反应的方法，所述方法包括为需要其的受治疗者施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物含有作为活性剂的选自SEQ ID NO：3至SEQ IDNO：8的肽。在某些实施方案中，所述疾病为由IgE或IgG介导的超敏反应(I型或III型)和/或FcεRI或FcγR诱导的分泌反应所导致的变态反应性疾病。

可通过本发明的药物组合物治疗的变态反应性疾病的实例包括但不限于：变态反应性鼻炎，包括季节性鼻炎和鼻窦炎；肺部疾病，例如支气管哮喘；变态反应性皮肤病，例如荨麻疹、血管性水肿、湿疹、特应性皮炎以及接触性皮炎；变态反应性结膜炎；胃肠变态反应，例如食物或药物引起的胃肠变态反应；痉挛；恶心；呕吐；腹泻；应激性肠病；眼变态反应，如眼葡萄膜炎；唇炎；外阴炎；以及过敏反应。本发明还可用于缓解或治疗暴露于毒素(包括蜂毒等)而诱导的症状。在某实施方案中，所述变态反应性疾病是哮喘。

本发明的申请人已经在美国专利6,682,740(其内容通过引用并入，如同完整描述于此)中公开了具有SEQ ID NO：15至SEQ ID NO：31所列的氨基酸序列的肽可用于抑制IgE介导的其中涉及粘膜型肥大细胞的超敏反应(I型)。这些肽现在显示可有效抑制IgE或IgG和/或FcεRI-或FcγR诱导的浆膜型肥大细胞和嗜碱性粒细胞的分泌反应。

因此，本发明还涉及治疗由选自浆膜型肥大细胞和嗜碱性粒细胞的细胞类型介导的变态反应性疾病的方法，所述方法包括为需要其的受治疗者施用治疗有效量的至少一种选自SEQ ID NO：15至SEQ ID NO：31的肽。

在一个实施方案中，用于治疗其中涉及浆膜型肥大细胞和/或嗜碱性粒细胞的变态反应性疾病的方法的肽是SEQ ID NO：25序列：

Cys-Cys-Asn-Tyr-Ile-Thr-Glu-Leu-Arg所列的本文被称为C3a7的肽，或其类似物、衍生物或盐，所述肽是衍生自人补体C3a肽的56-64序列的9-mer肽。

在又一个实施方案中，用于治疗其中涉及浆膜型肥大细胞和/或嗜碱性粒细胞的变态反应性疾病的方法的肽是SEQ ID NO：26序列：

Asp-Cys-Cys-Asn-Tyr-Ile-Thr-Arg所列的本文被称为C3a9的肽，或其类似物、衍生物或盐，所述肽是衍生自人补体肽C3a的55-62序列的g-mer肽。

在另一个实施方案中，用于治疗其中涉及浆膜型肥大细胞和/或嗜碱性粒细胞的变态反应性疾病的方法的肽是SEQ ID NO：27序列：

Asp-Ser-Ser-Asn-Tyr-Ile-Arg所列的本文被称为C3a11的肽，或其类似物、衍生物或盐，所述肽是衍生自人补体C3a肽的55-62序列的7-mer类似物。

在其他实施方案中，在用于治疗其中涉及浆膜型肥大细胞和/或嗜碱性粒细胞的变态反应性疾病的方法中使用的本发明的肽是下列序列的14-mer C3a4、20-mer C3a5、15-mer C3a6、10-mer C3a10或其类似物、衍生物或盐：

C3a4：Lys-Val-Phe-Leu-Asp-Cys-Cys-Asn-Tyr-Ile-Thr-Glu-Leu-Arg(SEQ ID NO：28)；

C3a5：

Lys-Lys-Val-Phe-Leu-Asp-Cys-Cys-Asn-Tyr-Ile-Thr-Glu-Leu-Arg-Arg-Gln-His-Ala-Arg(SEQ ID NO：29)；

C3a6：Lys-Val-Phe-Leu-Asp-Ala-Ala-Asn-Tyr-Ile-Thr-Glu-Leu-Arg-Arg(SEQ ID NO：30)；

C3a10：Arg-Arg-Cys-Cys-Asn-Tyr-Ile-Thr-Arg-Arg(SEQ ID NO：31)。

在某些优选的实施方案中，SEQ ID NO：25至SEQ ID NO：31任一肽的羧基端是羧基端酰胺。

对于花粉热的治疗，例如，喷雾剂或气溶胶形式的药物组合物可适于给药于需要的受治疗者以预防花粉季节中变态反应的发生。另外，已公知支气管粘膜表面是吸入的变应原的第一接触部位，因此，肥大细胞对于作为喷雾剂给药的本发明抑制性肽的应答非常有效。

与浆膜型肥大细胞激活有关的变态反应性疾病包括但不限于I型或III型速发型超敏反应，例如胃肠变态反应、痉挛、恶心、呕吐和腹泻。

本发明的肽作为药物组合物可作为单一疗法或联合其他治疗剂(例如其他的抗炎剂)给药。联合治疗可涉及作为在相同时间或不同时间给药的单剂量形式或多剂量形式的药物给药。

现将通过下列非限制性实施例来描述本发明。

实施例

材料与方法

试剂和细胞培养基。组织培养基和添加剂购买于Invitrogen LifeTechnologies或Gibco(Grand Island，NY)。Triton X-100，对硝基苯基-N-乙酰基-β-D-葡萄糖胺和抗-磷酸酪氨酸Ab PT-66来自Sigma(Sigma-Aldrich Kft，Hungary)。2，4-二硝基苯磺酸偶联的牛血清白蛋白(DNP11-BSA)，DNP包被的珠和鼠DNP特异性单克隆抗体A2 IgE由Arieh Licht先生(Rehovot，Israel)慷慨馈赠。辣根过氧化物酶(HRPO)偶联的抗小鼠IgG和HRP标记的抗兔IgG购自Sigma-Aldrich，抗LynAb来自BD Transduction Laboratories。增强化学发光试剂(ECL)购自AmershamBiosciences(UK)，用于SDS-凝胶电泳的材料从Bio-Rad(CA，USA)获得。Fluo-3AM染料从Calbiochem获得。C3a和C5a如先前所述(参见Erdei等，Int.Immunol.7：1433-1439，1995)分离。

合成肽和蛋白标记。肽合成通过使用“Boc chemistry”(Merifield等，Biochem.14：1385-1390，1964)的固相技术在MBHA树脂上进行。通过反相HPLC和质谱法纯化并鉴定肽。根据Amersham-Pharmacia(NJ，USA)提供的说明书(0.1M NaHCO3的标记方案)使用Cy5标记肽C3a9并使用Cy3标记A2IgE。

细胞。骨髓衍生的肥大细胞(BMMC)如Nagao等(Science 212：333-335，1981)所述由Balb/c小鼠制备。3周后，获得约95％纯度的肥大细胞群，通过流式细胞计量术测量，显示FcεRI和干细胞因子受体的高表达(c-kit)。

从Reuben Siraganian博士，NIH，Bethesda MD处获得的RBL-2H3细胞系在5％CO2 37℃的湿氛围中维持于添加5％FCS、2nM谷氨酰胺盒抗生素的杜贝科氏改良的基础培养基(DMEM)。对于实验，通过使用于DMEM中的10mM EDTA温育15min，在分离后收获细胞。

如先前所述(Kim等，J.Immol.162：4960-4965，1981)分离大鼠腹膜肥大细胞(RPMC)。如通过FcεRI表面表达的流式细胞计量监测所评估的，肥大细胞的制备品为约95％纯度。浆膜型肥大细胞的特异性激活剂化合物48/80引起所分离的大鼠腹膜肥大细胞的总β-氨基己糖苷酶含量的约50％的释放。

肥大细胞的分泌反应。如先前所述(参见Erdei等，Int.Immunol.7：1433-1439，1995)，通过测量分泌的颗粒酶β-氨基己糖苷酶的活性而监测肥大细胞应答FcεRI聚集的刺激的介质分泌。为研究C3a及其衍生物对抗原诱导的反应的作用，将使用饱和浓度的DNP特异性A2 IgE致敏的肥大细胞在室温下与一定浓度范围的不同肽预温育5min，然后将其暴露于次佳抗原浓度(5ng/ml)。

通过ELISA测量TNF-α。使用大鼠TNF-α ELISA试剂盒(R&D systems，UK)测定在无或存在所述肽的情况中RBL-2H3应答FcεRI聚集的TNF-α分泌。

免疫沉淀和Western印迹。在10cm培养皿中接种肥大细胞(7×10⁶/培养皿)，并在37℃于DMEM中使用A2IgE饱和过夜。洗涤之后，使用肽将它们处理5min，并通过在37℃与5ng/ml DNP111-BSA温育2min使FcεRI聚集。通过每培养皿500μl裂解缓冲剂(1％Triton X-100，50mMHEPES，100mM NaF，10mM EDTA，2mM原钒酸钠，10％丙三醇，10mM焦磷酸钠，蛋白酶抑制剂鸡尾酒1∶200，pH7.4)终止该反应。破碎细胞，并将除去细胞核后的上清液(post nuclear supernatants)的蛋白含量调至等值，然后通过PT-66磷酸酪氨酸特异性抗体包被的珠沉淀(每个样品10μl珠)。使用含有2-巯基乙醇的样品缓冲剂稀释蛋白，并使用SDS-PAGE分离，电转移至硝酸纤维素膜上，并使用指定的抗体显影，以及通过ECL检测。

监测游离的胞质Ca²⁺离子浓度。为0.5ml RPMI-1640培养基中的共5×10⁶IgE致敏的细胞加载5μM Fluo-3/AM指示剂和30μg/ml PluronicF-127，37℃持续30分钟。洗涤之后，将细胞(5×10⁵)与200μM的C3a7或C3a9肽在37℃温育5min。在开始流式细胞计量记录之后20秒钟，将5ng/ml抗原(DNP11-BSA)添加至细胞，并然后以Becton-DickinsonFACSCalibur流式细胞仪的时间分辨模式监测游离钙离子浓度的变化。使用CELLQuest软件(Becton-Dickinson，Franklin Lakes，NJ，USA)进行数据获取和分析。

激光扫描共聚焦显微镜。收获RBL-2H3细胞，并与5μM的Cy3偶联的IgE或同时还使用200μM的Cy5偶联的C3a9肽在40℃温育25min。洗涤之后，使用2％多聚甲醛在冰上固定细胞20min，然后固定于使用0.1％聚左旋赖氨酸预涂布的盖玻片上。在Zeiss LSM5激光扫描共焦显微镜的绿色(由543nm He-Ne激光器激发)和红色(由632nm He-Ne激光器激发)光通道中分析Cy3标记的IgE和Cy5肽的荧光信号。在光学上将细胞切成0.5μm厚度的512×512像素的切片。如先前所述(Vereb等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97：6013-6018，2000)进行作为共定位量度的荧光强度之间互相关系数的评估。

流式细胞计量荧光共振能量转移(FRET)测量。测量均与RBL-2H3细胞表面结合的FITC标记的C3a9肽(供体)和Cy3标记的IgE(接纳体)之间的FRET，并使用Becton Dickinson FACSStar Plus流式细胞仪进行评估。在FITC-C3a9肽为150μM(即与功能研究中应用的那些相似的剂量)时，使用饱和浓度的Cy3-IgE对RBL-2H3细胞进行标记。

C3a与BMMC的共价交联。洗涤BMMC并在室温下与C3a(每15-20×10⁶细胞/样品50μg/ml，于PBS中)温育10min。在室温下与5mM交联剂双(磺基琥珀酰亚胺基)-辛二酸酯(BS3，PIERCE，IL，USA)再温育20min后，洗涤细胞并将其裂解。C3a的特异性的多克隆兔抗体(Behringwerke AG，Germany)用于免疫沉淀。通过Jean Pierre Kinet(HarvardUniversity，Boston，USA)慷慨提供的FcεRIβ链特异性抗体进行Western印迹。使用HRPO偶联的山羊抗小鼠IgG(DAKO，Frank Diagnosztika Kft，Hungary)作为第二抗体。通过ECL进行检测。

表面等离子体共振(SPR)测量。使用2000型BIACORE仪器(Pharmacia，Sweden)进行SPR测量。合成并应用具有下列序列的肽：分别为(1)大鼠和人FcεRIβ链的第1细胞外环：STLQTSDFDDEVLLL YRAGYPF(SEQ IDNO：39)和SVLDISHIEGDIFSSFKAGY(SEQ ID NO：40)；以及(2)大鼠和人FcεRI β链的第2细胞外环：NNSAYMNYCKDITEDDGCFVTS(SEQ IDNO：41)和KSLAYIHIHSCQKFFETKCFMAS(SEQ ID NO：42)。

对所有肽在其N端氨基处进行生物素酰化，并以范围在30和60共振单位(RU)之间的低密度连接于链霉亲和素包被的传感芯片(BIACORE，Sweden)。以20μl/min的流速注射范围在10.5nM至656nM的5个不同浓度的溶于蒸馏水中的C3a和C5a溶液。各测量之间使用0.1M HCl使芯片表面再生。使用BIAEVALUATION3.0软件分析数据。所观察到的结合速率常数(kob)描绘为C3a浓度的函数，每个曲线的斜度作为特定的结合速率常数(kon)，而y截距作为解离速率常数(koff)，然后将Kb计算为koff/kon。

被动全身性过敏反应。使用300-400μl阿佛丁麻醉小鼠(Balb/c)，并使用于200μl PBS中的3μg IgE类DNP特异性单克隆抗体(SPE-7，Sigma)通过眶后(或尾静脉)注射。24h后，使用300-400μl阿佛丁麻醉小鼠，并将其暴露于放置于鼻孔的于PBS中的约100μl指定肽(抑制剂，SEQ ID NO：11，SEQ ID NO：35的对照逆肽或SEQ ID NO：36的GAKDGNEYI-COOH肽)的溶液。然后通过眶后(尾静脉)注射抗原(DNP衍生的人血清白蛋白，HSA，100μg于200μl PBS中)或仅注射PBS。1.5min之后，通过实施颈脱位和心脏穿刺处死小鼠。现将肝素冲洗的注射器用于抽吸。在台式离心机(tabletop)中以8000rpm于4℃旋转血样品10min。通过竞争性ALP测定的免疫技术方案测定组胺。

所述肽对肺功能的抑制性作用。首先，通过抗原(Ag)卵白蛋白的腹腔(ip)注射对小鼠(Balb/c，雌性，8周龄)进行致敏。之后，每间隔1周，通过喷雾器在有机玻璃腔中分散的相同Ag的气溶胶吸入攻击小鼠4次，每次约20min。在第28天，首先使用溶于0.1M NaHCO₃和如上所述分散的受试肽的气溶胶处理小鼠。因此，动物吸入气溶胶约10至20min。吸入之后，立即通过吸入(如上)致敏性抗原(于PBS中的5％OVA)20min攻击动物。在该处理结束时，立即使用体积描记法测试小鼠在清醒的自由活动状态下的肺功能。

通过小鼠中增强的呼气间歇(enhanced pause)来监测支气管收缩程度及其与气道阻力、阻抗以及胸膜腔内压的相关性。通过气管插管、注射0.8ml冰预冷的盐水(x2)及随后抽出支气管肺泡灌洗(BAL)液体，从这些小鼠获得BAL样品。在这些试验之后，使用美索比妥(1mg/ml)全身麻醉处死小鼠。打开它们的胸壁，抽取血液，使用冷PBS灌洗肺，并进行细胞学和组织学检查。

实施例1：衍生自人C3a的肽

表1，如下所示，提供了合成的肽、其氨基酸序列、质谱数据以及名称代码的表格。肽C3a1、C3a3、C3a55以及GAK肽(SEQ ID NO：33至SEQID NO：36)用作对照肽。使用本文上述的“Boc chemistry”合成列于表1中的肽。另外，将所有肽进一步制备为酰胺化的肽。应注意肽合成方法不意于限制。

实施例2：所述肽对粘膜型肥大细胞的分泌反应的抑制能力

在早期实验中，本申请的发明人已经鉴定了负责抑制RBL-2H3细胞的IgE介导的刺激的C3a序列基序(Erdei等，Immunol.Lett.68：79-82，1999)。结果已经明确证明C3a(65-77位残基)的C端序列(已知在发挥补体肽的过敏毒性和化学活性中是至关重要的)与所述抑制无关。然而，涉及包含56-64位残基(CCNYITELR，被称为C3a7)的上游序列。现合成该序列的几种类似物，其中辛肽DCCNYITR(被称为C3a9)显示可有效抑制FcεRI介导的RBL-2H3系的粘膜型肥大细胞的分泌(图1)。将IgE致敏的细胞与所述肽温育5min，然后，使用次佳的抗原剂量(5ng/ml)刺激，接着测量分泌的颗粒酶β-氨基己糖苷酶的活性。图1A显示了这些肽对这些细胞反应发挥的剂量依赖性抑制。

被称为C3a31、C3a32以及C3a35的肽对粘膜型肥大细胞分泌反应的作用示于图1B。如图1B所示，发现C3a31和C3a32肽抑制了IgE介导的RBL-2H3的β-氨基己糖苷酶分泌。检测了C3a11和C3a13肽，它们显示抑制RBL-2H3细胞的IgE依赖性脱颗粒。

使用骨髓衍生的肥大细胞(BMMC)进行相似的实验。发现C3a可抑制IgE介导的这些粘膜型肥大细胞的分泌反应(表2)，而C5a没有作用。如表2所示，C3a7和C3a9肽对BMMC分泌反应的抑制性作用与对RBL-2H3细胞发挥的抑制作用相当。序列DVSNYITR的对照肽对任何系统均无作用。

表2.C3a和C3a衍生的肽对IgE介导的RBL-2H3、BMMC以及大鼠腹膜肥大细胞(RPMC)的脱颗粒的抑制作用(IC50，μM)

对于脱颗粒测定，使用了次佳的抗原剂量。

^*C3a，当添加至非致敏细胞时，仅刺激浆膜型RPMC，但不刺激粘膜型RBL-2H3和BMM细胞。

实施例3：所述肽对浆膜型肥大细胞的分泌反应的抑制能力

尽管粘膜型肥大细胞对肽能刺激无应答，但长久以来已知浆膜型肥大细胞由阳离子促分泌剂刺激。过敏毒性肽C3a和C5a通过与其各自的浆膜型肥大细胞表达的受体结合而启动细胞分泌反应。为了研究所述肽对该肥大细胞类型的作用，使用RPMC。如所期望的，这些细胞对C5a和C3a均不应答(表2)。然而，当将肽C3a7或C3a9添加至IgE致敏的RPMC并在5min后使用次佳的抗原剂量刺激时，脱颗粒受到抑制(表2)。

实施例4：肽C3a7或C3a9抑制FcεRI聚集诱导的TNF-α分泌

通过检测TNF-α分泌来测定所述肽对肥大细胞晚期反应的作用。为此目的，在无或存在肽C3a7或C3a9的情况下刺激RBL-2H3之后24h，取上清液，并通过ELISA检测分泌的细胞因子浓度。如图1C所示，两种肽均剂量依赖性抑制该炎性细胞因子的释放。当单独添加时，所述肽无作用。

实施例5：抑制性肽抑制Lyn、PI-3K以及FcεRI的β亚单位的酪氨酸磷酸化

图2A显示当RBL-2H3细胞在抗原刺激之前暴露于200μM C3a7(泳道3)或C3a9(泳道4)时，FcεRI聚集诱导的几种细胞内蛋白的蛋白酪氨酸磷酸化增强显著减少。基于该结果和早期的发现(图1)，研究了FcεRI邻近事件。已知这些包括src家族PTK Lyn对FcεRIβ和γ亚单位的ITAM的磷酸化。如图2B所示，当细胞在存在C3a7或C3a9的情况下受抗原刺激时，Lyn的磷酸化显著减少，而对照肽无作用。还检测了FcεRIβ链的磷酸化，发现相对于受对照肽处理的细胞的磷酸化减少(图2B)。还发现当暴露于肽C3a7和C3a9时，PI-3K(调节磷脂酰肌醇酯磷酸化水平并因此是关键的偶联元件的酶)的酪氨酸磷酸化减少。这些肽自身不会引起RBL-2H3细胞的酪氨酸磷酸化蛋白模式的任何改变。

还使用大鼠粘膜型RBL-2H3系研究了肽C3a31对FcεRI偶联级联的抑制性作用。这些实验的结果已显示肽C3a31抑制了蛋白酪氨酸激酶Lyn和FcεRIβ链的磷酸化。1min之后观察到对Lyn磷酸化的抑制，3min之后观察到对PAG磷酸化(PAG在src家族激酶的调节中具有重要作用)的抑制。然而，还显示3min之后C3a31增强Lyn磷酸化。另外，5min之后，C3a31抑制Dok-1磷酸化，但8min之后无作用。它还抑制PLCγ-2的磷酸化。

实施例6：所述肽抑制抗原诱导的[Ca²⁺]_i的瞬时增加

由于钙离子的瞬时增加是抗原激活的细胞中诱导的最早期事件之一，检测了C3a7和C3a9对RBL-2H3细胞中的该过程的作用。如图3所示，当肽C3a7或C3a9在抗原攻击之前5min添加至细胞时，该过程受到显著抑制。指定为自细胞外介质的离子内流的[Ca²⁺]_i初始快速增加和随后持续增加的水平受到抑制。在对照中，在所述肽单独添加的情况，无作用。

实施例7：C3a结合FcεRIβ链

C3a与BMMC的共价交联。由于在粘膜型肥大细胞上不能检测到C3a受体，所以检验了所述肽通过与不同细胞膜组分(可能是1型Fcε受体)相互作用而发挥其抑制性作用的可能性。在早期实验中，本发明的发明人观察到C3a没有干扰IgE和FcεRI之间的相互作用，因此，推定它不与四聚体FcεRI复合物的α链相互作用。由于早期已报道带有ITAM的β链作为FcεRI反应的放大剂而起作用，检测了C3a与BMMC上的该膜蛋白的相互作用。将细胞与C3a温育，然后添加共价交联剂BS³试剂。然后，进行细胞裂解并使用多克隆的C3a特异性抗体进行免疫沉淀。通过SDS-PAGE分离蛋白样品并通过Western印迹使用FcεRIβ链特异性抗体进行分析。如图4A所示，仅观察到单一蛋白(泳道1)，而在对照样品中未分辨出任何蛋白(泳道2)。由于共价交联的复合物对各组分的特异性反应，即C3a在一侧，β链在另一侧，在泳道1中出现的具有45kDa质量的唯一条带为C3a和β链(36kDa)的共价复合物(9kDa)。这些结果与我们早期使用RBL-2H3细胞获得的结果完全一致(Erdei等，1999，同上)。

C3a和FcεRIβ链之间的相互作用的表面等离子体共振(SPR)测量。为进一步研究C3a与FcεRI的β链的相互作用，使用具有人和大鼠四次跨膜(tetraspan)分子的第一和第二细胞外环序列的固定化寡肽进行SPR测量。人C3a和作为对照的C5a用作分析物。如图4B和C所示，C3a分别以250nM和520nM的Kd值与人和大鼠蛋白的第一细胞外环结合。没有检测到C3a和细胞膜蛋白的第二细胞外环之间的相互作用。C5a与FcεRIβ链的任何检测的序列不发生反应。

实施例8：C3a9与FcεRI结合的IgE共定位于完整的RBL-2H3细胞上

为了观察完整细胞上的C3a衍生的肽和结合FcεRI的IgE之间的空间关系的详细情况，应用Cy3偶联的IgE和Cy5偶联的C3a9肽对RBL-2H3进行共聚焦激光扫描显微镜测量。对于Cy3和Cy5发射信号之间的互相关(互相关系数：≥0.54)的逐像素分析表明，结合细胞的肽与结合FcεRIα亚单位的IgE高度共定位。这与所有其他发现一致，强烈支持了所述肽的相互作用位点在肥大细胞的多亚单位FcεRI受体复合物中(图4D)。另外，还通过共聚集显微镜术检测缺少β链的人单核细胞，未发现可检测的肽结合。

上述结果进一步得到表明纳米级邻接的FRET测量结果的支持。流式细胞计量共振能转移(FCET)效率直方图(图4E)显示平均24％的FRET效率，明确表明FITC-C3a9肽和结合至RBL-2H3细胞表面的Cy3-IgE之间的分子邻接。

实施例9：被动全身性过敏反应的抑制

检测了C3a衍生的肽对小鼠被动全身性过敏反应的作用。如图5所示，发现C3a31酰胺减轻被动全身性过敏反应的症状，如测定小鼠血液中的组胺水平所监测。被称为C3a55酰胺的逆肽无效(图5)。使用具有SEQ IDNO：36的氨基酸序列GAKDGNEYI-COOH的非相关肽处理对照组，然后注射抗原DNP-HSA。

实施例10：哮喘模型中C3a衍生的肽的抑制能力

如实验部分所描述，在暴露于由起始抗原(卵白蛋白)注射的致敏作用然后通过暴露于该抗原的气溶胶而被攻击四次的小鼠(或非暴露的小鼠，即首次用于实验的小鼠)中测定肺功能。最后将小鼠暴露于仅任一缓冲剂的气溶胶，或暴露于含有肽C3a31的缓冲剂或暴露于含有被称为C3a55的逆肽的缓冲剂，然后受抗原的最终(通常第5次)攻击。图6A-D描述了肽C3a31的保护能力。图6A描述了首次用于实验的小鼠的肺气道阻力的各数值；图6B描述了哮喘小鼠的肺气道阻力的各数值；图6C描述了在Ag(卵白蛋白)气溶胶攻击之前用肽C3a31处理的“哮喘”小鼠的肺气道阻力的各数值；图6D描述了在Ag(卵白蛋白)气溶胶攻击之前用肽C3a55处理的“哮喘”小鼠的肺气道阻力的各数值；图6E显示了图6A-D中所示结果的平均值和标准差。这些结果明确地显示了C3a31肽可有效减轻哮喘动物模型的抗原诱导的症状。

表3提供了存在于通过与经受肺功能分析的那些小鼠相同的方案处理的小鼠的支气管肺泡灌洗物(BAL)中细胞的分析结果。如表3所示，使用肽C3a31处理显著影响BAL中检测到的细胞类型，主要减少嗜中性粒细胞的数量。

表3：暴露于所述肽的气溶胶对支气管肺泡灌洗物(BAL)中的细胞分布的影响

	首次用于实验的小鼠	卵白蛋白(OVA)	卵白蛋白+肽(OVA+Pep)(1)
	首次用于实验的小鼠	卵白蛋白(OVA)	卵白蛋白+肽(OVA+Pep)(1)	嗜中性粒细胞	1.7％	19％	13％
嗜曙红细胞	0	25％	4％	嗜中性粒细胞	1.7％	19％	13％
嗜曙红细胞	0	25％	4％	淋巴细胞	1.3％	8％	81％
巨噬细胞	97％	47％	1％	淋巴细胞	1.3％	8％	81％
巨噬细胞	97％	47％	1％	肥大细胞	0	0	4％

本发明的结果明确确定C3a衍生的肽抑制变态反应相关症状的显著能力。这在检查粘膜型和浆膜型肥大细胞的细胞培养物中以及在显示哮喘等症状的相似显著抑制的动物体内模型中观察到。

本领域技术人员应理解，本发明不受上文特别所示和所述的那些内容限制。而本发明的范围由下文权利要求所限定。

序列表

<110>耶达研究与发展有限公司

<120>补体C3a衍生的肽及其用途

<130>耶达/059 PCT

<150>US 60/702,627

<151>2005-07-27

<150>US 60/776,668

<151>2006-02-27

<160>42

<170>PatentIn 3.3版本

<210>1

<211>77

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<400>1

Ser Val Gln Leu Thr Glu Lys Arg Met Asp Lys Val Gly Lys Tyr Pro

1 5 10 15

Lys Glu Leu Arg Lys Cys Cys Glu Asp Gly Met Arg Glu Asn Pro Met

20 25 30

Arg Phe Ser Cys Gln Arg Arg Thr Arg Phe Ile Ser Leu Gly Glu Ala

35 40 45

Cys Lys Lys Val Phe Leu Asp Cys Cys Asn Tyr Ile Thr Glu Leu Arg

50 55 60

Arg Gln His Ala Arg Ala Ser His Leu Gly Leu Ala Arg

65 70 75

<210>2

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<213>人工序列

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<223>合成肽

<400>2

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<223>合成肽

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<220>

<223>合成肽

<220>

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<222>(1)..(1)

<223>Xaa可存在或不存在。当Xaa存在时，它是Cys、Ser或D-Ala。

当Xaa不存在时，2位上的Asp可使用低级烷酰基修饰

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Xaa Asp Ser Ser Asn Tyr Ile Thr Glu Cys Arg

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<220>

<223>合成肽

<220>

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<223>Xaa可存在或不存在。当Xaa存在时，它是Cys、Ser或D-Ala。

当Xaa不存在时，2位上的Asp可使用低级烷酰基修饰

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Xaa Asp Val Val Asn Tyr Ile Thr Arg

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<223>合成肽

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当Xaa不存在时，2位上的Asp可使用低级烷酰基修饰

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Xaa Asp Val Val Asn Tyr Ile Thr Glu Cys Arg

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<223>合成肽

<220>

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<223>合成肽

<220>

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<223>合成肽

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<222>(2)..(2)

<223>Xaa＝D-Ala

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Xaa Xaa Asp Val Val Asn Tyr Ile Thr Arg

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<220>

<223>合成肽

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<223>Xaa＝D-Ala

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<220>

<223>合成肽

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<220>

<223>合成肽

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Cys Asp Ser Ser Asn Tyr Ile Thr Arg

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<220>

<223>合成肽

<220>

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当Xaa不存在时，2位上的Asp可使用低级烷酰基修饰

<220>

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<222>(9)..(9)

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<400>15

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<211>8

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(1)

<223>Xaa可存在或不存在。当Xaa存在时，它是Cys、Ser或D-Ala。

当Xaa不存在时，2位上的Asp可使用低级烷酰基修饰

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(4)..(4)

<223>Xaa＝芳香族氨基酸残基

<220>

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<222>(8)..(8)

<223>Xaa可存在或不存在。当Xaa存在时，它是Arg、

Arg-NH2或Agm

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<223>合成肽

<220>

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<222>(5)..(5)

<223>Xaa是芳香族氨基酸残基

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(8)..(8)

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<220>

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<222>(10)..(10)

<223>Xaa＝带正电荷的氨基酸残基

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Asp Cys Cys Asn Xaa Ile Thr Xaa Leu Xaa

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<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(5)..(5)

<223>Xaa是芳香族氨基酸残基

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(9)..(9)

<223>Xaa可存在或不存在。当Xaa存在时，它是Arg、

Arg-NH2或Agm

<400>18

Asp Cys Cys Asn Xaa Ile Thr Arg Xaa

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<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<220>

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<223>Xaa是芳香族氨基酸残基

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<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<220>

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<222>(6)..(6)

<223>Xaa是芳香族氨基酸残基

<220>

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<222>(10)..(10)

<223>Xaa可存在或不存在。当存在时，它是Arg、

Arg-NH2或Agm

<400>20

Arg Arg Cys Cys Asn Xaa Ile Thr Arg Xaa

1 5 10

<210>21

<211>16

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(1)

<223>Xaa可存在或不存在。当Xaa存在时，它是Lys。

当Xaa不存在时，2位上的Lys可使用低级烷酰基修饰

<220>

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<222>(10)..(10)

<223>Xaa是芳香族氨基酸残基

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<223>Xaa是带正电荷的氨基酸残基

<220>

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<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(1)

<223>Xaa可存在或不存在。当Xaa存在时，它是Lys。

当Xaa不存在时，2位上的Lys可使用低级烷酰基修饰

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(10)..(10)

<223>Xaa是芳香族氨基酸残基

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(13)..(13)

<223>Xaa＝Glu或Lys

<220>

<221>MISC_FEATURE

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<223>Xaa是带正电荷的氨基酸残基

<400>22

Xaa Lys Val Phe Leu Asp Cys Cys Asn Xaa Ile Thr Xaa Leu Xaa

1 5 10 15

<210>23

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<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(1)

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当Xaa不存在时，2位上的Lys可使用低级烷酰基修饰

<220>

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<222>(10)..(10)

<223>Xaa是芳香族氨基酸残基

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(13)..(13)

<223>Xaa＝Glu或Lys

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(15)..(15)

<223>Xaa是带正电荷的氨基酸残基

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(16)..(16)

<223>Xaa＝Arg或Glu

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(19)..(19)

<223>Xaa＝Ala或Arg

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(20)..(20)

<223>Xaa＝Arg或Lys

<400>23

Xaa Lys Val Phe Leu Asp Cys Cys Asn Xaa Ile Thr Xaa Leu Xaa Xaa

1 5 10 15

Gln His Xaa Xaa

20

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<211>8

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(1)

<223>Xaa可存在或不存在。当Xaa存在时，它是Leu。

当1位上的Xaa不存在时，2位上的Asp可使用低级烷酰基修饰

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(8)..(8)

<223>Xaa可存在或不存在。当Xaa存在是，它是Arg、Arg-NH2或Agm

<400>24

Xaa Asp Ser Ser Asn Tyr Ile Xaa

1 5

<210>25

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<400>25

Cys Cys Asn Tyr Ile Thr Glu Leu Arg

1 5

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<211>8

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<400>26

Asp Cys Cys Asn Tyr Ile Thr Arg

1 5

<210>27

<211>7

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<400>27

Asp Ser Ser Asn Tyr Ile Arg

1 5

<210>28

<211>14

<212>PRT

<213>人工序列

<400>28

Lys Val Phe Leu Asp Cys Cys Asn Tyr Ile Thr Glu Leu Arg

1 5 10

<210>29

<211>20

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<400>29

Lys Lys Val Phe Leu Asp Cys Cys Asn Tyr Ile Thr Glu Leu Arg Arg

1 5 10 15

Gln His Ala Arg

20

<210>30

<211>15

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<400>30

Lys Val Phe Leu Asp Ala Ala Asn Tyr Ile Thr Glu Leu Arg Arg

1 5 10 15

<210>31

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<400>31

Arg Arg Cys Cys Asn Tyr Ile Thr Arg Arg

1 5 10

<210>32

<211>8

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<400>32

Asp Ser Ser Asn Tyr Ile Thr Arg

1 5

<210>33

<211>20

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<400>33

Ser Val Gln Leu Thr Glu Lys Arg Met Asp Lys Val Gly Lys Tyr Pro

1 5 10 15

Lys Glu Leu Arg

20

<210>34

<211>13

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<400>34

Arg Gln His Ala Arg Ala Ser His Leu Gly Leu Ala Arg

1 5 10

<210>35

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<400>35

Arg Thr Ile Tyr Asn Ser Ser Asp Ser

1 5

<210>36

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<400>36

Gly Ala Lys Asp Gly Asn Glu Tyr Ile

1 5

<210>37

<211>5

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>人工序列

<400>37

Cys Cys Asn Tyr Gly

1 5

<210>38

<211>8

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<400>38

Asp Val Ser Asn Tyr Ile Thr Arg

1 5

<210>39

<211>22

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<400>39

Ser Thr Leu Gln Thr Ser Asp Phe Asp Asp Glu Val Leu Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Arg Ala Gly Tyr Pro Phe

20

<210>40

<211>20

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<400>40

Ser Val Leu Asp Ile Ser His Ile Glu Gly Asp Ile Phe Ser Ser Phe

1 5 10 15

Lys Ala Gly Tyr

20

<210>41

<211>22

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<400>41

Asn Asn Ser Ala Tyr Met Asn Tyr Cys Lys Asp Ile Thr Glu Asp Asp

1 5 10 15

Gly Cys Phe Val Thr Ser

20

<210>42

<211>23

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<400>42

Lys Ser Leu Ala Tyr Ile His Ile His Ser Cys Gln Lys Phe Phe Glu

1 5 10 15

Thr Lys Cys Phe Met Ala Ser

20

Claims

1.一种衍生自人补体C3a的55-64位氨基酸序列(SEQ ID NO：2)的肽或其类似物、化学衍生物或药学可接受的盐，所述肽具有下列通式I的氨基酸序列：

X1-Asp-X2-Asn-Tyr-Ile-Thr-X3(SEQ ID NO：3至10)，

其中

X1选自氢、低级烷酰基、Cys、Ser、D-Ala以及D-Ala-D-Ala；

X2选自Ser-Ser和Val-Val；且

X3选自Arg、Arg-NH2、Glu-Cys-Arg以及Glu-Cys-Arg-NH2；

条件是：当X1是氢或低级烷酰基且X3是Arg或Arg-NH2时，X2是Val-Val。

2.根据权利要求1的肽，其中所述分泌反应由选自下述组的刺激所诱导：(i)IgE或IgG介导的触发，和(ii)FcεRI或FcγR聚集。

3.根据权利要求1的肽，所述肽具有选自下述组的氨基酸序列：

(a)D-Ala-D-Ala-Asp-Ser-Ser-Asn-Tyr-Ile-Thr-Arg-Z(SEQ ID NO：7)；

(b)Ser-Asp-Ser-Ser-Asn-Tyr-Ile-Thr-Arg-Z(SEQ ID NO：11)；

(c)Asp-Val-Val-Asn-Tyr-Ile-Thr-Arg-Z(SEQ ID NO：12)；

(d)Cys-Asp-Ser-Ser-Asn-Tyr-Ile-Thr-Arg-Z(SEQ ID NO：13)；

(e)Ser-Asp-Ser-Ser-Asn-Tyr-Ile-Thr-Glu-Cys-Arg-Z(SEQ ID NO：14)；

(f)(a)、(b)、(c)、(d)或(e)的类似物；

(g)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)或(f)的化学衍生物；以及

(h)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)或(g)的盐，

其中Z表示端羧酸、酰胺或醇。

4.根据权利要求1至3任一项的肽，其中所述Z是羧基端酰胺。

5.根据权利要求4的肽，所述肽具有SEQ ID NO：7所列的氨基酸序列，其中Z是羧基端酰胺。

6.根据权利要求4的肽，所述肽具有SEQ ID NO：11所列的氨基酸序列，其中Z是羧基端酰胺。

7.一种药物组合物，所述药物组合物含有：作为活性剂的根据权利要求1至6任一项的肽，以及药学上可接受的载体。

8.根据权利要求7的药物组合物，其中所述肽具有选自SEQ ID NO：3至SEQ ID NO：14及其类似物或化学衍生物的氨基酸序列。

9.根据权利要求8的药物组合物，其中所述肽具有SEQ ID NO：7所列的氨基酸序列，任选具有羧基端酰胺。

10.根据权利要求8的药物组合物，其中所述肽具有SEQ ID NO：11所列的氨基酸序列，任选具有羧基端酰胺。

11.一种用于预防和/或治疗变态反应性疾病的方法，所述方法包括为需要其的受治疗者施用含有治疗有效量的根据权利要求1至6任一项的肽以及药学上可接受的载体的药物组合物，从而预防或治疗所述变态反应性疾病。

12.根据权利要求11的方法，其中所述肽具有选自SEQ ID NO：3至SEQ ID NO：14的氨基酸序列，任选具有羧基端酰胺。

13.根据权利要求12的方法，其中所述肽具有SEQ ID NO：7所列的氨基酸序列，任选具有羧基端酰胺。

14.根据权利要求12的方法，其中所述肽具有SEQ ID NO：11所列的氨基酸序列，任选具有羧基端酰胺。

15.根据权利要求11的方法，其中所述变态反应性疾病由IgE或IgG介导的超敏反应(I型或III型)和/或FcεRI和/或FcγR诱导的分泌反应所导致。

16.根据权利要求11的方法，其中所述变态反应性疾病由选自粘膜型肥大细胞、浆膜型肥大细胞以及嗜碱性粒细胞的细胞类型介导。

17.根据权利要求16的方法，其中所述变态反应性疾病选自变态反应性鼻炎、肺部疾病、变态反应性皮肤病、变态反应性结膜炎、胃肠变态反应、痉挛、恶心、呕吐、腹泻、应激性肠病、眼变态反应、唇炎、外阴炎以及过敏反应。

18.根据权利要求17的方法，其中所述肺部疾病为哮喘。

19.一种用于预防和/或治疗变态反应性疾病的方法，所述变态反应性疾病由选自浆膜型肥大细胞和嗜碱性粒细胞的细胞类型介导，所述方法包括为需要其的受治疗者施用含有治疗有效量的肽及其类似物、化学衍生物和药学上可接受的盐和药学上可接受的载体的药物组合物，所述肽选自下列序列：

(a)X1-Cys-Asn-R1-X4(SEQ ID NO：15至20)；

(b)X2-Lys-Val-Phe-Leu-Asp-X3(SEQ ID NO：21至23)；以及

(c)X5-Asp-Ser-Ser-Asn-Tyr-Ile-R7(SEQ ID NO：24)；

其中

X1选自氢、低级烷酰基、Cys、Asp-Cys以及Arg-Arg-Cys；

X2选自氢、低级烷酰基以及Lys；

X3选自

(i)Ala-Ala-Asn-R1-Ile-Thr-R2-Leu-R3-R4；

(ii)Cys-Cys-Asn-R1-Ile-Thr-R2-Leu-R3；以及

(iii)Cys-Cys-Asn-R1-Ile-Thr-R2-Leu-R3-R4-Gln-His-R5-R6；

X4选自(i)Ile-Thr-R2-Leu-R3；和(ii)Ile-Thr-Arg-R7；

X5选自低级烷酰基和Leu；

R1选自芳香族氨基酸残基；

R2选自Glu和Lys；

R3选自带正电荷的氨基酸残基；

R4选自Arg和Glu；

R5选自Ala和Arg；

R6选自Arg和Lys；

R7选自羟基(OH)、Arg、Arg-NH2以及Agm(胍丁胺)。

20.根据权利要求19的方法，其中所述肽选自下列序列：

(a)Cys-Cys-Asn-Tyr-Ile-Thr-Glu-Leu-Arg(SEQ ID NO：25)；

(b)Asp-Cys-Cys-Asn-Tyr-Ile-Thr-Arg(SEQ ID NO：26)；

(c)Asp-Ser-Ser-Asn-Tyr-Ile-Arg(SEQ ID NO：27)；

(d)Lys-Val-Phe-Leu-Asp-Cys-Cys-Asn-Tyr-Ile-Thr-Glu-Leu-Arg(SEQID NO：28)；

(e)Lys-Lys-Val-Phe-Leu-Asp-Cys-Cys-Asn-Tyr-Ile-Thr-Glu-Leu-Arg-Arg-Gln-His-Ala-Arg(SEQ ID NO：29)；

(h)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)或(g)的类似物；

(i)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)或(h)的化学衍生物；

(g)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)或(i)的盐；

以及药学上可接受的载体。

21.根据权利要求19和20任一项的方法，其中所述肽由SEQ IDNO：25所列的氨基酸序列组成，任选具有羧基端酰胺。

22.根据权利要求19至20任一项的方法，其中所述肽由SEQ IDNO：26所列的氨基酸序列组成，任选具有羧基端酰胺。

23.根据权利要求19的方法，其中所述变态反应性疾病由IgE或IgG介导的超敏反应(I型或III型)和/或FcεRI和/或FcγR诱导的分泌反应所导致。

24.根据权利要求19的方法，其中所述变态反应性疾病选自胃肠变态反应、痉挛、恶心、呕吐、腹泻、应激性肠疾病。