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CN109957535A - 简单芽胞杆菌、利用其制备的微生物菌剂、生物肥及应用 - Google Patents

简单芽胞杆菌、利用其制备的微生物菌剂、生物肥及应用 Download PDF

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CN109957535A CN201910378531.7A CN201910378531A CN109957535A CN 109957535 A CN109957535 A CN 109957535A CN 201910378531 A CN201910378531 A CN 201910378531A CN 109957535 A CN109957535 A CN 109957535A
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Abstract

本发明提供了一株具有高耐盐、多功能修复连作、盐碱等障碍土壤的广谱功能菌——简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458，该菌株具有较高的溶磷，固氮，产嗜铁素、ACCD以及细胞分裂素的能力，耐盐度达到10％，对腐霉菌(Pythium)、镰刀菌(Fusarium)、弯孢菌(Curvularia lunata)、小斑菌(Bipolaria maydis)和疫霉菌(Phytophthora)均有较强的拮抗作用，适于生产具有防病、促生、抗盐碱等多功能的生物肥料，应用于中重度盐碱地粮食生产、牧草栽培，以及多年连作设施蔬菜生产上，其促进出苗，促进根系发育，防控根部病害，提高作物产量和品质等效果显著，可减少化肥农药的使用，应用前景广阔。

Description

简单芽胞杆菌、利用其制备的微生物菌剂、生物肥及应用
技术领域
本发明涉及微生物菌种及其应用，特别是指一种简单芽胞杆菌、利用其制备的微生物菌剂、生物肥及应用。
背景技术
随着社会的发展和人口的增加，对耕地资源的需求越来越多。我国有盐碱地9913万公顷，其中环渤海70万公顷，是重要的潜在耕地资源。盐碱地分为轻度盐碱地、中度盐碱地和重盐碱地。轻度盐碱地pH值为7.1—8.5，含盐量<0.3％，通常植物出苗率在70％—80％；中度盐碱地pH值为8.5—9.5，含盐量0.3％-0.6％；重度盐碱地pH值为9.5以上，含盐量≥0.6％，出苗率低于50％。因不合理耕作和施肥用药，菜田普遍次生盐渍化，发生土壤退化。盐碱地和退化土壤生产性能低下，导致病害加剧，产量、品质下降，影响产业竞争力和消费者健康。利用根际促生微生物提高盐碱地作物耐盐促生和退化土壤作物产量的生物改良法具有投资少，见效快，效益高的特点，已经成为国内外的研究热点。随着生物技术的发展，选用具耐盐碱、抗病促生的微生物制剂，通过改良土壤生态和提高植物的耐盐性，可实现中重度盐碱地、连作障碍菜田等退化土壤的再利用，是一条经济而有效的途径。
在自然界中由于生态环境的选择压力，如盐碱、干旱等，生活着许多耐受或适应上述极端环境的植物以及与之共生的微生物，在土壤、植物根际或植物组织内存在大量的微生物，其中具有防病、促生或提高植物抗逆功能的菌株，在提高肥料利用率，减少化学农药的使用等方面应用前景广阔，因此而成为研发热点，但目前开发应用的菌株大多具有植物种类或地域的偏好或特异性，应用范围受到一定限制，从而提高了开发成本，给实际应用造成了诸多不便。因此，筛选获得具有广谱特性的微生物菌株成为研发方向。
芽胞杆菌抗逆性强，存活期长，遍布于各类土壤、植物根际和植物组织内部。该类微生物的一些菌株因具有促生、拮抗等功能被用于制作成微生物肥料或微生物农药，但主要应用于常规土壤生产上，适用于中重度盐碱地，特别是适于多种障碍土壤改良的优良芽胞杆菌还很少，亟待加强相应研发工作，挖掘应用潜力。
申请人于申请号为201611208244.4的发明专利申请中公开了一种分离自海兴县盐碱土壤中的解淀粉芽孢杆菌ZCM18，该菌种的保藏编号为CGMCC No.12959，该菌种具有广谱促生抗逆作用，耐盐≤5％，可定殖于多种植物根际，能分泌吲哚乙酸、玉米素、多肽抗菌素、脯氨酸等促进植物生长、抑制病原真菌和提高植物抗逆、抗病性的物质。
发明内容
本发明的目的之一是提供一种具有高耐盐、多功能修复连作、盐碱等障碍土壤的广谱功能的简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458。
本发明中的菌种从海兴县中重度盐碱土壤(0.68％，pH＝8.39)苦菜根际分离得到。该菌株于2018年9月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，分类名为简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)，保藏编号为CGMCC No.16458，保藏机构的地址位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所(简称CGMCC)。
该菌种的菌落形态及生理生化特性如下：
该菌株菌落圆形，白色不透明，菌落光滑平整，边缘整齐，中间微微隆起，较湿润，通过革兰氏染色显微观察，为革兰氏阳性、杆状。无溶血反应。通过菌株形态学特征，生理生化特征和16S rRNA序列分析将该菌株鉴定为简单芽胞杆菌。
该菌株耐盐度为10％。
在自然条件下，该菌株可定殖于多种植物根际，能溶磷，固氮，产嗜铁素、ACCD以及细胞分裂素等促进植物生长、抑制病原真菌和提高植物抗逆能力的物质。
该菌株的培养：使用LB培养基(酵母粉5g，胰蛋白胨10g，NaCl5g，琼脂15g，蒸馏水1000mL)。
该菌株的扩培方法：
1、斜面菌种培养：将该菌株接入试管斜面，培养温度为30℃-35℃，pH值＝6.8-7.2，培养时间2-3天，用无菌水振荡30分钟后，10倍稀释后用血球计数板计数，菌数≥109cfu/mL。
2、摇瓶培养：按照0.5％-2％的接种量将斜面菌种接种到装有培养基的三角瓶中，在温度为30℃-35℃、pH值＝6.8-7.2、转速200转/分钟的条件下培养36-60小时，使菌数达到109cfu/mL。
上述培养基为：胰蛋白胨5.0g；蛋白胨1.0g；葡萄糖2.0g；K2HPO4 0.5g；MgSO40.5g；蒸馏水1000mL；pH＝6.8-7.2。固体培养基再加入琼脂粉15g。
3、发酵：按照10％-30％的三角瓶装液量，放入灭菌后的发酵培养基，按照接种量为1％-5％、温度30℃-35℃的条件培养24-48小时；或按发酵罐容积的40％-80％投入灭菌后的发酵培养基，按照种子液的接种量为2％-10％、温度为30℃-35℃，通气量0.4-0.6m3/h，搅拌速度150-200转/分钟，溶氧70％-75％，消泡剂(硅类，食用豆油)消泡，培养36-48小时，使菌数达到1010cfu/mL。
上述发酵培养基包含以下组分：氮源(豆饼粉，胰蛋白胨，蛋白胨，牛肉膏，酵母粉)5g-15g，碳源(玉米淀粉，葡萄糖，糖蜜，麸皮，米糠)5g-15g，MgSO4 1g-5g，KH2PO4 1g-5g，K2HPO4 1g-5g，水1000mL，pH＝6.8-7.2。
本发明的目的之二是提供含有简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCCNo.16458的微生物菌剂。
本发明的目的之三是提供含有简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCCNo.16458的生物肥料。
本发明的目的之四是提供含有简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCCNo.16458，含有其的发酵液、微生物菌剂或生物肥料在促进植物生长中的应用，所述的植物为粮食作物，经济作物，牧草。其中经济作物特别是指果蔬及蔬菜。
本发明的目的之五是提供含有简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCCNo.16458，含有其的发酵液、微生物菌剂或生物肥料在防控植物病害中的应用，所述植物病害的病原菌为腐霉菌、镰刀菌、弯孢菌、小斑菌和疫霉菌，所述的植物为粮食作物，经济作物，牧草。其中经济作物特别是指果蔬及蔬菜。
本发明的目的之六是提供含有简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCCNo.16458，含有其的发酵液、微生物菌剂或生物肥料在提高植物耐盐的应用，所述的植物适宜生长环境盐浓度提高0.3％，所述的植物为粮食作物，经济作物，牧草。其中经济作物特别是指果蔬及蔬菜。
所述的提高植物耐盐能力是指植物适宜生长环境的盐浓度提高0.3％。
具体地，在中度盐碱地上小麦的发芽率能恢复到85％以上。
具体地，将所述的简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458的菌悬液或含有其的发酵液喷洒在有机肥颗粒上制备成最终活菌数为2×107-2×109cfu/g的生物肥，用于调控中重度盐碱地粮食作物、牧草，连作障碍农田经济作物的生长。
本发明所取得的实质性特点和显著的技术进步在于：
本发明采用多级筛选方法获得了一株可广泛应用于中重度盐碱地、连作障碍菜田等退化土壤，多种植物的简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458，该菌株耐盐度为10％，经申请人实验证实，该菌种具有较高的溶磷、固氮、产嗜铁素、ACCD以及细胞分裂素的能力，对腐霉菌(Pythium)、镰刀菌(Fusarium)、弯孢菌(Curvularia lunata)、小斑菌(Bipolaria maydis)和疫霉菌(Phytophthora)均有较强的拮抗作用，适于具有防病、促生、抗盐碱等多功能生物肥料的生产，应用于中重度盐碱地粮食作物、牧草，连作障碍农田等经济作物的生产上，其促进出苗、根系发育、防控根部病害、提高作物产量等效果显著，可减少化肥农药的使用，应用前景广阔。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明做进一步描述，但不作为对本发明的限定，本发明的保护范围以权利要求记载的内容为准，任何依据本发明的说明书所做出的等效手段替换，均不脱离本发明的保护范围。
实施例1
简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458的形态和鉴定
1、菌株的形态学特征
在LB平板上形成圆形、扁平、湿润有粘性的菌落，LB液体培养基中混浊生长。经革兰氏染色，镜下可见两端钝圆、长短不一、革兰阳性杆菌，有大于菌体的次末端芽胞。
2、菌株生理生化特性
实验证实该菌株可以在含盐量为10％的LB平板上生长。经实验发现，该菌株具备溶磷，固氮，产嗜铁素、ACCD以及细胞分裂素的能力。ACCD酶活达到7.27mM/mg/h。
3、菌株鉴定与保藏
通过16S rDNA序列分析、综合菌体形态、生理生化特性和16S rDNA基因序列，可知本申请中的菌种为简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)。该菌株于2016年9月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(该保藏机构简称CGMCC，位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏编号为CGMCC No.16458，分类名为简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)。
实施例2
含有简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458生物肥制备
将甘油管保存的简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458菌液接种到LB固体培养基上进行活化，30℃培养2天，将单菌落接种到种子培养基中，30℃，200转/分钟，培养小时到对数后期时，按质量比为1％的接种量再进行转接培养一次后获得的菌液即为种子液。以此种子液进行发酵。按发酵罐容积的60％投入灭菌后的发酵培养基，按照种子液的接种量为5％、温度为30℃，通气量0.5m3/h，搅拌速度200转/分钟，溶氧75％，食用豆油消泡，培养45小时，使菌数达到1010cfu/mL。
发酵培养基包含以下组分：氮源(豆饼粉，胰蛋白胨，蛋白胨，牛肉膏，酵母粉)5g-15g，碳源(玉米淀粉，葡萄糖，糖蜜，麸皮，米糠)5g-15g；MgSO41g-5g；KH2PO41g-5g；K2HPO41g-5g；水1000mL；pH＝6.8-7.2。
将此发酵菌液喷洒在有机肥颗粒上，可制备成活菌含量大于2×107cfu/g的生物肥。
实施例3
简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458抗腐霉菌、镰刀菌、弯孢菌、小斑菌和疫霉菌试验
LB平皿中心接种供试真菌菌块，于距平皿中心2.5cm处对称放置4张直径6mm的小滤纸片，每张纸片上滴加10μL简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458菌液，每个处理重复3次，30℃培养；对照为LB平皿中心接种供试真菌菌块，于距平皿中心2.5cm处对称放置4张直径6mm的小滤纸片，每张纸片上滴加10μL无菌水，每个处理重复3次，30℃培养。待对照组真菌长满平板或长至纸片时取出平皿，测量真菌直径，计算抑制率。
抑制率(％)＝〔1-(试验组真菌直径/对照组真菌直径)〕×100
简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458对腐霉菌、镰刀菌、弯孢菌、小斑病菌和疫霉菌均有一定程度的抑制作用(具体结果见表1)。由表一可知，简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458对病原真菌的抑菌率相对较高，简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458对腐霉菌、镰刀菌、弯孢菌、小斑病菌和疫霉菌的抑制率分别为43.91％，68.61％，54.43％，60.47％和47.89％。
表1简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458拮抗病原真菌的抑制结果
实施例4
简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458提高盐环境下小麦种子发芽率试验
将简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458培养物离心收集到的菌体用无菌水洗3次后，重悬到无菌水中，获得简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCCNo.16458菌悬液(1×108cfu/mL)。将小麦种子(冀麦325发芽率≥99％)进行表面灭菌后铺在无菌滤纸平板中，加入5mL液体，组1为无菌水，组2为菌悬液，组3为含0.3％NaCl无菌水，组4为含0.3％NaCl菌悬液，组5为含0.6％NaCl无菌水，组6为含0.6％NaCl菌悬液，组7为含0.9％NaCl无菌水，组8为含0.9％NaCl菌悬液，菌悬液终浓度为105cfu/mL，黑暗培养2d后统计发芽率(具体结果见表2)。
表2发芽率统计表(单位：％)
由表2可知，简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458可提高小麦发芽率，在0％NaCl、0.3％NaCl、0.6％NaCl、0.9％NaCl环境下，小麦种子的发芽率分别提高了1.15％(P＜0.05)，7.18％(P＜0.01)，11.48％(P＜0.01)和17.35％(P＜0.01)。且随着盐浓度升高，效果越显著。在0.3％NaCl浓度下，在简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCCNo.16458的作用下，小麦的出芽率与0％NaCl无差异，说明简单芽胞杆菌(Bacillussimplex)CGMCC No.16458可使适宜植物生长的盐浓度提高0.3％，同时简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458可以使小麦在0.9％NaCl环境下的发芽率保持在80％以上，在盐碱地改良利用方面具有应用前景。
实施例5
简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458的发酵产品在中度盐碱地苏丹草上的应用
本实施例使用的是实施例2制得的生物肥。以同样方法制得对照生物肥——解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)CGMCC No.12959菌株生物肥。田间试验的地点设在河北省沧州市海兴县，土壤含盐度为0.4％。本试验设4个处理，4次重复，采用长方形，完全随机区组设计，小区面积10.0米×3.0米＝30.0平方米。
试验处理：
处理1：简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458生物肥+常规施肥减量20％
处理2：解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)CGMCC No.12959生物肥+常规施肥减量20％
处理3：常规施肥
处理4：空白对照
其中供试肥料为按实施例2中生产的分别含简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458和解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)CGMCC No.12959且含菌数量为2×108cfu/g的生物肥(其中氮磷钾含量5.2％)。常规施肥为施用化学复混肥(氮磷钾含量42％)每亩40kg，其它田间管理措施相同。
施用方法：
处理1：简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458生物肥65千克/亩+底施复混肥(42％，NPK＝22:10:10)32千克/亩；
处理2：解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)CGMCC No.12959生物肥65千克/亩+底施复混肥(42％，NPK＝22:10:10)32千克/亩；
处理3：底施复混肥(42％，NPK＝22:10:10)40千克/亩；
处理4：不施肥。
播种后45天进行刈割，统一留茬高度为离地30公分。收割前直接观察可见，处理1地块的苏丹草长势最佳，表现为根多茎粗，草群平均高度最高，处理1、处理2和处理3均比处理4长势好，叶色深绿，茎粗。处理4叶片最小、茎最细，叶色浅绿，生长势最弱(具体结果见表3)。
表3小区生物量统计表(产量单位：千克)
由表3可知，试验地苏丹草在减施复混肥20％基础上，施用简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458生物有机肥比常规施肥分别亩增产83.93公斤，增产率为16.80％，增产效果极显著；比施用解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)CGMCC No.12959生物有机肥亩增产41.13公斤，增产率为7.58％，增产效果极显著；比空白对照亩增产116.17公斤，增产率为24.85％，增产效果极显著。
实施例6
简单芽胞杆菌提高玉米耐盐试验
按实施例2方法制得的简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458和解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)CGMCC No.12959生物肥料，以含0.4％NaCl基质为栽培基质，进行玉米(郑单958，发芽率≥98％)发芽试验。每个处理360个穴，重复4次，处理设置如下：
处理1：栽培基质；
处理2：栽培基质+解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)CGMCCNo.12959生物肥料，比例9：1；
处理3：栽培基质+简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458生物肥料，比例9：1(体积比，下同)；
处理：将大小均匀的玉米种子置于穴内，每穴1粒，定量浇透水。在日光温室培养。5天开始隔天统计出芽率。
结果见表4。在含0.4％NaCl基质为栽培基质，对照发芽时间略晚，且发芽率只有40％左右，处理2和处理3在第6天开始出芽，最终发芽率分别为95.8％和87.9％(表4)。可见，简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458生物肥料处理显著提高了玉米植株对高盐环境的耐受性，优于解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)CGMCCNo.12959处理。
表4不同处理发芽率比较(％)
第5天 第6天 第7天 第8天
处理1 0 0 0.2 0.2
处理2 0 85.9 87.8 87.9
处理3 0 93.0 95.8 95.8
实施例7
简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458发酵产品在0.2％盐碱土盆栽玉米上的试验
按照实施例2的方法将简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458(处理1)和解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)CGMCC No.12959(处理2)进行菌液发酵，最终获得的发酵液菌数为1×1010cfu/mL。盆栽实验采用的基质为0.2％盐碱土。申请人将上述发酵液接种到小麦种子(科农2011，发芽率≥98)周围，每颗小麦种子5μL。对照组接种无菌水到小麦种子周围，每颗小麦种子5μL。重复10次。光照室培养25天后统计小麦的株高，地上干重，根干重。最终施用解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)CGMCCNo.12959发酵液的株高，地上干重，根干重分别比对照组增加4.45％(P＜0.05)，14.29％(P＜0.05)，16.67％(P＜0.05)；施用简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458发酵液的株高，地上干重，根干重分别比对照组增加9.33％(P＜0.01)，21.43％(P＜0.01)，25.00％(P＜0.01)(具体结果见表5)。两者的株高，地上干重，根干重均差异显著。
表5简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458
在0.2％盐碱土盆栽小麦上的试验
处理 平均株高(cm) 平均地上干重(g) 平均根干重(g)
对照组 37.50 0.14 0.12
处理1 41.00 0.17 0.15
处理2 39.17 0.16 0.14
处理1较对照提高(％) 9.33％ 21.43％ 25.00％
处理2较对照提高(％) 4.45％ 14.29％ 16.67％
实施例8
含有简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458的生物肥在盐碱地小麦田间试验
采用实施例2的方法，分别制得含有简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCCNo.16458(处理1)和解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)CGMCC No.12959(处理2)的生物肥，活菌含量1×109cfu/g。田间试验地点设在河北省沧州市海兴县盐碱地，土壤含盐量0.24％。施肥方式：旋耕1遍，撒施复混肥(42％)18kg/亩，再旋耕1遍。采用常用的施肥一体播种机，在对照处理肥槽里放2kg/亩的复混肥(42％)，播种，处理组肥槽里放16kg/亩的生物肥(5.2％)，播种。最终统计小麦(轮选103，发芽率≥82％)的根干重和产量。最终处理2的根干重和产量分别比对照组增加12.78％和12.05％，差异极显著；处理1的根干重和产量分别比对照组增加18.52％和22.83％，差异极显著(具体结果见表6)。处理2和处理1的根干重无显著差异，产量显著差异。
表6含有简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458的生物肥在盐碱地小麦应用效果
处理 平均根干重(g) 平均产量(kg/亩)
对照 8.53 198.52
处理1 10.11 243.84
处理2 9.62 222.45
处理1较对照提高(％) 18.52 22.83
处理2较对照提高(％) 12.78 12.05
实施例9
含有简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458的生物肥在连作障碍土壤茄子上的盆栽试验
采用实施例2的方法，分别制得含有简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCCNo.16458(处理1)和解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)CGMCC No.12959(处理2)的生物肥，活菌含量2×109cfu/g。利用15年连作黄瓜大棚土壤进行茄子盆栽试验，对照组使用空白载体，试验组使用处理1或处理2生物肥，挑选一致的茄子苗，每个处理12盆，重复4次。25℃光照室培养40天后进行统计。最终ZCM18的平均叶片数，茎粗，根干重，株干重分别比对照组增加9.14％(P＞0.05)，33.51％(P＜0.01)，36.17％(P＜0.01)，41.04％(P＜0.01)；P10的平均叶片数，茎粗，根干重，株干重分别比对照组增加13.64％(P＜0.05)，42.33％(P＜0.01)，46.81％(P＜0.01)，48.11％(P＜0.01)(具体结果见表7)。处理1和处理2的平均叶片数，茎粗，株干重差异显著。
表7含有简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458的生物肥在15年连作黄瓜大棚土壤盆栽茄子试验效果
处理 平均叶片数 茎粗(mm) 根干重(g) 株干重(g)
对照 7.33 5.67 0.47 4.24
处理1 8.33 8.07 0.69 6.28
处理2 8.00 7.57 0.64 5.98
处理1较对照提高(％) 13.64 42.33 46.81 48.11
处理2较对照提高(％) 9.14 33.51 36.17 41.04
实施例10
简单芽胞杆菌生物肥在连作障碍土壤黄瓜田间试验
采用实施例2的方法，分别制得含有简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCCNo.16458(处理1)和解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)CGMCC No.12959(处理2)的生物肥，活菌含量5×108cfu/g。利用20年连作黄瓜大棚土壤进行黄瓜田间试验，春茬施肥方式：旋耕1遍，撒施复混肥(42％)40kg/亩，再旋耕1遍，找平，起垄，每亩地3500株黄瓜。对照组穴施空白载体(160kg/亩)，处理组穴施生物肥(160kg/亩)，挑选一致的黄瓜苗进行种植。最终统计黄瓜春茬总产量。最终处理2和处理1的黄瓜产量分别比对照组增加13.47％(P＜0.01)和21.35％(P＜0.01)(表8)。处理2和处理1的黄瓜产量差异显著。
表8含有简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458的生物肥在20年连作黄瓜大棚土壤上的应用效果
处理 产量(kg)
对照 13885.00
处理1 16850.00
处理2 15755.00
处理1较对照提高(％) 21.35
处理2较对照提高(％) 13.47

Claims (8)

1.简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458。
2.含有权利要求1所述的简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458的微生物菌剂。
3.含有权利要求1所述的简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCC No.16458的生物肥料。
4.含有权利要求1-3中任一项所述的简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCCNo.16458，含有其的发酵液、微生物菌剂或生物肥料在促进植物生长中的应用，所述的植物为粮食作物，经济作物，牧草。
5.含有权利要求1-3中任一项所述的简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCCNo.16458，含有其的发酵液、微生物菌剂或生物肥料在防控植物病害中的应用，所述植物病害的病原菌为腐霉菌、镰刀菌、弯孢菌、小斑菌和疫霉菌，所述的植物为粮食作物，经济作物，牧草。
6.含有权利要求1-3中任一项所述的简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCCNo.16458，含有其的发酵液、微生物菌剂或生物肥料在提高植物耐盐的应用，所述的植物适宜生长环境盐浓度提高0.3％，所述的植物为粮食作物，经济作物，牧草。
7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于所述的含有简单芽胞杆菌(Bacillussimplex)CGMCC No.16458的发酵液是将简单芽胞杆菌(Bacillus simplex)CGMCCNo.16458接种于灭菌后且含有碳源、氮源及无机盐的培养基中培养后获得，培养基中的氮源选用豆饼粉，胰蛋白胨，蛋白胨，牛肉膏，酵母粉中的一种或其结合，碳源选用麸皮，米糠，玉米淀粉、葡萄糖、糖蜜中的一种或其结合。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于所述的培养条件如下：温度为30℃-35℃，通气量0.4-0.6m3/h，搅拌速度150-200转/分钟，溶氧70％-75％，培养周期36-48小时。
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