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CN108473973A - 包含负载蛋白的外泌体的组合物以及制备和递送该组合物的方法 - Google Patents

包含负载蛋白的外泌体的组合物以及制备和递送该组合物的方法 Download PDF

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崔暻善
柳承旭
任男彬
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Abstract

本发明涉及用于大量产生包含货物蛋白的外泌体的方法、用于制备外泌体的载体、通过该方法制备的包含货物蛋白质的外泌体以及通过使用由此制备的外泌体将货物蛋白负载到胞质溶胶中的方法。根据本发明提供的用于制备包含货物蛋白的外泌体的方法，可以高产率产生负载货物蛋白的外泌体，使得使用该外泌体其可以广泛应用于疾病治疗。

Description

包含负载蛋白的外泌体的组合物以及制备和递送该组合物的 方法
技术领域
相关申请的交叉引用
本申请要求于2016年9月30日提交的韩国专利申请No.10-2016-0126335，2016年9月30日提交的韩国专利申请No.10-2016-0126921，2016年9月30日提交的韩国专利申请No.10-2016-0126961，2016年10月4日提交的韩国专利申请No.10-2016-0127486，2016年10月13日提交的韩国专利申请No.10-2016-0132616，2017年2月10日提交的韩国专利申请No.10-2017-0018637的优先权，其每一个申请的内容通过引用并入本文。
本发明涉及包含负载蛋白的外泌体的组合物、使用光特异性结合蛋白来制备负载货物蛋白的外泌体的方法以及使用由此制备的外泌体将货物蛋白递送到胞质溶胶的方法。
背景技术
人体由约200种100万亿个细胞组成，其中生理活性由各种蛋白作用调节以维持生命。
细胞被由磷脂组成的双层结构膜包围，这阻止了外来物质进入细胞，迄今为止开发的大多数蛋白药物不能通过细胞膜进入细胞，而可以作用于细胞外部，或作用于细胞膜上的受体以将信号递送至细胞内来显示生理效果。
胞质溶胶具有大量互相作用以调节生理活性的蛋白。因此，一旦能够将蛋白药物递送进细胞，即进入胞质溶胶，就能够更有效地控制细胞活性。
最近，一直在积极进行研究以建立一种方法将货物蛋白经细胞膜直接递送进细胞中。当制备和给药货物蛋白和蛋白转导结构域(PTD)(通过细胞膜的肽)的重组蛋白时，其可以穿过细胞膜进入胞质溶胶(图1)。PTD的实例为HIV-1TAT、HSV VP22、Antp、dfTAT和Hph-1。通过结合PTDs和货物蛋白制备的融合蛋白作为重组蛋白产生，并且此时需要分离过程。然而，这个过程存在以下问题：蛋白重折叠不适当、活性降低、蛋白非特异性转移、导致体内免疫反应的风险大、成本高和产率低。
与各种纳米颗粒缀合的货物蛋白可以通过内吞作用穿过细胞膜进入胞质溶胶(图2)。此时，纳米颗粒的实例为金NP、脂质体NP、磁性NP和聚合NP。纳米颗粒与货物蛋白的分离主要发生在细胞中的溶酶体中，因此货物蛋白在溶酶体内分解而失去活性。或者在胞质溶胶中纳米颗粒难以与货物蛋白分离并且纳米颗粒的毒性可能是另一个问题。
外泌体(exosome)是具有50～200nm大小的膜结构的小囊泡，外泌体被分泌出细胞外，其包含用于细胞间信号转导的蛋白、DNA和RNA。
外泌体首次发现于通过在红细胞成熟后期除去细胞内蛋白而仅留下红细胞中的血红蛋白的过程中。根据电子显微镜下的观察，证实了外泌体不是直接由质膜分离的，而是从细胞内的特定区域(称为多泡体(MVB))排出细胞外的。即，当MVB与质膜融合时，这样的称为外泌体的囊泡排出细胞外(图3)。
尚未清楚公布外泌体产生的分子机制，但已知各种免疫细胞，包括B淋巴细胞、T淋巴细胞、树突状细胞、巨核细胞、巨噬细胞，干细胞和肿瘤细胞，在其存活时产生并分泌外泌体。
外泌体包含多种细胞内蛋白、DNA和RNA。从细胞中分泌出的包含在这些外泌体中的物质可以通过融合或内吞作用重新导入其他细胞，并作为细胞间的信使。通过分析从细胞中分泌出的包括在外泌体中的这些物质，就可以诊断出特定疾病。
外泌体还包括各种类型的microRNA。已经报道了通过检测其存在或不存在及其丰度来诊断疾病的方法(KR 10-2010-0127768A)。国际专利公布NO WO2009-015357A描述了通过检测源于癌症患者的样品(血液、唾液、眼泪等)中的外泌体的来预测和诊断特定疾病方法。特别地，分析了从患有特定疾病(肺部疾病)的患者获得的外泌体，并具体描述了特定microRNA与肺部疾病之间的关系。除诊断肺部疾病之外，还在继续研究以建立一种通过使用包括在外泌体中的特定蛋白来诊断肾脏疾病的方法。
外泌体还可以包括抗原。在抗原呈递细胞(APC)中，抗原肽载入在具有包括多囊体的膜结构细胞内区室中的MHC(主要组织相容性复合物)II类分子中。因此，来源于其的外泌体也具有抗原肽-MHC II类复合物。因此，外泌体作为免疫原载体将抗原肽呈递给CD4+T淋巴细胞，从而可以诱导免疫应答，诸如T淋巴细胞增殖。能够刺激免疫应答的分子诸如MHCI类和热休克蛋白(HSP)集中在外泌体中，使得外泌体可以用于增加或减少免疫应答来治疗癌症或自身免疫疾病。
发明内容
问题的解决方案
本发明提供包含载有货物蛋白的外泌体的组合物。
在另一实施方式中，本发明提供一种利用光特异性结合蛋白来制备载有货物蛋白的外泌体的方法。
在进一步的实施方式中，本发明提供一种使用外泌体将货物蛋白递送到胞质溶胶的方法。
附图说明
图1说明了通过货物蛋白和蛋白转导结构域(PTD)的重组蛋白递送货物蛋白的方法(Steven R.et al.Protein transduction:unrestricted delivery into all cellsTrends in Cell Biology,2000)。
图2说明了使用纳米颗粒和货物蛋白的复合物通过内吞作用将货物蛋白递送到胞质溶胶的方法(Munish Chanana et al.Physicochemical properties of protein-coated gold nanoparticles in biological fluids and cells before and afterproteolytic digestion.Angew.Chem.Int.Ed.2013)。
图3说明了外泌体从多泡体(MVB)分离和释放的过程(Graca Raposo and WillemStoorvogel.Extracellular vesicles:Exosomes,microvesicles,and friends.CellBiology 200(4),373-383,2013)。
图4说明了通过由靶向外泌体体内递送siRNA来治疗癌症的过程(Alvarez-Erviti,L.et al.Delivery of siRNA to the mouse brain by systemic injection oftargeted exosomes.Nature Biotechnology 29,341-345,2011)。
图5说明了根据本发明的光遗传学设计的携带蛋白的外泌体(EXPLOR)的制备过程。
图6说明了当对EXPLOR的光照停止时，货物蛋白和光特异性结合蛋白的融合蛋白在外泌体内部的分离过程。
图7说明了根据蓝光照射，在导入CIBN-EGFP-CD9基因和mCherry-CRY2基因的转化HEK293T细胞中，mCherry蛋白在细胞内的位置变化。
图8说明了获得根据本发明的EXPLOR的实验程序。
图9说明了根据蓝光强度，在外泌体中捕获的货物蛋白(mCherry蛋白)含量变化的测定结果。
图10说明了在使用包含货物蛋白(mCherry蛋白)的外泌体处理靶细胞(HT1080)之后，在靶细胞中导入货物蛋白的研究结果，其中左边表示未用外泌体处理的靶细胞，右边表示用外泌体处理的靶细胞。
图11是一组荧光图像(a)，说明了用包含货物蛋白(mCherry蛋白)的外泌体处理靶细胞(HT1080)之后，在靶细胞中导入货物蛋白的研究结果；以及图(b)，说明了经过外泌体处理诱导的凋亡细胞比率的比较结果。
图12说明了根据蓝光照射，在导入GIGANTEA-EGFP-CD9基因和mCherry-FKF1LOV的转化HEK293T细胞中，mCherry蛋白在细胞内的位置变化。
图13说明了通过荧光成像(a)测量的荧光素酶-mCherry融合蛋白的表达以及产物细胞中荧光素酶活性和分子数量(b)：
对照：不做处理的HEK293T细胞；
叠加：仅导入荧光素酶-mCherry-CRY2的HEK293T细胞；
XP：通过使用为外泌体负载技术设计的商购载体XPACK(Systems Biosciences)导入XPACK-荧光素酶-mCherry的HEK293T细胞；
EXPLOR：导入根据本发明的荧光素酶-mCherry-CRY2和CIBN-EGFP-CD9的HEK293T细胞；
图14说明了在产生的外泌体中荧光素酶活性(a)和分子数量(b)：
NEG：不做处理的HEK293T细胞产生的外泌体；
叠加：导入荧光素酶-mCherry-CRY2的HEK293T细胞产生的外泌体；
XP：在通过使用为外泌体负载技术设计的商购载体XPACK(Systems Biosciences)导入XPACK-荧光素酶-mCherry的HEK293T细胞中产生的外泌体；
EXPLOR：导入根据本发明的荧光素酶-mCherry-CRY2和CIBN-EGFP-CD9的HEK293T细胞产生的外泌体；
有光：通过在200μW蓝光照射下培养72小时产生的外泌体，
无光：通过在无光条件下培养72小时产生的外泌体。
图15说明了上述产生的外泌体中货物蛋白的负载效率。
图16说明了使用外泌体将货物蛋白转运到靶细胞(HeLa)的转运效率：
对照：不做处理的HEK293T细胞产生的外泌体；
叠加：导入荧光素酶-mCherry-CRY2的HEK293T细胞产生的外泌体；
XP：通过使用为外泌体负载技术设计的商购载体XPACK(Systems Biosciences)导入XPACK-荧光素酶-mCherry的HEK293T细胞产生的外泌体；
EXPLOR：导入荧光素酶-mCherry-CRY2和根据本发明CIBN-EGFP-CD9的HEK293T细胞产生的外泌体；
有光：通过在200μW蓝光照射下培养72小时产生的外泌体，
无光：通过在无光条件下培养72小时产生的外泌体。
图17说明了荧光素酶-mCherry-CRY2和CIBN-EGFP-CD9在HEK293T细胞中的表达位置，表明它们共用相同的位置来表达。
图18说明了Cre-mCherry-CRY2和CIBN-EGFP-CD9在HEK293T细胞中的表达位置，表明它们共用相同的位置来表达。
图19a说明了Cre:EXPLOR处理诱导的ZsGreen在pCAG-loxP-STOP-loxP-ZsGreen瞬时转染的HT1080细胞中的表达(比例尺，40μm)：
阴性:EXPLOR：未负载cre的外泌体作为阴性对照；
Cre:EXPLOR：负载cre的外泌体；以及
pCMV-Cre：pCMV-Cre载体转染作为阳性对照。
图19b说明了使用Cre:EXPLOR处理诱导的ZsGreen在pCAG-loxP-STOP-loxP-ZsGreen瞬时转染的HeLa细胞中的表达(比例尺，40μm)：
阴性:EXPLOR：未负载cre的外泌体作为阴性对照；
Cre:EXPLOR：负载cre的外泌体；以及
pCMV-Cre：pCMV-Cre载体转染作为阳性对照。
图20说明了使用Cre:EXPLOR处理诱导的ZsGreen在pCAG-loxP-STOP-loxP-ZsGreen瞬时转染的原代大鼠胚胎神经元中的表达(比例尺，100μm)：
对照:EXPLOR：未负载cre的外泌体作为阴性对照；以及
Cre:EXPLOR：负载cre的外泌体。
图21说明了使用Cre:EXPLOR处理诱导ZsGreen在具有pCAG-loxP-STOP-loxP-eNpHR3.0-EYFP基因的转基因小鼠中的表达(比例尺，100μm)：
对照:EXPLOR：未负载cre的外泌体作为阴性对照；
Cre:EXPLOR：负载cre的外泌体；
Hip：海马；以及
Th：丘脑。
图22说明了具有pCAG-loxP-STOP-loxP-eNpHR3.0-EYFP基因的转基因小鼠中NEuN/GFAP的免疫组化结果：
粉色：神经元特异性核蛋白；NEuN，阳性神经元；以及
红色：胶质纤维酸性蛋白；GFAP，阳性星形胶质细胞。
物镜，40×，比例尺，20μm。
图23说明了Cas9-mCherry-CRY2和CIBN-EGFP-CD9在HEK293T细胞中的表达位置，表明它们共用相同的位置来表达。
图24说明了用于产生负载Cas9的外泌体的DNA构建体的产生。
图25说明了在外泌体中捕获的货物蛋白(CRISPR-Cas9蛋白)含量的测定结果。
图26说明了GBA-mCherry-CRY2和CIBN-EGFP-CD9在HEK293T细胞中的表达位置，表明它们共用相同的位置来表达。
图27说明了内源性GBA和GBA-mCherry-CRY2融合蛋白在GBA-MCH-CRY2和CIBN-EGFP-CD9瞬时转染的HEK293T细胞、大鼠原代星形胶质细胞、人原代星形胶质细胞和戈谢成纤维细胞中的表达。
图28说明了在外泌体中捕获的货物蛋白(GBA蛋白)含量的测定结果。
图29说明了在外泌体中捕获的β-葡糖脑苷脂酶(一种货物蛋白(GBA蛋白))的酶活性测定结果：
Exo-天然：HEK293T源外泌体；
Exo-GBA：包括β-葡糖脑苷脂酶的外泌体。
图30说明了GBA-外泌体对源自戈谢病患者的成纤维细胞的处理结果，表明使用GBA-外泌体处理显著诱导了β-葡糖脑苷脂酶缺陷细胞中的酶活性。
图31说明了用于产生负载PTEN的外泌体的DNA构建体的产生和稳定表达负载PTEN的外泌体的细胞的产生。
图32说明了荧光素酶-mCherry-CRY2和CIBN-EGFP-CD9在HEK293T细胞中的表达位置，表明它们共用相同的位置来表达。
图33说明了基于荧光素酶分子数量的荧光素酶活性的定量测定结果。
图34说明了PrxI/II-mCherry-CRY2和CIBN-EGFP-CD9在HEK293T细胞中的表达位置，表明它们共用相同的位置来表达。
Prx I:过氧化物氧化还原酶I(peroxiredoxin I)
Prx II:过氧化物氧化还原酶II(peroxiredoxin II)
图35说明了在H2O2诱导的氧化应激和细胞毒性中负载PrxI/II的外泌体的保护作用。
无：H2O2处理的组；
Cre:EXPLOR：负载Cre的外泌体；
PrxI:EXPLOR：负载PrxI的外泌体；以及
PrxII:EXPLOR：负载PrxII的外泌体。
图36说明了MyoD-mCherry-CRY2和CIBN-EGFP-CD9在HEK293T细胞中的表达位置，表明它们共用相同的位置来表达。
图37说明了负载MyoD的外泌体对脂肪干细胞的处理结果，表明MyoD-外泌体(克隆#A6)的处理6天后诱导了细胞增殖。
图38说明了稳定表达负载p53的外泌体的细胞的产生。
图39说明了在外泌体中捕获的货物蛋白(p53蛋白)含量的测定结果。
稳定细胞：稳定表达负载p53的外泌体的细胞；
mcherry：负载mcherry的外泌体；
p53：负载p53的外泌体。
图40说明了使用荧光素酶报告基因的p53转录活性的测定结果，表明在阿霉素-处理的HeLa细胞中使用负载p53的外泌体的处理诱导了p53的转录活性。
图41说明了用于产生负载HMGB1的外泌体的DNA构建体的产生和稳定表达负载HMGB1的外泌体的细胞的产生。
图42说明了srIκB-mCherry-CRY2和CIBN-EGFP-CD9在HEK293T细胞中的表达位置，表明它们共用相同的位置来表达。
图43说明了srIkB-mCherry:EXPLOR的处理显著减少Hela细胞中肿瘤坏死因子α诱导的易位和NF-κB p65亚基的DNA结合。
图44说明了将负载srIkB的外泌体给药到类风湿性关节炎动物模型后的疾病进展分析。
图45说明了在LPS-诱导的脓毒症模型中用负载srIkB的外泌体处理的组的存活曲线。
无外泌体：只有LPS处理的组；
天然的外泌体：使用源自HEK293T的外泌体处理的组；
srIkB外泌体：使用负载srIkB的外泌体处理的组。
图46说明了pYSTAT3胞内抗体-mCherry-CRY2和CIBN-EGFP-CD9在HEK293T细胞中的表达位置，表明它们共用相同的位置来表达。
图47说明了使用负载pYSTAT3胞内抗体的外泌体将pYSTAT3胞内抗体递送到靶细胞的细胞内。
图48说明了Bax-mCherry-CRY2和CIBN-EGFP-CD9在HEK293T细胞中的表达位置，表明它们共用相同的位置来表达。
图49说明了负载Bax的外泌体的处理诱导细胞色素c从Hela细胞中线粒体的快速释放。
图50说明了AIMP-mCherry-CRY2和CIBN-EGFP-CD9在HEK293T细胞中的表达位置，表明它们共用相同的位置来表达。
图51说明了在外泌体中捕获的货物蛋白(AIMP蛋白)含量的测量结果。
图52说明了mCherry-CRY2和CIBN-EGFP-CD9在HEK293T细胞中的表达位置，表明它们共用相同的位置来表达。
本发明最佳实施方式
本发明提供包含载有货物蛋白的外泌体的复合物。
在另一实施方式中，本发明提供一种使用光特异性结合蛋白来制备载有货物蛋白的外泌体的方法。
在进一步实施的方式中，本发明提供一种使用外泌体将将货物蛋白递送至胞质溶胶的方法。
在另一实施方式中，本发明提供了用于大量产生包含融合蛋白的外泌体的方法，该融合蛋白由外泌体特异性标记物和货物蛋白组成。
本发明提供了通过使用光特异性结合蛋白对大量产生包含分离自外泌体膜的货物蛋白的外泌体的方法。
本发明还提供了用于制备外泌体的载体，该载体可用于外泌体的制备。
本发明进一步提供了通过使用上述外泌体将货物蛋白导入胞质溶胶中的方法。
在一个实施方式中，本发明提供了包含载有货物蛋白的外泌体的药物组合物及其制备方法。
在优选实施方式中，货物蛋白是抑制NF-κB的超阻遏物IκB蛋白、Bax(Bcl-2-相关的X蛋白)、过氧化物氧化还原酶I、过氧化物氧化还原酶II、cre重组酶、Cas9(CRISPR相关蛋白9)、Cpf1(来自普雷沃菌属(Prevotella)和弗朗西斯氏菌属(Francisella)的CRISPR 1)或GBA(β-葡糖脑苷脂酶)。
本发明提供了包括货物蛋白的外泌体，其可以通过递送货物蛋白用于体内各种疾病的治疗。例如，外泌体可以被制备成包括具有抗癌活性的蛋白或siRNA，然后处理癌细胞以进行癌症治疗(图4)。
对于包含用于治疗疾病的货物蛋白的外泌体，需要有效制备外泌体以具有适当负载的货物蛋白。韩国专利公开No.2004-0015508描述了用于制备包含特异性抗原的外泌体的方法。准确地说，其描述了一种通过使用外泌体释放货物蛋白的方法，其中将编码特定抗原的基因插入宿主细胞系中并且导入基因的蛋白在细胞系中稳定表达，该蛋白通过外泌体细胞外释放，以及将外泌体用作疫苗的方法。
然而外泌体是在细胞内自然形成的。因此，即使编码货物蛋白的基因插入到内源性产生外泌体的细胞中，很难由此制备包含在其中表达的蛋白的外泌体。
本发明提供了用于更有效地制备包含货物蛋白的外泌体的方法。结果，本发明人通过在高浓度内源性产生外泌体的细胞中大量地表达由外泌体特异性标记物和货物蛋白组成的融合蛋白，成功制备了有效包含货物蛋白的外泌体(图5)。
根据上述方法，货物蛋白附接到外泌体膜上。因此，由外泌体特异性标记物和货物蛋白对组成的融合蛋白在高浓度产生外泌体的细胞中表达，随后通过照射诱导融合蛋白的连接。然后，通过外泌体特异性标记物的作用将融合蛋白导入外泌体内。导入后终止照射时，融合蛋白分离成外泌体内的货物蛋白和光特异性结合蛋白。结果，可以有效地制备包含分离自融合蛋白的游离货物蛋白的外泌体(图6)。
本发明中负载到外泌体中的货物蛋白包括但不限于天然或非天然蛋白、截短形式或突变形式。货物蛋白的示例列于下，但不限于此。
[表1]
＜酶＞
酶是加快生物有机体中化学反应的生物催化分子。酶与其底物结合，并通过降低其激活能促进反应速率。酶可分为以下几类：蛋白酶、核酸酶、水解酶、激酶、磷酸酶和其他类型的酶。
在本发明中在外泌体中负载的靶蛋白包括酶及其调节物。在下面的描述中列出了靶蛋白的实例，但不限于此。
-蛋白酶及其抑制剂
MMP和TIMP
基质金属蛋白酶(MMP)，又称为基质素(matrixin)，是钙依赖性含锌内肽酶。MMP能够降解各种细胞外基质蛋白，并且已知参与细胞表面受体的切割、凋亡配体(诸如FAS配体)的释放和趋化因子/细胞因子失活。MMP也被认为在细胞行为中起主要作用，诸如细胞增殖、迁移(粘附/分散)、分化、血管生成、凋亡和宿主防御。
基质金属蛋白酶受特定的内源性金属蛋白酶组织抑制剂(TIMPs)抑制，该抑制剂包含四种蛋白酶抑制剂的家族：TIMP1、TIMP2、TIMP3和TIMP4。
MMP和TIMP的平衡在与各种生理或病理过程(诸如形态发生、血管生成、组织修复、肝硬化、关节炎和转移)相关的组织重塑中起重要作用。MMP-2和MMP-9被认为在转移中很重要。MMP-1被认为在类风湿性关节炎和骨关节炎中很重要。MMP和TIMP之间平衡的失调也是急性和慢性心血管疾病的特征。
包含MMPs和TIMPs的外泌体通过在高浓度产生外泌体的细胞中大量表达由外泌体特异性标记物和靶蛋白组成的融合蛋白来制备。载有MMPs或TIMPs的外泌体可用于治疗MMP相关疾病，包括类风湿性关节炎。
胱天蛋白酶及其抑制剂
胱天蛋白酶(半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶、半胱氨酸天冬氨酸酶或半胱氨酸依赖性天冬氨酸定向蛋白酶)是一蛋白酶家族，在程序性细胞死亡中起着重要作用，程序性细胞死亡包括细胞凋亡、细胞焦亡(pyroptosis)和坏死。这些细胞死亡形式对于保护生物体免受应激信号和致病性攻击非常重要。胱天蛋白酶也在炎症中起作用，它直接作用于促炎症的细胞因子，诸如pro-IL1β。正是这些信号分子允许免疫细胞募集至受感染的细胞或组织。胱天蛋白酶还具有其他确定的作用，诸如细胞增殖、肿瘤抑制、细胞分化、神经发育、轴突诱导和衰老。
胱天蛋白酶缺陷已被确定为肿瘤发展的原因。肿瘤生长可以由于多种因素的组合发生，包括细胞周期基因的突变，这消除对细胞生长的限制；以及凋亡蛋白的突变，诸如通过在异常生长的细胞中诱导细胞死亡来响应的胱天蛋白酶。
相反，某些胱天蛋白酶诸如半胱天冬酶-3的过度激活可引起过度的程序性细胞死亡。这可见于神经细胞丢失的几种神经退行性疾病，诸如阿尔茨海默病。涉及处理炎症信号的胱天蛋白酶也与疾病有关。这些胱天蛋白酶激活不足会增加有机体对感染的易感性，因为合适的免疫反应可能不会被激活。胱天蛋白酶在细胞死亡和疾病中发挥的重要作用引起了以胱天蛋白酶作为药物靶点的研究。例如，炎症性胱天蛋白酶-1与导致自身免疫性疾病有关。
包含胱天蛋白酶及其抑制剂的外泌体通过在高浓度产生外泌体的细胞中大量表达由外泌体特异性标记物和靶蛋白组成的融合蛋白来制备。载有胱天蛋白酶或其抑制剂的外泌体可用于治疗与胱天蛋白酶相关的疾病，包括神经退行性疾病或自身免疫性疾病。
组织蛋白酶及其抑制剂
组织蛋白酶是发现于所有动物以及其他生物体中的蛋白酶。这个家族大约有十几个成员，它们在结构、催化机制以及它们切割的蛋白上是有区别的。大部分成员在溶酶体中发现的低pH下被激活。因此，这个家族的活动几乎完全在这些细胞器内。
组织蛋白酶与癌症、中风、阿尔茨海默氏病、关节炎、埃博拉病毒、COPD、慢性牙周炎、胰腺炎和包括圆锥形角膜在内的一些眼部疾病有关。特别是对于癌症，组织蛋白酶D是一种促分裂原，它减弱了衰减趋化因子的抗肿瘤免疫应答，从而抑制树突细胞的功能。组织蛋白酶B和L参与基质降解和细胞侵袭。
包括组织蛋白酶及其抑制剂的外泌体通过在高浓度产生外泌体的细胞中大量表达由外泌体特异性标记物和靶蛋白组成的融合蛋白来制备。载有组织蛋白酶或其抑制剂的外泌体可用于治疗各种组织蛋白酶相关疾病，包括癌症和阿尔茨海默氏病。
-核酸酶
Cre重组酶
Cre重组酶是由P1噬菌体分离的蛋白，并通过检测两个不同的loxP区域来诱导重组。loxP为具有34bp的DNA片段,由在两端上的两个13bp回文序列和在中间的8bp不对称核间隔子组成。Cre重组酶结合到回文序列，切割后改变DNA的间隔子，然后重组DNA。基于间隔子的方向性在两个不同的loxP区域之间切除或倒位DNA序列。如果loxP区域的方向相同或相反，则分别发生切除或倒位。
[通过Cre重组酶的DNA缺失]
Cre重组酶利用的代表性实例之一是可以抑制特定基因的突变期和表达的组织的条件性基因敲除小鼠。该技术通过在特定靶基因的前端和末端之间产生loxP插入的小鼠，与表达Cre的转基因小鼠交配，或直接将Cre重组酶作用于特定细胞，从而除去某些分离细胞中的特定靶基因。条件性基因敲除小鼠通过表达这种基因能有效地确定特定基因的功能，这在胚胎发育早期、胚胎发育后期或成体过程中均具有致命性。
本发明提供了载有Cre重组酶蛋白的外泌体，并证实了Cre重组酶蛋白被递送至靶细胞的胞质溶胶。结果表明，载有Cre重组酶蛋白的本发明的外泌体可用于条件性基因操作。
Crispr/Cas9
CRISPR-Cas9是一种基于RNA的人工限制酶，使得通过限制基因的特定区域进行DNA校正成为可能。最近，它作为基因工程的关键元素受到广泛关注。
CRISPR是一种回文序列，是成簇规律间隔短回文重复序列(Clusteredregularly-interspaced short palindromic repeats)的缩写形式和首次观察到的细菌获得性免疫系统。首先，Cas9蛋白识别并限制入侵病毒。然后将限制的病毒序列插入CRISPR序列中，并将结合的病毒和CRISPR的序列转录为RNA。该RNA用于形成Cas9复合物。经过这个过程后，转录的“CRISPR+病毒序列”与Cas9结合，并且比单独的Cas9更快地除去相同的入侵病毒。通过靶序列和Cas9复合物的结合来限制靶序列，可以将该机制应用于基因工程中。
Cpf1是与上述工程的内切酶CRISPR-Cas9系统中的Cas9蛋白具有相似功能的蛋白。如下图所示，与Cas9不同，Cpf1识别原型间隔序列毗邻基序(PAM，protospace adjacentmotif)序列。它可以用于Cas9无法识别的区域，特别地它更实用，因为单独的crispr RNA(CrRNA)就能工作。在Cas9的情况下还需要tracrRNA。
[Cas9和Cpf1蛋白之间的比较]
本发明提供了载有Cas9或Cpf1蛋白的外泌体，并证实了将Cas9或Cpf1蛋白递送至靶细胞的胞质溶胶。结果表明，载有Cas9或Cpf1蛋白的本发明的外泌体可用于去除、添加或改变DNA序列的片段。
胱天蛋白酶激活DNA酶
胱天蛋白酶激活DNA酶(CAD)或DNA片段化因子亚基β(DFFB)在人类中是由DFFB基因编码的蛋白。它在细胞凋亡过程中分解DNA并促进细胞分化。它通常是由ICAD抑制的非活性单体。在二聚化之前被切割。
细胞凋亡是在哺乳动物发育过程中去除有毒和/或无用细胞的细胞死亡过程，细胞凋亡过程伴随着细胞和细胞核的收缩和片段化以及染色体DNA降解成核小体单位。DNA片段化因子(DFF)是40-kD(DFFB)亚基和45-kD(DFFA)亚基的异二聚体蛋白。DFFA是胱天蛋白酶-3的底物，并在细胞凋亡过程中触发DNA的片段化。当DFFA被胱天蛋白酶-3裂解时，DFF被激活。DFFA的切割片段从DFF的活性组分DFFB解离。已发现DFFB在细胞凋亡期间触发DNA片段化和染色质浓缩。
通过在高浓度产生外泌体的细胞中大量表达由外泌体特异性标记物和靶蛋白组成的融合蛋白来制备包含胱天蛋白酶激活DNA酶的外泌体。载有胱天蛋白酶激活DNA酶的外泌体可用于调节不同系统中的细胞凋亡。
-水解酶
包括β-葡糖脑苷脂酶的溶酶体酶
溶酶体贮积症是由于溶酶体先天性缺乏导致溶酶体降解物质的储存的疾病。常见的溶酶体贮积症之一是戈谢病(Gaucher disease)，其由溶酶体酶β-葡糖脑苷脂酶(GBA)基因缺陷诱导的。
通过在巨噬细胞溶酶体上储存葡糖脑苷酯酶/葡糖基鞘氨，GBA缺乏诱导肝、脾、骨髓等功能紊乱。还可诱导血液学异常，诸如贫血、血小板减少、白细胞减少、肝脾肿大(gepatolientalny)、破骨、中枢神经损伤等。
目前对戈谢病的治疗是通过静脉注射思而赞(cerezyme，一种GBA类似物)的酶替代疗法。然而，这类蛋白药物具有多种缺点，诸如在血液中半衰期短、抗体生成导致的效率低、难以递送至溶酶体以及不能应用神经原性戈谢病等。
本发明提供了载有GBA(β-葡糖脑苷脂酶)蛋白的外泌体，并证实GBA(β-葡糖脑苷脂酶)蛋白被递送至靶细胞的胞质溶胶。结果表明，载有GBA(β-葡糖脑苷脂酶)蛋白的本发明的外泌体可用于治疗戈谢病。
-激酶和磷酸酶
丝裂原活化激酶：p38MAP激酶
P38丝裂原激活蛋白激酶是一类丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)，其响应应激刺激，诸如细胞因子、紫外线照射、热休克和渗透压休克。P36MAP激酶参与细胞分化、凋亡和自噬。
P38MAP激酶(MAPK)参与控制对细胞因子和应激的细胞应答的信号级联反应。正在寻求P38抑制剂对自身免疫性疾病和炎症过程可能的治疗效果。
包含p38MAPK及其抑制剂的外泌体通过在高浓度产生外泌体的细胞中大量表达由外泌体特异性标记物和靶蛋白组成的融合蛋白来制备。负载p38MAPK或其抑制剂的外泌体可用于治疗p38MAPK相关疾病，包括自身免疫性疾病。
抑制子kappa B激酶(IKK)
IκB激酶(IKK)是参与促进对炎症的细胞应答的酶复合物。IκB激酶复合物是上游NF-κB信号转导级联的一部分。IκBα(κB抑制剂)蛋白通过掩蔽NF-κB蛋白的核定位信号(NLS)并使其在细胞质中保持无活性状态，使得NF-κB转录因子失活。IKK磷酸化抑制性IκBα蛋白。这种磷酸化导致IκBα从NF-κB解离。现在游离的NF-κB迁移到细胞核并激活至少150个基因的表达；其中一些是抗细胞凋亡的。
对于转录因子核因子-kB(NF-κB)家族成员的激活，IκB激酶活性是关键，其在淋巴细胞免疫调节中起着重要的作用。典型NF-κB通路的激活开始于对各种促炎症刺激的响应(包括在病原体表面表达的脂多糖)或促炎细胞因子的释放(诸如肿瘤坏死因子(TNF)或白细胞介素-1(IL-1))。免疫细胞刺激后，信号转导级联引起IKK复合物的激活，这一事件的特征是NEMO与同源激酶亚基IKK-α和IKK-β结合。
尽管在炎症刺激反应中具有功能适应性，但NF-κB信号转导的失调已经在各种疾病状态中被利用。在动脉粥样硬化、哮喘、类风湿性关节炎、炎症性肠病和多发性硬化症的发展中观察到由组成型IKK介导的IκBα磷酸化引起的NF-κB活性增加。特别地，组成型NF-κB活性在分子水平上促进持续的炎症信号转导，在表型上转化为慢性炎症。此外，NF-κB同时抑制细胞凋亡和促进淋巴细胞持续生长和增殖的能力解释了其与多种类型癌症的密切联系。
包含IKK的外泌体通过在高浓度产生外泌体的细胞中大量表达由外泌体特异性标记物和靶蛋白组成的融合蛋白来制备。载有IKK的外泌体可用于治疗NF-κB相关疾病，包括癌症。
PTEN磷酸酶
磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)被认定为肿瘤抑制蛋白。这个基因的突变是许多癌症发展的一个步骤。该蛋白包含张力蛋白样结构域以及类似于双特异性蛋白酪氨酸磷酸酶的催化结构域。与大多数蛋白酪氨酸磷酸酶不同，该蛋白优先将磷酸肌醇底物去磷酸化。其负调节细胞内磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸的细胞内水平，并通过负调节Akt/PKB信号通路发挥肿瘤抑制剂的功能。
PTEN缺失或突变与癌症、非癌性瘤形成和孤独症密切相关。特别是在肿瘤发展期间，PTEN的突变和缺失会使其失去酶活性，从而引起细胞增殖增加和细胞死亡减少。PTEN频繁遗传失活发生于成胶质母细胞瘤、子宫内膜癌和前列腺癌；在许多其他肿瘤类型诸如肺癌和乳腺癌中发现PTEN表达减少。此外，PTEN突变还会导致的各种癌症遗传倾向。
PTEN基因的突变导致了其他几种疾病，如考登综合征(Cowden syndrome)，其特征是发生称为错构瘤的非癌性肿瘤。这些疾病包括斑纳扬—赖利—鲁瓦尔卡巴综合征(Bannayan-Riley-Ruvalcaba syndrome)和变形杆菌样综合征(Proteus-like syndrome)。PTEN突变导致的疾病统称为PTEN错构瘤综合征或PHTS。造成这些综合症的突变导致产生的蛋白无功能或不存在。这种缺陷蛋白允许细胞以不受控制的方式分裂并阻碍受损细胞的死亡，引起肿瘤生长。
包含PTEN的外泌体通过在高浓度产生外泌体的细胞中大量表达由外泌体特异性标记物和靶蛋白组成的融合蛋白来制备。载有PTEN的外泌体可用于治疗不同类型的癌症。
Janus激酶
Janus激酶(JAK)是细胞内非受体酪氨酸激酶家族，其通过JAK-STAT通路转导细胞因子介导信号。由于I型和II型细胞因子受体家族的成员不具有催化激酶活性，因此他们依赖JAK家族的酪氨酸激酶磷酸化并激活参与其信号转导通路的下游蛋白。在受体与其各自的细胞因子/配体结合后，其经历构象变化，使两个JAK足够接近以彼此磷酸化。
JAK自动磷酸化诱导其自身内部的构象变化，使其能够通过进一步磷酸化和激活称为STATs(信号转导和转录激因子)的转录因子来转导细胞内信号。激活的STATs从受体分离并在转移到细胞核之前形成二聚体，在那里调节选定基因的转录。
使用JAK/STAT信号通道的分子的一些实例是集落刺激因子、催乳素、生长激素和许多细胞因子。正在开发JAK抑制剂用于治疗银屑病、类风湿性关节炎、真性红细胞增多症、脱发症、原发性血小板增多症、溃疡性结肠炎、伴有骨髓纤维化的骨髓化生和白癜风。
包括JAK及其抑制剂的外泌体通过在高浓度产生外泌体的细胞中大量表达由外泌体特异性标记物和靶蛋白组成的融合蛋白来制备。载有JAK或其抑制剂的外泌体可用于治疗JAK相关疾病，包括癌症。
-其它
泛素连接酶
泛素连接酶(也称为E3泛素连接酶)是一种蛋白，募集已载有泛素的E2泛素结合酶，识别蛋白底物并辅助或直接催化泛素从E2向蛋白底物转移。泛素通过异肽键与靶蛋白上的赖氨酸连接。E3连接酶与靶蛋白和E2酶相互作用，因此赋予底物对E2的特异性。
E3连接酶的泛素化调节多个领域，诸如细胞运输、DNA修复和信号转导，在细胞生物学中具有深远的意义。E3连接酶也是细胞周期控制的关键参与者，其介导细胞周期素以及细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白的降解。
E3泛素连接酶调节稳态平衡、细胞周期和DNA修复途径，因此，许多这些蛋白参与各种癌症，包括著名的MDM2、BRCA1和Von Hippel-Lindau肿瘤抑制剂。例如，在胃癌、肾细胞癌和肝癌(等)中发现了MDM2的突变，通过增加MDM2启动子对Sp1转录因子的亲和力，导致MDM2mRNA转录增加，从而使MDM2浓度失调。
包含泛素连接酶的外泌体通过在高浓度产生外泌体的细胞中大量表达由外泌体特异性标记去和靶蛋白组成的融合蛋白来制备。载有泛素连接酶的外泌体可用于治疗泛素化相关疾病，包括癌症。
荧光素酶
荧光素酶是一类产生生物发光的氧化酶的通称，通常与发光蛋白不同。荧光素酶广泛应用于生物技术、显微镜检查和作为报告基因使用，以及许多与荧光蛋白相同的应用。然而，与荧光蛋白不同，荧光素酶不需要外部光源，但是确实需要添加荧光素(可消耗的底物)。
所有萤光素酶被分类为氧化还原酶(EC 1.13.12.-)，这意味着它们通过结合分子氧作用于单个供体。由于萤光素酶来自许多不相关的不同的蛋白家族，因此没有统一的机制，因为任何机制都依赖于萤光素酶和萤光素的组合。然而，迄今为止所有表征的萤光素酶-荧光素反应都显示出在某个阶段需要分子氧。
在生物学研究中，萤光素酶通常用作报道者来评估在感兴趣的启动子控制下转染含萤光素酶基因的遗传构建体的细胞中转录活性。另外，在特定酶的活性下转化为荧光素的前荧光分子(pro-luminescent molecules)可用于检测偶联或两步荧光素酶分析中的酶活性。此类底物已用于检测胱天蛋白酶活性和细胞色素P450活性等。
萤光素酶也可用于在细胞活力测定或激酶活性测定中检测细胞ATP水平。荧光素酶可以通过生物素化作为ATP传感器蛋白。生物素化通过结合链霉亲和素-生物素复合物将萤光素酶固定在细胞表面上。这允许萤光素酶检测细胞中ATP的流出，并将通过生物发光有效显示ATP的实时释放。通过改变蛋白序列中的某些氨基酸残基来增加发光强度，荧光素酶对ATP的检测可以额外地更灵敏。
可使用表达荧光素酶的细胞系注射进行整个动物成像(称为体内或偶尔离体成像)。可以设计不同类型的细胞(例如骨髓干细胞、T细胞)以表达荧光素酶，允许其使用敏感的电荷耦合装置相机(CCD相机)在活动物体内进行非侵入性可视化。该技术已经用于追踪动物模型中肿瘤发生和肿瘤对治疗的应答。
本发明制备了载有萤光素酶蛋白的外泌体，并证实萤光素酶蛋白被递送至靶细胞的胞质溶胶。结果表明载有荧光素酶蛋白的本发明的外泌体可用于细胞活力分析、激酶活性分析和整个动物成像。
过氧化物氧化还原酶
过氧化物氧化还原酶(Prx)是细胞质中具有代表性的抗氧化酶，在哺乳动物细胞中获得0.1～0.8％的水溶性蛋白。在细胞中Prx具有通过接收2e-将氢过氧化物还原成H2O和ROH-的作用。通过参与H2O2(nmol浓度)的形成和除去，Prx还参与细胞增殖、分化、死亡和细胞信号转导。基于半胱氨酸氨基酸的数量，Prx更具体地分类为1-Cys Prx或2-Cys Prx。此外，基于结构和机制的差异，2-Cys prx被细分为“典型”或“非典型”。所有三个Prx在Cys-SOH形成的第二过程中氧化还原方面有差异。Prx I-Prx IV是典型的2-Cys Prx，Prx V是非典型的2-Cys Prc，而Prx VI是1-Cys Prx。某些2-Cys Prx形成寡聚体。
通过调节细胞中生长因子和TNF-α产生的H2O2的浓度，Prx I和II参与受体信号转导通道的激活。特别地，Prx II具有保护细胞免受细胞死亡诱导因素诸如血清饥饿、神经酰胺和依托泊苷(epotoside)的刺激的作用。
在正常细胞中，Prx I通过抑制PTEN磷酸酶的氧化而维持PTEN磷酸酶的活性。但在氧化应激增加的情况下，H2O2通过不可逆氧化将Prx从PTEN分离，从而抑制PTEN的活性。因此，其通过持续激活细胞增殖信号诸如Akt诱导肿瘤。
在细胞中Prx的数量变化与疾病有显著的关系。在癌症、动脉硬化、呼吸道炎症、骨质疏松、肥胖、退行性痴呆发展等过程中，活性氧数量的变化具有密切的联系。
本发明提供了载有过氧化物氧化还原酶I或过氧化物氧化还原酶II蛋白的外泌体，并证实过氧化物氧化还原酶I或过氧化物氧化还原酶II蛋白被递送至靶细胞的胞质溶胶。结果表明装载有过氧化物氧化还原酶I或过氧化物氧化还原酶II蛋白的本发明的外泌体可用于治疗活性氧相关疾病。
＜转录因子＞
转录因子是在真核生物中调节转录自DNA的mRNA的蛋白。转录因子与基础转录调节、生物体发育、对细胞间信号或环境的应答、细胞周期控制和发病机理有关。
负载在本发明外泌体中的靶蛋白包括转录因子及其调节子(增强子或抑制子)。在下面的描述中列出了靶蛋白的示例，但不限于此。
-转录因子及其调节子
NF-kB调节子、超阻遏物IkB
NF-κB是诱导炎症应答的主要转录因子，并调节炎症相关基因在各种细胞特别是免疫细胞中的表达。因此，选择性抑制免疫细胞中过度活跃的NF-κB信号转导通路可以成为不可治愈的的慢性炎症疾病的有效治疗策略,诸如类风湿性关节炎、败血症和银屑病。另外，NF-κB的活化具有通过增加抗细胞凋亡因子的表达来抑制细胞凋亡的作用。从这一作用来看，在癌症中NF-κB信号转导通路的持续激活是抗癌药物耐药的原因，并且随后降低了抗癌药物的治疗效果。
大多数NF-κB通过与正常细胞中NF-κB的抑制蛋白IκB结合而处于非激活状态。由各种刺激物诸如TNF-α和LPS激活的IκB激酶(IKK)复合物将IκB磷酸化。然后磷酸化的IκB泛素化并最终被蛋白酶体降解。通过IκB的降解，结合在IκB上的NF-κB(p50/p65)穿过核膜。通过后，NF-κB(p50/p65)通过结合核内靶基因的启动子区域来激活mRNA转录。这是诱导细胞因子和炎症介质(诸如iNOS、COX-2、NO、PGE2、TNF-α和IL-1)转录的免疫应答的重要元件(Lappas等，Biol.Reprod.67：668673，2002)。
超阻遏物IκB是IκB的S32A和S36A突变体形式，其可以持续抑制NF-κB，因为它不被IκB激酶磷酸化，并且不被蛋白酶体降解。因此，其作为治疗各种炎症性疾病的潜力很大。
本发明提供了载有超阻遏物IκB蛋白的外泌体，并证实超阻遏物IκB蛋白被递送至靶细胞的胞质溶胶。结果表明载有超阻遏物IκB蛋白的本发明的外泌体可用于治疗炎症性疾病。
MyoD
MyoD是一种在调节肌肉分化中起关键作用的蛋白。MyoD属于称为肌源性调节因子(MRF)的蛋白家族。已知MyoD与数百种肌肉基因启动子具有结合相互作用并允许成肌细胞增殖。MyoD的主要功能之一是通过增强p21和肌细胞生成素的转录将细胞从细胞周期中去除。
包含MyoD蛋白的外泌体通过在高浓度产生外泌体的细胞中大量表达由外泌体特异性标记物和靶蛋白组成的融合蛋白来制备。载有MyoD的外泌体可用于治疗成肌细胞相关疾病。
Tbx18(T-box转录因子18)
Tbx18编码进化上保守的转录因子家族的成员，在胚胎发育中起着至关重要的作用。Tbx18的特征在于存在DNA结合T-box结构域，并且其属于脊椎动物特异性Tbx1亚家族。Tbx18通过拮抗T-box家族中的转录激活因子充当转录阻遏物。在组织和器官的各种发育过程中需要Tbx18，组织和器官包括心脏和冠状血管、输尿管和脊柱。在窦房结(SAN)头部区域也需要Tbx18。
Tbx18转导是一种打开心肌细胞中基因的方法，作为治疗某些心律失常的方法。在健康的心脏中，窦房结细胞作为心脏的起搏器，并使心脏有规律的跳动。病态窦房结综合征的问题是SA结功能不正常，导致心律不齐。使用腺病毒将Tbx18表达进入心房肌细胞，将心房肌细胞转化为启动心跳的SA结细胞。Tbx18可以是治疗心律失常的多种基因治疗形式之一。
包含Tbx18蛋白的外泌体通过在高浓度产生外泌体的细胞中大量表达由外泌体特异性标记物和靶蛋白组成的融合蛋白来制备。载有Tbx18蛋白的外泌体可用于治疗病态窦房结综合征。
P53
已知肿瘤蛋白p53是基因组的守护者，因为它通过防止基因组突变来保存基因组的稳定性。当DNA受到损伤时，p53可以激活DNA修复蛋白。另外，p53可以通过将细胞周期保持在DNA损伤识别的G1/S调节点来抑制生长。在DNA损伤且不可修复的情况下，p53可诱导细胞凋亡。最后，p53对短端粒的衰老应答至关重要。p53应答无数应激而被激活，应激包括DNA损伤、氧化应激、渗透压休克、核糖核苷酸消耗和失调的癌基因表达。
如果p53受损，则肿瘤抑制受到严重损害。只遗传有一个P53基因功能拷贝的人很可能在成年早期患上肿瘤。增加p53的含量可能是治疗肿瘤或预防其扩散的解决方法。
包含p53蛋白的外泌体通过在高浓度产生外泌体的细胞中大量表达由外泌体特异性标记物和靶蛋白组成的融合蛋白来制备。载有p53蛋白的外泌体可用于治疗各种类型的癌症。
HMGB1(高迁移率族蛋白B1)
如同组蛋白，HMGB1是最重要的染色质蛋白之一。在细胞核中，HMGB1与核小体、转录因子和组蛋白相互作用。这种核蛋白组织DNA并调节转录。结合后，HMGB1弯曲DNA，这有利于其他蛋白的结合。它还与核小体相互作用以使堆积的DNA松散并重塑染色质。
HMGB1由免疫细胞通过无丝分裂途径分泌。激活的巨噬细胞和单核细胞分泌HMGB1作为炎症的细胞因子介质。中和HMGB1的抗体赋予针对关节炎、结肠炎、局部缺血、败血症等期间的损害和组织损伤的保护作用。
包含HMGB1蛋白的外泌体通过在高浓度产生外泌体的细胞中大量表达由外泌体特异性标记物和靶蛋白组成的融合蛋白来制备。载有HMGB1蛋白的外泌体可用于治疗炎症性疾病。
NeuroD1
神经原性分化1(也称为β2)是NeuroD型的转录因子。其通过结合含E box的启动子共有核心序列5'-CANNTG-3'来介导转录激活。其有助于调节几种细胞分化途径。其促进早期视网膜神经节细胞、内耳感觉神经元、形成小脑或海马的齿状回细胞层的颗粒细胞、胰腺的内分泌胰岛细胞和小肠的肠内分泌细胞。
包含NeuroD1蛋白的外泌体通过在高浓度产生外泌体的细胞中大量表达由外泌体特异性标记物和靶蛋白组成的融合蛋白来制备。载有NeuroD1蛋白的外泌体可用于调节神经元发育。
肿瘤相关的巨噬细胞(TAM)是一种属于巨噬细胞系的细胞。它们位于肿瘤块附近或肿瘤块内。TAM来源于循环的单核细胞或固定组织巨噬细胞，它们形成在许多肿瘤类型的基质内发现的主要白细胞浸润物。TAM与乳腺癌、卵巢癌、胶质瘤和淋巴瘤类型的不良预后有关，与结肠癌和胃癌较好的预后有关，并且与肺癌和前列腺癌的良好的和不良的预后都有关。
TAM分为两种主要的表型，M1和M2。M1TAM抑制癌症进展，而M2TAMs促进癌症进展。几种转录因子与M2巨噬细胞向M1巨噬细胞的转变有关。负载在本发明外泌体中的靶蛋白包括与巨噬细胞的M2至M1转化有关的转录因子。在下面的描述中列出了靶蛋白的实例，但不限于此。
IRF5
IRF 5是干扰素调节因子(一类转录因子)的成员。其在病毒介导干扰素的激活和细胞生长、分化、凋亡和免疫系统活性调节中具有重要作用。IRF5通过直接与DNA或其他蛋白相互作用来工作。
IRF5作为分子开关，控制巨噬细胞是否促进或抑制炎症。阻断巨噬细胞中IRF的产生可以帮助治疗广泛的自身免疫疾病，并且上调IRF5水平可以帮助治疗免疫系统弱或受损的人。
包含IRF5蛋白的外泌体通过在高浓度产生外泌体的细胞中大量表达由外泌体特异性标记物和靶蛋白组成的融合蛋白来制备。载有IRF5蛋白的外泌体可用于从M2到M1的巨噬细胞转化，用于治疗各种类型的癌症。
IRF3
IRF 3是干扰素调节因子的成员，是一组转录因子。IRF 3包括功能域、核输出信号、DNA结合域、C末端IRF关联域和几个调控位点。它在未感染细胞的细胞质中以失活的形式存在。当病毒感染、双链RNA或Toll样受体信号转导时，IKBKE和TBK 1激酶将其磷酸化。这导致二聚和核定位。IRF 3可以激活巨噬细胞中不同的基因表达程序。
包含IRF3蛋白的外泌体通过在高浓度产生外泌体的细胞中大量表达由外泌体特异性标记物和靶蛋白组成的融合蛋白来制备。载有IRF3蛋白的外泌体可用于从M2到M1的巨噬细胞转化，用于治疗各种类型的癌症。
STAT1
信号转导和转录激活因子1是转录因子，是STAT蛋白家族的成员。STAT1可以被几种配体诸如干扰素α、干扰素γ、表皮生长因子、血小板衍生生长因子或白细胞介素6激活。
I型IFN与细胞表面受体结合后，Jak激酶被激活并磷酸化STAT1和STAT2。STAT二聚化并与ISGF3G/IRF-9结合形成称为ISGF3转录因子的复合物。ISGF3结合IFN刺激的应答元素以激活IFN刺激的基因的转录。
应答II型IFN，STAT1是酪氨酸和丝氨酸磷酸化物。它形成同二聚体并与IFNγ激活的序列结合以驱动靶基因的表达，诱导细胞抗病毒状态。
包含STAT1蛋白的外泌体通过在高浓度产生外泌体的细胞中大量表达由外泌体特异性标记物和靶蛋白组成的融合蛋白来制备。载有STAT1蛋白的外泌体可用于治疗各种类型的癌症。
SOCS3
细胞因子信号转导抑制物是STAT诱导的STAT抑制剂的成员。STAT诱导的STAT抑制剂是细胞因子信号转导的细胞因子诱导型负调节剂。SOCS3由多种细胞因子如IL6、IL10和IFN-γ诱导。
SOCS3的过度表达抑制脂肪组织和肝脏中的胰岛素信号转导，但不抑制肌肉中的胰岛素信号转导。但是在小鼠的骨骼肌中缺失SOCS3可以防止肥胖。由于神经酰胺合成增加，SOCS3还有助于瘦素抵抗和胰岛素抵抗。研究表明，去除SOCS基因可预防肥胖症中的胰岛素抵抗。SOCS3蛋白可以与JAK2激酶结合并抑制JAK2激酶的活性。
包含SOCS3蛋白的外泌体通过在高浓度产生外泌体的细胞中大量表达由外泌体特异性标记物和靶蛋白组成的融合蛋白来制备。载有SOCS3蛋白的外泌体可用于治疗各种类型的癌症。
＜抗体＞
抗体是识别并通过“Y”形抗体尖端Fab可变区与其特异性抗原结合的蛋白。抗体可以通过与其结合来抑制靶抗原蛋白的活性。
负载在本发明外泌体中的靶蛋白包括抗体和抗体相关肽。在下面的描述中列出了靶蛋白的实例，但不限于此。
-抗体和相关肽
pySTAT3胞内抗体
STAT(信号转导和转录)是已经确定的转录因子：STAT1、STAT2、STAT3、STAT4、STAT5(STAT5A和STAT5B)和STAT6。STAT3蛋白具有C末端转录激活结构域(STAT3的主要磷酸化位点为酪氨酸705残基和丝氨酸727残基)。酪氨酸磷酸化和随后的STAT3二聚化促进向细胞核的运输和转录的激活。
JAK/STAT3信号转导通路在生长因子诱导的干扰素信号转导的激活中被识别并且参与增殖、分化、凋亡、血管生成、肿瘤发生和免疫。因此，对于开发抗癌药物，STAT3蛋白可以作为单一药物或组合治疗药物的良好靶点。
本发明制备了载有pYSTAT3胞内抗体的外泌体，并证实pYSTAT3胞内抗体被递送至靶细胞的胞质溶胶。结果表明载有pYSTAT3胞内抗体的本发明的外泌体可用于治疗癌症。
＜其它＞
细胞凋亡相关的蛋白
细胞凋亡(程序性细胞死亡)是通过各种因素除去受损细胞的过程，而异常细胞凋亡诱导肿瘤生成。基于这个原因，关于诱导肿瘤细胞凋亡的研究已经作为除去肿瘤的策略而积极进展。细胞萎缩引起的染色质浓缩、凋亡小体形成和DNA片段化是细胞凋亡的特征。细胞凋亡由两种不同途径诱导；一个是通过线粒体的内在途径，另一个是通过死亡受体的外在途径。细胞凋亡受到各种调节，例如促细胞凋亡Bcl-2家族的激活、前胱天蛋白酶的分割和多聚ADP核糖聚合酶(PARP)的片段化等等。特别是属于半胱氨酸蛋白酶的胱天蛋白酶在正常增殖的细胞中是前酶，并通过细胞凋亡诱导信号激活，然后通过包含货物蛋白诸如PARP在细胞凋亡中具有显著作用。
大多数细胞凋亡刺激物通过Bcl-2基因家族成员控制的途径诱导哺乳动物细胞凋亡，Bcl-2基因家族编码包括细胞凋亡激动剂和拮抗剂的同源蛋白组，诸如Bcl-2和Bcl-XL。即使这些成员被有区别地调节，这些成员也共享序列同源结构域。在细胞凋亡期间，bcl-2和Bax(在蛋白水平上与Bcl-2具有21％的同一性)的抗细胞凋亡或促细胞凋亡作用受同源和异源二聚体调控，其不同之处在于Bcl-2与Bax的比例。
促细胞凋亡蛋白：Bax
Bax(Bcl-2相关的X蛋白)是Bcl-2蛋白家族之一，即所谓的Bcl-2样蛋白4。上述Bax与线粒体外膜结合，其C末端的4个残基在线粒体的膜间隙上突起，Bax具有激活细胞凋亡的作用。在NCBI(GenBank：NM_001291428，NP_001278357等)上公布了关于上述蛋白及其基因碱基序列的特定信息。
Bax是合成促细胞凋亡蛋白的Bcl-2基因家族之一。Bax通过突变型p53抑制其转录。众所周知，插入或缺失Bax碱基序列是造成血液癌、结肠癌和直肠癌的细胞株中Bax表达显着降低的原因。
已知Bax参与神经元发育的凋亡、淋巴和生殖系统的稳态平衡、DNA损伤导致的细胞死亡、缺血再灌注损伤等。
本发明提供了载有Bax(Bcl-2相关的X蛋白)蛋白的外泌体，并证实Bax(Bcl-2相关的X蛋白)蛋白递送到靶细胞的胞质溶胶中。结果表明，载有Bax(Bcl-2相关的X蛋白)蛋白的本发明的外泌体可用于治疗癌症。
抗细胞凋亡蛋白：BcL-xL
由BCL2样1基因编码的B细胞淋巴瘤-超大(Bcl-xL)是线粒体中的跨膜分子。Bcl-xL是Bcl-2蛋白家族的成员，通过阻止线粒体内容物诸如细胞色素c的释放而起到抗细胞凋亡蛋白的作用，线粒体内容物的释放引起胱天蛋白酶的激活并最终导致程序性细胞死亡。
细胞凋亡领域的一个公认的概念是，促生存和抗生存Bcl-2家族蛋白的相对数量决定细胞是否会发生细胞死亡；如果存在更多的Bcl-xL，那么孔对于促细胞凋亡分子是不可渗透的，则细胞存活。与Bcl-2类似，Bcl-xL通过抑制肿瘤抑制因子p53的功能而参与癌细胞的存活。
包含Bcl-xL蛋白的外泌体通过在高浓度产生外泌体的细胞中大量表达由外泌体特异性标记物和靶蛋白组成的融合蛋白来制备。载有Bcl-xL蛋白的外泌体可用于调节细胞凋亡。
-其他
多功能信号分子：AIMP(氨酰tRNA合成酶相互作用的多功能蛋白)
酰胺-tRNA合成酶相互作用的多功能蛋白1(AIMP1)是多合酶复合物的非催化组分。刺激细胞质精氨酰-tRNA合酶的催化活性。具有炎性细胞因子活性。通过与SMURF2结合并抑制其SMAD7介导的降解来稳定SMURF2，负调节TGF-β信号转导。通过在低葡萄糖水平诱导胰高血糖素的分泌而参与葡萄糖的稳态平衡。促进真皮成纤维细胞增殖和伤口修复。
通过在低浓度下诱导内皮细胞迁移和在高浓度下诱导内皮细胞凋亡，在血管生成中起作用。诱导树突状细胞成熟和单核细胞粘附。通过与PSMA7相互作用降解HIF-1A来调节内皮细胞应答。
氨酰tRNA合成酶相互作用的多功能蛋白2(AIMP2)是氨酰tRNA合成酶复合物组装和稳定性所必需的。介导FUBP 1(MYC的转录激活因子)的泛素化和降解，导致肺泡II型细胞分化所必需的MYC下调。在患有常染色体隐性遗传性青少年帕金森病(autosomal-recessive juvenile Parkinsonism)、特发性帕金森病和弥漫性路易体病(diffuse Lewybody disease)的脑内累积。
包含AIMP1和AIMP2蛋白的外泌体通过在高浓度产生外泌体的细胞中大量表达由外泌体特异性标记物和靶蛋白组成的融合蛋白来制备。载有AIMP1或AIMP2蛋白的外泌体可用于多功能调节。
荧光蛋白(mCherry，GFP)
荧光蛋白是结构上同源的一类蛋白的成员，它们具有独特的特性，能够自己从其自己的多肽序列内的3个氨基酸序列中形成可见波长的发色团。生物学家将编码工程荧光蛋白的基因(或基因嵌合体)导入活细胞中，随后使用荧光显微镜观察基因产物的位置和动态，这是常见的研究实践。
荧光蛋白最普遍的应用是利用荧光蛋白对活细胞中特定细胞器或重组蛋白的定位和动态进行成像。为了成像特定的细胞器，标准的分子生物学技术被用来将编码荧光蛋白的基因融合到编码已知定位于该特定细胞器的蛋白或肽的cDNA上。这种融合使得嵌合基因将被表达为一个单一的多肽，在靶向基序和荧光蛋白之间形成了一个共价连接。包含在合适启动子控制下的嵌合基因的质粒用于转染哺乳动物细胞，然后表达该基因以产生相应的嵌合蛋白。嵌合体定位于目标细胞器并因此呈现荧光。通过使用荧光显微镜，细胞器的形态、动力学和分布可以随时间成像。
mCherry是一种单体荧光结构，分别在587nm/610nm处具有峰值激发/发射。它耐光漂白并且稳定。它成熟快速，t0.5为15分钟，这允许其在翻译后不久可视化。
绿色荧光蛋白(GFP)是由238个氨基酸残基(26.9kDa)组成的蛋白，当暴露于蓝色至紫外线范围内的光时，其显示出鲜绿色荧光。尽管许多其他海洋生物具有相似的绿色荧光蛋白，但GFP传统上是指首先从维多利亚多管发光水母(Aequorea victoria)中分离出的蛋白。来自维多利亚多管发光水母(A.victoria)的GFP在395nm波长处具有主要激发峰，在475nm处具有次要激发峰。它的发射峰位于509nm处，在可见光谱的较低绿色部分。
本发明制备了载有mCherry或GFP蛋白的外泌体，并证实了mCherry或GFP蛋白被递送至靶细胞的胞质溶胶。结果表明，载有mCherry或GFP蛋白的本发明的外泌体可用于活细胞或动物中外泌体和连接蛋白的定位和动态的成像。
核酸结合蛋白(例如RNP)
核蛋白是任何与核酸无论是DNA还是RNA结构相关的蛋白。脱氧核糖核蛋白(DNP)是DNA和蛋白的复合物。典型的例子是核小体复合物，其中基因组DNA在真核细胞核中环绕在八个组蛋白的簇上以形成染色质。在精子发生期间，精蛋白取代组蛋白。这种复合物中的脱氧核糖核蛋白相互作用以产生多蛋白调节复合物，在复合物中介入的DNA被环绕或缠绕。脱氧核糖核蛋白参与调节DNA复制和转录。
核糖核蛋白(RNP)是RNA和蛋白的复合物。端粒酶、穹窿核糖核蛋白、核糖核酸酶P、hnRNP和小核RNP(snRNP)以及核糖体是核糖核蛋白。核糖核蛋白起到保护作用。mRNA在细胞中不会以游离RNA分子存在。它们总是与核糖核蛋白结合并作为核糖核蛋白复合物发挥作用。
包含DNP或RNP的外泌体通过在高浓度产生外泌体的细胞中大量表达由外泌体特异性标记物和靶蛋白组成的融合蛋白来制备。载有DNP或RNP的外泌体可用于遗传学调控或核酸可转运的外泌体。
本发明证实了通过使用包含货物蛋白的外泌体成功地将货物蛋白递送至靶细胞的胞质溶胶，并且由此本发明提供了一种使用外泌体在细胞溶质中有效调节细胞内信号转导来治疗疾病的方法。
本发明的另一个目的是提供一种用于预防或治疗炎症性疾病的包含作为活性成分的外泌体的药物组合物。
本发明的另一个目的是提供用于预防或治疗癌症的包含作为活性成分的外泌体的药物组合物。
本发明的另一个目的是提供用于预防或治疗氧相关疾病的包含作为活性成分的外泌体的药物组合物。
本发明的另一个目的是提供用于产生靶基因条件性敲除等位基因的包含作为活性成分的外泌体的组合物。
本发明的另一个目的是提供操纵DNA序列的包含作为活性成分的外泌体的组合物。
本发明的另一个目的是提供用于预防或治疗戈谢病的包含作为活性成分的外泌体的药物组合物。
为了开发用于制备包含货物蛋白的外泌体的有效方法，本发明人进行了各种尝试。在我们的研究过程中，发明人注意到外泌体特异性标记物(CD9、CD63、CD81和CD82)。这些标记物属于四跨膜蛋白家族，并且通常是4倍穿透型膜蛋白。本发明人预测，当货物蛋白缀合在外泌体的膜蛋白上时，货物蛋白将相对容易地包括在外泌体内部。
通过在高浓度产生外泌体细胞中表达由货物蛋白和特别地在外泌体膜上丰富的并且可以穿透细胞膜的外泌体标记物组成的融合蛋白，可以大量产生包含货物蛋白的外泌体。
特别地，用于制备包含本发明货物蛋白的外泌体的方法的特征在于，在产生外泌体细胞中导入编码由外泌体特异性标记物和货物蛋白组成的融合蛋白的多核苷酸。
此时，在制备的外泌体中，货物蛋白与嵌入外泌体膜中的外泌体特异性标记物融合。
所述货物蛋白与外泌体的膜蛋白结合，并且即使到达靶细胞后也不分离，为了解决这一问题，进行了各种尝试，因此开发了一种技术，通过将货物蛋白与标记蛋白暂时缀合来制备包含货物蛋白的外泌体。例如，本文可以使用光特异性结合蛋白诸如CIBN和CRY 2。特别地，CIBN以与作为标志物蛋白之一的CD9融合的形式表达。同时，将编码CRY2和货物蛋白的融合蛋白的基因导入外泌体产生细胞中。由于CD9，表达的CIBN-CD9融合蛋白可以包括在外泌体产生细胞中。此时，当用蓝色LED光照射细胞时，在外泌体产生细胞中表达的货物蛋白-CRY2融合蛋白的CRY2结构域与融合CD9的CIBN结构域结合。结果产生可逆的“货物蛋白-CRY2-CIBN-CD9融合蛋白”。由于CD9，这种融合蛋白可以包括在外泌体内部。一旦产生了包含货物蛋白的外泌体并且蓝色LED光照射终止，则CIBN-CRY2连接被破坏并且货物蛋白以与外泌体膜分开的形式保留在外泌体中，导致制备包括货物蛋白的外泌体(图5～图10)。
这种通过本发明的方法制备的外泌体与包含靶物质的常规外泌体的效果完全不同。常规外泌体被表达为融合到外泌体特异性标记物上，以便在外泌体内部呈现货物蛋白，使得货物蛋白即使包括在外泌体内部也不是游离的，而是呈现为附着在外泌体膜上，这表明货物蛋白不能从外泌体膜分离，因此只有当外泌体融合在靶细胞的细胞壁上时才能将货物蛋白递送到靶细胞中。而且，即使在融合到靶细胞上后，货物蛋白仍然缀合在外泌体膜上，因此，货物蛋白在靶细胞中显示其作用的可能性很低，然而，本发明的外泌体呈现了一种游离存在的并且不与外泌体膜缀合的货物蛋白。因此，当这种外泌体通过靶细胞的内吞作用进入胞质溶胶时，货物蛋白不会粘附在外泌体的膜上，当外泌体在靶细胞中分解时，包含的货物蛋白可以在细胞溶质溶胶中递送并且可以在细胞溶质溶胶中自由移动，这表明货物蛋白在靶细胞胞质溶胶中具有其生理活性的完全活性(图11)。
货物蛋白与标记蛋白的结合水平可以根据待照射的光的强度而改变。因此，通过调节光的强度，可以控制外泌体中收集的货物蛋白的浓度。
利用光特异性结合蛋白制备包含货物蛋白的外泌体的方法尚未见报道，并首次由本发明人提出。
特别地，制备本发明的包含货物蛋白的外泌体的方法由以下步骤组成：(a)在外泌体产生细胞中导入编码融合蛋白(融合蛋白Ⅰ)的多核苷酸和编码融合蛋白(融合蛋白Ⅱ)的多核苷酸，其中，融合蛋白Ⅰ由外泌体特异性标记物和第一光特异性结合蛋白组成，融合蛋白Ⅱ由货物蛋白和可与第一光特异结合蛋白连接的第二光特异性结合蛋白组成；(b)用能够引起第一光特异性结合蛋白和第二光特异性结合蛋白之间缀合的光照射外泌体产生细胞；和(c)在外泌体生产细胞中完成外泌体产生后终止照射。
本发明中的术语“外泌体”表示具有质膜结构的小囊泡，其起源于称为多泡体(MVB)的细胞内特异性区室并且从细胞释放或分泌。
在本发明中，作为载体的外泌体通过自身携带货物蛋白将货物蛋白递送到靶细胞或组织中。此时，外泌体携带的货物蛋白作用于靶细胞或组织，以帮助治疗或诊断特定疾病。
本发明中的术语“外泌体产生细胞”表示能够产生外泌体的细胞。
本发明中，外泌体产生细胞不受限制，但优选地以B淋巴细胞、T淋巴细胞、树突细胞、巨核细胞、巨噬细胞、干细胞和肿瘤细胞等为例。例如，在本发明中，用作外泌体产生细胞的HEK293T细胞是一种永生化细胞系。
本发明中的术语“外泌体特异性标记物”表示外泌体膜富含的蛋白。
在本发明中，外泌体特异性标记物不受限制，但优选地以CD9、CD63、CD81和CD82等为例。例如，在本发明的优选实施方式中，使用CD9作为外泌体特异性标记物。CD9、CD63、CD81和CD82是4倍穿透型膜蛋白，当货物蛋白与外泌体的膜蛋白结合时，允许货物蛋白容易地存在于外泌体中。
本发明中的术语“光特异性结合蛋白”也称为光诱导异二聚体形成蛋白或光诱导同二聚体形成蛋白，是指当照射特定波长的光时，能够通过与不同蛋白结合形成异二聚体或通过与另一相同类型的蛋白结合形成同二聚体的蛋白。
本发明中，光特异性结合蛋白不受限制，但优选地以光诱导异二聚体形成蛋白或CIB(隐花色素-相互作用碱基-螺旋-环-螺旋蛋白)、CIBN(CIB的N末端结构域)、PhyB(光敏色素B)、PIF(光敏色素相互作用因子)、FKF1(黄素结合，Kelch重复序列，F-box 1)、GIGANTEA、CRY(隐花色素)和PHR(植物水解酶同源区)等为例。
特别地，当光特异性结合蛋白是光诱导异二聚体形成蛋白时，可以使用两种类型的光特异性结合蛋白(第一和第二光特异性结合蛋白)。当第一光特异性结合蛋白是CIB或CIBN时，第二光特异性结合蛋白可以是CRY或PHR。当第一光特异性结合蛋白是PhyB时，第二光特异性结合蛋白可以是PIF。当第一光特异性结合蛋白是GIGANTEA时，第二光特异性结合蛋白可以是FKF1。
例如，在本发明的优选实施方式中，使用CIBN作为第一光特异性结合蛋白，使用CRY2作为第二光特异性结合蛋白。这里使用的光的波长是460～490nm的蓝光。光的强度为20～50μW。
同时，为了证实由在其中表达的外泌体特异性标记物和第一光特异性结合蛋白组成的第一融合蛋白的表达并找出其位置，可以将标记蛋白融合到融合蛋白中。例如，在本发明的优选实施方式中，将荧光蛋白EGFP插入第一融合蛋白中，其中CIBN和CD9或GIGANTEA和CD连接在一起。因此，第一融合蛋白的表达模式(表达和表达水平)和细胞内位置可以通过携带荧光蛋白EGFP的第一融合蛋白的表达来研究。
本发明中的术语“货物蛋白”表示一种蛋白，其表达为与第二光特异性结合蛋白缀合的融合蛋白，以将货物蛋白定位在外泌体内。
在本发明中，货物蛋白可以在细胞中表达后由外泌体携带。货物蛋白不受限制，但优选地是疾病治疗蛋白或疾病诊断蛋白。例如，在本发明的优选实施方式中，使用具有荧光的mCherry作为货物蛋白。
本发明货物蛋白的实例选自但不限于基质金属蛋白酶(MMP)蛋白、金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)蛋白、胱天蛋白酶蛋白、胱天蛋白酶抑制蛋白、组织蛋白酶蛋白或组织蛋白酶抑制蛋白。
其中，
MMPs蛋白诸如是，但不限于MMP1蛋白(SEQ ID：13)；
TIMPs蛋白诸如是，但不限于TIMP1蛋白(SEQ ID NO：14)、TIMP2蛋白(SEQ ID NO：15)、TIMP3蛋白(SEQ ID NO：16)或TIMP4蛋白(SEQ ID NO：17)；
胱天蛋白酶蛋白诸如是，但不限于胱天蛋白酶1蛋白(SEQ ID NO:18)、胱天蛋白酶2蛋白(SEQ ID NO:19)、胱天蛋白酶3蛋白(SEQ ID NO:20)、胱天蛋白酶4蛋白(SEQ ID NO:21)、胱天蛋白酶5蛋白(SEQ ID NO:22)、胱天蛋白酶6蛋白(SEQ ID NO:23)、胱天蛋白酶7蛋白(SEQ ID NO:24)、胱天蛋白酶8蛋白(SEQ ID NO:25)、胱天蛋白酶9蛋白(SEQ ID NO:26)、胱天蛋白酶10蛋白(SEQ ID NO:27)、胱天蛋白酶11蛋白(SEQ ID NO:28)、胱天蛋白酶12蛋白(SEQ ID NO:29)、胱天蛋白酶13蛋白(SEQ ID NO:30)或胱天蛋白酶14蛋白(SEQ ID NO:31)；
胱天蛋白酶抑制蛋白诸如是，但不限于抑制以SEQ ID NO：18-31代表的胱天蛋白酶蛋白抑制蛋白或任何抑制胱天蛋白酶的蛋白。
组织蛋白酶蛋白诸如是，但不限于组织蛋白酶A蛋白(SEQ ID NO:32)、组织蛋白酶B蛋白(SEQ ID NO:33)、组织蛋白酶C蛋白(SEQ ID NO:34)、组织蛋白酶D蛋白(SEQ ID NO:35)、组织蛋白酶E蛋白(SEQ ID NO:36)、组织蛋白酶F蛋白(SEQ ID NO:37)、组织蛋白酶G蛋白(SEQ ID NO:38)、组织蛋白酶H蛋白(SEQ ID NO:39)、组织蛋白酶K蛋白(SEQ ID NO:40)、组织蛋白酶L1蛋白(SEQ ID NO:41)、组织蛋白酶L2蛋白(SEQ ID NO:42)、组织蛋白酶O蛋白(SEQ ID NO:43)、组织蛋白酶S蛋白(SEQ ID NO:44)、组织蛋白酶W蛋白(SEQ ID NO:45)或组织蛋白酶Z蛋白(SEQ ID NO:46)；以及
组织蛋白酶抑制蛋白诸如是，但不限于抑制以SEQ ID NO:32-46代表的组织蛋白酶蛋白抑制蛋白或任何抑制组织蛋白酶的蛋白。
本发明中货物蛋白的另一个实例选自但不限于Cre重组酶、Cas蛋白，胱天蛋白酶激活DNA酶(CAD)蛋白、β-葡糖脑苷脂酶(GBA)、p38丝裂原活化蛋白激酶、磷酸酶和张力蛋白同系物(PTEN)、Janus激酶(JAK)、泛素连接酶、萤光素酶、过氧化物氧化还原酶(Prx)I或II、抑制NF-κB的蛋白、MyoD蛋白、Tbx18蛋白、p53蛋白、高迁移率族蛋白1(HMGB1)蛋白、神经原性分化1(Neuro-D1)蛋白、干扰素调节因子5(IRF5)蛋白、干扰素调节因子3(IRF3)蛋白、信号转导和转录激活1(STAT1)蛋白、细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)蛋白、信号转导和转录激活2(STAT2)蛋白、抑制磷酸化STAT3的蛋白(pySTAT3)、Bax(Bcl2相关的X蛋白)、B细胞淋巴瘤-超大(Bcl-xL)蛋白、氨酰tRNA合成酶相互作用多功能蛋白(AIMP)、mCherry蛋白、绿色荧光蛋白(GFP)或与核酸结合的核蛋白，
其中，
Cre重组酶通过在DNA中识别LoxP位点来在LoxP位点之间重组DNA，其包括但不局限于以SEQ ID：9代表的Cre重组酶；
当Cas蛋白通过引导RNA与复合物结合时，具有内切酶或切口酶活性。在一些实施方式中，Cas蛋白是Cas9蛋白(诸如是以SEQ ID NO：10代表的Cas蛋白)，或其突变体或Cpf1蛋白(诸如是以SEQ ID NO：11代表的氨基酸)；
CAD蛋白诸如是以SEQ ID NO：47代表的氨基酸；
β-葡糖脑苷酯酶(GBA)诸如是以SEQ ID NO：12代表的氨基酸；
p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38MAPKs)蛋白是诸如是p38-α或其变异体，并且包括以SEQ ID NO：48-51代表的氨基酸；
抑制子kappa B激酶(IKK)蛋白诸如是以SEQ ID NO：83代表的氨基酸；
核因子-kappaB(NF-κB)蛋白诸如是以SEQ ID NO：84代表的氨基酸；
磷酸酶和张力素同源蛋白(PTEN)诸如是以SEQ ID NO：52代表的氨基酸；
Janus激酶(JAK)蛋白包括JAK1、JAK2、JAK3和TYK2，其中JAK1蛋白诸如是以SEQ IDNO：53代表的氨基酸，JAK2蛋白诸如是以SEQ ID NO：54代表的氨基酸，JAK3蛋白诸如是以SEQ ID NO：55代表的氨基酸，TYK2蛋白诸如是以SEQ ID NO：56代表的氨基酸；泛素连接酶蛋白包括c-CBL、PRKN、RBX1、TRAF2和Mdm2，其中泛素连接酶蛋白诸如是以SEQ ID NO：57至61代表的氨基酸；
荧光素酶蛋白诸如是以SEQ ID NO：62代表的氨基酸；
过氧化物氧化还原酶(Prx)I或II具有抑制来自氧化应激的细胞毒性的作用，其中过氧化物氧化还原酶I诸如是以SEQ ID NO：7代表的氨基酸，氧化物酶II诸如是以SEQ IDNO：8代表的氨基酸；
NF-κB抑制蛋白是通过与细胞质中的NF-κB结合而使NF-κB失活的超阻遏物IκB，其中超阻遏物IκB蛋白(IκB的S32A和S36A突变体形式)不被IκB激酶(IKK)磷酸化，因此它可以连续抑制NF-κB，并且NF-κB抑制蛋白诸如是以SEQ ID NO：1至5之一代表的氨基酸、例如IκB-α、IκB-β、IκB-ε、BCL-3或其突变体；
MyoD蛋白诸如是以SEQ ID NO：63代表的氨基酸；
Tbx18蛋白诸如是以SEQ ID NO：64代表的氨基酸；
P53蛋白诸如是以SEQ ID NO：65代表的氨基酸；
高迁移率族蛋白1(HMGB1)诸如是以SEQ ID NO：66代表的氨基酸；
神经原性分化1(Neuro-D1)蛋白诸如是以SEQ ID NO：67代表的氨基酸；
干扰素调节因子5(IRF5)蛋白诸如是以SEQ ID NO：68代表的氨基酸；
干扰素调节因子3(IRF3)蛋白诸如是以SEQ ID NO：69代表的氨基酸；
信号转导和转录激活子1(STAT1)蛋白诸如是以SEQ ID NO：70代表的氨基酸；
细胞因子信号转导抑制子3(SOCS3)蛋白诸如是以SEQ ID NO：71代表的氨基酸；
信号转导和转录激活子2(STAT2)蛋白诸如是以SEQ ID NO：72代表的氨基酸；
抑制磷酸化STAT3的蛋白(pySTAT3)，包括与pySTAT3结合以使pySTAT3失活的pySTAT3胞内抗体蛋白，并且诸如是以SEQ ID NO：73代表的氨基酸或任何抑制pySTAT3的蛋白；
Bax(Bcl2相关的X蛋白)诸如是以EQ ID NO：6代表的氨基酸；
B细胞淋巴瘤-超大(Bcl-xL)蛋白诸如是以SEQ ID NO：74代表的氨基酸；
氨酰tRNA合成酶相互作用多功能蛋白(AIMPs)包括AIMP1和AIMP2，其中，AIMP1蛋白诸如是以EQ ID NO：75代表的氨基酸并且AIMP2蛋白诸如是以SEQ ID NO：76代表的氨基酸；
mCherry蛋白诸如是以EQ ID NO：77代表的氨基酸；
绿色荧光蛋白(GFP)诸如是以EQ ID NO：78代表的氨基酸；
与核酸结合的核蛋白包括与DNA结合的脱氧核糖核蛋白(DNP)或与RNA结合的核糖核蛋白(RNP)，其中DNP包括RBBP4或NAP1L4，并且RNP包括端粒酶、异源核核糖核蛋白K(HNRNPK)，并且其中核蛋白诸如是核小体、精蛋白、小核RNP(snRNP)、以SEQ ID NO：79-82代表的氨基酸或它们的突变体或与核酸结合的任何蛋白。
本发明中的术语“培养”表示在适当控制的环境中生长细胞或微生物的方法。
在本发明中，将转化体培养1～3天，然后将培养基换成无血清培养基，继续培养2～5天。
在本发明中，用于培养转化体的方法是本领域技术人员已知的任何方法。
本文中的所述培养基是指广泛用于动物细胞培养的通知培养基，其可以选自由市售无血清培养基、无蛋白培养基和化学成分确定的培养基组成的组。
上述无血清培养基用于动物细胞培养，不含牛血清并且以SFM4CHO(HyClone)和EX-Cell(JHR Bioscience)为例。胰岛素样生长因子I(IGF-I)、乙醇胺、氯化铁和磷脂酰胆碱可以加入到培养基中，但不总限于此。
上述无蛋白培养基为动物细胞培养基，从培养基中去除动物来源的蛋白(特别是高分子量蛋白，特别地分子量至少为10kDa的蛋白)，无蛋白培养基可以是ProCHO(Lonza)和PF-Cho(HyClone)，但不总是限于此。
上述化学成分确定的培养基是动物细胞培养基，其不包含任何动物源组分，而是具有化学结构全部确定的组分。化学成分确定的培养基可以是CDM4CHO(HyClone)、PowerCHO2CD(Lonza)和CD-optiCHO(Life Technologies)，但并不总是限于此。
本发明中的术语“第一融合蛋白”表示通过外泌体特异性标记物与第一光特异性结合蛋白结合而形成的融合蛋白。
在本发明中，第一融合蛋白中所包含的外泌体特异性标记物和第一光学特异性结合蛋白的排列顺序不受限制，只要当第一种融合蛋白在外泌体产生细胞中表达时第一光敏特异性结合蛋白位于朝向外泌体内部的方向。例如，第一光特异性结合蛋白的N末端可以与外泌体特异性标记物的C末端缀合。
组成第一融合蛋白的外泌体特异性标记物和第一光特异性结合蛋白彼此直接相连或可由接头连接，上述接头不受限制，只要第一融合蛋白在外泌体产生细胞中表达，并呈现朝向外泌体内部的第一光特异性结合蛋白，但优选地是由氨基酸组成的肽接头，并且更优选地是柔性肽接头。该肽接头可以通过使用表达载体来表达，其中编码该接头的核酸与框架中编码各个结构域的其他核酸连接。
术语“第二融合蛋白”表示其中第二光特异性结合蛋白和货物蛋白被结合的融合蛋白。
在本发明中，第二融合蛋白中所包含的第二光特异性结合蛋白和货物蛋白的排列顺序不受限制，只要第二融合蛋白位于外泌体内且在外泌体产生细胞中与第一融合蛋白的第一光特异性结合蛋白区域结合。例如，货物蛋白的N末端可以与第二光特异性结合蛋白的C末端缀合。
组成第二融合蛋白的第二光特异性结合蛋白和货物蛋白彼此直接相连或可由接头连接，上述接头不受限制，只要第二融合蛋白位于外泌体内且在外泌体产生细胞中与第一融合蛋白的第一光特异性结合蛋白区域结合，但优选地是由氨基酸组成的肽接头，并且更优选地是柔性肽接头。该肽接头可以通过使用表达载体来表达，其中编码该接头的核酸与框架中编码各个结构域的其他核酸连接。
另外，上述各融合蛋白可以包括多肽，该多肽具有的序列中至少一个氨基酸残基不同于的各融合蛋白包括的各结构域的野生型氨基酸序列中的氨基酸残基。蛋白和多肽中的氨基酸交换而不改变分子的整体活性是本领域技术人员熟知的。最常见的交换存在于Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Thy/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu和Asp/Gly。另外，可以包括由于氨基酸序列的突变或修饰而具有提高的对热或pH的结构稳定性或增加的蛋白活性的蛋白。
最后，上述融合蛋白或包括各结构域融合蛋白的多肽可以通过本领域技术人员熟知的化学肽合成方法来制备，或通过以下方法制备。编码各结构域的基因通过PCR(聚合酶链式反应)扩增或通过本领域技术人员熟知的常规方法合成。将该基因克隆到表达载体中并表达。
同时，通过在外泌体产生细胞中导入编码各融合蛋白的多核苷酸，可以在外泌体产生细胞中表达各融合蛋白。此时，通过本领域技术人员熟知的常规方法将多核苷酸导入外泌体生产细胞中。例如，表达载体可以用于导入。
本发明中的术语“表达载体”是能够在宿主细胞中表达目标肽的重组载体。该载体是指包含可操作地连接以表达基因插入物的关键调节子的基因构建体。表达载体包括表达控制元素，诸如起始密码子、终止密码子、启动子和操纵子。一般将起始密码子和终止密码子理解为编码多肽的核苷酸序列的一部分。当基因构建体被导入并且存在于框架中的编码序列中时，它们被认为是起作用。载体的启动子可以是组成型或诱导型的。
本发明中的术语“可操作地连接”表示当通常起作用的核酸表达调节序列和编码货物蛋白或RNA的核酸序列通过功能性链接连接时的状态。例如，启动子与编码蛋白或RNA的核酸序列可操作地连接以影响编码序列的表达。与表达载体功能性链接可以通过本领域技术人员熟知的重组DNA技术来实现，特别是通过使用本领域技术人员熟知的常规酶可以实现位点特异性DNA切割和链接。
所述表达载体可以包括用于排出融合多肽的信号序列以促进蛋白从细胞培养基中分离。为了有效翻译插入的核酸序列，特定的起始信号可能是必需的。这些信号包含ATG起始密码子及其相邻序列。在某些情况下，应提供外源翻译控制信号，其中可能包括ATG起始密码子。这些外源翻译控制信号和起始密码子可以是各种天然来源和合成来源。通过导入合适的转录增强子或翻译增强子可以提高表达效率。
在本发明的优选实施方式中，表达载体能够表达与标签缀合的货物蛋白，以确认货物蛋白在外泌体内的插入。本文的标签用于确认货物蛋白的存在，其可以缀合至与第二光特异性结合蛋白缀合的区域相对的区域。例如，使用诸如红色荧光蛋白和绿色荧光蛋白的荧光蛋白作为标签与货物蛋白的C末端缀合。
如上所述制备的货物蛋白在外泌体产生细胞中表达。一旦产生外泌体，就研究是否检测到荧光蛋白标签，由此可以证实外泌体中货物蛋白的存在。
本发明中的术语“光”表示要照射的光，以便使在外泌体产生细胞中表达的第一光特异性结合蛋白和第二光特异性结合蛋白暂时结合。
如上文所述，第一光特异性结合蛋白被表达为与外泌体特异性标记物缀合的第一融合蛋白，而第二光特异性结合蛋白被表达为与货物蛋白缀合的第二融合蛋白。当光照射到外泌体产生细胞时，第一光特异性结合蛋白与第二光特异性结合蛋白结合，结果，暂时形成了包括外泌体特异性标记物-第一光特异性结合蛋白-第二光合特异性结合蛋白-货物蛋白的融合蛋白复合物。当在外泌体产生细胞中产生外泌体时，由于外泌体特异性标记物，货物蛋白可以与外泌体连接。此时，货物蛋白存在于外泌体内，并且当外泌体产生后停止光照射时，第一光特异性结合蛋白与第二光特异性结合蛋白分离，并且因此包括在外泌体中的货物蛋白作为外泌体的一部分与外泌体一起被排出。为了更有效地将货物蛋白递送到外泌体内，优选地将光间歇地照射到细胞而不是连续地照射细胞。即，当间歇地照射光时，第一光特异性结合蛋白和第二光特异性结合蛋白的缀合和分离重复，如此可以增加货物蛋白导入外泌体的可能性。
同时，足以诱导第一光特异性结合蛋白与第二光特异性结合蛋白结合的光波长根据第一和第二光特异性结合蛋白的种类变化。诱导第一光特异性结合蛋白和第二光特异性结合蛋白结合的光波长取决于蛋白的类型。因此，如本领域技术人员所知，可以选择适当的光波长。例如，为了将CRY2连接到CIBN，波长为460～490nm的光是优选的。如果光照少于10分钟，则CRY2和CIBN彼此分离。当PhyB与PIF结合时，用波长为650nm的光照射10分钟。当波长为750nm的光照射5分钟时，PhyB和PIF彼此分离。当FKF1与GIGANTEA结合时，用波长为460nm的光照射30分钟。在本发明的优选实施方式中，用波长为460～490nm的光照射以诱导CIBN和CRY2的结合。
在本发明的优选实施方式中，CRY2/mCherry融合蛋白和CIB/CD9融合蛋白在HEK293T中表达，永生化细胞系产生大量外泌体。结果发现，在胞质溶胶中均匀分布的mCherry蛋白在蓝光照射时分布在细胞膜和胞内体样结构膜中(图7)。当FKF1/mCherry融合蛋白和GIGANTEA/CD9融合蛋白在HEK293T细胞中表达时观察到类似的结果(图12)。在HEK293T细胞中表达CRY2/mCherry融合蛋白和CIBN/CD9融合蛋白，随后用蓝光照射并调节光强度。结果，当以强度位20～50μW的光照射时，外泌体中收集的mCherry蛋白的水平最高(图9)。将从细胞中分离的外泌体以约250μg/ml的浓度作用于HT1080细胞。结果，外泌体对HT1080细胞没有显示出任何特异性细胞毒性，并且证实mCherry蛋白在其胞质溶胶中递送(图10)。
为了比较常规方法中货物蛋白导入外泌体的效率和外泌体转移到靶细胞的效率，将XPACK载体用于常规方法，并将CRY2/mCherry融合蛋白和CIBN/CD9融合蛋白的表达载体导入HEK293T细胞中。然后，比较外泌体中货物蛋白的产生。结果证实，当使用本发明的方法时，导入效率显著地高(图15)。将从外泌体产生细胞分离的外泌体作用于靶细胞(HeLa)以比较货物蛋白的表达。当使用通过本发明的方法分离的外泌体时，货物蛋白的表达在靶细胞中最高(图16)。
本发明的另一个优选的实施方式中，本发明提供了用于产生外泌体的载体，其包括：(a)包含编码外泌体特异性标记物和第一光特异性结合蛋白的融合蛋白(第一融合蛋白)的多核苷酸的第一表达载体；和(b)第二表达载体，其包含多克隆位点和编码与上述第一光特异性结合蛋白连接的第二光特异性结合蛋白的多核苷酸，可以向多克隆位点导入编码货物蛋白的多核苷酸。
在本发明提供的用于生产外泌体的载体中，外泌体特异性标记物、第一光特异性结合蛋白、外泌体产生细胞和第二光特异性结合蛋白与上述相同。
在本发明中，术语“用于外泌体产生的转化细胞”表示通过表达第一融合蛋白能够产生外泌体的细胞，其中，导入了编码外泌体特异性标记物和第一光特异性结合蛋白的融合蛋白(第一融合蛋白)的多核苷酸。
在本发明中，第二表达载体包括编码第二光特异性结合蛋白的多核苷酸和相邻的多克隆位点。当编码货物蛋白的多核苷酸插入多克隆位点时，其表达为包括第二光特异性结合蛋白和货物蛋白的融合蛋白(第二融合蛋白)。
本发明提供的制备外泌体的载体可以包含组分、溶液或装置中的一种或多种，其不仅可用于产生外泌体的转化细胞和表达载体，还可用于导入表达载体；用于培养产生外泌体的转化细胞；以及用于分离和纯化从产生外泌体的转化细胞中产生的外泌体。例如，还可以包括适合于导入表达载体的缓冲液和培养产生外泌体的转化细胞所必需的培养基和容器。
本发明中的术语“Cas蛋白”表示CRISPR/Cas系统中关键蛋白，当Cas蛋白与称为CRSPR RNA(crRNA)和反式激活crRNA(tracrRNA)的两种RNA形成复合物时，Cas蛋白形成活性内切核酸酶或切口酶。
本发明中术语“引导RNA”指示能够与Cas蛋白形成复合物并将Cas蛋白引导至靶DNA的靶DNA特异性RNA。
在本发明中，上述引导RNA可以通过融合crRNA和tracrRNA的基本部分，由CRSPRRNA(CrRNA)和反式激活crRNA(TracrRNA)或单链RNA(SgRNA)两种RNA制成。
上述引导RNA可以是包括crRNA和tracrRNA的双重RNA(daul RNA)。如果上述RNA包括crRNA和tracrRNA的基本部分和靶互补部分，则任何引导RNA都能够用于本发明。上述crRNA能够与靶DNA杂交。
上述引导RNA能够在单链引导RNA的5'末端或双重RNA中crRNA的5'末端包括一个或多个另外的核苷酸。
理想地，上述引导RNA能够单链引导RNA的5'末端或双重RNA中crRNA的5'末端包括两个另外的鸟嘌呤核苷酸。引导RNA能够以RNA或者编码引导RNA的DNA形式被递送至细胞或生物体。引导RNA是能够被分离的RNA，包含在病毒载体中的RNA，或者在载体中被编码。理想地，上述载体不受限制，但可以是病毒载体、质粒载体或农杆菌载体。
编码引导RNA的DNA可以是包括编码引导RNA的DNA序列的载体。例如，通过转染包括分离的引导RNA或编码引导RNA的序列和启动子的质粒DNA，可将导向RNA递送至细胞或生物体。根据其他方法，可以通过使用病毒介导的基因递送将引导RNA递送至细胞或生物体。
当引导RNA以分离的RNA形式转染到细胞或生物体中时，可以通过使用行业中已知的任何体外转录系统进行体外转录来制备引导RNA。理想地，将导向RNA以分离的RNA的形式而不是以包括编码引导RNA的序列的质粒的形式递送至细胞。在本发明中，术语“分离的RNA(isolated RNA)”可以被“裸露RNA(naked RNA)”代替。因为分离的RNA不需要克隆过程，可以节省成本和时间。然而，不排除使用质粒DNA或病毒介导的基因递送用于引导RNA转染。
本发明提供通过本发明的方法制备的包括货物蛋白的外泌体。
另一方面，本发明提供通过上述方法产生的包含cre重组酶的外泌体。
另一方面，本发明提供通过上述方法制备的包含Cas9蛋白的外泌体。
另一方面，本发明提供通过上述方法产生的包含GBA(β-葡糖脑苷脂酶)蛋白的外泌体。
另一方面，本发明提供通过上述方法产生的包含过氧化物氧化还原酶(Prx)I或II蛋白的外泌体。
另一方面，本发明提供通过上述方法产生的包括抑制NF-kB的蛋白的外泌体。
另一方面，本发明提供通过上述方法制备的包含Bax(Bcl-2相关的X蛋白)蛋白的外泌体。
通过上述方法制备的外泌体包含由外泌体特异性标记物和第一种光特异性结合蛋白组成的在外泌体质膜上的融合蛋白(第一融合蛋白)和由货物蛋白和可以与第一光学特异性结合蛋白缀合的第二光学特异性结合蛋白组成的另一融合蛋白(第二融合蛋白)。因此，当将这种外泌体作用于靶组织细胞时，包含在外泌体中的第二融合蛋白可以通过质膜融合而递送至靶组织细胞的胞质溶胶。
包含货物蛋白质的所述外泌体可用于体内各种疾病的治疗。例如，制备包含作为货物蛋白表现出抗癌活性的蛋白聚合物(例如抗体等)的外泌体，然后将其作用于癌细胞。也就是说，外泌体可以用作比常规脂质体更好的起作用的生物相容性抗癌剂。
本发明还提供了用于预防和治疗炎症性疾病的药物组分，包括具有NF-κB抑制蛋白的外泌体。
上述炎症性疾病不受限制，但优选地以过敏、皮炎、特应症、结膜炎、牙周炎、鼻炎、中耳炎、咽喉炎、扁桃体炎、肺炎、胃溃疡、胃炎、克罗恩氏病(Crohn’s disease)、结肠炎、痛风、强直性脊柱炎、风湿热、狼疮、纤维肌痛、银屑病关节炎、骨关节炎、类风湿性关节炎、肩周炎、腱炎、腱鞘炎、腱周炎、肌炎、肝炎、膀胱炎、肾炎、干燥综合征(sjogren’s syndrome)、多发性硬化症、急慢性炎症性疾病、败血症和溃疡性结肠炎等。
在本发明的实验性实施例中，本发明人证实了用超阻遏物-IκB:EXPLOR预处理HeLa细胞来抑制由TNF-α激活的NF-κB向核的转移，以验证由TNF-α介导的炎症抑制效果(图43.左)。另外，证实了TNF-α激活的NF-κB的DNA结合受到抑制(图43右)。另外，本发明人证实了在3次眼球后注射胶原蛋白诱导关节炎的小鼠模型中关节炎的症状减轻，以验证炎症抑制效果，因此本发明中的超阻遏物IκB:EXPLOR可以用作药物组分用于预防和治疗炎症性疾病。
本发明还提供了用于预防和治疗癌症的药物组分，包括包含Bax(Bcl-2相关X蛋白)的外泌体。
上述癌症不受限制，但优选实例为乳腺癌、结肠癌、肺癌、小细胞肺癌、胃癌、肝癌、血癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头或颈癌、皮肤或脉络膜黑色素瘤、眼癌、腹膜癌、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门癌和宫颈癌等。
在本发明的实验性实施例中，本发明人证实了用Bax::EXPLOR预处理HeLa细胞增加了细胞色素c的释放，由此可以将Bax:EXPLOR用作用于预防和治疗癌症的药物组分。
本发明还提供了用于抗氧化的药物组分，包括含有过氧化物氧化还原酶(Prx)I或II的外泌体。
另外，本发明提供了包括含有过氧化物氧化还原酶(Prx)I或II的外泌体的药物组分，用于预防和治疗活性氧类疾病，以癌症、动脉硬化症、呼吸系统疾病、骨质疏松症、肥胖症和退行性痴呆症等为例。
另外，本发明提供了用于抗氧化的化妆品组分，包括具有过氧化物氧化还原酶(Prx)I或II的外泌体。
另外，本发明提供了用于皮肤抗衰老的化妆品组分，包括具有过氧化物氧化还原酶(Prx)I或II的外泌体。
在本发明的实验性实施例中，本发明人证实了用Prx I/II::EXPLOR预处理HeLa细胞在统计学上显著抑制由氧化应激引起的细胞毒性，以验证了对H2O2诱导氧化应激引起的细胞毒性的抑制效果，因此PrxI/II::EXPLOR可用作药物组分用于抗氧化或预防和治疗活性氧，或用作化妆品成分用于皮肤的抗氧化或抗衰老。
本发明还提供了用于创建靶基因的条件敲除等位基因的包括具有Cre重组酶的外泌体的组分。
在本发明的实验性实施例中，本发明人通过在将pCAG-loxP-STOP-loxP-ZsGreen编码DNA转染到HT1080和HeLa细胞中之后检测ZsGreen报告蛋白表达，证实了Cre::EXPLOR处理的HT1080细胞和HeLa细胞中ZsGreen报告蛋白的表达与pCMV-Cre载体转染作为阳性对照的结果相同，以验证了Cre重组酶的作用(图19a和19b)。另外，本发明人能够通过实施与上述相同的实验证实ZsGreen在Cre:EXPOR处理的原代小鼠胚胎神经元上的表达(图20)。而且，本发明人证实了在pCAG-lowP-STOP-loxP-eNpHR3.0-EYFP转基因小鼠腹外注射Cre::EXPLOR后，EYFP在Cre::EXPLOR处理组上表达，以在体内验证Cre-EXPLOR功能(图21)。此外，证实了在免疫组化结果中Cre::EXPLOR主要通过合并神经元区域靶向小鼠脑中神经元，以验证Cre::EXPLOR靶向细胞(图22)，并且因此Cre::EXPLOR可以用作用于创建靶基因条件敲除等位基因的组分。
本发明还提供了用于工程化DNA序列的组分，包括具有Cas9蛋白和靶DNA特异性引导RNA(gRNA)的外泌体。
前述组分不受限制，但优选诱导在正常序列上的突变或校正突变。突变可以自然发生的突变或致病微生物诱导的突变。换句话说，当检测到致病微生物并且清楚生物样品被感染时，突变是由致病微生物的感染引起的。致病微生物不受限制，但可以是病毒或细菌。
在本发明的实验性实施例中，本发明人证实了可以高产率制备包括CRISPR/Cas9蛋白的外泌体。
本发明还提供了用于治疗戈谢病的药物组分，包括包含β-葡糖脑苷脂酶(GBA)的外泌体。
在本发明的实验性实施例中，本发明人证实了通过GBA::EXPLOR处理来自戈谢病患者的细胞可以恢复β-葡糖脑苷脂酶(GBA)的活性(图30)，因此GBA::EXPLOR可以用作治疗戈谢病的药物成分。
根据本发明制备包含货物蛋白的外泌体的方法，可以高产率制备包含货物蛋白的外泌体。此外，货物蛋白呈现为与外泌体膜分离，因此可以广泛应用于治疗疾病。
发明方式
如以下实施例所示，本发明的实际和目前优选的实施方式是说明性的。然而，应该认识到，本领域技术人员在考虑到本公开的情况下，可以在本发明的精神和范围内进行修改和改进。
实施例
实施例1：制备外泌体
＜1-1＞证实CIBN和CRY2的结合以产生外泌体
将包含CIBN-EGFP-CD9基因的PcDNA3.1(+)载体和包含mCherry-CRY2基因的pcDNA3.1(+)载体在无光条件下导入HEK293T细胞(外泌体产生细胞)，然后将培养24小时。将培养基换成无血清培养基，然后再继续培养48小时。培养完成后，用波长为460～490nm的蓝色光照射细胞。通过使用共聚焦显微镜确认蓝色光照射之前和之后mCherry中显示的红色荧光的位置(图7)。
图7是荧光图像，说明了在导入CIBN-EGFP-CD9基因和mCherry-CRY2基因的转化HEK293T细胞中，根据蓝光照射，mCherry蛋白在细胞内位置的变化。如图7所示，在照射可引起光特异性结合蛋白CIBN和CRY2结合的蓝光之前，mCherry蛋白均匀分布在胞质溶胶中。然而，在照射蓝光后，mCherry蛋白质浓缩在膜中。经分析这种mCherry蛋白聚簇是由光特异性结合蛋白CIBN和CRY2的结合引起的。
＜1-2＞证实用于产生外泌体的GIGANTEA和FKF1的结合
在本实施例中使用包含GIGANTEA-EGFP-CD9基因的PcDNA3.1(+)载体和包含mCherry-FKF1LOV基因的pcDNA3.1(+)载体。通过与实施例<1-1>中描述的相同的方式确认细胞内外泌体。(上面的FKF1LOV中的LOV是光-氧-电压结构域的缩写，其表示在FKF1蛋白质中通过光与其他蛋白质结合的结构域，所以FKF1和FKF1LOV实际上在本文中是相同的)。
类似于实施例<1-1>，如图12所示，在照射可引起光特异性结合蛋白GIGANTEA和FKF1结合的蓝光之前，mCherry蛋白均匀地分布在胞质溶胶中。然而，在照射蓝光后，mCherry蛋白质在膜中浓缩。经分析这种mCherry蛋白聚簇是由光特异性结合蛋白GIGANTEA和FKF1的结合引起的。
实施例2：外泌体的产生和光强度对外泌体产生的影响
将分别包含CIBN-EGFP-CD9基因和mCherry-CRY2基因的各表达载体在波长为460nm，强度为0、5、20、50和200μW的LED光下导入HEK293T细胞中，随后培养24小时。然后，将培养基更换为无血清培养基，然后再培养48小时。培养完成后，分离培养基，离心(3000×g，15分钟)以获得不含细胞碎片的上清液。将5倍上清液的体积的ExoQuick-TC外泌体沉淀溶液(System Biosciences，Mountain View，California，USA)加入到所得上清液中。混合后，进行离心(1500×g，30分钟)以获得沉淀的外泌体。将获得的外泌体悬浮于PBS中，形成外泌体悬浮液。使用装有27-G针的注射器，用0.2μm过滤器过滤外泌体悬浮液。结果，获得单一大小的外泌体(图8)。然后，使用裂解缓冲液制备外泌体裂解物，随后进行免疫印迹以比较外泌体中mCherry蛋白的量(图9)。
图9是免疫印迹分析图像，示出了根据蓝光强度测量在外泌体中捕获的货物蛋白(mCherry蛋白)含量变化的结果。如图9所示，当用20～50μW强度的蓝光照射细胞时，外泌体中货物蛋白mCherry的量最高。从上述结果可以证实，在光特异性结合蛋白的结合过程中通过控制照射到细胞的光的强度，可以调节外泌体中捕获的货物蛋白质的含量。
实施例3：外泌体处理的效果
将分别包含CIBN-EGFP-CD9基因和mCherry-CRY2基因的各表达载体在波长为460nm，强度为50μW的LED光下导入HEK293T细胞中，随后通过与实施例2相同的方式提取外泌体。用提取的外泌体以250μl/ml的浓度处理HT1080细胞24小时。通过加入包含4％PFA和0.01％GA的0.1M磷酸盐缓冲液(pH7.4)将HT1080细胞固定在10％明胶凝胶上。通过使用液氮将附着在明胶凝胶上的细胞冷却一天。在-120℃下，用低温超薄切片机切取45nm薄切片。用抗mCherry抗体和蛋白A-金免疫染色薄切片。用Tecnai G2 Spirit Twin TEM观察mCherry蛋白(图10)。
图10是电子显微镜图，其显示了在用包含货物蛋白(mCherry)的外泌体处理靶细胞(HT1080)后在靶细胞中导入货物蛋白的研究结果，其中左边表示未用外泌体处理的靶细胞，右边表示用外泌体处理的靶细胞。如图10所示，证实了当用本发明的外泌体处理靶细胞时，货物蛋白被转移到靶细胞中。
实施例4：具有货物蛋白的外泌体的分析
将分别包含CIBN-EGFP-CD9基因和mCherry-CRY2基因的各表达载体在波长为460nm，强度为50μW的LED光下导入HEK293T细胞，随后通过与实施例2相同的方式提取外泌体。用提取的外泌体以250μl/ml的浓度处理HT1080细胞24小时。然后，在荧光显微镜下证实在mCherry蛋白质中的红色荧光，并且通过LDH细胞死亡测定法比较用外泌体处理的细胞与未用外泌体处理的细胞之间死细胞的比例(图11)。
图11是一组荧光图像(a)，说明了用包含货物蛋白(mCherry蛋白)的外泌体处理靶细胞(HT1080)之后，在靶细胞中导入货物蛋白的研究结果；以及图表(b)，说明了经过外泌体处理诱导的凋亡细胞比率的比较结果。如图11所示，证实了细胞凋亡不是由外泌体处理诱导的
实施例5：外泌体的产生以及货物蛋白进入产生的外泌体的导入效率的比较
＜5-1＞外泌体产生效率的证实
为了比较本发明与常规方法产生的外泌体和货物蛋白进入由此产生的外泌体的导入效率，通过测定其中的荧光素酶活性来研究外泌体产生细胞中货物蛋白的表达。
根据常规方法，使用为外泌体负载技术(XP)设计的商购载体XPACK(SystemsBiosciences)将XPACK-萤光素酶-mCherry导入HEK293T细胞。另一方面，根据本发明方法，将荧光素酶-mCherry-CRY2和CIBN-EGFP-CD9导入HEK293T细胞(EXPLOR)中。然后，测定两种细胞中的萤光素酶活性以比较两种方法的效率。根据制造商说明书(荧光素酶测定试剂，Promega)测定萤光素酶活性。绘制结果标准曲线，然后定量计算细胞中外泌体的数量。
如图14所示，证实了使用本发明的光特异性结合蛋白CIBN和CRY2的方法进入外泌体的导入效率显著高于常规方法(XP)(图14)。
＜5-2＞货物蛋白在产生的外泌体中的表达
将实施例<5-1>的细胞培养72小时，随后提取外泌体(Exoquick-TC，Systemsbiosciences)。通过测量其中的萤光素酶活性间接比较通过常规方法(XP)或本发明方法分离的外泌体中包含的货物蛋白质的浓度。如图15所示，证实了与常规方法相比本发明方法可以产生包含显著大量货物蛋白的外泌体(图15)。
＜5-3＞货物蛋白导入效率的比较
基于实施例<5-1>和<5-2>中测量的荧光素酶活性，通过以下数学公式计算货物蛋白的导入效率(E)。
[数学公式1]
E＝产生的外泌体中荧光素酶活性测量值/外泌体产生细胞中荧光素酶活性测量值
如图15所示，证实了使用本发明的CRY2和CIBN的结合产生的外泌体的效率是其他比较组的4至120倍高(图15)。
实施例6：外泌体向靶细胞转移效率的比较
为了比较外泌体转移效率，用包含货物蛋白的外泌体处理靶细胞。特别地，用5×109个外泌体处理HeLa细胞24小时，然后测量细胞中表达的荧光强度。如图16所示，证实本发明外泌体(EXPLOR)中的荧光强度显著地高(图16)。
因此，证实了使用本发明外泌体的方法可以更有效地将货物蛋白质递送至靶细胞。
实验性实施例
实验性实施例1：MMP(基质金属蛋白酶)
评估了在488nm波长蓝光下在表达CIBN-EGFP-CD9和MMPs-mCherry-Cry2的细胞中CIBN与CRY2的结合以及外泌体内MMP的负载。
为了大量产生负载MMPs的外泌体，建立了稳定表达CIBN-EGFP-CD9基因和MMP-mCherry-CRY2基因的细胞，并通过切向流过滤(TFF)法从培养上清液中分离纯化外泌体。
在靶细胞中对负载MMP的外泌体进行功能性分析：
用负载MMP的外泌体处理靶细胞以评估功能性酶活性。
通过腹腔内或静脉内方式向动物模型给药负载MMP的外泌体，以显示治疗效果。
实验性实施例2：TIMP(金属蛋白酶组织抑制剂)
评估了在488nm波长蓝光下在表达CIBN-EGFP-CD9和TIMPs-mCherry-Cry2的细胞中CIBN与CRY2的结合以及外泌体内TIMPs的负载。
为了大量产生负载TIMPs的外泌体，建立了稳定表达CIBN-EGFP-CD9基因和TIMPs-mCherry-CRY2基因的细胞，并通过切向流过滤(TFF)法从培养上清液中分离纯化外泌体。
在靶细胞中对负载TIMP的外泌体进行功能性分析：
用负载TIMPs的外泌体处理靶细胞以评估功能性酶活性。
通过腹腔内或静脉内方式向动物模型给药负载TIMP的外泌体，以显示治疗效果。
实验性实施例3：胱天蛋白酶
评估了在488nm波长蓝光下在表达CIBN-EGFP-CD9和胱天蛋白酶-mCherry-Cry2的细胞中CIBN与CRY2的结合以及外泌体内胱天蛋白酶的负载。
为了大量产生负载胱天蛋白酶的外泌体，建立了稳定表达CIBN-EGFP-CD9基因和胱天蛋白酶-mCherry-CRY2基因的细胞，并通过切向流过滤(TFF)法从培养上清液中分离纯化外泌体。
在靶细胞中对负载胱天蛋白酶的外泌体进行功能性分析：
用负载胱天蛋白酶的外泌体处理靶细胞以评估功能性酶活性。
通过腹腔内或静脉内方式向动物模型给药负载胱天蛋白酶的外泌体，以显示治疗效果。
实验性实施例4：组织蛋白酶
评估了在488nm波长蓝光下在表达CIBN-EGFP-CD9和组织蛋白酶-mCherry-Cry2的细胞中CIBN与CRY2的结合以及外泌体内组织蛋白酶的负载。
为了大量产生负载组织蛋白酶的外泌体，建立了稳定表达CIBN-EGFP-CD9基因和组织蛋白酶-mCherry-CRY2基因的细胞，并通过切向流过滤(TFF)法从培养上清液中分离纯化外泌体。
在靶细胞中对负载组织蛋白酶的外泌体进行功能性分析：
用负载组织蛋白酶的外泌体处理靶细胞以评估功能性酶活性。
通过腹腔内或静脉内向动物模型给药负载组织蛋白酶的外泌体，以显示治疗效果。
实验性实施例5：Cre重组蛋白酶
＜5-1＞产生负载Cre重组酶的外泌体(Cre::EXPLOR)
A.证实外泌体中的Cre重组酶
本发明人证实了CIBN和CRY2在表达CIBN-EGFP-CD9和Cre-mCherry-Cry2的细胞中的结合，以验证外泌体负载具有记录为SEQ ID NO：9的氨基酸的Cre重组酶。特别是，在无光条件下使用包括CIBN-EGFP-CD9基因和Cre-mCherry-CRY2基因的转染pcDNA3.1(+)载体培养24小时后，外泌体产生细胞HEK293T在Dulbecco改良不含胎牛血清(FBS)的Eagle培养基(DMEM)中再培养48小时。在培养结束后，通过共聚焦显微镜研究来自mCherry的红色荧光在488nm波长的蓝光照射之前和之后的位置。这个实验进行了多于五次。
根据结果，证实了Cre-mCherry-CRY2(红色)和CIBN-EGFP-CD9之间的结合(图18)，从而验证了外泌体对Cre重组酶的负载。
B.产生负载Cre重组酶的外泌体(Cre::EXPLOR)
本发明人进行了以下实验以获得负载Cre重组酶的外泌体。
特别地，将包括CIBN-EGRP-CD9基因和Cre-mCherry-CRY2基因的载体转染到外泌体产生细胞HEK293T上，并将这些细胞培养24小时。培养24小时后，将细胞培养基换成不含胎牛血清(FBS)，并且在488nm波长50μW功率的蓝光下再培养48小时。培养结束后，通过离心(2000×g，15分钟)从分离的培养基中产生除去细胞碎片的上清液。向上清液加入5倍体积的ExoQuick-TC外泌体沉淀溶液(System Biosciences，Mountain View，California，USA)，并在4℃下混合18小时。通过离心(1500×g，30分钟)上述上清液和ExoQuick-TC的混合物来悬浮外泌体小球以获得悬浮的外泌体(图8)。
此外，将稳定表达CIBN-EGFP-CD9基因和CRE-mCherry-CRY 2基因的外泌体产生细胞HEK293T，在488nm波长50μW功率的蓝光下在无胎牛血清的培养基中培养48～72h。培养结束后，通过离心(2000×g，15分钟)从分离的培养基中产生除去细胞碎片的上清液。为了从上清液中去除大于200nm的颗粒，用0.2μl PES膜(Corning)进行过滤。在相同的上清液中应用切向流过滤(TFF)方法去除小于20nm的颗粒，从滤液中浓缩并精制外泌体。在TFF中使用Vivaflow 50-100kDa PES膜(Sartorius)。在TFF的1.5～2个空气压力下，通过旋转滤液浓缩和精制外泌体。然后，通过在AmiconUltra-0.5(100kDa)(Millipore)过滤器上离心(10000～14000g，5分钟)除去外泌体浓缩物。最后，通过与根据实验目的优选的缓冲液反向离心(10000～14000g，5分钟)获得外泌体。
＜5-2＞通过负载Cre重组酶的外泌体(Cre::EXPLOR)证实Cre重组酶功能
A.在HT1080和HeLa细胞上证实Cre::EXPLOR功能
Cre重组酶具有在loxP区域上重组DNA的功能。本发明人进行了以下实验来研究Cre::EXPLOR的功能。
特别地，将pCAG-loxP-STOP-loxP-ZsGreen编码的DNA转染至HT1080和HeLa细胞并在6小时后洗涤。然后用0.25mg/ml Cre::EXPLOR或阴性::EXPLOR处理或转染pCMV-Cre载体。培养48小时后，研究具有绿色荧光的ZsGreen的表达。在Cre::EXPLOR处理的HT1080和HeLa细胞中证实了ZsGreen的表达，这不同于阴性::EXPLOR处理的HT1080和HeLa细胞，并且该ZsGreen的表达与阳性对照中的pCMV-Cre载体转染的结果相似(图19a和19b)。
B.证实Cre::EXPLOR在原代大鼠胚胎神经元上的功能
进行以下实验以研究Cre::EXPLOR在原代大鼠胚胎神经元上的功能。
特别地，将pCAG-loxP-STOP-loxP-ZsGreen编码DNA转染至原代大鼠胚胎神经元并在6小时后洗涤。然后将它们在0.15mg/ml Cre:EXPLOR上培养。培养48小时后，研究具有绿色荧光的ZsGreen的表达。该实验进行至少三次重复，由此证实在Cre::EXPLOR处理的原代大鼠胚胎神经元上ZsGreen的表达(图20)。
C.证实Cre::EXPLOR在转基因小鼠上的体内功能
本发明人进行以下实验以验证Cre:EXPLOR在体内的功能。
特别地，通过腹腔注射将50μl CreEXPLOR(10mg/mL)注射到pCAG-loxP-STOP-loxP-eNpHR3.0-EYFP转基因小鼠中。注射后，4％甲醛固定的脑切片通过荧光显微镜成像。绿色荧光指示eNpHR3.0-EYFP的表达，蓝色荧光指示细胞核。通过共聚焦显微镜研究Cre::EXPLOR处理小鼠的未定带(ZI)中神经元上eNpHR3.0-EYFP的表达，并因此在Cre::EXPLOR处理的pCAG-loxP-STOP-loxP-eNpHR3.0-EYFP转基因小鼠组中证实了EYFP的表达(图21)。
D.在转基因小鼠上证实Cre::EXPLOR靶向细胞
为了证实Cre::EXPLOR在上述体内实验中的特异性细胞靶向，进行了免疫组织化学实验。用NeuN抗体特异性染色神经元，用GFAP抗体特异性染色星形胶质细胞，由此通过研究融合区主要是神经元，证实了Cre:EXPLOR特异性地靶向小鼠脑中的神经元(图22)。
实验性实施例6：CRISPR-Cas9
＜6-1＞产生负载Cas9的外泌体(Cas9::EXPLOR)
A.证实在外泌体内Cas9
本发明人研究了表达CIBN和CRY2的CIBN-EGFP-CD9和Cas9-mCherry-CRY2的结合，以证实记录在氨基酸SEQ ID NO：10中的Cas9的负载。
如图23所示，Cas9-mCherry-CRY2插入的pcDNA3.1(+)载体具有11,890个碱基对的长度，并且三个蛋白质部分由在5末端具有NLS序列的Cas9、具有45碱基对接头序列的mCherry和隐花色素2组成，分别具有45和27个碱基对的接头序列。每个蛋白质部分长度分别为4194、699和1497个碱基对。
特别地，在无光条件下使用包括CIBN-EGFP-CD9基因和Cre-mCherry-CRY2基因的转染pcDNA3.1(+)载体培养24小时后，外泌体产生细胞HEK293T在Dulbecco改良的不含胎牛血清(FBS)的Eagle培养基(DMEM)中再培养48小时。在培养结束后，通过共聚焦显微镜研究在488nm波长的蓝光照射之前或之后来自mCherry的红色荧光的位置。这个实验进行超过五次。由此通过证实在蓝光刺激下CIBN-EGFP-CD9与Cas9-mCherry-CRY2结合(图23)，将Cas9蛋白负载到外泌体中。
B.产生负载Cas9的外泌体(Cas9::EXPLOR)
本发明人进行了以下实验以获得负载Cas9的外泌体。
特别地，将包含CIBN-EGRP-CD9基因和Cre-mCherry-CRY2基因的载体转染到外泌体产生细胞HEK293T上，并将这些细胞培养24小时。培养24小时后，将细胞培养基换成不含胎牛血清(FBS)，并且在488nm波长50μW功率的蓝光下再培养48小时。培养结束后，通过离心(2000×g，15分钟)从分离的培养基中产生除去细胞碎片的上清液。向上清液加入5倍体积的ExoQuick-TC外泌体沉淀溶液(System Biosciences，Mountain View，California，USA)，并在4℃下混合18小时。通过离心(1500×g，30分钟)上述上清液和ExoQuick-TC的混合物来悬浮外泌体小球以获得悬浮的外泌体(图8)。
此外，将稳定表达CIBN-EGFP-CD9基因和CRE-mCherry-CRY 2基因的外泌体产生细胞HEK293T，在488nm波长50μW功率的蓝光下在无胎牛血清的培养基中培养48～72h。培养结束后，通过离心(2000×g，15分钟)从分离的培养基中产生除去细胞碎片的上清液。为了从上清液中去除大于200nm的颗粒，用0.2μl PES膜(Corning)进行过滤。在相同的上清液中应用切向流过滤(TFF)方法去除小于20nm的颗粒，从滤液中浓缩并精制外泌体。在TFF中使用Vivaflow 50-100kDa PES膜(Sartorius)。在TFF的1.5～2个空气压力下，通过旋转滤液浓缩和精制外泌体。然后，通过在Amicon Ultra-0.5(100kDa)(Millipore)过滤器上离心(10000～14000g，5分钟)将外泌体浓缩物中液体除去。最后，通过与根据实验目的优选的缓冲液反向离心(10000～14000g，5分钟)获得外泌体。评估外泌体中Cas9的量(图25)。
在靶细胞中对负载Cas9的外泌体进行功能性分析：
用负载Cas9的外泌体处理靶细胞以显示功能性酶活性。
通过腹腔内或静脉内向动物模型给药负载Cas9的外泌体，以显示治疗效果。
实验性实施例7：胱天蛋白酶激活的DNA酶(CAD)
评估了在488nm波长蓝光下在表达CIBN-EGFP-CD9和CAD-mCherry-Cry2的细胞中CIBN与CRY2的结合以及外泌体内CAD的负载。
为了大量产生负载CAD的外泌体，建立了稳定表达CIBN-EGFP-CD9基因和CAD-mCherry-CRY2基因的细胞，并通过切向流过滤(TFF)法从培养上清液中分离纯化外泌体。
在靶细胞中对负载CAD的外泌体进行功能性分析：
用负载CAD的外泌体处理靶细胞以显示功能活性。
通过腹腔内或静脉内向动物模型给药负载CAD的外泌体，以显示治疗效果。
实验性实施例8：β-葡糖脑苷脂酶
＜8-1＞负载产生GBA的外泌体(GBA::EXPLOR)
A.证实外泌体中的GBA
本发明人研究了表达CIBN与CRY2的CIBN-EGFP-CD9和Cas9-mCherry-CRY2的结合，以证实记录在氨基酸SEQ ID NO：12中的GBA的负载。
[表2]
特别地，在无光条件下培养具有包含CIBN-EGFP-CD9基因和Cre-mCherry-CRY2基因的转染的pcDNA3.1(+)载体的外泌体产生细胞HEK293T 24小时后，外泌体产生细胞HEK293T在Dulbecco改良不含胎牛血清(FBS)的Eagle培养基(DMEM)中再培养48小时。在培养结束后，通过共聚焦显微镜研究来自mCherry的红色荧光在488nm波长的蓝光照射前后的位置。这个实验进行超过五次。由此通过证实在蓝光刺激下CIBN-EGFP-CD9与Cas9-mCherry-CRY2结合(图26)，将GBA蛋白负载到外泌体中。
B.产生负载GBA的外泌体(GBA::EXPLOR)
本发明人进行了以下实验以获得负载GBA的外泌体。
特别地，将包含CIBN-EGRP-CD9基因和Cre-mCherry-CRY2基因的载体转染到外泌体产生细胞HEK293T上，并将这些细胞培养24小时。培养24小时后，将细胞培养基换成不含胎牛血清(FBS)，并且在488nm波长50μW功率的蓝光下另外培养48小时。培养结束后，通过离心(2000×g，15分钟)从分离的培养基中产生除去细胞碎片的上清液。向上清液加入5倍体积的ExoQuick-TC外泌体沉淀溶液(System Biosciences，Mountain View，California，USA)，并在4℃下混合18小时。通过离心(1500×g，30分钟)上述上清液和ExoQuick-TC的混合物来悬浮外泌体小球以获得悬浮的外泌体(图8)。
此外，将稳定表达CIBN-EGFP-CD9基因和CRE-mCherry-CRY 2基因的外泌体产生细胞HEK293T，在488nm波长50μW功率的蓝光下在无胎牛血清的培养基中培养48～72h。培养结束后，通过离心(2000×g，15分钟)从分离的培养基中产生除去细胞碎片上清液。为了从上清液中去除大于200nm的颗粒，用0.2μl PES膜(Corning)进行过滤。在相同的上清液中应用切向流过滤(TFF)方法去除小于20nm的颗粒，从滤液中浓缩并精制外泌体。在TFF中使用Vivaflow 50-100kDa PES膜(Sartorius)。在TFF的1.5～2个空气压力下，通过旋转滤液浓缩和精制外泌体。然后，通过在AmiconUltra-0.5(100kDa)(Millipore)过滤器上离心(10000～14000g，5分钟)将外泌体浓缩物中液体除去。最后，通过与根据实验目的优选的缓冲液反向离心(10000～14000g，5分钟)获得外泌体。
＜8-2＞负载GBA的外泌体产生细胞中GBA表达的测定
本发明人进行蛋白印迹以测定负载GBA的外泌体中GBA的表达。
特别地，将包含CIBN-EGRP-CD9基因和GBA-mCherry-CRY2基因的载体转染到外泌体产生细胞HEK293T上，并将这些细胞培养24小时。使用MPER(哺乳动物蛋白提取试剂)裂解HEK293T细胞，并通过蛋白印迹分析蛋白。将大鼠原代星形胶质细胞、人原代星形胶质细胞和源自戈谢病患者的成纤维细胞(其中由于GBA基因异常引起β-葡糖脑苷脂酶缺陷)裂解以进行蛋白印迹并通过蛋白印迹分析蛋白。
结果，除源自戈谢病患者的成纤维细胞外，在包括CIBN-EGRP-CD9基因和GBA-mCherry-CRY2基因的HEK293T细胞、大鼠原代星形胶质细胞和人原代星形胶质细胞中观察到内源性GBA(图27)。
另外，在包括CIBN-EGRP-CD9基因和GBA-mCherry-CRY2基因的HEK293T细胞中观察到GBA-mCherry-CRY2融合蛋白(151kDa)，这表明GBA-mCherry-CRY2融合蛋白在负载GBA的外泌体中表达良好(图28)。
＜8-3＞通过负载GBA的外泌体(GBA::EXPLOR)证实GBA对源自戈谢病患者细胞的活性
A.在外泌体内GBA的酶活性
本发明人进行了β-葡糖脑苷脂酶活性的实验，以研究外泌体内GBA的葡糖脑苷脂降解活性。
特别地，将包含CIBN-EGRP-CD9基因和Cre-mCherry-CRY2基因的载体转染到外泌体产生细胞HEK293T上，并将这些细胞培养24小时。培养24小时后，将细胞培养基换成不含胎牛血清(FBS)，并且在488nm波长50μW功率的蓝光下另外培养48小时。培养结束后，通过离心(2000×g，15分钟)从分离的培养基中产生除去细胞碎片的上清液。向上清液加入5倍体积的ExoQuick-TC外泌体沉淀溶液(System Biosciences，Mountain View，California，USA)，并在4℃下混合18小时。通过离心(1500×g，30分钟)上述上清液和ExoQuick-TC的混合物来悬浮外泌体小球以获得悬浮的外泌体。
此外，将稳定表达CIBN-EGFP-CD9基因和CRE-mCherry-CRY 2基因的外泌体产生细胞HEK293T，在488nm波长50μW功率的蓝光下在无胎牛血清的培养基中培养48～72h。培养结束后，通过离心(2000×g，15分钟)从分离的培养基中产生除去细胞碎片的上清液。为了从上清液中去除大于200nm的颗粒，用0.2μl PES膜(Corning)进行过滤。在相同的上清液中应用切向流过滤(TFF)方法去除小于20nm的颗粒，从滤液中浓缩并精制外泌体。在TFF中使用Vivaflow 50-100kDa PES膜(Sartorius)。在TFF的1.5～2个空气压力下，通过旋转滤液浓缩和精制外泌体。然后，通过在Amicon Ultra-0.5(100kDa)(Millipore)过滤器上离心(10000～14000g，5分钟)将外泌体浓缩物中液体除去。最后，通过反向离心(10000～14000g，5分钟)来获得外泌体。使用MPER(哺乳动物蛋白质提取试剂)裂解外泌体并分析蛋白。
与负载mCherry的外泌体相比，观察到负载GBA的GBA::EXPLOR的β-葡糖脑苷脂酶酶活性增加，从而证实了活性GBA负载到外泌体上(图29)。
B.β-葡糖脑苷脂酶(GBA)对源自戈谢病患者细胞的酶活性
本发明人进行了以下实验，以确认当用GBA::EXPLOR处理时β-葡糖脑苷脂酶对源自戈谢病患者细胞的酶活性的恢复。
以60mm培养皿中2×105个细胞的密度培养源自戈谢病患者成纤维细胞。然后，用mCherry::EXPLOR(2×109个外泌体)或GBA::EXPLOR(1.2×1010个外泌体)处理在无血清DMEM培养基中培养的源自戈谢病患者成纤维细胞。通过使用底物4-甲基伞形酮基-β-D-吡喃葡萄糖苷(4-MUG；Sigma)检测荧光来测定GBA-mCh-CRY2的水解活性。在包含50μl细胞裂解液的0.15％(v/v)Triton X-100(Sigma)、0.8％(w/v)牛磺胆酸钠(Sigma)和10mM 4-MUG的0.2ml柠檬酸磷酸缓冲液(pH 0.5)中进行酶反应。在37℃孵育1小时后，使用100ul的0.1M甘氨酸和0.1M NaOH(pH 10.3)停止酶活性。在365nm激发、460nm发射条件下测量酶反应产物4-甲基伞形酮(4-MU)。
结果，负载GBA的GBA::EXPLOR处理源自戈谢病患者细胞的β-葡萄糖苷酶活性得以恢复(图30)。
实验性实施例9：丝裂原活化激酶：p38MAP激酶
本发明人证实了在488nm波长蓝光下在表达CIBN-EGFP-CD9和p38MAP激酶-mCherry-Cry2的细胞中CIBN与CRY2的结合，并验证了p38MAP激酶在外泌体内的负载。
为了大量产生负载p38MAP激酶的外泌体，建立了稳定表达CIBN-EGFP-CD9基因和p38MAP激酶-mCherry-CRY2基因的细胞，并通过切向流过滤(TFF)法从培养上清液中分离纯化外泌体。
在靶细胞中对负载p38MAP激酶的外泌体进行功能性分析：
用负载p38MAP激酶的外泌体处理靶细胞以显示功能活性。
通过腹腔内或静脉内向动物模型给药负载p38MAP激酶的外泌体，以显示治疗效果。
实验性实施例10：抑制子kappa B激酶(IKK)
评估了在488nm波长蓝光下在表达CIBN-EGFP-CD9和IKK-mCherry-Cry2的细胞中CIBN与CRY2的结合以及外泌体内IKK的负载。
为了大量产生负载IKK的外泌体，建立了稳定表达CIBN-EGFP-CD9基因和IKK-mCherry-CRY2基因的细胞，并通过切向流过滤(TFF)法从培养上清液中分离纯化外泌体。
在靶细胞中对负载IKK的外泌体进行功能性分析：
用负载IKK的外泌体处理靶细胞以显示功能活性。
通过腹腔内或静脉内向动物模型给药负载IKK的外泌体，以显示治疗效果。
实验性实施例11：PTEN磷酸酶
本发明人证实了在488nm波长蓝光下在表达CIBN-EGFP-CD9和PTEN-Cry2的细胞中CIBN与CRY2的结合以及外泌体内PTEN的负载。
为了大量产生负载PTEN的外泌体，建立了稳定表达CIBN-EGFP-CD9基因和PTEN-CRY2基因的细胞(图31)，并通过切向流过滤(TFF)法从培养上清液中分离纯化外泌体。
在靶细胞中对负载PTEN的外泌体进行功能性分析：
用负载PTEN的外泌体处理靶细胞以显示功能活性。
通过腹腔内或静脉内向动物模型给药负载PTEN的外泌体，以显示治疗效果。
实验性实施例12：Janus激酶(JNK)
评估了在488nm波长蓝光下在表达CIBN-EGFP-CD9和JNK-mCherry-Cry2的细胞中CIBN与CRY2的结合以及外泌体内JNK的负载。
为了大量产生负载JNK的外泌体，建立了稳定表达CIBN-EGFP-CD9基因和JNK-mCherry-CRY2基因的细胞，并通过切向流过滤(TFF)法从培养上清液中分离纯化外泌体。
在靶细胞中对负载JNK的外泌体进行功能性分析：
用负载JNK的外泌体处理靶细胞以显示功能活性。
通过腹腔内或静脉内向动物模型给药负载JNK的外泌体，以显示治疗效果。
实验性实施例13：泛素连接酶
评估了在488nm波长蓝光下在表达CIBN-EGFP-CD9和泛素连接酶-mCherry-Cry2的细胞中CIBN与CRY2的结合以及外泌体内泛素连接酶的负载。
为了大量产生负载泛素连接酶的外泌体，建立了稳定表达CIBN-EGFP-CD9基因和泛素连接酶-mCherry-CRY2基因的细胞，并通过切向流过滤(TFF)法从培养上清液中分离纯化外泌体。
在靶细胞中对负载泛素连接酶的外泌体进行功能性分析：
用负载泛素连接酶的外泌体处理靶细胞以显示功能活性。
通过腹腔内或静脉内向动物模型给药负载泛素连接酶的外泌体，以显示治疗效果。
实验性实施例14：荧光素酶
本发明人证实了在488nm波长蓝光下在表达CIBN-EGFP-CD9和荧光素酶-mCherry-Cry2的细胞中CIBN与CRY2的结合以及外泌体内荧光素酶的负载(图32)。
为了大量产生负载荧光素酶的外泌体，建立了稳定表达CIBN-EGFP-CD9基因和荧光素酶-mCherry-CRY2基因的细胞，并通过切向流过滤(TFF)法从培养上清液中分离纯化外泌体。
基于荧光素酶分子数量，分析定量的萤光素酶活性(图33)。
实验性实施例15：过氧化物氧化还原酶
＜15-1＞产生负载Prx I或Prx II的外泌体(Prx I/II:EXPLOR)
A.证实外泌体中的Prx I/Prx II
本发明人研究了表达CIBN和CRY2的CIBN-EGFP-CD9和PrxI/II-mCherry-CRY2的结合，以证实记录在氨基酸SEQ ID NO：7或8中的Prx I或Prx II的负载。
特别地，在无光条件下使用包含CIBN-EGFP-CD9基因和PrxI/II-mCherry-CRY2基因的转染pcDNA3.1(+)载体培养24小时后，外泌体产生细胞HEK293T在Dulbecco改良不含胎牛血清(FBS)的Eagle培养基(DMEM)中额外培养48小时。在培养结束后，通过共聚焦显微镜研究来自mCherry的红色荧光在488nm波长的蓝光照射前后的位置。这个实验进行超过五次。由此确认蓝色光刺激下的Prx I/II蛋白质的聚集(图34)。因此，通过证实Prx I/II-mCherry-CRY2(红色)和CIBN-EGFP-CD9(绿色)的共定位(黄色)，将Prx I/II蛋白负载到外泌体中。
B.产生Prx I/II::EXPLOR
本发明人进行了以下实验以获得负载Prx I/II的外泌体。
特别地，将包含CIBN-EGRP-CD9基因和Prx I/II-mCherry-CRY2基因的载体转染到外泌体产生细胞HEK293T上，并将这些细胞培养24小时。培养24小时后，将细胞培养基换成不含胎牛血清(FBS)，并且在488nm波长50μW功率的蓝光下另外培养48小时。培养结束后，通过离心(2000×g，15分钟)从分离的培养基中产生除去细胞碎片的上清液。向上清液加入5倍体积的ExoQuick-TC外泌体沉淀溶液(System Biosciences，Mountain View，California，USA)，并在4℃下混合18小时。通过离心(1500×g，30分钟)上述上清液和ExoQuick-TC的混合物来悬浮外泌体小球以获得悬浮的外泌体(图8)。
＜15-2＞证实Prx I/II::EXPLOR对氧化应激诱导的细胞毒性的抑制效果
本发明人进行了以下实验以证实Prx I/II::EXPLOR对氧化应激诱导的细胞毒性的抑制效果。
特别地，在改变HeLa细胞的无血清培养基后，用100μg/mL的PrxI/II::EXPLOR处理并培养18小时。用H2O2(0、0.5、1mM)处理并继续培养8小时。将WST分析用于分析细胞活性。
由于Prx I/II::EXPLOR的预处理，氧化应激诱导的细胞毒性被显著抑制(图35)。
实验性实施例16：NF-κB
评估了在488nm波长蓝光下在表达CIBN-EGFP-CD9和NF-κB-mCherry-Cry2的细胞中CIBN与CRY2的结合以及外泌体内NF-κB的负载。
为了大量产生负载NF-κB的外泌体，建立了稳定表达CIBN-EGFP-CD9基因和NF-κB-mCherry-CRY2基因的细胞，并通过切向流过滤(TFF)法从培养上清液中分离纯化外泌体。
在靶细胞中对负载NF-κB的外泌体进行功能性分析：
用负载NF-κB的外泌体处理靶细胞以显示功能活性。
通过腹腔内或静脉内向动物模型给药负载NF-κB的外泌体，以显示治疗效果。
实验性实施例17：MyoD
本发明人证实了在488nm波长蓝光下在表达CIBN-EGFP-CD9和MyoD-mCherry-Cry2的细胞中CIBN与CRY2的结合(图36)，并验证了外泌体内MyoD的负载。
为了大量产生负载MyoD的外泌体，建立了稳定表达CIBN-EGFP-CD9基因和MyoD-mCherry-CRY2基因的细胞，并通过切向流过滤(TFF)法从培养上清液中分离纯化外泌体。
用负载MyoD的外泌体处理靶细胞以显示功能活性(图37)。
实验性实施例18：Tbx18(T-box转录因子18)
评估了在488nm波长蓝光下在表达CIBN-EGFP-CD9和Tbx18-mCherry-Cry2的细胞中CIBN与CRY2的结合以及外泌体内Tbx18的负载。
为了大量产生负载Tbx18的外泌体，建立了稳定表达CIBN-EGFP-CD9基因和Tbx18-mCherry-CRY2基因的细胞，并通过切向流过滤(TFF)法从培养上清液中分离纯化外泌体。
在靶细胞中对负载Tbx18的外泌体进行功能性分析：
用负载Tbx18的外泌体处理靶细胞以显示功能活性。
通过腹腔内或静脉内向动物模型给药负载Tbx18的外泌体，以显示治疗效果。
实验性实施例19：p53
本发明人证实了在488nm波长蓝光下在表达CIBN-EGFP-CD9和p53-mCherry-Cry2的细胞中CIBN与CRY2的结合(图38)以及外泌体内PTEN的负载(图39)。
为了大量产生负载p53的外泌体，建立了稳定表达CIBN-EGFP-CD9基因和p53-mCherry-CRY2基因的细胞，并通过切向流过滤(TFF)法从培养上清液中分离纯化外泌体。
用负载p53的外泌体处理靶细胞以显示转录活性(图40)。
通过腹腔内或静脉内向动物模型给药负载p53的外泌体，以显示治疗效果。
实验性实施例20：HMGB1
本发明人证实了在488nm波长蓝光下在表达CIBN-EGFP-CD9和HMGB1-mCherry-Cry2的细胞中CIBN与CRY2的结合以及外泌体内HMGB1的负载(图41)。
为了大量产生负载HMGB1的外泌体，建立了稳定表达CIBN-EGFP-CD9基因和HMGB1-mCherry-CRY2基因的细胞，并通过切向流过滤(TFF)法从培养上清液中分离纯化外泌体。
在靶细胞中对负载HMGB1的外泌体进行功能性分析：
用负载HMGB1的外泌体处理靶细胞以显示功能活性。
通过腹腔内或静脉内向动物模型给药负载HMGB1的外泌体，以显示治疗效果。
实验性实施例21：超阻遏物IκB
＜21-1＞产生负载超阻遏物IκB的外泌体(超阻遏物IκB:EXPLOR)
A.证实外泌体中的超阻遏物IκB
本发明人研究了表达CIBN和CRY2的CIBN-EGFP-CD9和超阻遏物IκB-mCherry-CRY2的结合，以证实记录在氨基酸SEQ ID NO：5中的超阻遏物IκB的负载。
特别地，在无光条件下培养具有包含CIBN-EGFP-CD9基因和超阻遏物IκB-mCherry-CRY2基因的转染pcDNA3.1(+)载体的外泌体产生细胞HEK293T24小时后，外泌体产生细胞HEK293T在Dulbecco改良不含胎牛血清(FBS)的Eagle培养基(DMEM)中额外培养48小时。在培养结束后，通过共聚焦显微镜研究来自mCherry的红色荧光在488nm波长的蓝光照射前后的位置。这个实验进行超过五次。由此确认蓝色光刺激下的超阻遏物IκB蛋白的聚集(图42)。因此，通过证实超阻遏物IκB-mCherry-CRY2(红色)和CIBN-EGFP-CD9(绿色)的共定位(黄色)，将超阻遏物IκB蛋白负载到外泌体中。
B.产生超阻遏物IκB::EXPLOR
本发明人进行了以下实验以获得负载超阻遏物IκB的外泌体。
特别地，将包含CIBN-EGRP-CD9基因和超阻遏物IκB-mCherry-CRY2基因的载体转染到外泌体产生细胞HEK293T上，并将这些细胞培养24小时。培养24小时后，将细胞培养基换成不含胎牛血清(FBS)，并且在488nm波长50μW功率的蓝光下另外培养48小时。培养结束后，通过离心(2000×g，15分钟)从分离的培养基中产生除去细胞碎片的上清液。向上清液加入5倍体积的ExoQuick-TC外泌体沉淀溶液(System Biosciences，Mountain View，California，USA)，并在4℃下混合18小时。通过离心(1500×g，30分钟)上述上清液和ExoQuick-TC的混合物来悬浮外泌体小球以获得悬浮的外泌体(图8)。
此外，将稳定表达CIBN-EGFP-CD9基因和CRE-mCherry-CRY 2基因的外泌体产生细胞HEK293T，在488nm波长50μW功率的蓝光下在无胎牛血清的培养基中培养48～72h。培养结束后，通过离心(2000×g，15分钟)从分离的培养基中产生除去细胞碎片的上清液。为了从上清液中去除大于200nm的颗粒，用0.2μl PES膜(Corning)进行过滤。在相同的上清液中应用切向流过滤(TFF)方法去除小于20nm的颗粒，从滤液中浓缩并精制外泌体。在TFF中使用Vivaflow 50-100kDa PES膜(Sartorius)。在TFF的1.5～2个空气压力下，通过旋转滤液浓缩和精制外泌体。然后，通过在Amicon Ultra-0.5(100kDa)(Millipore)过滤器上离心(10000～14000g，5分钟)将外泌体浓缩物中液体除去。最后，通过与根据实验目的优选的缓冲液反向离心(10000～14000g，5分钟)获得外泌体。
＜21-2＞证实超阻遏物IκB:EXPLOR对TNF-α介导的NF-κB活性抑制效果
本发明人进行了以下实验以证实使用超阻遏物IκB:EXPLOR的TNF-α介导的抗炎效果。
特别地，HeLa在100mg/mL mCherry:EXPLOR中或超阻遏物-IκB-mCherry:EXPLOR处理的培养基中培养3小时。然后，用TNF-α(10ng/mL)处理并继续孵育30分钟。用4％多聚甲醛固定后，用Alexa Fluor 488缀合抗体将NF-κBp65染色并使用共聚焦显微镜检查。为了测量p65/c-Rel(NF-kB)的结合活性，根据制造商说明书在TransAM NF-kB和AP-1测定试剂盒(ActiveMotif，Carlsbad，CA，USA)中使用核裂解物。数据呈现平均值±SEM(n＝3)，并使用Tukey's事后测试(Tukey’s post hoc test)进行应用，并通过ANOVA测试确定显著组(**，p<0.01)。
通过用超阻遏物IκB:EXPLOR对HeLa预处理，TNF-α激活的NF-κB转运至细胞核并抑制NF-κBDNA结合(图43)。
＜21-3＞证实超阻遏物IκB:EXPLOR对胶原诱导关节炎动物模型的抗炎效果
本发明人进行了以下实验以证实超阻抑子IκB:EXPLOR对胶原蛋白诱导关节炎小鼠模型的抗炎效果。
特别地，主要使用的类风湿性关节炎模型，胶原蛋白诱导关节炎小鼠模型是通过注射牛Ⅱ型胶原蛋白和佐剂到DBA/1的尾皮下组织免疫而发展的。每2天向两个胶原蛋白诱导关节炎小鼠模型进行4次眼球后注射超阻遏物IκB:EXPLOR。根据表3中列出的临床评分确定类风湿性关节炎症状的进展。平均临床评分是根据上述表格的来自小鼠足部的临床评分的平均值。
当超阻遏物IκB:EXPLOR眼球后注射到胶原蛋白诱导关节炎小鼠模型时，类风湿性关节炎小鼠表现出症状的减少(图44)。
[表3]
严重度评分 表型标志
0 没有红斑和肿胀的迹象
1 红斑和轻度肿胀局限于跗骨或踝关节
2 红斑和轻度肿胀从踝关节延伸至跗骨
3 红斑及中度肿胀从踝关节延伸至跖骨关节
4 红斑和严重肿胀涵盖脚踝、脚和足趾，或肢体强直
＜21-4＞负载srIkB的外泌体对LPS诱导脓毒症模型的影响
另外，当超阻遏物IκB:EXPLOR腹膜内注射到LPS诱导脓毒症小鼠模型时，脓毒症小鼠表现出显著升高的存活率(图45)。
实验性实施例22：pySTAT3胞内抗体
本发明人证实了在488nm波长蓝光下在表达CIBN-EGFP-CD9和pySTAT3-mCherry-Cry2的细胞中CIBN与CRY2的结合以及外泌体内pySTAT3的负载(图46)。
为了大量产生负载pySTAT3的外泌体，建立了稳定表达CIBN-EGFP-CD9基因和pySTAT3-mCherry-CRY2基因的细胞，并通过切向流过滤(TFF)法从培养上清液中分离纯化外泌体。
用负载pySTAT3的外泌体处理靶细胞以评估功能活性。
通过腹腔内或静脉内向动物模型给药负载pySTAT3的外泌体，以显示治疗效果。
实验性实施例23：Bcl-2相关的X蛋白
＜23-1＞产生负载Bax的外泌体(Bax::EXPLOR)
A.证实外泌体中的Bax
本发明人研究了表达CIBN和CRY2d的CIBN-EGFP-CD9和Bax-mCherry-CRY2的结合，以证实记录在氨基酸SEQ ID NO：6中的Bax的负载。
特别地，在无光条件下培养具有包含CIBN-EGFP-CD9基因和Bax-mCherry-CRY2基因的转染pcDNA3.1(+)载体的外泌体产生细胞HEK293T 24小时后，外泌体产生细胞HEK293T在Dulbecco改良不含胎牛血清(FBS)的Eagle培养基(DMEM)中额外培养48小时。在培养结束后，通过共聚焦显微镜研究来自mCherry的红色荧光在488nm波长的蓝光照射前后的位置。这个实验进行了超过五次。由此确认蓝色光刺激下的Bax蛋白的聚集(图48)。因此，通过证实Bax-mCherry-CRY2(红色)和CIBN-EGFP-CD9(绿色)的结合，将Bax蛋白负载到外泌体中。
B.产生Bax::EXPLOR
本发明人进行了以下实验以获得负载Bax的外泌体。
特别地，将包含CIBN-EGRP-CD9基因和Bax-mCherry-CRY2基因的载体转染到外泌体产生细胞HEK293T上，并将这些细胞培养24小时。培养24小时后，将细胞培养基换成不含胎牛血清(FBS)，并且在488nm波长50μW功率的蓝光下另外培养48小时。培养结束后，通过离心(2000×g，15分钟)从分离的培养基中产生除去细胞碎片的上清液。向上清液加入5倍体积的ExoQuick-TC外泌体沉淀溶液(System Biosciences，Mountain View，California，USA)，并在4℃下混合18小时。通过离心(1500×g，30分钟)上述上清液和ExoQuick-TC的混合物来悬浮外泌体小球以获得悬浮的外泌体(图8)。
此外，将稳定表达CIBN-EGFP-CD9基因和Bax-mCherry-CRY 2基因的外泌体产生细胞HEK293T，在488nm波长50μW功率的蓝光下在无胎牛血清的培养基中培养48～72h。培养结束后，通过离心(2000×g，15分钟)从分离的培养基中产生除去细胞碎片的上清液。为了从上清液中去除大于200nm的颗粒，用0.2μl PES膜(Corning)进行过滤。在相同的上清液中应用切向流过滤(TFF)方法去除小于20nm的颗粒，从滤液中浓缩并精制外泌体。在TFF中使用Vivaflow 50-100kDa PES膜(Sartorius)。在TFF的1.5～2个空气压力下，通过旋转滤液浓缩和精制外泌体。然后，通过在Amicon Ultra-0.5(100kDa)(Millipore)过滤器上离心(10000～14000g，5分钟)将外泌体浓缩物中液体除去。最后，通过与根据实验目的优选的缓冲液反向离心(10000～14000g，5分钟)获得外泌体。
＜23-2＞证实由Bax::EXPLOR引起的细胞凋亡
Bax是细胞凋亡调节剂，因此Bax过度表达通过与线粒体膜结合释放细胞色素c并诱导细胞凋亡。本发明人证实了使用Bax:EXPLOR分泌细胞色素c。
特别地，HeLa在0.1mg/mL mCherry:EXPLOR中或包含Bax-mCherry:EXPLOR的培养基中培养12小时。使用4％多聚甲醛固定后，为了测量细胞色素c的分泌，用Alexa Fluor647-缀合的抗体将HeLa染色并使用共聚焦显微镜成像，并通过计数细胞数(比例尺20μm)来分析细胞色素c的比率。数据呈现平均值±SEM(n＝3)，并使用Tukey's事后测试进行应用，并通过ANOVA测试确定显著组(**，p<0.01)。
结果，在Bax:EXPLOR处理的HeLa中比在mCherry:EXPLOR处理的HeLa中观察到更大量的细胞色素c释放(图49)。
实验性实施例24：BcL-xL
评估了在488nm波长蓝光下在表达CIBN-EGFP-CD9和BcL-xL-mCherry-Cry2的细胞中CIBN与CRY2的结合以及外泌体内BcL-xL的负载。
为了大量产生负载BcL-xL的外泌体，建立了稳定表达CIBN-EGFP-CD9基因和BcL-xL-mCherry-CRY2基因的细胞，并通过切向流过滤(TFF)法从培养上清液中分离纯化外泌体。
在靶细胞中对负载BcL-xL的外泌体进行功能性分析：
用负载BcL-xL的外泌体处理靶细胞以显示功能活性。
通过腹腔内或静脉内向动物模型给药负载BcL-xL的外泌体，以显示治疗效果。
实验性实施例25：AIMP
本发明人证实了在488nm波长蓝光下在表达CIBN-EGFP-CD9和AIMP-mCherry-Cry2的细胞中CIBN与CRY2的结合(图50)以及外泌体内pySTAT3的负载(图51)。
为了大量产生负载AIMP的外泌体，建立了稳定表达CIBN-EGFP-CD9基因和AIMP-mCherry-CRY2基因的细胞，并通过切向流过滤(TFF)法从培养上清液中分离纯化外泌体。
用负载AIMP的外泌体处理靶细胞以评估功能活性。
通过腹腔内或静脉内向动物模型给药负载AIMP的外泌体，以显示治疗效果。
实验性实施例26：mcherry(荧光蛋白)
本发明人证实了在488nm波长蓝光下在表达CIBN-EGFP-CD9和mCherry-Cry2的细胞中CIBN与CRY2的结合(图52)以及外泌体内AIMP的负载。
为了大量产生负载mCherry的外泌体，建立了稳定表达CIBN-EGFP-CD9基因和mCherry-CRY2基因的细胞，并通过切向流过滤(TFF)法从培养上清液中分离纯化外泌体。
实验性实施例27：核酸结合蛋白
评估了在488nm波长蓝光下在表达CIBN-EGFP-CD9和核酸结合蛋白-mCherry-Cry2的细胞中CIBN与CRY2的结合以及外泌体内核酸结合蛋白的负载。
为了大量产生负载核酸结合蛋白的外泌体，建立了稳定表达CIBN-EGFP-CD9基因和核酸结合蛋白-mCherry-CRY2基因的细胞，并通过切向流过滤(TFF)法从培养上清液中分离纯化外泌体。
在靶细胞中对负载核酸结合蛋白的外泌体进行功能性分析：
用负载核酸结合蛋白的外泌体处理靶细胞以显示功能活性。
通过腹腔内或静脉内向动物模型给药负载核酸结合蛋白的外泌体，以显示治疗效果。
本领域的技术人员将认识到，上述描述中公开的概念和具体实施方式可以很容易地用作修改或设计其他实施方式的基础以实现本发明相同目的，本领域的技术人员还将认识到，这些同等的实施方式并不脱离所附权利要求中阐述的本发明的精神和范围。
<110> 赛尔莱克斯生命科学公司（CELLEX LIFE SCIENCES, INCORPORATED）
<120> 包含负载蛋白的外泌体的组合物以及制备和递送该组合物的方法
<130> 2017FPO-09-017_PCT
<150> KR 10-2016-0126335
<151> 2016-09-30
<150> KR 10-2016-0126921
<151> 2016-09-30
<150> KR 10-2016-0126961
<151> 2016-09-30
<150> KR 10-2016-0127486
<151> 2016-10-04
<150> KR 10-2016-0132616
<151> 2016-10-13
<150> KR 10-2017-0018637
<151> 2017-02-10
<160> 84
<170> PatentIn version 3.2
<210> 1
<211> 317
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 1
Met Phe Gln Ala Ala Glu Arg Pro Gln Glu Trp Ala Met Glu Gly Pro
1 5 10 15
Arg Asp Gly Leu Lys Lys Glu Arg Leu Leu Asp Asp Arg His Asp Ser
20 25 30
Gly Leu Asp Ser Met Lys Asp Glu Glu Tyr Glu Gln Met Val Lys Glu
35 40 45
Leu Gln Glu Ile Arg Leu Glu Pro Gln Glu Val Pro Arg Gly Ser Glu
50 55 60
Pro Trp Lys Gln Gln Leu Thr Glu Asp Gly Asp Ser Phe Leu His Leu
65 70 75 80
Ala Ile Ile His Glu Glu Lys Ala Leu Thr Met Glu Val Ile Arg Gln
85 90 95
Val Lys Gly Asp Leu Ala Phe Leu Asn Phe Gln Asn Asn Leu Gln Gln
100 105 110
Thr Pro Leu His Leu Ala Val Ile Thr Asn Gln Pro Glu Ile Ala Glu
115 120 125
Ala Leu Leu Gly Ala Gly Cys Asp Pro Glu Leu Arg Asp Phe Arg Gly
130 135 140
Asn Thr Pro Leu His Leu Ala Cys Glu Gln Gly Cys Leu Ala Ser Val
145 150 155 160
Gly Val Leu Thr Gln Ser Cys Thr Thr Pro His Leu His Ser Ile Leu
165 170 175
Lys Ala Thr Asn Tyr Asn Gly His Thr Cys Leu His Leu Ala Ser Ile
180 185 190
His Gly Tyr Leu Gly Ile Val Glu Leu Leu Val Ser Leu Gly Ala Asp
195 200 205
Val Asn Ala Gln Glu Pro Cys Asn Gly Arg Thr Ala Leu His Leu Ala
210 215 220
Val Asp Leu Gln Asn Pro Asp Leu Val Ser Leu Leu Leu Lys Cys Gly
225 230 235 240
Ala Asp Val Asn Arg Val Thr Tyr Gln Gly Tyr Ser Pro Tyr Gln Leu
245 250 255
Thr Trp Gly Arg Pro Ser Thr Arg Ile Gln Gln Gln Leu Gly Gln Leu
260 265 270
Thr Leu Glu Asn Leu Gln Met Leu Pro Glu Ser Glu Asp Glu Glu Ser
275 280 285
Tyr Asp Thr Glu Ser Glu Phe Thr Glu Phe Thr Glu Asp Glu Leu Pro
290 295 300
Tyr Asp Asp Cys Val Phe Gly Gly Gln Arg Leu Thr Leu
305 310 315
<210> 2
<211> 356
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 2
Met Ala Gly Val Ala Cys Leu Gly Lys Ala Ala Asp Ala Asp Glu Trp
1 5 10 15
Cys Asp Ser Gly Leu Gly Ser Leu Gly Pro Asp Ala Ala Ala Pro Gly
20 25 30
Gly Pro Gly Leu Gly Ala Glu Leu Gly Pro Gly Leu Ser Trp Ala Pro
35 40 45
Leu Val Phe Gly Tyr Val Thr Glu Asp Gly Asp Thr Ala Leu His Leu
50 55 60
Ala Val Ile His Gln His Glu Pro Phe Leu Asp Phe Leu Leu Gly Phe
65 70 75 80
Ser Ala Gly Thr Glu Tyr Met Asp Leu Gln Asn Asp Leu Gly Gln Thr
85 90 95
Ala Leu His Leu Ala Ala Ile Leu Gly Glu Thr Ser Thr Val Glu Lys
100 105 110
Leu Tyr Ala Ala Gly Ala Gly Leu Cys Val Ala Glu Arg Arg Gly His
115 120 125
Thr Ala Leu His Leu Ala Cys Arg Val Gly Ala His Ala Cys Ala Arg
130 135 140
Ala Leu Leu Gln Pro Arg Pro Arg Arg Pro Arg Glu Ala Pro Asp Thr
145 150 155 160
Tyr Leu Ala Gln Gly Pro Asp Arg Thr Pro Asp Thr Asn His Thr Pro
165 170 175
Val Ala Leu Tyr Pro Asp Ser Asp Leu Glu Lys Glu Glu Glu Glu Ser
180 185 190
Glu Glu Asp Trp Lys Leu Gln Leu Glu Ala Glu Asn Tyr Glu Gly His
195 200 205
Thr Pro Leu His Val Ala Val Ile His Lys Asp Val Glu Met Val Arg
210 215 220
Leu Leu Arg Asp Ala Gly Ala Asp Leu Asp Lys Pro Glu Pro Thr Cys
225 230 235 240
Gly Arg Ser Pro Leu His Leu Ala Val Glu Ala Gln Ala Ala Asp Val
245 250 255
Leu Glu Leu Leu Leu Arg Ala Gly Ala Asn Pro Ala Ala Arg Met Tyr
260 265 270
Gly Gly Arg Thr Pro Leu Gly Ser Ala Met Leu Arg Pro Asn Pro Ile
275 280 285
Leu Ala Arg Leu Leu Arg Ala His Gly Ala Pro Glu Pro Glu Gly Glu
290 295 300
Asp Glu Lys Ser Gly Pro Cys Ser Ser Ser Ser Asp Ser Asp Ser Gly
305 310 315 320
Asp Glu Gly Asp Glu Tyr Asp Asp Ile Val Val His Ser Ser Arg Ser
325 330 335
Gln Thr Arg Leu Pro Pro Thr Pro Ala Ser Lys Pro Leu Pro Asp Asp
340 345 350
Pro Arg Pro Val
355
<210> 3
<211> 500
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 3
Met Asn Gln Arg Arg Ser Glu Ser Arg Pro Gly Asn His Arg Leu Gln
1 5 10 15
Ala Tyr Ala Glu Pro Gly Lys Gly Asp Ser Gly Gly Ala Gly Pro Leu
20 25 30
Ser Gly Ser Ala Arg Arg Gly Arg Gly Gly Gly Gly Ala Ile Arg Val
35 40 45
Arg Arg Pro Cys Trp Ser Gly Gly Ala Gly Arg Gly Gly Gly Pro Ala
50 55 60
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65 70 75 80
Leu Arg Thr Leu Ser Ser Leu Arg Ala Gly Pro Ser Glu Pro His Ser
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Pro Gly Arg Arg Pro Pro Arg Ala Gly Arg Pro Leu Cys Gln Ala Asp
100 105 110
Pro Gln Pro Gly Lys Ala Ala Arg Arg Ser Leu Glu Pro Asp Pro Ala
115 120 125
Gln Thr Gly Pro Arg Pro Ala Arg Ala Ala Gly Met Ser Glu Ala Arg
130 135 140
Lys Gly Pro Asp Glu Ala Glu Glu Ser Gln Tyr Asp Ser Gly Ile Glu
145 150 155 160
Ser Leu Arg Ser Leu Arg Ser Leu Pro Glu Ser Thr Ser Ala Pro Ala
165 170 175
Ser Gly Pro Ser Asp Gly Ser Pro Gln Pro Cys Thr His Pro Pro Gly
180 185 190
Pro Val Lys Glu Pro Gln Glu Lys Glu Asp Ala Asp Gly Glu Arg Ala
195 200 205
Asp Ser Thr Tyr Gly Ser Ser Ser Leu Thr Tyr Thr Leu Ser Leu Leu
210 215 220
Gly Gly Pro Glu Ala Glu Asp Pro Ala Pro Arg Leu Pro Leu Pro His
225 230 235 240
Val Gly Ala Leu Ser Pro Gln Gln Leu Glu Ala Leu Thr Tyr Ile Ser
245 250 255
Glu Asp Gly Asp Thr Leu Val His Leu Ala Val Ile His Glu Ala Pro
260 265 270
Ala Val Leu Leu Cys Cys Leu Ala Leu Leu Pro Gln Glu Val Leu Asp
275 280 285
Ile Gln Asn Asn Leu Tyr Gln Thr Ala Leu His Leu Ala Val His Leu
290 295 300
Asp Gln Pro Gly Ala Val Arg Ala Leu Val Leu Lys Gly Ala Ser Arg
305 310 315 320
Ala Leu Gln Asp Arg His Gly Asp Thr Ala Leu His Val Ala Cys Gln
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Arg Gln His Leu Ala Cys Ala Arg Cys Leu Leu Glu Gly Arg Pro Glu
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355 360 365
Gln Gly Leu Ala Cys Leu His Ile Ala Thr Leu Gln Lys Asn Gln Pro
370 375 380
Leu Met Glu Leu Leu Leu Arg Asn Gly Ala Asp Ile Asp Val Gln Glu
385 390 395 400
Gly Thr Ser Gly Lys Thr Ala Leu His Leu Ala Val Glu Thr Gln Glu
405 410 415
Arg Gly Leu Val Gln Phe Leu Leu Gln Ala Gly Ala Gln Val Asp Ala
420 425 430
Arg Met Leu Asn Gly Cys Thr Pro Leu His Leu Ala Ala Gly Arg Gly
435 440 445
Leu Met Gly Ile Ser Ser Thr Leu Cys Lys Ala Gly Ala Asp Ser Leu
450 455 460
Leu Arg Asn Val Glu Asp Glu Thr Pro Gln Asp Leu Thr Glu Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Leu Leu Pro Phe Asp Asp Leu Lys Ile Ser Gly Lys Leu Leu
485 490 495
Leu Cys Thr Asp
500
<210> 4
<211> 454
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 4
Met Pro Arg Cys Pro Ala Gly Ala Met Asp Glu Gly Pro Val Asp Leu
1 5 10 15
Arg Thr Arg Pro Lys Ala Ala Gly Leu Pro Gly Ala Ala Leu Pro Leu
20 25 30
Arg Lys Arg Pro Leu Arg Ala Pro Ser Pro Glu Pro Ala Ala Pro Arg
35 40 45
Gly Ala Ala Gly Leu Val Val Pro Leu Asp Pro Leu Arg Gly Gly Cys
50 55 60
Asp Leu Pro Ala Val Pro Gly Pro Pro His Gly Leu Ala Arg Pro Glu
65 70 75 80
Ala Leu Tyr Tyr Pro Gly Ala Leu Leu Pro Leu Tyr Pro Thr Arg Ala
85 90 95
Met Gly Ser Pro Phe Pro Leu Val Asn Leu Pro Thr Pro Leu Tyr Pro
100 105 110
Met Met Cys Pro Met Glu His Pro Leu Ser Ala Asp Ile Ala Met Ala
115 120 125
Thr Arg Ala Asp Glu Asp Gly Asp Thr Pro Leu His Ile Ala Val Val
130 135 140
Gln Gly Asn Leu Pro Ala Val His Arg Leu Val Asn Leu Phe Gln Gln
145 150 155 160
Gly Gly Arg Glu Leu Asp Ile Tyr Asn Asn Leu Arg Gln Thr Pro Leu
165 170 175
His Leu Ala Val Ile Thr Thr Leu Pro Ser Val Val Arg Leu Leu Val
180 185 190
Thr Ala Gly Ala Ser Pro Met Ala Leu Asp Arg His Gly Gln Thr Ala
195 200 205
Ala His Leu Ala Cys Glu His Arg Ser Pro Thr Cys Leu Arg Ala Leu
210 215 220
Leu Asp Ser Ala Ala Pro Gly Thr Leu Asp Leu Glu Ala Arg Asn Tyr
225 230 235 240
Asp Gly Leu Thr Ala Leu His Val Ala Val Asn Thr Glu Cys Gln Glu
245 250 255
Thr Val Gln Leu Leu Leu Glu Arg Gly Ala Asp Ile Asp Ala Val Asp
260 265 270
Ile Lys Ser Gly Arg Ser Pro Leu Ile His Ala Val Glu Asn Asn Ser
275 280 285
Leu Ser Met Val Gln Leu Leu Leu Gln His Gly Ala Asn Val Asn Ala
290 295 300
Gln Met Tyr Ser Gly Ser Ser Ala Leu His Ser Ala Ser Gly Arg Gly
305 310 315 320
Leu Leu Pro Leu Val Arg Thr Leu Val Arg Ser Gly Ala Asp Ser Ser
325 330 335
Leu Lys Asn Cys His Asn Asp Thr Pro Leu Met Val Ala Arg Ser Arg
340 345 350
Arg Val Ile Asp Ile Leu Arg Gly Lys Ala Thr Arg Pro Ala Ser Thr
355 360 365
Ser Gln Pro Asp Pro Ser Pro Asp Arg Ser Ala Asn Thr Ser Pro Glu
370 375 380
Ser Ser Ser Arg Leu Ser Ser Asn Gly Leu Leu Ser Ala Ser Pro Ser
385 390 395 400
Ser Ser Pro Ser Gln Ser Pro Pro Arg Asp Pro Pro Gly Phe Pro Met
405 410 415
Ala Pro Pro Asn Phe Phe Leu Pro Ser Pro Ser Pro Pro Ala Phe Leu
420 425 430
Pro Phe Ala Gly Val Leu Arg Gly Pro Gly Arg Pro Val Pro Pro Ser
435 440 445
Pro Ala Pro Gly Gly Ser
450
<210> 5
<211> 317
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 5
Met Phe Gln Ala Ala Glu Arg Pro Gln Glu Trp Ala Met Glu Gly Pro
1 5 10 15
Arg Asp Gly Leu Lys Lys Glu Arg Leu Leu Asp Asp Arg His Asp Ala
20 25 30
Gly Leu Asp Ala Met Lys Asp Glu Glu Tyr Glu Gln Met Val Lys Glu
35 40 45
Leu Gln Glu Ile Arg Leu Glu Pro Gln Glu Val Pro Arg Gly Ser Glu
50 55 60
Pro Trp Lys Gln Gln Leu Thr Glu Asp Gly Asp Ser Phe Leu His Leu
65 70 75 80
Ala Ile Ile His Glu Glu Lys Ala Leu Thr Met Glu Val Ile Arg Gln
85 90 95
Val Lys Gly Asp Leu Ala Phe Leu Asn Phe Gln Asn Asn Leu Gln Gln
100 105 110
Thr Pro Leu His Leu Ala Val Ile Thr Asn Gln Pro Glu Ile Ala Glu
115 120 125
Ala Leu Leu Gly Ala Gly Cys Asp Pro Glu Leu Arg Asp Phe Arg Gly
130 135 140
Asn Thr Pro Leu His Leu Ala Cys Glu Gln Gly Cys Leu Ala Ser Val
145 150 155 160
Gly Val Leu Thr Gln Ser Cys Thr Thr Pro His Leu His Ser Ile Leu
165 170 175
Lys Ala Thr Asn Tyr Asn Gly His Thr Cys Leu His Leu Ala Ser Ile
180 185 190
His Gly Tyr Leu Gly Ile Val Glu Leu Leu Val Ser Leu Gly Ala Asp
195 200 205
Val Asn Ala Gln Glu Pro Cys Asn Gly Arg Thr Ala Leu His Leu Ala
210 215 220
Val Asp Leu Gln Asn Pro Asp Leu Val Ser Leu Leu Leu Lys Cys Gly
225 230 235 240
Ala Asp Val Asn Arg Val Thr Tyr Gln Gly Tyr Ser Pro Tyr Gln Leu
245 250 255
Thr Trp Gly Arg Pro Ser Thr Arg Ile Gln Gln Gln Leu Gly Gln Leu
260 265 270
Thr Leu Glu Asn Leu Gln Met Leu Pro Glu Ser Glu Asp Glu Glu Ser
275 280 285
Tyr Asp Thr Glu Ser Glu Phe Thr Glu Phe Thr Glu Asp Glu Leu Pro
290 295 300
Tyr Asp Asp Cys Val Phe Gly Gly Gln Arg Leu Thr Leu
305 310 315
<210> 6
<211> 192
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 6
Met Asp Gly Ser Gly Glu Gln Pro Arg Gly Gly Gly Pro Thr Ser Ser
1 5 10 15
Glu Gln Ile Met Lys Thr Gly Ala Leu Leu Leu Gln Gly Phe Ile Gln
20 25 30
Asp Arg Ala Gly Arg Met Gly Gly Glu Ala Pro Glu Leu Ala Leu Asp
35 40 45
Pro Val Pro Gln Asp Ala Ser Thr Lys Lys Leu Ser Glu Cys Leu Lys
50 55 60
Arg Ile Gly Asp Glu Leu Asp Ser Asn Met Glu Leu Gln Arg Met Ile
65 70 75 80
Ala Ala Val Asp Thr Asp Ser Pro Arg Glu Val Phe Phe Arg Val Ala
85 90 95
Ala Asp Met Phe Ser Asp Gly Asn Phe Asn Trp Gly Arg Val Val Ala
100 105 110
Leu Phe Tyr Phe Ala Ser Lys Leu Val Leu Lys Ala Leu Cys Thr Lys
115 120 125
Val Pro Glu Leu Ile Arg Thr Ile Met Gly Trp Thr Leu Asp Phe Leu
130 135 140
Arg Glu Arg Leu Leu Gly Trp Ile Gln Asp Gln Gly Gly Trp Asp Gly
145 150 155 160
Leu Leu Ser Tyr Phe Gly Thr Pro Thr Trp Gln Thr Val Thr Ile Phe
165 170 175
Val Ala Gly Val Leu Thr Ala Ser Leu Thr Ile Trp Lys Lys Met Gly
180 185 190
<210> 7
<211> 199
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 7
Met Ser Ser Gly Asn Ala Lys Ile Gly His Pro Ala Pro Asn Phe Lys
1 5 10 15
Ala Thr Ala Val Met Pro Asp Gly Gln Phe Lys Asp Ile Ser Leu Ser
20 25 30
Asp Tyr Lys Gly Lys Tyr Val Val Phe Phe Phe Tyr Pro Leu Asp Phe
35 40 45
Thr Phe Val Cys Pro Thr Glu Ile Ile Ala Phe Ser Asp Arg Ala Glu
50 55 60
Glu Phe Lys Lys Leu Asn Cys Gln Val Ile Gly Ala Ser Val Asp Ser
65 70 75 80
His Phe Cys His Leu Ala Trp Val Asn Thr Pro Lys Lys Gln Gly Gly
85 90 95
Leu Gly Pro Met Asn Ile Pro Leu Val Ser Asp Pro Lys Arg Thr Ile
100 105 110
Ala Gln Asp Tyr Gly Val Leu Lys Ala Asp Glu Gly Ile Ser Phe Arg
115 120 125
Gly Leu Phe Ile Ile Asp Asp Lys Gly Ile Leu Arg Gln Ile Thr Val
130 135 140
Asn Asp Leu Pro Val Gly Arg Ser Val Asp Glu Thr Leu Arg Leu Val
145 150 155 160
Gln Ala Phe Gln Phe Thr Asp Lys His Gly Glu Val Cys Pro Ala Gly
165 170 175
Trp Lys Pro Gly Ser Asp Thr Ile Lys Pro Asp Val Gln Lys Ser Lys
180 185 190
Glu Tyr Phe Ser Lys Gln Lys
195
<210> 8
<211> 198
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 8
Met Ala Ser Gly Asn Ala Arg Ile Gly Lys Pro Ala Pro Asp Phe Lys
1 5 10 15
Ala Thr Ala Val Val Asp Gly Ala Phe Lys Glu Val Lys Leu Ser Asp
20 25 30
Tyr Lys Gly Lys Tyr Val Val Leu Phe Phe Tyr Pro Leu Asp Phe Thr
35 40 45
Phe Val Cys Pro Thr Glu Ile Ile Ala Phe Ser Asn Arg Ala Glu Asp
50 55 60
Phe Arg Lys Leu Gly Cys Glu Val Leu Gly Val Ser Val Asp Ser Gln
65 70 75 80
Phe Thr His Leu Ala Trp Ile Asn Thr Pro Arg Lys Glu Gly Gly Leu
85 90 95
Gly Pro Leu Asn Ile Pro Leu Leu Ala Asp Val Thr Arg Arg Leu Ser
100 105 110
Glu Asp Tyr Gly Val Leu Lys Thr Asp Glu Gly Ile Ala Tyr Arg Gly
115 120 125
Leu Phe Ile Ile Asp Gly Lys Gly Val Leu Arg Gln Ile Thr Val Asn
130 135 140
Asp Leu Pro Val Gly Arg Ser Val Asp Glu Ala Leu Arg Leu Val Gln
145 150 155 160
Ala Phe Gln Tyr Thr Asp Glu His Gly Glu Val Cys Pro Ala Gly Trp
165 170 175
Lys Pro Gly Ser Asp Thr Ile Lys Pro Asn Val Asp Asp Ser Lys Glu
180 185 190
Tyr Phe Ser Lys His Asn
195
<210> 9
<211> 343
<212> PRT
<213> 细菌噬菌体P1
<400> 9
Met Ser Asn Leu Leu Thr Val His Gln Asn Leu Pro Ala Leu Pro Val
1 5 10 15
Asp Ala Thr Ser Asp Glu Val Arg Lys Asn Leu Met Asp Met Phe Arg
20 25 30
Asp Arg Gln Ala Phe Ser Glu His Thr Trp Lys Met Leu Leu Ser Val
35 40 45
Cys Arg Ser Trp Ala Ala Trp Cys Lys Leu Asn Asn Arg Lys Trp Phe
50 55 60
Pro Ala Glu Pro Glu Asp Val Arg Asp Tyr Leu Leu Tyr Leu Gln Ala
65 70 75 80
Arg Gly Leu Ala Val Lys Thr Ile Gln Gln His Leu Gly Gln Leu Asn
85 90 95
Met Leu His Arg Arg Ser Gly Leu Pro Arg Pro Ser Asp Ser Asn Ala
100 105 110
Val Ser Leu Val Met Arg Arg Ile Arg Lys Glu Asn Val Asp Ala Gly
115 120 125
Glu Arg Ala Lys Gln Ala Leu Ala Phe Glu Arg Thr Asp Phe Asp Gln
130 135 140
Val Arg Ser Leu Met Glu Asn Ser Asp Arg Cys Gln Asp Ile Arg Asn
145 150 155 160
Leu Ala Phe Leu Gly Ile Ala Tyr Asn Thr Leu Leu Arg Ile Ala Glu
165 170 175
Ile Ala Arg Ile Arg Val Lys Asp Ile Ser Arg Thr Asp Gly Gly Arg
180 185 190
Met Leu Ile His Ile Gly Arg Thr Lys Thr Leu Val Ser Thr Ala Gly
195 200 205
Val Glu Lys Ala Leu Ser Leu Gly Val Thr Lys Leu Val Glu Arg Trp
210 215 220
Ile Ser Val Ser Gly Val Ala Asp Asp Pro Asn Asn Tyr Leu Phe Cys
225 230 235 240
Arg Val Arg Lys Asn Gly Val Ala Ala Pro Ser Ala Thr Ser Gln Leu
245 250 255
Ser Thr Arg Ala Leu Glu Gly Ile Phe Glu Ala Thr His Arg Leu Ile
260 265 270
Tyr Gly Ala Lys Asp Asp Ser Gly Gln Arg Tyr Leu Ala Trp Ser Gly
275 280 285
His Ser Ala Arg Val Gly Ala Ala Arg Asp Met Ala Arg Ala Gly Val
290 295 300
Ser Ile Pro Glu Ile Met Gln Ala Gly Gly Trp Thr Asn Val Asn Ile
305 310 315 320
Val Met Asn Tyr Ile Arg Asn Leu Asp Ser Glu Thr Gly Ala Met Val
325 330 335
Arg Leu Leu Glu Asp Gly Asp
340
<210> 10
<211> 469
<212> PRT
<213> 化脓性链球菌（Streptococcus pyogenes）
<400> 10
Met His Ser Phe Pro Pro Leu Leu Leu Leu Leu Phe Trp Gly Val Val
1 5 10 15
Ser His Ser Phe Pro Ala Thr Leu Glu Thr Gln Glu Gln Asp Val Asp
20 25 30
Leu Val Gln Lys Tyr Leu Glu Lys Tyr Tyr Asn Leu Lys Asn Asp Gly
35 40 45
Arg Gln Val Glu Lys Arg Arg Asn Ser Gly Pro Val Val Glu Lys Leu
50 55 60
Lys Gln Met Gln Glu Phe Phe Gly Leu Lys Val Thr Gly Lys Pro Asp
65 70 75 80
Ala Glu Thr Leu Lys Val Met Lys Gln Pro Arg Cys Gly Val Pro Asp
85 90 95
Val Ala Gln Phe Val Leu Thr Glu Gly Asn Pro Arg Trp Glu Gln Thr
100 105 110
His Leu Thr Tyr Arg Ile Glu Asn Tyr Thr Pro Asp Leu Pro Arg Ala
115 120 125
Asp Val Asp His Ala Ile Glu Lys Ala Phe Gln Leu Trp Ser Asn Val
130 135 140
Thr Pro Leu Thr Phe Thr Lys Val Ser Glu Gly Gln Ala Asp Ile Met
145 150 155 160
Ile Ser Phe Val Arg Gly Asp His Arg Asp Asn Ser Pro Phe Asp Gly
165 170 175
Pro Gly Gly Asn Leu Ala His Ala Phe Gln Pro Gly Pro Gly Ile Gly
180 185 190
Gly Asp Ala His Phe Asp Glu Asp Glu Arg Trp Thr Asn Asn Phe Arg
195 200 205
Glu Tyr Asn Leu His Arg Val Ala Ala His Glu Leu Gly His Ser Leu
210 215 220
Gly Leu Ser His Ser Thr Asp Ile Gly Ala Leu Met Tyr Pro Ser Tyr
225 230 235 240
Thr Phe Ser Gly Asp Val Gln Leu Ala Gln Asp Asp Ile Asp Gly Ile
245 250 255
Gln Ala Ile Tyr Gly Arg Ser Gln Asn Pro Val Gln Pro Ile Gly Pro
260 265 270
Gln Thr Pro Lys Ala Cys Asp Ser Lys Leu Thr Phe Asp Ala Ile Thr
275 280 285
Thr Ile Arg Gly Glu Val Met Phe Phe Lys Asp Arg Phe Tyr Met Arg
290 295 300
Thr Asn Pro Phe Tyr Pro Glu Val Glu Leu Asn Phe Ile Ser Val Phe
305 310 315 320
Trp Pro Gln Leu Pro Asn Gly Leu Glu Ala Ala Tyr Glu Phe Ala Asp
325 330 335
Arg Asp Glu Val Arg Phe Phe Lys Gly Asn Lys Tyr Trp Ala Val Gln
340 345 350
Gly Gln Asn Val Leu His Gly Tyr Pro Lys Asp Ile Tyr Ser Ser Phe
355 360 365
Gly Phe Pro Arg Thr Val Lys His Ile Asp Ala Ala Leu Ser Glu Glu
370 375 380
Asn Thr Gly Lys Thr Tyr Phe Phe Val Ala Asn Lys Tyr Trp Arg Tyr
385 390 395 400
Asp Glu Tyr Lys Arg Ser Met Asp Pro Gly Tyr Pro Lys Met Ile Ala
405 410 415
His Asp Phe Pro Gly Ile Gly His Lys Val Asp Ala Val Phe Met Lys
420 425 430
Asp Gly Phe Phe Tyr Phe Phe His Gly Thr Arg Gln Tyr Lys Phe Asp
435 440 445
Pro Lys Thr Lys Arg Ile Leu Thr Leu Gln Lys Ala Asn Ser Trp Phe
450 455 460
Asn Cys Arg Lys Asn
465
<210> 11
<211> 1300
<212> PRT
<213> 土拉弗朗西斯菌（Francisella tularensis）
<400> 11
Met Ser Ile Tyr Gln Glu Phe Val Asn Lys Tyr Ser Leu Ser Lys Thr
1 5 10 15
Leu Arg Phe Glu Leu Ile Pro Gln Gly Lys Thr Leu Glu Asn Ile Lys
20 25 30
Ala Arg Gly Leu Ile Leu Asp Asp Glu Lys Arg Ala Lys Asp Tyr Lys
35 40 45
Lys Ala Lys Gln Ile Ile Asp Lys Tyr His Gln Phe Phe Ile Glu Glu
50 55 60
Ile Leu Ser Ser Val Cys Ile Ser Glu Asp Leu Leu Gln Asn Tyr Ser
65 70 75 80
Asp Val Tyr Phe Lys Leu Lys Lys Ser Asp Asp Asp Asn Leu Gln Lys
85 90 95
Asp Phe Lys Ser Ala Lys Asp Thr Ile Lys Lys Gln Ile Ser Glu Tyr
100 105 110
Ile Lys Asp Ser Glu Lys Phe Lys Asn Leu Phe Asn Gln Asn Leu Ile
115 120 125
Asp Ala Lys Lys Gly Gln Glu Ser Asp Leu Ile Leu Trp Leu Lys Gln
130 135 140
Ser Lys Asp Asn Gly Ile Glu Leu Phe Lys Ala Asn Ser Asp Ile Thr
145 150 155 160
Asp Ile Asp Glu Ala Leu Glu Ile Ile Lys Ser Phe Lys Gly Trp Thr
165 170 175
Thr Tyr Phe Lys Gly Phe His Glu Asn Arg Lys Asn Val Tyr Ser Ser
180 185 190
Asn Asp Ile Pro Thr Ser Ile Ile Tyr Arg Ile Val Asp Asp Asn Leu
195 200 205
Pro Lys Phe Leu Glu Asn Lys Ala Lys Tyr Glu Ser Leu Lys Asp Lys
210 215 220
Ala Pro Glu Ala Ile Asn Tyr Glu Gln Ile Lys Lys Asp Leu Ala Glu
225 230 235 240
Glu Leu Thr Phe Asp Ile Asp Tyr Lys Thr Ser Glu Val Asn Gln Arg
245 250 255
Val Phe Ser Leu Asp Glu Val Phe Glu Ile Ala Asn Phe Asn Asn Tyr
260 265 270
Leu Asn Gln Ser Gly Ile Thr Lys Phe Asn Thr Ile Ile Gly Gly Lys
275 280 285
Phe Val Asn Gly Glu Asn Thr Lys Arg Lys Gly Ile Asn Glu Tyr Ile
290 295 300
Asn Leu Tyr Ser Gln Gln Ile Asn Asp Lys Thr Leu Lys Lys Tyr Lys
305 310 315 320
Met Ser Val Leu Phe Lys Gln Ile Leu Ser Asp Thr Glu Ser Lys Ser
325 330 335
Phe Val Ile Asp Lys Leu Glu Asp Asp Ser Asp Val Val Thr Thr Met
340 345 350
Gln Ser Phe Tyr Glu Gln Ile Ala Ala Phe Lys Thr Val Glu Glu Lys
355 360 365
Ser Ile Lys Glu Thr Leu Ser Leu Leu Phe Asp Asp Leu Lys Ala Gln
370 375 380
Lys Leu Asp Leu Ser Lys Ile Tyr Phe Lys Asn Asp Lys Ser Leu Thr
385 390 395 400
Asp Leu Ser Gln Gln Val Phe Asp Asp Tyr Ser Val Ile Gly Thr Ala
405 410 415
Val Leu Glu Tyr Ile Thr Gln Gln Ile Ala Pro Lys Asn Leu Asp Asn
420 425 430
Pro Ser Lys Lys Glu Gln Glu Leu Ile Ala Lys Lys Thr Glu Lys Ala
435 440 445
Lys Tyr Leu Ser Leu Glu Thr Ile Lys Leu Ala Leu Glu Glu Phe Asn
450 455 460
Lys His Arg Asp Ile Asp Lys Gln Cys Arg Phe Glu Glu Ile Leu Ala
465 470 475 480
Asn Phe Ala Ala Ile Pro Met Ile Phe Asp Glu Ile Ala Gln Asn Lys
485 490 495
Asp Asn Leu Ala Gln Ile Ser Ile Lys Tyr Gln Asn Gln Gly Lys Lys
500 505 510
Asp Leu Leu Gln Ala Ser Ala Glu Asp Asp Val Lys Ala Ile Lys Asp
515 520 525
Leu Leu Asp Gln Thr Asn Asn Leu Leu His Lys Leu Lys Ile Phe His
530 535 540
Ile Ser Gln Ser Glu Asp Lys Ala Asn Ile Leu Asp Lys Asp Glu His
545 550 555 560
Phe Tyr Leu Val Phe Glu Glu Cys Tyr Phe Glu Leu Ala Asn Ile Val
565 570 575
Pro Leu Tyr Asn Lys Ile Arg Asn Tyr Ile Thr Gln Lys Pro Tyr Ser
580 585 590
Asp Glu Lys Phe Lys Leu Asn Phe Glu Asn Ser Thr Leu Ala Asn Gly
595 600 605
Trp Asp Lys Asn Lys Glu Pro Asp Asn Thr Ala Ile Leu Phe Ile Lys
610 615 620
Asp Asp Lys Tyr Tyr Leu Gly Val Met Asn Lys Lys Asn Asn Lys Ile
625 630 635 640
Phe Asp Asp Lys Ala Ile Lys Glu Asn Lys Gly Glu Gly Tyr Lys Lys
645 650 655
Ile Val Tyr Lys Leu Leu Pro Gly Ala Asn Lys Met Leu Pro Lys Val
660 665 670
Phe Phe Ser Ala Lys Ser Ile Lys Phe Tyr Asn Pro Ser Glu Asp Ile
675 680 685
Leu Arg Ile Arg Asn His Ser Thr His Thr Lys Asn Gly Ser Pro Gln
690 695 700
Lys Gly Tyr Glu Lys Phe Glu Phe Asn Ile Glu Asp Cys Arg Lys Phe
705 710 715 720
Ile Asp Phe Tyr Lys Gln Ser Ile Ser Lys His Pro Glu Trp Lys Asp
725 730 735
Phe Gly Phe Arg Phe Ser Asp Thr Gln Arg Tyr Asn Ser Ile Asp Glu
740 745 750
Phe Tyr Arg Glu Val Glu Asn Gln Gly Tyr Lys Leu Thr Phe Glu Asn
755 760 765
Ile Ser Glu Ser Tyr Ile Asp Ser Val Val Asn Gln Gly Lys Leu Tyr
770 775 780
Leu Phe Gln Ile Tyr Asn Lys Asp Phe Ser Ala Tyr Ser Lys Gly Arg
785 790 795 800
Pro Asn Leu His Thr Leu Tyr Trp Lys Ala Leu Phe Asp Glu Arg Asn
805 810 815
Leu Gln Asp Val Val Tyr Lys Leu Asn Gly Glu Ala Glu Leu Phe Tyr
820 825 830
Arg Lys Gln Ser Ile Pro Lys Lys Ile Thr His Pro Ala Lys Glu Ala
835 840 845
Ile Ala Asn Lys Asn Lys Asp Asn Pro Lys Lys Glu Ser Val Phe Glu
850 855 860
Tyr Asp Leu Ile Lys Asp Lys Arg Phe Thr Glu Asp Lys Phe Phe Phe
865 870 875 880
His Cys Pro Ile Thr Ile Asn Phe Lys Ser Ser Gly Ala Asn Lys Phe
885 890 895
Asn Asp Glu Ile Asn Leu Leu Leu Lys Glu Lys Ala Asn Asp Val His
900 905 910
Ile Leu Ser Ile Asp Arg Gly Glu Arg His Leu Ala Tyr Tyr Thr Leu
915 920 925
Val Asp Gly Lys Gly Asn Ile Ile Lys Gln Asp Thr Phe Asn Ile Ile
930 935 940
Gly Asn Asp Arg Met Lys Thr Asn Tyr His Asp Lys Leu Ala Ala Ile
945 950 955 960
Glu Lys Asp Arg Asp Ser Ala Arg Lys Asp Trp Lys Lys Ile Asn Asn
965 970 975
Ile Lys Glu Met Lys Glu Gly Tyr Leu Ser Gln Val Val His Glu Ile
980 985 990
Ala Lys Leu Val Ile Glu Tyr Asn Ala Ile Val Val Phe Glu Asp Leu
995 1000 1005
Asn Phe Gly Phe Lys Arg Gly Arg Phe Lys Val Glu Lys Gln Val Tyr
1010 1015 1020
Gln Lys Leu Glu Lys Met Leu Ile Glu Lys Leu Asn Tyr Leu Val Phe
1025 1030 1035 1040
Lys Asp Asn Glu Phe Asp Lys Thr Gly Gly Val Leu Arg Ala Tyr Gln
1045 1050 1055
Leu Thr Ala Pro Phe Glu Thr Phe Lys Lys Met Gly Lys Gln Thr Gly
1060 1065 1070
Ile Ile Tyr Tyr Val Pro Ala Gly Phe Thr Ser Lys Ile Cys Pro Val
1075 1080 1085
Thr Gly Phe Val Asn Gln Leu Tyr Pro Lys Tyr Glu Ser Val Ser Lys
1090 1095 1100
Ser Gln Glu Phe Phe Ser Lys Phe Asp Lys Ile Cys Tyr Asn Leu Asp
1105 1110 1115 1120
Lys Gly Tyr Phe Glu Phe Ser Phe Asp Tyr Lys Asn Phe Gly Asp Lys
1125 1130 1135
Ala Ala Lys Gly Lys Trp Thr Ile Ala Ser Phe Gly Ser Arg Leu Ile
1140 1145 1150
Asn Phe Arg Asn Ser Asp Lys Asn His Asn Trp Asp Thr Arg Glu Val
1155 1160 1165
Tyr Pro Thr Lys Glu Leu Glu Lys Leu Leu Lys Asp Tyr Ser Ile Glu
1170 1175 1180
Tyr Gly His Gly Glu Cys Ile Lys Ala Ala Ile Cys Gly Glu Ser Asp
1185 1190 1195 1200
Lys Lys Phe Phe Ala Lys Leu Thr Ser Val Leu Asn Thr Ile Leu Gln
1205 1210 1215
Met Arg Asn Ser Lys Thr Gly Thr Glu Leu Asp Tyr Leu Ile Ser Pro
1220 1225 1230
Val Ala Asp Val Asn Gly Asn Phe Phe Asp Ser Arg Gln Ala Pro Lys
1235 1240 1245
Asn Met Pro Gln Asp Ala Asp Ala Asn Gly Ala Tyr His Ile Gly Leu
1250 1255 1260
Lys Gly Leu Met Leu Leu Gly Arg Ile Lys Asn Asn Gln Glu Gly Lys
1265 1270 1275 1280
Lys Leu Asn Leu Val Ile Lys Asn Glu Glu Tyr Phe Glu Phe Val Gln
1285 1290 1295
Asn Arg Asn Asn
1300
<210> 12
<211> 536
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 12
Met Glu Phe Ser Ser Pro Ser Arg Glu Glu Cys Pro Lys Pro Leu Ser
1 5 10 15
Arg Val Ser Ile Met Ala Gly Ser Leu Thr Gly Leu Leu Leu Leu Gln
20 25 30
Ala Val Ser Trp Ala Ser Gly Ala Arg Pro Cys Ile Pro Lys Ser Phe
35 40 45
Gly Tyr Ser Ser Val Val Cys Val Cys Asn Ala Thr Tyr Cys Asp Ser
50 55 60
Phe Asp Pro Pro Thr Phe Pro Ala Leu Gly Thr Phe Ser Arg Tyr Glu
65 70 75 80
Ser Thr Arg Ser Gly Arg Arg Met Glu Leu Ser Met Gly Pro Ile Gln
85 90 95
Ala Asn His Thr Gly Thr Gly Leu Leu Leu Thr Leu Gln Pro Glu Gln
100 105 110
Lys Phe Gln Lys Val Lys Gly Phe Gly Gly Ala Met Thr Asp Ala Ala
115 120 125
Ala Leu Asn Ile Leu Ala Leu Ser Pro Pro Ala Gln Asn Leu Leu Leu
130 135 140
Lys Ser Tyr Phe Ser Glu Glu Gly Ile Gly Tyr Asn Ile Ile Arg Val
145 150 155 160
Pro Met Ala Ser Cys Asp Phe Ser Ile Arg Thr Tyr Thr Tyr Ala Asp
165 170 175
Thr Pro Asp Asp Phe Gln Leu His Asn Phe Ser Leu Pro Glu Glu Asp
180 185 190
Thr Lys Leu Lys Ile Pro Leu Ile His Arg Ala Leu Gln Leu Ala Gln
195 200 205
Arg Pro Val Ser Leu Leu Ala Ser Pro Trp Thr Ser Pro Thr Trp Leu
210 215 220
Lys Thr Asn Gly Ala Val Asn Gly Lys Gly Ser Leu Lys Gly Gln Pro
225 230 235 240
Gly Asp Ile Tyr His Gln Thr Trp Ala Arg Tyr Phe Val Lys Phe Leu
245 250 255
Asp Ala Tyr Ala Glu His Lys Leu Gln Phe Trp Ala Val Thr Ala Glu
260 265 270
Asn Glu Pro Ser Ala Gly Leu Leu Ser Gly Tyr Pro Phe Gln Cys Leu
275 280 285
Gly Phe Thr Pro Glu His Gln Arg Asp Phe Ile Ala Arg Asp Leu Gly
290 295 300
Pro Thr Leu Ala Asn Ser Thr His His Asn Val Arg Leu Leu Met Leu
305 310 315 320
Asp Asp Gln Arg Leu Leu Leu Pro His Trp Ala Lys Val Val Leu Thr
325 330 335
Asp Pro Glu Ala Ala Lys Tyr Val His Gly Ile Ala Val His Trp Tyr
340 345 350
Leu Asp Phe Leu Ala Pro Ala Lys Ala Thr Leu Gly Glu Thr His Arg
355 360 365
Leu Phe Pro Asn Thr Met Leu Phe Ala Ser Glu Ala Cys Val Gly Ser
370 375 380
Lys Phe Trp Glu Gln Ser Val Arg Leu Gly Ser Trp Asp Arg Gly Met
385 390 395 400
Gln Tyr Ser His Ser Ile Ile Thr Asn Leu Leu Tyr His Val Val Gly
405 410 415
Trp Thr Asp Trp Asn Leu Ala Leu Asn Pro Glu Gly Gly Pro Asn Trp
420 425 430
Val Arg Asn Phe Val Asp Ser Pro Ile Ile Val Asp Ile Thr Lys Asp
435 440 445
Thr Phe Tyr Lys Gln Pro Met Phe Tyr His Leu Gly His Phe Ser Lys
450 455 460
Phe Ile Pro Glu Gly Ser Gln Arg Val Gly Leu Val Ala Ser Gln Lys
465 470 475 480
Asn Asp Leu Asp Ala Val Ala Leu Met His Pro Asp Gly Ser Ala Val
485 490 495
Val Val Val Leu Asn Arg Ser Ser Lys Asp Val Pro Leu Thr Ile Lys
500 505 510
Asp Pro Ala Val Gly Phe Leu Glu Thr Ile Ser Pro Gly Tyr Ser Ile
515 520 525
His Thr Tyr Leu Trp Arg Arg Gln
530 535
<210> 13
<211> 469
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 13
Met His Ser Phe Pro Pro Leu Leu Leu Leu Leu Phe Trp Gly Val Val
1 5 10 15
Ser His Ser Phe Pro Ala Thr Leu Glu Thr Gln Glu Gln Asp Val Asp
20 25 30
Leu Val Gln Lys Tyr Leu Glu Lys Tyr Tyr Asn Leu Lys Asn Asp Gly
35 40 45
Arg Gln Val Glu Lys Arg Arg Asn Ser Gly Pro Val Val Glu Lys Leu
50 55 60
Lys Gln Met Gln Glu Phe Phe Gly Leu Lys Val Thr Gly Lys Pro Asp
65 70 75 80
Ala Glu Thr Leu Lys Val Met Lys Gln Pro Arg Cys Gly Val Pro Asp
85 90 95
Val Ala Gln Phe Val Leu Thr Glu Gly Asn Pro Arg Trp Glu Gln Thr
100 105 110
His Leu Thr Tyr Arg Ile Glu Asn Tyr Thr Pro Asp Leu Pro Arg Ala
115 120 125
Asp Val Asp His Ala Ile Glu Lys Ala Phe Gln Leu Trp Ser Asn Val
130 135 140
Thr Pro Leu Thr Phe Thr Lys Val Ser Glu Gly Gln Ala Asp Ile Met
145 150 155 160
Ile Ser Phe Val Arg Gly Asp His Arg Asp Asn Ser Pro Phe Asp Gly
165 170 175
Pro Gly Gly Asn Leu Ala His Ala Phe Gln Pro Gly Pro Gly Ile Gly
180 185 190
Gly Asp Ala His Phe Asp Glu Asp Glu Arg Trp Thr Asn Asn Phe Arg
195 200 205
Glu Tyr Asn Leu His Arg Val Ala Ala His Glu Leu Gly His Ser Leu
210 215 220
Gly Leu Ser His Ser Thr Asp Ile Gly Ala Leu Met Tyr Pro Ser Tyr
225 230 235 240
Thr Phe Ser Gly Asp Val Gln Leu Ala Gln Asp Asp Ile Asp Gly Ile
245 250 255
Gln Ala Ile Tyr Gly Arg Ser Gln Asn Pro Val Gln Pro Ile Gly Pro
260 265 270
Gln Thr Pro Lys Ala Cys Asp Ser Lys Leu Thr Phe Asp Ala Ile Thr
275 280 285
Thr Ile Arg Gly Glu Val Met Phe Phe Lys Asp Arg Phe Tyr Met Arg
290 295 300
Thr Asn Pro Phe Tyr Pro Glu Val Glu Leu Asn Phe Ile Ser Val Phe
305 310 315 320
Trp Pro Gln Leu Pro Asn Gly Leu Glu Ala Ala Tyr Glu Phe Ala Asp
325 330 335
Arg Asp Glu Val Arg Phe Phe Lys Gly Asn Lys Tyr Trp Ala Val Gln
340 345 350
Gly Gln Asn Val Leu His Gly Tyr Pro Lys Asp Ile Tyr Ser Ser Phe
355 360 365
Gly Phe Pro Arg Thr Val Lys His Ile Asp Ala Ala Leu Ser Glu Glu
370 375 380
Asn Thr Gly Lys Thr Tyr Phe Phe Val Ala Asn Lys Tyr Trp Arg Tyr
385 390 395 400
Asp Glu Tyr Lys Arg Ser Met Asp Pro Gly Tyr Pro Lys Met Ile Ala
405 410 415
His Asp Phe Pro Gly Ile Gly His Lys Val Asp Ala Val Phe Met Lys
420 425 430
Asp Gly Phe Phe Tyr Phe Phe His Gly Thr Arg Gln Tyr Lys Phe Asp
435 440 445
Pro Lys Thr Lys Arg Ile Leu Thr Leu Gln Lys Ala Asn Ser Trp Phe
450 455 460
Asn Cys Arg Lys Asn
465
<210> 14
<211> 207
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 14
Met Ala Pro Phe Glu Pro Leu Ala Ser Gly Ile Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Ile Ala Pro Ser Arg Ala Cys Thr Cys Val Pro Pro His Pro Gln
20 25 30
Thr Ala Phe Cys Asn Ser Asp Leu Val Ile Arg Ala Lys Phe Val Gly
35 40 45
Thr Pro Glu Val Asn Gln Thr Thr Leu Tyr Gln Arg Tyr Glu Ile Lys
50 55 60
Met Thr Lys Met Tyr Lys Gly Phe Gln Ala Leu Gly Asp Ala Ala Asp
65 70 75 80
Ile Arg Phe Val Tyr Thr Pro Ala Met Glu Ser Val Cys Gly Tyr Phe
85 90 95
His Arg Ser His Asn Arg Ser Glu Glu Phe Leu Ile Ala Gly Lys Leu
100 105 110
Gln Asp Gly Leu Leu His Ile Thr Thr Cys Ser Phe Val Ala Pro Trp
115 120 125
Asn Ser Leu Ser Leu Ala Gln Arg Arg Gly Phe Thr Lys Thr Tyr Thr
130 135 140
Val Gly Cys Glu Glu Cys Thr Val Phe Pro Cys Leu Ser Ile Pro Cys
145 150 155 160
Lys Leu Gln Ser Gly Thr His Cys Leu Trp Thr Asp Gln Leu Leu Gln
165 170 175
Gly Ser Glu Lys Gly Phe Gln Ser Arg His Leu Ala Cys Leu Pro Arg
180 185 190
Glu Pro Gly Leu Cys Thr Trp Gln Ser Leu Arg Ser Gln Ile Ala
195 200 205
<210> 15
<211> 220
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 15
Met Gly Ala Ala Ala Arg Thr Leu Arg Leu Ala Leu Gly Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Ala Thr Leu Leu Arg Pro Ala Asp Ala Cys Ser Cys Ser Pro Val
20 25 30
His Pro Gln Gln Ala Phe Cys Asn Ala Asp Val Val Ile Arg Ala Lys
35 40 45
Ala Val Ser Glu Lys Glu Val Asp Ser Gly Asn Asp Ile Tyr Gly Asn
50 55 60
Pro Ile Lys Arg Ile Gln Tyr Glu Ile Lys Gln Ile Lys Met Phe Lys
65 70 75 80
Gly Pro Glu Lys Asp Ile Glu Phe Ile Tyr Thr Ala Pro Ser Ser Ala
85 90 95
Val Cys Gly Val Ser Leu Asp Val Gly Gly Lys Lys Glu Tyr Leu Ile
100 105 110
Ala Gly Lys Ala Glu Gly Asp Gly Lys Met His Ile Thr Leu Cys Asp
115 120 125
Phe Ile Val Pro Trp Asp Thr Leu Ser Thr Thr Gln Lys Lys Ser Leu
130 135 140
Asn His Arg Tyr Gln Met Gly Cys Glu Cys Lys Ile Thr Arg Cys Pro
145 150 155 160
Met Ile Pro Cys Tyr Ile Ser Ser Pro Asp Glu Cys Leu Trp Met Asp
165 170 175
Trp Val Thr Glu Lys Asn Ile Asn Gly His Gln Ala Lys Phe Phe Ala
180 185 190
Cys Ile Lys Arg Ser Asp Gly Ser Cys Ala Trp Tyr Arg Gly Ala Ala
195 200 205
Pro Pro Lys Gln Glu Phe Leu Asp Ile Glu Asp Pro
210 215 220
<210> 16
<211> 211
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 16
Met Thr Pro Trp Leu Gly Leu Ile Val Leu Leu Gly Ser Trp Ser Leu
1 5 10 15
Gly Asp Trp Gly Ala Glu Ala Cys Thr Cys Ser Pro Ser His Pro Gln
20 25 30
Asp Ala Phe Cys Asn Ser Asp Ile Val Ile Arg Ala Lys Val Val Gly
35 40 45
Lys Lys Leu Val Lys Glu Gly Pro Phe Gly Thr Leu Val Tyr Thr Ile
50 55 60
Lys Gln Met Lys Met Tyr Arg Gly Phe Thr Lys Met Pro His Val Gln
65 70 75 80
Tyr Ile His Thr Glu Ala Ser Glu Ser Leu Cys Gly Leu Lys Leu Glu
85 90 95
Val Asn Lys Tyr Gln Tyr Leu Leu Thr Gly Arg Val Tyr Asp Gly Lys
100 105 110
Met Tyr Thr Gly Leu Cys Asn Phe Val Glu Arg Trp Asp Gln Leu Thr
115 120 125
Leu Ser Gln Arg Lys Gly Leu Asn Tyr Arg Tyr His Leu Gly Cys Asn
130 135 140
Cys Lys Ile Lys Ser Cys Tyr Tyr Leu Pro Cys Phe Val Thr Ser Lys
145 150 155 160
Asn Glu Cys Leu Trp Thr Asp Met Leu Ser Asn Phe Gly Tyr Pro Gly
165 170 175
Tyr Gln Ser Lys His Tyr Ala Cys Ile Arg Gln Lys Gly Gly Tyr Cys
180 185 190
Ser Trp Tyr Arg Gly Trp Ala Pro Pro Asp Lys Ser Ile Ile Asn Ala
195 200 205
Thr Asp Pro
210
<210> 17
<211> 224
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 17
Met Pro Gly Ser Pro Arg Pro Ala Pro Ser Trp Val Leu Leu Leu Arg
1 5 10 15
Leu Leu Ala Leu Leu Arg Pro Pro Gly Leu Gly Glu Ala Cys Ser Cys
20 25 30
Ala Pro Ala His Pro Gln Gln His Ile Cys His Ser Ala Leu Val Ile
35 40 45
Arg Ala Lys Ile Ser Ser Glu Lys Val Val Pro Ala Ser Ala Asp Pro
50 55 60
Ala Asp Thr Glu Lys Met Leu Arg Tyr Glu Ile Lys Gln Ile Lys Met
65 70 75 80
Phe Lys Gly Phe Glu Lys Val Lys Asp Val Gln Tyr Ile Tyr Thr Pro
85 90 95
Phe Asp Ser Ser Leu Cys Gly Val Lys Leu Glu Ala Asn Ser Gln Lys
100 105 110
Gln Tyr Leu Leu Thr Gly Gln Val Leu Ser Asp Gly Lys Val Phe Ile
115 120 125
His Leu Cys Asn Tyr Ile Glu Pro Trp Glu Asp Leu Ser Leu Val Gln
130 135 140
Arg Glu Ser Leu Asn His His Tyr His Leu Asn Cys Gly Cys Gln Ile
145 150 155 160
Thr Thr Cys Tyr Thr Val Pro Cys Thr Ile Ser Ala Pro Asn Glu Cys
165 170 175
Leu Trp Thr Asp Trp Leu Leu Glu Arg Lys Leu Tyr Gly Tyr Gln Ala
180 185 190
Gln His Tyr Val Cys Met Lys His Val Asp Gly Thr Cys Ser Trp Tyr
195 200 205
Arg Gly His Leu Pro Leu Arg Lys Glu Phe Val Asp Ile Val Gln Pro
210 215 220
<210> 18
<211> 404
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 18
Met Ala Asp Lys Val Leu Lys Glu Lys Arg Lys Leu Phe Ile Arg Ser
1 5 10 15
Met Gly Glu Gly Thr Ile Asn Gly Leu Leu Asp Glu Leu Leu Gln Thr
20 25 30
Arg Val Leu Asn Lys Glu Glu Met Glu Lys Val Lys Arg Glu Asn Ala
35 40 45
Thr Val Met Asp Lys Thr Arg Ala Leu Ile Asp Ser Val Ile Pro Lys
50 55 60
Gly Ala Gln Ala Cys Gln Ile Cys Ile Thr Tyr Ile Cys Glu Glu Asp
65 70 75 80
Ser Tyr Leu Ala Gly Thr Leu Gly Leu Ser Ala Asp Gln Thr Ser Gly
85 90 95
Asn Tyr Leu Asn Met Gln Asp Ser Gln Gly Val Leu Ser Ser Phe Pro
100 105 110
Ala Pro Gln Ala Val Gln Asp Asn Pro Ala Met Pro Thr Ser Ser Gly
115 120 125
Ser Glu Gly Asn Val Lys Leu Cys Ser Leu Glu Glu Ala Gln Arg Ile
130 135 140
Trp Lys Gln Lys Ser Ala Glu Ile Tyr Pro Ile Met Asp Lys Ser Ser
145 150 155 160
Arg Thr Arg Leu Ala Leu Ile Ile Cys Asn Glu Glu Phe Asp Ser Ile
165 170 175
Pro Arg Arg Thr Gly Ala Glu Val Asp Ile Thr Gly Met Thr Met Leu
180 185 190
Leu Gln Asn Leu Gly Tyr Ser Val Asp Val Lys Lys Asn Leu Thr Ala
195 200 205
Ser Asp Met Thr Thr Glu Leu Glu Ala Phe Ala His Arg Pro Glu His
210 215 220
Lys Thr Ser Asp Ser Thr Phe Leu Val Phe Met Ser His Gly Ile Arg
225 230 235 240
Glu Gly Ile Cys Gly Lys Lys His Ser Glu Gln Val Pro Asp Ile Leu
245 250 255
Gln Leu Asn Ala Ile Phe Asn Met Leu Asn Thr Lys Asn Cys Pro Ser
260 265 270
Leu Lys Asp Lys Pro Lys Val Ile Ile Ile Gln Ala Cys Arg Gly Asp
275 280 285
Ser Pro Gly Val Val Trp Phe Lys Asp Ser Val Gly Val Ser Gly Asn
290 295 300
Leu Ser Leu Pro Thr Thr Glu Glu Phe Glu Asp Asp Ala Ile Lys Lys
305 310 315 320
Ala His Ile Glu Lys Asp Phe Ile Ala Phe Cys Ser Ser Thr Pro Asp
325 330 335
Asn Val Ser Trp Arg His Pro Thr Met Gly Ser Val Phe Ile Gly Arg
340 345 350
Leu Ile Glu His Met Gln Glu Tyr Ala Cys Ser Cys Asp Val Glu Glu
355 360 365
Ile Phe Arg Lys Val Arg Phe Ser Phe Glu Gln Pro Asp Gly Arg Ala
370 375 380
Gln Met Pro Thr Thr Glu Arg Val Thr Leu Thr Arg Cys Phe Tyr Leu
385 390 395 400
Phe Pro Gly His
<210> 19
<211> 452
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 19
Met Ala Ala Pro Ser Ala Gly Ser Trp Ser Thr Phe Gln His Lys Glu
1 5 10 15
Leu Met Ala Ala Asp Arg Gly Arg Arg Ile Leu Gly Val Cys Gly Met
20 25 30
His Pro His His Gln Glu Thr Leu Lys Lys Asn Arg Val Val Leu Ala
35 40 45
Lys Gln Leu Leu Leu Ser Glu Leu Leu Glu His Leu Leu Glu Lys Asp
50 55 60
Ile Ile Thr Leu Glu Met Arg Glu Leu Ile Gln Ala Lys Val Gly Ser
65 70 75 80
Phe Ser Gln Asn Val Glu Leu Leu Asn Leu Leu Pro Lys Arg Gly Pro
85 90 95
Gln Ala Phe Asp Ala Phe Cys Glu Ala Leu Arg Glu Thr Lys Gln Gly
100 105 110
His Leu Glu Asp Met Leu Leu Thr Thr Leu Ser Gly Leu Gln His Val
115 120 125
Leu Pro Pro Leu Ser Cys Asp Tyr Asp Leu Ser Leu Pro Phe Pro Val
130 135 140
Cys Glu Ser Cys Pro Leu Tyr Lys Lys Leu Arg Leu Ser Thr Asp Thr
145 150 155 160
Val Glu His Ser Leu Asp Asn Lys Asp Gly Pro Val Cys Leu Gln Val
165 170 175
Lys Pro Cys Thr Pro Glu Phe Tyr Gln Thr His Phe Gln Leu Ala Tyr
180 185 190
Arg Leu Gln Ser Arg Pro Arg Gly Leu Ala Leu Val Leu Ser Asn Val
195 200 205
His Phe Thr Gly Glu Lys Glu Leu Glu Phe Arg Ser Gly Gly Asp Val
210 215 220
Asp His Ser Thr Leu Val Thr Leu Phe Lys Leu Leu Gly Tyr Asp Val
225 230 235 240
His Val Leu Cys Asp Gln Thr Ala Gln Glu Met Gln Glu Lys Leu Gln
245 250 255
Asn Phe Ala Gln Leu Pro Ala His Arg Val Thr Asp Ser Cys Ile Val
260 265 270
Ala Leu Leu Ser His Gly Val Glu Gly Ala Ile Tyr Gly Val Asp Gly
275 280 285
Lys Leu Leu Gln Leu Gln Glu Val Phe Gln Leu Phe Asp Asn Ala Asn
290 295 300
Cys Pro Ser Leu Gln Asn Lys Pro Lys Met Phe Phe Ile Gln Ala Cys
305 310 315 320
Arg Gly Asp Glu Thr Asp Arg Gly Val Asp Gln Gln Asp Gly Lys Asn
325 330 335
His Ala Gly Ser Pro Gly Cys Glu Glu Ser Asp Ala Gly Lys Glu Lys
340 345 350
Leu Pro Lys Met Arg Leu Pro Thr Arg Ser Asp Met Ile Cys Gly Tyr
355 360 365
Ala Cys Leu Lys Gly Thr Ala Ala Met Arg Asn Thr Lys Arg Gly Ser
370 375 380
Trp Tyr Ile Glu Ala Leu Ala Gln Val Phe Ser Glu Arg Ala Cys Asp
385 390 395 400
Met His Val Ala Asp Met Leu Val Lys Val Asn Ala Leu Ile Lys Asp
405 410 415
Arg Glu Gly Tyr Ala Pro Gly Thr Glu Phe His Arg Cys Lys Glu Met
420 425 430
Ser Glu Tyr Cys Ser Thr Leu Cys Arg His Leu Tyr Leu Phe Pro Gly
435 440 445
His Pro Pro Thr
450
<210> 20
<211> 277
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 20
Met Glu Asn Thr Glu Asn Ser Val Asp Ser Lys Ser Ile Lys Asn Leu
1 5 10 15
Glu Pro Lys Ile Ile His Gly Ser Glu Ser Met Asp Ser Gly Ile Ser
20 25 30
Leu Asp Asn Ser Tyr Lys Met Asp Tyr Pro Glu Met Gly Leu Cys Ile
35 40 45
Ile Ile Asn Asn Lys Asn Phe His Lys Ser Thr Gly Met Thr Ser Arg
50 55 60
Ser Gly Thr Asp Val Asp Ala Ala Asn Leu Arg Glu Thr Phe Arg Asn
65 70 75 80
Leu Lys Tyr Glu Val Arg Asn Lys Asn Asp Leu Thr Arg Glu Glu Ile
85 90 95
Val Glu Leu Met Arg Asp Val Ser Lys Glu Asp His Ser Lys Arg Ser
100 105 110
Ser Phe Val Cys Val Leu Leu Ser His Gly Glu Glu Gly Ile Ile Phe
115 120 125
Gly Thr Asn Gly Pro Val Asp Leu Lys Lys Ile Thr Asn Phe Phe Arg
130 135 140
Gly Asp Arg Cys Arg Ser Leu Thr Gly Lys Pro Lys Leu Phe Ile Ile
145 150 155 160
Gln Ala Cys Arg Gly Thr Glu Leu Asp Cys Gly Ile Glu Thr Asp Ser
165 170 175
Gly Val Asp Asp Asp Met Ala Cys His Lys Ile Pro Val Glu Ala Asp
180 185 190
Phe Leu Tyr Ala Tyr Ser Thr Ala Pro Gly Tyr Tyr Ser Trp Arg Asn
195 200 205
Ser Lys Asp Gly Ser Trp Phe Ile Gln Ser Leu Cys Ala Met Leu Lys
210 215 220
Gln Tyr Ala Asp Lys Leu Glu Phe Met His Ile Leu Thr Arg Val Asn
225 230 235 240
Arg Lys Val Ala Thr Glu Phe Glu Ser Phe Ser Phe Asp Ala Thr Phe
245 250 255
His Ala Lys Lys Gln Ile Pro Cys Ile Val Ser Met Leu Thr Lys Glu
260 265 270
Leu Tyr Phe Tyr His
275
<210> 21
<211> 377
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 21
Met Ala Glu Gly Asn His Arg Lys Lys Pro Leu Lys Val Leu Glu Ser
1 5 10 15
Leu Gly Lys Asp Phe Leu Thr Gly Val Leu Asp Asn Leu Val Glu Gln
20 25 30
Asn Val Leu Asn Trp Lys Glu Glu Glu Lys Lys Lys Tyr Tyr Asp Ala
35 40 45
Lys Thr Glu Asp Lys Val Arg Val Met Ala Asp Ser Met Gln Glu Lys
50 55 60
Gln Arg Met Ala Gly Gln Met Leu Leu Gln Thr Phe Phe Asn Ile Asp
65 70 75 80
Gln Ile Ser Pro Asn Lys Lys Ala His Pro Asn Met Glu Ala Gly Pro
85 90 95
Pro Glu Ser Gly Glu Ser Thr Asp Ala Leu Lys Leu Cys Pro His Glu
100 105 110
Glu Phe Leu Arg Leu Cys Lys Glu Arg Ala Glu Glu Ile Tyr Pro Ile
115 120 125
Lys Glu Arg Asn Asn Arg Thr Arg Leu Ala Leu Ile Ile Cys Asn Thr
130 135 140
Glu Phe Asp His Leu Pro Pro Arg Asn Gly Ala Asp Phe Asp Ile Thr
145 150 155 160
Gly Met Lys Glu Leu Leu Glu Gly Leu Asp Tyr Ser Val Asp Val Glu
165 170 175
Glu Asn Leu Thr Ala Arg Asp Met Glu Ser Ala Leu Arg Ala Phe Ala
180 185 190
Thr Arg Pro Glu His Lys Ser Ser Asp Ser Thr Phe Leu Val Leu Met
195 200 205
Ser His Gly Ile Leu Glu Gly Ile Cys Gly Thr Val His Asp Glu Lys
210 215 220
Lys Pro Asp Val Leu Leu Tyr Asp Thr Ile Phe Gln Ile Phe Asn Asn
225 230 235 240
Arg Asn Cys Leu Ser Leu Lys Asp Lys Pro Lys Val Ile Ile Val Gln
245 250 255
Ala Cys Arg Gly Ala Asn Arg Gly Glu Leu Trp Val Arg Asp Ser Pro
260 265 270
Ala Ser Leu Glu Val Ala Ser Ser Gln Ser Ser Glu Asn Leu Glu Glu
275 280 285
Asp Ala Val Tyr Lys Thr His Val Glu Lys Asp Phe Ile Ala Phe Cys
290 295 300
Ser Ser Thr Pro His Asn Val Ser Trp Arg Asp Ser Thr Met Gly Ser
305 310 315 320
Ile Phe Ile Thr Gln Leu Ile Thr Cys Phe Gln Lys Tyr Ser Trp Cys
325 330 335
Cys His Leu Glu Glu Val Phe Arg Lys Val Gln Gln Ser Phe Glu Thr
340 345 350
Pro Arg Ala Lys Ala Gln Met Pro Thr Ile Glu Arg Leu Ser Met Thr
355 360 365
Arg Tyr Phe Tyr Leu Phe Pro Gly Asn
370 375
<210> 22
<211> 434
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 22
Met Ala Glu Asp Ser Gly Lys Lys Lys Arg Arg Lys Asn Phe Glu Ala
1 5 10 15
Met Phe Lys Gly Ile Leu Gln Ser Gly Leu Asp Asn Phe Val Ile Asn
20 25 30
His Met Leu Lys Asn Asn Val Ala Gly Gln Thr Ser Ile Gln Thr Leu
35 40 45
Val Pro Asn Thr Asp Gln Lys Ser Thr Ser Val Lys Lys Asp Asn His
50 55 60
Lys Lys Lys Thr Val Lys Met Leu Glu Tyr Leu Gly Lys Asp Val Leu
65 70 75 80
His Gly Val Phe Asn Tyr Leu Ala Lys His Asp Val Leu Thr Leu Lys
85 90 95
Glu Glu Glu Lys Lys Lys Tyr Tyr Asp Thr Lys Ile Glu Asp Lys Ala
100 105 110
Leu Ile Leu Val Asp Ser Leu Arg Lys Asn Arg Val Ala His Gln Met
115 120 125
Phe Thr Gln Thr Leu Leu Asn Met Asp Gln Lys Ile Thr Ser Val Lys
130 135 140
Pro Leu Leu Gln Ile Glu Ala Gly Pro Pro Glu Ser Ala Glu Ser Thr
145 150 155 160
Asn Ile Leu Lys Leu Cys Pro Arg Glu Glu Phe Leu Arg Leu Cys Lys
165 170 175
Lys Asn His Asp Glu Ile Tyr Pro Ile Lys Lys Arg Glu Asp Arg Arg
180 185 190
Arg Leu Ala Leu Ile Ile Cys Asn Thr Lys Phe Asp His Leu Pro Ala
195 200 205
Arg Asn Gly Ala His Tyr Asp Ile Val Gly Met Lys Arg Leu Leu Gln
210 215 220
Gly Leu Gly Tyr Thr Val Val Asp Glu Lys Asn Leu Thr Ala Arg Asp
225 230 235 240
Met Glu Ser Val Leu Arg Ala Phe Ala Ala Arg Pro Glu His Lys Ser
245 250 255
Ser Asp Ser Thr Phe Leu Val Leu Met Ser His Gly Ile Leu Glu Gly
260 265 270
Ile Cys Gly Thr Ala His Lys Lys Lys Lys Pro Asp Val Leu Leu Tyr
275 280 285
Asp Thr Ile Phe Gln Ile Phe Asn Asn Arg Asn Cys Leu Ser Leu Lys
290 295 300
Asp Lys Pro Lys Val Ile Ile Val Gln Ala Cys Arg Gly Glu Lys His
305 310 315 320
Gly Glu Leu Trp Val Arg Asp Ser Pro Ala Ser Leu Ala Leu Ile Ser
325 330 335
Ser Gln Ser Ser Glu Asn Leu Glu Ala Asp Ser Val Cys Lys Ile His
340 345 350
Glu Glu Lys Asp Phe Ile Ala Phe Cys Ser Ser Thr Pro His Asn Val
355 360 365
Ser Trp Arg Asp Arg Thr Arg Gly Ser Ile Phe Ile Thr Glu Leu Ile
370 375 380
Thr Cys Phe Gln Lys Tyr Ser Cys Cys Cys His Leu Met Glu Ile Phe
385 390 395 400
Arg Lys Val Gln Lys Ser Phe Glu Val Pro Gln Ala Lys Ala Gln Met
405 410 415
Pro Thr Ile Glu Arg Ala Thr Leu Thr Arg Asp Phe Tyr Leu Phe Pro
420 425 430
Gly Asn
<210> 23
<211> 293
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 23
Met Ser Ser Ala Ser Gly Leu Arg Arg Gly His Pro Ala Gly Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Met Thr Glu Thr Asp Ala Phe Tyr Lys Arg Glu Met Phe Asp
20 25 30
Pro Ala Glu Lys Tyr Lys Met Asp His Arg Arg Arg Gly Ile Ala Leu
35 40 45
Ile Phe Asn His Glu Arg Phe Phe Trp His Leu Thr Leu Pro Glu Arg
50 55 60
Arg Gly Thr Cys Ala Asp Arg Asp Asn Leu Thr Arg Arg Phe Ser Asp
65 70 75 80
Leu Gly Phe Glu Val Lys Cys Phe Asn Asp Leu Lys Ala Glu Glu Leu
85 90 95
Leu Leu Lys Ile His Glu Val Ser Thr Val Ser His Ala Asp Ala Asp
100 105 110
Cys Phe Val Cys Val Phe Leu Ser His Gly Glu Gly Asn His Ile Tyr
115 120 125
Ala Tyr Asp Ala Lys Ile Glu Ile Gln Thr Leu Thr Gly Leu Phe Lys
130 135 140
Gly Asp Lys Cys His Ser Leu Val Gly Lys Pro Lys Ile Phe Ile Ile
145 150 155 160
Gln Ala Cys Arg Gly Asn Gln His Asp Val Pro Val Ile Pro Leu Asp
165 170 175
Val Val Asp Asn Gln Thr Glu Lys Leu Asp Thr Asn Ile Thr Glu Val
180 185 190
Asp Ala Ala Ser Val Tyr Thr Leu Pro Ala Gly Ala Asp Phe Leu Met
195 200 205
Cys Tyr Ser Val Ala Glu Gly Tyr Tyr Ser His Arg Glu Thr Val Asn
210 215 220
Gly Ser Trp Tyr Ile Gln Asp Leu Cys Glu Met Leu Gly Lys Tyr Gly
225 230 235 240
Ser Ser Leu Glu Phe Thr Glu Leu Leu Thr Leu Val Asn Arg Lys Val
245 250 255
Ser Gln Arg Arg Val Asp Phe Cys Lys Asp Pro Ser Ala Ile Gly Lys
260 265 270
Lys Gln Val Pro Cys Phe Ala Ser Met Leu Thr Lys Lys Leu His Phe
275 280 285
Phe Pro Lys Ser Asn
290
<210> 24
<211> 303
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 24
Met Ala Asp Asp Gln Gly Cys Ile Glu Glu Gln Gly Val Glu Asp Ser
1 5 10 15
Ala Asn Glu Asp Ser Val Asp Ala Lys Pro Asp Arg Ser Ser Phe Val
20 25 30
Pro Ser Leu Phe Ser Lys Lys Lys Lys Asn Val Thr Met Arg Ser Ile
35 40 45
Lys Thr Thr Arg Asp Arg Val Pro Thr Tyr Gln Tyr Asn Met Asn Phe
50 55 60
Glu Lys Leu Gly Lys Cys Ile Ile Ile Asn Asn Lys Asn Phe Asp Lys
65 70 75 80
Val Thr Gly Met Gly Val Arg Asn Gly Thr Asp Lys Asp Ala Glu Ala
85 90 95
Leu Phe Lys Cys Phe Arg Ser Leu Gly Phe Asp Val Ile Val Tyr Asn
100 105 110
Asp Cys Ser Cys Ala Lys Met Gln Asp Leu Leu Lys Lys Ala Ser Glu
115 120 125
Glu Asp His Thr Asn Ala Ala Cys Phe Ala Cys Ile Leu Leu Ser His
130 135 140
Gly Glu Glu Asn Val Ile Tyr Gly Lys Asp Gly Val Thr Pro Ile Lys
145 150 155 160
Asp Leu Thr Ala His Phe Arg Gly Asp Arg Cys Lys Thr Leu Leu Glu
165 170 175
Lys Pro Lys Leu Phe Phe Ile Gln Ala Cys Arg Gly Thr Glu Leu Asp
180 185 190
Asp Gly Ile Gln Ala Asp Ser Gly Pro Ile Asn Asp Thr Asp Ala Asn
195 200 205
Pro Arg Tyr Lys Ile Pro Val Glu Ala Asp Phe Leu Phe Ala Tyr Ser
210 215 220
Thr Val Pro Gly Tyr Tyr Ser Trp Arg Ser Pro Gly Arg Gly Ser Trp
225 230 235 240
Phe Val Gln Ala Leu Cys Ser Ile Leu Glu Glu His Gly Lys Asp Leu
245 250 255
Glu Ile Met Gln Ile Leu Thr Arg Val Asn Asp Arg Val Ala Arg His
260 265 270
Phe Glu Ser Gln Ser Asp Asp Pro His Phe His Glu Lys Lys Gln Ile
275 280 285
Pro Cys Val Val Ser Met Leu Thr Lys Glu Leu Tyr Phe Ser Gln
290 295 300
<210> 25
<211> 479
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 25
Met Asp Phe Ser Arg Asn Leu Tyr Asp Ile Gly Glu Gln Leu Asp Ser
1 5 10 15
Glu Asp Leu Ala Ser Leu Lys Phe Leu Ser Leu Asp Tyr Ile Pro Gln
20 25 30
Arg Lys Gln Glu Pro Ile Lys Asp Ala Leu Met Leu Phe Gln Arg Leu
35 40 45
Gln Glu Lys Arg Met Leu Glu Glu Ser Asn Leu Ser Phe Leu Lys Glu
50 55 60
Leu Leu Phe Arg Ile Asn Arg Leu Asp Leu Leu Ile Thr Tyr Leu Asn
65 70 75 80
Thr Arg Lys Glu Glu Met Glu Arg Glu Leu Gln Thr Pro Gly Arg Ala
85 90 95
Gln Ile Ser Ala Tyr Arg Val Met Leu Tyr Gln Ile Ser Glu Glu Val
100 105 110
Ser Arg Ser Glu Leu Arg Ser Phe Lys Phe Leu Leu Gln Glu Glu Ile
115 120 125
Ser Lys Cys Lys Leu Asp Asp Asp Met Asn Leu Leu Asp Ile Phe Ile
130 135 140
Glu Met Glu Lys Arg Val Ile Leu Gly Glu Gly Lys Leu Asp Ile Leu
145 150 155 160
Lys Arg Val Cys Ala Gln Ile Asn Lys Ser Leu Leu Lys Ile Ile Asn
165 170 175
Asp Tyr Glu Glu Phe Ser Lys Glu Arg Ser Ser Ser Leu Glu Gly Ser
180 185 190
Pro Asp Glu Phe Ser Asn Gly Glu Glu Leu Cys Gly Val Met Thr Ile
195 200 205
Ser Asp Ser Pro Arg Glu Gln Asp Ser Glu Ser Gln Thr Leu Asp Lys
210 215 220
Val Tyr Gln Met Lys Ser Lys Pro Arg Gly Tyr Cys Leu Ile Ile Asn
225 230 235 240
Asn His Asn Phe Ala Lys Ala Arg Glu Lys Val Pro Lys Leu His Ser
245 250 255
Ile Arg Asp Arg Asn Gly Thr His Leu Asp Ala Gly Ala Leu Thr Thr
260 265 270
Thr Phe Glu Glu Leu His Phe Glu Ile Lys Pro His Asp Asp Cys Thr
275 280 285
Val Glu Gln Ile Tyr Glu Ile Leu Lys Ile Tyr Gln Leu Met Asp His
290 295 300
Ser Asn Met Asp Cys Phe Ile Cys Cys Ile Leu Ser His Gly Asp Lys
305 310 315 320
Gly Ile Ile Tyr Gly Thr Asp Gly Gln Glu Ala Pro Ile Tyr Glu Leu
325 330 335
Thr Ser Gln Phe Thr Gly Leu Lys Cys Pro Ser Leu Ala Gly Lys Pro
340 345 350
Lys Val Phe Phe Ile Gln Ala Cys Gln Gly Asp Asn Tyr Gln Lys Gly
355 360 365
Ile Pro Val Glu Thr Asp Ser Glu Glu Gln Pro Tyr Leu Glu Met Asp
370 375 380
Leu Ser Ser Pro Gln Thr Arg Tyr Ile Pro Asp Glu Ala Asp Phe Leu
385 390 395 400
Leu Gly Met Ala Thr Val Asn Asn Cys Val Ser Tyr Arg Asn Pro Ala
405 410 415
Glu Gly Thr Trp Tyr Ile Gln Ser Leu Cys Gln Ser Leu Arg Glu Arg
420 425 430
Cys Pro Arg Gly Asp Asp Ile Leu Thr Ile Leu Thr Glu Val Asn Tyr
435 440 445
Glu Val Ser Asn Lys Asp Asp Lys Lys Asn Met Gly Lys Gln Met Pro
450 455 460
Gln Pro Thr Phe Thr Leu Arg Lys Lys Leu Val Phe Pro Ser Asp
465 470 475
<210> 26
<211> 416
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 26
Met Asp Glu Ala Asp Arg Arg Leu Leu Arg Arg Cys Arg Leu Arg Leu
1 5 10 15
Val Glu Glu Leu Gln Val Asp Gln Leu Trp Asp Ala Leu Leu Ser Arg
20 25 30
Glu Leu Phe Arg Pro His Met Ile Glu Asp Ile Gln Arg Ala Gly Ser
35 40 45
Gly Ser Arg Arg Asp Gln Ala Arg Gln Leu Ile Ile Asp Leu Glu Thr
50 55 60
Arg Gly Ser Gln Ala Leu Pro Leu Phe Ile Ser Cys Leu Glu Asp Thr
65 70 75 80
Gly Gln Asp Met Leu Ala Ser Phe Leu Arg Thr Asn Arg Gln Ala Ala
85 90 95
Lys Leu Ser Lys Pro Thr Leu Glu Asn Leu Thr Pro Val Val Leu Arg
100 105 110
Pro Glu Ile Arg Lys Pro Glu Val Leu Arg Pro Glu Thr Pro Arg Pro
115 120 125
Val Asp Ile Gly Ser Gly Gly Phe Gly Asp Val Gly Ala Leu Glu Ser
130 135 140
Leu Arg Gly Asn Ala Asp Leu Ala Tyr Ile Leu Ser Met Glu Pro Cys
145 150 155 160
Gly His Cys Leu Ile Ile Asn Asn Val Asn Phe Cys Arg Glu Ser Gly
165 170 175
Leu Arg Thr Arg Thr Gly Ser Asn Ile Asp Cys Glu Lys Leu Arg Arg
180 185 190
Arg Phe Ser Ser Leu His Phe Met Val Glu Val Lys Gly Asp Leu Thr
195 200 205
Ala Lys Lys Met Val Leu Ala Leu Leu Glu Leu Ala Gln Gln Asp His
210 215 220
Gly Ala Leu Asp Cys Cys Val Val Val Ile Leu Ser His Gly Cys Gln
225 230 235 240
Ala Ser His Leu Gln Phe Pro Gly Ala Val Tyr Gly Thr Asp Gly Cys
245 250 255
Pro Val Ser Val Glu Lys Ile Val Asn Ile Phe Asn Gly Thr Ser Cys
260 265 270
Pro Ser Leu Gly Gly Lys Pro Lys Leu Phe Phe Ile Gln Ala Cys Gly
275 280 285
Gly Glu Gln Lys Asp His Gly Phe Glu Val Ala Ser Thr Ser Pro Glu
290 295 300
Asp Glu Ser Pro Gly Ser Asn Pro Glu Pro Asp Ala Thr Pro Phe Gln
305 310 315 320
Glu Gly Leu Arg Thr Phe Asp Gln Leu Asp Ala Ile Ser Ser Leu Pro
325 330 335
Thr Pro Ser Asp Ile Phe Val Ser Tyr Ser Thr Phe Pro Gly Phe Val
340 345 350
Ser Trp Arg Asp Pro Lys Ser Gly Ser Trp Tyr Val Glu Thr Leu Asp
355 360 365
Asp Ile Phe Glu Gln Trp Ala His Ser Glu Asp Leu Gln Ser Leu Leu
370 375 380
Leu Arg Val Ala Asn Ala Val Ser Val Lys Gly Ile Tyr Lys Gln Met
385 390 395 400
Pro Gly Cys Phe Asn Phe Leu Arg Lys Lys Leu Phe Phe Lys Thr Ser
405 410 415
<210> 27
<211> 521
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 27
Met Lys Ser Gln Gly Gln His Trp Tyr Ser Ser Ser Asp Lys Asn Cys
1 5 10 15
Lys Val Ser Phe Arg Glu Lys Leu Leu Ile Ile Asp Ser Asn Leu Gly
20 25 30
Val Gln Asp Val Glu Asn Leu Lys Phe Leu Cys Ile Gly Leu Val Pro
35 40 45
Asn Lys Lys Leu Glu Lys Ser Ser Ser Ala Ser Asp Val Phe Glu His
50 55 60
Leu Leu Ala Glu Asp Leu Leu Ser Glu Glu Asp Pro Phe Phe Leu Ala
65 70 75 80
Glu Leu Leu Tyr Ile Ile Arg Gln Lys Lys Leu Leu Gln His Leu Asn
85 90 95
Cys Thr Lys Glu Glu Val Glu Arg Leu Leu Pro Thr Arg Gln Arg Val
100 105 110
Ser Leu Phe Arg Asn Leu Leu Tyr Glu Leu Ser Glu Gly Ile Asp Ser
115 120 125
Glu Asn Leu Lys Asp Met Ile Phe Leu Leu Lys Asp Ser Leu Pro Lys
130 135 140
Thr Glu Met Thr Ser Leu Ser Phe Leu Ala Phe Leu Glu Lys Gln Gly
145 150 155 160
Lys Ile Asp Glu Asp Asn Leu Thr Cys Leu Glu Asp Leu Cys Lys Thr
165 170 175
Val Val Pro Lys Leu Leu Arg Asn Ile Glu Lys Tyr Lys Arg Glu Lys
180 185 190
Ala Ile Gln Ile Val Thr Pro Pro Val Asp Lys Glu Ala Glu Ser Tyr
195 200 205
Gln Gly Glu Glu Glu Leu Val Ser Gln Thr Asp Val Lys Thr Phe Leu
210 215 220
Glu Ala Leu Pro Gln Glu Ser Trp Gln Asn Lys His Ala Gly Ser Asn
225 230 235 240
Gly Asn Arg Ala Thr Asn Gly Ala Pro Ser Leu Val Ser Arg Gly Met
245 250 255
Gln Gly Ala Ser Ala Asn Thr Leu Asn Ser Glu Thr Ser Thr Lys Arg
260 265 270
Ala Ala Val Tyr Arg Met Asn Arg Asn His Arg Gly Leu Cys Val Ile
275 280 285
Val Asn Asn His Ser Phe Thr Ser Leu Lys Asp Arg Gln Gly Thr His
290 295 300
Lys Asp Ala Glu Ile Leu Ser His Val Phe Gln Trp Leu Gly Phe Thr
305 310 315 320
Val His Ile His Asn Asn Val Thr Lys Val Glu Met Glu Met Val Leu
325 330 335
Gln Lys Gln Lys Cys Asn Pro Ala His Ala Asp Gly Asp Cys Phe Val
340 345 350
Phe Cys Ile Leu Thr His Gly Arg Phe Gly Ala Val Tyr Ser Ser Asp
355 360 365
Glu Ala Leu Ile Pro Ile Arg Glu Ile Met Ser His Phe Thr Ala Leu
370 375 380
Gln Cys Pro Arg Leu Ala Glu Lys Pro Lys Leu Phe Phe Ile Gln Ala
385 390 395 400
Cys Gln Gly Glu Glu Ile Gln Pro Ser Val Ser Ile Glu Ala Asp Ala
405 410 415
Leu Asn Pro Glu Gln Ala Pro Thr Ser Leu Gln Asp Ser Ile Pro Ala
420 425 430
Glu Ala Asp Phe Leu Leu Gly Leu Ala Thr Val Pro Gly Tyr Val Ser
435 440 445
Phe Arg His Val Glu Glu Gly Ser Trp Tyr Ile Gln Ser Leu Cys Asn
450 455 460
His Leu Lys Lys Leu Val Pro Arg Met Leu Lys Phe Leu Glu Lys Thr
465 470 475 480
Met Glu Ile Arg Gly Arg Lys Arg Thr Val Trp Gly Ala Lys Gln Ile
485 490 495
Ser Ala Thr Ser Leu Pro Thr Ala Ile Ser Ala Gln Thr Pro Arg Pro
500 505 510
Pro Met Arg Arg Trp Ser Ser Val Ser
515 520
<210> 28
<211> 373
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 28
Met Ala Glu Asn Lys His Pro Asp Lys Pro Leu Lys Val Leu Glu Gln
1 5 10 15
Leu Gly Lys Glu Val Leu Thr Glu Tyr Leu Glu Lys Leu Val Gln Ser
20 25 30
Asn Val Leu Lys Leu Lys Glu Glu Asp Lys Gln Lys Phe Asn Asn Ala
35 40 45
Glu Arg Ser Asp Lys Arg Trp Val Phe Val Asp Ala Met Lys Lys Lys
50 55 60
His Ser Lys Val Gly Glu Met Leu Leu Gln Thr Phe Phe Ser Val Asp
65 70 75 80
Pro Gly Ser His His Gly Glu Ala Asn Leu Glu Met Glu Glu Pro Glu
85 90 95
Glu Ser Leu Asn Thr Leu Lys Leu Cys Ser Pro Glu Glu Phe Thr Arg
100 105 110
Leu Cys Arg Glu Lys Thr Gln Glu Ile Tyr Pro Ile Lys Glu Ala Asn
115 120 125
Gly Arg Thr Arg Lys Ala Leu Ile Ile Cys Asn Thr Glu Phe Lys His
130 135 140
Leu Ser Leu Arg Tyr Gly Ala Asn Phe Asp Ile Ile Gly Met Lys Gly
145 150 155 160
Leu Leu Glu Asp Leu Gly Tyr Asp Val Val Val Lys Glu Glu Leu Thr
165 170 175
Ala Glu Gly Met Glu Ser Glu Met Lys Asp Phe Ala Ala Leu Ser Glu
180 185 190
His Gln Thr Ser Asp Ser Thr Phe Leu Val Leu Met Ser His Gly Thr
195 200 205
Leu His Gly Ile Cys Gly Thr Met His Ser Glu Lys Thr Pro Asp Val
210 215 220
Leu Gln Tyr Asp Thr Ile Tyr Gln Ile Phe Asn Asn Cys His Cys Pro
225 230 235 240
Gly Leu Arg Asp Lys Pro Lys Val Ile Ile Val Gln Ala Cys Arg Gly
245 250 255
Gly Asn Ser Gly Glu Met Trp Ile Arg Glu Ser Ser Lys Pro Gln Leu
260 265 270
Cys Arg Gly Val Asp Leu Pro Arg Asn Met Glu Ala Asp Ala Val Lys
275 280 285
Leu Ser His Val Glu Lys Asp Phe Ile Ala Phe Tyr Ser Thr Thr Pro
290 295 300
His His Leu Ser Tyr Arg Asp Lys Thr Gly Gly Ser Tyr Phe Ile Thr
305 310 315 320
Arg Leu Ile Ser Cys Phe Arg Lys His Ala Cys Ser Cys His Leu Phe
325 330 335
Asp Ile Phe Leu Lys Val Gln Gln Ser Phe Glu Lys Ala Ser Ile His
340 345 350
Ser Gln Met Pro Thr Ile Asp Arg Ala Thr Leu Thr Arg Tyr Phe Tyr
355 360 365
Leu Phe Pro Gly Asn
370
<210> 29
<211> 341
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 29
Met Ala Asp Glu Lys Pro Ser Asn Gly Val Leu Val His Met Val Lys
1 5 10 15
Leu Leu Ile Lys Thr Phe Leu Asp Gly Ile Phe Asp Asp Leu Met Glu
20 25 30
Asn Asn Val Leu Asn Thr Asp Glu Ile His Leu Ile Gly Lys Cys Leu
35 40 45
Lys Phe Val Val Ser Asn Ala Glu Asn Leu Val Asp Asp Ile Thr Glu
50 55 60
Thr Ala Gln Thr Ala Gly Lys Ile Phe Arg Glu His Leu Trp Asn Ser
65 70 75 80
Lys Lys Gln Leu Ser Ser Asp Ile Ser Ser Asp Gly Glu Arg Glu Ala
85 90 95
Asn Met Pro Gly Leu Asn Ile Arg Asn Lys Glu Phe Asn Tyr Leu His
100 105 110
Asn Arg Asn Gly Ser Glu Leu Asp Leu Leu Gly Met Arg Asp Leu Leu
115 120 125
Glu Asn Leu Gly Tyr Ser Val Val Ile Lys Glu Asn Leu Thr Ala Gln
130 135 140
Glu Met Glu Thr Ala Leu Arg Gln Phe Ala Ala His Pro Glu His Gln
145 150 155 160
Ser Ser Asp Ser Thr Phe Leu Val Phe Met Ser His Ser Ile Leu Asn
165 170 175
Gly Ile Cys Gly Thr Lys His Trp Asp Gln Glu Pro Asp Val Leu His
180 185 190
Asp Asp Thr Ile Phe Glu Ile Phe Asn Asn Arg Asn Cys Gln Ser Leu
195 200 205
Lys Asp Lys Pro Lys Val Ile Ile Met Gln Ala Cys Arg Gly Asn Gly
210 215 220
Ala Gly Ile Val Trp Phe Thr Thr Asp Ser Gly Lys Ala Gly Ala Asp
225 230 235 240
Thr His Gly Arg Leu Leu Gln Gly Asn Ile Cys Asn Asp Ala Val Thr
245 250 255
Lys Ala His Val Glu Lys Asp Phe Ile Ala Phe Lys Ser Ser Thr Pro
260 265 270
His Asn Val Ser Trp Arg His Glu Thr Asn Gly Ser Val Phe Ile Ser
275 280 285
Gln Ile Ile Tyr Tyr Phe Arg Glu Tyr Ser Trp Ser His His Leu Glu
290 295 300
Glu Ile Phe Gln Lys Val Gln His Ser Phe Glu Thr Pro Asn Ile Leu
305 310 315 320
Thr Gln Leu Pro Thr Ile Glu Arg Leu Ser Met Thr Arg Tyr Phe Tyr
325 330 335
Leu Phe Pro Gly Asn
340
<210> 30
<211> 377
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 30
Met Ala Glu Asp Lys His Asn Lys Asn Pro Leu Lys Met Leu Glu Ser
1 5 10 15
Leu Gly Lys Glu Leu Ile Ser Gly Leu Leu Asp Asp Phe Val Glu Lys
20 25 30
Asn Val Leu Lys Leu Glu Glu Glu Glu Lys Lys Lys Ile Tyr Asp Ala
35 40 45
Lys Leu Gln Asp Lys Ala Arg Val Leu Val Asp Ser Ile Arg Gln Lys
50 55 60
Asn Gln Glu Ala Gly Gln Val Phe Val Gln Thr Phe Leu Asn Ile Asp
65 70 75 80
Lys Asn Ser Thr Ser Ile Lys Ala Pro Glu Glu Thr Val Ala Gly Pro
85 90 95
Asp Glu Ser Val Gly Ser Ala Ala Thr Leu Lys Leu Cys Pro His Glu
100 105 110
Glu Phe Leu Lys Leu Cys Lys Glu Arg Ala Gly Glu Ile Tyr Pro Ile
115 120 125
Lys Glu Arg Lys Asp Arg Thr Arg Leu Ala Leu Ile Ile Cys Asn Thr
130 135 140
Glu Phe Asp His Met Pro Pro Arg Asn Gly Ala Ala Leu Asp Ile Leu
145 150 155 160
Gly Met Lys Gln Leu Leu Glu Gly Leu Gly Tyr Thr Val Glu Val Glu
165 170 175
Glu Lys Leu Thr Ala Arg Asp Met Glu Ser Val Leu Trp Lys Phe Ala
180 185 190
Ala Arg Glu Glu His Lys Ser Ser Asp Ser Thr Phe Leu Val Phe Met
195 200 205
Ser His Gly Ile Leu Asp Gly Ile Cys Gly Thr Met His Ser Glu Glu
210 215 220
Glu Pro Asp Val Leu Pro Tyr Asp Thr Ile Phe Arg Thr Phe Asn Asn
225 230 235 240
Arg Asn Cys Leu Ser Leu Lys Asp Lys Pro Lys Val Ile Ile Val Gln
245 250 255
Ala Cys Arg Gly Ala Asn Arg Gly Glu Leu Trp Val Ser Asp Ser Pro
260 265 270
Pro Ala Leu Ala Asp Ser Phe Ser Gln Ser Ser Glu Asn Leu Glu Glu
275 280 285
Asp Ala Val Tyr Lys Thr His Val Glu Lys Asp Phe Ile Ala Phe Cys
290 295 300
Ser Ser Thr Pro His Asn Val Ser Trp Arg Asp Ile Lys Lys Gly Ser
305 310 315 320
Leu Phe Ile Thr Arg Leu Ile Thr Cys Phe Gln Lys Tyr Ala Trp Cys
325 330 335
Cys His Leu Glu Glu Val Phe Arg Lys Val Gln Gln Ser Phe Glu Lys
340 345 350
Pro Asn Val Lys Ala Gln Met Pro Thr Val Glu Arg Leu Ser Met Thr
355 360 365
Arg Tyr Phe Tyr Leu Phe Pro Gly Asn
370 375
<210> 31
<211> 242
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 31
Met Ser Asn Pro Arg Ser Leu Glu Glu Glu Lys Tyr Asp Met Ser Gly
1 5 10 15
Ala Arg Leu Ala Leu Ile Leu Cys Val Thr Lys Ala Arg Glu Gly Ser
20 25 30
Glu Glu Asp Leu Asp Ala Leu Glu His Met Phe Arg Gln Leu Arg Phe
35 40 45
Glu Ser Thr Met Lys Arg Asp Pro Thr Ala Glu Gln Phe Gln Glu Glu
50 55 60
Leu Glu Lys Phe Gln Gln Ala Ile Asp Ser Arg Glu Asp Pro Val Ser
65 70 75 80
Cys Ala Phe Val Val Leu Met Ala His Gly Arg Glu Gly Phe Leu Lys
85 90 95
Gly Glu Asp Gly Glu Met Val Lys Leu Glu Asn Leu Phe Glu Ala Leu
100 105 110
Asn Asn Lys Asn Cys Gln Ala Leu Arg Ala Lys Pro Lys Val Tyr Ile
115 120 125
Ile Gln Ala Cys Arg Gly Glu Gln Arg Asp Pro Gly Glu Thr Val Gly
130 135 140
Gly Asp Glu Ile Val Met Val Ile Lys Asp Ser Pro Gln Thr Ile Pro
145 150 155 160
Thr Tyr Thr Asp Ala Leu His Val Tyr Ser Thr Val Glu Gly Tyr Ile
165 170 175
Ala Tyr Arg His Asp Gln Lys Gly Ser Cys Phe Ile Gln Thr Leu Val
180 185 190
Asp Val Phe Thr Lys Arg Lys Gly His Ile Leu Glu Leu Leu Thr Glu
195 200 205
Val Thr Arg Arg Met Ala Glu Ala Glu Leu Val Gln Glu Gly Lys Ala
210 215 220
Arg Lys Thr Asn Pro Glu Ile Gln Ser Thr Leu Arg Lys Arg Leu Tyr
225 230 235 240
Leu Gln
<210> 32
<211> 480
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 32
Met Ile Arg Ala Ala Pro Pro Pro Leu Phe Leu Leu Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Leu Leu Val Ser Trp Ala Ser Arg Gly Glu Ala Ala Pro Asp Gln
20 25 30
Asp Glu Ile Gln Arg Leu Pro Gly Leu Ala Lys Gln Pro Ser Phe Arg
35 40 45
Gln Tyr Ser Gly Tyr Leu Lys Gly Ser Gly Ser Lys His Leu His Tyr
50 55 60
Trp Phe Val Glu Ser Gln Lys Asp Pro Glu Asn Ser Pro Val Val Leu
65 70 75 80
Trp Leu Asn Gly Gly Pro Gly Cys Ser Ser Leu Asp Gly Leu Leu Thr
85 90 95
Glu His Gly Pro Phe Leu Val Gln Pro Asp Gly Val Thr Leu Glu Tyr
100 105 110
Asn Pro Tyr Ser Trp Asn Leu Ile Ala Asn Val Leu Tyr Leu Glu Ser
115 120 125
Pro Ala Gly Val Gly Phe Ser Tyr Ser Asp Asp Lys Phe Tyr Ala Thr
130 135 140
Asn Asp Thr Glu Val Ala Gln Ser Asn Phe Glu Ala Leu Gln Asp Phe
145 150 155 160
Phe Arg Leu Phe Pro Glu Tyr Lys Asn Asn Lys Leu Phe Leu Thr Gly
165 170 175
Glu Ser Tyr Ala Gly Ile Tyr Ile Pro Thr Leu Ala Val Leu Val Met
180 185 190
Gln Asp Pro Ser Met Asn Leu Gln Gly Leu Ala Val Gly Asn Gly Leu
195 200 205
Ser Ser Tyr Glu Gln Asn Asp Asn Ser Leu Val Tyr Phe Ala Tyr Tyr
210 215 220
His Gly Leu Leu Gly Asn Arg Leu Trp Ser Ser Leu Gln Thr His Cys
225 230 235 240
Cys Ser Gln Asn Lys Cys Asn Phe Tyr Asp Asn Lys Asp Leu Glu Cys
245 250 255
Val Thr Asn Leu Gln Glu Val Ala Arg Ile Val Gly Asn Ser Gly Leu
260 265 270
Asn Ile Tyr Asn Leu Tyr Ala Pro Cys Ala Gly Gly Val Pro Ser His
275 280 285
Phe Arg Tyr Glu Lys Asp Thr Val Val Val Gln Asp Leu Gly Asn Ile
290 295 300
Phe Thr Arg Leu Pro Leu Lys Arg Met Trp His Gln Ala Leu Leu Arg
305 310 315 320
Ser Gly Asp Lys Val Arg Met Asp Pro Pro Cys Thr Asn Thr Thr Ala
325 330 335
Ala Ser Thr Tyr Leu Asn Asn Pro Tyr Val Arg Lys Ala Leu Asn Ile
340 345 350
Pro Glu Gln Leu Pro Gln Trp Asp Met Cys Asn Phe Leu Val Asn Leu
355 360 365
Gln Tyr Arg Arg Leu Tyr Arg Ser Met Asn Ser Gln Tyr Leu Lys Leu
370 375 380
Leu Ser Ser Gln Lys Tyr Gln Ile Leu Leu Tyr Asn Gly Asp Val Asp
385 390 395 400
Met Ala Cys Asn Phe Met Gly Asp Glu Trp Phe Val Asp Ser Leu Asn
405 410 415
Gln Lys Met Glu Val Gln Arg Arg Pro Trp Leu Val Lys Tyr Gly Asp
420 425 430
Ser Gly Glu Gln Ile Ala Gly Phe Val Lys Glu Phe Ser His Ile Ala
435 440 445
Phe Leu Thr Ile Lys Gly Ala Gly His Met Val Pro Thr Asp Lys Pro
450 455 460
Leu Ala Ala Phe Thr Met Phe Ser Arg Phe Leu Asn Lys Gln Pro Tyr
465 470 475 480
<210> 33
<211> 339
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 33
Met Trp Gln Leu Trp Ala Ser Leu Cys Cys Leu Leu Val Leu Ala Asn
1 5 10 15
Ala Arg Ser Arg Pro Ser Phe His Pro Leu Ser Asp Glu Leu Val Asn
20 25 30
Tyr Val Asn Lys Arg Asn Thr Thr Trp Gln Ala Gly His Asn Phe Tyr
35 40 45
Asn Val Asp Met Ser Tyr Leu Lys Arg Leu Cys Gly Thr Phe Leu Gly
50 55 60
Gly Pro Lys Pro Pro Gln Arg Val Met Phe Thr Glu Asp Leu Lys Leu
65 70 75 80
Pro Ala Ser Phe Asp Ala Arg Glu Gln Trp Pro Gln Cys Pro Thr Ile
85 90 95
Lys Glu Ile Arg Asp Gln Gly Ser Cys Gly Ser Cys Trp Ala Phe Gly
100 105 110
Ala Val Glu Ala Ile Ser Asp Arg Ile Cys Ile His Thr Asn Ala His
115 120 125
Val Ser Val Glu Val Ser Ala Glu Asp Leu Leu Thr Cys Cys Gly Ser
130 135 140
Met Cys Gly Asp Gly Cys Asn Gly Gly Tyr Pro Ala Glu Ala Trp Asn
145 150 155 160
Phe Trp Thr Arg Lys Gly Leu Val Ser Gly Gly Leu Tyr Glu Ser His
165 170 175
Val Gly Cys Arg Pro Tyr Ser Ile Pro Pro Cys Glu His His Val Asn
180 185 190
Gly Ser Arg Pro Pro Cys Thr Gly Glu Gly Asp Thr Pro Lys Cys Ser
195 200 205
Lys Ile Cys Glu Pro Gly Tyr Ser Pro Thr Tyr Lys Gln Asp Lys His
210 215 220
Tyr Gly Tyr Asn Ser Tyr Ser Val Ser Asn Ser Glu Lys Asp Ile Met
225 230 235 240
Ala Glu Ile Tyr Lys Asn Gly Pro Val Glu Gly Ala Phe Ser Val Tyr
245 250 255
Ser Asp Phe Leu Leu Tyr Lys Ser Gly Val Tyr Gln His Val Thr Gly
260 265 270
Glu Met Met Gly Gly His Ala Ile Arg Ile Leu Gly Trp Gly Val Glu
275 280 285
Asn Gly Thr Pro Tyr Trp Leu Val Ala Asn Ser Trp Asn Thr Asp Trp
290 295 300
Gly Asp Asn Gly Phe Phe Lys Ile Leu Arg Gly Gln Asp His Cys Gly
305 310 315 320
Ile Glu Ser Glu Val Val Ala Gly Ile Pro Arg Thr Asp Gln Tyr Trp
325 330 335
Glu Lys Ile
<210> 34
<211> 463
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 34
Met Gly Ala Gly Pro Ser Leu Leu Leu Ala Ala Leu Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Ser Gly Asp Gly Ala Val Arg Cys Asp Thr Pro Ala Asn Cys Thr Tyr
20 25 30
Leu Asp Leu Leu Gly Thr Trp Val Phe Gln Val Gly Ser Ser Gly Ser
35 40 45
Gln Arg Asp Val Asn Cys Ser Val Met Gly Pro Gln Glu Lys Lys Val
50 55 60
Val Val Tyr Leu Gln Lys Leu Asp Thr Ala Tyr Asp Asp Leu Gly Asn
65 70 75 80
Ser Gly His Phe Thr Ile Ile Tyr Asn Gln Gly Phe Glu Ile Val Leu
85 90 95
Asn Asp Tyr Lys Trp Phe Ala Phe Phe Lys Tyr Lys Glu Glu Gly Ser
100 105 110
Lys Val Thr Thr Tyr Cys Asn Glu Thr Met Thr Gly Trp Val His Asp
115 120 125
Val Leu Gly Arg Asn Trp Ala Cys Phe Thr Gly Lys Lys Val Gly Thr
130 135 140
Ala Ser Glu Asn Val Tyr Val Asn Ile Ala His Leu Lys Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Lys Tyr Ser Asn Arg Leu Tyr Lys Tyr Asp His Asn Phe Val Lys
165 170 175
Ala Ile Asn Ala Ile Gln Lys Ser Trp Thr Ala Thr Thr Tyr Met Glu
180 185 190
Tyr Glu Thr Leu Thr Leu Gly Asp Met Ile Arg Arg Ser Gly Gly His
195 200 205
Ser Arg Lys Ile Pro Arg Pro Lys Pro Ala Pro Leu Thr Ala Glu Ile
210 215 220
Gln Gln Lys Ile Leu His Leu Pro Thr Ser Trp Asp Trp Arg Asn Val
225 230 235 240
His Gly Ile Asn Phe Val Ser Pro Val Arg Asn Gln Ala Ser Cys Gly
245 250 255
Ser Cys Tyr Ser Phe Ala Ser Met Gly Met Leu Glu Ala Arg Ile Arg
260 265 270
Ile Leu Thr Asn Asn Ser Gln Thr Pro Ile Leu Ser Pro Gln Glu Val
275 280 285
Val Ser Cys Ser Gln Tyr Ala Gln Gly Cys Glu Gly Gly Phe Pro Tyr
290 295 300
Leu Ile Ala Gly Lys Tyr Ala Gln Asp Phe Gly Leu Val Glu Glu Ala
305 310 315 320
Cys Phe Pro Tyr Thr Gly Thr Asp Ser Pro Cys Lys Met Lys Glu Asp
325 330 335
Cys Phe Arg Tyr Tyr Ser Ser Glu Tyr His Tyr Val Gly Gly Phe Tyr
340 345 350
Gly Gly Cys Asn Glu Ala Leu Met Lys Leu Glu Leu Val His His Gly
355 360 365
Pro Met Ala Val Ala Phe Glu Val Tyr Asp Asp Phe Leu His Tyr Lys
370 375 380
Lys Gly Ile Tyr His His Thr Gly Leu Arg Asp Pro Phe Asn Pro Phe
385 390 395 400
Glu Leu Thr Asn His Ala Val Leu Leu Val Gly Tyr Gly Thr Asp Ser
405 410 415
Ala Ser Gly Met Asp Tyr Trp Ile Val Lys Asn Ser Trp Gly Thr Gly
420 425 430
Trp Gly Glu Asn Gly Tyr Phe Arg Ile Arg Arg Gly Thr Asp Glu Cys
435 440 445
Ala Ile Glu Ser Ile Ala Val Ala Ala Thr Pro Ile Pro Lys Leu
450 455 460
<210> 35
<211> 412
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 35
Met Gln Pro Ser Ser Leu Leu Pro Leu Ala Leu Cys Leu Leu Ala Ala
1 5 10 15
Pro Ala Ser Ala Leu Val Arg Ile Pro Leu His Lys Phe Thr Ser Ile
20 25 30
Arg Arg Thr Met Ser Glu Val Gly Gly Ser Val Glu Asp Leu Ile Ala
35 40 45
Lys Gly Pro Val Ser Lys Tyr Ser Gln Ala Val Pro Ala Val Thr Glu
50 55 60
Gly Pro Ile Pro Glu Val Leu Lys Asn Tyr Met Asp Ala Gln Tyr Tyr
65 70 75 80
Gly Glu Ile Gly Ile Gly Thr Pro Pro Gln Cys Phe Thr Val Val Phe
85 90 95
Asp Thr Gly Ser Ser Asn Leu Trp Val Pro Ser Ile His Cys Lys Leu
100 105 110
Leu Asp Ile Ala Cys Trp Ile His His Lys Tyr Asn Ser Asp Lys Ser
115 120 125
Ser Thr Tyr Val Lys Asn Gly Thr Ser Phe Asp Ile His Tyr Gly Ser
130 135 140
Gly Ser Leu Ser Gly Tyr Leu Ser Gln Asp Thr Val Ser Val Pro Cys
145 150 155 160
Gln Ser Ala Ser Ser Ala Ser Ala Leu Gly Gly Val Lys Val Glu Arg
165 170 175
Gln Val Phe Gly Glu Ala Thr Lys Gln Pro Gly Ile Thr Phe Ile Ala
180 185 190
Ala Lys Phe Asp Gly Ile Leu Gly Met Ala Tyr Pro Arg Ile Ser Val
195 200 205
Asn Asn Val Leu Pro Val Phe Asp Asn Leu Met Gln Gln Lys Leu Val
210 215 220
Asp Gln Asn Ile Phe Ser Phe Tyr Leu Ser Arg Asp Pro Asp Ala Gln
225 230 235 240
Pro Gly Gly Glu Leu Met Leu Gly Gly Thr Asp Ser Lys Tyr Tyr Lys
245 250 255
Gly Ser Leu Ser Tyr Leu Asn Val Thr Arg Lys Ala Tyr Trp Gln Val
260 265 270
His Leu Asp Gln Val Glu Val Ala Ser Gly Leu Thr Leu Cys Lys Glu
275 280 285
Gly Cys Glu Ala Ile Val Asp Thr Gly Thr Ser Leu Met Val Gly Pro
290 295 300
Val Asp Glu Val Arg Glu Leu Gln Lys Ala Ile Gly Ala Val Pro Leu
305 310 315 320
Ile Gln Gly Glu Tyr Met Ile Pro Cys Glu Lys Val Ser Thr Leu Pro
325 330 335
Ala Ile Thr Leu Lys Leu Gly Gly Lys Gly Tyr Lys Leu Ser Pro Glu
340 345 350
Asp Tyr Thr Leu Lys Val Ser Gln Ala Gly Lys Thr Leu Cys Leu Ser
355 360 365
Gly Phe Met Gly Met Asp Ile Pro Pro Pro Ser Gly Pro Leu Trp Ile
370 375 380
Leu Gly Asp Val Phe Ile Gly Arg Tyr Tyr Thr Val Phe Asp Arg Asp
385 390 395 400
Asn Asn Arg Val Gly Phe Ala Glu Ala Ala Arg Leu
405 410
<210> 36
<211> 401
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 36
Met Lys Thr Leu Leu Leu Leu Leu Leu Val Leu Leu Glu Leu Gly Glu
1 5 10 15
Ala Gln Gly Ser Leu His Arg Val Pro Leu Arg Arg His Pro Ser Leu
20 25 30
Lys Lys Lys Leu Arg Ala Arg Ser Gln Leu Ser Glu Phe Trp Lys Ser
35 40 45
His Asn Leu Asp Met Ile Gln Phe Thr Glu Ser Cys Ser Met Asp Gln
50 55 60
Ser Ala Lys Glu Pro Leu Ile Asn Tyr Leu Asp Met Glu Tyr Phe Gly
65 70 75 80
Thr Ile Ser Ile Gly Ser Pro Pro Gln Asn Phe Thr Val Ile Phe Asp
85 90 95
Thr Gly Ser Ser Asn Leu Trp Val Pro Ser Val Tyr Cys Thr Ser Pro
100 105 110
Ala Cys Lys Thr His Ser Arg Phe Gln Pro Ser Gln Ser Ser Thr Tyr
115 120 125
Ser Gln Pro Gly Gln Ser Phe Ser Ile Gln Tyr Gly Thr Gly Ser Leu
130 135 140
Ser Gly Ile Ile Gly Ala Asp Gln Val Ser Ala Phe Ala Thr Gln Val
145 150 155 160
Glu Gly Leu Thr Val Val Gly Gln Gln Phe Gly Glu Ser Val Thr Glu
165 170 175
Pro Gly Gln Thr Phe Val Asp Ala Glu Phe Asp Gly Ile Leu Gly Leu
180 185 190
Gly Tyr Pro Ser Leu Ala Val Gly Gly Val Thr Pro Val Phe Asp Asn
195 200 205
Met Met Ala Gln Asn Leu Val Asp Leu Pro Met Phe Ser Val Tyr Met
210 215 220
Ser Ser Asn Pro Glu Gly Gly Ala Gly Ser Glu Leu Ile Phe Gly Gly
225 230 235 240
Tyr Asp His Ser His Phe Ser Gly Ser Leu Asn Trp Val Pro Val Thr
245 250 255
Lys Gln Ala Tyr Trp Gln Ile Ala Leu Asp Asn Ile Gln Val Gly Gly
260 265 270
Thr Val Met Phe Cys Ser Glu Gly Cys Gln Ala Ile Val Asp Thr Gly
275 280 285
Thr Ser Leu Ile Thr Gly Pro Ser Asp Lys Ile Lys Gln Leu Gln Asn
290 295 300
Ala Ile Gly Ala Ala Pro Val Asp Gly Glu Tyr Ala Val Glu Cys Ala
305 310 315 320
Asn Leu Asn Val Met Pro Asp Val Thr Phe Thr Ile Asn Gly Val Pro
325 330 335
Tyr Thr Leu Ser Pro Thr Ala Tyr Thr Leu Leu Asp Phe Val Asp Gly
340 345 350
Met Gln Phe Cys Ser Ser Gly Phe Gln Gly Leu Asp Ile His Pro Pro
355 360 365
Ala Gly Pro Leu Trp Ile Leu Gly Asp Val Phe Ile Arg Gln Phe Tyr
370 375 380
Ser Val Phe Asp Arg Gly Asn Asn Arg Val Gly Leu Ala Pro Ala Val
385 390 395 400
Pro
<210> 37
<211> 484
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 37
Met Ala Pro Trp Leu Gln Leu Leu Ser Leu Leu Gly Leu Leu Pro Gly
1 5 10 15
Ala Val Ala Ala Pro Ala Gln Pro Arg Ala Ala Ser Phe Gln Ala Trp
20 25 30
Gly Pro Pro Ser Pro Glu Leu Leu Ala Pro Thr Arg Phe Ala Leu Glu
35 40 45
Met Phe Asn Arg Gly Arg Ala Ala Gly Thr Arg Ala Val Leu Gly Leu
50 55 60
Val Arg Gly Arg Val Arg Arg Ala Gly Gln Gly Ser Leu Tyr Ser Leu
65 70 75 80
Glu Ala Thr Leu Glu Glu Pro Pro Cys Asn Asp Pro Met Val Cys Arg
85 90 95
Leu Pro Val Ser Lys Lys Thr Leu Leu Cys Ser Phe Gln Val Leu Asp
100 105 110
Glu Leu Gly Arg His Val Leu Leu Arg Lys Asp Cys Gly Pro Val Asp
115 120 125
Thr Lys Val Pro Gly Ala Gly Glu Pro Lys Ser Ala Phe Thr Gln Gly
130 135 140
Ser Ala Met Ile Ser Ser Leu Ser Gln Asn His Pro Asp Asn Arg Asn
145 150 155 160
Glu Thr Phe Ser Ser Val Ile Ser Leu Leu Asn Glu Asp Pro Leu Ser
165 170 175
Gln Asp Leu Pro Val Lys Met Ala Ser Ile Phe Lys Asn Phe Val Ile
180 185 190
Thr Tyr Asn Arg Thr Tyr Glu Ser Lys Glu Glu Ala Arg Trp Arg Leu
195 200 205
Ser Val Phe Val Asn Asn Met Val Arg Ala Gln Lys Ile Gln Ala Leu
210 215 220
Asp Arg Gly Thr Ala Gln Tyr Gly Val Thr Lys Phe Ser Asp Leu Thr
225 230 235 240
Glu Glu Glu Phe Arg Thr Ile Tyr Leu Asn Thr Leu Leu Arg Lys Glu
245 250 255
Pro Gly Asn Lys Met Lys Gln Ala Lys Ser Val Gly Asp Leu Ala Pro
260 265 270
Pro Glu Trp Asp Trp Arg Ser Lys Gly Ala Val Thr Lys Val Lys Asp
275 280 285
Gln Gly Met Cys Gly Ser Cys Trp Ala Phe Ser Val Thr Gly Asn Val
290 295 300
Glu Gly Gln Trp Phe Leu Asn Gln Gly Thr Leu Leu Ser Leu Ser Glu
305 310 315 320
Gln Glu Leu Leu Asp Cys Asp Lys Met Asp Lys Ala Cys Met Gly Gly
325 330 335
Leu Pro Ser Asn Ala Tyr Ser Ala Ile Lys Asn Leu Gly Gly Leu Glu
340 345 350
Thr Glu Asp Asp Tyr Ser Tyr Gln Gly His Met Gln Ser Cys Asn Phe
355 360 365
Ser Ala Glu Lys Ala Lys Val Tyr Ile Asn Asp Ser Val Glu Leu Ser
370 375 380
Gln Asn Glu Gln Lys Leu Ala Ala Trp Leu Ala Lys Arg Gly Pro Ile
385 390 395 400
Ser Val Ala Ile Asn Ala Phe Gly Met Gln Phe Tyr Arg His Gly Ile
405 410 415
Ser Arg Pro Leu Arg Pro Leu Cys Ser Pro Trp Leu Ile Asp His Ala
420 425 430
Val Leu Leu Val Gly Tyr Gly Asn Arg Ser Asp Val Pro Phe Trp Ala
435 440 445
Ile Lys Asn Ser Trp Gly Thr Asp Trp Gly Glu Lys Gly Tyr Tyr Tyr
450 455 460
Leu His Arg Gly Ser Gly Ala Cys Gly Val Asn Thr Met Ala Ser Ser
465 470 475 480
Ala Val Val Asp
<210> 38
<211> 255
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 38
Met Gln Pro Leu Leu Leu Leu Leu Ala Phe Leu Leu Pro Thr Gly Ala
1 5 10 15
Glu Ala Gly Glu Ile Ile Gly Gly Arg Glu Ser Arg Pro His Ser Arg
20 25 30
Pro Tyr Met Ala Tyr Leu Gln Ile Gln Ser Pro Ala Gly Gln Ser Arg
35 40 45
Cys Gly Gly Phe Leu Val Arg Glu Asp Phe Val Leu Thr Ala Ala His
50 55 60
Cys Trp Gly Ser Asn Ile Asn Val Thr Leu Gly Ala His Asn Ile Gln
65 70 75 80
Arg Arg Glu Asn Thr Gln Gln His Ile Thr Ala Arg Arg Ala Ile Arg
85 90 95
His Pro Gln Tyr Asn Gln Arg Thr Ile Gln Asn Asp Ile Met Leu Leu
100 105 110
Gln Leu Ser Arg Arg Val Arg Arg Asn Arg Asn Val Asn Pro Val Ala
115 120 125
Leu Pro Arg Ala Gln Glu Gly Leu Arg Pro Gly Thr Leu Cys Thr Val
130 135 140
Ala Gly Trp Gly Arg Val Ser Met Arg Arg Gly Thr Asp Thr Leu Arg
145 150 155 160
Glu Val Gln Leu Arg Val Gln Arg Asp Arg Gln Cys Leu Arg Ile Phe
165 170 175
Gly Ser Tyr Asp Pro Arg Arg Gln Ile Cys Val Gly Asp Arg Arg Glu
180 185 190
Arg Lys Ala Ala Phe Lys Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Leu Cys Asn
195 200 205
Asn Val Ala His Gly Ile Val Ser Tyr Gly Lys Ser Ser Gly Val Pro
210 215 220
Pro Glu Val Phe Thr Arg Val Ser Ser Phe Leu Pro Trp Ile Arg Thr
225 230 235 240
Thr Met Arg Ser Phe Lys Leu Leu Asp Gln Met Glu Thr Pro Leu
245 250 255
<210> 39
<211> 335
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 39
Met Trp Ala Thr Leu Pro Leu Leu Cys Ala Gly Ala Trp Leu Leu Gly
1 5 10 15
Val Pro Val Cys Gly Ala Ala Glu Leu Cys Val Asn Ser Leu Glu Lys
20 25 30
Phe His Phe Lys Ser Trp Met Ser Lys His Arg Lys Thr Tyr Ser Thr
35 40 45
Glu Glu Tyr His His Arg Leu Gln Thr Phe Ala Ser Asn Trp Arg Lys
50 55 60
Ile Asn Ala His Asn Asn Gly Asn His Thr Phe Lys Met Ala Leu Asn
65 70 75 80
Gln Phe Ser Asp Met Ser Phe Ala Glu Ile Lys His Lys Tyr Leu Trp
85 90 95
Ser Glu Pro Gln Asn Cys Ser Ala Thr Lys Ser Asn Tyr Leu Arg Gly
100 105 110
Thr Gly Pro Tyr Pro Pro Ser Val Asp Trp Arg Lys Lys Gly Asn Phe
115 120 125
Val Ser Pro Val Lys Asn Gln Gly Ala Cys Gly Ser Cys Trp Thr Phe
130 135 140
Ser Thr Thr Gly Ala Leu Glu Ser Ala Ile Ala Ile Ala Thr Gly Lys
145 150 155 160
Met Leu Ser Leu Ala Glu Gln Gln Leu Val Asp Cys Ala Gln Asp Phe
165 170 175
Asn Asn His Gly Cys Gln Gly Gly Leu Pro Ser Gln Ala Phe Glu Tyr
180 185 190
Ile Leu Tyr Asn Lys Gly Ile Met Gly Glu Asp Thr Tyr Pro Tyr Gln
195 200 205
Gly Lys Asp Gly Tyr Cys Lys Phe Gln Pro Gly Lys Ala Ile Gly Phe
210 215 220
Val Lys Asp Val Ala Asn Ile Thr Ile Tyr Asp Glu Glu Ala Met Val
225 230 235 240
Glu Ala Val Ala Leu Tyr Asn Pro Val Ser Phe Ala Phe Glu Val Thr
245 250 255
Gln Asp Phe Met Met Tyr Arg Thr Gly Ile Tyr Ser Ser Thr Ser Cys
260 265 270
His Lys Thr Pro Asp Lys Val Asn His Ala Val Leu Ala Val Gly Tyr
275 280 285
Gly Glu Lys Asn Gly Ile Pro Tyr Trp Ile Val Lys Asn Ser Trp Gly
290 295 300
Pro Gln Trp Gly Met Asn Gly Tyr Phe Leu Ile Glu Arg Gly Lys Asn
305 310 315 320
Met Cys Gly Leu Ala Ala Cys Ala Ser Tyr Pro Ile Pro Leu Val
325 330 335
<210> 40
<211> 329
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 40
Met Trp Gly Leu Lys Val Leu Leu Leu Pro Val Val Ser Phe Ala Leu
1 5 10 15
Tyr Pro Glu Glu Ile Leu Asp Thr His Trp Glu Leu Trp Lys Lys Thr
20 25 30
His Arg Lys Gln Tyr Asn Asn Lys Val Asp Glu Ile Ser Arg Arg Leu
35 40 45
Ile Trp Glu Lys Asn Leu Lys Tyr Ile Ser Ile His Asn Leu Glu Ala
50 55 60
Ser Leu Gly Val His Thr Tyr Glu Leu Ala Met Asn His Leu Gly Asp
65 70 75 80
Met Thr Ser Glu Glu Val Val Gln Lys Met Thr Gly Leu Lys Val Pro
85 90 95
Leu Ser His Ser Arg Ser Asn Asp Thr Leu Tyr Ile Pro Glu Trp Glu
100 105 110
Gly Arg Ala Pro Asp Ser Val Asp Tyr Arg Lys Lys Gly Tyr Val Thr
115 120 125
Pro Val Lys Asn Gln Gly Gln Cys Gly Ser Cys Trp Ala Phe Ser Ser
130 135 140
Val Gly Ala Leu Glu Gly Gln Leu Lys Lys Lys Thr Gly Lys Leu Leu
145 150 155 160
Asn Leu Ser Pro Gln Asn Leu Val Asp Cys Val Ser Glu Asn Asp Gly
165 170 175
Cys Gly Gly Gly Tyr Met Thr Asn Ala Phe Gln Tyr Val Gln Lys Asn
180 185 190
Arg Gly Ile Asp Ser Glu Asp Ala Tyr Pro Tyr Val Gly Gln Glu Glu
195 200 205
Ser Cys Met Tyr Asn Pro Thr Gly Lys Ala Ala Lys Cys Arg Gly Tyr
210 215 220
Arg Glu Ile Pro Glu Gly Asn Glu Lys Ala Leu Lys Arg Ala Val Ala
225 230 235 240
Arg Val Gly Pro Val Ser Val Ala Ile Asp Ala Ser Leu Thr Ser Phe
245 250 255
Gln Phe Tyr Ser Lys Gly Val Tyr Tyr Asp Glu Ser Cys Asn Ser Asp
260 265 270
Asn Leu Asn His Ala Val Leu Ala Val Gly Tyr Gly Ile Gln Lys Gly
275 280 285
Asn Lys His Trp Ile Ile Lys Asn Ser Trp Gly Glu Asn Trp Gly Asn
290 295 300
Lys Gly Tyr Ile Leu Met Ala Arg Asn Lys Asn Asn Ala Cys Gly Ile
305 310 315 320
Ala Asn Leu Ala Ser Phe Pro Lys Met
325
<210> 41
<211> 333
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 41
Met Asn Pro Thr Leu Ile Leu Ala Ala Phe Cys Leu Gly Ile Ala Ser
1 5 10 15
Ala Thr Leu Thr Phe Asp His Ser Leu Glu Ala Gln Trp Thr Lys Trp
20 25 30
Lys Ala Met His Asn Arg Leu Tyr Gly Met Asn Glu Glu Gly Trp Arg
35 40 45
Arg Ala Val Trp Glu Lys Asn Met Lys Met Ile Glu Leu His Asn Gln
50 55 60
Glu Tyr Arg Glu Gly Lys His Ser Phe Thr Met Ala Met Asn Ala Phe
65 70 75 80
Gly Asp Met Thr Ser Glu Glu Phe Arg Gln Val Met Asn Gly Phe Gln
85 90 95
Asn Arg Lys Pro Arg Lys Gly Lys Val Phe Gln Glu Pro Leu Phe Tyr
100 105 110
Glu Ala Pro Arg Ser Val Asp Trp Arg Glu Lys Gly Tyr Val Thr Pro
115 120 125
Val Lys Asn Gln Gly Gln Cys Gly Ser Cys Trp Ala Phe Ser Ala Thr
130 135 140
Gly Ala Leu Glu Gly Gln Met Phe Arg Lys Thr Gly Arg Leu Ile Ser
145 150 155 160
Leu Ser Glu Gln Asn Leu Val Asp Cys Ser Gly Pro Gln Gly Asn Glu
165 170 175
Gly Cys Asn Gly Gly Leu Met Asp Tyr Ala Phe Gln Tyr Val Gln Asp
180 185 190
Asn Gly Gly Leu Asp Ser Glu Glu Ser Tyr Pro Tyr Glu Ala Thr Glu
195 200 205
Glu Ser Cys Lys Tyr Asn Pro Lys Tyr Ser Val Ala Asn Asp Thr Gly
210 215 220
Phe Val Asp Ile Pro Lys Gln Glu Lys Ala Leu Met Lys Ala Val Ala
225 230 235 240
Thr Val Gly Pro Ile Ser Val Ala Ile Asp Ala Gly His Glu Ser Phe
245 250 255
Leu Phe Tyr Lys Glu Gly Ile Tyr Phe Glu Pro Asp Cys Ser Ser Glu
260 265 270
Asp Met Asp His Gly Val Leu Val Val Gly Tyr Gly Phe Glu Ser Thr
275 280 285
Glu Ser Asp Asn Asn Lys Tyr Trp Leu Val Lys Asn Ser Trp Gly Glu
290 295 300
Glu Trp Gly Met Gly Gly Tyr Val Lys Met Ala Lys Asp Arg Arg Asn
305 310 315 320
His Cys Gly Ile Ala Ser Ala Ala Ser Tyr Pro Thr Val
325 330
<210> 42
<211> 334
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 42
Met Asn Leu Ser Leu Val Leu Ala Ala Phe Cys Leu Gly Ile Ala Ser
1 5 10 15
Ala Val Pro Lys Phe Asp Gln Asn Leu Asp Thr Lys Trp Tyr Gln Trp
20 25 30
Lys Ala Thr His Arg Arg Leu Tyr Gly Ala Asn Glu Glu Gly Trp Arg
35 40 45
Arg Ala Val Trp Glu Lys Asn Met Lys Met Ile Glu Leu His Asn Gly
50 55 60
Glu Tyr Ser Gln Gly Lys His Gly Phe Thr Met Ala Met Asn Ala Phe
65 70 75 80
Gly Asp Met Thr Asn Glu Glu Phe Arg Gln Met Met Gly Cys Phe Arg
85 90 95
Asn Gln Lys Phe Arg Lys Gly Lys Val Phe Arg Glu Pro Leu Phe Leu
100 105 110
Asp Leu Pro Lys Ser Val Asp Trp Arg Lys Lys Gly Tyr Val Thr Pro
115 120 125
Val Lys Asn Gln Lys Gln Cys Gly Ser Cys Trp Ala Phe Ser Ala Thr
130 135 140
Gly Ala Leu Glu Gly Gln Met Phe Arg Lys Thr Gly Lys Leu Val Ser
145 150 155 160
Leu Ser Glu Gln Asn Leu Val Asp Cys Ser Arg Pro Gln Gly Asn Gln
165 170 175
Gly Cys Asn Gly Gly Phe Met Ala Arg Ala Phe Gln Tyr Val Lys Glu
180 185 190
Asn Gly Gly Leu Asp Ser Glu Glu Ser Tyr Pro Tyr Val Ala Val Asp
195 200 205
Glu Ile Cys Lys Tyr Arg Pro Glu Asn Ser Val Ala Asn Asp Thr Gly
210 215 220
Phe Thr Val Val Ala Pro Gly Lys Glu Lys Ala Leu Met Lys Ala Val
225 230 235 240
Ala Thr Val Gly Pro Ile Ser Val Ala Met Asp Ala Gly His Ser Ser
245 250 255
Phe Gln Phe Tyr Lys Ser Gly Ile Tyr Phe Glu Pro Asp Cys Ser Ser
260 265 270
Lys Asn Leu Asp His Gly Val Leu Val Val Gly Tyr Gly Phe Glu Gly
275 280 285
Ala Asn Ser Asn Asn Ser Lys Tyr Trp Leu Val Lys Asn Ser Trp Gly
290 295 300
Pro Glu Trp Gly Ser Asn Gly Tyr Val Lys Ile Ala Lys Asp Lys Asn
305 310 315 320
Asn His Cys Gly Ile Ala Thr Ala Ala Ser Tyr Pro Asn Val
325 330
<210> 43
<211> 321
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 43
Met Asp Val Arg Ala Leu Pro Trp Leu Pro Trp Leu Leu Trp Leu Leu
1 5 10 15
Cys Arg Gly Gly Gly Asp Ala Asp Ser Arg Ala Pro Phe Thr Pro Thr
20 25 30
Trp Pro Arg Ser Arg Glu Arg Glu Ala Ala Ala Phe Arg Glu Ser Leu
35 40 45
Asn Arg His Arg Tyr Leu Asn Ser Leu Phe Pro Ser Glu Asn Ser Thr
50 55 60
Ala Phe Tyr Gly Ile Asn Gln Phe Ser Tyr Leu Phe Pro Glu Glu Phe
65 70 75 80
Lys Ala Ile Tyr Leu Arg Ser Lys Pro Ser Lys Phe Pro Arg Tyr Ser
85 90 95
Ala Glu Val His Met Ser Ile Pro Asn Val Ser Leu Pro Leu Arg Phe
100 105 110
Asp Trp Arg Asp Lys Gln Val Val Thr Gln Val Arg Asn Gln Gln Met
115 120 125
Cys Gly Gly Cys Trp Ala Phe Ser Val Val Gly Ala Val Glu Ser Ala
130 135 140
Tyr Ala Ile Lys Gly Lys Pro Leu Glu Asp Leu Ser Val Gln Gln Val
145 150 155 160
Ile Asp Cys Ser Tyr Asn Asn Tyr Gly Cys Asn Gly Gly Ser Thr Leu
165 170 175
Asn Ala Leu Asn Trp Leu Asn Lys Met Gln Val Lys Leu Val Lys Asp
180 185 190
Ser Glu Tyr Pro Phe Lys Ala Gln Asn Gly Leu Cys His Tyr Phe Ser
195 200 205
Gly Ser His Ser Gly Phe Ser Ile Lys Gly Tyr Ser Ala Tyr Asp Phe
210 215 220
Ser Asp Gln Glu Asp Glu Met Ala Lys Ala Leu Leu Thr Phe Gly Pro
225 230 235 240
Leu Val Val Ile Val Asp Ala Val Ser Trp Gln Asp Tyr Leu Gly Gly
245 250 255
Ile Ile Gln His His Cys Ser Ser Gly Glu Ala Asn His Ala Val Leu
260 265 270
Ile Thr Gly Phe Asp Lys Thr Gly Ser Thr Pro Tyr Trp Ile Val Arg
275 280 285
Asn Ser Trp Gly Ser Ser Trp Gly Val Asp Gly Tyr Ala His Val Lys
290 295 300
Met Gly Ser Asn Val Cys Gly Ile Ala Asp Ser Val Ser Ser Ile Phe
305 310 315 320
Val
<210> 44
<211> 331
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 44
Met Lys Arg Leu Val Cys Val Leu Leu Val Cys Ser Ser Ala Val Ala
1 5 10 15
Gln Leu His Lys Asp Pro Thr Leu Asp His His Trp His Leu Trp Lys
20 25 30
Lys Thr Tyr Gly Lys Gln Tyr Lys Glu Lys Asn Glu Glu Ala Val Arg
35 40 45
Arg Leu Ile Trp Glu Lys Asn Leu Lys Phe Val Met Leu His Asn Leu
50 55 60
Glu His Ser Met Gly Met His Ser Tyr Asp Leu Gly Met Asn His Leu
65 70 75 80
Gly Asp Met Thr Ser Glu Glu Val Met Ser Leu Met Ser Ser Leu Arg
85 90 95
Val Pro Ser Gln Trp Gln Arg Asn Ile Thr Tyr Lys Ser Asn Pro Asn
100 105 110
Arg Ile Leu Pro Asp Ser Val Asp Trp Arg Glu Lys Gly Cys Val Thr
115 120 125
Glu Val Lys Tyr Gln Gly Ser Cys Gly Ala Cys Trp Ala Phe Ser Ala
130 135 140
Val Gly Ala Leu Glu Ala Gln Leu Lys Leu Lys Thr Gly Lys Leu Val
145 150 155 160
Ser Leu Ser Ala Gln Asn Leu Val Asp Cys Ser Thr Glu Lys Tyr Gly
165 170 175
Asn Lys Gly Cys Asn Gly Gly Phe Met Thr Thr Ala Phe Gln Tyr Ile
180 185 190
Ile Asp Asn Lys Gly Ile Asp Ser Asp Ala Ser Tyr Pro Tyr Lys Ala
195 200 205
Met Asp Gln Lys Cys Gln Tyr Asp Ser Lys Tyr Arg Ala Ala Thr Cys
210 215 220
Ser Lys Tyr Thr Glu Leu Pro Tyr Gly Arg Glu Asp Val Leu Lys Glu
225 230 235 240
Ala Val Ala Asn Lys Gly Pro Val Ser Val Gly Val Asp Ala Arg His
245 250 255
Pro Ser Phe Phe Leu Tyr Arg Ser Gly Val Tyr Tyr Glu Pro Ser Cys
260 265 270
Thr Gln Asn Val Asn His Gly Val Leu Val Val Gly Tyr Gly Asp Leu
275 280 285
Asn Gly Lys Glu Tyr Trp Leu Val Lys Asn Ser Trp Gly His Asn Phe
290 295 300
Gly Glu Glu Gly Tyr Ile Arg Met Ala Arg Asn Lys Gly Asn His Cys
305 310 315 320
Gly Ile Ala Ser Phe Pro Ser Tyr Pro Glu Ile
325 330
<210> 45
<211> 376
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 45
Met Ala Leu Thr Ala His Pro Ser Cys Leu Leu Ala Leu Leu Val Ala
1 5 10 15
Gly Leu Ala Gln Gly Ile Arg Gly Pro Leu Arg Ala Gln Asp Leu Gly
20 25 30
Pro Gln Pro Leu Glu Leu Lys Glu Ala Phe Lys Leu Phe Gln Ile Gln
35 40 45
Phe Asn Arg Ser Tyr Leu Ser Pro Glu Glu His Ala His Arg Leu Asp
50 55 60
Ile Phe Ala His Asn Leu Ala Gln Ala Gln Arg Leu Gln Glu Glu Asp
65 70 75 80
Leu Gly Thr Ala Glu Phe Gly Val Thr Pro Phe Ser Asp Leu Thr Glu
85 90 95
Glu Glu Phe Gly Gln Leu Tyr Gly Tyr Arg Arg Ala Ala Gly Gly Val
100 105 110
Pro Ser Met Gly Arg Glu Ile Arg Ser Glu Glu Pro Glu Glu Ser Val
115 120 125
Pro Phe Ser Cys Asp Trp Arg Lys Val Ala Ser Ala Ile Ser Pro Ile
130 135 140
Lys Asp Gln Lys Asn Cys Asn Cys Cys Trp Ala Met Ala Ala Ala Gly
145 150 155 160
Asn Ile Glu Thr Leu Trp Arg Ile Ser Phe Trp Asp Phe Val Asp Val
165 170 175
Ser Val Gln Glu Leu Leu Asp Cys Gly Arg Cys Gly Asp Gly Cys His
180 185 190
Gly Gly Phe Val Trp Asp Ala Phe Ile Thr Val Leu Asn Asn Ser Gly
195 200 205
Leu Ala Ser Glu Lys Asp Tyr Pro Phe Gln Gly Lys Val Arg Ala His
210 215 220
Arg Cys His Pro Lys Lys Tyr Gln Lys Val Ala Trp Ile Gln Asp Phe
225 230 235 240
Ile Met Leu Gln Asn Asn Glu His Arg Ile Ala Gln Tyr Leu Ala Thr
245 250 255
Tyr Gly Pro Ile Thr Val Thr Ile Asn Met Lys Pro Leu Gln Leu Tyr
260 265 270
Arg Lys Gly Val Ile Lys Ala Thr Pro Thr Thr Cys Asp Pro Gln Leu
275 280 285
Val Asp His Ser Val Leu Leu Val Gly Phe Gly Ser Val Lys Ser Glu
290 295 300
Glu Gly Ile Trp Ala Glu Thr Val Ser Ser Gln Ser Gln Pro Gln Pro
305 310 315 320
Pro His Pro Thr Pro Tyr Trp Ile Leu Lys Asn Ser Trp Gly Ala Gln
325 330 335
Trp Gly Glu Lys Gly Tyr Phe Arg Leu His Arg Gly Ser Asn Thr Cys
340 345 350
Gly Ile Thr Lys Phe Pro Leu Thr Ala Arg Val Gln Lys Pro Asp Met
355 360 365
Lys Pro Arg Val Ser Cys Pro Pro
370 375
<210> 46
<211> 303
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 46
Met Ala Arg Arg Gly Pro Gly Trp Arg Pro Leu Leu Leu Leu Val Leu
1 5 10 15
Leu Ala Gly Ala Ala Gln Gly Gly Leu Tyr Phe Arg Arg Gly Gln Thr
20 25 30
Cys Tyr Arg Pro Leu Arg Gly Asp Gly Leu Ala Pro Leu Gly Arg Ser
35 40 45
Thr Tyr Pro Arg Pro His Glu Tyr Leu Ser Pro Ala Asp Leu Pro Lys
50 55 60
Ser Trp Asp Trp Arg Asn Val Asp Gly Val Asn Tyr Ala Ser Ile Thr
65 70 75 80
Arg Asn Gln His Ile Pro Gln Tyr Cys Gly Ser Cys Trp Ala His Ala
85 90 95
Ser Thr Ser Ala Met Ala Asp Arg Ile Asn Ile Lys Arg Lys Gly Ala
100 105 110
Trp Pro Ser Thr Leu Leu Ser Val Gln Asn Val Ile Asp Cys Gly Asn
115 120 125
Ala Gly Ser Cys Glu Gly Gly Asn Asp Leu Ser Val Trp Asp Tyr Ala
130 135 140
His Gln His Gly Ile Pro Asp Glu Thr Cys Asn Asn Tyr Gln Ala Lys
145 150 155 160
Asp Gln Glu Cys Asp Lys Phe Asn Gln Cys Gly Thr Cys Asn Glu Phe
165 170 175
Lys Glu Cys His Ala Ile Arg Asn Tyr Thr Leu Trp Arg Val Gly Asp
180 185 190
Tyr Gly Ser Leu Ser Gly Arg Glu Lys Met Met Ala Glu Ile Tyr Ala
195 200 205
Asn Gly Pro Ile Ser Cys Gly Ile Met Ala Thr Glu Arg Leu Ala Asn
210 215 220
Tyr Thr Gly Gly Ile Tyr Ala Glu Tyr Gln Asp Thr Thr Tyr Ile Asn
225 230 235 240
His Val Val Ser Val Ala Gly Trp Gly Ile Ser Asp Gly Thr Glu Tyr
245 250 255
Trp Ile Val Arg Asn Ser Trp Gly Glu Pro Trp Gly Glu Arg Gly Trp
260 265 270
Leu Arg Ile Val Thr Ser Thr Tyr Lys Asp Gly Lys Gly Ala Arg Tyr
275 280 285
Asn Leu Ala Ile Glu Glu His Cys Thr Phe Gly Asp Pro Ile Val
290 295 300
<210> 47
<211> 338
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 47
Met Leu Gln Lys Pro Lys Ser Val Lys Leu Arg Ala Leu Arg Ser Pro
1 5 10 15
Arg Lys Phe Gly Val Ala Gly Arg Ser Cys Gln Glu Val Leu Arg Lys
20 25 30
Gly Cys Leu Arg Phe Gln Leu Pro Glu Arg Gly Ser Arg Leu Cys Leu
35 40 45
Tyr Glu Asp Gly Thr Glu Leu Thr Glu Asp Tyr Phe Pro Ser Val Pro
50 55 60
Asp Asn Ala Glu Leu Val Leu Leu Thr Leu Gly Gln Ala Trp Gln Gly
65 70 75 80
Tyr Val Ser Asp Ile Arg Arg Phe Leu Ser Ala Phe His Glu Pro Gln
85 90 95
Val Gly Leu Ile Gln Ala Ala Gln Gln Leu Leu Cys Asp Glu Gln Ala
100 105 110
Pro Gln Arg Gln Arg Leu Leu Ala Asp Leu Leu His Asn Val Ser Gln
115 120 125
Asn Ile Ala Ala Glu Thr Arg Ala Glu Asp Pro Pro Trp Phe Glu Gly
130 135 140
Leu Glu Ser Arg Phe Gln Ser Lys Ser Gly Tyr Leu Arg Tyr Ser Cys
145 150 155 160
Glu Ser Arg Ile Arg Ser Tyr Leu Arg Glu Val Ser Ser Tyr Pro Ser
165 170 175
Thr Val Gly Ala Glu Ala Gln Glu Glu Phe Leu Arg Val Leu Gly Ser
180 185 190
Met Cys Gln Arg Leu Arg Ser Met Gln Tyr Asn Gly Ser Tyr Phe Asp
195 200 205
Arg Gly Ala Lys Gly Gly Ser Arg Leu Cys Thr Pro Glu Gly Trp Phe
210 215 220
Ser Cys Gln Gly Pro Phe Asp Met Asp Ser Cys Leu Ser Arg His Ser
225 230 235 240
Ile Asn Pro Tyr Ser Asn Arg Glu Ser Arg Ile Leu Phe Ser Thr Trp
245 250 255
Asn Leu Asp His Ile Ile Glu Lys Lys Arg Thr Ile Ile Pro Thr Leu
260 265 270
Val Glu Ala Ile Lys Glu Gln Asp Gly Arg Glu Val Asp Trp Glu Tyr
275 280 285
Phe Tyr Gly Leu Leu Phe Thr Ser Glu Asn Leu Lys Leu Val His Ile
290 295 300
Val Cys His Lys Lys Thr Thr His Lys Leu Asn Cys Asp Pro Ser Arg
305 310 315 320
Ile Tyr Lys Pro Gln Thr Arg Leu Lys Arg Lys Gln Pro Val Arg Lys
325 330 335
Arg Gln
<210> 48
<211> 360
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 48
Met Ser Gln Glu Arg Pro Thr Phe Tyr Arg Gln Glu Leu Asn Lys Thr
1 5 10 15
Ile Trp Glu Val Pro Glu Arg Tyr Gln Asn Leu Ser Pro Val Gly Ser
20 25 30
Gly Ala Tyr Gly Ser Val Cys Ala Ala Phe Asp Thr Lys Thr Gly Leu
35 40 45
Arg Val Ala Val Lys Lys Leu Ser Arg Pro Phe Gln Ser Ile Ile His
50 55 60
Ala Lys Arg Thr Tyr Arg Glu Leu Arg Leu Leu Lys His Met Lys His
65 70 75 80
Glu Asn Val Ile Gly Leu Leu Asp Val Phe Thr Pro Ala Arg Ser Leu
85 90 95
Glu Glu Phe Asn Asp Val Tyr Leu Val Thr His Leu Met Gly Ala Asp
100 105 110
Leu Asn Asn Ile Val Lys Cys Gln Lys Leu Thr Asp Asp His Val Gln
115 120 125
Phe Leu Ile Tyr Gln Ile Leu Arg Gly Leu Lys Tyr Ile His Ser Ala
130 135 140
Asp Ile Ile His Arg Asp Leu Lys Pro Ser Asn Leu Ala Val Asn Glu
145 150 155 160
Asp Cys Glu Leu Lys Ile Leu Asp Phe Gly Leu Ala Arg His Thr Asp
165 170 175
Asp Glu Met Thr Gly Tyr Val Ala Thr Arg Trp Tyr Arg Ala Pro Glu
180 185 190
Ile Met Leu Asn Trp Met His Tyr Asn Gln Thr Val Asp Ile Trp Ser
195 200 205
Val Gly Cys Ile Met Ala Glu Leu Leu Thr Gly Arg Thr Leu Phe Pro
210 215 220
Gly Thr Asp His Ile Asp Gln Leu Lys Leu Ile Leu Arg Leu Val Gly
225 230 235 240
Thr Pro Gly Ala Glu Leu Leu Lys Lys Ile Ser Ser Glu Ser Ala Arg
245 250 255
Asn Tyr Ile Gln Ser Leu Thr Gln Met Pro Lys Met Asn Phe Ala Asn
260 265 270
Val Phe Ile Gly Ala Asn Pro Leu Ala Val Asp Leu Leu Glu Lys Met
275 280 285
Leu Val Leu Asp Ser Asp Lys Arg Ile Thr Ala Ala Gln Ala Leu Ala
290 295 300
His Ala Tyr Phe Ala Gln Tyr His Asp Pro Asp Asp Glu Pro Val Ala
305 310 315 320
Asp Pro Tyr Asp Gln Ser Phe Glu Ser Arg Asp Leu Leu Ile Asp Glu
325 330 335
Trp Lys Ser Leu Thr Tyr Asp Glu Val Ile Ser Phe Val Pro Pro Pro
340 345 350
Leu Asp Gln Glu Glu Met Glu Ser
355 360
<210> 49
<211> 364
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 49
Met Ser Gly Pro Arg Ala Gly Phe Tyr Arg Gln Glu Leu Asn Lys Thr
1 5 10 15
Val Trp Glu Val Pro Gln Arg Leu Gln Gly Leu Arg Pro Val Gly Ser
20 25 30
Gly Ala Tyr Gly Ser Val Cys Ser Ala Tyr Asp Ala Arg Leu Arg Gln
35 40 45
Lys Val Ala Val Lys Lys Leu Ser Arg Pro Phe Gln Ser Leu Ile His
50 55 60
Ala Arg Arg Thr Tyr Arg Glu Leu Arg Leu Leu Lys His Leu Lys His
65 70 75 80
Glu Asn Val Ile Gly Leu Leu Asp Val Phe Thr Pro Ala Thr Ser Ile
85 90 95
Glu Asp Phe Ser Glu Val Tyr Leu Val Thr Thr Leu Met Gly Ala Asp
100 105 110
Leu Asn Asn Ile Val Lys Cys Gln Ala Leu Ser Asp Glu His Val Gln
115 120 125
Phe Leu Val Tyr Gln Leu Leu Arg Gly Leu Lys Tyr Ile His Ser Ala
130 135 140
Gly Ile Ile His Arg Asp Leu Lys Pro Ser Asn Val Ala Val Asn Glu
145 150 155 160
Asp Cys Glu Leu Arg Ile Leu Asp Phe Gly Leu Ala Arg Gln Ala Asp
165 170 175
Glu Glu Met Thr Gly Tyr Val Ala Thr Arg Trp Tyr Arg Ala Pro Glu
180 185 190
Ile Met Leu Asn Trp Met His Tyr Asn Gln Thr Val Asp Ile Trp Ser
195 200 205
Val Gly Cys Ile Met Ala Glu Leu Leu Gln Gly Lys Ala Leu Phe Pro
210 215 220
Gly Ser Asp Tyr Ile Asp Gln Leu Lys Arg Ile Met Glu Val Val Gly
225 230 235 240
Thr Pro Ser Pro Glu Val Leu Ala Lys Ile Ser Ser Glu His Ala Arg
245 250 255
Thr Tyr Ile Gln Ser Leu Pro Pro Met Pro Gln Lys Asp Leu Ser Ser
260 265 270
Ile Phe Arg Gly Ala Asn Pro Leu Ala Ile Asp Leu Leu Gly Arg Met
275 280 285
Leu Val Leu Asp Ser Asp Gln Arg Val Ser Ala Ala Glu Ala Leu Ala
290 295 300
His Ala Tyr Phe Ser Gln Tyr His Asp Pro Glu Asp Glu Pro Glu Ala
305 310 315 320
Glu Pro Tyr Asp Glu Ser Val Glu Ala Lys Glu Arg Thr Leu Glu Glu
325 330 335
Trp Lys Glu Leu Thr Tyr Gln Glu Val Leu Ser Phe Lys Pro Pro Glu
340 345 350
Pro Pro Lys Pro Pro Gly Ser Leu Glu Ile Glu Gln
355 360
<210> 50
<211> 367
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 50
Met Ser Ser Pro Pro Pro Ala Arg Ser Gly Phe Tyr Arg Gln Glu Val
1 5 10 15
Thr Lys Thr Ala Trp Glu Val Arg Ala Val Tyr Arg Asp Leu Gln Pro
20 25 30
Val Gly Ser Gly Ala Tyr Gly Ala Val Cys Ser Ala Val Asp Gly Arg
35 40 45
Thr Gly Ala Lys Val Ala Ile Lys Lys Leu Tyr Arg Pro Phe Gln Ser
50 55 60
Glu Leu Phe Ala Lys Arg Ala Tyr Arg Glu Leu Arg Leu Leu Lys His
65 70 75 80
Met Arg His Glu Asn Val Ile Gly Leu Leu Asp Val Phe Thr Pro Asp
85 90 95
Glu Thr Leu Asp Asp Phe Thr Asp Phe Tyr Leu Val Met Pro Phe Met
100 105 110
Gly Thr Asp Leu Gly Lys Leu Met Lys His Glu Lys Leu Gly Glu Asp
115 120 125
Arg Ile Gln Phe Leu Val Tyr Gln Met Leu Lys Gly Leu Arg Tyr Ile
130 135 140
His Ala Ala Gly Ile Ile His Arg Asp Leu Lys Pro Gly Asn Leu Ala
145 150 155 160
Val Asn Glu Asp Cys Glu Leu Lys Ile Leu Asp Phe Gly Leu Ala Arg
165 170 175
Gln Ala Asp Ser Glu Met Thr Gly Tyr Val Val Thr Arg Trp Tyr Arg
180 185 190
Ala Pro Glu Val Ile Leu Asn Trp Met Arg Tyr Thr Gln Thr Val Asp
195 200 205
Ile Trp Ser Val Gly Cys Ile Met Ala Glu Met Ile Thr Gly Lys Thr
210 215 220
Leu Phe Lys Gly Ser Asp His Leu Asp Gln Leu Lys Glu Ile Met Lys
225 230 235 240
Val Thr Gly Thr Pro Pro Ala Glu Phe Val Gln Arg Leu Gln Ser Asp
245 250 255
Glu Ala Lys Asn Tyr Met Lys Gly Leu Pro Glu Leu Glu Lys Lys Asp
260 265 270
Phe Ala Ser Ile Leu Thr Asn Ala Ser Pro Leu Ala Val Asn Leu Leu
275 280 285
Glu Lys Met Leu Val Leu Asp Ala Glu Gln Arg Val Thr Ala Gly Glu
290 295 300
Ala Leu Ala His Pro Tyr Phe Glu Ser Leu His Asp Thr Glu Asp Glu
305 310 315 320
Pro Gln Val Gln Lys Tyr Asp Asp Ser Phe Asp Asp Val Asp Arg Thr
325 330 335
Leu Asp Glu Trp Lys Arg Val Thr Tyr Lys Glu Val Leu Ser Phe Lys
340 345 350
Pro Pro Arg Gln Leu Gly Ala Arg Val Ser Lys Glu Thr Pro Leu
355 360 365
<210> 51
<211> 365
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 51
Met Ser Leu Ile Arg Lys Lys Gly Phe Tyr Lys Gln Asp Val Asn Lys
1 5 10 15
Thr Ala Trp Glu Leu Pro Lys Thr Tyr Val Ser Pro Thr His Val Gly
20 25 30
Ser Gly Ala Tyr Gly Ser Val Cys Ser Ala Ile Asp Lys Arg Ser Gly
35 40 45
Glu Lys Val Ala Ile Lys Lys Leu Ser Arg Pro Phe Gln Ser Glu Ile
50 55 60
Phe Ala Lys Arg Ala Tyr Arg Glu Leu Leu Leu Leu Lys His Met Gln
65 70 75 80
His Glu Asn Val Ile Gly Leu Leu Asp Val Phe Thr Pro Ala Ser Ser
85 90 95
Leu Arg Asn Phe Tyr Asp Phe Tyr Leu Val Met Pro Phe Met Gln Thr
100 105 110
Asp Leu Gln Lys Ile Met Gly Met Glu Phe Ser Glu Glu Lys Ile Gln
115 120 125
Tyr Leu Val Tyr Gln Met Leu Lys Gly Leu Lys Tyr Ile His Ser Ala
130 135 140
Gly Val Val His Arg Asp Leu Lys Pro Gly Asn Leu Ala Val Asn Glu
145 150 155 160
Asp Cys Glu Leu Lys Ile Leu Asp Phe Gly Leu Ala Arg His Ala Asp
165 170 175
Ala Glu Met Thr Gly Tyr Val Val Thr Arg Trp Tyr Arg Ala Pro Glu
180 185 190
Val Ile Leu Ser Trp Met His Tyr Asn Gln Thr Val Asp Ile Trp Ser
195 200 205
Val Gly Cys Ile Met Ala Glu Met Leu Thr Gly Lys Thr Leu Phe Lys
210 215 220
Gly Lys Asp Tyr Leu Asp Gln Leu Thr Gln Ile Leu Lys Val Thr Gly
225 230 235 240
Val Pro Gly Thr Glu Phe Val Gln Lys Leu Asn Asp Lys Ala Ala Lys
245 250 255
Ser Tyr Ile Gln Ser Leu Pro Gln Thr Pro Arg Lys Asp Phe Thr Gln
260 265 270
Leu Phe Pro Arg Ala Ser Pro Gln Ala Ala Asp Leu Leu Glu Lys Met
275 280 285
Leu Glu Leu Asp Val Asp Lys Arg Leu Thr Ala Ala Gln Ala Leu Thr
290 295 300
His Pro Phe Phe Glu Pro Phe Arg Asp Pro Glu Glu Glu Thr Glu Ala
305 310 315 320
Gln Gln Pro Phe Asp Asp Ser Leu Glu His Glu Lys Leu Thr Val Asp
325 330 335
Glu Trp Lys Gln His Ile Tyr Lys Glu Ile Val Asn Phe Ser Pro Ile
340 345 350
Ala Arg Lys Asp Ser Arg Arg Arg Ser Gly Met Lys Leu
355 360 365
<210> 52
<211> 403
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 52
Met Thr Ala Ile Ile Lys Glu Ile Val Ser Arg Asn Lys Arg Arg Tyr
1 5 10 15
Gln Glu Asp Gly Phe Asp Leu Asp Leu Thr Tyr Ile Tyr Pro Asn Ile
20 25 30
Ile Ala Met Gly Phe Pro Ala Glu Arg Leu Glu Gly Val Tyr Arg Asn
35 40 45
Asn Ile Asp Asp Val Val Arg Phe Leu Asp Ser Lys His Lys Asn His
50 55 60
Tyr Lys Ile Tyr Asn Leu Cys Ala Glu Arg His Tyr Asp Thr Ala Lys
65 70 75 80
Phe Asn Cys Arg Val Ala Gln Tyr Pro Phe Glu Asp His Asn Pro Pro
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Gln Leu Glu Leu Ile Lys Pro Phe Cys Glu Asp Leu Asp Gln Trp Leu
100 105 110
Ser Glu Asp Asp Asn His Val Ala Ala Ile His Cys Lys Ala Gly Lys
115 120 125
Gly Arg Thr Gly Val Met Ile Cys Ala Tyr Leu Leu His Arg Gly Lys
130 135 140
Phe Leu Lys Ala Gln Glu Ala Leu Asp Phe Tyr Gly Glu Val Arg Thr
145 150 155 160
Arg Asp Lys Lys Gly Val Thr Ile Pro Ser Gln Arg Arg Tyr Val Tyr
165 170 175
Tyr Tyr Ser Tyr Leu Leu Lys Asn His Leu Asp Tyr Arg Pro Val Ala
180 185 190
Leu Leu Phe His Lys Met Met Phe Glu Thr Ile Pro Met Phe Ser Gly
195 200 205
Gly Thr Cys Asn Pro Gln Phe Val Val Cys Gln Leu Lys Val Lys Ile
210 215 220
Tyr Ser Ser Asn Ser Gly Pro Thr Arg Arg Glu Asp Lys Phe Met Tyr
225 230 235 240
Phe Glu Phe Pro Gln Pro Leu Pro Val Cys Gly Asp Ile Lys Val Glu
245 250 255
Phe Phe His Lys Gln Asn Lys Met Leu Lys Lys Asp Lys Met Phe His
260 265 270
Phe Trp Val Asn Thr Phe Phe Ile Pro Gly Pro Glu Glu Thr Ser Glu
275 280 285
Lys Val Glu Asn Gly Ser Leu Cys Asp Gln Glu Ile Asp Ser Ile Cys
290 295 300
Ser Ile Glu Arg Ala Asp Asn Asp Lys Glu Tyr Leu Val Leu Thr Leu
305 310 315 320
Thr Lys Asn Asp Leu Asp Lys Ala Asn Lys Asp Lys Ala Asn Arg Tyr
325 330 335
Phe Ser Pro Asn Phe Lys Val Lys Leu Tyr Phe Thr Lys Thr Val Glu
340 345 350
Glu Pro Ser Asn Pro Glu Ala Ser Ser Ser Thr Ser Val Thr Pro Asp
355 360 365
Val Ser Asp Asn Glu Pro Asp His Tyr Arg Tyr Ser Asp Thr Thr Asp
370 375 380
Ser Asp Pro Glu Asn Glu Pro Phe Asp Glu Asp Gln His Thr Gln Ile
385 390 395 400
Thr Lys Val
<210> 53
<211> 1154
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 53
Met Gln Tyr Leu Asn Ile Lys Glu Asp Cys Asn Ala Met Ala Phe Cys
1 5 10 15
Ala Lys Met Arg Ser Ser Lys Lys Thr Glu Val Asn Leu Glu Ala Pro
20 25 30
Glu Pro Gly Val Glu Val Ile Phe Tyr Leu Ser Asp Arg Glu Pro Leu
35 40 45
Arg Leu Gly Ser Gly Glu Tyr Thr Ala Glu Glu Leu Cys Ile Arg Ala
50 55 60
Ala Gln Ala Cys Arg Ile Ser Pro Leu Cys His Asn Leu Phe Ala Leu
65 70 75 80
Tyr Asp Glu Asn Thr Lys Leu Trp Tyr Ala Pro Asn Arg Thr Ile Thr
85 90 95
Val Asp Asp Lys Met Ser Leu Arg Leu His Tyr Arg Met Arg Phe Tyr
100 105 110
Phe Thr Asn Trp His Gly Thr Asn Asp Asn Glu Gln Ser Val Trp Arg
115 120 125
His Ser Pro Lys Lys Gln Lys Asn Gly Tyr Glu Lys Lys Lys Ile Pro
130 135 140
Asp Ala Thr Pro Leu Leu Asp Ala Ser Ser Leu Glu Tyr Leu Phe Ala
145 150 155 160
Gln Gly Gln Tyr Asp Leu Val Lys Cys Leu Ala Pro Ile Arg Asp Pro
165 170 175
Lys Thr Glu Gln Asp Gly His Asp Ile Glu Asn Glu Cys Leu Gly Met
180 185 190
Ala Val Leu Ala Ile Ser His Tyr Ala Met Met Lys Lys Met Gln Leu
195 200 205
Pro Glu Leu Pro Lys Asp Ile Ser Tyr Lys Arg Tyr Ile Pro Glu Thr
210 215 220
Leu Asn Lys Ser Ile Arg Gln Arg Asn Leu Leu Thr Arg Met Arg Ile
225 230 235 240
Asn Asn Val Phe Lys Asp Phe Leu Lys Glu Phe Asn Asn Lys Thr Ile
245 250 255
Cys Asp Ser Ser Val Ser Thr His Asp Leu Lys Val Lys Tyr Leu Ala
260 265 270
Thr Leu Glu Thr Leu Thr Lys His Tyr Gly Ala Glu Ile Phe Glu Thr
275 280 285
Ser Met Leu Leu Ile Ser Ser Glu Asn Glu Met Asn Trp Phe His Ser
290 295 300
Asn Asp Gly Gly Asn Val Leu Tyr Tyr Glu Val Met Val Thr Gly Asn
305 310 315 320
Leu Gly Ile Gln Trp Arg His Lys Pro Asn Val Val Ser Val Glu Lys
325 330 335
Glu Lys Asn Lys Leu Lys Arg Lys Lys Leu Glu Asn Lys His Lys Lys
340 345 350
Asp Glu Glu Lys Asn Lys Ile Arg Glu Glu Trp Asn Asn Phe Ser Tyr
355 360 365
Phe Pro Glu Ile Thr His Ile Val Ile Lys Glu Ser Val Val Ser Ile
370 375 380
Asn Lys Gln Asp Asn Lys Lys Met Glu Leu Lys Leu Ser Ser His Glu
385 390 395 400
Glu Ala Leu Ser Phe Val Ser Leu Val Asp Gly Tyr Phe Arg Leu Thr
405 410 415
Ala Asp Ala His His Tyr Leu Cys Thr Asp Val Ala Pro Pro Leu Ile
420 425 430
Val His Asn Ile Gln Asn Gly Cys His Gly Pro Ile Cys Thr Glu Tyr
435 440 445
Ala Ile Asn Lys Leu Arg Gln Glu Gly Ser Glu Glu Gly Met Tyr Val
450 455 460
Leu Arg Trp Ser Cys Thr Asp Phe Asp Asn Ile Leu Met Thr Val Thr
465 470 475 480
Cys Phe Glu Lys Ser Glu Gln Val Gln Gly Ala Gln Lys Gln Phe Lys
485 490 495
Asn Phe Gln Ile Glu Val Gln Lys Gly Arg Tyr Ser Leu His Gly Ser
500 505 510
Asp Arg Ser Phe Pro Ser Leu Gly Asp Leu Met Ser His Leu Lys Lys
515 520 525
Gln Ile Leu Arg Thr Asp Asn Ile Ser Phe Met Leu Lys Arg Cys Cys
530 535 540
Gln Pro Lys Pro Arg Glu Ile Ser Asn Leu Leu Val Ala Thr Lys Lys
545 550 555 560
Ala Gln Glu Trp Gln Pro Val Tyr Pro Met Ser Gln Leu Ser Phe Asp
565 570 575
Arg Ile Leu Lys Lys Asp Leu Val Gln Gly Glu His Leu Gly Arg Gly
580 585 590
Thr Arg Thr His Ile Tyr Ser Gly Thr Leu Met Asp Tyr Lys Asp Asp
595 600 605
Glu Gly Thr Ser Glu Glu Lys Lys Ile Lys Val Ile Leu Lys Val Leu
610 615 620
Asp Pro Ser His Arg Asp Ile Ser Leu Ala Phe Phe Glu Ala Ala Ser
625 630 635 640
Met Met Arg Gln Val Ser His Lys His Ile Val Tyr Leu Tyr Gly Val
645 650 655
Cys Val Arg Asp Val Glu Asn Ile Met Val Glu Glu Phe Val Glu Gly
660 665 670
Gly Pro Leu Asp Leu Phe Met His Arg Lys Ser Asp Val Leu Thr Thr
675 680 685
Pro Trp Lys Phe Lys Val Ala Lys Gln Leu Ala Ser Ala Leu Ser Tyr
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Leu Glu Asp Lys Asp Leu Val His Gly Asn Val Cys Thr Lys Asn Leu
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Leu Leu Ala Arg Glu Gly Ile Asp Ser Glu Cys Gly Pro Phe Ile Lys
725 730 735
Leu Ser Asp Pro Gly Ile Pro Ile Thr Val Leu Ser Arg Gln Glu Cys
740 745 750
Ile Glu Arg Ile Pro Trp Ile Ala Pro Glu Cys Val Glu Asp Ser Lys
755 760 765
Asn Leu Ser Val Ala Ala Asp Lys Trp Ser Phe Gly Thr Thr Leu Trp
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Glu Lys Glu Arg Phe Tyr Glu Ser Arg Cys Arg Pro Val Thr Pro Ser
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Asn Gln Arg Pro Phe Phe Arg Ala Ile Met Arg Asp Ile Asn Lys Leu
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Leu Gly Glu Gly His Phe Gly Lys Val Glu Leu Cys Arg Tyr Asp Pro
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1140 1145 1150
Leu Lys
<210> 54
<211> 1132
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 54
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1 5 10 15
Ser Ser Ile Tyr Gln Asn Gly Asp Ile Ser Gly Asn Ala Asn Ser Met
20 25 30
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35 40 45
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65 70 75 80
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115 120 125
Asn Arg Ala Tyr Arg His Gly Ile Ser Arg Gly Ala Glu Ala Pro Leu
130 135 140
Leu Asp Asp Phe Val Met Ser Tyr Leu Phe Ala Gln Trp Arg His Asp
145 150 155 160
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165 170 175
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180 185 190
Asn Asp Gln Thr Pro Leu Ala Ile Tyr Asn Ser Ile Ser Tyr Lys Thr
195 200 205
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210 215 220
Thr Arg Lys Arg Ile Arg Tyr Arg Phe Arg Arg Phe Ile Gln Gln Phe
225 230 235 240
Ser Gln Cys Lys Ala Thr Ala Arg Asn Leu Lys Leu Lys Tyr Leu Ile
245 250 255
Asn Leu Glu Thr Leu Gln Ser Ala Phe Tyr Thr Glu Lys Phe Glu Val
260 265 270
Lys Glu Pro Gly Ser Gly Pro Ser Gly Glu Glu Ile Phe Ala Thr Ile
275 280 285
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1125 1130
<210> 55
<211> 1124
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 55
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1 5 10 15
Ser Leu Leu Ser Thr Glu Ala Gly Ala Leu His Val Leu Leu Pro Ala
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580 585 590
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595 600 605
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610 615 620
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625 630 635 640
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645 650 655
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660 665 670
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675 680 685
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690 695 700
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Gly Val Thr Met Pro Ile Ser Ala Leu Asp Pro Ala Lys Lys Leu Gln
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885 890 895
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Asp Lys Ser Cys Ser Pro Ser Ala Glu Phe Leu Arg Met Met Gly Cys
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1090 1095 1100
Cys Glu Thr His Ala Phe Thr Ala His Pro Glu Gly Lys His His Ser
1105 1110 1115 1120
Leu Ser Phe Ser
<210> 56
<211> 1187
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 56
Met Pro Leu Arg His Trp Gly Met Ala Arg Gly Ser Lys Pro Val Gly
1 5 10 15
Asp Gly Ala Gln Pro Met Ala Ala Met Gly Gly Leu Lys Val Leu Leu
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225 230 235 240
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245 250 255
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260 265 270
Glu Arg Val Pro Val Cys His Leu Arg Leu Leu Ala Gln Ala Glu Gly
275 280 285
Glu Pro Cys Tyr Ile Arg Asp Ser Gly Val Ala Pro Thr Asp Pro Gly
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Gly Lys Lys Ala Lys Ala His Lys Ala Val Gly Gln Pro Ala Asp Arg
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740 745 750
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755 760 765
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770 775 780
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785 790 795 800
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805 810 815
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885 890 895
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900 905 910
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915 920 925
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930 935 940
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945 950 955 960
Lys Tyr Lys Gly Cys Cys Glu Asp Gln Gly Glu Lys Ser Leu Gln Leu
965 970 975
Val Met Glu Tyr Val Pro Leu Gly Ser Leu Arg Asp Tyr Leu Pro Arg
980 985 990
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995 1000 1005
Glu Gly Met Ala Tyr Leu His Ala Gln His Tyr Ile His Arg Asp Leu
1010 1015 1020
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Val Thr Leu Tyr Glu Leu Leu Thr His Cys Asp Ser Ser Gln Ser Pro
1090 1095 1100
Pro Thr Lys Phe Leu Glu Leu Ile Gly Ile Ala Gln Gly Gln Met Thr
1105 1110 1115 1120
Val Leu Arg Leu Thr Glu Leu Leu Glu Arg Gly Glu Arg Leu Pro Arg
1125 1130 1135
Pro Asp Lys Cys Pro Cys Glu Val Tyr His Leu Met Lys Asn Cys Trp
1140 1145 1150
Glu Thr Glu Ala Ser Phe Arg Pro Thr Phe Glu Asn Leu Ile Pro Ile
1155 1160 1165
Leu Lys Thr Val His Glu Lys Tyr Gln Gly Gln Ala Pro Ser Val Phe
1170 1175 1180
Ser Val Cys
1185
<210> 57
<211> 906
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 57
Met Ala Gly Asn Val Lys Lys Ser Ser Gly Ala Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Leu Ile Gly Leu Met Lys Asp Ala
20 25 30
Phe Gln Pro His His His His His His His Leu Ser Pro His Pro Pro
35 40 45
Gly Thr Val Asp Lys Lys Met Val Glu Lys Cys Trp Lys Leu Met Asp
50 55 60
Lys Val Val Arg Leu Cys Gln Asn Pro Lys Leu Ala Leu Lys Asn Ser
65 70 75 80
Pro Pro Tyr Ile Leu Asp Leu Leu Pro Asp Thr Tyr Gln His Leu Arg
85 90 95
Thr Ile Leu Ser Arg Tyr Glu Gly Lys Met Glu Thr Leu Gly Glu Asn
100 105 110
Glu Tyr Phe Arg Val Phe Met Glu Asn Leu Met Lys Lys Thr Lys Gln
115 120 125
Thr Ile Ser Leu Phe Lys Glu Gly Lys Glu Arg Met Tyr Glu Glu Asn
130 135 140
Ser Gln Pro Arg Arg Asn Leu Thr Lys Leu Ser Leu Ile Phe Ser His
145 150 155 160
Met Leu Ala Glu Leu Lys Gly Ile Phe Pro Ser Gly Leu Phe Gln Gly
165 170 175
Asp Thr Phe Arg Ile Thr Lys Ala Asp Ala Ala Glu Phe Trp Arg Lys
180 185 190
Ala Phe Gly Glu Lys Thr Ile Val Pro Trp Lys Ser Phe Arg Gln Ala
195 200 205
Leu His Glu Val His Pro Ile Ser Ser Gly Leu Glu Ala Met Ala Leu
210 215 220
Lys Ser Thr Ile Asp Leu Thr Cys Asn Asp Tyr Ile Ser Val Phe Glu
225 230 235 240
Phe Asp Ile Phe Thr Arg Leu Phe Gln Pro Trp Ser Ser Leu Leu Arg
245 250 255
Asn Trp Asn Ser Leu Ala Val Thr His Pro Gly Tyr Met Ala Phe Leu
260 265 270
Thr Tyr Asp Glu Val Lys Ala Arg Leu Gln Lys Phe Ile His Lys Pro
275 280 285
Gly Ser Tyr Ile Phe Arg Leu Ser Cys Thr Arg Leu Gly Gln Trp Ala
290 295 300
Ile Gly Tyr Val Thr Ala Asp Gly Asn Ile Leu Gln Thr Ile Pro His
305 310 315 320
Asn Lys Pro Leu Phe Gln Ala Leu Ile Asp Gly Phe Arg Glu Gly Phe
325 330 335
Tyr Leu Phe Pro Asp Gly Arg Asn Gln Asn Pro Asp Leu Thr Gly Leu
340 345 350
Cys Glu Pro Thr Pro Gln Asp His Ile Lys Val Thr Gln Glu Gln Tyr
355 360 365
Glu Leu Tyr Cys Glu Met Gly Ser Thr Phe Gln Leu Cys Lys Ile Cys
370 375 380
Ala Glu Asn Asp Lys Asp Val Lys Ile Glu Pro Cys Gly His Leu Met
385 390 395 400
Cys Thr Ser Cys Leu Thr Ser Trp Gln Glu Ser Glu Gly Gln Gly Cys
405 410 415
Pro Phe Cys Arg Cys Glu Ile Lys Gly Thr Glu Pro Ile Val Val Asp
420 425 430
Pro Phe Asp Pro Arg Gly Ser Gly Ser Leu Leu Arg Gln Gly Ala Glu
435 440 445
Gly Ala Pro Ser Pro Asn Tyr Asp Asp Asp Asp Asp Glu Arg Ala Asp
450 455 460
Asp Thr Leu Phe Met Met Lys Glu Leu Ala Gly Ala Lys Val Glu Arg
465 470 475 480
Pro Pro Ser Pro Phe Ser Met Ala Pro Gln Ala Ser Leu Pro Pro Val
485 490 495
Pro Pro Arg Leu Asp Leu Leu Pro Gln Arg Val Cys Val Pro Ser Ser
500 505 510
Ala Ser Ala Leu Gly Thr Ala Ser Lys Ala Ala Ser Gly Ser Leu His
515 520 525
Lys Asp Lys Pro Leu Pro Val Pro Pro Thr Leu Arg Asp Leu Pro Pro
530 535 540
Pro Pro Pro Pro Asp Arg Pro Tyr Ser Val Gly Ala Glu Ser Arg Pro
545 550 555 560
Gln Arg Arg Pro Leu Pro Cys Thr Pro Gly Asp Cys Pro Ser Arg Asp
565 570 575
Lys Leu Pro Pro Val Pro Ser Ser Arg Leu Gly Asp Ser Trp Leu Pro
580 585 590
Arg Pro Ile Pro Lys Val Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Asp Pro
595 600 605
Trp Thr Gly Arg Glu Leu Thr Asn Arg His Ser Leu Pro Phe Ser Leu
610 615 620
Pro Ser Gln Met Glu Pro Arg Pro Asp Val Pro Arg Leu Gly Ser Thr
625 630 635 640
Phe Ser Leu Asp Thr Ser Met Ser Met Asn Ser Ser Pro Leu Val Gly
645 650 655
Pro Glu Cys Asp His Pro Lys Ile Lys Pro Ser Ser Ser Ala Asn Ala
660 665 670
Ile Tyr Ser Leu Ala Ala Arg Pro Leu Pro Val Pro Lys Leu Pro Pro
675 680 685
Gly Glu Gln Cys Glu Gly Glu Glu Asp Thr Glu Tyr Met Thr Pro Ser
690 695 700
Ser Arg Pro Leu Arg Pro Leu Asp Thr Ser Gln Ser Ser Arg Ala Cys
705 710 715 720
Asp Cys Asp Gln Gln Ile Asp Ser Cys Thr Tyr Glu Ala Met Tyr Asn
725 730 735
Ile Gln Ser Gln Ala Pro Ser Ile Thr Glu Ser Ser Thr Phe Gly Glu
740 745 750
Gly Asn Leu Ala Ala Ala His Ala Asn Thr Gly Pro Glu Glu Ser Glu
755 760 765
Asn Glu Asp Asp Gly Tyr Asp Val Pro Lys Pro Pro Val Pro Ala Val
770 775 780
Leu Ala Arg Arg Thr Leu Ser Asp Ile Ser Asn Ala Ser Ser Ser Phe
785 790 795 800
Gly Trp Leu Ser Leu Asp Gly Asp Pro Thr Thr Asn Val Thr Glu Gly
805 810 815
Ser Gln Val Pro Glu Arg Pro Pro Lys Pro Phe Pro Arg Arg Ile Asn
820 825 830
Ser Glu Arg Lys Ala Gly Ser Cys Gln Gln Gly Ser Gly Pro Ala Ala
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Ser Ala Ala Thr Ala Ser Pro Gln Leu Ser Ser Glu Ile Glu Asn Leu
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Met Ser Gln Gly Tyr Ser Tyr Gln Asp Ile Gln Lys Ala Leu Val Ile
865 870 875 880
Ala Gln Asn Asn Ile Glu Met Ala Lys Asn Ile Leu Arg Glu Phe Val
885 890 895
Ser Ile Ser Ser Pro Ala His Val Ala Thr
900 905
<210> 58
<211> 465
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 58
Met Ile Val Phe Val Arg Phe Asn Ser Ser His Gly Phe Pro Val Glu
1 5 10 15
Val Asp Ser Asp Thr Ser Ile Phe Gln Leu Lys Glu Val Val Ala Lys
20 25 30
Arg Gln Gly Val Pro Ala Asp Gln Leu Arg Val Ile Phe Ala Gly Lys
35 40 45
Glu Leu Arg Asn Asp Trp Thr Val Gln Asn Cys Asp Leu Asp Gln Gln
50 55 60
Ser Ile Val His Ile Val Gln Arg Pro Trp Arg Lys Gly Gln Glu Met
65 70 75 80
Asn Ala Thr Gly Gly Asp Asp Pro Arg Asn Ala Ala Gly Gly Cys Glu
85 90 95
Arg Glu Pro Gln Ser Leu Thr Arg Val Asp Leu Ser Ser Ser Val Leu
100 105 110
Pro Gly Asp Ser Val Gly Leu Ala Val Ile Leu His Thr Asp Ser Arg
115 120 125
Lys Asp Ser Pro Pro Ala Gly Ser Pro Ala Gly Arg Ser Ile Tyr Asn
130 135 140
Ser Phe Tyr Val Tyr Cys Lys Gly Pro Cys Gln Arg Val Gln Pro Gly
145 150 155 160
Lys Leu Arg Val Gln Cys Ser Thr Cys Arg Gln Ala Thr Leu Thr Leu
165 170 175
Thr Gln Gly Pro Ser Cys Trp Asp Asp Val Leu Ile Pro Asn Arg Met
180 185 190
Ser Gly Glu Cys Gln Ser Pro His Cys Pro Gly Thr Ser Ala Glu Phe
195 200 205
Phe Phe Lys Cys Gly Ala His Pro Thr Ser Asp Lys Glu Thr Ser Val
210 215 220
Ala Leu His Leu Ile Ala Thr Asn Ser Arg Asn Ile Thr Cys Ile Thr
225 230 235 240
Cys Thr Asp Val Arg Ser Pro Val Leu Val Phe Gln Cys Asn Ser Arg
245 250 255
His Val Ile Cys Leu Asp Cys Phe His Leu Tyr Cys Val Thr Arg Leu
260 265 270
Asn Asp Arg Gln Phe Val His Asp Pro Gln Leu Gly Tyr Ser Leu Pro
275 280 285
Cys Val Ala Gly Cys Pro Asn Ser Leu Ile Lys Glu Leu His His Phe
290 295 300
Arg Ile Leu Gly Glu Glu Gln Tyr Asn Arg Tyr Gln Gln Tyr Gly Ala
305 310 315 320
Glu Glu Cys Val Leu Gln Met Gly Gly Val Leu Cys Pro Arg Pro Gly
325 330 335
Cys Gly Ala Gly Leu Leu Pro Glu Pro Asp Gln Arg Lys Val Thr Cys
340 345 350
Glu Gly Gly Asn Gly Leu Gly Cys Gly Phe Ala Phe Cys Arg Glu Cys
355 360 365
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370 375 380
Gly Thr Thr Thr Gln Ala Tyr Arg Val Asp Glu Arg Ala Ala Glu Gln
385 390 395 400
Ala Arg Trp Glu Ala Ala Ser Lys Glu Thr Ile Lys Lys Thr Thr Lys
405 410 415
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420 425 430
His Met Lys Cys Pro Gln Pro Gln Cys Arg Leu Glu Trp Cys Trp Asn
435 440 445
Cys Gly Cys Glu Trp Asn Arg Val Cys Met Gly Asp His Trp Phe Asp
450 455 460
Val
465
<210> 59
<211> 108
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 59
Met Ala Ala Ala Met Asp Val Asp Thr Pro Ser Gly Thr Asn Ser Gly
1 5 10 15
Ala Gly Lys Lys Arg Phe Glu Val Lys Lys Trp Asn Ala Val Ala Leu
20 25 30
Trp Ala Trp Asp Ile Val Val Asp Asn Cys Ala Ile Cys Arg Asn His
35 40 45
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50 55 60
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Asp Asn Arg Glu Trp Glu Phe Gln Lys Tyr Gly His
100 105
<210> 60
<211> 501
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 60
Met Ala Ala Ala Ser Val Thr Pro Pro Gly Ser Leu Glu Leu Leu Gln
1 5 10 15
Pro Gly Phe Ser Lys Thr Leu Leu Gly Thr Lys Leu Glu Ala Lys Tyr
20 25 30
Leu Cys Ser Ala Cys Arg Asn Val Leu Arg Arg Pro Phe Gln Ala Gln
35 40 45
Cys Gly His Arg Tyr Cys Ser Phe Cys Leu Ala Ser Ile Leu Ser Ser
50 55 60
Gly Pro Gln Asn Cys Ala Ala Cys Val His Glu Gly Ile Tyr Glu Glu
65 70 75 80
Gly Ile Ser Ile Leu Glu Ser Ser Ser Ala Phe Pro Asp Asn Ala Ala
85 90 95
Arg Arg Glu Val Glu Ser Leu Pro Ala Val Cys Pro Ser Asp Gly Cys
100 105 110
Thr Trp Lys Gly Thr Leu Lys Glu Tyr Glu Ser Cys His Glu Gly Arg
115 120 125
Cys Pro Leu Met Leu Thr Glu Cys Pro Ala Cys Lys Gly Leu Val Arg
130 135 140
Leu Gly Glu Lys Glu Arg His Leu Glu His Glu Cys Pro Glu Arg Ser
145 150 155 160
Leu Ser Cys Arg His Cys Arg Ala Pro Cys Cys Gly Ala Asp Val Lys
165 170 175
Ala His His Glu Val Cys Pro Lys Phe Pro Leu Thr Cys Asp Gly Cys
180 185 190
Gly Lys Lys Lys Ile Pro Arg Glu Lys Phe Gln Asp His Val Lys Thr
195 200 205
Cys Gly Lys Cys Arg Val Pro Cys Arg Phe His Ala Ile Gly Cys Leu
210 215 220
Glu Thr Val Glu Gly Glu Lys Gln Gln Glu His Glu Val Gln Trp Leu
225 230 235 240
Arg Glu His Leu Ala Met Leu Leu Ser Ser Val Leu Glu Ala Lys Pro
245 250 255
Leu Leu Gly Asp Gln Ser His Ala Gly Ser Glu Leu Leu Gln Arg Cys
260 265 270
Glu Ser Leu Glu Lys Lys Thr Ala Thr Phe Glu Asn Ile Val Cys Val
275 280 285
Leu Asn Arg Glu Val Glu Arg Val Ala Met Thr Ala Glu Ala Cys Ser
290 295 300
Arg Gln His Arg Leu Asp Gln Asp Lys Ile Glu Ala Leu Ser Ser Lys
305 310 315 320
Val Gln Gln Leu Glu Arg Ser Ile Gly Leu Lys Asp Leu Ala Met Ala
325 330 335
Asp Leu Glu Gln Lys Val Leu Glu Met Glu Ala Ser Thr Tyr Asp Gly
340 345 350
Val Phe Ile Trp Lys Ile Ser Asp Phe Ala Arg Lys Arg Gln Glu Ala
355 360 365
Val Ala Gly Arg Ile Pro Ala Ile Phe Ser Pro Ala Phe Tyr Thr Ser
370 375 380
Arg Tyr Gly Tyr Lys Met Cys Leu Arg Ile Tyr Leu Asn Gly Asp Gly
385 390 395 400
Thr Gly Arg Gly Thr His Leu Ser Leu Phe Phe Val Val Met Lys Gly
405 410 415
Pro Asn Asp Ala Leu Leu Arg Trp Pro Phe Asn Gln Lys Val Thr Leu
420 425 430
Met Leu Leu Asp Gln Asn Asn Arg Glu His Val Ile Asp Ala Phe Arg
435 440 445
Pro Asp Val Thr Ser Ser Ser Phe Gln Arg Pro Val Asn Asp Met Asn
450 455 460
Ile Ala Ser Gly Cys Pro Leu Phe Cys Pro Val Ser Lys Met Glu Ala
465 470 475 480
Lys Asn Ser Tyr Val Arg Asp Asp Ala Ile Phe Ile Lys Ala Ile Val
485 490 495
Asp Leu Thr Gly Leu
500
<210> 61
<211> 491
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 61
Met Cys Asn Thr Asn Met Ser Val Pro Thr Asp Gly Ala Val Thr Thr
1 5 10 15
Ser Gln Ile Pro Ala Ser Glu Gln Glu Thr Leu Val Arg Pro Lys Pro
20 25 30
Leu Leu Leu Lys Leu Leu Lys Ser Val Gly Ala Gln Lys Asp Thr Tyr
35 40 45
Thr Met Lys Glu Val Leu Phe Tyr Leu Gly Gln Tyr Ile Met Thr Lys
50 55 60
Arg Leu Tyr Asp Glu Lys Gln Gln His Ile Val Tyr Cys Ser Asn Asp
65 70 75 80
Leu Leu Gly Asp Leu Phe Gly Val Pro Ser Phe Ser Val Lys Glu His
85 90 95
Arg Lys Ile Tyr Thr Met Ile Tyr Arg Asn Leu Val Val Val Asn Gln
100 105 110
Gln Glu Ser Ser Asp Ser Gly Thr Ser Val Ser Glu Asn Arg Cys His
115 120 125
Leu Glu Gly Gly Ser Asp Gln Lys Asp Leu Val Gln Glu Leu Gln Glu
130 135 140
Glu Lys Pro Ser Ser Ser His Leu Val Ser Arg Pro Ser Thr Ser Ser
145 150 155 160
Arg Arg Arg Ala Ile Ser Glu Thr Glu Glu Asn Ser Asp Glu Leu Ser
165 170 175
Gly Glu Arg Gln Arg Lys Arg His Lys Ser Asp Ser Ile Ser Leu Ser
180 185 190
Phe Asp Glu Ser Leu Ala Leu Cys Val Ile Arg Glu Ile Cys Cys Glu
195 200 205
Arg Ser Ser Ser Ser Glu Ser Thr Gly Thr Pro Ser Asn Pro Asp Leu
210 215 220
Asp Ala Gly Val Ser Glu His Ser Gly Asp Trp Leu Asp Gln Asp Ser
225 230 235 240
Val Ser Asp Gln Phe Ser Val Glu Phe Glu Val Glu Ser Leu Asp Ser
245 250 255
Glu Asp Tyr Ser Leu Ser Glu Glu Gly Gln Glu Leu Ser Asp Glu Asp
260 265 270
Asp Glu Val Tyr Gln Val Thr Val Tyr Gln Ala Gly Glu Ser Asp Thr
275 280 285
Asp Ser Phe Glu Glu Asp Pro Glu Ile Ser Leu Ala Asp Tyr Trp Lys
290 295 300
Cys Thr Ser Cys Asn Glu Met Asn Pro Pro Leu Pro Ser His Cys Asn
305 310 315 320
Arg Cys Trp Ala Leu Arg Glu Asn Trp Leu Pro Glu Asp Lys Gly Lys
325 330 335
Asp Lys Gly Glu Ile Ser Glu Lys Ala Lys Leu Glu Asn Ser Thr Gln
340 345 350
Ala Glu Glu Gly Phe Asp Val Pro Asp Cys Lys Lys Thr Ile Val Asn
355 360 365
Asp Ser Arg Glu Ser Cys Val Glu Glu Asn Asp Asp Lys Ile Thr Gln
370 375 380
Ala Ser Gln Ser Gln Glu Ser Glu Asp Tyr Ser Gln Pro Ser Thr Ser
385 390 395 400
Ser Ser Ile Ile Tyr Ser Ser Gln Glu Asp Val Lys Glu Phe Glu Arg
405 410 415
Glu Glu Thr Gln Asp Lys Glu Glu Ser Val Glu Ser Ser Leu Pro Leu
420 425 430
Asn Ala Ile Glu Pro Cys Val Ile Cys Gln Gly Arg Pro Lys Asn Gly
435 440 445
Cys Ile Val His Gly Lys Thr Gly His Leu Met Ala Cys Phe Thr Cys
450 455 460
Ala Lys Lys Leu Lys Lys Arg Asn Lys Pro Cys Pro Val Cys Arg Gln
465 470 475 480
Pro Ile Gln Met Ile Val Leu Thr Tyr Phe Pro
485 490
<210> 62
<211> 240
<212> PRT
<213> 海肾
<400> 62
Met Thr Ser Lys Val Tyr Asp Pro Glu Gln Arg Lys Arg Met Ile Thr
1 5 10 15
Gly Pro Gln Trp Trp Ala Arg Cys Lys Gln Met Asn Val Leu Asp Ser
20 25 30
Phe Ile Asn Tyr Tyr Asp Ser Glu Lys His Ala Glu Asn Ala Val Ile
35 40 45
Phe Leu His Gly Asn Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Trp Arg His Val Val
50 55 60
Pro His Ile Glu Pro Val Ala Arg Cys Ile Ile Pro Asp Leu Ile Gly
65 70 75 80
Met Gly Lys Ser Gly Lys Ser Gly Asn Gly Ser Tyr Arg Leu Leu Asp
85 90 95
His Tyr Lys Tyr Leu Thr Ala Trp Phe Glu Leu Leu Asn Leu Pro Lys
100 105 110
Lys Ile Ile Phe Val Gly His Asp Trp Gly Ala Cys Leu Ala Phe His
115 120 125
Tyr Ser Tyr Glu His Gln Asp Lys Ile Lys Ala Ile Val His Ala Glu
130 135 140
Ser Val Val Asp Val Ile Glu Ser Trp Asp Glu Trp Pro Asp Ile Glu
145 150 155 160
Glu Asp Ile Ala Leu Ile Lys Ser Glu Glu Gly Glu Lys Met Val Leu
165 170 175
Glu Asn Asn Phe Phe Val Glu Thr Met Leu Pro Ser Lys Ile Met Arg
180 185 190
Lys Leu Glu Pro Glu Glu Phe Ala Ala Tyr Leu Glu Pro Phe Lys Glu
195 200 205
Lys Gly Glu Val Arg Arg Pro Thr Leu Ser Trp Pro Arg Glu Ile Pro
210 215 220
Leu Val Lys Gly Gly Lys Pro Asp Val Val Gln Ile Val Arg Asn Tyr
225 230 235 240
<210> 63
<211> 320
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 63
Met Glu Leu Leu Ser Pro Pro Leu Arg Asp Val Asp Leu Thr Ala Pro
1 5 10 15
Asp Gly Ser Leu Cys Ser Phe Ala Thr Thr Asp Asp Phe Tyr Asp Asp
20 25 30
Pro Cys Phe Asp Ser Pro Asp Leu Arg Phe Phe Glu Asp Leu Asp Pro
35 40 45
Arg Leu Met His Val Gly Ala Leu Leu Lys Pro Glu Glu His Ser His
50 55 60
Phe Pro Ala Ala Val His Pro Ala Pro Gly Ala Arg Glu Asp Glu His
65 70 75 80
Val Arg Ala Pro Ser Gly His His Gln Ala Gly Arg Cys Leu Leu Trp
85 90 95
Ala Cys Lys Ala Cys Lys Arg Lys Thr Thr Asn Ala Asp Arg Arg Lys
100 105 110
Ala Ala Thr Met Arg Glu Arg Arg Arg Leu Ser Lys Val Asn Glu Ala
115 120 125
Phe Glu Thr Leu Lys Arg Cys Thr Ser Ser Asn Pro Asn Gln Arg Leu
130 135 140
Pro Lys Val Glu Ile Leu Arg Asn Ala Ile Arg Tyr Ile Glu Gly Leu
145 150 155 160
Gln Ala Leu Leu Arg Asp Gln Asp Ala Ala Pro Pro Gly Ala Ala Ala
165 170 175
Ala Phe Tyr Ala Pro Gly Pro Leu Pro Pro Gly Arg Gly Gly Glu His
180 185 190
Tyr Ser Gly Asp Ser Asp Ala Ser Ser Pro Arg Ser Asn Cys Ser Asp
195 200 205
Gly Met Met Asp Tyr Ser Gly Pro Pro Ser Gly Ala Arg Arg Arg Asn
210 215 220
Cys Tyr Glu Gly Ala Tyr Tyr Asn Glu Ala Pro Ser Glu Pro Arg Pro
225 230 235 240
Gly Lys Ser Ala Ala Val Ser Ser Leu Asp Cys Leu Ser Ser Ile Val
245 250 255
Glu Arg Ile Ser Thr Glu Ser Pro Ala Ala Pro Ala Leu Leu Leu Ala
260 265 270
Asp Val Pro Ser Glu Ser Pro Pro Arg Arg Gln Glu Ala Ala Ala Pro
275 280 285
Ser Glu Gly Glu Ser Ser Gly Asp Pro Thr Gln Ser Pro Asp Ala Ala
290 295 300
Pro Gln Cys Pro Ala Gly Ala Asn Pro Asn Pro Ile Tyr Gln Val Leu
305 310 315 320
<210> 64
<211> 607
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 64
Met Ala Glu Lys Arg Arg Gly Ser Pro Cys Ser Met Leu Ser Leu Lys
1 5 10 15
Ala His Ala Phe Ser Val Glu Ala Leu Ile Gly Ala Glu Lys Gln Gln
20 25 30
Gln Leu Gln Lys Lys Arg Arg Lys Leu Gly Ala Glu Glu Ala Ala Gly
35 40 45
Ala Val Asp Asp Gly Gly Cys Ser Arg Gly Gly Gly Ala Gly Glu Lys
50 55 60
Gly Ser Ser Glu Gly Asp Glu Gly Ala Ala Leu Pro Pro Pro Ala Gly
65 70 75 80
Ala Thr Ser Gly Pro Ala Arg Ser Gly Ala Asp Leu Glu Arg Gly Ala
85 90 95
Ala Gly Gly Cys Glu Asp Gly Phe Gln Gln Gly Ala Ser Pro Leu Ala
100 105 110
Ser Pro Gly Gly Ser Pro Lys Gly Ser Pro Ala Arg Ser Leu Ala Arg
115 120 125
Pro Gly Thr Pro Leu Pro Ser Pro Gln Ala Pro Arg Val Asp Leu Gln
130 135 140
Gly Ala Glu Leu Trp Lys Arg Phe His Glu Ile Gly Thr Glu Met Ile
145 150 155 160
Ile Thr Lys Ala Gly Arg Arg Met Phe Pro Ala Met Arg Val Lys Ile
165 170 175
Ser Gly Leu Asp Pro His Gln Gln Tyr Tyr Ile Ala Met Asp Ile Val
180 185 190
Pro Val Asp Asn Lys Arg Tyr Arg Tyr Val Tyr His Ser Ser Lys Trp
195 200 205
Met Val Ala Gly Asn Ala Asp Ser Pro Val Pro Pro Arg Val Tyr Ile
210 215 220
His Pro Asp Ser Pro Ala Ser Gly Glu Thr Trp Met Arg Gln Val Ile
225 230 235 240
Ser Phe Asp Lys Leu Lys Leu Thr Asn Asn Glu Leu Asp Asp Gln Gly
245 250 255
His Ile Ile Leu His Ser Met His Lys Tyr Gln Pro Arg Val His Val
260 265 270
Ile Arg Lys Asp Cys Gly Asp Asp Leu Ser Pro Ile Lys Pro Val Pro
275 280 285
Ser Gly Glu Gly Val Lys Ala Phe Ser Phe Pro Glu Thr Val Phe Thr
290 295 300
Thr Val Thr Ala Tyr Gln Asn Gln Gln Ile Thr Arg Leu Lys Ile Asp
305 310 315 320
Arg Asn Pro Phe Ala Lys Gly Phe Arg Asp Ser Gly Arg Asn Arg Met
325 330 335
Gly Leu Glu Ala Leu Val Glu Ser Tyr Ala Phe Trp Arg Pro Ser Leu
340 345 350
Arg Thr Leu Thr Phe Glu Asp Ile Pro Gly Ile Pro Lys Gln Gly Asn
355 360 365
Ala Ser Ser Ser Thr Leu Leu Gln Gly Thr Gly Asn Gly Val Pro Ala
370 375 380
Thr His Pro His Leu Leu Ser Gly Ser Ser Cys Ser Ser Pro Ala Phe
385 390 395 400
His Leu Gly Pro Asn Thr Ser Gln Leu Cys Ser Leu Ala Pro Ala Asp
405 410 415
Tyr Ser Ala Cys Ala Arg Ser Gly Leu Thr Leu Asn Arg Tyr Ser Thr
420 425 430
Ser Leu Ala Glu Thr Tyr Asn Arg Leu Thr Asn Gln Ala Gly Glu Thr
435 440 445
Phe Ala Pro Pro Arg Thr Pro Ser Tyr Val Gly Val Ser Ser Ser Thr
450 455 460
Ser Val Asn Met Ser Met Gly Gly Thr Asp Gly Asp Thr Phe Ser Cys
465 470 475 480
Pro Gln Thr Ser Leu Ser Met Gln Ile Ser Gly Met Ser Pro Gln Leu
485 490 495
Gln Tyr Ile Met Pro Ser Pro Ser Ser Asn Ala Phe Ala Thr Asn Gln
500 505 510
Thr His Gln Gly Ser Tyr Asn Thr Phe Arg Leu His Ser Pro Cys Ala
515 520 525
Leu Tyr Gly Tyr Asn Phe Ser Thr Ser Pro Lys Leu Ala Ala Ser Pro
530 535 540
Glu Lys Ile Val Ser Ser Gln Gly Ser Phe Leu Gly Ser Ser Pro Ser
545 550 555 560
Gly Thr Met Thr Asp Arg Gln Met Leu Pro Pro Val Glu Gly Val His
565 570 575
Leu Leu Ser Ser Gly Gly Gln Gln Ser Phe Phe Asp Ser Arg Thr Leu
580 585 590
Gly Ser Leu Thr Leu Ser Ser Ser Gln Val Ser Ala His Met Val
595 600 605
<210> 65
<211> 393
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 65
Met Glu Glu Pro Gln Ser Asp Pro Ser Val Glu Pro Pro Leu Ser Gln
1 5 10 15
Glu Thr Phe Ser Asp Leu Trp Lys Leu Leu Pro Glu Asn Asn Val Leu
20 25 30
Ser Pro Leu Pro Ser Gln Ala Met Asp Asp Leu Met Leu Ser Pro Asp
35 40 45
Asp Ile Glu Gln Trp Phe Thr Glu Asp Pro Gly Pro Asp Glu Ala Pro
50 55 60
Arg Met Pro Glu Ala Ala Pro Pro Val Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro
65 70 75 80
Thr Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ser Trp Pro Leu Ser Ser Ser
85 90 95
Val Pro Ser Gln Lys Thr Tyr Gln Gly Ser Tyr Gly Phe Arg Leu Gly
100 105 110
Phe Leu His Ser Gly Thr Ala Lys Ser Val Thr Cys Thr Tyr Ser Pro
115 120 125
Ala Leu Asn Lys Met Phe Cys Gln Leu Ala Lys Thr Cys Pro Val Gln
130 135 140
Leu Trp Val Asp Ser Thr Pro Pro Pro Gly Thr Arg Val Arg Ala Met
145 150 155 160
Ala Ile Tyr Lys Gln Ser Gln His Met Thr Glu Val Val Arg Arg Cys
165 170 175
Pro His His Glu Arg Cys Ser Asp Ser Asp Gly Leu Ala Pro Pro Gln
180 185 190
His Leu Ile Arg Val Glu Gly Asn Leu Arg Val Glu Tyr Leu Asp Asp
195 200 205
Arg Asn Thr Phe Arg His Ser Val Val Val Pro Tyr Glu Pro Pro Glu
210 215 220
Val Gly Ser Asp Cys Thr Thr Ile His Tyr Asn Tyr Met Cys Asn Ser
225 230 235 240
Ser Cys Met Gly Gly Met Asn Arg Arg Pro Ile Leu Thr Ile Ile Thr
245 250 255
Leu Glu Asp Ser Ser Gly Asn Leu Leu Gly Arg Asn Ser Phe Glu Val
260 265 270
Arg Val Cys Ala Cys Pro Gly Arg Asp Arg Arg Thr Glu Glu Glu Asn
275 280 285
Leu Arg Lys Lys Gly Glu Pro His His Glu Leu Pro Pro Gly Ser Thr
290 295 300
Lys Arg Ala Leu Pro Asn Asn Thr Ser Ser Ser Pro Gln Pro Lys Lys
305 310 315 320
Lys Pro Leu Asp Gly Glu Tyr Phe Thr Leu Gln Ile Arg Gly Arg Glu
325 330 335
Arg Phe Glu Met Phe Arg Glu Leu Asn Glu Ala Leu Glu Leu Lys Asp
340 345 350
Ala Gln Ala Gly Lys Glu Pro Gly Gly Ser Arg Ala His Ser Ser His
355 360 365
Leu Lys Ser Lys Lys Gly Gln Ser Thr Ser Arg His Lys Lys Leu Met
370 375 380
Phe Lys Thr Glu Gly Pro Asp Ser Asp
385 390
<210> 66
<211> 215
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 66
Met Gly Lys Gly Asp Pro Lys Lys Pro Arg Gly Lys Met Ser Ser Tyr
1 5 10 15
Ala Phe Phe Val Gln Thr Cys Arg Glu Glu His Lys Lys Lys His Pro
20 25 30
Asp Ala Ser Val Asn Phe Ser Glu Phe Ser Lys Lys Cys Ser Glu Arg
35 40 45
Trp Lys Thr Met Ser Ala Lys Glu Lys Gly Lys Phe Glu Asp Met Ala
50 55 60
Lys Ala Asp Lys Ala Arg Tyr Glu Arg Glu Met Lys Thr Tyr Ile Pro
65 70 75 80
Pro Lys Gly Glu Thr Lys Lys Lys Phe Lys Asp Pro Asn Ala Pro Lys
85 90 95
Arg Pro Pro Ser Ala Phe Phe Leu Phe Cys Ser Glu Tyr Arg Pro Lys
100 105 110
Ile Lys Gly Glu His Pro Gly Leu Ser Ile Gly Asp Val Ala Lys Lys
115 120 125
Leu Gly Glu Met Trp Asn Asn Thr Ala Ala Asp Asp Lys Gln Pro Tyr
130 135 140
Glu Lys Lys Ala Ala Lys Leu Lys Glu Lys Tyr Glu Lys Asp Ile Ala
145 150 155 160
Ala Tyr Arg Ala Lys Gly Lys Pro Asp Ala Ala Lys Lys Gly Val Val
165 170 175
Lys Ala Glu Lys Ser Lys Lys Lys Lys Glu Glu Glu Glu Asp Glu Glu
180 185 190
Asp Glu Glu Asp Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Glu Asp Glu Asp Glu
195 200 205
Glu Glu Asp Asp Asp Asp Glu
210 215
<210> 67
<211> 356
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 67
Met Thr Lys Ser Tyr Ser Glu Ser Gly Leu Met Gly Glu Pro Gln Pro
1 5 10 15
Gln Gly Pro Pro Ser Trp Thr Asp Glu Cys Leu Ser Ser Gln Asp Glu
20 25 30
Glu His Glu Ala Asp Lys Lys Glu Asp Asp Leu Glu Thr Met Asn Ala
35 40 45
Glu Glu Asp Ser Leu Arg Asn Gly Gly Glu Glu Glu Asp Glu Asp Glu
50 55 60
Asp Leu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Asp Asp Asp Gln Lys
65 70 75 80
Pro Lys Arg Arg Gly Pro Lys Lys Lys Lys Met Thr Lys Ala Arg Leu
85 90 95
Glu Arg Phe Lys Leu Arg Arg Met Lys Ala Asn Ala Arg Glu Arg Asn
100 105 110
Arg Met His Gly Leu Asn Ala Ala Leu Asp Asn Leu Arg Lys Val Val
115 120 125
Pro Cys Tyr Ser Lys Thr Gln Lys Leu Ser Lys Ile Glu Thr Leu Arg
130 135 140
Leu Ala Lys Asn Tyr Ile Trp Ala Leu Ser Glu Ile Leu Arg Ser Gly
145 150 155 160
Lys Ser Pro Asp Leu Val Ser Phe Val Gln Thr Leu Cys Lys Gly Leu
165 170 175
Ser Gln Pro Thr Thr Asn Leu Val Ala Gly Cys Leu Gln Leu Asn Pro
180 185 190
Arg Thr Phe Leu Pro Glu Gln Asn Gln Asp Met Pro Pro His Leu Pro
195 200 205
Thr Ala Ser Ala Ser Phe Pro Val His Pro Tyr Ser Tyr Gln Ser Pro
210 215 220
Gly Leu Pro Ser Pro Pro Tyr Gly Thr Met Asp Ser Ser His Val Phe
225 230 235 240
His Val Lys Pro Pro Pro His Ala Tyr Ser Ala Ala Leu Glu Pro Phe
245 250 255
Phe Glu Ser Pro Leu Thr Asp Cys Thr Ser Pro Ser Phe Asp Gly Pro
260 265 270
Leu Ser Pro Pro Leu Ser Ile Asn Gly Asn Phe Ser Phe Lys His Glu
275 280 285
Pro Ser Ala Glu Phe Glu Lys Asn Tyr Ala Phe Thr Met His Tyr Pro
290 295 300
Ala Ala Thr Leu Ala Gly Ala Gln Ser His Gly Ser Ile Phe Ser Gly
305 310 315 320
Thr Ala Ala Pro Arg Cys Glu Ile Pro Ile Asp Asn Ile Met Ser Phe
325 330 335
Asp Ser His Ser His His Glu Arg Val Met Ser Ala Gln Leu Asn Ala
340 345 350
Ile Phe His Asp
355
<210> 68
<211> 498
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 68
Met Asn Gln Ser Ile Pro Val Ala Pro Thr Pro Pro Arg Arg Val Arg
1 5 10 15
Leu Lys Pro Trp Leu Val Ala Gln Val Asn Ser Cys Gln Tyr Pro Gly
20 25 30
Leu Gln Trp Val Asn Gly Glu Lys Lys Leu Phe Cys Ile Pro Trp Arg
35 40 45
His Ala Thr Arg His Gly Pro Ser Gln Asp Gly Asp Asn Thr Ile Phe
50 55 60
Lys Ala Trp Ala Lys Glu Thr Gly Lys Tyr Thr Glu Gly Val Asp Glu
65 70 75 80
Ala Asp Pro Ala Lys Trp Lys Ala Asn Leu Arg Cys Ala Leu Asn Lys
85 90 95
Ser Arg Asp Phe Arg Leu Ile Tyr Asp Gly Pro Arg Asp Met Pro Pro
100 105 110
Gln Pro Tyr Lys Ile Tyr Glu Val Cys Ser Asn Gly Pro Ala Pro Thr
115 120 125
Asp Ser Gln Pro Pro Glu Asp Tyr Ser Phe Gly Ala Gly Glu Glu Glu
130 135 140
Glu Glu Glu Glu Glu Leu Gln Arg Met Leu Pro Ser Leu Ser Leu Thr
145 150 155 160
Glu Asp Val Lys Trp Pro Pro Thr Leu Gln Pro Pro Thr Leu Arg Pro
165 170 175
Pro Thr Leu Gln Pro Pro Thr Leu Gln Pro Pro Val Val Leu Gly Pro
180 185 190
Pro Ala Pro Asp Pro Ser Pro Leu Ala Pro Pro Pro Gly Asn Pro Ala
195 200 205
Gly Phe Arg Glu Leu Leu Ser Glu Val Leu Glu Pro Gly Pro Leu Pro
210 215 220
Ala Ser Leu Pro Pro Ala Gly Glu Gln Leu Leu Pro Asp Leu Leu Ile
225 230 235 240
Ser Pro His Met Leu Pro Leu Thr Asp Leu Glu Ile Lys Phe Gln Tyr
245 250 255
Arg Gly Arg Pro Pro Arg Ala Leu Thr Ile Ser Asn Pro His Gly Cys
260 265 270
Arg Leu Phe Tyr Ser Gln Leu Glu Ala Thr Gln Glu Gln Val Glu Leu
275 280 285
Phe Gly Pro Ile Ser Leu Glu Gln Val Arg Phe Pro Ser Pro Glu Asp
290 295 300
Ile Pro Ser Asp Lys Gln Arg Phe Tyr Thr Asn Gln Leu Leu Asp Val
305 310 315 320
Leu Asp Arg Gly Leu Ile Leu Gln Leu Gln Gly Gln Asp Leu Tyr Ala
325 330 335
Ile Arg Leu Cys Gln Cys Lys Val Phe Trp Ser Gly Pro Cys Ala Ser
340 345 350
Ala His Asp Ser Cys Pro Asn Pro Ile Gln Arg Glu Val Lys Thr Lys
355 360 365
Leu Phe Ser Leu Glu His Phe Leu Asn Glu Leu Ile Leu Phe Gln Lys
370 375 380
Gly Gln Thr Asn Thr Pro Pro Pro Phe Glu Ile Phe Phe Cys Phe Gly
385 390 395 400
Glu Glu Trp Pro Asp Arg Lys Pro Arg Glu Lys Lys Leu Ile Thr Val
405 410 415
Gln Val Val Pro Val Ala Ala Arg Leu Leu Leu Glu Met Phe Ser Gly
420 425 430
Glu Leu Ser Trp Ser Ala Asp Ser Ile Arg Leu Gln Ile Ser Asn Pro
435 440 445
Asp Leu Lys Asp Arg Met Val Glu Gln Phe Lys Glu Leu His His Ile
450 455 460
Trp Gln Ser Gln Gln Arg Leu Gln Pro Val Ala Gln Ala Pro Pro Gly
465 470 475 480
Ala Gly Leu Gly Val Gly Gln Gly Pro Trp Pro Met His Pro Ala Gly
485 490 495
Met Gln
<210> 69
<211> 427
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 69
Met Gly Thr Pro Lys Pro Arg Ile Leu Pro Trp Leu Val Ser Gln Leu
1 5 10 15
Asp Leu Gly Gln Leu Glu Gly Val Ala Trp Val Asn Lys Ser Arg Thr
20 25 30
Arg Phe Arg Ile Pro Trp Lys His Gly Leu Arg Gln Asp Ala Gln Gln
35 40 45
Glu Asp Phe Gly Ile Phe Gln Ala Trp Ala Glu Ala Thr Gly Ala Tyr
50 55 60
Val Pro Gly Arg Asp Lys Pro Asp Leu Pro Thr Trp Lys Arg Asn Phe
65 70 75 80
Arg Ser Ala Leu Asn Arg Lys Glu Gly Leu Arg Leu Ala Glu Asp Arg
85 90 95
Ser Lys Asp Pro His Asp Pro His Lys Ile Tyr Glu Phe Val Asn Ser
100 105 110
Gly Val Gly Asp Phe Ser Gln Pro Asp Thr Ser Pro Asp Thr Asn Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Thr Ser Asp Thr Gln Glu Asp Ile Leu Asp Glu Leu Leu
130 135 140
Gly Asn Met Val Leu Ala Pro Leu Pro Asp Pro Gly Pro Pro Ser Leu
145 150 155 160
Ala Val Ala Pro Glu Pro Cys Pro Gln Pro Leu Arg Ser Pro Ser Leu
165 170 175
Asp Asn Pro Thr Pro Phe Pro Asn Leu Gly Pro Ser Glu Asn Pro Leu
180 185 190
Lys Arg Leu Leu Val Pro Gly Glu Glu Trp Glu Phe Glu Val Thr Ala
195 200 205
Phe Tyr Arg Gly Arg Gln Val Phe Gln Gln Thr Ile Ser Cys Pro Glu
210 215 220
Gly Leu Arg Leu Val Gly Ser Glu Val Gly Asp Arg Thr Leu Pro Gly
225 230 235 240
Trp Pro Val Thr Leu Pro Asp Pro Gly Met Ser Leu Thr Asp Arg Gly
245 250 255
Val Met Ser Tyr Val Arg His Val Leu Ser Cys Leu Gly Gly Gly Leu
260 265 270
Ala Leu Trp Arg Ala Gly Gln Trp Leu Trp Ala Gln Arg Leu Gly His
275 280 285
Cys His Thr Tyr Trp Ala Val Ser Glu Glu Leu Leu Pro Asn Ser Gly
290 295 300
His Gly Pro Asp Gly Glu Val Pro Lys Asp Lys Glu Gly Gly Val Phe
305 310 315 320
Asp Leu Gly Pro Phe Ile Val Asp Leu Ile Thr Phe Thr Glu Gly Ser
325 330 335
Gly Arg Ser Pro Arg Tyr Ala Leu Trp Phe Cys Val Gly Glu Ser Trp
340 345 350
Pro Gln Asp Gln Pro Trp Thr Lys Arg Leu Val Met Val Lys Val Val
355 360 365
Pro Thr Cys Leu Arg Ala Leu Val Glu Met Ala Arg Val Gly Gly Ala
370 375 380
Ser Ser Leu Glu Asn Thr Val Asp Leu His Ile Ser Asn Ser His Pro
385 390 395 400
Leu Ser Leu Thr Ser Asp Gln Tyr Lys Ala Tyr Leu Gln Asp Leu Val
405 410 415
Glu Gly Met Asp Phe Gln Gly Pro Gly Glu Ser
420 425
<210> 70
<211> 750
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 70
Met Ser Gln Trp Tyr Glu Leu Gln Gln Leu Asp Ser Lys Phe Leu Glu
1 5 10 15
Gln Val His Gln Leu Tyr Asp Asp Ser Phe Pro Met Glu Ile Arg Gln
20 25 30
Tyr Leu Ala Gln Trp Leu Glu Lys Gln Asp Trp Glu His Ala Ala Asn
35 40 45
Asp Val Ser Phe Ala Thr Ile Arg Phe His Asp Leu Leu Ser Gln Leu
50 55 60
Asp Asp Gln Tyr Ser Arg Phe Ser Leu Glu Asn Asn Phe Leu Leu Gln
65 70 75 80
His Asn Ile Arg Lys Ser Lys Arg Asn Leu Gln Asp Asn Phe Gln Glu
85 90 95
Asp Pro Ile Gln Met Ser Met Ile Ile Tyr Ser Cys Leu Lys Glu Glu
100 105 110
Arg Lys Ile Leu Glu Asn Ala Gln Arg Phe Asn Gln Ala Gln Ser Gly
115 120 125
Asn Ile Gln Ser Thr Val Met Leu Asp Lys Gln Lys Glu Leu Asp Ser
130 135 140
Lys Val Arg Asn Val Lys Asp Lys Val Met Cys Ile Glu His Glu Ile
145 150 155 160
Lys Ser Leu Glu Asp Leu Gln Asp Glu Tyr Asp Phe Lys Cys Lys Thr
165 170 175
Leu Gln Asn Arg Glu His Glu Thr Asn Gly Val Ala Lys Ser Asp Gln
180 185 190
Lys Gln Glu Gln Leu Leu Leu Lys Lys Met Tyr Leu Met Leu Asp Asn
195 200 205
Lys Arg Lys Glu Val Val His Lys Ile Ile Glu Leu Leu Asn Val Thr
210 215 220
Glu Leu Thr Gln Asn Ala Leu Ile Asn Asp Glu Leu Val Glu Trp Lys
225 230 235 240
Arg Arg Gln Gln Ser Ala Cys Ile Gly Gly Pro Pro Asn Ala Cys Leu
245 250 255
Asp Gln Leu Gln Asn Trp Phe Thr Ile Val Ala Glu Ser Leu Gln Gln
260 265 270
Val Arg Gln Gln Leu Lys Lys Leu Glu Glu Leu Glu Gln Lys Tyr Thr
275 280 285
Tyr Glu His Asp Pro Ile Thr Lys Asn Lys Gln Val Leu Trp Asp Arg
290 295 300
Thr Phe Ser Leu Phe Gln Gln Leu Ile Gln Ser Ser Phe Val Val Glu
305 310 315 320
Arg Gln Pro Cys Met Pro Thr His Pro Gln Arg Pro Leu Val Leu Lys
325 330 335
Thr Gly Val Gln Phe Thr Val Lys Leu Arg Leu Leu Val Lys Leu Gln
340 345 350
Glu Leu Asn Tyr Asn Leu Lys Val Lys Val Leu Phe Asp Lys Asp Val
355 360 365
Asn Glu Arg Asn Thr Val Lys Gly Phe Arg Lys Phe Asn Ile Leu Gly
370 375 380
Thr His Thr Lys Val Met Asn Met Glu Glu Ser Thr Asn Gly Ser Leu
385 390 395 400
Ala Ala Glu Phe Arg His Leu Gln Leu Lys Glu Gln Lys Asn Ala Gly
405 410 415
Thr Arg Thr Asn Glu Gly Pro Leu Ile Val Thr Glu Glu Leu His Ser
420 425 430
Leu Ser Phe Glu Thr Gln Leu Cys Gln Pro Gly Leu Val Ile Asp Leu
435 440 445
Glu Thr Thr Ser Leu Pro Val Val Val Ile Ser Asn Val Ser Gln Leu
450 455 460
Pro Ser Gly Trp Ala Ser Ile Leu Trp Tyr Asn Met Leu Val Ala Glu
465 470 475 480
Pro Arg Asn Leu Ser Phe Phe Leu Thr Pro Pro Cys Ala Arg Trp Ala
485 490 495
Gln Leu Ser Glu Val Leu Ser Trp Gln Phe Ser Ser Val Thr Lys Arg
500 505 510
Gly Leu Asn Val Asp Gln Leu Asn Met Leu Gly Glu Lys Leu Leu Gly
515 520 525
Pro Asn Ala Ser Pro Asp Gly Leu Ile Pro Trp Thr Arg Phe Cys Lys
530 535 540
Glu Asn Ile Asn Asp Lys Asn Phe Pro Phe Trp Leu Trp Ile Glu Ser
545 550 555 560
Ile Leu Glu Leu Ile Lys Lys His Leu Leu Pro Leu Trp Asn Asp Gly
565 570 575
Cys Ile Met Gly Phe Ile Ser Lys Glu Arg Glu Arg Ala Leu Leu Lys
580 585 590
Asp Gln Gln Pro Gly Thr Phe Leu Leu Arg Phe Ser Glu Ser Ser Arg
595 600 605
Glu Gly Ala Ile Thr Phe Thr Trp Val Glu Arg Ser Gln Asn Gly Gly
610 615 620
Glu Pro Asp Phe His Ala Val Glu Pro Tyr Thr Lys Lys Glu Leu Ser
625 630 635 640
Ala Val Thr Phe Pro Asp Ile Ile Arg Asn Tyr Lys Val Met Ala Ala
645 650 655
Glu Asn Ile Pro Glu Asn Pro Leu Lys Tyr Leu Tyr Pro Asn Ile Asp
660 665 670
Lys Asp His Ala Phe Gly Lys Tyr Tyr Ser Arg Pro Lys Glu Ala Pro
675 680 685
Glu Pro Met Glu Leu Asp Gly Pro Lys Gly Thr Gly Tyr Ile Lys Thr
690 695 700
Glu Leu Ile Ser Val Ser Glu Val His Pro Ser Arg Leu Gln Thr Thr
705 710 715 720
Asp Asn Leu Leu Pro Met Ser Pro Glu Glu Phe Asp Glu Val Ser Arg
725 730 735
Ile Val Gly Ser Val Glu Phe Asp Ser Met Met Asn Thr Val
740 745 750
<210> 71
<211> 225
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 71
Met Val Thr His Ser Lys Phe Pro Ala Ala Gly Met Ser Arg Pro Leu
1 5 10 15
Asp Thr Ser Leu Arg Leu Lys Thr Phe Ser Ser Lys Ser Glu Tyr Gln
20 25 30
Leu Val Val Asn Ala Val Arg Lys Leu Gln Glu Ser Gly Phe Tyr Trp
35 40 45
Ser Ala Val Thr Gly Gly Glu Ala Asn Leu Leu Leu Ser Ala Glu Pro
50 55 60
Ala Gly Thr Phe Leu Ile Arg Asp Ser Ser Asp Gln Arg His Phe Phe
65 70 75 80
Thr Leu Ser Val Lys Thr Gln Ser Gly Thr Lys Asn Leu Arg Ile Gln
85 90 95
Cys Glu Gly Gly Ser Phe Ser Leu Gln Ser Asp Pro Arg Ser Thr Gln
100 105 110
Pro Val Pro Arg Phe Asp Cys Val Leu Lys Leu Val His His Tyr Met
115 120 125
Pro Pro Pro Gly Ala Pro Ser Phe Pro Ser Pro Pro Thr Glu Pro Ser
130 135 140
Ser Glu Val Pro Glu Gln Pro Ser Ala Gln Pro Leu Pro Gly Ser Pro
145 150 155 160
Pro Arg Arg Ala Tyr Tyr Ile Tyr Ser Gly Gly Glu Lys Ile Pro Leu
165 170 175
Val Leu Ser Arg Pro Leu Ser Ser Asn Val Ala Thr Leu Gln His Leu
180 185 190
Cys Arg Lys Thr Val Asn Gly His Leu Asp Ser Tyr Glu Lys Val Thr
195 200 205
Gln Leu Pro Gly Pro Ile Arg Glu Phe Leu Asp Gln Tyr Asp Ala Pro
210 215 220
Leu
225
<210> 72
<211> 770
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 72
Met Ala Gln Trp Asn Gln Leu Gln Gln Leu Asp Thr Arg Tyr Leu Glu
1 5 10 15
Gln Leu His Gln Leu Tyr Ser Asp Ser Phe Pro Met Glu Leu Arg Gln
20 25 30
Phe Leu Ala Pro Trp Ile Glu Ser Gln Asp Trp Ala Tyr Ala Ala Ser
35 40 45
Lys Glu Ser His Ala Thr Leu Val Phe His Asn Leu Leu Gly Glu Ile
50 55 60
Asp Gln Gln Tyr Ser Arg Phe Leu Gln Glu Ser Asn Val Leu Tyr Gln
65 70 75 80
His Asn Leu Arg Arg Ile Lys Gln Phe Leu Gln Ser Arg Tyr Leu Glu
85 90 95
Lys Pro Met Glu Ile Ala Arg Ile Val Ala Arg Cys Leu Trp Glu Glu
100 105 110
Ser Arg Leu Leu Gln Thr Ala Ala Thr Ala Ala Gln Gln Gly Gly Gln
115 120 125
Ala Asn His Pro Thr Ala Ala Val Val Thr Glu Lys Gln Gln Met Leu
130 135 140
Glu Gln His Leu Gln Asp Val Arg Lys Arg Val Gln Asp Leu Glu Gln
145 150 155 160
Lys Met Lys Val Val Glu Asn Leu Gln Asp Asp Phe Asp Phe Asn Tyr
165 170 175
Lys Thr Leu Lys Ser Gln Gly Asp Met Gln Asp Leu Asn Gly Asn Asn
180 185 190
Gln Ser Val Thr Arg Gln Lys Met Gln Gln Leu Glu Gln Met Leu Thr
195 200 205
Ala Leu Asp Gln Met Arg Arg Ser Ile Val Ser Glu Leu Ala Gly Leu
210 215 220
Leu Ser Ala Met Glu Tyr Val Gln Lys Thr Leu Thr Asp Glu Glu Leu
225 230 235 240
Ala Asp Trp Lys Arg Arg Gln Gln Ile Ala Cys Ile Gly Gly Pro Pro
245 250 255
Asn Ile Cys Leu Asp Arg Leu Glu Asn Trp Ile Thr Ser Leu Ala Glu
260 265 270
Ser Gln Leu Gln Thr Arg Gln Gln Ile Lys Lys Leu Glu Glu Leu Gln
275 280 285
Gln Lys Val Ser Tyr Lys Gly Asp Pro Ile Val Gln His Arg Pro Met
290 295 300
Leu Glu Glu Arg Ile Val Glu Leu Phe Arg Asn Leu Met Lys Ser Ala
305 310 315 320
Phe Val Val Glu Arg Gln Pro Cys Met Pro Met His Pro Asp Arg Pro
325 330 335
Leu Val Ile Lys Thr Gly Val Gln Phe Thr Thr Lys Val Arg Leu Leu
340 345 350
Val Lys Phe Pro Glu Leu Asn Tyr Gln Leu Lys Ile Lys Val Cys Ile
355 360 365
Asp Lys Asp Ser Gly Asp Val Ala Ala Leu Arg Gly Ser Arg Lys Phe
370 375 380
Asn Ile Leu Gly Thr Asn Thr Lys Val Met Asn Met Glu Glu Ser Asn
385 390 395 400
Asn Gly Ser Leu Ser Ala Glu Phe Lys His Leu Thr Leu Arg Glu Gln
405 410 415
Arg Cys Gly Asn Gly Gly Arg Ala Asn Cys Asp Ala Ser Leu Ile Val
420 425 430
Thr Glu Glu Leu His Leu Ile Thr Phe Glu Thr Glu Val Tyr His Gln
435 440 445
Gly Leu Lys Ile Asp Leu Glu Thr His Ser Leu Pro Val Val Val Ile
450 455 460
Ser Asn Ile Cys Gln Met Pro Asn Ala Trp Ala Ser Ile Leu Trp Tyr
465 470 475 480
Asn Met Leu Thr Asn Asn Pro Lys Asn Val Asn Phe Phe Thr Lys Pro
485 490 495
Pro Ile Gly Thr Trp Asp Gln Val Ala Glu Val Leu Ser Trp Gln Phe
500 505 510
Ser Ser Thr Thr Lys Arg Gly Leu Ser Ile Glu Gln Leu Thr Thr Leu
515 520 525
Ala Glu Lys Leu Leu Gly Pro Gly Val Asn Tyr Ser Gly Cys Gln Ile
530 535 540
Thr Trp Ala Lys Phe Cys Lys Glu Asn Met Ala Gly Lys Gly Phe Ser
545 550 555 560
Phe Trp Val Trp Leu Asp Asn Ile Ile Asp Leu Val Lys Lys Tyr Ile
565 570 575
Leu Ala Leu Trp Asn Glu Gly Tyr Ile Met Gly Phe Ile Ser Lys Glu
580 585 590
Arg Glu Arg Ala Ile Leu Ser Thr Lys Pro Pro Gly Thr Phe Leu Leu
595 600 605
Arg Phe Ser Glu Ser Ser Lys Glu Gly Gly Val Thr Phe Thr Trp Val
610 615 620
Glu Lys Asp Ile Ser Gly Lys Thr Gln Ile Gln Ser Val Glu Pro Tyr
625 630 635 640
Thr Lys Gln Gln Leu Asn Asn Met Ser Phe Ala Glu Ile Ile Met Gly
645 650 655
Tyr Lys Ile Met Asp Ala Thr Asn Ile Leu Val Ser Pro Leu Val Tyr
660 665 670
Leu Tyr Pro Asp Ile Pro Lys Glu Glu Ala Phe Gly Lys Tyr Cys Arg
675 680 685
Pro Glu Ser Gln Glu His Pro Glu Ala Asp Pro Gly Ser Ala Ala Pro
690 695 700
Tyr Leu Lys Thr Lys Phe Ile Cys Val Thr Pro Thr Thr Cys Ser Asn
705 710 715 720
Thr Ile Asp Leu Pro Met Ser Pro Arg Thr Leu Asp Ser Leu Met Gln
725 730 735
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740 745 750
Glu Ser Leu Thr Phe Asp Met Glu Leu Thr Ser Glu Cys Ala Thr Ser
755 760 765
Pro Met
770
<210> 73
<211> 246
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 73
Met Glu Leu Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Val Val
1 5 10 15
Gly Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Trp Gly
20 25 30
Asn Asn Arg Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Arg
35 40 45
Leu Leu Met Tyr Tyr Ala Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg
50 55 60
Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp
65 70 75 80
Val Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Gly Phe Glu
85 90 95
Cys Ser Gly Gly Asp Cys Val Gly Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Glu
100 105 110
Ile Leu Gly Gly Ser Ser Arg Ser Ser Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Ala
130 135 140
Pro Gly Gly Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu
145 150 155 160
Ser Ser Asp Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
165 170 175
Glu Trp Ile Gly Thr Ile Tyr Gly Ser Ala Gly Thr Tyr Tyr Ala Thr
180 185 190
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp
195 200 205
Leu Lys Met Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
210 215 220
Thr Arg Ala Phe Ser Asn Thr Arg Leu Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr
225 230 235 240
Leu Val Thr Ile Ser Ser
245
<210> 74
<211> 233
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 74
Met Ser Gln Ser Asn Arg Glu Leu Val Val Asp Phe Leu Ser Tyr Lys
1 5 10 15
Leu Ser Gln Lys Gly Tyr Ser Trp Ser Gln Phe Ser Asp Val Glu Glu
20 25 30
Asn Arg Thr Glu Ala Pro Glu Gly Thr Glu Ser Glu Met Glu Thr Pro
35 40 45
Ser Ala Ile Asn Gly Asn Pro Ser Trp His Leu Ala Asp Ser Pro Ala
50 55 60
Val Asn Gly Ala Thr Gly His Ser Ser Ser Leu Asp Ala Arg Glu Val
65 70 75 80
Ile Pro Met Ala Ala Val Lys Gln Ala Leu Arg Glu Ala Gly Asp Glu
85 90 95
Phe Glu Leu Arg Tyr Arg Arg Ala Phe Ser Asp Leu Thr Ser Gln Leu
100 105 110
His Ile Thr Pro Gly Thr Ala Tyr Gln Ser Phe Glu Gln Val Val Asn
115 120 125
Glu Leu Phe Arg Asp Gly Val Asn Trp Gly Arg Ile Val Ala Phe Phe
130 135 140
Ser Phe Gly Gly Ala Leu Cys Val Glu Ser Val Asp Lys Glu Met Gln
145 150 155 160
Val Leu Val Ser Arg Ile Ala Ala Trp Met Ala Thr Tyr Leu Asn Asp
165 170 175
His Leu Glu Pro Trp Ile Gln Glu Asn Gly Gly Trp Asp Thr Phe Val
180 185 190
Glu Leu Tyr Gly Asn Asn Ala Ala Ala Glu Ser Arg Lys Gly Gln Glu
195 200 205
Arg Phe Asn Arg Trp Phe Leu Thr Gly Met Thr Val Ala Gly Val Val
210 215 220
Leu Leu Gly Ser Leu Phe Ser Arg Lys
225 230
<210> 75
<211> 312
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 75
Met Ala Asn Asn Asp Ala Val Leu Lys Arg Leu Glu Gln Lys Gly Ala
1 5 10 15
Glu Ala Asp Gln Ile Ile Glu Tyr Leu Lys Gln Gln Val Ser Leu Leu
20 25 30
Lys Glu Lys Ala Ile Leu Gln Ala Thr Leu Arg Glu Glu Lys Lys Leu
35 40 45
Arg Val Glu Asn Ala Lys Leu Lys Lys Glu Ile Glu Glu Leu Lys Gln
50 55 60
Glu Leu Ile Gln Ala Glu Ile Gln Asn Gly Val Lys Gln Ile Pro Phe
65 70 75 80
Pro Ser Gly Thr Pro Leu His Ala Asn Ser Met Val Ser Glu Asn Val
85 90 95
Ile Gln Ser Thr Ala Val Thr Thr Val Ser Ser Gly Thr Lys Glu Gln
100 105 110
Ile Lys Gly Gly Thr Gly Asp Glu Lys Lys Ala Lys Glu Lys Ile Glu
115 120 125
Lys Lys Gly Glu Lys Lys Glu Lys Lys Gln Gln Ser Ile Ala Gly Ser
130 135 140
Ala Asp Ser Lys Pro Ile Asp Val Ser Arg Leu Asp Leu Arg Ile Gly
145 150 155 160
Cys Ile Ile Thr Ala Arg Lys His Pro Asp Ala Asp Ser Leu Tyr Val
165 170 175
Glu Glu Val Asp Val Gly Glu Ile Ala Pro Arg Thr Val Val Ser Gly
180 185 190
Leu Val Asn His Val Pro Leu Glu Gln Met Gln Asn Arg Met Val Ile
195 200 205
Leu Leu Cys Asn Leu Lys Pro Ala Lys Met Arg Gly Val Leu Ser Gln
210 215 220
Ala Met Val Met Cys Ala Ser Ser Pro Glu Lys Ile Glu Ile Leu Ala
225 230 235 240
Pro Pro Asn Gly Ser Val Pro Gly Asp Arg Ile Thr Phe Asp Ala Phe
245 250 255
Pro Gly Glu Pro Asp Lys Glu Leu Asn Pro Lys Lys Lys Ile Trp Glu
260 265 270
Gln Ile Gln Pro Asp Leu His Thr Asn Asp Glu Cys Val Ala Thr Tyr
275 280 285
Lys Gly Val Pro Phe Glu Val Lys Gly Lys Gly Val Cys Arg Ala Gln
290 295 300
Thr Met Ser Asn Ser Gly Ile Lys
305 310
<210> 76
<211> 320
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 76
Met Pro Met Tyr Gln Val Lys Pro Tyr His Gly Gly Gly Ala Pro Leu
1 5 10 15
Arg Val Glu Leu Pro Thr Cys Met Tyr Arg Leu Pro Asn Val His Gly
20 25 30
Arg Ser Tyr Gly Pro Ala Pro Gly Ala Gly His Val Gln Glu Glu Ser
35 40 45
Asn Leu Ser Leu Gln Ala Leu Glu Ser Arg Gln Asp Asp Ile Leu Lys
50 55 60
Arg Leu Tyr Glu Leu Lys Ala Ala Val Asp Gly Leu Ser Lys Met Ile
65 70 75 80
Gln Thr Pro Asp Ala Asp Leu Asp Val Thr Asn Ile Ile Gln Ala Asp
85 90 95
Glu Pro Thr Thr Leu Thr Thr Asn Ala Leu Asp Leu Asn Ser Val Leu
100 105 110
Gly Lys Asp Tyr Gly Ala Leu Lys Asp Ile Val Ile Asn Ala Asn Pro
115 120 125
Ala Ser Pro Pro Leu Ser Leu Leu Val Leu His Arg Leu Leu Cys Glu
130 135 140
His Phe Arg Val Leu Ser Thr Val His Thr His Ser Ser Val Lys Ser
145 150 155 160
Val Pro Glu Asn Leu Leu Lys Cys Phe Gly Glu Gln Asn Lys Lys Gln
165 170 175
Pro Arg Gln Asp Tyr Gln Leu Gly Phe Thr Leu Ile Trp Lys Asn Val
180 185 190
Pro Lys Thr Gln Met Lys Phe Ser Ile Gln Thr Met Cys Pro Ile Glu
195 200 205
Gly Glu Gly Asn Ile Ala Arg Phe Leu Phe Ser Leu Phe Gly Gln Lys
210 215 220
His Asn Ala Val Asn Ala Thr Leu Ile Asp Ser Trp Val Asp Ile Ala
225 230 235 240
Ile Phe Gln Leu Lys Glu Gly Ser Ser Lys Glu Lys Ala Ala Val Phe
245 250 255
Arg Ser Met Asn Ser Ala Leu Gly Lys Ser Pro Trp Leu Ala Gly Asn
260 265 270
Glu Leu Thr Val Ala Asp Val Val Leu Trp Ser Val Leu Gln Gln Ile
275 280 285
Gly Gly Cys Ser Val Thr Val Pro Ala Asn Val Gln Arg Trp Met Arg
290 295 300
Ser Cys Glu Asn Leu Ala Pro Phe Asn Thr Ala Leu Lys Leu Leu Lys
305 310 315 320
<210> 77
<211> 233
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 77
Met Val Ser Lys Gly Glu Glu Asp Asn Met Ala Ile Ile Lys Glu Phe
1 5 10 15
Met Arg Phe Lys Val His Met Glu Gly Ser Val Asn Gly His Glu Phe
20 25 30
Glu Ile Glu Gly Glu Gly Glu Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Thr Gln Thr
35 40 45
Ala Lys Leu Lys Val Thr Lys Gly Gly Pro Leu Pro Phe Ala Trp Asp
50 55 60
Ile Leu Ser Pro Gln Phe Met Tyr Gly Ser Lys Ala Tyr Val Lys His
65 70 75 80
Pro Ala Asp Ile Pro Asp Tyr Leu Lys Leu Ser Phe Pro Glu Gly Phe
85 90 95
Lys Trp Glu Arg Val Met Asn Phe Glu Asp Gly Gly Val Val Thr Val
100 105 110
Thr Gln Asp Ser Ser Leu Gln Asp Gly Glu Phe Ile Tyr Lys Val Lys
115 120 125
Leu Arg Gly Thr Asn Phe Pro Ser Asp Gly Pro Val Met Gln Lys Lys
130 135 140
Thr Met Gly Trp Glu Ala Ser Ser Glu Arg Met Tyr Pro Glu Asp Gly
145 150 155 160
Ala Leu Lys Gly Glu Ile Lys Gln Arg Leu Lys Leu Lys Asp Gly Gly
165 170 175
His Tyr Asp Ala Glu Val Lys Thr Thr Tyr Lys Ala Lys Lys Pro Val
180 185 190
Gln Leu Pro Gly Ala Tyr Asn Val Asn Ile Lys Leu Asp Ile Thr Ser
195 200 205
His Asn Glu Asp Tyr Thr Ile Val Glu Gln Tyr Glu Arg Ala Glu Gly
210 215 220
Arg His Ser Thr Gly Gly Met Asp Glu
225 230
<210> 78
<211> 267
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 78
Met Val Ser Lys Gly Glu Glu Leu Phe Thr Gly Val Val Pro Ile Leu
1 5 10 15
Val Glu Leu Asp Gly Asp Val Asn Gly His Lys Phe Ser Val Ser Gly
20 25 30
Glu Gly Glu Gly Asp Ala Thr Tyr Gly Lys Leu Thr Leu Lys Phe Ile
35 40 45
Cys Thr Thr Gly Lys Leu Pro Val Pro Trp Pro Thr Leu Val Thr Thr
50 55 60
Leu Thr Tyr Gly Val Gln Cys Phe Ser Arg Tyr Pro Asp His Met Lys
65 70 75 80
Gln His Asp Phe Phe Lys Ser Ala Met Pro Glu Gly Tyr Val Gln Glu
85 90 95
Arg Thr Ile Phe Phe Lys Asp Asp Gly Asn Tyr Lys Thr Arg Ala Glu
100 105 110
Val Lys Phe Glu Gly Asp Thr Leu Val Asn Arg Ile Glu Leu Lys Gly
115 120 125
Ile Asp Phe Lys Glu Asp Gly Asn Ile Leu Gly His Lys Leu Glu Tyr
130 135 140
Asn Tyr Asn Ser His Asn Val Tyr Ile Met Ala Asp Lys Gln Lys Asn
145 150 155 160
Gly Ile Lys Val Asn Phe Lys Ile Arg His Asn Ile Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Val Gln Leu Ala Asp His Tyr Gln Gln Asn Thr Pro Ile Gly Asp Gly
180 185 190
Pro Val Leu Leu Pro Asp Asn His Tyr Leu Ser Thr Gln Ser Ala Leu
195 200 205
Ser Lys Asp Pro Asn Glu Lys Arg Asp His Met Val Leu Leu Glu Phe
210 215 220
Val Thr Ala Ala Gly Ile Thr Leu Gly Met Asp Glu Leu Tyr Lys Gly
225 230 235 240
Ser Gly Ser Gly Leu Arg Ser Arg Ala Gln Ala Ser Asn Ser Ala Val
245 250 255
Asp Gly Thr Ala Gly Pro Gly Ser Thr Gly Ser
260 265
<210> 79
<211> 425
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 79
Met Ala Asp Lys Glu Ala Ala Phe Asp Asp Ala Val Glu Glu Arg Val
1 5 10 15
Ile Asn Glu Glu Tyr Lys Ile Trp Lys Lys Asn Thr Pro Phe Leu Tyr
20 25 30
Asp Leu Val Met Thr His Ala Leu Glu Trp Pro Ser Leu Thr Ala Gln
35 40 45
Trp Leu Pro Asp Val Thr Arg Pro Glu Gly Lys Asp Phe Ser Ile His
50 55 60
Arg Leu Val Leu Gly Thr His Thr Ser Asp Glu Gln Asn His Leu Val
65 70 75 80
Ile Ala Ser Val Gln Leu Pro Asn Asp Asp Ala Gln Phe Asp Ala Ser
85 90 95
His Tyr Asp Ser Glu Lys Gly Glu Phe Gly Gly Phe Gly Ser Val Ser
100 105 110
Gly Lys Ile Glu Ile Glu Ile Lys Ile Asn His Glu Gly Glu Val Asn
115 120 125
Arg Ala Arg Tyr Met Pro Gln Asn Pro Cys Ile Ile Ala Thr Lys Thr
130 135 140
Pro Ser Ser Asp Val Leu Val Phe Asp Tyr Thr Lys His Pro Ser Lys
145 150 155 160
Pro Asp Pro Ser Gly Glu Cys Asn Pro Asp Leu Arg Leu Arg Gly His
165 170 175
Gln Lys Glu Gly Tyr Gly Leu Ser Trp Asn Pro Asn Leu Ser Gly His
180 185 190
Leu Leu Ser Ala Ser Asp Asp His Thr Ile Cys Leu Trp Asp Ile Ser
195 200 205
Ala Val Pro Lys Glu Gly Lys Val Val Asp Ala Lys Thr Ile Phe Thr
210 215 220
Gly His Thr Ala Val Val Glu Asp Val Ser Trp His Leu Leu His Glu
225 230 235 240
Ser Leu Phe Gly Ser Val Ala Asp Asp Gln Lys Leu Met Ile Trp Asp
245 250 255
Thr Arg Ser Asn Asn Thr Ser Lys Pro Ser His Ser Val Asp Ala His
260 265 270
Thr Ala Glu Val Asn Cys Leu Ser Phe Asn Pro Tyr Ser Glu Phe Ile
275 280 285
Leu Ala Thr Gly Ser Ala Asp Lys Thr Val Ala Leu Trp Asp Leu Arg
290 295 300
Asn Leu Lys Leu Lys Leu His Ser Phe Glu Ser His Lys Asp Glu Ile
305 310 315 320
Phe Gln Val Gln Trp Ser Pro His Asn Glu Thr Ile Leu Ala Ser Ser
325 330 335
Gly Thr Asp Arg Arg Leu Asn Val Trp Asp Leu Ser Lys Ile Gly Glu
340 345 350
Glu Gln Ser Pro Glu Asp Ala Glu Asp Gly Pro Pro Glu Leu Leu Phe
355 360 365
Ile His Gly Gly His Thr Ala Lys Ile Ser Asp Phe Ser Trp Asn Pro
370 375 380
Asn Glu Pro Trp Val Ile Cys Ser Val Ser Glu Asp Asn Ile Met Gln
385 390 395 400
Val Trp Gln Met Ala Glu Asn Ile Tyr Asn Asp Glu Asp Pro Glu Gly
405 410 415
Ser Val Asp Pro Glu Gly Gln Gly Ser
420 425
<210> 80
<211> 375
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 80
Met Ala Asp His Ser Phe Ser Asp Gly Val Pro Ser Asp Ser Val Glu
1 5 10 15
Ala Ala Lys Asn Ala Ser Asn Thr Glu Lys Leu Thr Asp Gln Val Met
20 25 30
Gln Asn Pro Arg Val Leu Ala Ala Leu Gln Glu Arg Leu Asp Asn Val
35 40 45
Pro His Thr Pro Ser Ser Tyr Ile Glu Thr Leu Pro Lys Ala Val Lys
50 55 60
Arg Arg Ile Asn Ala Leu Lys Gln Leu Gln Val Arg Cys Ala His Ile
65 70 75 80
Glu Ala Lys Phe Tyr Glu Glu Val His Asp Leu Glu Arg Lys Tyr Ala
85 90 95
Ala Leu Tyr Gln Pro Leu Phe Asp Lys Arg Arg Glu Phe Ile Thr Gly
100 105 110
Asp Val Glu Pro Thr Asp Ala Glu Ser Glu Trp His Ser Glu Asn Glu
115 120 125
Glu Glu Glu Lys Leu Ala Gly Asp Met Lys Ser Lys Val Val Val Thr
130 135 140
Glu Lys Ala Ala Ala Thr Ala Glu Glu Pro Asp Pro Lys Gly Ile Pro
145 150 155 160
Glu Phe Trp Phe Thr Ile Phe Arg Asn Val Asp Met Leu Ser Glu Leu
165 170 175
Val Gln Glu Tyr Asp Glu Pro Ile Leu Lys His Leu Gln Asp Ile Lys
180 185 190
Val Lys Phe Ser Asp Pro Gly Gln Pro Met Ser Phe Val Leu Glu Phe
195 200 205
His Phe Glu Pro Asn Asp Tyr Phe Thr Asn Ser Val Leu Thr Lys Thr
210 215 220
Tyr Lys Met Lys Ser Glu Pro Asp Lys Ala Asp Pro Phe Ser Phe Glu
225 230 235 240
Gly Pro Glu Ile Val Asp Cys Asp Gly Cys Thr Ile Asp Trp Lys Lys
245 250 255
Gly Lys Asn Val Thr Val Lys Thr Ile Lys Lys Lys Gln Lys His Lys
260 265 270
Gly Arg Gly Thr Val Arg Thr Ile Thr Lys Gln Val Pro Asn Glu Ser
275 280 285
Phe Phe Asn Phe Phe Asn Pro Leu Lys Ala Ser Gly Asp Gly Glu Ser
290 295 300
Leu Asp Glu Asp Ser Glu Phe Thr Leu Ala Ser Asp Phe Glu Ile Gly
305 310 315 320
His Phe Phe Arg Glu Arg Ile Val Pro Arg Ala Val Leu Tyr Phe Thr
325 330 335
Gly Glu Ala Ile Glu Asp Asp Asp Asn Phe Glu Glu Gly Glu Glu Gly
340 345 350
Glu Glu Glu Glu Leu Glu Gly Asp Glu Glu Gly Glu Asp Glu Asp Asp
355 360 365
Ala Glu Ile Asn Pro Lys Val
370 375
<210> 81
<211> 1132
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 81
Met Pro Arg Ala Pro Arg Cys Arg Ala Val Arg Ser Leu Leu Arg Ser
1 5 10 15
His Tyr Arg Glu Val Leu Pro Leu Ala Thr Phe Val Arg Arg Leu Gly
20 25 30
Pro Gln Gly Trp Arg Leu Val Gln Arg Gly Asp Pro Ala Ala Phe Arg
35 40 45
Ala Leu Val Ala Gln Cys Leu Val Cys Val Pro Trp Asp Ala Arg Pro
50 55 60
Pro Pro Ala Ala Pro Ser Phe Arg Gln Val Ser Cys Leu Lys Glu Leu
65 70 75 80
Val Ala Arg Val Leu Gln Arg Leu Cys Glu Arg Gly Ala Lys Asn Val
85 90 95
Leu Ala Phe Gly Phe Ala Leu Leu Asp Gly Ala Arg Gly Gly Pro Pro
100 105 110
Glu Ala Phe Thr Thr Ser Val Arg Ser Tyr Leu Pro Asn Thr Val Thr
115 120 125
Asp Ala Leu Arg Gly Ser Gly Ala Trp Gly Leu Leu Leu Arg Arg Val
130 135 140
Gly Asp Asp Val Leu Val His Leu Leu Ala Arg Cys Ala Leu Phe Val
145 150 155 160
Leu Val Ala Pro Ser Cys Ala Tyr Gln Val Cys Gly Pro Pro Leu Tyr
165 170 175
Gln Leu Gly Ala Ala Thr Gln Ala Arg Pro Pro Pro His Ala Ser Gly
180 185 190
Pro Arg Arg Arg Leu Gly Cys Glu Arg Ala Trp Asn His Ser Val Arg
195 200 205
Glu Ala Gly Val Pro Leu Gly Leu Pro Ala Pro Gly Ala Arg Arg Arg
210 215 220
Gly Gly Ser Ala Ser Arg Ser Leu Pro Leu Pro Lys Arg Pro Arg Arg
225 230 235 240
Gly Ala Ala Pro Glu Pro Glu Arg Thr Pro Val Gly Gln Gly Ser Trp
245 250 255
Ala His Pro Gly Arg Thr Arg Gly Pro Ser Asp Arg Gly Phe Cys Val
260 265 270
Val Ser Pro Ala Arg Pro Ala Glu Glu Ala Thr Ser Leu Glu Gly Ala
275 280 285
Leu Ser Gly Thr Arg His Ser His Pro Ser Val Gly Arg Gln His His
290 295 300
Ala Gly Pro Pro Ser Thr Ser Arg Pro Pro Arg Pro Trp Asp Thr Pro
305 310 315 320
Cys Pro Pro Val Tyr Ala Glu Thr Lys His Phe Leu Tyr Ser Ser Gly
325 330 335
Asp Lys Glu Gln Leu Arg Pro Ser Phe Leu Leu Ser Ser Leu Arg Pro
340 345 350
Ser Leu Thr Gly Ala Arg Arg Leu Val Glu Thr Ile Phe Leu Gly Ser
355 360 365
Arg Pro Trp Met Pro Gly Thr Pro Arg Arg Leu Pro Arg Leu Pro Gln
370 375 380
Arg Tyr Trp Gln Met Arg Pro Leu Phe Leu Glu Leu Leu Gly Asn His
385 390 395 400
Ala Gln Cys Pro Tyr Gly Val Leu Leu Lys Thr His Cys Pro Leu Arg
405 410 415
Ala Ala Val Thr Pro Ala Ala Gly Val Cys Ala Arg Glu Lys Pro Gln
420 425 430
Gly Ser Val Ala Ala Pro Glu Glu Glu Asp Thr Asp Pro Arg Arg Leu
435 440 445
Val Gln Leu Leu Arg Gln His Ser Ser Pro Trp Gln Val Tyr Gly Phe
450 455 460
Val Arg Ala Cys Leu Arg Arg Leu Val Pro Pro Gly Leu Trp Gly Ser
465 470 475 480
Arg His Asn Glu Arg Arg Phe Leu Arg Asn Thr Lys Lys Phe Ile Ser
485 490 495
Leu Gly Lys His Ala Lys Leu Ser Leu Gln Glu Leu Thr Trp Lys Met
500 505 510
Ser Val Arg Asp Cys Ala Trp Leu Arg Arg Ser Pro Gly Val Gly Cys
515 520 525
Val Pro Ala Ala Glu His Arg Leu Arg Glu Glu Ile Leu Ala Lys Phe
530 535 540
Leu His Trp Leu Met Ser Val Tyr Val Val Glu Leu Leu Arg Ser Phe
545 550 555 560
Phe Tyr Val Thr Glu Thr Thr Phe Gln Lys Asn Arg Leu Phe Phe Tyr
565 570 575
Arg Lys Ser Val Trp Ser Lys Leu Gln Ser Ile Gly Ile Arg Gln His
580 585 590
Leu Lys Arg Val Gln Leu Arg Glu Leu Ser Glu Ala Glu Val Arg Gln
595 600 605
His Arg Glu Ala Arg Pro Ala Leu Leu Thr Ser Arg Leu Arg Phe Ile
610 615 620
Pro Lys Pro Asp Gly Leu Arg Pro Ile Val Asn Met Asp Tyr Val Val
625 630 635 640
Gly Ala Arg Thr Phe Arg Arg Glu Lys Arg Ala Glu Arg Leu Thr Ser
645 650 655
Arg Val Lys Ala Leu Phe Ser Val Leu Asn Tyr Glu Arg Ala Arg Arg
660 665 670
Pro Gly Leu Leu Gly Ala Ser Val Leu Gly Leu Asp Asp Ile His Arg
675 680 685
Ala Trp Arg Thr Phe Val Leu Arg Val Arg Ala Gln Asp Pro Pro Pro
690 695 700
Glu Leu Tyr Phe Val Lys Val Asp Val Thr Gly Ala Tyr Asp Thr Ile
705 710 715 720
Pro Gln Asp Arg Leu Thr Glu Val Ile Ala Ser Ile Ile Lys Pro Gln
725 730 735
Asn Thr Tyr Cys Val Arg Arg Tyr Ala Val Val Gln Lys Ala Ala His
740 745 750
Gly His Val Arg Lys Ala Phe Lys Ser His Val Ser Thr Leu Thr Asp
755 760 765
Leu Gln Pro Tyr Met Arg Gln Phe Val Ala His Leu Gln Glu Thr Ser
770 775 780
Pro Leu Arg Asp Ala Val Val Ile Glu Gln Ser Ser Ser Leu Asn Glu
785 790 795 800
Ala Ser Ser Gly Leu Phe Asp Val Phe Leu Arg Phe Met Cys His His
805 810 815
Ala Val Arg Ile Arg Gly Lys Ser Tyr Val Gln Cys Gln Gly Ile Pro
820 825 830
Gln Gly Ser Ile Leu Ser Thr Leu Leu Cys Ser Leu Cys Tyr Gly Asp
835 840 845
Met Glu Asn Lys Leu Phe Ala Gly Ile Arg Arg Asp Gly Leu Leu Leu
850 855 860
Arg Leu Val Asp Asp Phe Leu Leu Val Thr Pro His Leu Thr His Ala
865 870 875 880
Lys Thr Phe Leu Arg Thr Leu Val Arg Gly Val Pro Glu Tyr Gly Cys
885 890 895
Val Val Asn Leu Arg Lys Thr Val Val Asn Phe Pro Val Glu Asp Glu
900 905 910
Ala Leu Gly Gly Thr Ala Phe Val Gln Met Pro Ala His Gly Leu Phe
915 920 925
Pro Trp Cys Gly Leu Leu Leu Asp Thr Arg Thr Leu Glu Val Gln Ser
930 935 940
Asp Tyr Ser Ser Tyr Ala Arg Thr Ser Ile Arg Ala Ser Leu Thr Phe
945 950 955 960
Asn Arg Gly Phe Lys Ala Gly Arg Asn Met Arg Arg Lys Leu Phe Gly
965 970 975
Val Leu Arg Leu Lys Cys His Ser Leu Phe Leu Asp Leu Gln Val Asn
980 985 990
Ser Leu Gln Thr Val Cys Thr Asn Ile Tyr Lys Ile Leu Leu Leu Gln
995 1000 1005
Ala Tyr Arg Phe His Ala Cys Val Leu Gln Leu Pro Phe His Gln Gln
1010 1015 1020
Val Trp Lys Asn Pro Thr Phe Phe Leu Arg Val Ile Ser Asp Thr Ala
1025 1030 1035 1040
Ser Leu Cys Tyr Ser Ile Leu Lys Ala Lys Asn Ala Gly Met Ser Leu
1045 1050 1055
Gly Ala Lys Gly Ala Ala Gly Pro Leu Pro Ser Glu Ala Val Gln Trp
1060 1065 1070
Leu Cys His Gln Ala Phe Leu Leu Lys Leu Thr Arg His Arg Val Thr
1075 1080 1085
Tyr Val Pro Leu Leu Gly Ser Leu Arg Thr Ala Gln Thr Gln Leu Ser
1090 1095 1100
Arg Lys Leu Pro Gly Thr Thr Leu Thr Ala Leu Glu Ala Ala Ala Asn
1105 1110 1115 1120
Pro Ala Leu Pro Ser Asp Phe Lys Thr Ile Leu Asp
1125 1130
<210> 82
<211> 462
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 82
Met Glu Thr Glu Gln Pro Glu Glu Thr Phe Pro Asn Thr Glu Thr Asn
1 5 10 15
Gly Glu Phe Gly Lys Arg Pro Ala Glu Asp Met Glu Glu Glu Gln Ala
20 25 30
Phe Lys Arg Ser Arg Asn Thr Asp Glu Met Val Glu Leu Arg Ile Leu
35 40 45
Leu Gln Ser Lys Asn Ala Gly Ala Val Ile Gly Lys Gly Gly Lys Asn
50 55 60
Ile Lys Ala Leu Arg Thr Asp Tyr Asn Ala Ser Val Ser Val Pro Asp
65 70 75 80
Ser Ser Gly Pro Glu Arg Ile Leu Ser Ile Ser Ala Asp Ile Glu Thr
85 90 95
Ile Gly Glu Ile Leu Lys Lys Ile Ile Pro Thr Leu Glu Glu Gly Leu
100 105 110
Gln Leu Pro Ser Pro Thr Ala Thr Ser Gln Leu Pro Leu Glu Ser Asp
115 120 125
Ala Val Glu Cys Leu Asn Tyr Gln His Tyr Lys Gly Ser Asp Phe Asp
130 135 140
Cys Glu Leu Arg Leu Leu Ile His Gln Ser Leu Ala Gly Gly Ile Ile
145 150 155 160
Gly Val Lys Gly Ala Lys Ile Lys Glu Leu Arg Glu Asn Thr Gln Thr
165 170 175
Thr Ile Lys Leu Phe Gln Glu Cys Cys Pro His Ser Thr Asp Arg Val
180 185 190
Val Leu Ile Gly Gly Lys Pro Asp Arg Val Val Glu Cys Ile Lys Ile
195 200 205
Ile Leu Asp Leu Ile Ser Glu Ser Pro Ile Lys Gly Arg Ala Gln Pro
210 215 220
Tyr Asp Pro Asn Phe Tyr Asp Glu Thr Tyr Asp Tyr Gly Gly Phe Thr
225 230 235 240
Met Met Phe Asp Asp Arg Arg Gly Arg Pro Val Gly Phe Pro Met Arg
245 250 255
Gly Arg Gly Gly Phe Asp Arg Met Pro Pro Gly Arg Gly Gly Arg Pro
260 265 270
Met Pro Pro Ser Arg Arg Asp Tyr Asp Asp Met Ser Pro Arg Arg Gly
275 280 285
Pro Pro Pro Pro Pro Pro Gly Arg Gly Gly Arg Gly Gly Ser Arg Ala
290 295 300
Arg Asn Leu Pro Leu Pro Pro Pro Pro Pro Pro Arg Gly Gly Asp Leu
305 310 315 320
Met Ala Tyr Asp Arg Arg Gly Arg Pro Gly Asp Arg Tyr Asp Gly Met
325 330 335
Val Gly Phe Ser Ala Asp Glu Thr Trp Asp Ser Ala Ile Asp Thr Trp
340 345 350
Ser Pro Ser Glu Trp Gln Met Ala Tyr Glu Pro Gln Gly Gly Ser Gly
355 360 365
Tyr Asp Tyr Ser Tyr Ala Gly Gly Arg Gly Ser Tyr Gly Asp Leu Gly
370 375 380
Gly Pro Ile Ile Thr Thr Gln Val Thr Ile Pro Lys Asp Leu Ala Gly
385 390 395 400
Ser Ile Ile Gly Lys Gly Gly Gln Arg Ile Lys Gln Ile Arg His Glu
405 410 415
Ser Gly Ala Ser Ile Lys Ile Asp Glu Pro Leu Glu Gly Ser Glu Asp
420 425 430
Arg Ile Ile Thr Ile Thr Gly Thr Gln Asp Gln Ile Gln Asn Ala Gln
435 440 445
Tyr Leu Leu Gln Asn Ser Val Lys Gln Tyr Ser Gly Lys Phe
450 455 460
<210> 83
<211> 745
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 83
Met Glu Arg Pro Pro Gly Leu Arg Pro Gly Ala Gly Gly Pro Trp Glu
1 5 10 15
Met Arg Glu Arg Leu Gly Thr Gly Gly Phe Gly Asn Val Cys Leu Tyr
20 25 30
Gln His Arg Glu Leu Asp Leu Lys Ile Ala Ile Lys Ser Cys Arg Leu
35 40 45
Glu Leu Ser Thr Lys Asn Arg Glu Arg Trp Cys His Glu Ile Gln Ile
50 55 60
Met Lys Lys Leu Asn His Ala Asn Val Val Lys Ala Cys Asp Val Pro
65 70 75 80
Glu Glu Leu Asn Ile Leu Ile His Asp Val Pro Leu Leu Ala Met Glu
85 90 95
Tyr Cys Ser Gly Gly Asp Leu Arg Lys Leu Leu Asn Lys Pro Glu Asn
100 105 110
Cys Cys Gly Leu Lys Glu Ser Gln Ile Leu Ser Leu Leu Ser Asp Ile
115 120 125
Gly Ser Gly Ile Arg Tyr Leu His Glu Asn Lys Ile Ile His Arg Asp
130 135 140
Leu Lys Pro Glu Asn Ile Val Leu Gln Asp Val Gly Gly Lys Ile Ile
145 150 155 160
His Lys Ile Ile Asp Leu Gly Tyr Ala Lys Asp Val Asp Gln Gly Ser
165 170 175
Leu Cys Thr Ser Phe Val Gly Thr Leu Gln Tyr Leu Ala Pro Glu Leu
180 185 190
Phe Glu Asn Lys Pro Tyr Thr Ala Thr Val Asp Tyr Trp Ser Phe Gly
195 200 205
Thr Met Val Phe Glu Cys Ile Ala Gly Tyr Arg Pro Phe Leu His His
210 215 220
Leu Gln Pro Phe Thr Trp His Glu Lys Ile Lys Lys Lys Asp Pro Lys
225 230 235 240
Cys Ile Phe Ala Cys Glu Glu Met Ser Gly Glu Val Arg Phe Ser Ser
245 250 255
His Leu Pro Gln Pro Asn Ser Leu Cys Ser Leu Val Val Glu Pro Met
260 265 270
Glu Asn Trp Leu Gln Leu Met Leu Asn Trp Asp Pro Gln Gln Arg Gly
275 280 285
Gly Pro Val Asp Leu Thr Leu Lys Gln Pro Arg Cys Phe Val Leu Met
290 295 300
Asp His Ile Leu Asn Leu Lys Ile Val His Ile Leu Asn Met Thr Ser
305 310 315 320
Ala Lys Ile Ile Ser Phe Leu Leu Pro Pro Asp Glu Ser Leu His Ser
325 330 335
Leu Gln Ser Arg Ile Glu Arg Glu Thr Gly Ile Asn Thr Gly Ser Gln
340 345 350
Glu Leu Leu Ser Glu Thr Gly Ile Ser Leu Asp Pro Arg Lys Pro Ala
355 360 365
Ser Gln Cys Val Leu Asp Gly Val Arg Gly Cys Asp Ser Tyr Met Val
370 375 380
Tyr Leu Phe Asp Lys Ser Lys Thr Val Tyr Glu Gly Pro Phe Ala Ser
385 390 395 400
Arg Ser Leu Ser Asp Cys Val Asn Tyr Ile Val Gln Asp Ser Lys Ile
405 410 415
Gln Leu Pro Ile Ile Gln Leu Arg Lys Val Trp Ala Glu Ala Val His
420 425 430
Tyr Val Ser Gly Leu Lys Glu Asp Tyr Ser Arg Leu Phe Gln Gly Gln
435 440 445
Arg Ala Ala Met Leu Ser Leu Leu Arg Tyr Asn Ala Asn Leu Thr Lys
450 455 460
Met Lys Asn Thr Leu Ile Ser Ala Ser Gln Gln Leu Lys Ala Lys Leu
465 470 475 480
Glu Phe Phe His Lys Ser Ile Gln Leu Asp Leu Glu Arg Tyr Ser Glu
485 490 495
Gln Met Thr Tyr Gly Ile Ser Ser Glu Lys Met Leu Lys Ala Trp Lys
500 505 510
Glu Met Glu Glu Lys Ala Ile His Tyr Ala Glu Val Gly Val Ile Gly
515 520 525
Tyr Leu Glu Asp Gln Ile Met Ser Leu His Ala Glu Ile Met Glu Leu
530 535 540
Gln Lys Ser Pro Tyr Gly Arg Arg Gln Gly Asp Leu Met Glu Ser Leu
545 550 555 560
Glu Gln Arg Ala Ile Asp Leu Tyr Lys Gln Leu Lys His Arg Pro Ser
565 570 575
Asp His Ser Tyr Ser Asp Ser Thr Glu Met Val Lys Ile Ile Val His
580 585 590
Thr Val Gln Ser Gln Asp Arg Val Leu Lys Glu Leu Phe Gly His Leu
595 600 605
Ser Lys Leu Leu Gly Cys Lys Gln Lys Ile Ile Asp Leu Leu Pro Lys
610 615 620
Val Glu Val Ala Leu Ser Asn Ile Lys Glu Ala Asp Asn Thr Val Met
625 630 635 640
Phe Met Gln Gly Lys Arg Gln Lys Glu Ile Trp His Leu Leu Lys Ile
645 650 655
Ala Cys Thr Gln Ser Ser Ala Arg Ser Leu Val Gly Ser Ser Leu Glu
660 665 670
Gly Ala Val Thr Pro Gln Thr Ser Ala Trp Leu Pro Pro Thr Ser Ala
675 680 685
Glu His Asp His Ser Leu Ser Cys Val Val Thr Pro Gln Asp Gly Glu
690 695 700
Thr Ser Ala Gln Met Ile Glu Glu Asn Leu Asn Cys Leu Gly His Leu
705 710 715 720
Ser Thr Ile Ile His Glu Ala Asn Glu Glu Gln Gly Asn Ser Met Met
725 730 735
Asn Leu Asp Trp Ser Trp Leu Thr Glu
740 745
<210> 84
<211> 968
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 84
Met Ala Glu Asp Asp Pro Tyr Leu Gly Arg Pro Glu Gln Met Phe His
1 5 10 15
Leu Asp Pro Ser Leu Thr His Thr Ile Phe Asn Pro Glu Val Phe Gln
20 25 30
Pro Gln Met Ala Leu Pro Thr Asp Gly Pro Tyr Leu Gln Ile Leu Glu
35 40 45
Gln Pro Lys Gln Arg Gly Phe Arg Phe Arg Tyr Val Cys Glu Gly Pro
50 55 60
Ser His Gly Gly Leu Pro Gly Ala Ser Ser Glu Lys Asn Lys Lys Ser
65 70 75 80
Tyr Pro Gln Val Lys Ile Cys Asn Tyr Val Gly Pro Ala Lys Val Ile
85 90 95
Val Gln Leu Val Thr Asn Gly Lys Asn Ile His Leu His Ala His Ser
100 105 110
Leu Val Gly Lys His Cys Glu Asp Gly Ile Cys Thr Val Thr Ala Gly
115 120 125
Pro Lys Asp Met Val Val Gly Phe Ala Asn Leu Gly Ile Leu His Val
130 135 140
Thr Lys Lys Lys Val Phe Glu Thr Leu Glu Ala Arg Met Thr Glu Ala
145 150 155 160
Cys Ile Arg Gly Tyr Asn Pro Gly Leu Leu Val His Pro Asp Leu Ala
165 170 175
Tyr Leu Gln Ala Glu Gly Gly Gly Asp Arg Gln Leu Gly Asp Arg Glu
180 185 190
Lys Glu Leu Ile Arg Gln Ala Ala Leu Gln Gln Thr Lys Glu Met Asp
195 200 205
Leu Ser Val Val Arg Leu Met Phe Thr Ala Phe Leu Pro Asp Ser Thr
210 215 220
Gly Ser Phe Thr Arg Arg Leu Glu Pro Val Val Ser Asp Ala Ile Tyr
225 230 235 240
Asp Ser Lys Ala Pro Asn Ala Ser Asn Leu Lys Ile Val Arg Met Asp
245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
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290 295 300
Val His Arg Gln Phe Ala Ile Val Phe Lys Thr Pro Lys Tyr Lys Asp
305 310 315 320
Ile Asn Ile Thr Lys Pro Ala Ser Val Phe Val Gln Leu Arg Arg Lys
325 330 335
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340 345 350
Ile Lys Asp Lys Glu Glu Val Gln Arg Lys Arg Gln Lys Leu Met Pro
355 360 365
Asn Phe Ser Asp Ser Phe Gly Gly Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Gly
370 375 380
Gly Gly Met Phe Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly Gly Thr Gly Ser Thr
385 390 395 400
Gly Pro Gly Tyr Ser Phe Pro His Tyr Gly Phe Pro Thr Tyr Gly Gly
405 410 415
Ile Thr Phe His Pro Gly Thr Thr Lys Ser Asn Ala Gly Met Lys His
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Gly Thr Met Asp Thr Glu Ser Lys Lys Asp Pro Glu Gly Cys Asp Lys
435 440 445
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Val Thr Leu Thr Tyr Ala Thr Gly Thr Lys Glu Glu Ser Ala Gly Val
485 490 495
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Ala Asn Ala Leu Phe Asp Tyr Ala Val Thr Gly Asp Val Lys Met Leu
515 520 525
Leu Ala Val Gln Arg His Leu Thr Ala Val Gln Asp Glu Asn Gly Asp
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Ser Val Leu His Leu Ala Ile Ile His Leu His Ser Gln Leu Val Arg
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Asp Leu Leu Glu Val Thr Ser Gly Leu Ile Ser Asp Asp Ile Ile Asn
565 570 575
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580 585 590
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595 600 605
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Glu Gly His Asp Lys Val Leu Ser Ile Leu Leu Lys His Lys Lys Ala
625 630 635 640
Ala Leu Leu Leu Asp His Pro Asn Gly Asp Gly Leu Asn Ala Ile His
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Leu Ala Met Met Ser Asn Ser Leu Pro Cys Leu Leu Leu Leu Val Ala
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Ala Gly Ala Asp Val Asn Ala Gln Glu Gln Lys Ser Gly Arg Thr Ala
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Leu Leu Lys Ala Ala Gly Ala Asp Pro Leu Val Glu Asn Phe Glu Pro
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Leu Tyr Asp Leu Asp Asp Ser Trp Glu Asn Ala Gly Glu Asp Glu Gly
755 760 765
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Asp Leu Leu Ala Gln Gly Asp Met Lys Gln Leu Ala Glu Asp Val Lys
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Leu Gln Leu Tyr Lys Leu Leu Glu Ile Pro Asp Pro Asp Lys Asn Trp
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900 905 910
Gln Gln Ile Asp Glu Leu Arg Asp Ser Asp Ser Val Cys Asp Ser Gly
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Val Glu Thr Ser Phe Arg Lys Leu Ser Phe Thr Glu Ser Leu Thr Ser
930 935 940
Gly Ala Ser Leu Leu Thr Leu Asn Lys Met Pro His Asp Tyr Gly Gln
945 950 955 960
Glu Gly Pro Leu Glu Gly Lys Ile
965

Claims (21)

1.一种用于大量产生在膜上包含货物蛋白的外泌体的方法，包括以下步骤：
a)通过在外泌体产生细胞中导入编码由外泌体特异性标记物和货物蛋白组成的融合蛋白的多核苷酸来制备转化细胞；
b)培养步骤a)的所述的转化细胞；以及
c)将所述货物蛋白分离到外泌体膜内侧。
2.根据权利要求1所述的用于大量产生包含货物蛋白的外泌体的方法，其中，所述货物蛋白是抑制NF-κB的超阻遏物IκB蛋白、Bax(Bcl-2相关X蛋白)、过氧化物氧化还原酶I、过氧化物氧化还原酶II、cre重组酶、Cas9(CRISPR相关蛋白9)、Cpf1(来自普雷沃菌属和弗朗西斯氏菌属的CRISPR 1)或GBA(β-葡糖脑苷脂酶)。
3.根据权利要求1所述的用于大量产生外泌体的方法，其中，所述外泌体产生细胞是选自由B淋巴细胞、T淋巴细胞、树突状细胞、巨核细胞、巨噬细胞、干细胞和肿瘤细胞组成的组的一个或多个细胞。
4.根据权利要求1所述的用于大量产生外泌体的方法，其中，所述外泌体特异性标记物是CD9、CD63、CD81或CD82。
5.一种用于大量产生包含货物蛋白的外泌体的方法，包括以下步骤：
(a)在外泌体产生细胞中导入编码融合蛋白(融合蛋白I)的多核苷酸和编码融合蛋白(融合蛋白II)的多核苷酸，所述融合蛋白I由外泌体特异性标记物和第一光特异性结合蛋白组成，所述融合蛋白II由货物蛋白和能够与所述第一光特异性结合蛋白连接的第二光特异性结合蛋白组成；
(b)用能够引起所述第一光特异性结合蛋白和所述第二光特异性结合蛋白之间缀合的光照射所述外泌体产生细胞；以及
(c)在所述外泌体产生细胞中完成生产外泌体后终止所述照射。
6.根据权利要求5所述的用于大量产生包含货物蛋白的外泌体的方法，其中，所述第一光特异性结合蛋白是选自由CIB(隐花色素相互作用碱性螺旋-环-螺旋蛋白)、CIBN(CIB的N末端结构域)、PhyB(光敏色素B)、PIF(光敏色素相互作用因子)、FKF1(黄素结合、Kelch重复、Fbox 1)、GIGANTEA、CRY(隐花色素)和PHR(光裂合酶同源区域)组成的组的一种或多种蛋白。
7.根据权利要求5所述的用于大量产生包含货物蛋白的外泌体的方法，其中，当所述第一光特异性结合蛋白为CIB或CIBN时，所述第二光特异性结合蛋白为CRY或PHR，并且所述第一光特异性结合蛋白与所述第二光特异性结合蛋白的结合通过用波长为460～490nm的光照射来实现。
8.根据权利要求5所述的用于大量产生包含货物蛋白的外泌体的方法，其中，当所述第一光特异性结合蛋白为PhyB时，所述第二光特异性结合蛋白为PIF，并且所述第一光特异性结合蛋白与所述第二光特异性结合蛋白的结合通过用波长为600～650nm的光照射来实现。
9.根据权利要求5所述的用于大量产生包含货物蛋白的外泌体的方法，其中，当所述第一光特异性结合蛋白为GIGANTEA时，所述第二光特异性结合蛋白为FKF1，并且所述第一光特异性结合蛋白与所述第二光特异性结合蛋白的结合通过用波长为460～490nm的光照射来实现。
10.根据权利要求5所述的用于大量产生包含货物蛋白的外泌体的方法，其中，所述货物蛋白是抑制NF-κB的超阻遏物IκB蛋白、Bax(Bcl-2相关的X蛋白)、过氧化物氧化还原酶I、过氧化物氧化还原酶II、cre重组酶、Cas9(CRISPR相关蛋白9)、Cpf1(来自普雷沃菌属和弗朗西斯氏菌属的CRISPR 1)或GBA(β-葡糖脑苷脂酶)。
11.使用由根据权利要求1或权利要求5所述的方法制备的外泌体将蛋白药物递送至胞质溶胶的方法。
12.用于将作为活性成分的由根据权利要求1或权利要求5所述的方法制备的包含蛋白药物的外泌体递送至胞质溶胶的药物组合物。
13.一种用于产生外泌体的载体，包括：
(a)第一表达载体，包含编码外泌体特异性标记物和第一光特异性结合蛋白的融合蛋白(第一融合蛋白)的多核苷酸；以及
(b)第二表达载体，包含多克隆位点和编码将与上文所述第一光特异性结合蛋白结合的第二光特异性结合蛋白的多核苷酸，编码货物蛋白的多核苷酸能够被导入至所述多克隆位点。
14.根据权利要求13所述的用于产生外泌体的载体，其中，所述第二表达载体将在外泌体生产细胞中表达由所述第二光特异性结合蛋白和所述货物蛋白组成的融合蛋白(第二融合蛋白)。
15.由根据权利要求1或权利要求5所述的方法制备的包含货物蛋白的外泌体。
16.一种用于产生靶基因的条件敲除等位基因的组合物，包括由权利要求1或权利要求5所述的方法制备的包含Cre重组酶的外泌体作为活性成分。
17.一种操纵DNA序列的组合物，包含由根据权利要求1或权利要求5所述的方法制备的包含Cas9和Cpf1蛋白的外泌体以及对靶DNA序列特异的引导RNA。
18.一种用于治疗或预防戈谢病的方法，包括将药学有效剂量的由根据权利要求1或权利要求5所述的方法制备的包含β-葡糖脑苷脂酶的外泌体作为活性成分给药的步骤。
19.一种用于治疗或预防活性氧相关疾病的方法，包括将药学有效剂量的由根据权利要求1或权利要求5所述的方法制备的包含过氧化物氧化还原酶I或过氧化物氧化还原酶II的外泌体作为活性成分给药的步骤。
20.一种用于治疗或预防炎症性疾病的方法，包括将药学有效剂量的由根据权利要求1或权利要求5所述的方法制备的包含超阻遏物IκB蛋白的外泌体作为活性成分给药的步骤。
21.一种用于治疗或预防癌症的方法，包括将药学有效剂量的由根据权利要求1或权利要求5所述的方法制备的包含Bax(Bcl-2相关的X蛋白)蛋白的外泌体作为活性成分给药的步骤。
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