CN107595884A

CN107595884A - 一种头部毛囊血管内皮细胞生长因子促进剂

Info

Publication number: CN107595884A
Application number: CN201710928279.3A
Authority: CN
Inventors: 王春儒; 李慧; 付笑彦
Original assignee: Beijing Fullcan Biotechnology Co ltd; Institute of Chemistry CAS
Current assignee: Beijing Fullcan Biotechnology Co ltd; Institute of Chemistry CAS
Priority date: 2017-10-09
Filing date: 2017-10-09
Publication date: 2018-01-19

Abstract

本发明公开一种头部毛囊血管内皮细胞生长因子促进剂，其包含富勒烯油、氨基富勒烯水溶液、羟基富勒烯水溶液一种或几种，该促进剂能够有效促进VEGFR‑2在头部毛囊部位的表达，从而起到促进毛发生长、治疗脱发的作用，安全有效，无副作用，不易复发，尤其是对雄激素性脱发、斑秃、脂溢性脱发效果更明显。

Description

一种头部毛囊血管内皮细胞生长因子促进剂

技术领域

本发明涉及医药领域，尤其是涉及一种头部毛囊血管内皮细胞生长因子促进剂。

背景技术

目前，毛囊研究的主要方向是毛囊真表皮间相互调控作用，涉及多个基因、生长因子、形态发生分子家族及信号通路等如：转化生长因子(TGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)/Wnt通路、BMP家族，以及表皮生长因子、血管内皮细胞生长因子、干细胞生长因子等。这些家族、因子都由相应的受体、配体、胞质内递质及核转录因子等组成。

近年来发现血管内皮细胞生长因子(VEGF)家族对毛囊的生长具有调控作用，而且在生长期毛囊的毛乳头细胞、毛囊外毛根鞘细胞上均发现有VEGF表达。生长期毛囊周围的血管明显增强，进入退行期后毛囊周围的血管开始退化，而休止期则血管化现象停止，这一现象与外毛根鞘细胞表达VEGF有关。VEGF家族成员通过结合位于血管内皮细胞特异性的VEGF受体介导微血管增生、增强血管通透性及内皮细胞增殖等作用，VEGF受体分为VEGFR-1、VEGFR-2和VGEGFR-3，在内皮细胞中VEGF的增殖主要由VEGFR-2介导。由于VEGF仅在生长期的毛囊中表达，并且在雄激素源性脱发和斑秃患者的毛囊肿VEGF表达减弱甚至消失，这就提示我们雄激素源性脱发和斑秃很可能与VEGF水平降低有关，因此如果能够上调局部毛囊肿VEGF水平，将有望治疗雄激素源性脱发和斑秃，目前被FDA批准外用治疗雄激素源性脱发的一种局部外用药米诺地尔可以有效抑制毛发脱落和促进毛发再生，但米诺地尔现有的治疗脱发的方法起效慢、副作用大。因此一种起效快，毒副作用小的药物急需解决的问题。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种头部毛囊血管内皮细胞生长因子促进剂，能够促进VEGFR-2表达的同时，快速有效又安全的起到治疗脱发的功能。

本发明是通过下述技术方案实现的：

一种头部毛囊血管内皮细胞生长因子促进剂，包含富勒烯油、氨基富勒烯水溶液、羟基富勒烯水溶液。

本发明所述的促进剂能够治疗毛囊血管内皮细胞生长因子下降所导致的脱发。

本发明所述的促进剂能够上调毛囊血管内皮细胞生长因子VEGF含量，尤其是上调毛囊血管内皮细胞生长因子VEGFR-2含量。

本发明所述的脱发包括雄激素性脱发、斑秃、脂溢性脱发，优选雄激素性脱发和斑秃。

本发明所述促进剂中，所述富勒烯油是富勒烯与油的组合，其中富勒烯在富勒烯油中

浓度为0.01-20mg/ml。

进一步优选，所述富勒烯油中富勒烯浓度0.1mg/mL-15mg/mL。

进一步优选，所述富勒烯油中富勒烯浓度1-10mg/ml。

本发明所述的富勒烯为空心富勒烯和/或金属富勒烯。包括但不限于富勒烯C_2n、M@C_2n、M₂@C_2n、MA@C_2n、M₃N@C_2n、M₂C₂@C_2n、M₂S@C_2n、M₂O@C_2n和M_xA_3-xN@C_2n中的任一种，其中，M和A均为金属元素，所述M和A均选自Sc、Y和镧系金属元素中的任意一种；30≤n≤60；0≤x≤3。

进一步优选所述富勒烯选择C₆₀、C₇₀、C₇₆、C₈₄，Gd@C₈₂，SC₃N@C₈₀一种或以上的混合物。

所述的油包括但不限于植物种子，花朵，根茎等的提取物，例如橄榄油，大豆油、亚麻籽油，青刺果油，油菜籽油，甜杏仁油，葵花油，红花籽油，葡萄籽油，月见草油，琉璃苣籽油，当归油，生姜油，荷荷巴油，核桃油，鳄梨油，芒果油，蓖麻油，杏仁油，乳木果油，玫瑰果油，椰子油，棕榈油，谷糠油，小麦胚芽油，金盏花油，芦荟油，棕榈油，甜杏仁油，玉米油，葡萄籽油等一种或几种的混合物。进一步优选富勒烯油为富勒烯橄榄油。

所述富勒烯油的制备：将富勒烯末与油充分混合均匀后，置于球磨机中，超声、搅拌、加热，使富勒烯在油中充分溶解，过滤得到富勒烯油。

进一步优选，步骤(1)将富勒烯粉末进行球磨细化0.05-1μm，再将细化后的富勒烯粉末与油进行混合，置于球磨机中500-1000转/分钟，球磨8-20h，得到富勒烯油混悬液，再将富勒烯油混悬液加热到40-60℃，氮气保护，搅拌12-72h后，离心、过滤，得到富勒烯油溶液。

进一步优选，步骤(1)将富勒烯粉末球磨细化0.05-1μm，与油充分混合均匀后，置于球磨机中500-700转/分钟，球磨6-10h，得到富勒烯油混悬液，然后将混悬液加热到40-50℃超声、氮气保护，搅拌加热10-15h，使富勒烯在油脂类辅料中充分溶解，离心、过滤得到富勒烯油。

本发明所述氨基富勒烯是通过下述方法制备得到:

(a)将有机胺溶液与固体富勒烯混合，在室温搅拌或加热搅拌回流条件下进行反应，其中，有机胺包括乙二胺、丙胺、丙醇胺、对苯二胺和二乙醇胺的至少之一；固体富勒烯包括空心富勒烯C_2n、金属富勒烯M@C_2n、M₂@C_2n、MA@C_2n、M₃N@C_2n、M₂C₂@C_2n、M₂S@C_2n、M₂O@C_2n和M_xA_3-xN@C_2n中的至少之一，其中，M和A分别独立的选自Sc、Y和镧系金属元素，30≤n≤60，0≤x≤3。

(b)将步骤(a)得到的溶液旋转干燥，用稀酸溶液溶解旋转干燥后的剩余固体，其中，稀酸溶液为无机酸溶液，稀酸溶液的浓度为0.5～1.5mmol/L。

(c)调节步骤(b)得到的溶液的pH值为4～6，透析至溶液的电导率小于1μs/cm。

(d)利用阴离子交换树脂处理步骤(c)得到的溶液，透析至溶液的电导率小于1μs/cm。

所述羟基富勒烯是由下述方法制备得到：将固体富勒烯与过氧化氢溶液以及碱溶液混合反应，其中,碱溶液包括氢氧化钠水溶液、氢氧化钾水溶液以及四丁基氢氧化铵水溶液的至少之一,固体富勒烯包括空心富勒烯C_2n、M@C_2n、M₂@C_2n、MA@C_2n、M₃N@C_2n、M₂C₂@C_2n、M₂S@C_2n、M₂O@C_2n和M_xA_3-xN@C_2n中的至少之一，其中，M和A分别独立的选自Sc、Y和镧系金属元素，30≤n≤60，0≤x≤3；所述碱溶液中碱的含量为8～15wt％；基于所述过氧化氢溶液的总质量，所述过氧化氢溶液中过氧化氢的含量为20～40wt％；所述混合溶液中所述过氧化氢以及所述碱溶液的体积比为7:(1～4)；所述反应是在加热搅拌处理下进行的，所述加热搅拌处理的加热温度为50～80摄氏度，搅拌速率为600～1500rpm/min,时间为15～36小时,对经过所述反应的所述混合溶液进行提纯处理。

进一步优选，羟基富勒烯的制备是通过下述方法得到的：

(a)将质量百分含量为30％的过氧化氢水溶液和质量百分含量为40％的氢氧化钠溶液按照体积比为7:3加入100mL圆底烧瓶，加入200mg富勒烯固体，使用磁力搅拌器搅拌24h，温度：70℃，转速：1000r/min，过滤，保留滤液。

(b)将滤液加离心管中，再加入过量的浓度为95％的乙醇。经过离心后收集沉淀，离心转速：10000r/min，离心时间：4min，将沉淀溶于水。

(c)将(b)步骤得到的溶液进行透析处理，透析至溶液的电导率小于1μs/cm。

(d)将透析后的溶液冷冻干燥，以便获得羟基富勒烯固体。冻干温度：-29℃，真空度：55Pa，冻干时间：48h。

本发明一种头部毛囊血管内皮细胞生长因子促进剂的使用方法：富勒烯油可涂抹、氨基富勒烯水溶液、羟基富勒烯水溶液涂抹或灌胃给药方式。

本发明一种头部毛囊血管内皮细胞生长因子促进剂可用于保健品或药品或食品或护肤品或发用品的有效成分之一，与药学上可接受的载体或与中药提取物组成组合物，其填加量为0.01-99.99％。

本发明还提供上述促进剂在制备促进头部毛囊血管内皮细胞生长因子表达药物中应用。所述的促进剂在制备治疗雄激素源性脱发药物中的应用。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

富勒烯橄榄油、氨基富勒烯、羟基富勒烯能够有效促进VEGFR-2在头部毛囊部位的表达，从而起到促进毛发生长、治疗脱发的目的，安全有效，无副作用，不易复发，尤其是对雄激素性脱发、斑秃、脂溢性脱发效果更明显，一周就生效显效。

附图说明

图1显示了根据本发明氨基富勒烯中实施例1以及实施例2的氨基富勒烯红外吸收谱。

图2显示了根据本发明氨基富勒烯实施例1以及实施例2的氨基富勒烯电子束探针分析结果。

图3显示了根据本发明氨基富勒烯实施例1以及实施例2的氨基富勒烯水合粒径(图3a)和zeta电位(图3b)。

图4显示了根据本发明羟基富勒烯中实施例1制备的C₆₀(O)₅(OH)₁₂的红外吸收谱。

图5显示了根据本发明羟基富勒烯实施例1制备的C₆₀(O)₅(OH)₁₂的X射线光电子能谱C1s峰拟合曲线。

图6显示了根据本发明羟基富勒烯实施例1制备的C₆₀(O)₅(OH)₁₂的水合粒径(图3a)和zeta电位(图3b)。

图7是根据本发明试验例一：C₆₀-橄榄油组Western Blot检测VEGFR-2含量图。

图8是根据本发明的试验例一：C₆₀-橄榄油组RT-PCR检测检测VEGFR-2含量图，其中A：C₆₀-橄榄油；B：橄榄油；C：米诺地尔；D：生理盐水。

图9是根据本发明的试验例二氨基富勒烯的小鼠VEGFR-2，Western Blot检测含量图。

图10是根据本发明的试验例二氨基富勒烯的小鼠VEGFR-2，RT-PCR检测含量图，其中A：氨基富勒烯；B米诺地尔；C；生理盐水。

图11是根据本发明的试验例三羟基富勒烯的小鼠VEGFR-2，Western Blot检测含量图。

图12是根据本发明的试验例三羟基富勒烯的小鼠VEGFR-2，RT-PCR检测含量图，其中A：羟基富勒烯；B米诺地尔；C：生理盐水。

具体实施方式

下面对本发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。

实施例富勒烯油

实施例1 C70富勒烯油

将富勒烯粉末C70进行球磨细化0.05-1μm，再将细化后的富勒烯粉末1g与大豆油20g进行混合，置于球磨机中500转/分钟，球磨8h，得到富勒烯油混悬液，再将富勒烯油混悬液加热到40℃，氮气保护，搅拌12h后，离心、过滤，得到富勒烯油溶液。

实施例2 C60富勒烯油

将富勒烯粉末C60进行球磨细化0.05-1μm，再将细化后的富勒烯粉末5g与大豆油100g进行混合，置于球磨机中700转/分钟，球磨12h，得到富勒烯油混悬液，再将富勒烯油混悬液加热到50℃，氮气保护，搅拌24h后，离心、过滤，得到富勒烯油溶液。

实施例3 C76富勒烯油

将富勒烯粉末C76进行球磨细化0.05-1μm，再将细化后的富勒烯粉末0.1与青刺果油10g进行混合，置于球磨机中1000转/分钟，球磨20h，得到富勒烯油混悬液，再将富勒烯油混悬液加热到60℃，氮气保护，搅拌36h后，离心、过滤，得到富勒烯油溶液。

实施例4 Gd@C82富勒烯油

将富勒烯粉末Gd@C82进行球磨细化0.05-1μm，再将细化后的富勒烯粉末10g与橄榄油40g进行混合，置于球磨机中500-1000转/分钟，球磨8-20h，得到富勒烯油混悬液，再将富勒烯油混悬液加热到40-60℃，氮气保护，搅拌12-72h后，离心、过滤，得到富勒烯油溶液。

实施例5 C60富勒烯油

将富勒烯粉末C60进行球磨细化0.05-1μm，再将细化后的富勒烯粉末3g与橄榄油30g进行混合，置于球磨机中500转/分钟，球磨80h，得到富勒烯油混悬液，再将富勒烯油混悬液加热到40℃，氮气保护，搅拌12h后，离心、过滤，得到富勒烯油溶液。

实施例6 C70富勒烯油

实施例7 C76富勒烯油

将富勒烯粉末C76进行球磨细化0.05-1μm，再将细化后的富勒烯粉末3g与橄榄油20g进行混合，置于球磨机中500转/分钟，球磨80h，得到富勒烯油混悬液，再将富勒烯油混悬液加热到40℃，氮气保护，搅拌12h后，离心、过滤，得到富勒烯油溶液。

实施例8 C60富勒烯油

将富勒烯粉末C60进行球磨细化0.05-1μm，再将细化后的富勒烯粉末5g与橄榄油25g进行混合，置于球磨机中500转/分钟，球磨80h，得到富勒烯油混悬液，再将富勒烯油混悬液加热到40℃，氮气保护，搅拌12h后，离心、过滤，得到富勒烯油溶液。

实施例9 C70富勒烯油

将富勒烯粉末C70进行球磨细化0.05-1μm，再将细化后的富勒烯粉末1g与橄榄油15g进行混合，置于球磨机中500转/分钟，球磨80h，得到富勒烯油混悬液，再将富勒烯油混悬液加热到40℃，氮气保护，搅拌12h后，离心、过滤，得到富勒烯油溶液。

实施例氨基富勒烯

实施例1：制备C₆₀(EDA)₉

(a)将50mL乙二胺(分析纯，国药试剂)加入100mL具塞锥形瓶，加入50mg固体富勒烯C₆₀(纯度：99％，厦门福纳新材料科技有限公司)，再加入磁力搅拌子，使用磁力搅拌器搅拌24h(温度：室温，转速：1000r/min)，使用溶剂过滤器(容积：1L，滤膜孔径：200nm，津腾公司)将反应物抽滤后得到棕红色溶液。溶液的成分主要是未参加反应的乙二胺和C₆₀(EDA)₉。

(b)将(a)步骤得到的溶液加入250ml的圆底烧瓶中，再使用旋转蒸发仪(型号：IKARV10basic)将滤液旋转干燥完全(温度：70摄氏度，转速：80r/min)。将稀盐酸(浓度：1mol/L)加入到圆底烧瓶中，振荡烧瓶使其内壁上的蒸干物溶解在稀盐酸中，得到棕红色澄清溶液。

(c)将(b)步骤得到的溶液使用NaOH水溶液(浓度：10mol/L)中和pH试纸检测为弱酸性(pH为5左右)，以保证过量的乙二胺以氯化盐形式存在，能够在后续的透析步骤充分除去。将中和后溶液装入透析袋(截止分子量为3500)放入超纯水中透析，透析至超纯水的电导率小于1μs/cm即可。

(d)将(c)步骤透析后的溶液流经装有阴离子交换树脂(Ambersep900(OH)，伊诺凯试剂公司)的层析柱，重复3次。将离子交换后溶液装入透析袋(截止分子量为3500)放入超纯水中透析透析至超纯水的电导率小于1μs/cm。溶液呈澄清的棕红色。

将棕红色溶液滴于银镜上，自然干燥后用于红外光谱(IR)测试。如图1所示，样品在3300nm左右的红外特征吸收(-NH₂的伸缩振动吸收峰)证明乙二胺被键合到富勒烯的碳笼，同时在800-1500nm红外特征吸收(碳笼上C-C和C＝C的伸缩振动峰)的变化也佐证乙二胺已经键合到碳笼上。将样品溶液滴于粘有碳导电胶的电子探针台上，自然干燥后用于电子束探针分析(EPMA)，测试结果如图2(a)所示，经过阴离子交换后的样品中只存在CN元素(H无法被检测)，说明键合的乙二胺是以本体形式而不是以氯化盐形式存在。将样品溶液直接用于动态光散射(DLS)测试，如图3所示，其水合粒径在100nm左右且表面带正电荷，适合被细胞捕获、吞噬。将样品冷冻干燥用于CHN元素分析(EA)，随机在样品中选择2个位置，分析结果见表1，由N：C比例可以确定其化学组成为C₆₀(EDA)₉。通过调整(a)步骤中乙二胺和富勒烯的反应时间，可以调控键合的乙二胺的数量，获得C₆₀(EDA)_n，n＝5-9。

表1：C₆₀(EDA)₉元素分析结果

实施例2：制备Gd@C₈₂(EDA)₈

反应条件以及步骤同实施例1，所不同的是，采用50mg金属富勒烯Gd@C₈₂固体(纯度：99％，厦门福纳新材料科技有限公司)替代C₆₀。最终获得含有Gd@C₈₂(EDA)₈的澄清棕黑色溶液。采用与实施例1中相同的测试方法以及条件对获得的产品进行成分检测，如图1所示，样品在3300nm左右的红外特征吸收(-NH₂的伸缩振动吸收峰)证明乙二胺被键合到富勒烯的碳笼，同时在800-1500nm红外特征吸收(碳笼上C-C和C＝C的伸缩振动峰)的变化也佐证乙二胺已经键合到碳笼上。将样品溶液滴于粘有碳导电胶的电子探针台上，自然干燥后用于电子束探针分析(EPMA)，测试结果如图2(b)所示，经过阴离子交换后的样品中只存在C、N、Gd元素(H无法被检测)，说明键合的乙二胺是以本体形式而不是以氯化盐形式存在。将样品溶液直接用于动态光散射(DLS)测试，如图3所示，其水合粒径在100nm左右且表面带正电荷，适合被细胞捕获、吞噬。将样品冷冻干燥用于CHN元素分析(EA)，随机在样品中选择2个位置，分析结果见表2，由N：C比例可以确定其化学组成为Gd@C₈₂(EDA)₈。通过调整乙二胺和金属富勒烯的反应时间，可以调控键合的乙二胺的数量，获得Gd@C₈₂(EDA)n，n＝6-8。使用等电感耦合等离子体原子发射光谱(ICP-AES)测试样品中Gd³⁺离子浓度(使用浓硝酸处理样品，将样品内的Gd酸解成Gd³⁺离子)，可以确定溶液中样品浓度。

表2：Gd@C₈₂(EDA)₈元素分析结果

实施例3：制备C_m(EDA)₉(m＝70、76、78、84)

反应条件以及步骤同实施例1，所不同的是，采用50mg C₇₀、C₇₆、C₇₈或者C₈₄固体(纯度：99％，厦门福纳新材料科技有限公司)替代C₆₀。

实施例4：制备M@C₈₂(EDA)₈(M＝Y、Ho、Lu)

反应条件以及步骤同实施例1，所不同的是，采用50mg Y@C₈₂、Ho@C₈₂或者Lu@C₈₂固体(纯度：99％，厦门福纳新材料科技有限公司)替代C₆₀。

实施例5：制备M₃N@C₈₀(EDA)₈(M＝Sc、Y、Lu)

反应条件以及步骤同实施例1，所不同的是，采用50mg Sc₃N@C₈₀、Y₃N@C₈₀或者Lu₃N@C₈₀固体(纯度：99％，厦门福纳新材料科技有限公司)替代C₆₀。

实施例羟基富勒烯

实施例1：制备C₆₀富勒醇

(a)将7mL质量百分含量为30％的过氧化氢(分析纯，购于国药试剂)水溶液和3mL质量百分含量为40％的氢氧化钠(分析纯，国药试剂)加入100mL圆底烧瓶，加入200mg富勒烯C₆₀固体(纯度：99％，厦门福纳新材料科技有限公司)，再加入磁力搅拌子(型号：B200)，使用磁力搅拌器搅拌24h(温度：70℃，转速：1000r/min)，使用溶剂过滤器(容积：1L，滤膜孔径：200nm，津腾公司)过滤得到棕黄色溶液。

(b)将(a)步骤得到的溶液加入50ml的离心管中，再加入过量的浓度为95％的乙醇(分析纯，国药试剂)。经过离心(转速：10000r/min，时间：4min)后去除上层无色溶液，将收集的沉淀溶于超纯水中，得到黄色澄清溶液。

(c)将(b)步骤得到的溶液装入透析袋(截止分子量为3500)放入超纯水中透析，透析至超纯水的电导率小于1μs/cm，得到黄色溶液。

(d)将(c)步骤透析后的溶液装入50mL塑料离心管中，使用液氮冷冻后放入冷冻干燥机中冷冻干燥(温度：-29℃，真空度：55Pa，时间：48h)，将得到的黄色固体装入棕色样品瓶中备用。

将固体样品溶于超纯水再滴于银镜上，自然干燥后用于红外光谱(IR)测试，如图4所示，样品在3400nm左右的红外特征吸收(-OH的伸缩振动吸收峰)证明羟基被键合到碳笼；同时在800-1500nm红外特征吸收(碳笼上C-C和C＝C的伸缩振动峰)属于富勒烯碳笼的特征振动吸收峰；特征振动峰为1750nm-1归属于-C＝O伸缩振动，这是由于-C-OH过度氧化或者频哪醇重排产生的。将固体样品直接用于X射线光电子能谱分析，如图5所示，对样品中C元素光电子能谱进行分峰拟合，键能为284.68eV的峰属于C-C和C＝C，键能为285.91eV的峰属于C-O，键能为288.58eV的峰属于C＝O，根据积分面积可以确定样品的化学组成是C60(O)₅(OH)₁₂。将样品溶液直接用于动态光散射(DLS)测试，如图6所示，样品水合粒径在145nm左右且表面带负电荷，能够长期稳定地存在于水溶液中。将固体样品用于CHN元素分析(EA)，取样品中两个随机位置(1#以及2#)进行元素分析。结果见表3。根据表3中的C含量可以对样品中的富勒醇进行定量。

表3：C₆₀富勒醇元素分析结果

通过调整(a)步骤中过氧化氢和C₆₀的反应温度和反应时间，可以调控键合的羟基的数量(C₆₀(O)₅(OH)_n，n＝16-30)。

实施例2：制备Cn(n＝70、76、78、84)富勒醇

制备方法和制备条件同实施例1，所不同的是，在步骤(a)中，分别采用C₇₀、C₇₆、C₇₈以及C₈₄替代C₆₀。

实施例3：制备金属富勒烯M@C₈₂富勒醇

制备方法和制备条件同实施例1。所不同的是，在步骤(a)中，分别采用Y@C₈₂、Ho@C₈₂、以及Lu@C₈₂替代C₆₀。

实施例4：制备M₃N@C₈₀富勒醇

制备方法和制备条件同实施例1。所不同的是，在步骤(a)中，分别采用Y₃N@C₈₂、Sc₃N@C₈₂、以及Lu₃N@C₈₂替代C₆₀。

试验例

试验例一：C57BL/6小黑鼠8周大，乙醚麻醉后，将按1：1比例混合的松香石蜡加热融化后涂抹于小鼠背部，待其冷却变硬后剥去，拔掉所有终止期毛发，诱导高度同步的生长期毛发发育，该毛囊与自发形成的生长期毛囊在形态上无差别。9天后其背部毛发生长完全。将小鼠分为4组，分别为C₆₀-橄榄油组、橄榄油组、米诺地尔组、生理盐水组，每天背部涂抹150微升，14天后，取小鼠背部皮肤，采用Western Blot和RT-PCR方法检测VEGFR-2含量。

结果：图7Western Blot检测可以看出，背部涂抹C₆₀的小鼠VEGFR-2含量明显高于其他组；图8RT-PCR检测可以看出，背部涂抹C₆₀的小鼠，VEGFR-2含量明显高于其他组。

结论：本发明的富勒烯油的促进剂能够上调VEGFR-2含量，治疗脱发，对于雄性激素源性脱发及斑秃效果明显优于米诺地尔。

试验例二：C57BL/6小黑鼠8周大，乙醚麻醉后，将按1：1比例混合的松香石蜡加热融化后涂抹于小鼠背部，待其冷却变硬后剥去，拔掉所有终止期毛发，诱导高度同步的生长期毛发发育，该毛囊与自发形成的生长期毛囊在形态上无差别。9天后其背部毛发生长完全。将小鼠分为3组，分别为氨基富勒烯组、米诺地尔组、生理盐水组，每天背部涂抹150微升，14天后，取小鼠背部皮肤，采用Western Blot和RT-PCR方法检测VEGFR-2含量。结果：附图9，氨基富勒烯组的Western Blot检测可以看出，背部涂抹氨基富勒烯的小鼠VEGFR-2含量明显高于其他组；附图10：RT-PCR检测可以看出，背部涂抹氨基富勒烯的小鼠，VEGFR-2含量明显高于其他组。

结论：本发明的氨基富勒烯促进剂能够上调VEGFR-2含量，治疗脱发，对于雄性激素源性脱发及斑秃效果明显优于米诺地尔。

试验例三：C57BL/6小黑鼠8周大，乙醚麻醉后，将按1：1比例混合的松香石蜡加热融化后涂抹于小鼠背部，待其冷却变硬后剥去，拔掉所有终止期毛发，诱导高度同步的生长期毛发发育，该毛囊与自发形成的生长期毛囊在形态上无差别。9天后其背部毛发生长完全。将小鼠分为3组，分别为羟基富勒烯组、米诺地尔组、生理盐水组，每天背部涂抹150微升，14天后，取小鼠背部皮肤，采用Western Blot和RT-PCR方法检测VEGFR-2含量。结果：附图11说明：Western Blot检测可以看出，背部涂抹羟基富勒烯的小鼠VEGFR-2含量明显高于其他组；附图12说明：RT-PCR检测可以看出，背部涂抹羟基富勒烯的小鼠，VEGFR-2含量明显高于其他组。

结论：本发明的羟基富勒烯促进剂能够上调VEGFR-2含量，治疗脱发，对于雄性激素源性脱发及斑秃效果明显优于米诺地尔。

前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。

Claims

1.一种头部毛囊血管内皮细胞生长因子促进剂，其特征在于，其包含富勒烯油、氨基富勒烯水溶液、羟基富勒烯水溶液一种或几种。

2.如权利要求1所述的一种头部毛囊血管内皮细胞生长因子促进剂，其特征在于，所述促进剂能够治疗毛囊血管内皮细胞生长因子下降所导致的脱发。

3.如权利要求1所述的一种头部毛囊血管内皮细胞生长因子促进剂，其特征在于，所述的促进剂能够上调毛囊血管内皮细胞生长因子VEGF含量。

4.如权利要求3所述的一种头部毛囊血管内皮细胞生长因子促进剂，其特征在于，所述促进剂能够上调毛囊血管内皮细胞生长因子VEGFR-2含量。

5.如权利要求2所述的一种头部毛囊血管内皮细胞生长因子促进剂，其特征在于，所述脱发包括雄激素性脱发、斑秃、脂溢性脱发。

6.如权利要求1所述的一种头部毛囊血管内皮细胞生长因子促进剂，其特征在于，所述富勒烯油，其中富勒烯在富勒烯油中浓度为0.01-20mg/ml；进一步优选所述富勒烯油中富勒烯浓度0.1mg/mL-15mg/mL；进一步优选，所述富勒烯油中富勒烯浓度1-10mg/ml。

7.如权利要求1所述的一种头部毛囊血管内皮细胞生长因子促进剂，其特征在于，所述氨基富勒烯是按照下述方法制备得到：

(a)将有机胺溶液与固体富勒烯混合，在室温搅拌或加热搅拌回流条件下进行反应，其中，有机胺包括乙二胺、丙胺、丙醇胺、对苯二胺和二乙醇胺的至少之一；固体富勒烯包括空心富勒烯C_2n、金属富勒烯M@C_2n、M₂@C_2n、MA@C_2n、M₃N@C_2n、M₂C₂@C_2n、M₂S@C_2n、M₂O@C_2n和M_xA_3-xN@C_2n中的至少之一，其中，M和A分别独立的选自Sc、Y和镧系金属元素，30≤n≤60，0≤x≤3；

(b)将步骤(a)得到的溶液旋转干燥，用稀酸溶液溶解旋转干燥后的剩余固体，其中，稀酸溶液为无机酸溶液，稀酸溶液的浓度为0.5～1.5mmol/L；

(c)调节步骤(b)得到的溶液的pH值为4～6，透析至溶液的电导率小于1μs/cm；

8.如权利要求1所述的一种头部毛囊血管内皮细胞生长因子促进剂，其特征在于，所述羟基富勒烯是由下述方法制备得到：将固体富勒烯与过氧化氢溶液以及碱溶液混合反应，其中,碱溶液包括氢氧化钠水溶液、氢氧化钾水溶液以及四丁基氢氧化铵水溶液的至少之一,固体富勒烯包括空心富勒烯C_2n、M@C_2n、M₂@C_2n、MA@C_2n、M₃N@C_2n、M₂C₂@C_2n、M₂S@C_2n、M₂O@C_2n和M_xA_3-xN@C_2n中的至少之一，其中，M和A分别独立的选自Sc、Y和镧系金属元素，30≤n≤60，0≤x≤3；所述碱溶液中碱的含量为8～15wt％；基于所述过氧化氢溶液的总质量，所述过氧化氢溶液中过氧化氢的含量为20～40wt％；所述混合溶液中所述过氧化氢以及所述碱溶液的体积比为7:(1～4)；所述反应是在加热搅拌处理下进行的，所述加热搅拌处理的加热温度为50～80摄氏度，搅拌速率为600～1500rpm/min,时间为15～36小时,对经过所述反应的所述混合溶液进行提纯处理。

9.如权利要求1所述的促进剂在制备促进头部毛囊血管内皮细胞生长因子表达药物中的应用。

10.如权利要求1所述的促进剂在制备治疗雄激素源性脱发药物中的应用。