CN106924272B

CN106924272B - 水杨酸甲酯糖苷在制备预防和/或治疗系统性红斑狼疮及其并发症药物中的用途

Info

Publication number: CN106924272B
Application number: CN201611259895.6A
Authority: CN
Inventors: 杜冠华; 方莲花; 张东明; 何阳阳; 阎雨; 林溢煌; 吴平; 张慧芳
Original assignee: Institute of Materia Medica of CAMS
Current assignee: Institute of Materia Medica of CAMS
Priority date: 2015-12-31
Filing date: 2016-12-31
Publication date: 2021-04-13
Anticipated expiration: 2036-12-31
Also published as: CN106924272A

Abstract

本发明公开了一类如通式(1)所示的水杨酸甲酯糖苷类化合物及其药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗系统性红斑狼疮及其并发症的药物用途。本发明中，水杨酸甲酯糖苷具有降低狼疮小鼠体内自身抗体和炎症因子的表达水平、改善免疫功能的药理作用；具有减缓狼疮关节炎样病理进程的作用；具有降低狼疮小鼠肾脏组织中免疫复合物沉积、改善狼疮小鼠肾功能的药理作用；具有保护狼疮小鼠脾脏功能的作用。水杨酸甲酯糖苷类化合物为中国民间传统中草药滇白珠中提取分离的单体化合物，具有毒性低、提取工艺简单、合成路线成熟等优点；其原材料资源广阔，且容易大量制备，具有很好的应用与开发前景，是一种比较理想的新型的治疗系统性红斑狼疮及其免疫功能失调、狼疮关节炎、狼疮性肾炎、狼疮性脾脏损伤等并发症的中药单体。

Description

水杨酸甲酯糖苷在制备预防和/或治疗系统性红斑狼疮及其并发症药物中的用途

技术领域

本发明涉及水杨酸甲酯糖苷类化合物及其药学上可接受的盐新的药理作用，以及水杨酸甲酯糖苷类化合物及其药学上可接受的盐在制备预防和治疗系统性红斑狼疮及其并发症疾病药物中的应用；属医药技术领域。

技术背景

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种以自身抗体的产生和免疫复合物的沉积为主要病理特征的自身免疫性结缔组织疾病，是一种难以治愈的慢性疾病，严重危害着人类的健康。系统性红斑狼疮临床表现为全身性的组织损伤，最显著的即所谓的面部皮疹(蝴蝶斑)。除了皮肤，系统性红斑狼疮通常还影响着几乎所有重要的组织(如关节)和器官(如心、肝、脑、肾和肺)，血液系统和中枢神经系统往往也是机体主要受累的部分。据美国狼疮基金会估计，全美患有系统性红斑狼疮的病人不低于150万，每年新增病例多达1.6万。在中国和世界范围内，也大约有100和500万人饱受着系统性红斑狼疮的折磨。系统性红斑狼疮是一种耗费大量医疗资源的慢性疾病。在美国，系统性红斑狼疮患者的年度人均治疗总费用(住院、门诊和药房)已高达29,232美元，远远高于其他非系统性红斑狼疮的慢性疾病患者所产生的费用。

临床上系统性红斑狼疮常用药物主要包括非甾体抗炎药、抗疟药、糖皮质激素、免疫抑制剂及生物制剂。这些药物仅能够在一定程度上缓解症状，无法彻底治愈疾病，同时又具有毒副作用大、不良反应多的缺点。

因此，对于系统性红斑狼疮治疗药物的研究不仅具有巨大的社会效益，而且可以明显减轻国家和家庭的经济负担，是十分紧迫和必要的。

在中国发明专利申请(发明名称：“水杨酸甲酯糖苷类化合物，其合成方法与用途”，申请号：200910082224.0；公开号CN101863934A；公开日2010-10-20)中公开了一类水杨酸甲酯糖苷类化合物，公开了这类化合物在制备解热、消炎和镇痛药物中的应用。没有公开其在制备预防和/或治疗系统性红斑狼疮及其并发症产品中的应用。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供水杨酸甲酯糖苷类化合物及其药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗系统性红斑狼疮及其并发症产品中的应用。

为解决以上技术问题，本发明提供了如下技术方案：

本发明技术方案的第一方面是提供了如通式(1)所示的水杨酸甲酯糖苷类化合物及其药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗系统性红斑狼疮及其并发症产品中的应用；

R选自单糖、单糖组成的二糖或三糖，其中所述的单糖包括葡萄糖、果糖、半乳糖；更进一步的，所述的二糖包括乳糖、麦芽糖、蔗糖。

其中，所述的预防和/或治疗系统性红斑狼疮及其并发症选自免疫功能失调、狼疮关节炎、狼疮性肾炎、狼疮性脾脏损伤；所述的产品包括药品、食品、保健品。

本发明技术方案第二方面是提供了一种药物组合物在制备预防和/或治疗系统性红斑狼疮及其并发症产品中的应用，其特征在于，含有治疗有效剂量的通式(I)所示的化合物和药学上可接受的载体或辅料，

R选自单糖、单糖组成的二糖或三糖，其中所述的单糖包括葡萄糖、果糖、半乳糖；进一步的，所述的二糖包括乳糖、麦芽糖、蔗糖。

进一步的，本发明技术方案第二方面所述的药物组合物还包括与其他活性物质以任何比例合用制成的药物组合物。

更进一步的，以上所述的药物组合物选自如下的剂型：溶液、混悬液、冻干粉针、乳剂、丸剂、胶囊、粉末、缓释制剂、控制释放制剂、持续释放制剂及微粒体给药系统。

本发明第二方面所述的药物组合物，以用已知的方法配制，使用几种途径对受试者施用，包括但不限于肠胃外、经口、局部、皮内、肌肉内、腹膜内、皮下、静脉、鼻内途径。

本发明中水杨酸甲酯糖苷类化合物可通过已知方法制备得到。

本发明的水杨酸甲酯糖苷类化合物的药物组合物任选的可以通过任何常规方法用一种或多种药学可接受的载体和/或赋形剂来配制。因此，水杨酸甲酯糖苷类化合物和它药学可接受的盐可特别配制为例如吸入或吹入(通过口或鼻)或经口、含化、肠胃外或直肠给药。

水杨酸甲酯糖苷类化合物的药物组合物也可以采用溶液、混悬液、乳剂、丸剂、胶囊、粉末、控制释放或持续释放制剂。这些制剂将含有治疗有效量的水杨酸甲酯糖苷类化合物，优选为纯化形式，以及适量的载体，以提供对患者适当给药的形式。

有益技术效果：

本发明通过腹腔注射降植烷(pristane)建立小鼠系统性红斑狼疮模型，在造模后的第1个月对成模小鼠进行筛查，剔除模型未成功小鼠，并将模型成功小鼠进行随机分组，在制备模型后的第45天开始进行药物干预。整个实验期间，每隔一个月均对狼疮小鼠血清中DNA等自身抗体的表达水平进行动态的测定，同时也对狼疮小鼠关节炎样病理进程进行有效的监控。在制备模型后的第6个月，收集小鼠血清和主要的内脏器官，从脾脏损伤和肾功能损伤等层面评估DL0309对狼疮小鼠病理进程的有效缓解和治疗作用。通过以上实验，本发明首次发现水杨酸甲酯糖苷类化合物具有降低狼疮小鼠体内自身抗体和炎症因子的表达水平、改善免疫功能的作用；具有减缓狼疮关节炎样病理进程的作用；具有降低狼疮小鼠肾脏组织中免疫复合物沉积、改善狼疮小鼠肾功能的作用；具有保护狼疮小鼠脾脏功能的作用，可应用于制备预防、缓解和/或治疗系统性红斑狼疮及其免疫功能失调、狼疮关节炎、狼疮性肾炎、狼疮性脾脏损伤等并发症的产品。

而且本发明的药物水杨酸甲酯糖苷类化合物为中国民间传统中草药滇白珠中提取分离的单体化合物，具有毒性低、提取工艺简单、合成路线成熟等优点；其原材料资源广阔，且容易大量制备，具有很好的应用和开发前景。

附图说明

图1.DL0309对pristane诱导的狼疮小鼠体内自身DNA抗体表达的影响(A：IgG型DNA自身抗体；B：IgM型DNA自身抗体)。

图2.DL0309对pristane诱导的狼疮小鼠体内自身Sm抗体表达的影响(A：IgG型Sm自身抗体；B：IgM型Sm自身抗体)。

图3.DL0309对pristane诱导的狼疮小鼠体内自身组蛋白抗体表达的影响(A：IgG型组蛋白自身抗体；B：IgM型组蛋白自身抗体)。

图4.DL0309对pristane诱导的狼疮小鼠体内IL-6(A)和总IgG(B)表达的影响。

图5.DL0309对pristane诱导的狼疮小鼠后足体积的影响。

图6.X-光造影下观察DL0309对狼疮小鼠后肢关节畸形和肿胀的有效改善作用。

图7.DL0309对pristane诱导的狼疮小鼠肾功能的改善作用(A：血清中肌酐的含量；B：尿液样本中总蛋白与肌酐的比值)。

图8.肾脏组织病理学检测(H&E染色)(a-对照组；b-模型组；c-模型组；d-阿司匹林组；e-泼尼松组；f-低剂量组；g-中剂量组；h-高剂量组)。

图9.肾脏组织病理学检测(PAS染色)(a-对照组；b-模型组；c-模型组；d-阿司匹林组；e-泼尼松组；f-低剂量组；g-中剂量组；h-高剂量组)。

图10.肾脏组织中总IgG复合物的沉积。

图11.肾脏组织中C3补体复合物的沉积。

图12.DL0309对狼疮小鼠脾指数的影响。

图13.脾脏组织病理学检测(H&E染色)(a-对照组；b-模型组；c-模型组；d-DL0309低剂量组；e-DL0309中剂量组；f-DL0309高剂量组；g-阿司匹林组；h-泼尼松组)

具体实施方式

下面结合本发明进一步说明水杨酸甲酯糖苷类化合物在体内预防、缓解和/或治疗系统性红斑狼疮及其并发症的药理作用与药物用途。

下述实施例更详细地举例说明本发明，并不是对本发明的任何限制。

实验例1：由降植烷(pristane)诱导的系统性红斑狼疮小鼠模型是一种经典的、广为认可的小鼠模型，常用来评估抗狼疮药物的药理作用。小鼠的饲养、分组和给药情况如下：近交系BALB/c雌性小鼠(SPF级，7～8周龄)购自北京维通利华实验动物技术有限公司(合格证号：SCXK(京)2012-0001；序号：11400700048526)。BALB/c小鼠自造模前1周开始，至实验结束(造模后6个月)前，一直饲养于中国医学科学院药物研究所实验动物中心屏障系统，5～7只/笼。饲养条件为：25℃恒温、50％相对湿度、常规饲料与自由饮水、以及12h光照/黑暗交替循环。

在造模后的第1个月，依据体内自身抗体的表达水平对成模小鼠进行筛查，并将成模小鼠进行随机分组，12只/组。分别为对照组、模型组、DL0309低剂量组(200mg/kg体重)、DL0309中剂量组(400mg/kg体重)、DL0309高剂量组(800mg/kg体重)、阳性药阿司匹林组(303mg/kg体重)和阳性药泼尼松组(5mg/kg体重)。在造模后的第45天开始，按照上述剂量进行口服给药，1次/天。给药体积均为0.2mL/10g体重。其中对照组和模型组均同步给予等体积的CMC-Na溶液。

(一)检测DL0309对pristane诱导的狼疮小鼠体内自身DNA抗体表达的影响。

在造模后的第1，2，…6个月，通过剪尾取血，并将血清和血细胞进行分离。采用ELISA法对血清样本中DNA、Sm、组蛋白抗体水平进行测定。绘制各组血清样本中自身DNA、Sm、组蛋白抗体的相对表达水平随时间的动态曲线(见图1、图2和图3)，狼疮模型小鼠血清中IgG和IgM两种形式的上述自身抗体的表达水平均显著升高(*P<0.05或**P<0.01)；中、高剂量的DL0309，阳性药阿司匹林与泼尼松均可以降低狼疮小鼠体内DNA-IgG/IgM、Sm-IgG/IgM及组蛋白-IgG/IgM等自身抗体表达水平的升高，与模型组的差异具有统计学意义(^#P<0.05，^##P<0.01或^###P<0.001)，说明口服给予化合物DL0309能够有效抑制狼疮小鼠体内自身抗体的生成。

(二)检测DL0309对pristane诱导的狼疮小鼠血清中炎症细胞因子IL-6水平的影响。

在造模后的第2个月(也即进行药物干预后的第15天)，测定各组小鼠血清中IL-6的表达水平(见图4A)。IL-6这一重要的炎症介质在狼疮模型小鼠血清中被检测到明显的高表达(**P<0.01)；高剂量的DL0309，阳性药阿司匹林与泼尼松可以显著降低狼疮小鼠血清中IL-6的表达水平(^#P<0.05或^##P<0.01)，说明口服给予化合物DL0309能够有效抑制狼疮小鼠体内炎症细胞因子的表达。

(三)检测DL0309对pristane诱导的狼疮小鼠血清中总IgG水平的影响。

在造模后的第1，2，…6个月，通过ELISA测定各组小鼠血清中总IgG的含量(见图4B)。狼疮小鼠血清中总IgG的含量随着时间的推移逐步的升高，在造模后的第2个月开始与对照组相比呈现出显著性差异(**P<0.01)；中、高剂量的DL0309，阳性药阿司匹林与泼尼松可以显著降低狼疮小鼠血清中总IgG的表达水平(^#P<0.05或^##P<0.01)。

(四)检测DL0309对pristane诱导的狼疮小鼠足肿胀程度的影响。

在造模后的第6个月，由独立实验人员将小鼠后足相同位置划线，将小鼠后足浸于测量杯液体中，并使划线部位与液面持平，采用小动物足趾容积测定仪测量并记录小鼠后足体积(见图5)。狼疮小鼠后足的平均体积相对于对照组显著升高(**P<0.01)；中、高剂量的DL0309，阳性药阿司匹林与泼尼松可以显著降低狼疮小鼠后足的体积(^#P<0.05或^##P<0.01)，说明口服给予化合物DL0309能够有效抑制狼疮小鼠后足肿胀程度。

(五)检测DL0309对pristane诱导的狼疮小鼠关节炎样病理进程的影响。

在造模后的第6个月，将小鼠后肢置于X-光下进行观察。狼疮模型小鼠后足在X-光下可见明显的畸形，同时也可观察到脚踝处明显的肿胀；而中、高剂量的DL0309组，阳性药阿司匹林与泼尼松组均未观察到明显的此类现象(见图6)，说明口服给予化合物DL0309能够有效缓解狼疮小鼠关节炎样病理进程。

(六)检测DL0309对pristane诱导的狼疮小鼠血清中肌酐含量的影响。

在造模后的第6个月，收集小鼠血清，用SOD酶法测定血清中肌酐含量(见图7A)。狼疮模型小鼠血清中肌酐含量明显升高；高剂量的DL0309，阳性药阿司匹林与泼尼松可以有效降低血清中肌酐含量。

(七)检测DL0309对pristane诱导的狼疮小鼠尿液中总蛋白含量的影响。

在造模后的第6个月，收集小鼠尿液，用SOD酶法测定尿液中肌酐含量，用BCA法测定尿液中总蛋白含量。通过计算二者比值(见图7B)，可见狼疮模型小鼠尿液中单位肌酐中总蛋白的含量显著升高；高剂量的DL0309，阳性药阿司匹林与泼尼松可以有效降低单位肌酐中总蛋白的含量。

(八)检测DL0309对pristane诱导的狼疮小鼠肾脏病理改变的影响。

在造模后的第6个月，收集各组小鼠肾脏，进行病理检查。经H&E染色(见图8)，镜下观察可见狼疮模型小鼠肾脏组织中有大量炎性细胞浸润，肾小球系膜变宽，毛细血管壁增厚，呈现出典型的肾小球肾炎特征；高剂量的DL0309，阳性药阿司匹林和泼尼松能够明显的改善狼疮小鼠这一病理改变。经PAS染色(见图9)，镜下观察可见正常小鼠肾小球内毛细血管袢薄而清晰，狼疮病变的肾小球内毛细血管袢明显增厚，肾小球肿胀致使肾小囊狭窄，同时可见基底膜紊乱，肾小管增厚等病理改变；高剂量的DL0309，阳性药阿司匹林和泼尼松能够明显的改善狼疮小鼠这一病理改变。上述实验从病理学角度证实了DL0309对狼疮小鼠肾脏损伤的保护作用。

(九)检测DL0309对pristane诱导的狼疮小鼠肾组织中免疫复合物沉积的影响。

在造模后的第6个月，收集各组小鼠肾脏，进行间接免疫荧光染色。在200倍荧光显微镜下观察(见图10)，狼疮模型小鼠肾脏组织尤其是肾小球部位可被激发出强烈的红色荧光，说明肾小球部位沉积了大量的总IgG复合物；高剂量的DL0309，阳性药阿司匹林和泼尼松能够明显的降低狼疮小鼠肾组织中总IgG复合物的沉积。在400倍激光共聚焦显微镜下观察(见图11)，狼疮模型小鼠肾小球可被激发出强烈的绿色荧光，说明肾小球部位沉积了大量的C3补体复合物；高剂量的DL0309，阳性药阿司匹林和泼尼松能够明显的降低狼疮小鼠肾组织中C3补体复合物的沉积。上述实验证实了DL0309能够降低狼疮小鼠肾组织中免疫复合物的沉积，也进一步解释了DL0309保护狼疮小鼠肾功能的机制。

(十)检测DL0309对pristane诱导的狼疮小鼠脾指数、脾脏病理改变的影响。

在造模后的第6个月，收集小鼠脾脏，以脾脏重量比体重计算各组小鼠的脾指数(见图12)。狼疮模型小鼠脾指数相较于对照组升高了将近一倍(**P<0.01)；高剂量的DL0309，阳性药阿司匹林和泼尼松能够显著降低狼疮小鼠脾指数的升高(^#P<0.05或^##P<0.01)，说明DL0309能够对狼疮小鼠的脾脏起到明显的保护作用。通过组织病理学检查也进一步证实了上述结论。镜下观察可见(图13)，狼疮模型小鼠脾组织中细胞异常增生，脾脏白髓结构呈结节状增生和扩大；阳性药阿司匹林和泼尼松及DL0309能够明显的改善这一病理改变。

整体动物实验结果表明，水杨酸甲酯糖苷类化合物具有降低狼疮小鼠体内自身抗体和炎症因子的表达水平、改善免疫功能的作用；具有减缓狼疮关节炎样病理进程的作用；具有降低狼疮小鼠肾脏组织中免疫复合物沉积、改善狼疮小鼠肾功能的作用；具有保护狼疮小鼠脾脏功能的作用。

综上所述，水杨酸甲酯糖苷类化合物具有预防、缓解和/或治疗系统性红斑狼疮及其并发症的作用，水杨酸甲酯糖苷类化合物为中国民间传统中草药滇白珠中提取分离的单体化合物，具有毒性低、提取工艺简单、合成路线成熟等优点；其原材料资源广阔，且容易大量制备，具有很好的应用和开发前景，可应用于制备预防、缓解和/或治疗系统性红斑狼疮及其免疫功能失调、狼疮关节炎、狼疮性肾炎、狼疮性脾脏损伤等并发症的产品。

Claims

1.如通式(I)所示的水杨酸甲酯糖苷类化合物及其药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗系统性红斑狼疮及其并发症产品中的应用；

R选自单糖、二糖、单糖组成的三糖，其中所述的单糖包括葡萄糖、果糖、半乳糖，所述的二糖包括乳糖、麦芽糖、蔗糖。

2.根据权利要求1的应用，其特征在于，所述的预防和/或治疗系统性红斑狼疮及其并发症选自免疫功能失调。

3.根据权利要求1的应用，其特征在于所述的系统性红斑狼疮及其并发症选自狼疮关节炎。

4.根据权利要求1的应用，其特征在于，所述的系统性红斑狼疮及其并发症选自狼疮性肾炎。

5.根据权利要求1的应用，其特征在于，所述的系统性红斑狼疮及其并发症选自狼疮性脾脏损伤。

6.根据权利要求1的应用，其特征在于，所述的产品包括药品、食品、保健品。

7.一种药物组合物在制备预防和/或治疗系统性红斑狼疮及其并发症产品中的应用，其特征在于，含有治疗有效剂量的通式(I)所示的化合物和药学上可接受的载体或辅料，

8.根据权利要求7的应用，其特征在于，所述的药物组合物还包括与其他物质以任何比例合用制成的药物组合物。

9.根据权利要求7-8任一项的应用，其特征在于，所述的预防和/或治疗系统性红斑狼疮及其并发症选自免疫功能失调、狼疮关节炎、狼疮性肾炎、狼疮性脾脏损伤；所述的产品包括药品、食品、保健品。

10.根据权利要求7的应用，其特征在于，所述的药物组合物选自如下的剂型：溶液、混悬液、冻干粉针、乳剂、丸剂、胶囊、粉末、缓释制剂、控制释放制剂、持续释放制剂及微粒体给药系统。