CN106535930A - 猪流行性腹泻病毒疫苗及其使用方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了分离或纯化的猪流行性腹泻病毒(PEDV)或猪流行性腹泻病毒(PEDV)S1蛋白及其使用方法。

Description

猪流行性腹泻病毒疫苗及其使用方法

相关申请

根据美国法典第35篇第119条(e)款，本申请要求2014年3月11日提交的临时美国序列号61/951,439的优先权，所述申请以引用的方式并入本文。

序列表

本申请含有已以ASCII格式电子版形式提交且特此以引用的方式整体并入的序列表。2015年2月24日创建的所述ASCII拷贝名为09531.389WO1_SL.txt并且大小为76,617字节。

发明背景

猪流行性腹泻病毒(PEDV)是感染沿猪的小肠排列的细胞的冠状病毒，从而引起猪流行性腹泻(一种严重腹泻和脱水的病状)。它通常在老猪(older hog)中引起疾病，从而使得体重减轻，但是它在新生小猪中是严重疾病，通常在感染病毒的数天内致死。PEDV首次在欧洲发现，但在亚洲国家，诸如韩国、中国、日本、菲律宾以及泰国变得越来越成问题。在2013年它还传播到北美，并且。(Stevenson等人，Journal of Veterinary DiagnosticInvestigation,25(5)649-654,2013)。由于PEDV具有高度传染性，从而在小猪中导致显著的发病率和死亡率并且与增加的疫苗接种和消毒成本相关，因此是巨大的经济负担(Song等人，Virus Genes,44(2):167–175,2012)。

尚未已知存在预防PEDV感染的疫苗。因此，对预防或改善PEDV感染的有效手段存在明显持续的需求。

发明概述

本发明提供一种疫苗和有效使易感猪对猪流行性腹泻病毒(PEDV)免疫的疫苗接种的方法。在某些实施方案中，疫苗含有与生理上可接受的无毒媒介物组合的免疫原性量的PEDV。在某些实施方案中，疫苗含有与生理上可接受的无毒媒介物组合的免疫原性量的PEDV S1蛋白(也称为“突起”蛋白)或其变体。

在某些实施方案中，本发明提供了一种组合物，其包含第一免疫原性组合物，所述第一免疫原性组合物包含猪流行性腹泻病毒(PEDV)和药学上可接受的无毒媒介物，其中PEDV与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2具有至少90％的同一性(即，90％、91％、92％、93％、或94％、或95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或100％)。在某些实施方案中，PEDV与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2具有至少99％、99.9％或99.99％的同一性。在某些实施方案中，PEDV由SEQ ID NO:1或SEQID NO:2组成。

在某些实施方案中，本发明提供了一种组合物，其包含第一免疫原性组合物，所述第一免疫原性组合物包含猪流行性腹泻病毒(PEDV)S1蛋白和药学上可接受的无毒媒介物，其中PEDV S1蛋白与由SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4编码的蛋白具有至少90％的同一性(即，90％、91％、92％、93％、或94％、或95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或100％)。在某些实施方案中，PEDV与由SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4编码的蛋白具有至少99％、99.9％或99.99％的同一性。在某些实施方案中，PEDV S1蛋白由通过SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4编码的蛋白组成。

在某些实施方案中，组合物还包含有效量的免疫学佐剂。

在某些实施方案中，组合物包含PEDV或缀合或连接至非PEDVS1肽的PEDVS1蛋白。

在某些实施方案中，组合物包含PEDV或缀合或连接至多糖的PEDVS1蛋白。

在某些实施方案中，组合物还包含第二免疫原性组合物。

在某些实施方案中，本发明提供一种保护易感猪以防猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染的方法，其包括向猪施用有效量的上述组合物。在某些实施方案中，组合物通过肌肉内、皮内、皮下递送或通过粘膜表面施用。在某些实施方案中，组合物通过口服摄取施用。在某些实施方案中，组合物通过鼻内施用。

在某些实施方案中，本发明提供一种组合物，其包含表达盒，所述表达盒包含启动子和编码猪流行性腹泻病毒(PEDV)S1蛋白的序列，其中PEDV S1蛋白与由SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4编码的蛋白具有至少90％的同一性(即，90％、91％、92％、93％、或94％、或95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或100％)。在某些实施方案中，PEDV与由SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4编码的蛋白具有至少99％、99.9％或99.99％的同一性。在某些实施方案中，PEDV S1蛋白由通过SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4编码的蛋白组成。

附图简述

图1提供了美国/印第安纳州12.83/2013(SEQ ID NO:1)的序列。

图2提供了美国/爱荷华州23.57/2013(SEQ ID NO:2)。

图3提供了美国.印第安纳州12.83.2013(SEQ ID NO:3)。

图4提供了美国.爱荷华州23.57.2013(SEQ ID NO:4)。

发明详述

核酸

本发明提供编码部分或全部PEDV或PEDV S1蛋白的核酸。术语“核酸”指以单链或双链形式的脱氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)及其聚合物，其由包含糖、磷酸和可以是嘌呤或嘧啶的碱基的单体(核苷酸)构成。除非具体限定，否则本术语涵盖含有天然核苷酸的已知类似物的核酸，所述类似物具有与参照核酸类似的结合性质并且以与天然发生核苷酸类似的方式代谢。除非另外指示，否则一个特定核酸序列也涵盖其经过保守性修饰的变体(例如，简并密码子取代)和互补序列，以及明确指示的序列。具体地，简并密码子取代可通过产生序列来实现，其中一个或多个选择的(或所有)密码子的第三位置被混合碱基和/或脱氧肌苷残基取代。“核酸片段”是给定核酸分子的一部分。

术语“多核苷酸”、“核酸”或“核酸片段”可在本文中互换使用。这些术语涵盖由磷酸二酯键连接的核苷酸。“多核苷酸”可以是任选地含有合成、非天然或经修饰的核苷酸碱基的单链或双链的核糖核酸(RNA)或脱氧核糖核酸(DNA)聚合物。呈DNA的聚合物形式的多核苷酸可包含cDNA、基因组DNA、合成DNA中的一个或多个区段或其混合物。核苷酸碱基在本文中以单字母代码示出：腺嘌呤(A)、鸟嘌呤(G)、胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)、肌苷(I)和尿嘧啶(U)。除非具体限定，否则本术语涵盖含有天然核苷酸的已知类似物的核酸，所述类似物具有与参照核酸类似的结合性质并且以与天然发生核苷酸类似的方式代谢。除非另外指示，否则一个特定核酸序列也隐含地涵盖其经过保守性修饰的变体(例如，简并密码子取代)和互补序列，以及明确指示的序列。具体地，简并密码子取代可通过产生序列来实现，其中一个或多个选择的(或所有)密码子的第三位置被混合碱基和/或脱氧肌苷残基取代。

“核苷酸序列”是DNA或RNA的聚合物，其可以是单链或双链的，任选地包含能够掺入DNA或RNA聚合物中的合成的、非天然的或经修饰的核苷酸碱基。术语“核酸”、“核酸分子”、“核酸片段”、“核酸序列或区段”或“多核苷酸”可互换使用，并且可以同样与基因、通过基因编码的cDNA、DNA和RNA互换使用。

本发明涵盖分离的或基本上纯化的核酸组合物。在本发明的上下文中，“分离的”或“纯化的”DNA分子或RNA分子是远离其天然环境存在的DNA分子或RNA分子并且因此不是天然产物。分离的DNA分子或RNA分子可以以纯化的形式存在，或者可以在非天然环境，例如像在转基因宿主细胞中存在。例如，“分离的”或“纯化的”核酸分子或其生物活性的部分，在通过重组技术生产时基本上不含其他细胞材料或培养基，或者当化学合成时基本上不含化学前体或其他化学品。在一个实施方案中，“分离的”核酸不含在所述核酸衍生自其的生物的基因组DNA中天然地侧接所述核酸的序列(即位于所述核酸的5'和3'端的序列)。所公开的核苷酸序列的片段和变体也被本发明涵盖。“片段”或“部分”意指全长的核苷酸序列或小于全长的核苷酸序列。

“天然存在的”、“天然的”或“野生型”用于描述可以在自然中发现而区别于人工生产的对象。例如，存在于生物(包括病毒)中的蛋白或核苷酸序列(其可以从自然中的来源分离并且没有通过实验室人员有意地修饰)是天然存在的。

“基因组”指生物的全部遗传材料。

如在本领域中已知，“同一性”是通过比较序列确定的两个或多个多肽序列或两个或多个多核苷酸序列之间的关系。在本领域中，“同一性”还意指多肽或多核苷酸序列之间的序列相关程度，视情况而定，如通过此类序列串之间的匹配所确定的。“同一性”和“相似性”可以通过已知方法方便地计算，包括但不限于以下文献中描述方法：(ComputationalMolecular Biology,Lesk,A.M.编，牛津大学出版社，New York，1988；Biocomputing:Informatics and Genome Projects,Smith,D.W.编，Academic Press，New York，1993；Computer Analysis of Sequence Data，第I部分，Griffin,A.M.和Griffin,H.G.,编，Humana Press,New Jersey,1994；Sequence Analysis in Molecular Biology,vonHeinje,G.,Academic Press,1987；以及Sequence Analysis Primer,Gribskov,M.和Devereux,J.编，M Stockton Press，New York，1991；以及Carillo,H.和Lipman,D.,SIAMJ.Applied Math.,48:1073(1988)。设计确定同一性的优选方法以得到所测试序列之间的最大匹配。在可公开获得的计算机程序中编码确定同一性和相似性的方法。确定两个序列之间的同一性和相似性的优选计算机程序方法包括但不限于，GCG程序包(Devereux,J.等，1984)、BLASTP、BLASTN以及FASTA(Altschul,S.F.等，1990。BLASTX程序可自NCBI和其他来源公开获得(BLAST Manual,Altschul,S.等,NCBI NLM NIH Bethesda,Md.20894；Altschul,S.等，1990)。熟知的Smith Waterman算法也可用于确定同一性。

通过本领域中已知的多种方法制备编码PEDV S1蛋白的氨基酸序列变体的核酸分子。这些方法包括但不限于从天然来源(在天然存在的氨基酸序列变体的情况中)分离或通过寡核苷酸介导的(或定点)诱变、PCR诱变和盒诱变PEDV S1蛋白的早期制备的变体或非变体版的制备。

启动子

“启动子”是指通常在其编码序列上游(5')的核苷酸序列，其通过提供关于RNA聚合酶和其他对于正确转录所需要的因子的识别来控制编码序列的表达。“启动子”包括短DNA序列的最小启动子，其包括TATA框和作用是具体说明转录起始位点的其他序列，所述最小启动子上可添加用于控制表达的调控元件。“启动子”还指包括最小启动子和调控元件的核苷酸序列，其能够控制编码序列或功能性RNA的表达。这种类型的启动子序列包括近端和更远距离的上游元件，后一类元件通常被称为增强子。因而，“增强子”是可刺激启动子活性的DNA序列，并且可以是启动子的内在元件或插入的异源元件以增强启动子的水平或组织特异性。它能够在两个方向(正常方向或翻转方向)运行并且即使当移动到启动子上游或下游时，能够发挥功能。增强子和其他上游启动子元件都结合介导其效应的序列特异性的DNA结合蛋白。启动子可以整个衍生自天然基因，或包括衍生自天然可见的不同启动子的不同元件，或者甚至包括合成的DNA区段。启动子还可以含有蛋白质因子结合所涉及的DNA序列，其响应生理的或发育的条件，控制转录起始的效率。启动子的综述性讨论提供于美国专利号7,501,129中，其以引用方式并入本文。

本发明涵盖分离的或基本上纯化的核酸组合物。在本发明的上下文中，“分离的”或“纯化的”DNA分子或RNA分子是远离其天然环境存在的DNA分子或RNA分子并且因此不是天然产物。分离的DNA分子或RNA分子可以以纯化的形式存在，或者可以在非天然环境，例如像在转基因宿主细胞中存在。例如，“分离的”或“纯化的”核酸分子或其生物活性的部分，在通过重组技术生产时基本上不含其他细胞材料或培养基，或者当化学合成时基本上不含化学前体或其他化学品。在一个实施方案中，“分离的”核酸不含在所述核酸衍生自其的生物的基因组DNA中天然地侧接所述核酸的序列(即位于所述核酸的5'和3'端的序列)。例如，在各种实施方案中，分离的核酸分子可含有小于约5kb、4kb、3kb、2kb、1kb、0.5kb或0.1kb的在所述核酸衍生自其的细胞的基因组DNA中天然地侧接所述核酸分子的核苷酸序列。所公开的核苷酸序列的片段和变体也被本发明涵盖。“片段”或“部分”意指全长的核苷酸序列或小于全长的核苷酸序列。

“天然存在的”、“天然的”或“野生型”用于描述可以在自然中发现而区别于人工生产的对象。例如，存在于生物(包括病毒)中的蛋白或核苷酸序列(其可以从自然中的来源分离并且没有通过实验室人员有意地修饰)是天然存在的。

在某些实施方案中，本发明提供运载体和含有上述启动子的表达盒。“运载体”定义为包括，尤其是任何病毒运载体，以及任何质粒、黏粒、噬菌体或双元运载体，其呈双链或单链、线性或环状形式，可以是或可以不是可自主转移的或可移动的，并且其可以通过融入细胞基因组或在染色体外存在(例如，具有复制起点的自主复制质粒)转化原核或真核宿主。

使用标准连接技术，编码治疗组合物的核酸可被工程化到运载体中，诸如Sambrook和Russell,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold Spring HarborLaboratory Press Cold Spring Harbor,NY(2001)中描述的那些技术。例如，连接可以在20mM Tris-Cl pH 7.5、10mM MgCl2、10mM DTT、33μg/ml BSA、10mM-50mM NaCl中与40μMATP、0.01-0.02(Weiss)单位T4DNA连接酶在0℃(用于“粘性末端”连接)或1mM ATP、0.3-0.6(Weiss)单位T4DNA连接酶在14℃(用于“平末端”连接)完成。分子间的“粘性末端”连接通常在总DNA浓度30-100μg/ml(总终浓度5-100nM)下实施。

在某些实施方案中，本发明提供了含有表达盒的运载体，所述表达盒包含可操作地连接至靶序列(例如PEDV S1蛋白)的启动子以用于疫苗生产。“表达盒”在本文中意指能够指导特定核苷酸序列在恰当宿主细胞中表达的核酸序列，所述表达盒包括可操作地连接至目的核苷酸序列的启动子，所述目的核苷酸序列可操作地连接至终止信号。编码区通常编码目的功能RNA，例如RNAi分子。包括目的核苷酸序列的表达盒可以是嵌合的。

“可操作地连接”指在单一分子片段上核酸或氨基酸序列的连接，从而使得序列之一的功能受另一个所影响。例如，将调节DNA序列称为“可操作地连接至”编码RNA或多肽的DNA序列或“与其连接”，如果这两个序列处于这样的位置，从而使得调节DNA序列影响编码DNA序列的表达(即，编码序列或功能RNA在启动子的转录控制之下)。编码序列可以以有义或反义方向可操作地连接至调节序列。当核酸与另一个核酸序列呈功能关系安置时，所述核酸被“可操作地连接”。一般来说，“可操作地连接”意指所连接的DNA序列是邻接的。然而，增强子不必是连续的。连接是通过连接于适宜的限制位点处来达成。如果所述位点不存在，那么根据常规实践使用合成的寡核苷酸转接头或接头。另外，编码酶的核酸的多个拷贝可一起连接在表达运载体中。这种多个核酸可被接头隔开。

“表达”是指内源性基因或转基因在细胞中的转录和/或翻译。例如，在反义构建体的情况下，表达可仅指反义DNA的转录。此外，表达是指有义(mRNA)或功能RNA的转录和稳定积聚。表达还可以指蛋白的产生。

“表达盒”在本文中意指能够指导特定核苷酸序列在恰当宿主细胞中表达的DNA序列，所述表达盒包括可操作地连接至目的核苷酸序列的启动子，所述目的核苷酸序列可操作地连接至终止信号。它还典型地包括核苷酸序列的适当翻译所要求的序列。编码区通常编码目的蛋白，但是也可能编码目的功能RNA(例如反义RNA或非翻译的RNA，以有义或反义方向)。包含目标核苷酸序列的表达盒可以是嵌合的，这指的是它的至少一种组分相对于它的至少一种其他组分是异源的。表达盒还可以是天然存在的但是已经以用于异源表达的重组体形式来获得的表达盒。这种表达盒将包含连接至目的核苷酸序列的转录起始区。这种表达盒可设置有多个限制性位点，所述限制性位点用于插入将处于调节区的转录调控下的目的基因。表达盒可另外地含有选择性标记基因。

本发明还提供含有本文所述的运载体的哺乳动物细胞。

蛋白质

PEDV S1蛋白可缀合或连接至另一个肽或至多糖。例如，可以利用本领域公知的又被称为“载体”的免疫原性蛋白。可用的有免疫原性蛋白包括钥孔血蓝素(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白、人血清白蛋白、人丙种球蛋白、鸡免疫球蛋白G以及牛丙种球蛋白。可用的免疫原性多糖包括来自其他病原体的多糖，诸如作为疫苗有效的那些多糖。免疫原性多糖或其他病原体的蛋白可缀合至PEDV S1蛋白、连接至PEDV S1蛋白或与PEDV S1蛋白混合。

术语“蛋白”、“肽”和“多肽”在本文中可互换使用。

术语“氨基酸”包括呈右旋或左旋立体异构体的形式的天然氨基酸(例如，Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gln、Gly、His、Hyl、Hyp、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr以及Val)以及非天然氨基酸(例如，磷酸丝氨酸、磷酸苏氨酸、磷酸酪氨酸、羟脯氨酸以及γ-羧基谷氨酸；马尿酸、八氢吲哚-2-羧酸、抑胃酶氨酸(statine)、1,2,3,4,-四氢异喹啉-3-羧酸、青霉胺、鸟氨酸、瓜氨酸、α--甲基-丙氨酸、对-苯甲酰基苯丙氨酸、苯基甘氨酸、炔丙基甘氨酸、肌氨酸和叔-丁基甘氨酸)的残基。术语还包括具有常规氨基保护基团(例如乙酰基或苄氧羰基)的天然和非天然的氨基酸(右旋和左旋立体异构体)以及在羧基末端(例如，作为(C₁-C₆)烷基、苯基或苄基或酰胺；或作为α-甲基苄基酰胺)被保护的天然和非天然氨基酸。其他合适的氨基和羧基保护基团是本领域中技术人员已知的(参见例如，Greene,T.W.；Wutz,P.G.M.,Protecting Groups In Organic Synthesis；第二版，1991，New York，John Wiley&sons公司以及其中引用的文件)。氨基酸可通过羧基末端、氨基末端或通过任何其他方便的附接点例如像通过例如半胱氨酸的硫连接至化合物的其余部分。

本发明涵盖分离的或基本上纯化的蛋白组合物。在本发明的上下文中，“分离的”或“纯化的”多肽是远离其天然环境存在的多肽并且因此不是天然产物。多肽可以以纯化的形式存在，或者可以在非天然环境，例如像在转基因宿主细胞中存在。例如，“分离的”或“纯化的”蛋白或其生物活性的部分，在通过重组技术生产时基本上不含其他细胞材料或培养基，或者当化学合成时基本上不含化学前体或其他化学品。基本上不含细胞材料的蛋白包括具有小于污染蛋白的约30％、20％、10％、5％(按干重计)的蛋白或多肽的制备物。当本发明的蛋白或生物活性部分重组地产生时，优选地培养基表示少于目的化学品的前体或非蛋白的约30％、20％、10％、或5％(按干重计)的。由此编码的所公开的蛋白或部分长度蛋白的片段和变体也被本发明涵盖。“片段”或“部分”意指全长的或小于全长的多肽或蛋白质的氨基酸序列。

分子的“变体”是基本上类似于天然分子的序列的序列。

“分离的”意思是从天然状态发生改变或者去除。例如，在活动物体内天然存在的核酸或肽不是“分离的”，但部分地或完全地从其天然状态的共存物质分离出来的相同核酸或肽是“分离的”。分离的核酸或蛋白质可以大致上纯化的形式存在，或者可存在于非天然环境(例如，宿主细胞)中。除非此处另外具体说明，否则蛋白、病毒粒子复合体、抗体以及形成本发明的主题的其他生物分子被分离或可以被分离。

在肽的上下文中，术语“基本上同一性”是指包含在指定比较窗中与参考序列具有至少70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、或79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、或89％、至少90％、91％、92％、93％、或94％、或95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性的序列的肽。使用Needleman和Wunsch,J.Mol.Biol.48:443(1970)的同源比对算法进行最佳比对。两个肽序列基本上同一的指标是一条肽与针对第二肽产生的抗体有免疫学反应。因此，例如当两条肽仅仅因保守取代而不同时，一条肽基本上与第二肽同一。

佐剂

如本文使用的术语“佐剂”是指免疫应答的非特异性刺激物，或可以在宿主中产生储库(depot)的物质，当分别与本发明的疫苗和药物组合物组合时可以产生甚至更强的免疫应答。疫苗通常含有两种组分：抗原(例如，PEDV S1蛋白或PEDV)和佐剂。抗原是病原体或免疫应答所指向的肿瘤编码的分子结构。为了活化抗原特异性免疫应答，抗原必须存在于适当的免疫刺激微环境中。在某些实施方案中，佐剂通过刺激免疫活化分子诸如促炎细胞因子的产生来创建这种微环境。疫苗的功效取决于抗原和佐剂的类型以及它们被如何施用。在这些组分中实现正确的平衡对引出期望的免疫学结果是重要的。

在某些实施方案中，如本文所述的免疫原性组合物还包含一种或多种佐剂。佐剂是当与免疫原或抗原一起施用时增强免疫应答的物质。细胞因子或淋巴因子的数目显示具有免疫调节活性并且因此可用作佐剂，包括但不限于白介素1-α、1-β、2、4、5、6、7、8以及10、12(参见例如美国专利号5,723,127)、13、14、15、16、17和18(及其突变形式)；干扰素-α、β和γ；粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)(参见，例如美国专利号5,078,996和ATCC保藏号39900)；巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)；粒细胞集落刺激因子(G-CSF)；以及肿瘤坏死因子α和β。可与本文所述的免疫原性组合物一起使用的另外佐剂包括趋化因子，包括但不限于MCP-1、MIP-1α、MIP-1β以及RANTES；粘附分子，诸如选择蛋白，例如，L-选择蛋白、P-选择蛋白和E-选择蛋白；粘蛋白样分子，例如，CD34、GlyCAM-1和MadCAM-1；整合蛋白家族的成员，诸如LFA-1、VLA-1、Mac-1以及p150.95；免疫球蛋白超家族成员，诸如PECAM、ICAM，例如ICAM-1、ICAM-2和ICAM-3、CD2和LFA-3；共刺激分子诸如CD40和CD40L；生长因子，包括血管生长因子、神经生长因子、成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、B7.2、PDGF、BL-1和血管内皮生长因子；受体分子，包括Fas、TNF受体、Flt、Apo-1、p55、WSL-1、DR3、TRAMP、Apo-3、AIR、LARD、NGRF、DR4、DR5、KILLER、TRAIL-R2、TRICK2以及DR6；以及半胱天冬酶(ICE)。

其他佐剂还包括胞壁酰肽，诸如N-乙酰基-胞壁酰-L-苏氨酰-D-异谷氨酰胺(thr-MDP)、N-乙酰基-去甲胞壁酰-L-丙氨酸-2-(1’-2’二棕榈酰基-sn-甘油基-3-羟磷酰氧基)-乙胺(MTP-PE)；水包油型乳剂，诸如MF59(美国专利号6,299,884)(包含5％角鲨烯、0.5％Tween 80和0.5％Span 85(可选地包含多种量的MTP-PE)，使用诸如型号110Y微射流机(microfluidizer)(Microfluidics,Newton,MA))和SAF(包含10％角鲨烯、0.4％Tween 80、5％普朗尼克(pluronic)嵌段聚合物L121和thr-MDP，微射流为亚微米乳剂或涡旋来产生更大颗粒大小的乳剂)；铝盐(明矾)，诸如氢氧化铝、磷酸铝、硫酸招；白槽石(Amphigen)；阿夫立定；L121/角鲨烯；D-交酯-聚交酯/配糖；普朗尼克多元醇；灭活的博德特杆菌属(Bordetella)；皂素，诸如描述于美国专利号5,057,540的Stimulon^TMQS-21(Antigenics,Framingham,MA.)、描述于美国专利号5,254,339中的ISCOMATRIX(CSL公司，Parkville，澳大利亚)和免疫刺激复合物(ISCOMS)；结核分枝杆菌；细菌脂多糖；合成多核苷酸，诸如含有CpG基序的寡核苷酸(例如美国专利号6,207,646)；描述于欧洲专利号1,296,713和1,326,634中的IC-31(Intercell AG,Vienna，奥地利)；百日咳毒素(PT)或其突变体、霍乱毒素或其突变体(例如，美国专利号7,285,281、7,332,174、7,361,355以及7,384,640)；或大肠杆菌(E.coli)不耐热毒素(LT)，尤其是LT-K63、LT-R72(例如，美国专利号6,149,919、7,115,730和7,291,588)。

用于增强免疫应答的合适的佐剂还包括但不限于MPL^TM(3-O-脱酰基单磷酰脂质A，Corixa,Hamilton,MT)，其在美国专利号4,912,094中有所描述。还适用作佐剂的是合成脂质A类似物或氨基烷基葡糖胺磷酸盐化合物(AGP)或其衍生物或其类似物，其可得自Corixa(Hamilton,MT)并且在美国专利号6,113,918中有所描述。一种此类AGP是2-[(R)-3-十四酰基氧基十四酰基氨基]乙基2-脱氧-4-O-膦酰基-3-O-[(R)-3-十四烷酰氧十四烷酰基]-2-[(R)-3-十四酰基氧基十四酰基-氨基]-b-D-吡喃葡萄糖苷，其也被称为529(先前被称为RC529)。这种529佐剂被配制成水性形式(AF)或稳定的乳剂(SE)。

合适的佐剂包括但不限于表面活性剂，例如十六烷基胺、十八烷基胺、溶血卵磷脂、二甲基双十八烷基溴化铵，N，N-双十八烷基-N'-N-双(2-羟乙基-丙烷二胺)、甲氧基十六烷基甘油和普朗尼克多元醇；聚阴离子(polanions)，例如吡喃、硫酸葡聚糖、聚IC、聚丙烯酸、卡波姆(carbopol)；肽，例如胞壁酰二肽、MPL、对甲基甘氨酸、特夫素(tuftsin)、油乳剂、明矾及其混合物。其他可能的佐剂包括大肠杆菌(E.coli)热不稳定肠毒素和霍乱毒素的B肽亚单元。McGhee,J.R.等人，"On vaccine development,"Sem.Hematol.,30:3-15(1993)。最后，可将免疫原性产品并入到脂质体中以用于疫苗制剂或可和缀合至蛋白诸如钥孔血蓝素(KLH)或人血清清蛋白(HSA)或其他聚合物。

本发明的疫苗

在某些实施方案中，本发明提供用于保护哺乳动物免受PEDV感染或治疗PEDV感染的疫苗。

如本文所用，术语“治疗剂”或“治疗复合物”是指对哺乳动物接受者有有益效应的任何药剂或材料。因此，“治疗剂”涵盖具有核酸或蛋白质组分的治疗性和预防性分子。

为了制备疫苗，可分离、冻干和稳定PEDV或PEDV S1蛋白。然后可将PEDV或PEDV S1蛋白调节至适当的浓度，优选地与合适的疫苗佐剂组合并且封装以用于使用。

在某些实施方案中，本发明包含两种或更多种免疫原性多肽。在某些实施方案中，可将一种或多种多肽调节至适当的浓度并且可与任何合适的佐剂、稀释剂、药学上可接受的载体或其任何组合一起配制。本文中使用的短语“药学上可接受的载体”旨在包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂、赋形剂等，这些都与药物的施用相适应。用于药物活性物质的此类介质和药剂的使用为本领域已熟知的。生理上可接受的媒介物可用作载体和/或稀释剂。药学可接受的媒介物应理解是指进入药物组合物或免疫原性组合物的化合物或化合物组合，其不导致副作用并且其使得可以例如促进活性化合物的施用、增加其在体内的寿命和/或其功效、增加其在溶液中的溶解度或另选地增强其保存。这些药学上可接受的媒介物是公知的并且可以由本领域技术人员根据所选活性化合物的性质和施用模式而适应。这些包括但不限于水、林格氏溶液、合适的等渗介质、甘油、乙醇及其他常规溶剂、磷酸盐缓冲盐水等。

如本文所用的“治疗”是指改善给定疾病或病状的至少一种症状和/或预防其发展。

“抗原”是指能够通过抗体结合的分子。抗原另外能够被免疫系统识别和/或能够诱导体液免疫应答和/或细胞免疫应答，从而导致B-和/或T-淋巴细胞活化。抗原可具有一个或多个表位(B和/或T细胞表位)。如本文所用的抗原还可以是若干单个抗原的混合物。“抗原决定簇”是指被B或T淋巴细胞特异性识别的抗原的部分。应答抗原决定簇的B-淋巴细胞产生抗体，而T-淋巴细胞通过效应物功能的增殖和建立应答抗原决定簇，所述效应物功能对于细胞和/或体液免疫性的介导是重要的。

“免疫应答”是指导致B和/或T淋巴细胞和/或以及抗原递呈细胞的活化或增殖的体液免疫应答和/或细胞免疫应答。然而，在一些情况中，免疫应答可具有低强度并且仅当使用根据本发明的至少一种物质时变得可检测。“免疫原性”是指用于刺激活生物体的免疫系统的药剂，从而免疫系统的一种或多种功能增加并且指向免疫原性剂。“免疫原性多肽”是引出细胞和/或体液免疫应答的多肽，所述多肽无论是单独或连接至载体的。优选地，可活化抗原递呈细胞。

“增强”免疫应答的物质是指与没有添加所述物质情况下测量的相同免疫应答相比较，添加所述物质后观察到免疫应答更剧烈，或强化或以任何方式偏离。例如，使用⁵¹Cr释放测定，可测定在免疫过程中使用和不使用所述物质所获得的样品中细胞毒性T细胞的溶胞活性。与不使用所述物质情况下的CTL溶胞活性相比，CTL溶胞活性增强下所述物质的量，被称为增强动物对抗原的免疫应答的足够量。在某些实施方案中，免疫应答增强至少大约2倍，诸如大约3倍或以上。分泌的细胞因子的量或类型也可能改变。另选地，诱导的抗体的量或其亚类也可能改变。

术语“免疫”或“免疫作用”或相关术语，是指赋予对靶抗原或表位产生充分免疫应答(包括抗体和/或细胞免疫，例如效应物CTL)的能力。这些术语不要求产生完全免疫，但是产生的免疫应答要比基线实质上更高。例如，如果在应用本发明方法之后发生针对靶抗原的细胞和/或体液免疫应答，则就可认为哺乳动物针对该靶抗原进行了免疫。

术语“免疫治疗”是指用于治疗疾病、病症或病状的组合物。更具体地讲，术语用于指治疗的方法，其中通过疫苗接种或通过免疫分子转移产生有益的免疫应答。“免疫有效量”是指当引入个体时足以在个体中诱导免疫应答的组合物的量。在主动免疫的语境下，所述术语与“产生免疫的有效量”同义。成为免疫有效的所必需的组合物的量随许多因素而变化，包括组合物、组合物中其他组分的存在、抗原、免疫途径、个体、既往免疫或生理状况等。

术语“表位”是指被单个抗体或T细胞受体识别的基本元件或最小单位，并且因此是指所述抗体或T细胞受体与之结合的特定结构域、区域或分子结构。抗原可由多个表位组成，而半抗原通常可具有少数表位。如本文所用的“基本上相当于”是指将引出至少基本等同于由天然表位产生的应答的免疫应答的表位。对组合物或疫苗的免疫应答是在细胞的宿主中的发展和/或对目标多肽或疫苗的抗体介导的免疫应答。通常，这种应答包括特异性针对目标组合物或疫苗中所包括的一种或多种抗原的受试者产生抗体、B细胞、辅助T细胞、抑制T细胞和/或细胞毒性T细胞。本发明的疫苗还可包括已知增强免疫应答的有效量的免疫佐剂。“有效量”是指实现所需生物作用必需或足够的量。组合物的有效量可为实现这个选定结果的量，并且这种量可按惯例由本领域技术人员确定。例如，用于治疗免疫系统缺陷的有效量可为引起免疫系统活化必需的量，从而导致在暴露于抗原时抗原特异性免疫应答的发展。所述术语还与“足量”同义。任何具体应用的有效量可随例如待治疗的疾病或病状、要施用的具体组合物、受试者的大小和/或疾病或病状的严重性等此类因素而变化。本领域的普通技术人员无需过度实验，便可凭经验确定本发明的具体组合物的有效量。

为了使受试者免疫，肠胃外(通常通过肌内或皮下注射)施用在合适媒介物中的组合物。然而，其他施用方式，诸如口服、鼻内或皮内递送，也是可接受的。

疫苗制剂可含有在媒介物中的有效量的活性成分，有效量容易通过本领域技术人员确定。活性成分通常可在组合物的约1％至约95％(w/w)的范围内，或适当时甚至更高或更低。待施用的量取决于诸如考虑疫苗接种的动物或人受试者的年龄、体重和身体状况的因素。量还可取决于动物免疫系统合成抗体的能力和所需保护的程度。本领域的普通技术人员可通过建立剂量反应曲线的常规试验容易地确立有效剂量。通过以一种或多种剂量施用生物膜肽或其片段，使受试者免疫。可按需施用多剂量以保持对目标细菌的免疫状态。

鼻内制剂可包括既不对鼻粘膜产生刺激也不显著扰乱纤毛功能的媒介物。稀释剂诸如水、盐水或其他已知的物质可与主题发明一起使用。鼻用制剂还可含有防腐剂，诸如但不限于氯代丁醇和苯扎氯铵。表面活性剂可存在以增强目标蛋白质被鼻粘膜吸收。

口服液体制备物可呈例如水性或油性悬浮剂、溶液、乳剂、糖浆或酏剂的形式，或可以片剂形式干燥提供，或以使用前用水或其他合适的媒介物复溶的产品干燥提供。这种液体制备物可以含有常规添加剂，诸如悬浮剂、乳化剂、非水性媒介物(可以包括食用油)或防腐剂。

为了制备疫苗，可分离、冻干和稳定纯化的组合物。然后可将组合物调节至适当的浓度，优选地与合适的疫苗佐剂组合并且封装以用于使用。

制剂和施用方法

在某些实施方案中，将有效量的病毒、疫苗或治疗组合物施用至受试者。“有效量”或“治疗有效量”在本文中可互换使用，并且是指有效实现特定生物学结果的化合物、制剂、材料或组合物的量，如本文中所描述。此类结果可以包括但不限于对病毒感染的抑制，如通过本领域中合适的任何手段所测定的。

在某些实施方案中，施用一定量的疫苗以使受试者免疫。如本文所用，“免疫”或“疫苗接种”在本文中可互换使用，并且旨在用于预防性或治疗效免疫或疫苗接种。

在某些实施方案中，疫苗、治疗组合物或病毒经由肌内、皮内或皮下递送施用。在某些实施方案中，疫苗、治疗组合物或病毒经由粘膜表面，诸如口或鼻内表面施用。在某些实施方案中，疫苗、治疗组合物或病毒经由胸骨内注射或通过使用注入技术施用。

在某些实施方案中，“医药学上可接受”是指就组合物、制剂、稳定性、患者接受性和生物可用性来说，从药理学/毒理学角度患者可接受且从物理/化学角度医药制造化学家可接受的那些性质和/或物质。“药学上可接受的载体”是指不干扰一种或多种活性成分的生物活性效果且对施用至的宿主无毒的介质。

本发明的疫苗和组合物可被配制成药物组合物并且以适合于所选施用途径(即，经口、鼻内、皮内或胃肠外、通过静脉内、肌肉内、局部或皮下途径)的多种形式向哺乳动物宿主(如人患者)施用。

因此，本发明化合物可与药学上可接受的媒介物(如惰性稀释剂或可吸收食用载体)组合来全身性施用，例如经口施用。它们可封闭在硬壳或软壳明胶胶囊中，可压制成片剂，或可直接掺入患者膳食的食物。对于经口治疗性施药，活性化合物可与一种或多种赋形剂组合并且以可摄取片剂、经颊片剂、锭剂、胶囊、酏剂、悬浮液、糖浆、粉片等形式使用。所述组合物和制剂应含有至少0.1％活性化合物。当然组合物和制剂的百分比可变化并且可合宜地在给定单位剂型的约2重量％至约60重量％之间。活性化合物在所述治疗适用组合物中的量是使得将获得有效剂量水平的量。

片剂、锭剂、丸剂、胶囊等还可含有以下各物：粘合剂，如黄蓍树胶、阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂，如磷酸二钙；崩解剂，如玉米淀粉、马铃薯淀粉、海藻酸等；润滑剂，如硬脂酸镁；以及甜味剂，如蔗糖、果糖、乳糖或阿斯巴甜或可添加调味剂，如胡椒薄荷、冬青油或樱桃香精。当单位剂型是胶囊时，除以上类型的材料之外，它也可包含液体载体，如植物油或聚乙二醇。各种其他材料可作为包衣存在或以其他方式修改固体单位剂型的物质形态。举例来说，片剂、丸剂或胶囊可用明胶、蜡、虫胶或糖等包覆。糖浆或酏剂可含有活性化合物、作为甜味剂的蔗糖或果糖、作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、染料和调味剂，如樱桃或甜橙香精。当然，用于制备任何单位剂型的任何材料都应为药学上可接受的并且在所用量下大致上无毒。此外，活性化合物可并入持续释放制剂和装置中。

活性化合物还可通过输注或注射来静脉内或腹膜内施用。可于水中制备活性化合物或其盐的溶液，任选与无毒表面活性剂混合。还可于甘油、液体聚乙二醇、三乙酸甘油酯及其混合物中以及于油中制备分散液。在普通的储存和使用条件下，这些制剂含有防腐剂以防止微生物的生长。

适用于注射或输注的药物剂型可包括无菌水溶液或分散液或任选地囊封于脂质体中的包含活性成分的无菌粉末，所述活性成分适合于临时制备无菌可注射或可输注溶液或分散液。在所有情况下，最终剂型应该在制造和存储条件下处于无菌、流体和稳定状态。液态载体或媒介物可为溶剂或液态分散介质，其包含例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、液态聚乙二醇等)、植物油、无毒甘油酯及其适合的混合物。适当的流动性可例如通过形成脂质体、在分散液的情况下维持所需粒度或使用表面活性剂加以维持。对微生物作用的防止可通过各种抗菌剂和抗真菌剂(例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等)来实现。在许多情况下，将为优选的是包括等渗剂，例如糖、缓冲剂或氯化钠。可注射组合物的延长吸收可通过在组合物中使用延迟吸收的试剂(例如单硬脂酸铝和明胶)来实现。

无菌可注射溶液是通过将在适当溶剂中的所需量的活性化合物与以上列举的各种其他成分(根据需要)合并，随后进行过滤灭菌来制备。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，优选制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术，所述技术产生活性成分外加存在于先前无菌过滤溶液中的任何额外所需成分的粉末。对于局部施用，本发明的化合物可以纯的形式(当它们是液体时)施加。然而，将通常合乎需要的是将它们与皮肤病学上可接受的载体组合，以组合物或制剂形式施用至皮肤，所述载体可为固体或液体。

适用的固体载体包括微细分散的固体，如滑石、粘土、微晶纤维素、二氧化硅、氧化铝等。适用的液体载体包括水、醇或二醇或水-醇/二醇掺合物，其中本发明化合物可任选地借助于无毒表面活性剂在有效水平下溶解或分散于所述载体中。可添加另外的成分诸如芳香剂或抗微生物剂以使给定用途的性质最优化。所得液体组合物可通过用于浸渍绷带和其他敷料的吸收垫施用，或使用泵型喷雾器或气雾剂喷雾器喷射于受影响的区域上。

如合成聚合物、脂肪酸、脂肪酸盐和酯类、脂肪醇、改性纤维素或改性矿物质的增稠剂也可与液态载体一起使用，以便形成用于直接向使用者的皮肤施用的可涂敷糊剂、凝胶剂、软膏剂、皂剂等。

所需剂量可方便地以单个剂量提供或以适当时间间隔施用的分次剂量提供，例如以每天两次、三次、四次或更多次亚剂量提供。亚剂量本身可进一步分成例如多个独立的松散间隔的施用；如多次自吹入器吸入或通过多次滴入眼中。

为了使受试者免疫，肠胃外(通常通过肌内或皮下注射)施用在合适媒介物中的PEDV S1蛋白或PEDV。然而，诸如口服递送或鼻内递送的其他施用方式也是可接受的。疫苗制剂将含有在媒介物中的有效量的活性成分。

制剂可含有在媒介物中的有效量的活性成分，有效量容易通过本领域技术人员确定。“有效量”意指指示实现所需生物作用必需或足够的化合物的量。活性成分通常可在组合物的约1％至约95％(w/w)的范围内，或适当时甚至更高或更低。用于任何具体应用的量可根据如病状的严重性的此类因素而改变。待施用的量取决于诸如考虑疫苗接种的动物和同时治疗的类型的因素，如果有的话。量还可取决于动物免疫系统合成抗体的能力和所需保护的程度。典型地，体外使用的剂量可以对用于原位施用药物组合物的量提供有用的指导，并且动物模型可以用来确定治疗具体病症的有效剂量。多种考虑描述于例如Gilman等人编，Goodman And Gilman's:The Pharmacological Bases of Therapeutics，第8版，Pergamon Press,1990；以及Reminpton's Pharmaceutical Sciences,第17版MackPublishing Co.,Easton,Pa.,1990，其中每个以引用的方式并入本文。另外，本领域的普通技术人员可通过建立剂量反应曲线的常规试验容易地确立有效剂量。通过以一种或多种剂量施用组合物，使受试者免疫。可按需施用多剂量以保持对靶的免疫状态。例如，在约四周的时间段后，初始剂量后面可跟着加强剂量以增强免疫原性应答。还可施用进一步的加强剂量。可间隔例如，约1、2、3、4、5、6或7、14或21天多(例如，2、3、4或5)次施用组合物。

鼻内制剂可包括既不对鼻粘膜产生刺激也不显著扰乱纤毛功能的媒介物。稀释剂诸如水、盐水或其他已知的物质可与主题发明一起使用。鼻用制剂还可含有防腐剂，诸如但不限于氯代丁醇和苯扎氯铵。表面活性剂可存在以增强目标蛋白质被鼻粘膜吸收。

口服液体制备物可呈例如水性或油性悬浮剂、溶液、乳剂、糖浆或酏剂的形式，或可以片剂形式干燥提供，或以使用前用水或其他合适的媒介物复溶的产品干燥提供。这种液体制备物可以含有常规添加剂，诸如悬浮剂、乳化剂、非水性媒介物(可以包括食用油)或防腐剂。

因此，本发明的组合物可与药学上可接受的媒介物(如惰性稀释剂或可吸收食用载体)组合来全身性施用，例如经口施用。它们可封闭在硬壳或软壳明胶胶囊中，可压制成片剂，或可直接与患者膳食的食物合并。对于经口治疗性施药，本发明的组合物可与一种或多种赋形剂组合并且以可摄取片剂、经颊片剂、锭剂、胶囊、酏剂、悬浮液、糖浆、粉片等形式使用。这类制备物应含有至少0.1％的本发明的组合物。当然组合物的百分比可变化并且可合宜地在给定单位剂型的约2重量％至约60重量％之间。本发明的组合物在这种治疗适用制备物中的量是使得将获得有效剂量水平的量。

本发明的组合物的适用剂量可通过比较它们在动物模型中的体外活性与体内活性来确定。治疗中所需的本文描述的组合物的量可根据施用途径和受试者的年龄和情况而变化，并且最终将由护理兽医或临床医生确定。

所需剂量可方便地以单个剂量提供或以适当时间间隔施用的分次剂量提供，例如以每天两次、三次、四次或更多次亚剂量提供。亚剂量本身可进一步分成例如多个独立的松散间隔的施用；如多次自吹入器吸入或通过多次滴入眼中。

本文所引用的所有公开案、专利和专利申请均以引用的方式并入本文中。尽管在前面的说明中，本发明按照其某些实施方案进行了描述，并且许多细节是为了举例说明的目的而被阐述，对本领域的技术人员将是显而易见的是，本发明容许另外的实施方案，并且在此描述的某些细节可以进行相当大的变化，而不脱离本发明的基本原理。

在描述本发明的上下文中，术语“一个”和“一种”和“所述”以及“或”以及类似的指示的使用意图解释为涵盖单数和复数两者，除非在本文另外地指示或明显地与上下文矛盾。因此，如提到“一种目标多肽”包括多个此类多肽并且如提到“试剂”包括提到本领域的技术人员所了解的一种或多种药剂及其等效物等。

术语“包含”、“具有”、“包括”和“含有”应解释为开放式术语(即，意味着“包括但不限于”)，除非另外指明。除非本文另外指明，否则本文中值范围的列举仅仅意图用作个别地表示属于所述范围的各单独值的简要方法，并且犹如本文个别描述地那样将各单独值并入到说明书中。可按任何适合的顺序来执行本文所述的全部方法，除非本文另外指明或上下文明显矛盾。本文所提供的任何以及全部实施例或示例性语言(例如，“如”)的使用仅意图更好地说明本发明并且除非另外要求，否则不会对本发明的范围施加限制。本说明书中的语言不应解释为将任何非要求的元素指示为实践本发明所必需。

本文中描述了本发明的实施方案，其包括为发明人所知用来执行本发明的最佳模式。在阅读了上述描述后，这些所述实施方案的变化对本领域的技术人员将变得显而易见。发明人希望技术人员视情况采用此类变体，并且发明人意图以不同于如本文所特别描述的方式来实践本发明。因此，本发明包括在随附的适用法律允许的权利要求中叙述的主题的所有修改和等效物。此外，除非本文另有指示或与上下文明显矛盾，否则在所有可行变体中的上述元素的任何组合都涵盖在本发明内。

关于值的范围时，本发明涵盖在范围的上限与下限之间的每个中间值，除非上下文另有明确规定，否则精确到下限单位的十分之一。本发明还涵盖任意其他指出的中间值。此外，本发明还涵盖排除范围的上限和下限中的一个或两个的范围，除非明确不包括在所述范围内。

除非另有说明，表达说明书和权利要求书中使用的成分、反应条件、纯度％、多肽和多核苷酸长度等的量的所有数被术语“约”修饰。因此，说明书和权利要求书中所陈述的数值参数都是近似值，所述近似值可以根据本发明的所需性质而变化。在最低限度并且不试图限制对权利要求书范围的等价范围的原则的应用，每个数值参数均应当应用普通四舍五入技术，至少根据报告的有效数字的数值来解读。但是，尽可能精确地报告具体实例中陈述的数值。然而，任何数值固有地包含来自其实验测量值的标准偏差的某些误差。

除非另外定义，本文使用的所有技术术语和科学术语的含义是本发明所属领域技术人员一般理解的那些含义。本领域技术人员还将理解，与本文所描述的方法和材料类似或等同的任何方法和材料可用于实践或测试本发明。此外，本文中提到的所有出版物均以引用的方式整体并入。

序列表

<110> 明尼苏达大学董事会

<120> 猪流行性腹泻病毒疫苗及其使用方法

<130> 09531.389WO1

<150> 61/951,439

<151> 2014-03-11

<160> 4

<170> 专利版本 3.5

<210> 1

<211> 27990

<212> DNA

<213> 猪流行性腹泻病毒

<400> 1

ctttttctag actcttgtct actcaattca actaaacgaa attttgtcct tccggccgca 60

tgtccatgct gctggaagct gacgtggaat ttcattaggt ttgcttaagt agccatcgca 120

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aggatagtgg tcattatgtc actaactttt atgatgctgc tatggctatt gatggttatg 4020

gtcgtcatca gataaagtat gacacactga acactatttg tgttaaagac gttaattgga 4080

cagcaccttt tgtcccagac gttgagcctg tattggagcc tgttgtcaaa cctttctatt 4140

cttataagaa tgttgatttt taccaaggag attttagtga ccttgttaaa cttccatgtg 4200

attttgttgt taatgctgca aatgagaatt tgtctcacgg tggcggcata gcaaaggcca 4260

ttgatgttta taccaagggc atgttgcaga agtgctcgaa tgattacatt aaagcacacg 4320

gtcccattaa agttggacgt ggtgtcatgt tggaggcatt aggtcttaag gtctttaatg 4380

ttgttggtcc acgtaagggt aagcatgcac ctgagcttct tgttaaggct tataagtccg 4440

tttttgctaa ttcaggtgtt gctcttacac ctttgattag tgttggaatt tttagtgttc 4500

ctttggaaga atctttatct gcttttcttg catgtgttgg tgatcgccac tgtaagtgct 4560

tttgttatag tgacaaagag cgcgaggcga tcattaatta catggatggc ttggtagatg 4620

ctattttcaa agatgcgctt gttgatacta ctcctgtcca ggaagatgtt caacaagttt 4680

cacaaaaacc agttttgcct aattttgaac ctttcaggat tgaaggtgct catgctttct 4740

atgagtgcaa ccctgaaggt ttgatgtcat taggtgctga taagctggtg ttgtttacaa 4800

attccaattt ggatttttgt agcgttggta agtgtcttaa caatgtgacc ggcggtgcat 4860

tgcttgaagc cataaatgta tttaaaaaga gtaacaaaac agtgcctgct ggcaactgtg 4920

ttacttttga gtgtgcagac atgatttcta ttactatggt agtattgcca tctgatggtg 4980

atgctaatta tgacaaaaat tatgcacgcg ccgtcgtcaa ggtatctaag cttaaaggca 5040

agttattgct tgctgttggt gatgccacgt tgtattccaa gttgtcccat ctcagcgtgg 5100

taggtttcgt atccacacct gatgatgtgg agcgtttcta cgcaaataag agtgtggtta 5160

ttaaagtcac tgaggataca cgtagtgtta aggctgttaa agtagaatcc actgttactt 5220

atggacaaca aattggacct tgtcttgtta atgacaccgt tgtcacagac aacaaacctg 5280

ttgttgctga tgttgtagct aaggttgtac caagtgctaa ttgggattca cattatggtt 5340

ttgataaggc tggtgagttc cacatgctag accatactgg gtttgtcttt cctagtgaag 5400

ttgttaacgg taggcgtgtg cttaaaacca cagataataa ctgttgggtt aatgttacat 5460

gtttacaatt acagtttgct agatttaggt tcaagtcagc aggtctacag gctatgtggg 5520

agtcctattg tactggtgat gttgctatgt ttgtgcattg gttgtactgg cttactggtg 5580

ttgacaaagg tcagcctagt gattcagaaa atgcacttaa catgttgtcc aagtacattg 5640

tttctgctgg ttctgtcact attgaacgtg tcacgcatga cggctgttgt tgtagtaagc 5700

gtgttgtcac tgcaccagtt gtgaatgcta gcgtattgaa gcttggcgtc gaggatggtc 5760

tttgtccaca tggtcttaac tacattgaca aagttgttgt agttaaaggt actacaattg 5820

ttgtcaatgt tggaaaacct gtagtggcac catcacacct ctttcttaag ggtgtttctt 5880

acacaacatt cctagataat ggtaacggtg ttgtcggcca ttatactgtt tttgatcatg 5940

acactggtat ggtgcatgat ggagatgctt ttgtaccggg tgatctcaat gtatctcctg 6000

ttacaaatgt tgtcgtctca gagcagacgg ctgttgtgat taaagaccct gtgaagaaag 6060

tagagttaga cgctacaaag ctgttagaca ctatgcatta tgcatcggaa agattctttt 6120

cctttggtga ttttatgtca cgtaatttaa ttacagtgtt tttgtacatc cttagcattt 6180

tgggtctctg ttttagggcc tttcgtaaga gggatgttaa agttctagct ggtgtacccc 6240

aacgtactgg tattatattg cgtaaaagtg tgcgctataa tgcaaaggcg ttgggtgtct 6300

tcttcaagct aaaactttat tggttcaaag ttcttggtaa gtttagtttg ggtatttatg 6360

cattgtatgc attactattc atgacaatac gctttacacc tataggtggc cctgtttgtg 6420

atgatgttgt tgctggttat gctaattcta gttttgacaa gaatgagtat tgcaacagtg 6480

ttatttgtaa ggtctgtctc tatgggtacc aggaactttc agacttctct cacacacagg 6540

tagtatggca acaccttaga gacccattaa ttggtaatgt gatgcctttc ttttatttgg 6600

catttctggc aatttttggg ggtgtttatg taaaggctat tactctctat tttattttcc 6660

agtaccttaa cattcttggt gtgtttttgg gcctacaaca gtccatttgg tttttgcagc 6720

ttgtgccttt tgatgtcttt ggtgacgaga tcgtcgtctt tttcatcgtt acacgcgtat 6780

tgatgttcct taagcatgtt ttccttggct gcgataaggc atcttgtgtg gcttgctcta 6840

agagtgctcg ccttaagcgc gttcctgtcc agactatttt tcagggtact agcaaatcct 6900

tctacgtaca tgccaatggt ggttctaagt tctgtaagaa gcacaatttc ttttgtttaa 6960

attgtgattc ttatggtcca ggctgcactt ttattaatga cgtcattgca actgaagttg 7020

gtaatgttgt caaacttaat gtgctaccga caggtcctgc cactattctt attgacaagg 7080

ttgaattcag taatggtttt tactatcttt atagtggtga cacattttgg aagtacaact 7140

ttgacataac agatagcaaa tacacttgca aagaatcact taaaaattgt agcataatca 7200

cagactttat tgtttttaac aataatggtt ccaatgtaaa tcaggttaag aatgcatgtg 7260

tttatttttc acagatgctt tgtaaacctg ttaagttagt ggactcagcg ttgttggcca 7320

gtttgtctgt tgattttggt gcaagcttac atagtgcttt tgttagtgtg ttgtcgaata 7380

gttttggcaa agatctgtca agttgtaatg acatgcagga ttgcaagagc acattgggtt 7440

ttgatgatgt accattggat acctttaatg ctgctgttgc tgaggctcat cgttacgatg 7500

tcctcttgac tgacatgtcg ttcaacaatt ttaccaccag ttatgcaaaa ccagaggaaa 7560

aatttcccgt ccatgacatt gccacgtgta tgcgtgtagg tgccaagatt gttaatcata 7620

acgttcttgt caaggatagt atacctgtgg tgtggcttgt acgtgatttc attgcccttt 7680

cggaagaaac taggaagtac attattcgta cgactaaagt taagggtata accttcatgt 7740

tgacctttaa tgattgtcgt atgcacacta ccatacctac tgtttgcatt gcaaataaga 7800

agggtgcagg tcttcctagt ttttcaaagg ttaagaaatt cttctggttt ttgtgtctgt 7860

tcatggttgc tgttttcttt gcactaagct ttcttgattt tagtactcag gttagcagtg 7920

atagcgatta tgacttcaag tatattgaga gtggccagtt gaagactttt gacaatccac 7980

ttagttgtgt gcataatgtc tttagtaact tcgaccagtg gcatgatgcc aagtttggtt 8040

tcacccccgt caacaatcct agttgtccta tagtcgttgg tgtatcagac gaagctcgca 8100

ctgttccagg tatyccagca ggtgtttatt tagctggtaa aacacttgtt tttgctatta 8160

acaccatttt tggtacatct ggtttgtgct ttgatgctag tggcgttgct gataagggcg 8220

cttgcatttt taattcggct tgcaccacat tatctggttt gggtggaact gctgtctact 8280

gttataagaa tggtctagtt gaaggtgcta aactttatag tgagttggca cctcatagct 8340

actataaaat ggtagatggt aatgctgtgt ctttacctga aattatttca cgcggctttg 8400

gcatccgtac tatccgtaca aaggctatga cctactgtcg cgttggccag tgtgtgcaat 8460

ctgcagaagg tgtttgtttt ggcgccgata gattctttgt ctataatgca gaatctggtt 8520

ctgactttgt ttgtggcaca gggctcttta cattgttgat gaacgttatt agtgtttttt 8580

ccaagacagt accagtaact gtgttgtctg gtcaaatact ttttaattgc attattgctt 8640

ttgctgctgt tgcggtgtgt ttcttattta caaagtttaa gcgcatgttc ggtgatatgt 8700

ctgttggcgt tttcactgtc ggtgcttgta ctttgttgaa caatgtttct tacattgtaa 8760

cacagaacac acttggcatg ttgggctatg caactttgta cttcttgtgc actaaaggtg 8820

ttagatatat gtggatttgg catttgggat ttttgatctc atatatactt attgcaccat 8880

ggtgggtttt gatggtttat gccttttcgg ccatttttga gtttatgcct aaccttttta 8940

agcttaaggt ttcaacacaa ctttttgagg gtgacaagtt cgtaggctct tttgaaaatg 9000

ctgcagcagg tacatttgtg cttgatatgc atgcctatga gagacttgcc aactctatct 9060

caactgaaaa actgcgtcag tatgctagta cttacaataa gtacaagtat tattcaggca 9120

gtgcttcaga ggctgattac aggcttgctt gttttgccca tttggccaag gctatgatgg 9180

attatgcttc taatcacaat gacacgttat acacaccacc cactgtgagt tacaattcaa 9240

ctctacaggc tggcttgcgt aagatggcac aaccatctgg tgttgttgag aagtgcatag 9300

ttcgtgtttg ctatggtaat atggctctta atggcctatg gcttggtgat actgttatgt 9360

gcccacgcca tgttatagcg tctagtacta ctagcactat agattatgac tatgcccttt 9420

ctgttttacg cctccacaac ttctccattt catctggtaa tgttttccta ggtgttgtgg 9480

gtgtaaccat gcgaggtgct ttgttgcaga taaaggttaa tcaaaacaat gtccacacgc 9540

ctaagtacac ctatcgcaca gttagaccag gtgaatcttt taatatcttg gcgtgctatg 9600

atggtgctgc agctggtgtt tatggcgtta acatgcgctc taattacact attagaggct 9660

cgttcattaa tggcgcttgt ggttcacctg gttataatat taacaatggt accgttgagt 9720

tttgctattt acatcagctt gaacttggtt caggctgtca tgttggtagc gacttagatg 9780

gtgttatgta tggtggttat gaggaccaac ctactttgca agttgaaggc gctagtagtc 9840

tgtttacaga gaatgtgttg gcatttcttt atgcagcact cattaatggt tctacctggt 9900

ggcttagttc ttctaggatt gctgtagaca ggtttaatga gtgggctgtt cataatggta 9960

tgacaacagt aggtaatact gattgctttt ctattcttgc tgctaagact ggtgttgatg 10020

tacaacgttt gttggcctca atccagtctc tgcataagaa ttttggtgga aagcaaattc 10080

ttggctatac ctcgttgaca gatgagttta ctacaggtga agttatacgt caaatgtatg 10140

gcgttaatct tcagagtggt tatgtttcac gcgcctgcag aaatgtcttg ctggttggtt 10200

cttttctgac tttcttttgg tcagaattag tttcctacac taagttcttt tgggtaaatc 10260

ctggttatgt cacacctatg tttgcgtgtt tgtcattgct gtcctcactt ttgatgttca 10320

cactcaagca taagacattg ttcttccagg tctttctaat acctgctctg attgttacat 10380

cttgcattaa tttggcattt gatgttgaag tctacaacta tttggcagag cattttgatt 10440

accatgtttc tctcatgggt tttaatgcac aaggtcttgt taacatcttt gtctgctttg 10500

ttgttaccat tttacacggc acatacacat ggcgcttttt taacacacct gtgagttctg 10560

tcacttatgt ggtagctttg atgactgcgg catataacta tttttacgct agtgacattc 10620

ttagttgtgc tatgacacta tttgctagtg tgactggcaa ctggttcgtt ggtgctgttt 10680

gttataaagc tgctgtttat attgccttga gatttcctac ttttgtggct atttttggtg 10740

atattaagag tgttatgttc tgttaccttg tgttgggtta ttttacctgt tgtttctacg 10800

gtattctcta ctggttcaac aggtttttta aggttagtgt aggtgtctat gactatactg 10860

ttagtgctgc tgagtttaag tatatggttg ctaacggcct acgtgcacca actggaacac 10920

ttgattcact acttctgtct gccaaattga ttggtattgg tggtgagcgg aatattaaga 10980

tttcttccgt tcagtctaaa ctgactgata ttaagtgtag taacgttgtg cttttaggct 11040

gtctctctag catgaatgtc tcagcaaatt caacagaatg ggcctattgt gttgacttgc 11100

ataacaagat caacttgtgt aatgacccag aaaaagcgca ggaaatgcta cttgctttgt 11160

tggcattttt ccttagtaag aatagtgctt ttggtttgga tgacttattg gaatcctatt 11220

ttaatgacaa tagtatgttg cagagtgttg catctactta tgtcggtttg ccttcttatg 11280

tcatttatga aaatgcacgc caacagtatg aagatgctgt taataatggt tctccacctc 11340

agttggttaa gcaattgcgc catgccatga atgtagcaaa gagcgaattt gaccgtgagg 11400

cttctactca gcgtaagctt gatagaatgg cggaacaggc tgcagcacag atgtacaaag 11460

aggcaagagc agttaatagg aagtccaaag ttgtaagtgc tatgcattca ctgctttttg 11520

gtatgttgag acgtttggac atgtcttctg tagacaccat tctcaacttg gcaaaggatg 11580

gggttgtacc tctgtctgtc ataccggcag tcagtgctac taagcttaac attgttactt 11640

ctgatatcga ttcttataat cgtatccagc gtgagggatg tgtccattac gctggtacca 11700

tttggaatat aattgatatc aaggacaatg atggcaaggt ggtacacgtt aaggaggtaa 11760

ccgcacagaa tgctgagtcc ctgtcatggc ccctggtcct tgggtgtgag cgtattgtca 11820

agctccagaa taatgaaatt attcctggta agctgaagca gcgctccatt aaggcagaag 11880

gagatggcat agttggagaa ggtaaggcac tttacaataa tgagggtgga cgtactttta 11940

tgtatgcttt catctcggac aaaccggacc tgcgtgtagt taagtgggag ttcgatggtg 12000

gttgtaacac tattgagcta gaaccaccac gtaagttctt ggtggattct cctaatggtg 12060

cacagatcaa gtatctctac tttgttcgta accttaacac gttacgtagg ggtgctgttc 12120

ttggctacat aggtgccact gtacgcttgc aggctggtaa acaaacagaa caggctatta 12180

actcttcatt gttgacactt tgcgctttcg ctgtggatcc tgctaagacc tacatcgatg 12240

ctgtcaaaag tggtcacaaa ccagtaggta actgcgttaa gatgttggcc aatggttctg 12300

gtaatggaca agctgttact aatggtgtgg aggctagtac taaccaggat tcatacggtg 12360

gtgcttccgt gtgtctatat tgtagagcac atgttgagca tccatctatg gatggttttt 12420

gcagactgaa aggcaagtac gtacaggtgc cactaggtac agtggatcct atacgttttg 12480

tacttgagaa tgacgtttgc aaggtctgtg gttgttggct ggctaatggc tgcacttgtg 12540

acagatccat tatgcaaagc actgatatgg cttatttaaa cgagtacggg gctctagtgc 12600

agctcgacta gagccctgta acggtactga tacacaacat gtgtatcgtg cttttgacat 12660

ctacaacaag gatgttgctt gtctaggtaa attcctcaag gtgaactgtg ttcgcctgaa 12720

gaatttggat aagcatgatg cattctatgt tgtcaaaaga tgtaccaagt ctgcgatgga 12780

acacgagcaa tccatctata gcagacttga aaagtgtgga gccgtagctg aacacgattt 12840

cttcacttgg aaggatggtc gtgcaatcta tggtaacgtt tgtagaaagg atcttaccga 12900

gtatactatg atggatttgt gttacgcttt acgtaacttt gatgaaaaca attgcgatgt 12960

tcttaagagc attttaatta aggtaggcgc ttgtgaggag tcctacttca ataataaagt 13020

ctggtttgac cctgttgaaa atgaagacat tcatcgtgtt tatgcattgt taggtaccat 13080

tgtttcacgt gctatgctta aatgcgttaa gttctgtgat gcaatggttg aacaaggtat 13140

agttggtgtt gtcacattag ataatcagga tcttaatggt gatttttatg attttggtga 13200

ttttacttgt agcatcaagg gaatgggtat acccatttgc acatcatatt actcttatat 13260

gatgcctgtt atgggtatga ctaattgcct tgctagtgag tgttttgtta agagtgatat 13320

atttggtgag gatttcaagt catatgacct gctggaatat gatttcacgg agcataagac 13380

agcactcttc aacaagtatt tcaagtattg gggactgcaa taccacccta actgtgtgga 13440

ctgcagtgat gagcagtgca tagttcactg tgccaacttc aatacgttgt tttccactac 13500

tatacctatt acggcatttg gacctttgtg tcgcaagtgt tggattgatg gtgttccact 13560

ggtaactaca gctggttatc attttaaaca gttaggtata gtttggaaca atgacctcaa 13620

cttacactct agcaggctct ctattaacga actactccag ttttgtagtg atcctgcatt 13680

gcttatagca tcatcaccag cccttgttga tcagcgtact gtttgctttt cagttgcagc 13740

gctaggtaca ggtatgacta accagactgt taaacctggc catttcaata aggagtttta 13800

tgacttctta cttgagcaag gtttcttttc tgagggctct gagcttactt taaagcactt 13860

cttctttgca cagaagggtg atgcagctgt taaggatttt gactactata ggtataatag 13920

acctactgtt ctggacattt gccaagctcg cgtcgtgtat caaatagtgc aacgctattt 13980

tgatatttac gaaggtggtt gtatcactgc taaagaagtg gttgttacaa accttaacaa 14040

gagcgcaggt tatcctttga acaagtttgg taaagctggt ctttactatg agtctttatc 14100

ctatgaggaa caggatgaac tttatgctta tactaagcgt aacatcctgc ccactatgac 14160

acagctcaac cttaaatatg ctataagtgg caaagaacgt gcacgcacag tgggtggtgt 14220

ttcgcttttg tcaaccatga ctactcggca gtatcaccag aaacacctta agtccatagt 14280

taatactagg ggcgcttcgg ttgttattgg tactactaag ttttatggtg gttgggacaa 14340

tatgcttaag aaccttattg atggtgtcga aaatccgtgt cttatgggtt gggattaccc 14400

aaagtgcgac agagcactgc ccaatatgat acgcatgatt tcagccatga ttttaggctc 14460

taagcacacc acatgctgca gttccactga ccgctttttc aggttgtgca atgaattggc 14520

tcaagtcctt actgaggttg tttattctaa tggaggtttt tatttgaagc caggtggtac 14580

tacctctggt gatgcaacca ccgcatatgc aaactcagtt ttcaatatct tccaagcagt 14640

aagtgccaat gttaacaaac ttcttagtgt tgacagcaat gtctgtcata atttagaagt 14700

taagcaattg cagcgtaagc tttatgagtg ctgttataga tcaactaccg tcgatgacca 14760

gttcgtcgtt gagtattatg gttacttgcg taaacatttt tcaatgatga ttctttctga 14820

tgatggcgtt gtttgttaca acaatgacta tgcatcactt ggttatgtcg ctgatcttaa 14880

cgcattcaag gctgttttgt attaccagaa caatgtcttc atgagcgcct ctaaatgttg 14940

gatcgagcct gacattaata aaggtcctca tgaattttgc tcgcagcata ctatgcagat 15000

tgtcgataaa gatggtactt actacctacc ttaccctgat ccttcaagaa tcctctctgc 15060

aggtgtgttt gttgacgacg ttgttaaaac tgatgcagtt gtattgcttg aacgttatgt 15120

gtcattggct atagatgcct acccgttatc taagcatgaa aaccctgaat ataagaaggt 15180

gttttatgtg cttttggatt gggttaagca cctgtataaa actttgaatg ctggtgtgtt 15240

agagtctttt tctgtcacac ttttggaaga ttctactgct aaattctggg atgagagctt 15300

ttatgccaac atgtatgaga aatctgcagt tttgcaatct gcagggcttt gtgttgtttg 15360

tggctctcaa actgttttac gttgtggtga ttgtctacgg cgtcctatgc tttgtactaa 15420

gtgtgcttat gatcatgtca ttggaacaac tcacaagttc attttggcta tcactccata 15480

tgtgtgttgt gcttcagatt gtggtgtcaa tgatgtaact aagctctact taggtggtct 15540

tagttattgg tgtcatgaac acaagccacg tcttgcattc ccgttgtgtt ctgctggtaa 15600

tgtttttggt ttgtacaaaa attctgctac cggctcaccc gatgttgagg actttaatcg 15660

cattgctaca tccgattgga ctgatgtttc tgactacagg ttggcaaatg atgtcaaaga 15720

ctcattgcgt ctatttgcag cggaaactat caaggccaag gaggagagcg ttaagtcatc 15780

ctacgcttgt gcaacactac atgaggttgt aggacctaaa gagttgttgc tcaaatggga 15840

agtcggcaga cccaaaccac ctcttaatag aaattcggtt ttcacttgtt atcatataac 15900

gaagaacacc aaatttcaaa tcggtgagtt tgtgtttgag aaggcagaat atgataatga 15960

tgctgtaaca tataaaacta ccgccacaac aaaacttgtt cctggcatgg tttttgtgct 16020

tacctcacat aatgttcagc cattgcgcgc accgaccatt gctaatcaag aacgttattc 16080

cactatacat aagttgcacc ctgcttttaa catacctgaa gcttattcta gcttagtgcc 16140

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taaatctcac tgtgttatag ggctaggttt gtactatcca ggtgcacgta tagtgtttac 16260

agcttgttct catgcagcgg tcgattcact ttgtgtgaaa gcctccactg cttatagcaa 16320

tgacaaatgt tcacgcatca taccacagcg tgctcgtgtt gagtgttatg acggtttcaa 16380

gtctaataat actagtgctc agtacctttt ctccactgtc aatgctttgc cagagtgcaa 16440

tgcggacatt gttgtggtgg atgaggtttc tatgtgcact aattatgact tgtctgtcat 16500

aaatcagcgc atcagctata ggcatgtagt ctatgttggt gaccctcaac agctgcctgc 16560

accacgtgtt atgatttcac gtggtacttt ggaaccaaag gactacaacg ttgtcactca 16620

acgcatgtgt gcccttaagc ctgatgtttt cttgcacaag tgttatcgct gtcctgctga 16680

gatagtgcgc actgtgtctg agatggtcta tgaaaaccaa ttcattcctg tgcacccaga 16740

tagcaagcag tgttttaaaa tcttttgcaa gggtaatgtt caggttgaca atggttcaag 16800

catcaatcgc aggcaattgg atgttgtgcg tatgtttttg gctaaaaacc ctaggtggtc 16860

aaaggctgtt tttatttctc cttataacag ccagaattat gttgccagcc gcatgctagg 16920

tttacaaatt cagacagttg actcatccca gggtagtgag tatgactatg tcatttatac 16980

acaaacttca gatactgccc atgcctgtaa tgttaacagg tttaatgttg ccatcacaag 17040

ggctaagaaa ggcatattat gtataatgtg cgataggtcc ctttttgatg tgcttaaatt 17100

ttttgagctt aaattgtctg atttgcaggc taatgagggt tgtggtcttt ttaaagactg 17160

tagcagaggt gatgatctgt tgccaccatc tcacgctaac accttcatgt ctttagcgga 17220

caattttaag actgatcaag atcttgctgt tcaaataggt gttaatggac ccattaaata 17280

tgagcatgtt atctcgttta tgggcttccg ttttgatatc aacataccca accatcacac 17340

tctcttttgc acacgcgact ttgccatgcg caatgttaga ggttggttgg gttttgacgt 17400

tgaaggagca catgttgttg gctctaacgt cggtacaaat gtcccattgc aattagggtt 17460

ttctaacggt gttgattttg ttgtcagacc tgaaggttgc gttgtaactg agtctggtga 17520

ctacattaaa cccgtcagag ctcgtgctcc accaggggaa caatttgcac accttttgcc 17580

tctacttaaa cgcggccaac catgggatgt ggttcgtaag cgtatagtgc aaatgtgtag 17640

tgactacctg gctaacctat cagacatact aatttttgtg ttgtgggctg gtggtttgga 17700

gttgacaact atgcgttact ttgtcaagat tggaccaagc aagagttgtg attgtggtaa 17760

ggttgctact tgttacaata gtgcgctgca tacgtactgt tgtttcaaac atgcccttgg 17820

ttgtgattac ctgtacaatc catactgtat tgatatacag cagtggggat acaagggatc 17880

acttagcctt aaccaccatg agcattgtaa tgtacataga aacgagcatg tggcttctgg 17940

tgatgccata atgactcgct gtctagccat acatgattgc tttgtcaaga acgttgactg 18000

gtccatcaca tacccattta ttggtaatga ggctgttatt aataagagcg gccgaattgt 18060

gcaatcacac actatgcggt cagttcttaa gttatacaat ccaaaagcca tatatgatat 18120

tggcaaccct aagggcatta gatgtgccgt aacggatgct aagtggttct gctttgacaa 18180

gaatcctact aattctaatg tcaagacatt ggagtatgac tatataacac acggccaatt 18240

tgatgggttg tgcttgtttt ggaattgcaa tgtggacatg tatccagaat tctctgtggt 18300

ctgtcggttt gacactcgct gtaggtcacc actcaacttg gagggttgta atggtggttc 18360

actgtatgtt aataatcatg cattccatac accggctttt gacaagcgtg cttttgccaa 18420

gttgaagcca atgccatttt tcttctatga tgatactgag tgtgacaagt tacaggactc 18480

tataaactac gttcctctta gggctagtaa ttgcattact aaatgtaatg ttggtggagc 18540

tgtctgtagt aagcattgtg ctatgtacca tagctatgtt aatgcttaca acacctttac 18600

gtcggcgggc tttacgattt gggtgcccac ttcgtttgac acctacaatc tgtggcagac 18660

atttagtaac aacttgcaag gtcttgagaa cattgctttc aatgtcgtaa agaaaggatc 18720

ttttgttggt gctgaaggtg agcttcctgt agctgtggtt aatgacaaag tgctcgttag 18780

agatggtact gttgatactc ttgttttcac aaacaagaca tcactaccca ctaacgtagc 18840

ttttgagttg tatgccaagc gtaaggtagg actcacccca cccattacga tcctacgtaa 18900

cttgggtgtt gtttgcacat ctaagtgtgt catttgggac tatgaagccg aacgtccact 18960

tactactttt acaaaggatg tctgtaaata taccgacttt gagggtgacg tttgcacact 19020

ctttgataac agcattgttg gttcattaga gcgattctct atgacccaaa atgctgtgct 19080

tatgtcactt acagctgtta aaaagcttac tggcataaag ttaacttatg gttatcttaa 19140

tggtgtccca gttaacacac atgaagataa accttttact tggtacattt acactaggaa 19200

gaacggcaag ttcgaggact atcctgatgg ctattttacc caaggtagaa caaccgctga 19260

ttttagccct cgtagtgaca tggaaaagga cttcctaagt atggatatgg gtctgtttat 19320

taacaagtac ggactcgaag attacggctt tgagcacgtt gtgtatggtg atgtttctaa 19380

aaccaccctt ggtggtttac atctactaat ttcgcaggtg cgtctggcct gtatgggtgt 19440

gcttaaaata gacgagtttg tgtctagtaa tgatagcacg ttaaagtctt gtactgttac 19500

atatgctgat aaccctagta gtaagatggt ttgcacgtat atggatctcc ttcttgacga 19560

ttttgtcagc attcttaaat cgttggattt gagtgttgta tctaaagttc atgaagttat 19620

ggtcgattgt aaaatgtgga ggtggatgtt gtggtgtaag gatcataaac tccagacatt 19680

ttatccgcaa cttcaggcca gtgaatggaa atgtggttat tccatgcctt ctatttacaa 19740

gatacaacgt atgtgtttag aaccttgcaa tctctataac tatggtgctg gtattaagtt 19800

acctgatggc attatgttta acgtagttaa atatacacag ctttgtcaat atcttaatag 19860

caccacaatg tgtgtacccc atcacatgcg cgtgctacat cttggtgctg gctccgacaa 19920

gggtgttgca cctggcacgg ctgtcttacg acgttggttg ccactggatg ccattatagt 19980

tgacaatgat agtgtggatt acgttagcga tgctgattat agtgttacgg gagattgctc 20040

taccttatac ctgtcagata agtttgactt agttatatct gatatgtatg atggtaagat 20100

taaaagttgt gatggggaga acgtgtctaa agaaggcttc tttccctata ttaatggtgt 20160

catcactgaa aagttggcac ttggtggtac tgtagctatt aaggtgacgg agtttagttg 20220

gaataagaag ttgtatgaac tcattcagaa gtttgagtat tggacaatgt tctgtaccag 20280

tgttaacacg tcatcgtcag aggcattttt aattggtgtt cactatttag gtgattttgc 20340

aagtggcgct gtgattgacg gcaacactat gcatgccaat tatatcttct ggcgtaattc 20400

cacaattatg actatgtctt acaatagtgt acttgattta agcaagttca attgtaagca 20460

taaggctaca gttgttatta atttaaaaga ttcatccatt agtgatgttg tgttaggttt 20520

gttgaagaat ggtaagttgc tagtgcgtaa taatgacgcc atttgtggtt tttctaatca 20580

tttggtcaac gtaaacaaat gaagtcttta aattacttct ggttgttctt accagtactt 20640

tcaacactca gcctaccaca agatgtcact aggtgccagt ccactattaa cttcaggcgg 20700

ttcttttcaa aatttaatgt gcaggcacct gctgtcgttg tgttgggtgg ttatctacct 20760

agtatgaact cctctagctg gtactgtggc acaggtcttg aaactgctag tggcgtgcat 20820

ggtattttcc tcagttacat cgatgctggt cagggctttg agattggcat ttcacaggag 20880

ccgtttgatc ctagtggtta ccagctttat ttacataagg ccactaatgg taaccataat 20940

gctattgcac gactgcgcat ttgccagttt ccagataata aaacattggg ccctactgtt 21000

aatgatgtta caacaggtcg taactgccta ttcaacaaag ccattccagc ttatatgcag 21060

gatggaaaaa atatcgttgt cggcataaca tgggacaatg atcgtgtcac tgtttttgct 21120

gacaagatct atcattttta tcttaaaaat gattggtccc gtgttgcgac aagatgttac 21180

aataaaagaa gttgtgctat gcaatatgtt tatacaccta cctactacat gcttaatgtt 21240

actagtgcag gtgaggatgg catttattat gaaccatgta cagctaattg cagtggttac 21300

gctgccaatg tgtttgccac tgattctaat ggccacatac cagaaggttt tagttttaat 21360

aattggtttc ttttgtccaa tgattccact ttgttgcatg gtaaggtggt ttccaaccaa 21420

cctttgttgg tcaattgtct tttggccatt cctaagattt atggactagg ccaatttttc 21480

tcattcaatc aaacgatgga tggcgtttgt aatggagctg ctgcgcagcg tgcaccagag 21540

gctctgaggt ttaatattaa tgacacctct gtcattcttg ctgaaggctc aattgtactt 21600

catactgctt taggaacaaa tctttctttt gtttgcagta attcttcaga tcctcatcta 21660

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gatacttaca actccactgt ttataaattt ttggctgttt tacctcctac cgtcagggaa 21780

attgtcatca ccaagtatgg tgatgtttat gtcaatgggt ttggatactt gcatctcggt 21840

ttgttggatg ctgtcacaat taatttcact ggtcatggca ctgacgatga tgtttctggt 21900

ttttggacca tagcatcgac taattttgtt gatgcactca tcgaagttca aggaaccgcc 21960

attcagcgta ttctttattg tgatgatcct gttagccaac tcaagtgttc tcaggttgct 22020

tttgaccttg acgatggttt ttaccctatt tcttctagaa accttctgag tcatgaacag 22080

ccaatttctt ttgttactct gccatcattt aatgatcatt cttttgttaa cattactgta 22140

tctgcttcct ttggtggtca tagtggtgcc aaccttattg catctgacac tactatcaat 22200

gggtttagtt ctttctgtgt tgacactaga caatttacca tttcactgtt ttataacgtt 22260

acaaacagtt atggttatgt gtctaaatca caggacagta attgcccttt caccttgcaa 22320

tctgttaatg attacctgtc ttttagcaaa ttttgtgttt ccaccagcct tttggctagt 22380

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gtcacggacg tttcttttat gactctggat gtgtgtacca agtatactat ctatggcttt 22560

aaaggtgagg gtatcattac ccttacaaat tctagctttt tggcaggtgt ttattacaca 22620

tctgattctg gacagttgtt agcctttaag aatgtcacta gtggtgctgt ttattctgtt 22680

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tctaatgatg gctctaattg tacagagcct gtgttggtgt atagtaacat aggtgtttgt 22860

aaatctggca gtattggcta cgtcccatct cagtctggcc aagtcaagat tgcacccacg 22920

gttactggga atattagtat tcccaccaac tttagtatga gtattaggac agaatattta 22980

cagctttaca acacgcctgt tagtgttgat tgtgccacat atgtttgtaa tggtaactct 23040

cgttgtaaac aattactcac ccagtacact gcagcatgta agaccataga gtcagcatta 23100

caactcagcg ctaggcttga gtctgttgaa gttaactcta tgcttactat ttctgaagag 23160

gctctacagt tagctaccat tagttcgttt aatggtgatg gatataattt tactaatgtg 23220

ctgggtgttt ctgtgtatga tcctgcaagt ggcagggtgg tacaaaaaag gtcttttatt 23280

gaagacctgc tttttaataa agtggttact aatggccttg gtactgttga tgaagactat 23340

aagcgctgtt ctaatggtcg ctctgtggca gatctagtct gtgcacagta ttactctggt 23400

gtcatggtac tacctggtgt tgttgacgct gagaagcttc acatgtatag tgcgtctctc 23460

atcggtggta tggtgctagg aggttttact tctgcagcgg cattgccttt tagctatgct 23520

gttcaagcta gactcaatta tcttgctcta cagacggatg ttctacagcg gaaccagcaa 23580

ttgcttgctg agtcttttaa ctctgctatt ggtaatataa cttcagcctt tgagagtgtt 23640

aaagaggcta ttagtcaaac ttccaagggt ttgaacactg tggctcatgc gcttactaag 23700

gttcaagagg ttgttaactc gcagggtgca gctttgactc aacttaccgt acagctgcaa 23760

cacaacttcc aagccatttc tagttctatt gatgacattt actctcgact ggacattctt 23820

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gttgctcaaa ccctcactaa gtatactgag gttcaggcta gcaggaagtt agcacagcaa 23940

aaggttaatg agtgcgttaa atcgcaatct cagcgttatg gtttttgtgg tggtgatggc 24000

gagcacattt tctctctggt acaggcagca cctcagggcc tgctgttttt acatacagta 24060

cttgtaccga gtgattttgt agatgttatt gccatcgctg gcttatgcgt taacgatgaa 24120

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actgcgacgg aatattttgt ttcatcgcga cgtatgtttg aacctagaaa acctaccgtt 24240

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ctaccagatg taatcccaga ttacatcgat gttaacaaaa cacttgatga gattttagct 24360

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aatctcactg gtgaaattgc agatttagag cagcgttcag agtctctccg taatactaca 24480

gaggagctcc aaagtcttat atataatatc aacaacacac tagttgacct tgagtggctc 24540

aaccgagttg agacatatat caagtggccg tggtgggttt ggttgattat tttcattgtt 24600

ctcatctttg ttgtgtcatt actagtgttc tgctgcattt ccacgggttg ttgtggatgc 24660

tgcggctgct gctgtgcttg tttctcaggt tgttgtaggg gtcctagact tcaaccttac 24720

gaagtttttg aaaaggtcca cgtgcagtga tgtttcttgg actttttcaa tacacgattg 24780

acacagttgt caaagatgtc tcaaagtctg ctaacttgtc tttggatgct gtccaagagt 24840

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tgttggcagc gcgttttgct gtcattgttc tttattgccc acttttatat tattgtggtg 25020

catttttaga tgcaactatt atttgttgca cacttattgg caggctttgt ttagtctgct 25080

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ttgactcaat tcaactagac gagtatgcta caattagtga atgataatgg tctagtagtt 25440

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caattggtta atctgtgctt cacttgtcac cggttgtgta atagcgcagt ttacacacct 25560

atagggcgtt tgtatagagt ttataagtct tacatgcaaa tagaccccct ccctagtact 25620

gttattgacg tataaacgaa atatgtctaa cggttctatt cccgttgatg aggtgattca 25680

acaccttaga aactggaatt tcacatggaa tatcatactg acgatactac ttgtagtgct 25740

tcagtatggc cattacaagt actctgcgtt cttgtatggt gtcaagatgg ctattctatg 25800

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tcctgaaaca gacgcgcttc tcactacttc tgtgatgggc cgacaggtct gcattccagt 26040

gcttggagca ccaactggtg taacgctaac actccttagt ggtacattgc ttgtagaggg 26100

ctataaggtt gctactggcg tacaggtaag tcaattacct aatttcgtca cagtcgccaa 26160

ggccactaca acaattgtct acggacgtgt tggtcgttca gtcaatgctt catctggcac 26220

tggttgggct ttctatgtcc ggtccaaaca cggcgactac tcagctgtga gtaatccgag 26280

ttcggttctc acagatagtg agaaagtgct tcatttagtc taaacagaaa ctttatggct 26340

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cgtggtgagc gaattgaaca accttccaat tggcatttct actacctcgg aacaggacct 26580

cacgccgacc tccgctatag gactcgtact gagggtgttt tctgggttgc taaagaaggc 26640

gcaaagactg aacccactaa cctgggtgtc agaaaggcgt ctgaaaagcc aattattcca 26700

aatttctctc aacagcttcc cagcgtagtt gagattgttg aacctaacac acctcctact 26760

tcacgtgcaa attcacgtag caggagtcgt ggtaatggca acaacaggtc cagatctcca 26820

agtaacaaca gaggcaataa ccagtcccgc ggtaattcac agaatcgtgg aaataaccag 26880

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cagtccaaga acagaaacca gtcaaatgac cgtggtggtg taacatcacg cgatgatctg 27000

gtggctgctg tcaaggatgc ccttaaatct ttgggtattg gcgaaaaccc tgacaagctt 27060

aagcaacagc agaagcccaa acaggaaagg tctgacagca gcggcaaaaa tacacctaag 27120

aagaacaaat ccagagccac ttcgaaagaa cgtgacctca aagacatccc agagtggagg 27180

agaattccca agggcgaaaa tagcgtagca gcttgcttcg gacccagggg aggcttcaaa 27240

aattttggag atgcggaatt tgtcgaaaaa ggtgttgayg cctcaggcta tgctcagatc 27300

gccagtttag caccaaatgt tgcagcattg ctctttggtg gtaatgtggc tgttcgtgag 27360

ctagcggact cttacgagat tacatataat tataaaatga ctgtgccaaa gtctgatcca 27420

aatgtagagc ttcttgtttc acaggtggat gcatttaaaa ctgggaatgc aaaaccccag 27480

agaaagaagg aaaagaagaa caagcgtgaa accacgcagc agctgaatga agaggccatc 27540

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gttgatggtg gtgacacggc cgttgaaatt atcaacgaga tcttcgacac aggaaattaa 27660

acaatgtttg actggcttat cctggctatg tcccagggta gtgccattac actgttatta 27720

ctgagtgttt ttttagcgac ttggctgctg ggctatggct ttgccctcta actagcggtc 27780

ttggtcttgc acacaacggt aagccagtgg taatgtcagt gcaagaagga tattaccata 27840

gcactgtcat gaggggaacg cagtaccttt tcatctaaac ctttgcacga gtaatcaaag 27900

atccgcttga cgagcctata tggaagagcg tgccaggtat ttgactcaag gactgttagt 27960

aactgaagac ctgacggtgt tgatatggat 27990

<210> 2

<211> 28005

<212> DNA

<213> 猪流行性腹泻病毒

<400> 2

ctacggatag ttagctcttt ttctagactc ttgtctactc aattcaacta aacgaaattt 60

tgtccttccg gccgcatgtc catgctgctg gaagctgacg tggaatttca ttaggtttgc 120

ttaagtagcc atcgcaagtg ctgtgctgtc ctctagttcc tggttggcgt tccgtcgcct 180

tctacatact agacaaacag ccttcctccg gttccgtctg ggggttgtgt ggataactag 240

ttccgtctag tttgaaacca gtaactgtcg gctatggcta gcaaccatgt tacattggct 300

tttgccaatg atgcagaaat ttcagctttt ggcttttgca ctgctagtga agccgtctca 360

tactattctg aggccgccgc tagtggattt atgcaatgcc gtttcgtgtc cttcgatctc 420

gctgacactg ttgagggatt gcttcccgaa gactatgtca tggtggtggt cggcactacc 480

aagcttagtg cgtatgtgga cacttttggt agccgcccca aaaacatttg tggttggctg 540

ttattttcta actgtaatta cttcctcgaa gagttagagc ttacttttgg tcgtcgtggt 600

ggtaacatcg tgccagttga ccaatacatg tgtggcgctg acggtaaacc tgttcttcag 660

gaatccgaat gggagtatac agatttcttt gctgactccg aagacggtca actcaacatt 720

gctggtatca cttatgtgaa ggcctggatt gtagagcgat cggatgtctc ttatgcgagt 780

cagaatttaa catctattaa gtctattact tactgttcaa cctatgagca tacttttcct 840

gatggtactg ccatgaaggt tgcacgtact ccaaagatta agaagactgt tgtcttgtct 900

gagccacttg ctactatcta cagggaaatt ggttctcctt ttgtggataa tgggagcgat 960

gctcgttcta tcattaagag accagtgttc ctccacgctt ttgttaagtg taagtgtggt 1020

agttatcatt ggactgttgg tgattggact tcctatgtct ccacttgctg tggctttaag 1080

tgtaagccag tccttgtggc ttcatgctct gctacgcctg gttctgttgt ggttacgcgc 1140

gctggtgctg gcactggtgt taagtattac aacaacatgt tcctgcgcca tgtggcagac 1200

attgatgggt tggcattctg gcgaattctc aaggtgcagt ccaaagacga cctcgcttgc 1260

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gtcaaacaag ctatctttgc tggtcatgtt gttgttggca gcgcgctcgt tgacattgtt 1440

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tgggagcagc ttaaggctgt cgttagaggc cttaacctcc tgtctgatga ggtcgtgctc 1560

tttggcaaaa gacttagctg tgccactctt agtatcgtta acggtgtttt tgagttcatc 1620

gccgaagtgc ctgagaagtt ggctgcggct gttacagttt ttgtcaactt cttgaatgag 1680

ctttttgagt ctgcctgtga ctgcttaaag gtcggaggta aaacctttaa caaggttggc 1740

tcttatgttc tttttgacaa cgcattggtt aagcttgtca aggcaaaagt tcgcggccca 1800

cgacaggcag gtgtttgtga agttcgttac acaagccttg ttattgggag tactaccaag 1860

gtggtttcca agcgcgttga aaatgccaat gtgaatctcg tcgtcgttga cgaggatgtg 1920

accctcaaca ccactggtcg tacagttgtt gttgacggac ttgcattctt cgagagtgac 1980

gggttttaca gacatcttgc tgatgctgac gttgtcattg aacatcctgt ttataagtct 2040

gcttgtgagc tcaagccagt ttttgagtgt gacccaatac ctgattttcc tatgcctgtg 2100

gccgctagtg ttgcagagct ttgtgtgcaa actgatctgt tgcttaaaaa ttacaacact 2160

ccttataaaa cttacagctg cgttgtgaga ggtgataagt gttgcatcac ttgcacctta 2220

catatcacag caccaagtta tatggaggat gctgctaatt ttgtagacct ctgtaccaag 2280

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caagggttcg taaccacttg ttgcacgatg tcaggttttg agtgttttat gcctataatc 2400

ccacagtgtc cagcagtgct tgaagagatt gatggtggta gcatctggcg gtcttttatc 2460

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ggcattgttg tcactgtagc acgcaaattt aaacgacttg gtgctctctt ggcagaaatg 2580

tataacactt acctttcaac tgtggtggaa aacttggtac tggccggtgt tagcttcaag 2640

tattatgcca ccagtgtccc aaaaattgtt ttgggctgtt gttttcacag tgttaaaagt 2700

gttcttgcaa gtgccttcca gattcctgtc caggcaggca ttgagaagtt taaagtcttc 2760

cttaactgtg ttcaccctgt tgtaccacgc gtcattgaaa cttcttttgt ggaattagaa 2820

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ttctattatg atggaacact atactatccc accgatggta atagtgttgt gcctatttgt 2940

tttaagaaga agggtggtgg tgatgtcaaa ttctctgatg aagtctctgt tagaaccatt 3000

gacccagttt ataaggtctc ccttgaattt gagttcgagt ctgagactat tatggctgtg 3060

cttaataagg ctgttggtaa tcgtatcaag gttacaggtg gttgggacga tgttgttgag 3120

tatatcaacg ttgccattga ggttcttaaa gatcatatcg atgtgcctaa gtactacatc 3180

tatgatgagg aaggtggcac cgatcctaat cttcccgtaa tggtttctca gtggccgttg 3240

aatgatgaca cgatctcaca ggatctgctt gatgtggaag ttgttactga tgcaccaatt 3300

gatttcgagg gtgatgaagt agactcctct gaccctgata aggtggcaga tgtggctaac 3360

tctgagcctg aggatgatgg tcctaatgta gctcctgaaa caaatgtaga gtctgaagtt 3420

gaggaagttg ccgcaacctt gtcttttatt aaagatacac cttccacagt tactaaggat 3480

ccttttgctt ttgactttgc aagctatgga ggacttaagg ttttaagaca atctcataac 3540

aactgctggg ttacttctac cttggtgcag ctacaattgc ttggcatcgt tgatgaccct 3600

gcaatggagc tttttagtgc tggtagagtt ggtccaatgg ttcgcaaatg ctatgagtca 3660

caaaaggcta tcttgggatc tttgggtgat gtgtcggctt gcctagagtc cctgactaag 3720

gacctacaca cacttaagat tacctgttct gtagtctgtg gttgtggtac tggtgaacgt 3780

atctatgagg gttgtgcttt tcgtatgacg ccaactttgg aaccgttccc atatggtgct 3840

tgtgctcagt gtgctcaagt tttgatgcac acttttaaaa gtattgttgg caccggcatc 3900

ttttgtcgag atactactgc tctctccttg gattctttgg ttgtaaaacc tctttgtgcg 3960

gctgctttta taggcaagga cagtggtcat tatgtcacta acttttatga tgctgctatg 4020

gctattgatg gttatggtcg tcatcagata aagtatgaca cactgaacac tatttgtgtt 4080

aaagacgtta attggacagc accttttgtc ccagacgttg agcctgtatt ggagcctgtt 4140

gtcaaaccgt tctattctta taagaatgtt gatttttacc aaggagattt tagtgacctt 4200

gttaaacttc catgtgactt tgttgttaat gctgcaaatg agaatttgtc tcacggtggc 4260

ggcatagcaa aggccattga tgtttatacc aagggcatgt tgcagaagtg ctcgaatgat 4320

tacattaaag cacacggtcc cattaaagtt ggacgtggtg tcatgttgga ggcattaggt 4380

cttaaggtct ttaatgttgt tggtccacgt aagggtaagc atgcacctga gcttcttgtt 4440

aaggcttata agtccgtttt tgctaattca ggtgttgctc ttacaccttt gattagtgtt 4500

ggaattttta gtgttccttt ggaagaatct ttatctgctt ttcttgcatg tgttggtgat 4560

cgccactgta agtgcttttg ttatagtgac aaagagcgcg aggcgatcat taattacatg 4620

gatggcttgg tagatgctat tttcaaagat gcacttgttg atactactcc tgtccaggaa 4680

gatgttcaac aagtttcaca aaaaccagtt ttgcctaatt ttgaaccttt caggattgaa 4740

ggtgctcatg ctttctatga gtgcaaccct gaaggtttga tgtcattagg tgctgacaag 4800

ctggtgttgt ttacaaattc caatttggat ttttgtagcg ttggtaagtg tcttaacaat 4860

gtgactggcg gtgcattgct tgaagccata aatgtattta aaaagagtaa caaaacagtg 4920

cctgctggca actgtgttac ttttgagtgt gcagatatga tttctattac tatggtagta 4980

ttgccatctg acggtgatgc taattatgac aaaaattatg cacgcgccgt cgtcaaggta 5040

tctaagctta aaggcaagtt attgcttgct gttggtgatg ctatgttgta ttccaagttg 5100

tcccacctca gcgtgttagg tttcgtatcc acacctgatg atgtggagcg tttctacgca 5160

aataagagtg tggttattaa agttactgag gatacacgta gtgttaagac tgttaaagta 5220

gaatccactg ttacttatgg acaacaaatt ggaccttgtc ttgttaatga caccgttgtc 5280

acagacaaca aacctgttgt tgctgatgtt gtagctaagg ttgtaccaag tgctaattgg 5340

gattcacatt atggttttga taaggctggt gagttccaca tgctagacca tactgggttt 5400

gcctttccta gtgaagttgt taacggtagg cgtgtgctta aaaccacaga taataactgt 5460

tgggttaatg ttacatgttt acaattacag tttgctagat ttaggttcaa gtcagcaggt 5520

ctacaggcta tgtgggagtc ctattgtact ggtgatgttg ctatgtttgt gcattggttg 5580

tactggctta ctggtgttga caaaggtcag cctagtgatt cagaaaatgc acttaacatg 5640

ttgtctaagt acattgttcc tgctggttct gtcactattg aacgtgtcac gcatgacggt 5700

tgttgttgta gtaagcgtgt tgtcactgca ccagttgtga atgctagcgt gttgaagctt 5760

ggcgtcgagg atggtctttg tccacatggt cttaactaca ttgacaaagt tgttgtagtt 5820

aaaggtacta caattgttgt caatgttgga aaacctgtag tggcaccatc gcacctcttt 5880

cttaagggtg tttcctacac aacattccta gataatggta acggtgttgc cggccattat 5940

actgtttttg atcatgacac tggtatggtg catgatggag atgtttttgt accaggtgat 6000

ctcaatgtgt ctcctgttac aaatgttgtc gtctcagagc agacggctgt tgtgattaaa 6060

gaccctgtga agaaagtaga gttagacgct acaaagctgt tagacactat gaattatgca 6120

tcggaaagat tcttttcctt tggtgatttt atgtcacgta atttaattac agtgtttttg 6180

tacatcctta gtattttggg tctctgtttt agggcctttc gtaagaggga tgttaaagtt 6240

ctagctggtg taccccaacg tactggtatt atattgcgta aaagtgtgcg ctataatgca 6300

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agtttgggta tttatgcatt gtatgcatta ctattcatga caatacgctt tacacctata 6420

ggtggccctg tttgtgatga tgttgttgct ggttatgcta attctagttt tgacaagaat 6480

gagtattgca acagtgttat ttgtaaggtc tgtctctatg ggtaccagga actttcggac 6540

ttctctcaca cacaggtagt atggcaacac cttagagacc cattaattgg taatgtgatg 6600

cctttctttt atttggcatt tctggcaatt tttgggggtg tttatgtaaa ggctattact 6660

ctctatttta ttttccagta tcttaacata cttggtgtgt ttttgggcct acaacagtcc 6720

atttggtttt tgcagcttgt gccttttgat gtctttggtg acgagatcgt cgtctttttc 6780

atcgttacac gcgtattgat gttccttaag catgttttcc ttggctgcga taaggcatct 6840

tgtgtggctt gctctaagag tgctcgcctt aagcgcgttc ctgtccagac tatttttcag 6900

ggtactagca aatccttcta cgtacatgcc aatggtggtt ctaagttctg taagaagcac 6960

aatttctttt gtttaaattg tgattcttat ggtccaggct gcacttttat taatgacgtc 7020

attgcaactg aagttggtaa tgttgtcaaa cttaatgtgc aaccgacagg tcctgccact 7080

attcttattg acaaggttga attcagtaat ggtttttact atctttatag tggtgacaca 7140

ttttggaagt acaactttga cataacagat aacaaataca cttgcaaaga gtcacttaaa 7200

aattgtagca taatcacaga ctttattgtt tttaacaata atggttccaa tgtaaatcag 7260

gttaagaatg catgtgtgta tttttcacag atgctttgta aacctgttaa gttagtggac 7320

tcagcgttgt tggccagttt gtctgttgat tttggtgcaa gcttacatag tgcttttgtt 7380

agtgtgttgt cgaatagttt tggcaaagac ctgtcaagtt gtaatgacat gcaggattgc 7440

aagagcacat tgggttttga tgatgtacca ttggatacct ttaatgctgc tgttgctgag 7500

gctcatcgtt acgatgtcct cttgactgac atgtcgttca acaattttac caccagttat 7560

gcaaaaccag aggaaaaact tcccgtccat gacattgcca cgtgtatgcg tgtaggtgcc 7620

aagattgtta atcataacgt tcttgtcaag gatagtatac ctgtggtgtg gcttgtacgt 7680

gatttcattg ccctttctga agaaactagg aagtacatta ttcgtacgac taaagttaag 7740

ggtataacct tcatgttgac ctttaatgat tgtcgtatgc atactaccat acctactgtt 7800

tgcattgcaa ataagaaggg tgcaggtctt cctagttttt caaaggttaa gaaattcttc 7860

tggtttttgt gtctgttcat agttgctgtt ttctttgcac taagcttttt tgattttagt 7920

actcaggtta gcagtgatag tgattatgac ttcaagtata ttgagagtgg ccagttgaag 7980

acttttgaca atccacttag ttgtgtgcat aatgtcttta gtaacttcga ccagtggcat 8040

gatgccaagt ttggtttcac ccccgtcaac aatcctagtt gtcctatagt cgttggtgta 8100

tcagacgaag cgcgcactgt tccaggtatc ccagcaggtg tttatttagc tggtaaaaca 8160

cttgtttttg ctattaacac catttttggt acatctggtt tgtgctttga tgctagtggc 8220

gttgctgata agggcgcttg catttttaat tcggcttgca ccacattatc tggtttgggt 8280

ggaactgctg tctactgtta taagaatggt ctagttgaag gtgctaaact ttatagtgag 8340

ttggcacctc atagctacta taaaatggta gatggtaatg ctgtgtcttt acctgaaatt 8400

atctcgcgcg gctttggcat ccgtactatc cgtacaaagg ctatgaccta ctgtcgcgtt 8460

ggccagtgtg tgcaatctgc agaaggtgtt tgttttggcg ccgatagatt ctttgtctat 8520

aatgcagaat ctggttctga ctttgtttgt ggcacagggc tctttacatt gttgatgaac 8580

gttattagtg ttttttccaa gacagtacca gtaactgtgt tgtctggtca aatacttttt 8640

aattgcatta ttgcttttgc tgctgttgcg gtgtgtttct tatttacaaa gtttaagcgc 8700

atgttcggtg atatgtctgt tggcgttttc actgtcggtg cttgtacttt gttgaacaat 8760

gtttcctaca ttgtaacaca gaacacactt ggcatgttgg gctatgcaac tttgtacttt 8820

ttgtgcacta aaggtgttag atatatgtgg atttggcatt tgggattttt gatctcatat 8880

atacttattg caccatggtg ggttttgatg gtttatgcct tttcagccat ttttgagttt 8940

atgcctaacc tttttaagct taaggtttca acacaacttt ttgagggtga caagttcgta 9000

ggctcttttg aaaatgctgc agcaggtaca tttgtgcttg atatgcatgc ctatgagaga 9060

cttgccaact ctatctcaac tgaaaaactg cgtcagtatg ctagtactta caataagtac 9120

aagtattatt caggcagtgc ttcagaggct gattacaggc ttgcttgttt tgcccatttg 9180

gccaaggcta tgatggatta tgcttctaat cacaacgaca cgttatacac accacccact 9240

gtgagttaca attcaactct acaggctggc ttgcgtaaga tggcacaacc atctggtgtt 9300

gttgagaagt gcatagttcg tgtttgctat ggtaatatgg ctcttaatgg cctatggctt 9360

ggtgatactg ttatctgccc acgccatgtt atagcgtcta gtactactag cactatagat 9420

tatgactatg ccctttctgt tttacgcctc cacaacttct ccatttcatc tggtaatgtt 9480

ttcctaggtg ttgtgggtgt aaccatgcga ggtgctttgt tgcagataaa ggttaatcaa 9540

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atcttggcgt gctatgatgg ttctgcagct ggtgtttacg gcgttaacat gcgctctaat 9660

tacactatta gaggctcgtt cattaatggc gcttgtggtt cacctggtta taatattaac 9720

aatggtaccg ttgagttttg ctatttacac cagcttgaac ttggttcagg ctgtcatgtt 9780

ggtagcgact tagatggtgt tatgtatggt ggttatgagg accaacctac tttgcaagtt 9840

gaaggcgcta gtagtctgtt tacagagaat gtgttggcat ttctttatgc agcactcatt 9900

aatggttcta cctggtggct tagttcttct aggattgctg tagacaggtt taatgagtgg 9960

gctgttcata atggtatgac aacagtagtt aatactgatt gcttttctat tcttgctgct 10020

aagactggtg ttgatgtaca acgtttgttg gcctcaatcc agtctctgca taagaatttt 10080

ggtggaaagc aaattcttgg ctatacctcg ttgacagatg agtttactac aggtgaagtt 10140

atacgtcaaa tgtatggcgt taatcttcag agtggttatg tttcacgcgc ctgtagaaat 10200

gtcttgctgg ttggttcttt tctgactttc ttttggtcag aattagtttc ctacactaag 10260

ttcttttggg taaatcctgg ttatgtcaca cctatgtttg cgtgtttgtc attgctgtcc 10320

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gctctgattg ttacatcttg cattaatttg gcatttgatg ttgaagtcta caactatttg 10440

gcagagcatt ttgattacca tgtttctctc atgggtttta atgcacaagg tcttgttaac 10500

atctttgtct gctttgttgt taccatttta cacggcacat acacatggcg cttttttaac 10560

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acctgttgct tctacggtat tctctactgg ttcaacaggt tttttaaggt tagtgtaggt 10860

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gcaccaactg gaacacttga ttcactactt ctgtctgcca aattgattgg tattggtggt 10980

gagcggaata ttaagatttc ttccgttcag tctaaactga ctgatattaa gtgtagtaac 11040

gttgtgcttt taggctgtct ctctagcatg aatgtctcag caaattcaac agaatgggcc 11100

tattgtgttg acttgcataa caagatcaac ttgtgtaatg acccagaaaa agcgcaggaa 11160

atgctacttg ctttgttggc atttttcctt agtaagaata gtgcttttgg tttagatgac 11220

ttattggaat cctattttaa tgacaatagt atgttgcaga gtgttgcatc tacttatgtc 11280

ggtttgcctt cttatgtcat ttatgaaaat gcacgccaac agtatgaaga tgctgttaat 11340

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gaatttgacc gtgaggcttc tactcagcgt aagcttgata gaatggcgga acaggctgca 11460

gcacagatgt acaaagaggc acgagcagtt aataggaagt ccaaagttgt aagtgctatg 11520

cattcactgc tttttggtat gttgagacgt ttggacatgt cttctgtaga caccattctc 11580

aacttggcaa aggatggggt tgtacctctg tctgtcatac cggcagtcag tgctactaag 11640

cttaacattg ttacttctga tatcgattct tataatcgta tccagcgtga gggatgtgtc 11700

cactacgctg gtaccatttg gaatataatt gatatcaagg acaatgatgg caaggtggta 11760

cacgttaagg aggtaaccgc acagaatgct gagtccctgt catggcccct ggtccttggg 11820

tgtgagcgta ttgtcaagct ccagaataat gaaattattc ctggtaagct gaagcagcgc 11880

tccattaagg cagaaggaga tggcatagtt ggagaaggta aggcacttta caataatgag 11940

ggtggacgta cttttatgta tgctttcatc tcggacaaac cggacctgcg tgtagtcaag 12000

tgggagttcg atggtggttg taacactatt gagctagaac caccacgtaa gttcttggtg 12060

gattctccta atggtgcaca gatcaagtat ctctactttg ttcgtaacct taacacgtta 12120

cgtaggggtg ctgttctcgg ctacataggt gccactgtac gcttgcaggc tggtaaacaa 12180

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ttggccaatg gttctggtaa tggacaagct gttactaatg gtgtggaggc tagtactaac 12360

caggattcat acggtggtgc gtccgtgtgt ctatattgta gagcacatgt tgagcatcca 12420

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actgtgttcg cctgaagaat ttggataagc atgatgcatt ctatgttgtc aaaagatgta 12780

ccaagtctgc gatggaacac gagcaatcca tctatagcag acttgaaaag tgtggagccg 12840

tagccgaaca cgatttcttc acttggaagg atggtcgtgc catctatggt aacgtttgta 12900

gaaaggatct taccgagtat actatgatgg atttgtgtta cgctttacgt aactttgatg 12960

aaaacaattg cgatgttctt aagagcattt taattaaggt aggcgcttgt gaggagtcct 13020

acttcaataa taaagtctgg tttgaccctg ttgaaaatga agacattcat cgtgtctatg 13080

cattgttagg taccattgtt tcacgtgcta tgcttaaatg cgttaagttc tgtgatgcaa 13140

tggttgaaca aggtatagtt ggtgttgtca cattagataa tcaggatctt aatggtgatt 13200

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cgttgttttc cactactata cctattacgg catttggacc tttgtgtcgc aagtgttgga 13560

ttgatggtgt tccactggta actacagctg gttatcattt taaacagtta ggtatagttt 13620

ggaacaatga cctcaactta cactctagca ggctctctat taacgaatta ctccagtttt 13680

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gcttttcagt tgcagcgcta ggtacaggta tgactaacca gactgttaaa cctggccatt 13800

tcaataagga gttttatgac ttcttacttg agcaaggttt cttttctgag ggctctgagc 13860

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actataggta taatagacct actgttctgg acatttgcca agctcgcgtc gtgtatcaaa 13980

tagtgcaacg ctattttgat atttacgaag gtggttgtat cactgctaaa gaggtggttg 14040

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actatgagtc tttatcctat gaggaacagg atgaacttta tgcttatact aagcgtaaca 14160

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atggtggttg ggacaatatg cttaagaacc ttattgatgg tgttgaaaat ccgtgtctta 14400

tgggttggga ctacccaaag tgcgacagag cactgcccaa tatgatacgt atgatttcag 14460

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atatcttcca agcagtaagt gccaatgtta acaaacttct tagtgttgac agcaatgtct 14700

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gcgcctctaa atgttggatc gagcctgaca ttaataaagg tcctcatgaa ttttgctcgc 15000

agcatactat gcagattgtc gataaagatg gtacttatta ccttccttac cctgatcctt 15060

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ctatgctttg tactaagtgt gcttatgatc atgtcattgg aacaactcac aagttcattt 15480

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ttgaagactt taatcgcatt gctacatccg attggactga tgtttctgac tacaggttgg 15720

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cagaatatga taatgatgct gtaacatata aaactaccgc cacaacaaaa cttgttcctg 16020

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cacgtatagt gtttacagct tgttctcatg cagcggtcga ttcactttgt gtgaaagctt 16320

ccactgctta tagcaatgac aaatgttcac gcatcatacc acagcgcgct cgtgttgagt 16380

gttatgatgg tttcaagtct aataatacta gtgctcagta ccttttctct actgtcaatg 16440

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atgacttgtc tgtcataaat cagcgcatca gctataggca tgtagtctat gttggtgacc 16560

ctcaacagct gcctgcacca cgtgttatga tttcacgtgg tactttggaa ccaaaggact 16620

acaacgttgt cactcaacgc atgtgtgccc ttaagcctga tgttttcttg cacaagtgtt 16680

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ttgataatgg ttcaagcatt aatcgcaggc aattggatgt tgtgcgtatg tttttggcta 16860

aaaatcctag gtggtcaaag gctgttttta tttctcctta taacagccag aattatgttg 16920

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actatgtcat ttacacacaa acttcagata ctgcccatgc ctgtaatgtt aacaggttta 17040

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ggttgggttt tgacgttgaa ggagcacatg ttgttggctc taacgtcggt acaaatgtcc 17460

cattgcaatt agggttttct aacggtgttg attttgttgt cagacctgaa ggttgcgttg 17520

taactgagtc tggtgactac attaaacccg tcagagctcg tgctccacca ggggaacaat 17580

ttgcacacct tttgcctcta cttaaacgcg gccaaccatg ggatgtggtt cgtaagcgta 17640

tagtgcaaat gtgtagtgac tacctggcta acctatcaga catactaatt tttgtgttgt 17700

gggctggtgg tttggagttg acaactatgc gttactttgt caagattgga ccaagcaaga 17760

gttgtgattg tggtaaggtt gctacttgtt acaatagtgc gctgcatacg tactgttgtt 17820

tcaaacatgc ccttggttgt gattacctgt acaatccata ctgtattgat atacagcagt 17880

ggggatacaa gggatcactt agccttaacc accatgagca ttgtaatgta catagaaacg 17940

agcatgtggc ttctggtgat gccataatga ctcgctgtct agccatacat gattgctttg 18000

tcaagaacgt tgactggtcc atcacatacc catttattgg taatgaggct gttattaata 18060

agagcggccg aattgtgcaa tcacacacta tgcggtcagt tcttaagtta tacaatccaa 18120

aagccatata tgatattggc aaccctaagg gcattagatg tgccgtaacg gatgctaagt 18180

ggttctgctt tgacaagaat cctactaatt ctaatgtcaa gacattggag tatgactata 18240

taacacacgg ccaatttgat gggttgtgct tgttttggaa ttgcaatgtg gacatgtatc 18300

cagaattctc tgtggtctgt cggtttgaca ctcgctgtag gtcaccactc aacttggagg 18360

gttgtaatgg tggttcactg tatgttaata atcatgcatt ccatacaccg gcttttgaca 18420

agcgtgcttt tgccaagttg aagccaatgc catttttctt ctatgatgat actgagtgtg 18480

acaagttaca ggactctata aactacgttc ctcttagggc tagtaattgc attactaaat 18540

gtaatgttgg tggagctgtc tgtagtaagc attgtgctat gtaccatagc tatgttaatg 18600

cttacaacac ctttacgtcg gcgggcttta cgatttgggt gcccacttcg tttgacacct 18660

acaatctgtg gcagacattt agtaacaact tgcaaggtct tgagaacatt gctttcaatg 18720

tcgtaaagaa aggatctttt gttggtgctg aaggtgagct tcctgtagct gtggttaatg 18780

acaaagtgct cgttagagat ggtactgttg atactcttgt tttcacaaac aagacatcac 18840

tacccactaa cgtagctttt gagttgtatg ccaagcgtaa ggtaggactc accccaccca 18900

ttacgatcct acgtaacttg ggtgttgttt gcacatctaa gtgtgtcatt tgggactatg 18960

aagccgaacg tccacttact acttttacaa aggatgtctg taaatatacc gactttgagg 19020

gtgacgtttg cacactcttt gataacagca ttgttggttc attagagcga ttctctatga 19080

cccaaaatgc tgtgcttatg tcacttacag ctgttaaaaa gcttactggc ataaagttaa 19140

cttatggtta tcttaatggt gtcccagtta acacacatga agataaacct tttacttggt 19200

acatttacac taggaagaac ggcaagttcg aggactatcc tgatggctat tttacccaag 19260

gtagaacaac cgctgatttt agccctcgta gtgacatgga aaaggacttc ctaagtatgg 19320

atatgggtct gtttattaac aagtacggac tcgaagatta cggctttgag cacgttgtgt 19380

atggtgatgt ttctaaaacc acccttggtg gtttacatct actaatttcg caggtgcgtc 19440

tggcctgtat gggtgtgctt aaaatagacg agtttgtgtc tagtaatgat agcacgttaa 19500

agtcttgtac tgttacatat gctgataacc ctagtagtaa gatggtttgc acgtatatgg 19560

atctccttct tgacgatttt gtcagcattc ttaaatcgtt ggatttgagt gttgtatcta 19620

aagttcatga agttatggtc gattgtaaaa tgtggaggtg gatgttgtgg tgtaaggatc 19680

ataaactcca gacattttat ccgcaacttc aggccagtga atggaaatgt ggttattcca 19740

tgccttctat ttacaagata caacgtatgt gtttagaacc ttgcaatctc tataactatg 19800

gtgctggtat taagttacct gatggcatta tgtttaacgt agttaaatat acacagcttt 19860

gtcaatatct taatagcacc acaatgtgtg taccccatca catgcgcgtg ctacatcttg 19920

gtgctggctc cgacaagggt gttgcacctg gcacggctgt cttacgacgt tggttgccac 19980

tggatgccat tatagttgac aatgatagtg tggattacgt tagcgatgct gattatagtg 20040

ttacgggaga ttgctctacc ttatacctgt cagataagtt tgacttagtt atatctgata 20100

tgtatgatgg taagattaaa agttgtgatg gggagaacgt gtctaaagaa ggcttctttc 20160

cctatattaa tggtgtcatc actgaaaagt tggcacttgg tggtactgta gctattaagg 20220

tgacggagtt tagttggaat aagaagttgt atgaactcat tcagaggttt gagtattgga 20280

caatgttctg taccagtgtt aacacgtcat cgtcagaggc attcttaatt ggtgttcact 20340

atttaggtga ttttgcaagt ggcgctgtga ttgacggcaa cactatgcat gccaattata 20400

tcttctggcg taattccaca attatgacta tgtcttacaa tagtgtactt gatttaagca 20460

agttcaattg taagcataag gctacagttg tcattaattt aaaagattca tccattagtg 20520

atgttgtgtt aggtttgttg aagaatggta agttgctagt gcgtaataat gacgccattt 20580

gtggtttttc taatcatttg gtcaacgtaa acaaatgaag tctttaacct acttctggtt 20640

gttcttacca gtactttcaa cactcagcct accacaagat gtcactaggt gccagtccac 20700

tattaacttc aggcggttct tttcaaaatt taatgtgcag gcacctgctg tcgttgtgtt 20760

gggtggttat ctacctagta tgaactcctc tagctggtac tgtggcacag gtcttgaaac 20820

tgctagtggc gtgcatggta ttttcctcag ttacatcgat tctggtcagg gctttgagat 20880

tggcatttca caggagccgt ttgatcctag tggttaccag ctttatttac ataaggccac 20940

taatggtaac cataatgcta ttgcacgact gcgcatttgc cagtttccag ataataaaac 21000

attgggccct actgttaatg atgttacaac aggtcgtaac tgcctattca acaaagccat 21060

tccagcttat atgcaggatg gaaaaaatat cgttgtcggc ataacatggg acaatgatcg 21120

tgtcactgtt tttgctgaca agatctatca tttttatctt aaaaatgatt ggtcccgtgt 21180

tgcgacaaga tgttacaata aaagaagttg tgctatgcaa tatgtttata cacctaccta 21240

ctacatgctt aatgttacta gtgcaggtga ggatggcatt tattatgaac catgtacagc 21300

taattgcagt ggttacgctg ccaatgtgtt tgccactgat tctaatggcc acataccaga 21360

aggttttagt tttaataatt ggtttctttt gtccaatgat tccactttgt tgcatggtaa 21420

ggtggtttcc aaccaacctt tgttggtcaa ttgtcttttg gccattccta agatttatgg 21480

actaggccaa tttttctcat tcaatcaaac gatggatggc gtttgtaatg gagctgctgc 21540

gcagcgtgca ccagaggctc tgaggtttaa tattaatgac acctctgtca ttcttgctga 21600

aggctcaatt gtacttcata ctgctttagg aacaaatctt tcttttgttt gcagtaattc 21660

ttcagatcct catctagcta ccttcgccat acctctgggt gctacccaag taccttatta 21720

ttgttttctt aaagtggata cttacaactc cactgtttat aaatttttgg ctgttttacc 21780

tcctactgtc agggaaattg tcatcaccaa gtatggtgat gtttatgtca atgggtttgg 21840

atacttgcat ctcggtttgt tggatgctgt cacaattaat ttcactggtc atggcactga 21900

cgatgatgtt tctggttttt ggaccatagc atcgactaat tttgttgatg cactcatcga 21960

agttcaagga accgccattc agcgtattct ttattgtgat gatcctgtta gccaactcaa 22020

gtgttctcag gttgcttttg accttgacga tggtttttac cctatttctt ctagaaacct 22080

tctgagtcat gaacagccaa tttcttttgt tactctgcca tcatttaatg atcattcttt 22140

tgttaacatt actgtatctg cttcctttgg tggtcatagt ggtgccaacc ttattgcatc 22200

tgacactact atcaatgggt ttagttcttt ctgtgttgac actagacaat ttaccatttc 22260

actgttttat aacgttacaa acagttatgg ttatgtgtct aaatcacagg acagtaattg 22320

ccctttcacc ttgcaatctg ttaatgatta cctgtctttt agcaaatttt gtgtttccac 22380

cagccttttg gctagtgmct gtaccataga tctttttggt taccctgagt ttggtagtgg 22440

tgttaagttt acgtcccttt actttcaatt cacaaagggt gagttgatta ctggcacgcc 22500

taaaccactt gaaggtgtca cggacgtttc ttttatgact ctggatgtgt gtaccaagta 22560

tactatctat ggctttaaag gtgagggtat cattaccctt acaaattcta gctttttggc 22620

aggtgtttat tacacatctg attctggaca gttgttagcc tttaagaatg tcactagtgg 22680

tgctgtttat tctgttacgc catgttcttt ttcagagcag gctgcatatg ttgatgatga 22740

tatagtgggt gttatttcta gtttgtctag ctccactttt aacagcacta gggagttgcc 22800

tggtttcttc taccattcta atgatggctc taattgtaca gagcctgtgt tggtgtatag 22860

taacataggt gtttgtaaat ctggcagtat tggctacgtc ccatctcagt ctggccaagt 22920

caagattgca cccacggtta ctgggaatat tagtattccc accaacttta gtatgagtat 22980

taggacagaa tatttacagc tttacaacac gcctgttagt gttgattgtg ccacatatgt 23040

ttgtaatggt aactctcgtt gtaaacaatt actcacccag tacactgcag catgtaagac 23100

catagagtca gcattacaac tcagcgctag gcttgagtct gttgaagtta actctatgct 23160

tactatttct gaagaggctc tacagttagc taccattagt tcgtttaatg gtgatggata 23220

taattttact aatgtgctgg gtgtttctgt gtatgatcct gcaagtggca gggtggtaca 23280

aaaaaggtct tttattgaag acctgctttt taataaagtg gttactaatg gccttggtac 23340

tgttgatgaa gactataagc gctgttctaa tggtcgctct gtggcagatc tagtctgtgc 23400

acagtattac tctggtgtca tggtactacc tggtgttgtt gacgctgaga agcttcacat 23460

gtatagtgcg tctctcatcg gtggtatggt gctaggaggt tttacttctg cagcggcatt 23520

gccttttagc tatgctgttc aagctagact caattatctt gctctacaga cggatgttct 23580

acagcggaac cagcaattgc ttgctgagtc ttttaactct gctattggta atataacttc 23640

agcctttgag agtgttaaag aggctattag tcaaacttcc aagggtttga acactgtggc 23700

tcatgcgctt actaaggttc aagaggttgt taactcgcag ggtgcagctt tgactcaact 23760

taccgtacag ctgcaacaca acttccaagc catttctagt tctattgatg acatttactc 23820

tcgactggac attctttcag ccgatgttca ggttgaccgt ctcatcaccg gcagattatc 23880

agcacttaat gcttttgttg ctcaaaccct cactaagtat actgaggttc aggctagcag 23940

gaagttagca cagcaaaagg ttaatgagtg cgttaaatcg caatctcagc gttatggttt 24000

ttgtggtggt gatggcgagc acattttctc tctggtacag gcagcacctc agggcctgct 24060

gtttttacat acagtacttg taccgagtga ttttgtagat gttattgcca tcgctggctt 24120

atgcgttaac gatgaaattg ccttgactct acgtgagcct ggcttagtct tgtttacgca 24180

tgaacttcaa aatcatactg cgacggaata ttttgtttca tcgcgacgta tgtttgaacc 24240

tagaaaacct accgttagtg attttgttca aattgagagt tgtgtggtca cctatgtcaa 24300

tttgactaga gaccaactac cagatgtaat cccagattac atcgatgtta acaaaacact 24360

tgatgagatt ttagcttctc tgcccaatag aactggtcca agtcttcctt tagatgtttt 24420

taatgccact tatcttaatc tcactggtga aattgcagat ttagagcagc gttcagagtc 24480

tctccgtaat actacagagg agctccaaag tcttatatat aatatcaaca acacactagt 24540

tgaccttgag tggctcaacc gagttgagac atatatcaag tggccgtggt gggtttggtt 24600

gattattttc attgttctca tctttgttgt gtcattacta gtgttctgct gcatttccac 24660

gggttgttgt ggatgctgcg gctgctgctg tgcttgtttc tcaggttgtt gtaggggtcc 24720

tagacttcaa ccttacgaag tttttgaaaa ggtccacgtg cagtgatgtt tcttggactt 24780

tttcaataca cgattgacac agttgtcaaa gatgtctcaa agtctgctaa cttgtctttg 24840

gatgctgtcc aagagttgga gctcaatgta gttccaatta gacaagcttc aaatgtgacg 24900

ggttttcttt tcaccagtgt ttttatctac ttctttgcac tgtttaaagc gtcttctttg 24960

aggcgcaatt atattatgtt ggcagcgcgt tttgctgtca ttgttcttta ttgcccactt 25020

ttatattatt gtggtgcatt tttagatgca actattattt gttgcacact tattggcagg 25080

ctttgtttag tctgctttta ctcctggcgc tataaaaatg cgctctttat tatttttaat 25140

actacgacac tttctttcct caatggtaaa gcagcttatt atgacggcaa atccattgtg 25200

attttagaag gtggtgacca ttacatcact tttggcaact cttttgttgc ttttgttagt 25260

agcatcgact tgtatctagc tatacgtggg cggcaagaag ctgacctaca gctgttgcga 25320

actgttgagc ttcttgatgg caagaagctt tatgtctttt cgcaacatca aattgttggc 25380

attactaatg ctgcatttga ctcaattcaa ctagacgagt atgctacaat tagtgaatga 25440

taatggtcta gtagttaatg ttatactttg gcttttcgta ctctttttcc tgcttattat 25500

aagcattact ttcgtccaat tggttaatct gtgcttcact tgtcaccggt tgtgtaatag 25560

cgcagtttac acacctatag ggcgtttgta tagagtttat aagtcttaca tgcaaataga 25620

ccccctacct agtactgtta ttgacgtata aacgaaatat gtctaacggt tctattcccg 25680

ttgatgaggt gattcaacac cttagaaact ggaatttcac atggaatatc atactgacga 25740

tactacttgt agtgcttcag tatggccatt acaagtactc tgcgttcttg tatggtgtca 25800

agatggctat tctatggata ctttggcctc ttgtgttagc actgtcactt tttgatgcat 25860

gggctagctt tcaggtcaat tgggtctttt ttgctttcag catccttatg gcttgcatca 25920

ctcttatgct gtggataatg tactttgtca atagcattcg gttgtggcgc aggacacatt 25980

cttggtggtc tttcaatcct gaaacagacg cgcttctcac tacttctgtg atgggccgac 26040

aggtctgcat tccagtgctt ggagcaccaa ctggtgtaac gctaacactc cttagtggta 26100

cattgcttgt agagggctat aaggttgcta ctggcgtaca ggtaagtcaa ttacctaatt 26160

tcgtcacagt cgccaaggcc actacaacaa ttgtctacgg acgtgttggt cgttcagtca 26220

atgcttcatc tggcactggt tgggctttct atgtccggtc caaacacggc gactactcag 26280

ctgtgagtaa tccgagttcg gttctcacag atagtgagaa agtgcttcat ttagtctaaa 26340

cagaaacttt atggcttctg tcagttttca ggatcgtggc cgcaaacggg tgccattatc 26400

cctctatgcc cctcttaggg ttactaatga caaacccctt tctaaggtac ttgcaaataa 26460

tgctgtaccc actaataaag gaaataagga ccagcaaatt ggatactgga atgagcaaat 26520

tcgctggcgc atgcgccgtg gtgagcgaat tgaacaacct tccaattggc atttctacta 26580

cctcggaaca ggacctcacg ccgacctccg ctataggact cgtactgagg gtgttttctg 26640

ggttgctaaa gaaggcgcaa agactgaacc cactaacctg ggtgtcagaa aggcgtctga 26700

aaagccaatt attccaaatt tctctcaaca gcttcccagc gtagttgaga ttgttgaacc 26760

taacacacct cctacttcac gtgcaaattc acgtagcagg agtcgtggta atggcaacta 26820

caggtccaga tctccaagta acaacagagg caataaccag tcccgcggta attcacagaa 26880

tcgtggaaat aaccagggtc gtggagcttc tcagaacaga ggaggcaata ataataacaa 26940

taacaagtct cgtaaccagt ccaagaacag aaaccagtca aatgaccgtg gtggtgtaac 27000

atcacgcgat gatctggtgg ctgctgtcaa ggatgccctt aaatctttgg gtattggcga 27060

aaaccctgac aagcttaagc aacagcagaa gcccaaacag gaaaggtctg acagcagcgg 27120

caaaaataca cctaagaaga acaaatccag agccacttcg aaagaacgtg acctcaaaga 27180

catcccagag tggaggagaa ttcccaaggg cgaaaatagc gtagcagctt gcttcggacc 27240

caggggaggc ttcaaaaatt ttggagatgc ggaatttgtc gaaaaaggtg ttgatgcctc 27300

aggctatgct cagatcgcca gtttagcacc aaatgttgca gcattgctct ttggtggtaa 27360

tgtggctgtt cgtgagctag cggactctta cgagattaca tataattata aaatgactgt 27420

gccaaagtct gatccaaatg tagagcttct tgtttcacag gtggatgcat ttaaaactgg 27480

gaatgcaaaa ccccagagaa agaaggaaaa gaagaacaag cgtgaaacca cgcagcagct 27540

gaatgaagag gccatctacg atgatgtggg tgtgccatct gatgtgactc atgccaattt 27600

ggaatgggac acagctgttg atggtggtga cacggccgtt gaaattatca acgagatctt 27660

cgacacagga aattaaacaa tgtttgactg gcttatcctg gctatgtccc agggtagtgc 27720

cattacactg ttattactga gtgtttttct agcgacttgg ctgctgggct atggctttgc 27780

cctctaacta gcggtcttgg tcttgcacac aacggtaagc cagtggtaat gtcagtgcaa 27840

gaaggatatt accatagcac tgtcatgagg ggaacgcagt accttttcat ctaaaccttt 27900

gcacgagtaa tcaaagatcc gcttgacgag cctatatgga agagcgtgcc aggtatttga 27960

ctcaaggact gttagtaact gaagacctga cggtgttgat atgga 28005

<210> 3

<211> 1170

<212> DNA

<213> 猪流行性腹泻病毒

<400> 3

atgaagtctt taaattactt ctggttgttc ttaccagtac tttcaacact cagcctacca 60

caagatgtca ctaggtgcca gtccactatt aacttcaggc ggttcttttc aaaatttaat 120

gtgcaggcac ctgctgtcgt tgtgttgggt ggttatctac ctagtatgaa ctcctctagc 180

tggtactgtg gcacaggtct tgaaactgct agtggcgtgc atggtatttt cctcagttac 240

atcgatgctg gtcagggctt tgagattggc atttcacagg agccgtttga tcctagtggt 300

taccagcttt atttacataa ggccactaat ggtaaccata atgctattgc acgactgcgc 360

atttgccagt ttccagataa taaaacattg ggccctactg ttaatgatgt tacaacaggt 420

cgtaactgcc tattcaacaa agccattcca gcttatatgc aggatggaaa aaatatcgtt 480

gtcggcataa catgggacaa tgatcgtgtc actgtttttg ctgacaagat ctatcatttt 540

tatcttaaaa atgattggtc ccgtgttgcg acaagatgtt acaataaaag aagttgtgct 600

atgcaatatg tttatacacc tacctactac atgcttaatg ttactagtgc aggtgaggat 660

ggcatttatt atgaaccatg tacagctaat tgcagtggtt acgctgccaa tgtgtttgcc 720

actgattcta atggccacat accagaaggt tttagtttta ataattggtt tcttttgtcc 780

aatgattcca ctttgttgca tggtaaggtg gtttccaacc aacctttgtt ggtcaattgt 840

cttttggcca ttcctaagat ttatggacta ggccaatttt tctcattcaa tcaaacgatg 900

gatggcgttt gtaatggagc tgctgcgcag cgtgcaccag aggctctgag gtttaatatt 960

aatgacacct ctgtcattct tgctgaaggc tcaattgtac ttcatactgc tttaggaaca 1020

aatctttctt ttgtttgcag taattcttca gatcctcatc tagctacctt cgccatacct 1080

ctgggtgcta cccaagtacc ttattattgt tttcttaaag tggatactta caactccact 1140

gtttataaat ttttggctgt tttacctcct 1170

<210> 4

<211> 1170

<212> DNA

<213> 猪流行性腹泻病毒

<400> 4

atgaagtctt taacctactt ctggttgttc ttaccagtac tttcaacact cagcctacca 60

caagatgtca ctaggtgcca gtccactatt aacttcaggc ggttcttttc aaaatttaat 120

gtgcaggcac ctgctgtcgt tgtgttgggt ggttatctac ctagtatgaa ctcctctagc 180

tggtactgtg gcacaggtct tgaaactgct agtggcgtgc atggtatttt cctcagttac 240

atcgattctg gtcagggctt tgagattggc atttcacagg agccgtttga tcctagtggt 300

taccagcttt atttacataa ggccactaat ggtaaccata atgctattgc acgactgcgc 360

atttgccagt ttccagataa taaaacattg ggccctactg ttaatgatgt tacaacaggt 420

cgtaactgcc tattcaacaa agccattcca gcttatatgc aggatggaaa aaatatcgtt 480

gtcggcataa catgggacaa tgatcgtgtc actgtttttg ctgacaagat ctatcatttt 540

tatcttaaaa atgattggtc ccgtgttgcg acaagatgtt acaataaaag aagttgtgct 600

atgcaatatg tttatacacc tacctactac atgcttaatg ttactagtgc aggtgaggat 660

ggcatttatt atgaaccatg tacagctaat tgcagtggtt acgctgccaa tgtgtttgcc 720

actgattcta atggccacat accagaaggt tttagtttta ataattggtt tcttttgtcc 780

aatgattcca ctttgttgca tggtaaggtg gtttccaacc aacctttgtt ggtcaattgt 840

cttttggcca ttcctaagat ttatggacta ggccaatttt tctcattcaa tcaaacgatg 900

gatggcgttt gtaatggagc tgctgcgcag cgtgcaccag aggctctgag gtttaatatt 960

aatgacacct ctgtcattct tgctgaaggc tcaattgtac ttcatactgc tttaggaaca 1020

aatctttctt ttgtttgcag taattcttca gatcctcatc tagctacctt cgccatacct 1080

ctgggtgcta cccaagtacc ttattattgt tttcttaaag tggatactta caactccact 1140

gtttataaat ttttggctgt tttacctcct 1170

Claims (28)

1.一种组合物，其包含猪流行性腹泻病毒(PEDV)和药学上可接受的无毒媒介物，其中所述PEDV与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2具有至少90％的同一性。

2.如权利要求1所述的组合物，其中所述PEDV与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2具有至少99％的同一性。

3.如权利要求1所述的组合物，其中所述PEDV与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2具有至少99.9％的同一性。

4.如权利要求1所述的组合物，其中所述PEDV与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2具有至少99.99％的同一性。

5.如权利要求1所述的组合物，其中所述PEDV包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2。

6.如权利要求1至5中任一项所述的组合物，其还包含有效量的免疫学佐剂。

7.如权利要求1至6中任一项所述的组合物，其中所述PEDV缀合或连接至非PEDV肽。

8.如权利要求1至6中任一项所述的组合物，其中所述PEDV缀合或连接至多糖。

9.如权利要求1至8中任一项所述的组合物，其还包含第二免疫原性组合物。

10.一种组合物，其包含猪流行性腹泻病毒(PEDV)S1蛋白和药学上可接受的无毒媒介物，其中所述PEDV S1蛋白与由SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4编码的蛋白具有至少90％的同一性。

11.如权利要求10所述的组合物，其中所述PEDV S1蛋白与由SEQ ID NO:3或SEQ IDNO:4编码的蛋白具有至少99％的同一性。

12.如权利要求10所述的组合物，其中所述PEDV S1蛋白与由SEQ ID NO:3或SEQ IDNO:4编码的蛋白具有至少99.9％的同一性。

13.如权利要求10所述的组合物，其中所述PEDV与由SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4编码的蛋白具有至少99.99％的同一性。

14.如权利要求10所述的组合物，其中所述PEDV S1蛋白包含由SEQ ID NO:3或SEQ IDNO:4编码的蛋白。

15.如权利要求10至14中任一项所述的组合物，其还包含有效量的免疫学佐剂。

16.如权利要求10至15中任一项所述的组合物，其中所述PEDV S1蛋白缀合或连接至非PEDV S1肽。

17.如权利要求10至15中任一项所述的组合物，其中所述PEDV S1蛋白缀合或连接至多糖。

18.如权利要求10至17中任一项所述的组合物，其还包含第二免疫原性组合物。

19.一种保护易感猪免受猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染的方法，所述方法包括向所述猪施用有效量的如权利要求1至18中任一项所述的组合物。

20.如权利要求19所述的方法，其中所述组合物通过肌肉内、皮内、皮下递送或通过粘膜表面施用。

21.如权利要求20所述的方法，其中所述组合物通过皮下或肌内注射施用。

22.如权利要求19所述的方法，其中所述组合物通过口服摄取施用。

23.如权利要求19所述的方法，其中所述组合物鼻内施用。

24.一种组合物，其包含表达盒，所述表达盒包含启动子和编码猪流行性腹泻病毒(PEDV)S1蛋白的序列，其中所述PEDV S1蛋白与由SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4编码的蛋白具有至少90％的同一性。

25.如权利要求24所述的组合物，其中所述PEDV S1蛋白与由SEQ ID NO:3或SEQ IDNO:4编码的蛋白具有至少99％的同一性。

26.如权利要求24所述的组合物，其中所述PEDV S1蛋白与由SEQ ID NO:3或SEQ IDNO:4编码的蛋白具有至少99.9％的同一性。

27.如权利要求24所述的组合物，其中所述PEDV S1蛋白与由SEQ ID NO:3或SEQ IDNO:4编码的蛋白具有至少99.99％的同一性。

28.如权利要求24所述的组合物，其中所述PEDV S1蛋白包含由SEQ ID NO:3或SEQ IDNO:4编码的蛋白。