CN105079244A - 一种治疗卵巢早衰的药物组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗卵巢早衰的药物组合物，包括女贞子、北沙参、熟地黄、丹参、茜草等药材，本发明药物组合物以中医药理论为指导，从整体出发，采用中医药治疗，通过多系统、多环节的整体调节作用，能明显的调动整体功能，提高卵巢对促性腺激素的反应性，进而恢复和改善卵巢功能，比单纯应用西药针对雌激素水平降低的干预措施有着明显优势，并且能够避免性激素带来的不良反应与依赖性，恢复性腺轴功能，改善性激素紊乱状态，直接激发卵巢及其他受损组织修复。

Description

一种治疗卵巢早衰的药物组合物及其应用

发明领域

本发明涉及一种药物组合物，特别涉及一种治疗卵巢早衰的药物组合物。

背景技术

近年来卵巢早衰逐渐成为妇科门诊的常见病、多发病，并受到社会各界的广泛重视。卵巢早衰的病因病机复杂，治疗难度极大。目前临床治疗中成药多为滋肾补阴，调经药，如左归丸、定坤丸等，没有以卵巢早衰为适应症的药物；西药治疗以雌孕激素药为主，疗效确切，但副作用大，容易引起子宫内膜癌和乳腺癌的发生。

发明内容

本发明的目的在于提供一种疗效确切、使用安全的治疗卵巢早衰的药物组合物，克服了西药雌孕激素治疗带来的不良反应与依赖性，能够明显的调动整体功能，提高卵巢对促性腺激素的反应性，进而恢复和改善卵巢功能，恢复性腺轴功能，改善性激素紊乱状态，直接激发卵巢及其他受损组织修复。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

本发明药物组合物的原料药包括女贞子、北沙参、熟地黄、丹参、茜草；

本发明药物组合物的原料药还包括梅花、菟丝子、金银花、月季花；

本发明药物组合物的原料药进一步还包括甘草。

本发明药物组合物的原料药配比为：

本发明药物组合物的原料药配比优选为：

本发明药物组合物的原料药组成进一步优选为：

或

本发明药物组合物加入常规辅料，按照常规工艺，制成药学上可接受的各种剂型，包括但不限于片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、口服液体制剂。

本发明药物组合物具有滋阴补肾，凉血活血，解郁调经之功效，临床用于肾阴亏损，瘀热内阻证的治疗，症见闭经、月经量少，性欲下降，阴道干涩或见潮热、多汗、烦躁失眠、腰膝酸软；卵巢早衰见上述证候者。

本发明根据其功能主治，从药物致卵巢早衰模型、自身免疫性卵巢早衰模型、补肾试验等方面，进行了主要药效学试验，结果表明本发明药物组合物具有以下作用：

一、对卵巢早衰的治疗作用

1、对雷公藤多苷致大鼠卵巢早衰模型的影响

实验采用雷公藤多苷灌胃后造成的大鼠卵巢早衰模型，造模后模型组动物性激素出现紊乱，血清中FSH、LH水平较正常对照组显著增加，E₂水平较正常对照组明显降低；灌胃给药后，本发明药物组合物高、中剂量可显著降低血清中FSH水平、显著升高E₂水平，高剂量可显著降低LH水平，调节紊乱的性激素，使其趋向于正常水平。

病理组织学检查显示，模型组卵泡表现为各期卵泡数量与正常对照组相比明显减少，包括原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡，黄体数量减少，部分被增生纤维及增生纤维细胞所代替。增生纤维间质血管内有充血、瘀血现象，并有炎症细胞浸润，以淋巴细胞为主。部分卵泡囊性变，颗粒层细胞大小不一，排列紊乱，排列不规则，细胞大小不均匀。阳性药组和给药三个不同剂量组动物各级卵泡数量有不同程度增多，卵泡生长活跃，成熟卵泡增生多，颗粒层细胞层次多，卵泡液含量增多，黄体数量增多，发育良好。卵巢间质炎症、纤维增生、充血瘀血较模型组减轻。

2、对自身免疫性小鼠卵巢早衰模型的影响

实验采用小鼠透明带₃(ZP3)和弗氏完全佐剂(CFA)组成的免疫剂皮下注射造成的小鼠自身免疫性卵巢早衰模型，造模后模型组动物性激素出现紊乱，血清中FSH、LH水平较正常对照组显著增加，E₂水平较正常对照组明显降低；灌胃给药后，本发明药物组合物高、中剂量可显著降低血清中FSH水平、LH水平，并显著升高E₂水平，调节紊乱的性激素，使其趋向于正常水平。

病理组织学检查显示，正常对照组小鼠卵巢内的原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡等各级卵泡数目多见。模型组小鼠卵巢内原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡，黄体数量减少，卵泡细胞有退行性变，血管内有瘀血，个别卵巢间质内有小片状炎症渗出。给药三个不同剂量组和阳性药组小鼠卵巢内原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡、黄体数量与模型组相比，有不同程度增多。

二、补肾作用

对氢化可的松致小鼠肾虚的影响

采用大剂量氢化可的松注射液肌注造成小鼠肾阴虚模型，试验表明模型组小鼠体重、自主活动、耐寒、耐疲劳能力较正常对照组明显下降，本发明药物组合物高、中剂量可明显抑制小鼠体重下降，三个剂量组均可增加小鼠自主活动次数，延长低温游泳存活时间，表明本发明药物组合物具有补肾作用。

本发明药物组合物以中医药理论为指导，从整体出发，采用中医药治疗，通过多系统、多环节的整体调节作用，能明显的调动整体功能，提高卵巢对促性腺激素的反应性，进而恢复和改善卵巢功能，比单纯应用西药针对雌激素水平降低的干预措施有着明显优势，并且能够避免性激素带来的不良反应与依赖性，恢复性腺轴功能，改善性激素紊乱状态，直接激发卵巢及其他受损组织修复。

具体实施方式

下述实施例用于进一步证明但不限于本发明。

实施例1：散剂

女贞子516g北沙参207g熟地黄129g丹参387g茜草387g

梅花52g菟丝子129g金银花465g月季花258g甘草52g

取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺制成散剂。

实施例2：口服液

女贞子207g北沙参516g热地黄387g丹参129g茜草129g

梅花310g菟丝子361g金银花207g月季花26g甘草310g

取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺制成口服液。

实施例3：丸剂

女贞子646g北沙参129g熟地黄52g丹参387g茜草387g

梅花26g菟丝子52g金银花594g月季花284g甘草26g

取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺制成丸剂。

实施例4：胶囊

女贞子129g北沙参646g熟地黄465g丹参52g茜草52g

梅花310g菟丝子465g金银花129g月季花26g甘草310g

取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺制成胶囊。

实施例5：片剂

女贞子465g北沙参284g热地黄258g丹参310g茜草310g

梅花103g菟丝子181g金银花387g月季花155g甘草129g

取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺制成片剂。

实施例6：颗粒

女贞子336g北沙参336g熟地黄284g丹参284g茜草284g

梅花155g菟丝子284g金银花336g月季花129g甘草155g

取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺制成颗粒。

实施例7：本发明药物组合物药效实验研究

【试验材料】

受试药物按实施例6制备本发明药物组合物，1g膏粉相当于生药4.54g，由亚宝药业集团股份有限公司提供，批号：120201。

剂量设计人临床用量为93g生药，成人体重按60公斤计算为1.55g生药/kg，按动物与人公斤等效剂量折算，小鼠用34.10、17.05、8.53g生药/kg和大鼠用16.74、8.37、4.19g生药/kg三个剂量，中剂量相当于临床等效剂量。

阳性对照药

结合雌激素片，新疆新姿源生物制药有限责任公司生产，批号：20110902，规格：每片含结合雌激素0.625mg。成人临床用量为0.625mg，大鼠用0.06mg/kg，相当于临床等效剂量。

戊酸雌二醇片，生产企业：法国DELPHARMLilleS.A.S.，分包装企业：拜耳医药保健有限公司广州分公司，批号：034E，生产日期：2011-07-04，规格：1mg。成人临床用量为1mg，小鼠用0.18mg/kg，相当于临床等效剂量。

左归丸，北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂生产，成人临床用量为18g，大鼠用3.24mg/kg，相当于临床等效剂量的两倍。

给药量和给药途径灌胃给药，灌胃容积小鼠为20ml/kg和大鼠为10ml/kg。

动物来源CD(SD)IGS大鼠、BALB/C小鼠和CD-1(ICR)小鼠，均由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号分别为SCXK(京)2012-0001。

实验动物使用许可证许可证号：SYXK(京)2008-0023，屏障环境。适用范围：小鼠、大鼠、豚鼠、兔，有效期为2008年11月17日至2013年11月17日。

试剂雷公藤多苷片，黄石飞云制药有限公司产品，批号：20120101；

造模剂：根据小鼠透明带₃(ZP3)的第330～342个氨基酸序列(NSSSSQFQIHGPR)，合成透明带多肽，由北京中科亚光生物科技有限公司合成，其分析纯度为97.72％，批号：C13136002。

氢化可的松注射液，山西晋新双鹤药业有限责任公司，批号：201110085，规格：5ml：25mg。

仪器RT-6000酶标分析仪，深圳雷杜生命科学股份有限公司出品；电子天平，METTLERTOLEDOPL203型，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司产品；ZH-LUO/D小鼠自主活动仪，安徽淮北正华生物仪器有限公司生产。

【试验方法和结果】

1、对雷公藤多苷致卵巢早衰大鼠模型的影响

试验方法

选取健康SD大鼠，雌性，体重250～270g，先适应性饲养3d，然后连续5d做阴道涂片，有动情周期的大鼠纳入试验，按体重随机分为6组，分别为正常对照组，模型对照组，本发明药物组合物高、中、低剂量组，阳性药对照组结合雌激素片。除正常对照组外，其余各组均用雷公藤多苷片50mg/kg灌胃造模，每日1次，连续14d。造模结束后，各组分别灌胃给予相应药物，正常对照组和模型对照组灌胃给予等体积蒸馏水(10ml/kg)，每日一次，连续给药40d。末次给药24h后，腹主动脉取血，3000rpm离心15分钟，分离血清，采用ELISA试剂盒测定血清中促卵泡生成激素(FSH)、促黄体生成激素(LH)、雌二醇(E₂)水平；处死大鼠后，解剖，取卵巢，称重，将卵巢置10％甲醛中固定，梯度乙醇脱水，石蜡包埋，切片，常规HE染色，置光学显微镜下观察。

试验结果

(1)对雷公藤多苷致大鼠卵巢早衰模型血清性激素的影响

本实验采用雷公藤多苷灌胃后造成的大鼠卵巢早衰模型，造模后模型组动物性激素出现紊乱，血清中FSH、LH水平较正常对照组显著增加，E₂水平较正常对照组明显降低；灌胃给药后，本发明药物组合物高、中剂量可显著降低血清中FSH水平、显著升高E₂水平，高剂量可显著降低LH水平，调节紊乱的性激素，使其趋向于正常水平。

表1本发明药物组合物对雷公藤多苷致卵巢早衰大鼠血清性激素的影响

注：与模型对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01，n＝10，下表同。

(2)对雷公藤多苷致大鼠卵巢早衰模型病理组织学的影响

病理组织学检查显示：正常对照组大鼠卵巢各级卵泡生长活跃，发育成熟颗粒细胞层次多，卵泡液含量多，黄体体积大，细胞丰富，结构正常。

模型组卵泡表现为各期卵泡数量与正常对照组相比明显减少，包括原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡，黄体数量减少，部分被增生纤维及增生纤维细胞所代替。增生纤维间质血管内有充血、瘀血现象，并有炎症细胞浸润，以淋巴细胞为主。部分卵泡囊性变，颗粒层细胞大小不一，排列紊乱，排列不规则，细胞大小不均匀。

阳性药组和给药三个不同剂量组动物各级卵泡数量有不同程度增多，卵泡生长活跃，成熟卵泡增多，颗粒层细胞层次多，卵泡液含量增多，黄体数量增多，发育良好，给药高剂量组最为明显。本发明药物组合物对卵巢早衰大鼠卵泡发育和卵巢间质炎症、纤维增生、充血瘀血的影响见表2、3、4。

表2本发明药物组合物对雷公藤多苷致卵巢早衰大鼠卵泡发育的影响

表3本发明药物组合物对雷公藤多苷致卵巢早衰大鼠黄体发育的影响

表4本发明药物组合物对大鼠卵巢早衰模型卵巢间质炎症、纤维增生等的影响

注：H.0.01＝71，H.0.05＝78。

附：卵巢间质炎症、纤维增生、充血瘀血等病变分级标准：

“-”：卵巢各级卵细胞及间质正常结构。

“+”：卵巢各级卵细胞及间质结构较正常，充血、瘀血少见。

“++”：卵巢各级卵细胞有轻度病变，间质充血、瘀血，炎症细胞浸润。

“+++”：卵巢各级卵细胞病变有明显退行性变，间质纤维增生，炎症浸润及充血、瘀血较重。

2、对自身免疫性卵巢早衰小鼠模型的影响

试验方法

选取健康BALB/C小鼠，雌性，7～9周龄，先适应性饲养并连续5d做阴道涂片，有动情周期的小鼠纳入试验，按体重随机分为6组，分别为正常对照组，模型对照组，本发明药物组合物高、中、低剂量组，阳性药对照组戊酸雌二醇片。除正常对照组外，其余各组将免疫试剂(ZP3+CFA)按0.1mL/鼠皮下注射于后双脚掌处，14d后以新配制的免疫试剂(ZP3+CFA)按0.1mL/鼠再次皮下注射于后双脚掌处加强免疫，正常对照组皮下注射等量的生理盐水。造模成功后第6天，各组开始分别灌胃给予相应药物，正常对照组和模型对照组灌胃给予等体积蒸馏水(20ml/kg)，每日一次，连续给药4周。末次给药24h后，小鼠摘眼球后取血，3000rpm离心15分钟，分离血清，采用ELISA试剂盒测定血清中促卵泡生成激素(FSH)、促黄体生成激素(LH)、雌二醇(E₂)水平；处死小鼠后，解剖，取卵巢，称重，将卵巢置10％甲醛中固定，梯度乙醇脱水，石蜡包埋，切片，常规HE染色，置光学显微镜下观察。

试验结果

(1)对自身免疫性小鼠卵巢早衰模型血清性激素的影响

本实验采用小鼠透明带₃(ZP3)和弗氏完全佐剂(CFA)组成的免疫剂皮下注射造成的小鼠自身免疫性卵巢早衰模型，造模后模型组动物性激素出现紊乱，血清中FSH、LH水平较正常对照组显著增加，E₂水平较正常对照组明显降低；灌胃给药后，本发明药物组合物高、中剂量可显著降低血清中FSH水平、LH水平，并显著升高E₂水平，调节紊乱的性激素，使其趋向于正常水平。

表5本发明药物组合物对自身免疫性小鼠卵巢早衰模型性激素的影响

(2)对自身免疫性小鼠卵巢早衰模型病理组织学的影响

病理组织学检查显示：正常对照组小鼠卵巢内的原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡等各级卵泡数目多见。

模型组小鼠卵巢内原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡，黄体数量减少，卵泡细胞有退行性变，血管内有瘀血，个别卵巢间质内有小片状炎症渗出。

给药三个不同剂量组和阳性药组小鼠卵巢内原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡、黄体数量与模型组相比，有不同程度增多。

本发明药物组合物对自身免疫性小鼠卵巢早衰模型卵泡发育和黄体发育的影响见表6和表7。

表6本发明药物组合物对自身免疫性小鼠卵巢早衰模型卵泡发育的影响

表7本发明药物组合物对自身免疫性小鼠卵巢早衰模型黄体发育的影响

3、对氢化可的松致小鼠肾阴虚的影响

试验方法

选取健康CD-1(ICR)雌性小鼠60只，称重，按体重随机分为6组，分别为正常对照组，模型对照组，本发明药物组合物高、中、低剂量组，阳性对照药左归丸组。各组分别灌胃给予相应药物，正常对照组和模型对照组灌胃给予等体积蒸馏水(20ml/kg)，每日一次，同时肌注氢化可的松注射液25mg/kg，共3日。第3日于药后1小时，记录各组动物体重、10min内小鼠自主活动次数及低温游泳存活时间，以t检验进行组间比较。

试验结果

见表8和表9，大剂量氢化可的松肌注可造成小鼠肾虚模型，使小鼠体重、自主活动、耐寒耐疲劳能力较正常对照组明显下降，本发明药物组合物高、中剂量可明显抑制小鼠体重下降，三个剂量组均可增加小鼠自主活动次数，延长低温游泳存活时间，表明本发明药物组合物具有补肾作用。

表8本发明药物组合物对氢化可的松致小鼠肾阴虚模型体重的影响(n＝10)

表9本发明药物组合物对氢化可的松致小鼠肾虚模型的影响(n＝10)

Claims (10)

1.一种治疗卵巢早衰的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药包括女贞子、北沙参、熟地黄、丹参、茜草。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药还包括梅花、菟丝子、金银花、月季花。

3.如权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药还包括甘草。

4.如权利要求1-3任一所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药配比为：

5.如权利要求4所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药配比为：

6.如权利要求5所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药配比为：

7.如权利要求5所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药配比为：

8.如权利要求1-7任一所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物加入常规辅料，按照常规工艺，制成药学上可接受的各种剂型，包括但不限于片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、口服液体制剂。

9.如权利要求1-7任一所述的药物组合物在制备治疗卵巢早衰药物中的应用。

10.如权利要求8所述的药物组合物在制备治疗卵巢早衰药物中的应用。