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BR122020006541B1 - Uso terapêutico de compostos de benzeno substituídos com arila ou heteroarila e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos para tratamento ou prevenção de câncer - Google Patents

Uso terapêutico de compostos de benzeno substituídos com arila ou heteroarila e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos para tratamento ou prevenção de câncer Download PDF

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BR122020006541B1
BR122020006541B1 BR122020006541-9A BR122020006541A BR122020006541B1 BR 122020006541 B1 BR122020006541 B1 BR 122020006541B1 BR 122020006541 A BR122020006541 A BR 122020006541A BR 122020006541 B1 BR122020006541 B1 BR 122020006541B1
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BR
Brazil
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cancer
alkyl
cell
aryl
compound
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Application number
BR122020006541-9A
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English (en)
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Kevin Wayne Kuntz
Richard Chesworth
Kenneth William Duncan
Heike Keilhack
Natalie Warholic
Christine Klaus
Wanjun Zheng
Masashi Seki
Syuji Shirotori
Satoshi Kawano
Timothy James Nelson Wigle
Original Assignee
Epizyme, Inc.
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Publication date
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Abstract

A presente invenção se refere aos compostos de benzeno substituídos com arila ou heteroarila. A presente invenção também se refere às composições farma-cêuticas contendo estes compostos e aos métodos para tratar câncer através da ad-ministração destes compostos e composições farmacêuticas aos pacientes em ne-cessidade dos mesmos. A presente invenção também se refere ao uso de tais com-postos para pesquisa ou outros propósitos não terapêuticos.

Description

[001] Dividido do BR1120130263245, depositado em 13/04/2012.
Pedidos Relacionados
[002] Este pedido reivindica prioridade a, e o benefício dos Pedidos Provisórios U.S. Nos 61/474.821, depositado em 13 de Abril de 2011, e 61/499.595 depositado em 21 de Junho de 2011, os conteúdos totais dos quais são integralmente incorporados neste relatório como referência.
[003]Incorporação Como Referência Da Listagem de Sequências
[004]Os conteúdos do arquivo de texto nomeado “41478507001 WOST25.txt”, que foi criado em 28 de Março de 2012 e apresenta 2 KB em tamanho, são integralmente incorporados como referência neste relatório.
Fundamentos da Invenção
[005] Em células eucarióticas, o DNA é empacotado com histonas para formar cromatina. Mudanças na estrutura ordenada da cromatina podem levar a alterações na transcrição de genes associados. O controle das mudanças na estrutura da cromatina (e, consequentemente, da transcrição) é mediado por modificações covalentes em histonas, mais notavelmente de suas caudas N-terminais. Estas modificações são frequentemente referidas como epigenéticas, pois elas podem levar a mudanças hereditárias na expressão do gene, mas não afetam a sequência do DNA por si só. As modificações covalentes (por exemplo, metilação, acetilação, fosforilação e ubiquiti- nação) das cadeias laterais de aminoácidos são enzimaticamente mediadas. A adição seletiva de grupos metila aos sítios de aminoácidos específicos em histonas é controlada pela ação de uma família única de enzimas conhecidas como histona metiltrans- ferases (HMTs).
[006]A coleta orquestrada de sistemas bioquímicos após a regulação transcricional deve ser severamente controlada para que o crescimento e diferenciação celulares ocorra de forma ideal. Estados de doença resultam quando estes controles são interrompidos por expressão e/ou atividade anormais das enzimas responsáveis pela modificação de DNA e histona. Em cânceres humanos, por exemplo, existe um corpo crescente de evidência para sugerir que a atividade da enzima epi- genética desregulada contribui para a proliferação celular descontrolada associada com câncer, assim como outros fenótipos relevantes ao câncer, tais como migração e invasão celulares acentuadas. Além do câncer, existe evidência crescente para um papel de enzimas epigenéticas em várias outras doenças humanas, incluindo doenças metabólicas (tais como diabetes), doenças inflamatórias (tais como doença de Crohn), doenças neurodegenerativas (tais como doença de Alzheimer) e doenças cardiovasculares. Portanto, a modulação seletiva da ação anormal de enzimas epigenéticas pode ser uma esperança para o tratamento de uma variedade de doenças.
[007] Proteínas do grupo Policomb (PcG) e grupo tritorax (trxG) são conhecidas como parte do sistema de memória celular. Veja, por exemplo, Francis et al. (2001) Nat Rev Mol Cell Biol 2:409 - 21 e Simon et al. (2002) Curr Opin Genet Dev 12:210 - 8. Em geral, proteínas PcG são repressores transcricionais que mantêm o “estado off”, e as proteínas trxG são ativadores transcricionais que mantêm o “estado on”. Pelo fato de que os membros das proteínas PcG e trxG contêm atividade de histona metiltrans- ferase (HMTase) intrínseca, as proteínas PcG e trxG podem participar na memória celular através da metilação de histonas de núcleo. Veja, por exemplo, Beisel et al. (2002) Nature 419:857 - 62; Cao et al. (2002) Science 298:1039 - 43; Czermin et al. (2002) Cell 111:185 - 96; Kuzmichev et al. (2002) Genes Dev 16:2893 - 905; Milne et al. (2002) Mol Cell 10:1107 - 17; Muller et al. (2002) Cell 111:197 - 208; e Nakamura et al. (2002) Mol Cell 10:1119 - 28.
[008] Estudos bioquímicos e genéticos forneceram evidência de que proteínas PcG de Drosophila funcionam em pelo menos dois complexos de proteína distintos, o complexo repressivo Policomb 1 (PRC 1) e o complexo ESC-E(Z) (também conhecido como complexo repressivo Policomb 2 (PRC2)). Otte et al. (2003) Curr Opin Genet Dev 13:448 - 54. Estudos em Drosophila demonstraram que os complexos ESC- E(Z)/EED-EZH2 (isto é, PRC2) têm atividade de histona metiltransferase intrínseca. Embora as composições dos complexos isolados por grupos diferentes sejam levemente diferentes, elas, em geral, contêm EED, EZH2, SUZ12 e RbAp48 ou homólogos de Drosophila dos mesmos. Entretanto, um complexo reconstituído compreendendo apenas EED, EZH2, e SUZ12 conserva atividade de histona metiltransferase para lisina 27 da histona H3. Patente U.S. 7.563.589.
[009] Entre as várias proteínas que constituem os complexos PRC2, EZH2 (Acentuador de Homólogo 2 de Zeste) é a subunidade catalítica. O sítio catalítico de EZH2, por sua vez, está presente dentro de um domínio de SET, um motivo de sequência altamente conservado (nomeado depois de Su(var)3-9, Acentuador de Zeste, Trithorax) que é encontrado em várias proteínas associadas à cromatina, incluindo membros do grupo Trithorax e grupo Policomb. O domínio de SET é característico de todas as histona lisina metiltransferases conhecidas, exceto a H3-K79 metiltransfe-rase DOT1.
[010]Além do silenciamento do gene Hox, a metilação da histona H3-K27 mediada por PRC2 foi mostrada participar na inativação de X. Plath et al. (2003) Science 300:131 - 5; Silva et al. (2003) Dev Cell4:481 - 95. O recrutamento do complexo PRC2 em Xi e trimetilação subsequente em histona H3-K27 ocorre durante o estágio de ini-ciação da inativação de X e é dependente de Xist RNA. Além disso, EZH2 e sua atividade de histona H3-K27 metiltransferase associada foram descobertas marcar de maneira diferente as células de epiblasto pluripotentes e o trofectoderma diferenciado, e compatíveis com um papel de EZH2 na manutenção dos padrões de modificação epi- genética de células de epiblasto pluripotentes, a deleção mediada por Cre de EZH2 resulta em perda da metilação de histona H3-K27 nas células. Erhardt et al. (2003) Development 130:4235 - 48). Além disso, estudos em linhagens celulares e tecidos de câncer de próstata e mama revelaram uma correlação forte entre os níveis de EZH2 e SUZ12 e a invasão destes cânceres, indicando que a disfunção do complexo PRC2 pode contribuir para o câncer. Bracken et al. (2003) EMBOJ22:5323 - 35; Kirmizis et al. (2003) Mol Cancer Ther 2:113 - 21; Kleer et al. (2003) Proc Natl Acad Sci USA 100:11606 - 11; Varambally et al. (2002) Nature 419:624 - 9.
[011] Recentemente, mutações somáticas da tirosina 641 (Y641C, Y641F, Y641N, Y641S e Y641H, algumas vezes também referida como Y646C, Y646F, Y646N, Y646S e Y646H, respectivamente) de EZH2 foram relatadas estar associadas com linfoma folicular (FL) e com o subtipo do tipo células B (GCB) do centro germinal de linfoma difuso de grandes células B (DLBCL). Morin et al. (2010) Nat Genet 42:181 - 5. Em todos os casos, a ocorrência do gene de EZH2 mutante foi descoberta ser heterozigótica, e a expressão dos alelos do tipo selvagem e mutantes foi detectada nas amostras de mutantes esboçadas por sequenciamento de transcriptoma. também foi demonstrado que todas as formas mutantes de EZH2 podem ser incorporadas no complexo PRC2 de múltiplas proteínas, mas que os complexos resultantes são desprovidos de a capacidade de catalisar a metilação do resíduo equivalente de H3-K27 de um substrato peptídico. Consequentemente, foi concluído que as mudanças associadas à doença em Tyr641 de EZH2 resultaram na perda de função com respeito à metilação de H3-K27 catalisada por EZH2.
Sumário da Invenção
[012] Em um aspecto, a presente invenção caracteriza um composto de benzeno substituído com arila ou heteroarila da Fórmula (I) abaixo ou um sal farmaceuti- camente aceitável ou éster do mesmo.
Figure img0001
(I),
[013] Nesta fórmula,
[014]Xi é N ou CR11;
[015]X2 é N ou CR13;
[016]Z é NR7R8, OR7, S(O)nR7 ou CR7R8R14, em que n é 0, 1 ou 2;
[017]cada um entre R1, R5, R9 e R10 é, independentemente, H ou alquila C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste de halo, hidroxila, COOH, C(O)O-alquila C1-C6, ciano, alcoxila C1C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros e heteroarila de 5 ou 6 membros;
[018]cada um entre R2, R3 e R4 é, independentemente, -Q1-T1, em que Q1 é uma ligação ou ligante alquila C1-C3 opcionalmente substituído com halo, ciano, hidroxila ou alcóxi C1-C6, e T1 é H, halo, hidroxila, COOH, ciano, ou RS1, em que RS1 é alquila C1-C3, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, alcoxila C1-C6, C(O)O-alquila C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, heterocicloalquila de 4 a 12 membros, ou heteroarila de 5 ou 6 membros, e RS1 é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste de halo, hidroxila, oxo, COOH, C(O)O-alquila C1-C6, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros e heteroarila de 5 ou 6 membros;
[019] R6 é arila C6-C10 ou heteroarila de 5 ou 6 membros, cada um entre os quais é opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2, em que Q2 é uma ligação ou ligante alquila C1-C3 opcionalmente substituído com halo, ciano, hidroxila ou alcóxi Ci- Ce, e T2 é H, halo, ciano, -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)+A-, C(O)Ra, -C(O)ORa, - C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -NRbC(O)ORa, -S(O)2Ra, -S(O)2NRaRb ou RS2, em que cada um entre Ra, Rb e Rc é, independentemente, H ou RS3, A- é um ânion farmaceutica- mente aceitável, cada um entre RS2 e RS3 é, independentemente, alquila Ci-Ce, ciclo- alquila C3-C8, arila Ce-Cio, heterocicloalquila de 4 a 12 membros, ou heteroarila de 5 ou 6 membros, ou Ra e Rb, juntamente com o átomo de N ao qual eles são ligados, formam um anel heterocicloalquila de 4 a 12 membros tendo 0 ou 1 heteroátomo adicional, e cada um entre RS2, RS3, e o anel heterocicloalquila de 4 a 12 membros formado por Ra e Rb, é opcionalmente substituído com um ou mais um ou mais -Q3-T3, em que Q3 é uma ligação ou ligante alquila C1-C3, cada um opcionalmente substituído com halo, ciano, hidroxila ou alcóxi C1-Ce, e T3 é selecionado a partir do grupo que consiste de halo, ciano, alquila C1-Ce, cicloalquila C3-C8, arila Ce-Cw, heterocicloalquila de 4 a 12 membros, heteroarila de 5 ou e membros, ORa, COORd, -S(O)2Rd, -NRdRe e -C(O)NRdRe, cada um entre Rd e Re independentemente sendo H ou alquila C1-Ce, ou -Q3-T3 é oxo; ou quaisquer dois -Q2-T2 vizinhos, juntamente com os átomos aos quais eles são ligados formam um anel de 5 ou e membros opcionalmente contendo 1 a 4 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S e opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste de halo, hidroxila, COOH, C(O)O-alquila C1-Ce, ciano, alcoxila C1-Ce, amino, mono-alquilamino C1- Ce, di-alquila C1-Cemino, cicloalquila C3-C8, arila Ce-C1o, heterocicloalquila de 4 a 12 membros e heteroarila de 5 ou e membros;
[020] R7 é -Q4-T4, em que Q4 é uma ligação, ligante alquila C1-C4 ou ligante al- quenila C2-C4, cada ligante opcionalmente substituído com halo, ciano, hidroxila ou alcóxi C1-Ce, e T4 é H, halo, ciano, NRfRg, -ORf, -C(O)Rf, -C(O)ORf, -C(O)NRfRg, - C(O)NRf0Rg, -NRfC(O)Rg, -S(O)2Rf, ou RS4, em que cada um entre Rf e Rg é, inde-pendentemente, H ou RS5, cada um entre RS4 e RS5 é, independentemente, alquila C1- C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros ou heteroarila de 5 ou 6 membros, e cada um entre RS4 e RS5 é opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5, em que Q5 é uma ligação, C(O), C(O)NRk, NRkC(O), S(O)2, ou ligante alquila C1-C3, Rk sendo H ou alquila C1-C6, e T5 é H, halo, alquila C1-C6, hidroxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros, heteroarila de 5 ou 6 membros, ou S(O)qRq, em que q é 0, 1 ou 2 e Rq é alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros ou heteroarila de 5 ou 6 membros, e T5 é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste de halo, alquila C1-C6, hidroxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros e heteroarila de 5 ou 6 membros, exceto quando T5 é H, halo, hidroxila ou ciano; ou -Q5-T5 é oxo;
[021]cada um entre R8, R11, R12 e R13 é, independentemente, H, halo, hidroxila, COOH, ciano, RS6, ORS6, ou COORS6, em que RS6 é alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C8, heterocicloalquila de 4 a 12 membros, amino, mono-alquilamino C1-C6, ou di-alquilamino C1-C6, e RS6 é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste de halo, hidroxila, COOH, C(O)O-alquila C1-C6, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6 e di-alquila- mino C1-C6; ou R7 e R8, juntamente com o átomo de N ao qual eles são ligados, formam um anel heterocicloalquila de 4 a 11 membros tendo 0 a 2 heteroátomos adicionais, ou R7 e R8, juntamente com o átomo de C ao qual eles são ligados, formam cicloalquila C3C8 ou um anel heterocicloalquila de 4 a 11 membros tendo 1 a 3 heteroátomos, e cada um entre os anéis heterocicloalquila de 4 a 11 membros ou cicloalquila C3-C8 formado por R7 e R8 é opcionalmente substituído com um ou mais -Q6-T6, em que Q6 é uma ligação, C(O), C(O)NRm, NRmC(O), S(O)2, ou ligante alquila C1-C3, Rm sendo H ou alquila C1-C6, e T6 é H, halo, alquila C1-C6, hidroxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros, heteroarila de 5 ou 6 membros, ou S(O)pRp, em que p é 0, 1 ou 2 e Rp é alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros ou heteroarila de 5 ou 6 membros, e T6 é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste de halo, alquila C1-C6, hidroxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros, e heteroarila de 5 ou 6 membros, exceto quando T6 é H, halo, hidroxila, ou ciano; ou-Q6-T6 é oxo; e
[022]RI4 é ausente, H, ou alquila C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste de halo, hidroxila, COOH, C(O)O-alquila C1-C6, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di- alquilamino C1-C6, cicloalquila C3- C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros e heteroarila de 5 ou 6 membros.
[023]Um subconjunto dos compostos da Fórmula (I) inclui aqueles da Fórmula (Ia):
[024]
Figure img0002
[025]Um outro subconjunto dos compostos da Fórmula (1) inclui aqueles da Fórmula (Ib), (Ic) ou (Id):
[026]
Figure img0003
[027]Um outro subconjunto dos compostos da fórmula (I) inclui aqueles da Fór mula (Ie), (Ig), (II) ou (IIa):
[028]
Figure img0004
[029]Os compostos da Fórmula (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (Ig), (II) ou (IIa) podem incluir uma ou mais entre as características seguintes:
[030]XI é CR11, e X2 é CR13.
[031]Xi é CR11 e X2 é N.
[032]Xi é N e X2é CR13.
[033]Xi é N e X2 é N.
[034]Z é NR7R8.
[035]Z é CR7R8R14.
[036]Z é OR7.
[037]Z é S(O)nR7, em que n é 0, 1 ou 2.
[038] R6 é arila C6-C10 não substituído ou heteroarila de 5 ou 6 membros não substituído.
[039] R6 é arila C6-C10 substituído com um ou mais -Q2-T2 ou heteroarila de 5 ou 6 membros substituído com um ou mais -Q2-T2.
[040] R6 é fenila substituído com um ou mais -Q2-T2.
[041] R6 é heteroarila de 5 ou 6 membros contendo 1 a 3 heteroátomos adicionais selecionados a partir de N, O e S e opcionalmente substituído com um ou mais - Q2-T2.
[042] R6 é quinolinila, tetrazolila, oxazolila, isoxazolila, tiazolila, isotiazolila, furila ou tienila, cada um entre os quais é opcionalmente substituído com um ou mais -Q2- T2.
[043]T2 é alquila C1-C6, arila C6-C10, halo, -ORa -NRaRb, -(NRaRbRc)+A-, -C(O)Ra, - C(O)ORa, -C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -NRbC(O)ORa, -S(O)2Ra ou -S(O)2NRaRb.
[044]T2 é -NRaRb, em que cada um entre Ra e Rb é, independentemente, H ou alquila C1-C6, ou Ra e Rb, juntamente com o átomo de N ao qual eles são ligados, formam um anel heterocicloalquila de 4 a 7 membros tendo 0 ou 1 heteroátomo adicional, o alquila C1-C6 e o anel heterocicloalquila de 4 a 12 membros (por exemplo, 4 a 7 membros) sendo opcionalmente substituídos com um ou mais -Q3-T3.
[045]Q2 é ligante alquila C1-C3 opcionalmente substituído com halo ou hidroxila.
[046]Q2 é uma ligação ou ligante metila ou etila e T2 é H, halo, -ORa, -NRaRb, - (NRaRbRc)+A- ou -S(O)2NRaRb.
[047] R7 não é H.
[048] R7 é alquila C1-C6, cicloalquila C3-C8 ou heterocicloalquila de 4 a 12 membros (por exemplo, 4 a 7 membros), cada um opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
[049] R7 é heterocicloalquila de 4 a 7 membros opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
[050] R7 é piperidinila, tetra-hidropirano, ciclopentila ou ciclo-hexila, cada um opcionalmente substituído com -Q5-T5.
[051]T5 é H, halo, alquila C1-C6, alcoxila C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10 ou heterocicloalquila de 4 a 12 membros (por exemplo, 4 a 7 membros).
[052]Q5 é uma ligação e T5 é alquila C1-C6, cicloalquila C3-C8 ou heterocicloalquila de 4 a 12 membros (por exemplo, 4 a 7 membros).
[053]Q5 é CO, S(O)2, ou NHC(O); e T5 é alquila C1-C2, alcoxila C1-C6, cicloalquila C3-C8 ou heterocicloalquila de 4 a 12 membros (por exemplo, 4 a 7 membros).
[054]Q5 é ligante alquila C1-C3 e T5 é H ou arila C6-C10.
[055]Q5 é ligante alquila C1-C3 e T5 é cicloalquila C3-C8, heterocicloalquila de 4 a 7 membros ou S(O)qRq.
[056] R11 é H.
[057] R7 é ciclopentila ou ciclo-hexila, cada um opcionalmente substituído com - Q5-T5.
[058]Q5 é NHC(O) e T5 é alquila C1-C6 ou alcóxi C1-C6.
[059] R7 é isopropila.
[060]Cada um entre R2 e R4 é, independentemente, H ou alquila C1-C6 opcionalmente substituído com amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6 ou arila C6-C10.
[061]Cada um entre R2 e R4 é metila.
[062] R1 é H.
[063] R12 é H, metila, etila, etenila ou halo.
[064] Ri2 é metila.
[065] Ri2 é etila.
[066] Ri2 é etenila.
[067] R8 é H, metila ou etila.
[068] R8 é metila.
[069] R8 é etila.
[070] R8 é 4 a 7-heterocicloalquila, por exemplo, tetra-hidropirano.
[071] Z é NR7R8 ou CR7R8R14, em que R7 e R8, juntamente com o átomo ao qual eles são ligados, formam um anel selecionado a partir do grupo que consiste de pipe- ridinila, morfolinila, piperazinila e ciclo-hexenila, cada um opcionalmente substituído com -Q6-T6.
[072] R13 é H ou metila.
[073] R13 é H.
[074] R3 é H. A-é Br- ou Cl-.
[075]A presente invenção também fornece composições farmacêuticas compreendendo um ou mais portadores farmaceuticamente aceitáveis e um ou mais compostos selecionados a partir daqueles de qualquer Fórmula divulgada neste relatório.
[076] Um outro aspecto desta invenção é um método para tratar ou prevenir câncer. O método inclui administrar a um paciente em necessidade do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais compostos selecionados a partir daqueles de qualquer Fórmula divulgada neste relatório.
[077]A menos que de outro modo estabelecido, qualquer descrição de um método de tratamento inclui usos dos compostos para fornecer tal tratamento ou profilaxia, conforme é descrito no relatório descritivo, assim como usos dos compostos para preparar um medicamento para tratar ou prevenir tal condição. O tratamento inclui o tratamento de animais humanos ou não humanos, incluindo roedores e outros modelos de doença.
[078] Por exemplo, o método compreende a etapa de administrar a um paciente tendo um câncer com metilação de H3-K27 anormal uma quantidade eficaz de um ou mais compostos de qualquer uma entre as Fórmulas divulgadas neste relatório, em que o composto inibe a atividade de histona metiltransferase de EZH2, desse modo, tratando o câncer. Exemplos da metilação de H3-K27 anormal podem incluir um aumento global em e/ou distribuição alterada de H3-K27 di ou trimetilação na cromatina de células de câncer.
[079] Por exemplo, o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste de cânceres que superexpressam EZH2 ou outras subunidades de PRC2, contêm mutações de perda de função em H3-K27 demetilases, tais como UTX, ou superexpressam proteínas acessórias, tais como PHF19/PCL3, capazes de aumentar e ou mislocalizar a atividade de EZH2 (veja as referências em Sneeringer et al. Proc Natl Acad Sci USA 107(49):20980 - 5, 2010).
[080] Por exemplo, o método compreende a etapa de administrar a um paciente tendo um câncer que superexpressa EZH2 uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais compostos de qualquer uma entre as Fórmulas divulgadas neste relatório, em que o composto inibe a atividade de histona metiltransferase de EZH2, desse modo, tratando o câncer.
[081] Por exemplo, o método compreende a etapa de administrar a um paciente tendo um câncer com uma mutação de perda de função na H3-K27 demetilase UTX uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais compostos de qualquer Fórmula divulgada neste relatório, em que o composto inibe a atividade de histona metiltransferase de EZH2, desse modo, tratando o câncer.
[082] Por exemplo, o método compreende a etapa de administrar a um paciente tendo um câncer que superexpressa um componente acessório do PRC2, tal como PHF19/PCL3, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais compostos de qualquer Fórmula divulgada neste relatório, em que o composto inibe a atividade de histona metiltransferase de EZH2, desse modo, tratando o câncer.
[083]Ainda em um outro aspecto, esta invenção se refere a um método para modular a atividade da EZH2 do tipo selvagem, a subunidade catalítica do complexo PRC2 que catalisa a mono- a tri-metilação de lisina 27 em histona H3 (H3-K27). Por exemplo, a presente invenção se refere a um método para inibir a atividade de EZH2 em uma célula. Este método pode ser conduzido in vitro ou in vivo.
[084]Ainda em um outro aspecto, esta invenção diz respeito a um método para inibir em um paciente a conversão de H3-K27 em H3-K27 trimetilada. O método compreende administrar a um paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais entre os compostos de qualquer uma entre as Fórmulas divulgadas neste relatório para inibir a atividade de histona metiltransferase de EZH2, desse modo, inibindo a conversão de H3-K27 em H3-K27 trimetilada no paciente.
[085] Por exemplo, o método compreende a etapa de administrar a um paciente tendo um câncer que expressa um mutante Y641 de EZH2 uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais compostos de qualquer Fórmula divulgada neste relatório, em que o composto inibe a atividade de histona metiltransferase de EZH2, desse modo, tratando o câncer.
[086] Por exemplo, o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste de linfoma folicular e linfoma difuso de grandes células B (DLBCL) de subtipo do tipo células B (GCB) do centro germinal. Por exemplo, o câncer é linfoma, leucemia ou melanoma. Preferivelmente, o linfoma é linfoma não Hodgkin, linfoma folicular ou linfoma difuso de grandes células B. Alternativamente, a leucemia é leucemia mielógena crônica (CML), leucemia mieloide aguda, leucemia linfocítica aguda ou leucemia de linhagem mista.
[087]A condição pré-cancerosa é síndromes mielodisplásicas (MDS, anteriormente conhecidas como pré-leucemia).
[088] Por exemplo, o câncer é um câncer hematológico.
[089] Por exemplo, o método compreende a etapa de administrar a um paciente tendo um câncer que expressa um mutante Y641 de EZH2 uma quantidade terapeu- ticamente eficaz de um ou mais compostos de quaisquer Fórmulas divulgadas neste relatório, em que o composto inibe seletivamente a atividade de histona metiltransferase do mutante Y641 de EZH2, desse modo, tratando o câncer.
[090] Por exemplo, o método compreende ainda as etapas de realizar um ensaio para detectar um mutante Y641 de EZH2 em uma amostra compreendendo células de câncer a partir de um paciente tendo um câncer.
[091]Ainda em um outro aspecto, esta invenção se refere a um método para modular a atividade da histona metiltransferase EZH2 do tipo selvagem e mutante, a subunidade catalítica do complexo PRC2 que catalisa a mono a trimetilação de lisina 27 em histona H3 (H3-K27). Por exemplo, a presente invenção se refere a um método para inibir a atividade de certas formas mutantes de EZH2 em uma célula. As formas mutantes de EZH2 incluem uma substituição de um outro resíduo de aminoácido por tirosina 641 (Y641, também Tyr641) de EZH2 do tipo selvagem. O método inclui con-tatar a célula com uma quantidade eficaz de um ou mais entre os compostos de qualquer uma entre as Fórmulas divulgadas neste relatório. Este método pode ser conduzido in vitro ou in vivo.
[092]Ainda em um outro aspecto, esta invenção diz respeito a um método para inibir em um paciente a conversão de H3-K27 em H3-K27 trimetilada. O método compreende administrar a um paciente que expressa um mutante Y641 de EZH2 uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais entre os compostos de qualquer uma entre as Fórmulas divulgadas neste relatório para inibir a atividade de histona metiltransferase de EZH2, desse modo, inibindo a conversão de H3-K27 em H3-K27 trimetilada no paciente. Por exemplo, a atividade de histona metiltransferase inibida é aquela do mutante Y641 de EZH2. Por exemplo, o composto desta invenção inibe seletivamente a atividade de histona metiltransferase do mutante Y641 de EZH2. Por exemplo, o mutante Y641 de EZH2 é selecionado a partir do grupo que consiste de Y641C, Y641F, Y641H, Y641N e Y641S.
[093]O método para inibir em um paciente a conversão de H3-K27 em H3-K27 trimetilada também pode compreender a realização de um ensaio para detectar um mutante Y641 de EZH2 em uma amostra a partir de um paciente antes de administrar ao paciente que expressa um mutante Y641 de EZH2 uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais entre os compostos de qualquer uma entre as Fórmulas divulgadas neste relatório. Por exemplo, a realização do ensaio para detectar o mutante Y641 de EZH2 inclui resequenciamento total do genoma ou resequenciamento da região alvo que detecta um ácido nucleico que codifica o mutante Y641 de EZH2. Por exemplo, a realização do ensaio para detectar o mutante Y641 de EZH2 inclui contatar a amostra com um anticorpo que se liga especificamente a um polipeptídeo ou fragmento do mesmo característico do mutante Y641 de EZH2. Por exemplo, a realização do ensaio para detectar o mutante Y641 de EZH2 inclui contatar a amostra sob condições altamente severas com uma sonda de ácido nucleico que hibridiza em um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo ou fragmento do mesmo característico do mutante Y641 de EZH2.
[094]Além disso, a invenção também se refere a um método para identificar um inibidor de um mutante Y641 de EZH2. O método compreende as etapas de combinar um mutante Y641 isolado de EZH2 com um substrato de histona, um doador de grupo metila, e um composto de teste, em que o substrato de histona compreende uma forma de H3-K27 selecionada a partir do grupo que consiste de H3-K27 não metilada, H3-K27 monometilada, H3-K27 dimetilada, e qualquer combinação das mesmas; e a realização de um ensaio para detectar a metilação de H3-K27 (por exemplo, formação de H3-K27 trimetilada) no substrato de histona, desse modo, identificando o composto de teste como um inibidor do mutante Y641 de EZH2 quando a metilação de H3-K27 (por exemplo, formação de H3-K27 trimetilada) na presença do composto de teste é menor do que a metilação de H3-K27 (por exemplo, formação de H3-K27 trimetilada) na ausência do composto de teste.
[095] Em uma modalidade, a realização do ensaio para detectar a metilação de H3-K27 no substrato de histona compreende medir a incorporação de grupos metila marcados.
[096] Em uma modalidade, os grupos metila marcados são grupos metila isoto- picamente marcados.
[097] Em uma modalidade, a realização do ensaio para detectar a metilação de H3-K27 no substrato de histona compreende contatar o substrato de histona com um anticorpo que se liga especificamente à H3-K27 trimetilada.
[098]Também no escopo da invenção está um método para identificar um inibidor seletivo de um mutante Y641 de EZH2. O método compreende as etapas de combinar um mutante Y641 isolado de EZH2 com um substrato de histona, um doador de grupo metila e um composto de teste, em que o substrato de histona compreende uma forma de H3-K27 selecionada a partir do grupo que consiste de H3-K27 monometi- lada, H3-K27 dimetilada e uma combinação de H3-K27 monometilada e H3-K27 di- metilada, desse modo, formando uma mistura de teste; combinar uma EZH2 do tipo selvagem isolada com um substrato de histona, um doador de grupo metila e um composto de teste, em que o substrato de histona compreende uma forma de H3-K27 selecionada a partir do grupo que consiste de H3-K27 monometilada, H3-K27 dimeti-lada e uma combinação de H3-K27 monometilada e H3-K27 dimetilada, desse modo, formando uma mistura controle; realizar um ensaio para detectar a trimetilação do substrato de histona na mistura de teste e na mistura controle; calcular a razão de (a) trimetilação com o mutante Y641 de EZH2 e o composto de teste (M+) para (b) trimetilação com o mutante Y641 de EZH2 sem o composto de teste (M-); calcular a razão de (c) trimetilação com EZH2 do tipo selvagem e o composto de teste (WT+) para (d) trimetilação com EZH2 do tipo selvagem sem o composto de teste (WT-); comparar a razão (a)/(b) com a razão (c)/(d); e identificar o composto de teste como um inibidor seletivo do mutante Y641 de EZH2 quando a razão (a)/(b) é menor do que a razão (c)/(d).
[099]A presente invenção ainda fornece um método para identificar um paciente como um candidato para o tratamento com um ou mais compostos da invenção. O método compreende as etapas de realizar um ensaio para detectar um mutante Y641 de EZH2 em uma amostra a partir de um paciente; e identificar um paciente que expressa um mutante Y641 de EZH2 como um candidate para o tratamento com um ou mais compostos da invenção, em que o composto inibe a atividade de histona metiltransferase de EZH2.
[0100]Um outro aspecto da invenção é um método para inibir conversão de H3- K27 em H3-K27 trimetilada. O método compreende a etapa de contatar um mutante Y641 de EZH2 com um substrato de histona compreendendo H3-K27 e uma quantidade eficaz de um composto da presente invenção, em que o composto inibe a atividade de histona metiltransferase de EZH2, desse modo, inibindo a conversão de H3- K27 em H3-K27 trimetilada.
[0101]Além disso, os compostos ou métodos descritos neste relatório podem ser usados para pesquisa (por exemplo, estudo de enzimas epigenéticas) e outros propósitos não terapêuticos.
[0102]A menos que de outro modo definido, todos os termos técnicos e científicos usados neste relatório têm o mesmo significado, conforme comumente entendido por aqueles de habilidade comum na técnica a qual esta invenção pertence. No relatório descritivo, as formas no singular também incluem o plural a menos que o contexto claramente indique de outro modo. Embora os métodos e materiais similares ou equivalentes àqueles descritos neste relatório possam ser usados na prática ou teste da presente invenção, métodos e materiais adequados são descritos abaixo. Todas as publicações, pedidos de patente, patentes e outras referências mencionadas neste relatório são incorporadas como referência. As referências citadas neste relatório não são admitidas como técnica anterior à invenção reivindicada. No caso de conflito, o presente relatório descritivo, incluindo as definições, prevalecerá. Além disso, os materiais, métodos e exemplos são apenas ilustrativos e não são limitantes.
[0103]Outras características e vantagens da invenção serão evidentes a partir da descrição detalhada e reivindicações seguintes.
[0104]Breve Descrições Das Figuras
[0105]A Figura 1 (A) é um lote idealizado de contagem celular (isto é, número celular) como uma função de tempo que mostra a proliferação exponencial durante o crescimento celular na fase log.
[0106]A Figura 1 (B) é um lote idealizado de ln(contagem celular) como uma função de tempo para os dados a partir do painel (A).
[0107]A Figura 2 é um gráfico que mostra curvas de crescimento celular bifásico na presença de um composto antiproliferativo para o qual existe um retardo antes que o impacto do composto no crescimento celular seja realizado. O composto começa a afetar o crescimento celular no ponto de tempo “início de impacto” marcado. Os círculos cheios representam dados idealizados para a amostra controle veículo (ou solvente) que não é tratada com o composto. Os outros símbolos representam curvas de crescimento bifásico para as células tratadas com concentrações diferentes do composto (isto é, fármaco).
[0108]A Figura 3 é um novo lote de kp como uma função da concentração do composto para (A) um composto citostático e (B) citotóxico, ilustrando a determinação gráfica da LCC para um agente citotóxico. Observe que para um composto citostático (painel A), o valor de kp nunca pode estar abaixo zero.
[0109]A Figura 4 é um diagrama que mostra a metilação de H3K27me3 global em tumores WSU-DLCL2 a partir de camundongos tratados com o composto 87 durante 7 dias.
[0110]A Figura 5 é um diagrama que mostra a metilação de H3K27me3 global em tumores WSU-DLCL2 a partir de camundongos tratados com o composto 141 durante 7 dias.
[0111]A Figura 6 é um diagrama que mostra o crescimento de tumor de camundongos portadores de xenoenxerto de WSU-DLCL2 durante o curso do tratamento de 28 dias tratados com veículo ou Composto 141.
[0112]A Figura 7 é um diagrama que mostra o crescimento de tumor de camundongos portadores de xenoenxerto de WSU-DLCL2 tratados com o Composto 44.
[0113]A Figura 8 é um diagrama que mostra a metilação de H3K27me3 global em tumores WSU-DLCL2 a partir de camundongos tratados com o Composto 44 durante 28 e 7 dias.
[0114]A Figura 9 é um diagrama que mostra o crescimento de tumor de camundongos portadores de xenoenxerto de WSU-DLCL2 com tratamento com Composto 44 em programações de dosagem diferentes.
[0115]A Figura 10 é um diagrama que mostra a metilação de H3K27me3 global em tumores WSU-DLCL2 a partir de camundongos tratados com o Composto 44 em programações de dosagem diferentes durante 28 dias.
[0116]A Figura 11 é um diagrama que mostra o efeito do Composto 44 sobre o peso corpóreo do camundongo. Os dados representam a média ± SD (n = 9). As dosagens que resultaram em mortalidades não são plotadas.
[0117]A Figura 12 é um diagrama que mostra os efeitos antitumor do Composto 44 oralmente administrado contra um xenoenxerto de linfoma difuso de grandes de células B KARPAS-422 em camundongos. Os dados representam a média ± SD (n = 9). * P < 0,05 versus veículo controle no dia 29 (medições ANOVA repetidas, seguido por teste de comparação múltiplo do tipo Dunnett). As dosagens que resultaram em mortalidades não são plotadas.
[0118]Descrição Detalhada da Invenção
[0119]A presente invenção fornece novos compostos de benzeno substituídos com arila ou heteroarila, métodos sintéticos para fabricar os compostos, composições farmacêuticas contendo os mesmos e vários usos dos compostos.
1 .Compostos de benzeno substituídos com arila ou heteroarila
[0120]A presente invenção fornece os compostos da Fórmula (I):
[0121]
Figure img0005
[0122]ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster dos mesmos. Nesta fórmula:
[0123]XI é N ou CR11;
[0124]X2 é N ou CR13;
[0125]Z é NR7R8, OR7, S(O)nR7 ou CR7R8R14, em que n é 0, 1 ou 2;
[0126]cada um entre R1, R5, R9 e R10 é, independentemente, H ou alquila C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste de halo, hidroxila, COOH, C(O)O-alquila C1-C6, ciano, alcoxila C1C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros e heteroarila de 5 ou 6 membros;
[0127]cada um entre R2, R3 e R4 é, independentemente, -Q1-T1, em que Q1 é uma ligação ou ligante alquila C1-C3 opcionalmente substituído com halo, ciano, hidroxila ou alcóxi C1-C6, e TI é H, halo, hidroxila, COOH, ciano, ou RSI, em que RSI é alquila C1-C3, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, alcoxila C1-C6, C(O)O-alquila C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, heterocicloalquila de 4 a 12 membros ou heteroarila de 5 ou 6 membros, e Rsi é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste de halo, hidroxila, oxo, COOH, C(O)O-alquila C1-C6, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros e heteroarila de 5 ou 6 membros;
[0128]R6 é arila C6-C10 ou heteroarila de 5 ou 6 membros, cada um entre os quais é opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2, em que Q2 é uma ligação ou ligante alquila C1-C3 opcionalmente substituído com halo, ciano, hidroxila ou alcóxi C1-C6, e T2 é H, halo, ciano, -ORa -NRaRb, -(NRaRbRc)+A-, -C(O)Ra, -C(O)ORa, - C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -NRbC(O)ORa, -S(O)2Ra, -S(O)2NRaRb, ou RS2, em que cada um entre Ra, Rb e Rc é, independentemente, H ou RS3, A- é um ânion farmaceutica- mente aceitável, cada um entre RS2 e RS3 é, independentemente, alquila C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros, ou heteroarila de 5 ou 6 membros, ou Ra e Rb, juntamente com o átomo de N ao qual eles são ligados, formam um anel heterocicloalquila de 4 a 12 membros tendo 0 ou 1 heteroátomo adicional, e cada um entre RS2, RS3, e o anel heterocicloalquila de 4 a 12 membros formado por Ra e Rb, é opcionalmente substituído com um ou mais um ou mais -Q3-T3, em que Q3 é uma ligação ou ligante alquila C1-C3, cada um opcionalmente substituído com halo, ciano, hidroxila ou alcóxi C1-C6, e T3 é selecionado a partir do grupo que consiste de halo, ciano, alquila C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros, heteroarila de 5 ou 6 membros, ORd, COORd, -S(O)2Rd, -NRdRe e -C(O)NRdRe, cada um entre Rd e Re independentemente sendo H ou alquila C1-C6, ou -Q3-T3 é oxo; ou quaisquer dois -Q2-T2 vizinhos, juntamente com os átomos aos quais eles são ligados, formam um anel de 5 ou 6 membros opcionalmente contendo 1 a 4 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S e opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste de halo, hidroxila, COOH, C(O)O-alquila C1-C6, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros e heteroarila de 5 ou 6 membros;
[0129]R7 é -Q4-T4, em que Q4 é uma ligação, ligante alquila C1-C4 ou ligante alquenila C2-C4, cada ligante opcionalmente substituído com halo, ciano, hidroxila ou alcóxi C1-C6, e T4 é H, halo, ciano, NRfRg, -ORf, -C(O)Rf, -C(O)ORf, -C(O)NRfRg, - C(O)NRfORg, -NRfC(O)Rg, -S(O)2Rf, ou RS4, em que cada um entre Rf e Rg é, inde-pendentemente, H ou RS5, cada um entre RS4 e RS5 é, independentemente, alquila C1C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros ou heteroarila de 5 ou 6 membros, e cada um entre RS4 e RS5 é opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5, em que Q5 é uma ligação, C(O), C(O)NRk, NRkC(O), S(O)2, ou ligante alquila C1-C3, Rk sendo H ou alquila C1-C6, e T5 é H, halo, alquila C1-C6, hidroxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros, heteroarila de 5 ou 6 membros, ou S(O)qRq, em que q é 0, 1 ou 2 e Rq é alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros, ou heteroarila de 5 ou 6 membros, e T5 é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste de halo, alquila C1-C6, hidroxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros e heteroarila de 5 ou 6 membros, exceto quando T5 é H, halo, hidroxila ou ciano; ou -Q5-T5 é oxo;
[0130]cada um entre R8, R11, R12 e R13 é, independentemente, H, halo, hidroxila, COOH, ciano, RS6, ORS6 ou COORS6, em que RS6 é alquila C1-C6, alquenila C2C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C8, heterocicloalquila de 4 a 12 membros, amino, mono-alquilamino C1-C6, ou di-alquilamino C1-C6, e RS6 é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste de halo, hidroxila, COOH, C(O)O-alquila C1-C6, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, e di-alquilamino C1-C6; ou R7 e R8, juntamente com o átomo de N ao qual eles são ligados, formam um anel heterocicloalquila de 4 a 11 membros tendo 0 a 2 heteroátomos adicionais, ou R7 e R8, juntamente com o átomo de C ao qual eles são ligados, formam cicloalquila C3-C8 ou um anel heterocicloalquila de 4 a 11 membros tendo 1 a 3 heteroátomos, e cada um entre os anéis heterocicloalquila de 4 a 11 membros ou cicloalquila C3-C8 formado por R7 e R8 é opcionalmente substituído com um ou mais -Q6-T6, em que Q6 é uma ligação, C(O), C(O)NRm, NRmC(O), S(O)2, ou ligante alquila C1-C3, Rm sendo H ou alquila C1-C6, e T6 é H, halo, alquila C1-C6, hidroxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros, heteroarila de 5 ou 6 membros, ou S(O)pRp, em que p é 0, 1 ou 2 e Rp é alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros, ou heteroarila de 5 ou 6 membros, e T6 é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste de halo, alquila C1-C6, hidroxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros e heteroarila de 5 ou 6 membros, exceto quando T6 é H, halo, hidroxila, ou ciano; ou -Q6-T6 é oxo; e
[0131]RI4 é ausente, H, ou alquila C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste de halo, hidroxila, COOH, C(O)O-alquila C1-C6, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di- alquilamino C1-C6, cicloalquila C3- C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros e heteroarila de 5 ou 6 membros.
[0132]Por exemplo, X1 é CR11 e X2 é CR13.
[0133]Por exemplo, X1 é CR11 e X2 é N.
[0134]Por exemplo, X1 é N e X2 é CR13.
[0135]Por exemplo, Xi é N e X2 é N.
[0136]Por exemplo, Z é NR7R8.
[0137]Por exemplo, Z é CR7R8R14.
[0138]Por exemplo, Z é OR7.
[0139]Por exemplo, Z é S(O)nR7, em que n é 0, 1 ou 2.
[0140]Por exemplo, Z é SR7.
[0141]Por exemplo, Rε é arila C6-C10 não substituído ou heteroarila de 5 ou 6 membros não substituído.
[0142]Por exemplo, Rε é arila Cε-C10 substituído com um ou mais -Q2-T2ou heteroarila de 5 ou 6 membros substituído com um ou mais -Q2-T2.
[0143]Por exemplo, Rε é fenila não substituído.
[0144]Por exemplo, Rε é fenila substituído com um ou mais -Q2-T2.
[0145]Por exemplo, Rε é heteroarila de 5 a ε membros contendo 1 a 3 hetero- átomos adicionais selecionados a partir de N, O e S e opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2.
[0146]Por exemplo, Rε é piridinila, pirazolila, pirimidinila, quinolinila, tetrazolila, oxazolila, isoxazolila, tiazolila, isotiazolila, furila, ou tienila, cada um entre os quais é opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2.
[0147]Por exemplo, Q2 é uma ligação.
[0148]Por exemplo, Q2 é um ligante alquila C1-C3 não substituído.
[0149]Por exemplo, T2 é alquila C1-Cε ou arila Cε-Cw, cada um opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3.
[0150]Por exemplo, T2 é um alquila C1-Cε de cadeia reta ou C3-Cε de cadeia ramificada não substituído ou substituído, incluindo, mas não limitado a, metila, etila, n-propila, i-propila, n-butila, s-butila, t-butila, n-pentila, s-pentila e n-hexila.
[0151]Por exemplo, T2 é fenila.
[0152]Por exemplo, T2 é halo (por exemplo, flúor, cloro, bromo e iodo).
[0153]Por exemplo, T2 é heterocicloalquila de 4 a 7 membros (por exemplo, azetidinila, oxetanila, tietanila, pirrolidinila, imidazolidinila, pirazolidinila, oxazolidinila, isoxazolidinila, triazolidinila, tetra-hidrofuranila, piperidinila, 1,2,3,6-tetra-hidropiri- dinila, piperazinila, tetra-hidro-2H-piranila, 3,6-di-hidro-2H-piranila, tetra-hidro-2H-ti- opirano, morfolinila, 1,4-diazepanila, 1,4-oxazepanila, 2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]hepta- nila, 2,5-diazabiciclo[2,2,1]heptanila, 2-oxa-6-azaespiro[3,3]heptanila, 2,6-diazaes- piro[3,3]heptanila e semelhantes) opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3.
[0154]Por exemplo, T2 é -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)+A-, -C(O)Ra, -C(O)ORa, - C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -NRbC(O)ORa, -S(O)2Ra ou -S(O)2NRaRb.
[0155]Por exemplo, T2 é -NRaRb ou -C(O)NRaRb, em que cada um entre Ra e Rb é, independentemente, H ou alquila C1-C6, ou Ra e Rb, juntamente com o átomo de N ao qual eles são ligados, formam um anel heterocicloalquila de 4 a 7 membros tendo 0 ou 1 heteroátomo adicional, o alquila C1-C6 e o anel heterocicloalquila de 4 a 7 membros sendo opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3.
[0156]Por exemplo, Q2 é ligante alquila C1-C3 opcionalmente substituído com halo ou hidroxila.
[0157]Por exemplo, Q2 é uma ligação ou ligante metila e T2 é H, halo, -ORa, - NRaRb, -(NRaRbRc)+A- ou -S(O)2NRaRb.
[0158]Por exemplo, cada um entre Ra, Rb e Rc é, independentemente, H ou alquila C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3.
[0159]Por exemplo, um entre Ra, Rb e Rc é H.
[0160]Por exemplo, Ra e Rb, juntamente com o átomo de N ao qual eles são ligados, formam um anel heterocicloalquila de 4 a 7 membros tendo 0 ou 1 heteroátomo adicional ao átomo de N (por exemplo, azetidinila, pirrolidinila, imidazolidinila, pirazolidinila, oxazolidinila, isoxazolidinila, triazolidinila, piperidinila, 1,2,3,6-tetra-hi- dropiridinila, piperazinila, morfolinila, 1,4-diazepanila, 1,4-oxazepanila, 2-oxa-5-azabi- ciclo[2,2,1]heptanila, 2,5-diazabiciclo[2,2,1]heptanila, 2-oxa-6- azaespiro[3,3]heptanila, 2,6-diazaespiro[3,3]heptanila e semelhantes) e o anel é opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3.
[0161]Por exemplo, -Q3-T3 é oxo.
[0162]Por exemplo, T2 é heterocicloalquila de 4 a 7 membros ou cicloalquila C3C8 e um ou mais -Q3-T3 são oxo.
[0163]Por exemplo, Q3 é uma ligação ou ligante alquila C1-C3 não substituído ou substituído.
[0164]Por exemplo, T3 é H, halo, heterocicloalquila de 4 a 7 membros, alquila C1-C3, ORd, COORd,-S(O)2Rd ou -NRdRe.
[0165]Por exemplo, um entre Rde Re é H.
[0166]Por exemplo, R7 não é H.
[0167]Por exemplo, R7 é -C(O)Rf.
[0168]Por exemplo, R7 é -C(O)Rf, em que Rf é cicloalquila C3-C8.
[0169]Por exemplo, R7 é arila C6-C10 substituído com um ou mais -Q5-T5.
[0170]Por exemplo, R7 é fenila opcionalmente substituído com um ou mais -Q5- T5.
[0171]Por exemplo, R7 é alquila C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
[0172]Por exemplo, R7 é cicloalquila C3-C8 opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
[0173]Por exemplo, R7 é heterocicloalquila de 4 a 7 membros (por exemplo, azetidinila, oxetanila, tietanila, pirrolidinila, imidazolidinila, pirazolidinila, oxazolidinila, isoxazolidinila, triazolidinila, tetra-hidrofuranila, piperidinila, 1,2,3,6-tetra-hidropiri- dinila, piperazinila, tetra-hidro-2H-piranila, 3,6-di-hidro-2H-piranila, tetra-hidro-2H-ti- opirano e morfolinila, e semelhantes) opcionalmente substituído com um ou mais -Q5- T5.
[0174]Por exemplo, R7 é heterocicloalquila de 5 a 6 membros opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
[0175]Por exemplo, R7 é isopropila.
[0176]Por exemplo, R7 é pirrolidinila, piperidinila, tetra-hidropirano, ciclopentila, ciclo-hexila, ou ciclo-heptila, cada um opcionalmente substituído com -Q5-T5.
[0177]Por exemplo, R7 é ciclopentila ou ciclo-hexila, cada um opcionalmente substituído com -Q5-T5.
[0178]Por exemplo, R7 é pirrolidinila, piperidinila, tetra-hidropirano, tetra-hidro- 2H- tiopiranila, ciclopentila, ciclo-hexila ou ciclo-heptila, cada um opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
[0179]Por exemplo, R7 é ciclopentila, ciclo-hexila ou tetra-hidro-2H-tiopiranila, cada um opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
[0180]Por exemplo, um ou mais -Q5-T5 são oxo.
[0181]Por exemplo, R7 é 1-óxido-tetra-hidro-2H-tiopiranila ou 1,1-dióxido-tetra- hidro-2H-tiopiranila.
[0182]Por exemplo, Q5 é uma ligação e T5 é amino, mono-alquilamino C1-C6 ou di-alquilamino C1-C6.
[0183]Por exemplo, Q5 é NHC(O) e T5 é alquila C1-C6 ou alcóxi C1-C6.
[0184]Por exemplo, -Q5-T5 é oxo.
[0185]Por exemplo, T4 é heterocicloalquila de 4 a 7 membros ou cicloalquila C3C8 e um ou mais -Q5-T5 são oxo.
[0186]Por exemplo, T5 é H, halo, alquila C1-C6, alcoxila C1-C6, cicloalquila C3C8, arila C6-C10 ou heterocicloalquila de 4 a 7 membros.
[0187]Por exemplo, Q5 é uma ligação e T5 é alquila C1-C6, cicloalquila C3-C8 ou heterocicloalquila de 4 a 7 membros.
[0188]Por exemplo, Q5 é CO, S(O)2 ou NHC(O); e T5 é alquila C1-C6, alcoxila C1-C6, cicloalquila C3-C8 ou heterocicloalquila de 4 a 7 membros.
[0189]Por exemplo, T5 é alquila C1-C6 ou alcoxila C1-C6, cada um opcionalmente substituído com halo, hidroxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6 ou cicloalquila C3-C8.
[0190]Por exemplo, Q5 é ligante alquila C1-C3 e T5 é H ou arila C6-C10.
[0191]Por exemplo, Q5 é ligante alquila C1-C3 e T5 é cicloalquila C3-C8, heterocicloalquila de 4 a 7 membros, ou S(O)qRq.
[0192]Por exemplo, R11 é H.
[0193]Por exemplo, cada um entre R2 e R4 é, independentemente, H ou alquila C1-C6 opcionalmente substituído com amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6 ou arila C6-C10.
[0194]Por exemplo, cada um entre R2 e R4 é, independentemente, alquila C1C3 opcionalmente substituído com alcoxila C1-C6.
[0195]Por exemplo, cada um entre R2 e R4 é metila.
[0196]Por exemplo, R1 é H.
[0197]Por exemplo, R12 é H, metila, etila, etenila ou halo.
[0198]Por exemplo, R12 é metila.
[0199]Por exemplo, R12 é etila.
[0200]Por exemplo, R12 é etenila.
[0201]Por exemplo, R8 é H, metila, etila ou etenila.
[0202]Por exemplo, R8 é metila.
[0203]Por exemplo, R8 é etila.
[0204]Por exemplo, R8 é heterocicloalquila de 4 a 7 membros (por exemplo, azetidinila, oxetanila, tietanila, pirrolidinila, imidazolidinila, pirazolidinila, oxazolidinila, isoxazolidinila, triazolidinila, tetra-hidrofuranila, piperidinila, 1,2,3,6-tetra-hidropiri- dinila, piperazinila, tetra-hidro-2H-piranila, 3,6-di-hidro-2H-piranila, tetra-hidro-2H-ti- opirano, morfolinila, 1,4-diazepanila, 1,4-oxazepanila, 2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]hepta- nila, 2,5-diazabiciclo[2,2,1]heptanila, 2-oxa-6- azaespiro[3,3]heptanila, 2,6-diazaes- piro[3,3]heptanila e semelhantes).
[0205]Por exemplo, R8 é tetra-hidropirano.
[0206]Por exemplo, R8 é tetra-hidropirano e R7 é -Q4-T4, em que Q4 é uma ligação ou ligante alquila C1- C4 e T4 é H, alquila C1-C6, cicloalquila C3-C8 ou heterocicloalquila de 4 a 7 membros.
[0207]Por exemplo, Z é NR7R8 ou CR7R8R14, em que R7 e R8, juntamente com o átomo ao qual eles são ligados, formam um anel heterocicloalquila de 4 a 11 membros tendo 1 a 3 heteroátomos (por exemplo, azetidinila, oxetanila, tietanila, pirroli- dinila, imidazolidinila, pirazolidinila, oxazolidinila, isoxazolidinila, triazolidinila, tetra-hi- drofuranila, piperidinila, 1,2,3,6- tetra-hidropiridinila, piperazinila, tetra-hidro-2H-pira- nila, 3,6-di-hidro-2H-piranila, tetra-hidro- 2H-tiopirano e morfolinila, 1,4-dioxa-8-azaes- piro[4,5]decanila, e semelhantes) ou cicloalquila C3-C8, cada um opcionalmente substituído com um ou mais -QG-TG.
[0208]Por exemplo, o anel formado por R7 e R8 é selecionado a partir do grupo que consiste de azetidinila, pirrolidinila, piperidinila, morfolinila, piperazinila, 1,4-dioxa- 8- azaespiro[4,5]decanila e ciclo-hexenila, cada um opcionalmente substituído com - QG-TG.
[0209]Por exemplo,-Q6-T6 é oxo.
[0210]Por exemplo, TG é H, halo, alquila C1-CG, alcoxila C1-CG, cicloalquila C3C8, arila CG-C10 ou heterocicloalquila de 4 a 7 membros.
[0211]Por exemplo, QG é uma ligação e TG é alquila C1-CG, cicloalquila C3-C8 ou heterocicloalquila de 4 a 7 membros.
[0212]Por exemplo, QG é CO, S(O)2, ou NHC(O); e TG é alquila C1-C6, alcoxila C1-CG, cicloalquila C3-C8 ou heterocicloalquila de 4 a 7 membros.
[0213]Por exemplo, TG é alquila C1-CG ou alcoxila C1-CG, cada um opcionalmente substituído com halo, hidroxila, ciano, alcoxila C1-CG, amino, mono-alquilamino C1-CG, di-alquilamino C1-CG ou cicloalquila C3-C8.
[0214]Por exemplo, QG é ligante alquila C1-C3 e TG é H ou arila CG-C10.
[0215]Por exemplo, Q6 é ligante alquila C1-C3 e T6 é cicloalquila C3-C8, heterocicloalquila de 4 a 7 membros ou S(O)pRp.
[0216]Por exemplo, cada um entre Rp e Rq é, independentemente, alquila C1C6.
[0217]Por exemplo, R13 é H ou metila.
[0218]Por exemplo, R13 é H.
[0219]Por exemplo, R3 é H.
[0220]Por exemplo, A-é Br- ou Cl-.
[0221]Por exemplo, cada um entre R5, R9 e R10 é H.
[0222]A presente invenção fornece os compostos da Fórmula (Ia)
[0223]
Figure img0006
[0224]ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster dos mesmos, em que:
[0225]XI é N ou CR11;
[0226]X2 é N ou CR13;
[0227]Z é NR7R8, OR7, S(O)nR7 ou CR7R8R14, em que n é 0, 1 ou 2;
[0228]cada um entre RI e R5 é, independentemente, H ou alquila C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste de halo, hidroxila, COOH, C(O)O-alquila C1-C6, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros e heteroarila de 5 ou 6 membros;
[0229]cada um entre R2, R3 e R4 é, independentemente, -Q1-T1, em que Q1 é uma ligação ou ligante alquila C1-C3 opcionalmente substituído com halo, ciano, hidroxila ou alcóxi C1-C6, e Ti é H, halo, hidroxila, COOH, ciano, ou Rsi, em que Rsi é alquila C1-C3, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, alcoxila C1-C6, C(O)O-alquila C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, heterocicloalquila de 4 a 12 membros ou heteroarila de 5 ou 6 membros, e RS1 é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste de halo, hidroxila, oxo, COOH, C(O)O-alquila C1-C6, ciano, alcoxila C1C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros e heteroarila de 5 ou 6 membros;
[0230]R6 é arila C6-C10 ou heteroarila de 5 ou 6 membros, cada um entre os quais é opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2, em que Q2 é uma ligação ou ligante alquila C1-C3 opcionalmente substituído com halo, ciano, hidroxila ou alcóxi C1-C6, e T2 é H, halo, ciano, -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)+A-, C(O)Ra, -C(O)ORa, - C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -NRbC(O)ORa, -S(O)2Ra, -S(O)2NRaRb, ou RS2, em que cada um entre Ra, Rb e Rc é, independentemente, H ou RS3, A- é um ânion farmaceutica- mente aceitável, cada um entre RS2 e RS3 é, independentemente, alquila C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros ou heteroarila de 5 ou 6 membros, ou Ra e Rb, juntamente com o átomo de N ao qual eles são ligados, formam um anel heterocicloalquila de 4 a 12 membros tendo 0 ou 1 heteroátomo adicional, e cada um entre RS2, RS3, e o anel heterocicloalquila de 4 a 12 membros formado por Ra e Rb, é opcionalmente substituído com um ou mais um ou mais -Q3-T3, em que Q3 é uma ligação ou ligante alquila C1-C3, cada um opcionalmente substituído com halo, ciano, hidroxila ou alcóxi C1-C6, e T3 é selecionado a partir do grupo que consiste de halo, ciano, alquila C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros, heteroarila de 5 ou 6 membros, ORd, COORd, -S(O)2Rd, -NRdRe e - C(O)NRdRe, cada um entre Rd e Re independentemente sendo H ou alquila C1-C6, ou -Q3-T3 é oxo; ou quaisquer dois -Q2-T2 vizinhos, juntamente com os átomos aos quais eles são ligados, formam um anel de 5 ou 6 membros opcionalmente contendo 1 a 4 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S e opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste de halo, hidroxila, COOH, C(O)O-alquila C1-C6, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di- alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros e heteroarila de 5 ou 6 membros;
[0231]R7 é -Q4-T4, em que Q4 é uma ligação, ligante alquila C1-C4 ou ligante alquenila C2-C4, cada ligante opcionalmente substituído com halo, ciano, hidroxila ou alcóxi C1-C6, e T4 é H, halo, ciano, NRfRg, -ORf, -C(O)Rf, -C(O)ORf, -C(O)NRfRg, - C(O)NRfORg, -NRfC(O)Rg, -S(O)2Rf ou RS4, em que cada um entre Rf e Rg é, indepen-dentemente, H ou RS5, cada um entre RS4 e RS5 é, independentemente, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros ou heteroarila de 5 ou 6 membros, e cada um entre RS4 e RS5 é opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5, em que Q5 é uma ligação, C(O), C(O)NRk, NRkC(O), S(O)2, ou ligante alquila C1-C3, Rk sendo H ou alquila C1-C6, e T5 é H, halo, alquila C1-C6, hidroxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros, heteroarila de 5 ou 6 membros, ou S(O)qRq, em que q é 0, 1 ou 2 e Rq é alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros ou heteroarila de 5 ou 6 membros, e T5 é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste de halo, alquila C1-C6, hidroxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros e heteroarila de 5 ou 6 membros, exceto quando T5 é H, halo, hidroxila ou ciano; ou -Q5-T5 é oxo;
[0232]cada um entre R8, R11, R12 e R13 é, independentemente, H, halo, hidroxila, COOH, ciano, RS6, ORS6 ou COORS6, em que RS6 é alquila C1-C6, alquenila C2C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C8, heterocicloalquila de 4 a 12 membros, amino, mono-alquilamino C1-C6, ou di-alquilamino C1-C6, e RS6 é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste de halo, hidroxila, COOH, C(O)O-alquila C1-C6, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6 e di-alquilamino C1-C6; ou R7 e R8, juntamente com o átomo de N ao qual eles são ligados, formam um anel heterocicloalquila de 4 a 11 membros tendo 0 a 2 hete- roátomos adicionais, ou R7 e R8, juntamente com o átomo de C ao qual eles são ligados, formam cicloalquila C3-C8 ou um anel heterocicloalquila de 4 a 11 membros tendo 1 a 3 heteroátomos, e cada um entre os anéis heterocicloalquila de 4 a 11 membros ou cicloalquila C3-C8 formado por R7 e R8 é opcionalmente substituído com um ou mais -Q6-T6, em que Q6 é uma ligação, C(O), C(O)NRm, NRmC(O), S(O)2, ou ligante alquila C1-C3, Rm sendo H ou alquila C1-C6, e T6 é H, halo, alquila C1-C6, hidroxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros, heteroarila de 5 ou 6 membros, ou S(O)pRp, em que p é 0, 1 ou 2 e Rp é alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 7 membros ou heteroarila de 5 ou 6 membros, e T6 é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste de halo, alquila C1-C6, hidroxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros e heteroarila de 5 ou 6 membros, exceto quando T6 é H, halo, hidroxila ou ciano; ou -Q6-T6 é oxo; e
[0233]RI4 é ausente, H, ou alquila C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste de halo, hidroxila, COOH, C(O)O-alquila C1-C6, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di- alquilamino C1-C6, cicloalquila C3-C8, arila C6-C10, heterocicloalquila de 4 a 12 membros e heteroarila de 5 ou 6 membros.
[0234]Por exemplo, X2 é CR13.
[0235]Por exemplo, X2 é N.
[0236]Por exemplo, Z é NR7R8.
[0237]Por exemplo, Z é CR7R8R14.
[0238]Por exemplo, Z é OR7.
[0239]Por exemplo, Z é S(O)nR7, em que n é 0, 1 ou 2.
[0240]Por exemplo, Z é SR7.
[0241]Por exemplo, Rε é arila C6-C10 não substituído ou heteroarila de 5 ou 6 membros não substituído.
[0242]Por exemplo, Rε é arila Cε-Cio substituído com um ou mais -Q2-T2 ou heteroarila de 5 ou 6 membros substituído com um ou mais -Q2-T2.
[0243]Por exemplo, Rε é fenila não substituído.
[0244]Por exemplo, Rε é fenila substituído com um ou mais -Q2-T2.
[0245]Por exemplo, Rε é heteroarila de 5 a ε membros contendo 1 a 3 hetero- átomos adicionais selecionados a partir de N, O e S e opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2.
[0246]Por exemplo, Rε é piridinila, pirazolila, pirimidinila, quinolinila, tetrazolila, oxazolila, isoxazolila, tiazolila, isotiazolila, furila ou tienila, cada um entre os quais é opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2.
[0247]Por exemplo, Q2 é uma ligação.
[0248]Por exemplo, Q2 é um ligante alquila C1-C3 não substituído.
[0249]Por exemplo, T2 é alquila C1-Cε ou arila Cε-Cw, cada um opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3.
[0250]Por exemplo, T2 é um alquila C1-Cε de cadeia reta ou C3-Cε de cadeia ramificada não substituído ou substituído, incluindo, mas não limitado a, metila, etila, n-propila, i-propila, n-butila, s-butila, t-butila, n-pentila, s-pentila e n-hexila.
[0251]Por exemplo, T2 é fenila.
[0252]Por exemplo, T2 é halo (por exemplo, flúor, cloro, bromo e iodo).
[0253]Por exemplo, T2 é heterocicloalquila de 4 a 7 membros (por exemplo, azetidinila, oxetanila, tietanila, pirrolidinila, imidazolidinila, pirazolidinila, oxazolidinila, isoxazolidinila, triazolidinila, tetra-hidrofuranila, piperidinila, 1,2,3,6-tetra-hidropiri- dinila, piperazinila, tetra-hidro-2H-piranila, 3,6-di-hidro-2H-piranila, tetra-hidro-2H-ti- opirano, morfolinila, 1,4-diazepanila, 1,4-oxazepanila, 2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]hepta- nila, 2,5-diazabiciclo[2,2,1]heptanila, 2-oxa-6- azaespiro[3,3]heptanila, 2,6-diazaes- piro[3,3]heptanila e semelhantes) opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3.
[0254]Por exemplo, T2 é -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)+A-, -C(O)Ra, -C(O)ORa, - C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -NRbC(O)ORa, -S(O)2Ra ou -S(O)2NRaRb.
[0255]Por exemplo, T2 é -NRaRb ou -C(O)NRaRb, em que cada um entre Ra e Rb é, independentemente, H ou alquila C1-C6, ou Ra e Rb, juntamente com o átomo de N ao qual eles são ligados, formam um anel heterocicloalquila de 4 a 7 membros tendo 0 ou 1 heteroátomo adicional, o alquila C1-C6 e o anel heterocicloalquila de 4 a 7 membros sendo opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3.
[0256]Por exemplo, Q2 é ligante alquila C1-C3 opcionalmente substituído com halo ou hidroxila.
[0257]Por exemplo, Q2 é uma ligação ou ligante metila e T2 é H, halo, -ORa, - NRaRb, -(NRaRbRc)+A- ou -S(O)2NRaRb.
[0258]Por exemplo, cada um entre Ra, Rb e Rc é, independentemente, H ou alquila C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3.
[0259]Por exemplo, um entre Ra, Rb e Rc é H.
[0260]Por exemplo, Ra e Rb, juntamente com o átomo de N ao qual eles são ligados, formam um anel heterocicloalquila de 4 a 7 membros tendo 0 ou 1 heteroátomo adicional ao átomo de N (por exemplo, azetidinila, pirrolidinila, imidazolidinila, pirazolidinila, oxazolidinila, isoxazolidinila, triazolidinila, piperidinila, 1,2,3,6-tetra-hi- dropiridinila, piperazinila, morfolinila, 1,4-diazepanila, 1,4-oxazepanila, 2-oxa-5-azabi- ciclo[2,2,1]heptanila, 2,5-diazabiciclo[2,2,1]heptanila, 2-oxa-6- azaespiro[3,3]hepta- nila, 2,6-diazaespiro[3,3]heptanila e semelhantes) e o anel é opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3.
[0261]Por exemplo, -Q3-T3 é oxo.
[0262]Por exemplo, T2 é heterocicloalquila de 4 a 7 membros ou cicloalquila C3C8 e um ou mais -Q3-T3 são oxo.
[0263]Por exemplo, Q3 é uma ligação ou ligante alquila C1-C3 não substituído ou substituído.
[0264]Por exemplo, T3 é H, halo, heterocicloalquila de 4 a 7 membros, alquila C1-C3, ORd, COORd, -S(O)2Rd ou -NRdRe.
[0265]Por exemplo, um entre Rd e Re é H.
[0266]Por exemplo, R7 não é H.
[0267]Por exemplo, R7 é -C(O)Rf.
[0268]Por exemplo, R7 é -C(O)Rf, em que Rf é cicloalquila C3-C8.
[0269]Por exemplo, R7 é arila C6-C10 substituído com um ou mais -Q5-T5.
[0270]Por exemplo, R7 é fenila opcionalmente substituído com um ou mais -Q5- T5.
[0271]Por exemplo, R7 é alquila C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
[0272]Por exemplo, R7 é cicloalquila C3-C8 opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
[0273]Por exemplo, R7 é heterocicloalquila de 4 a 7 membros (por exemplo, azetidinila, oxetanila, tietanila, pirrolidinila, imidazolidinila, pirazolidinila, oxazolidinila, isoxazolidinila, triazolidinila, tetra-hidrofuranila, piperidinila, 1,2,3,6-tetra-hidropiri- dinila, piperazinila, tetra-hidro-2H-piranila, 3,6-di-hidro-2H-piranila, tetra-hidro-2H-ti- opirano e morfolinila, e semelhantes) opcionalmente substituído com um ou mais -Q5- T5.
[0274]Por exemplo, R7 é heterocicloalquila de 5 a 6 membros opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
[0275]Por exemplo, R7 é isopropila.
[0276]Por exemplo, R7 é pirrolidinila, piperidinila, tetra-hidropirano, ciclopentila, ciclo-hexila, ou ciclo-heptila, cada um opcionalmente substituído com -Q5-T5.
[0277]Por exemplo, R7 é ciclopentila ou ciclo-hexila, cada um opcionalmente substituído com -Q5-T5.
[0278]Por exemplo, R7 é pirrolidinila, piperidinila, tetra-hidropirano, tetra-hidro- 2H- tiopiranila, ciclopentila, ciclo-hexila ou ciclo-heptila, cada um opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
[0279]Por exemplo, R7 é ciclopentila, ciclo-hexila ou tetra-hidro-2H-tiopiranila, cada um opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
[0280]Por exemplo, um ou mais -Q5-T5 são oxo.
[0281]Por exemplo, R7 é 1-óxido-tetra-hidro-2H-tiopiranila ou 1,1-dióxido-tetra- hidro-2H-tiopiranila.
[0282]Por exemplo, Q5 é uma ligação e T5 é amino, mono-alquilamino C1-C6 ou di-alquilamino C1-C6.
[0283]Por exemplo, Q5 é NHC(O) e T5 é alquila C1-C6 ou alcóxi C1-C6.
[0284]Por exemplo, -Q5-T5 é oxo.
[0285]Por exemplo, T4 é heterocicloalquila de 4 a 7 membros ou cicloalquila C3C8 e um ou mais -Q5-T5 são oxo.
[0286]Por exemplo, T5 é H, halo, alquila C1-C6, alcoxila C1-C6, cicloalquila C3C8, arila C6-C10, ou heterocicloalquila de 4 a 7 membros.
[0287]Por exemplo, Q5 é uma ligação e T5 é alquila C1-C6, cicloalquila C3-C8 ou heterocicloalquila de 4 a 7 membros.
[0288]Por exemplo, Q5 é CO, S(O)2 ou NHC(O); e T5 é alquila C1-C6, alcoxila C1-C6, cicloalquila C3-C8 ou heterocicloalquila de 4 a 7 membros.
[0289]Por exemplo, T5 é alquila C1-C6 ou alcoxila C1-C6, cada um opcionalmente substituído com halo, hidroxila, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6 ou cicloalquila C3-C8.
[0290]Por exemplo, Q5 é ligante alquila C1-C3 e T5 é H ou arila C6-C10.
[0291]Por exemplo, Q5 é ligante alquila C1-C3 e T5 é cicloalquila C3-C8, heterocicloalquila de 4 a 7 membros ou S(O)qRq.
[0292]Por exemplo, R11 é H.
[0293]Por exemplo, cada um entre R2 e R4 é, independentemente, H ou alquila C1C6 opcionalmente substituído com amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6 ou arila C6-C10.
[0294]Por exemplo, cada um entre R2 e R4 é, independentemente, alquila C1C3 opcionalmente substituído com alcoxila C1-C6.
[0295]Por exemplo, cada um entre R2 e R4 é metila.
[0296]Por exemplo, R1 é H.
[0297]Por exemplo, R5 é H.
[0298]Por exemplo, R12 é H, metila, etila, etenila ou halo.
[0299]Por exemplo, R12 é metila.
[0300]Por exemplo, R12 é etila.
[0301]Por exemplo, R12 é etenila.
[0302]Por exemplo, R8 é H, metila, etila ou etenila.
[0303]Por exemplo, R8 é metila.
[0304]Por exemplo, R8 é etila.
[0305]Por exemplo, R8 é heterocicloalquila de 4 a 7 membros (por exemplo, azetidinila, oxetanila, tietanila, pirrolidinila, imidazolidinila, pirazolidinila, oxazolidinila, isoxazolidinila, triazolidinila, tetra-hidrofuranila, piperidinila, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinila, piperazinila, tetra-hidro-2H-piranila, 3,6-di-hidro-2H-piranila, tetra-hidro-2H-tiopirano, morfolinila, 1,4-diazepanila, 1,4-oxazepanila, 2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptanila, 2,5-diazabici- clo[2,2,1]heptanila, 2-oxa-6- azaespiro[3,3]heptanila, 2,6-diazaespiro[3,3]heptanila e semelhantes).
[0306]Por exemplo, R8 é tetra-hidropirano.
[0307]Por exemplo, R8 é tetra-hidropirano e R7 é -Q4-T4, em que Q4 é uma ligação ou ligante alquila C1-C4 e T4 é H, alquila C1-C6, cicloalquila C3-C8 ou heterocicloalquila de 4 a 7 membros.
[0308]Por exemplo, Z é NR7R8 ou CR7R8R14, em que R7 e R8, juntamente com o átomo ao qual eles são ligados, formam um anel heterocicloalquila de 4 a 11 membros tendo 1 a 3 heteroátomos (por exemplo, azetidinila, oxetanila, tietanila, pirrolidinila, imidazolidinila, pirazolidinila, oxazolidinila, isoxazolidinila, triazolidinila, tetra-hi- drofuranila, piperidinila, 1,2,3,6- tetra-hidropiridinila, piperazinila, tetra-hidro-2H-pira- nila, 3,6-di-hidro-2H-piranila, tetra-hidro- 2H-tiopirano e morfolinila, 1,4-dioxa-8-azaes- piro[4,5]decanila, e semelhantes) ou cicloalquila C3-C8, cada um opcionalmente substituído com um ou mais -QG-TG.
[0309]Por exemplo, o anel formado por R7 e R8 é selecionado a partir do grupo que consiste de azetidinila, pirrolidinila, piperidinila, morfolinila, piperazinila, 1,4-dioxa- 8- azaespiro[4,5]decanila e ciclo-hexenila, cada um opcionalmente substituído com - QG-TG.
[0310]Por exemplo, -QG-TG é oxo.
[0311]Por exemplo, TG é H, halo, alquila C1-CG, alcoxila C1-CG, cicloalquila C3C8, arila CG-C10 ou heterocicloalquila de 4 a 7 membros.
[0312]Por exemplo, QG é uma ligação e TG é alquila C1-CG, cicloalquila C3-C8 ou heterocicloalquila de 4 a 7 membros.
[0313]Por exemplo, QG é CO, S(O)2 ou NHC(O); e TG é alquila C1-C6, alcoxila C1-CG, cicloalquila C3-C8 ou heterocicloalquila de 4 a 7 membros.
[0314]Por exemplo, TG é alquila C1-CG ou alcoxila C1-CG, cada um opcionalmente substituído com halo, hidroxila, ciano, alcoxila C1-CG, amino, mono-alquilamino C1-CG, di-alquilamino C1-CG ou cicloalquila C3-C8.
[0315]Por exemplo, QG é ligante alquila C1-C3 e TG é H ou arila CG-C10.
[0316]Por exemplo, Qε é ligante alquila C1-C3 e Tε é cicloalquila C3-C8, heterocicloalquila de 4 a 7 membros ou S(O)pRp.
[0317]Por exemplo, cada um entre Rp e Rq é, independentemente, alquila Ci- Cε.
[0318]Por exemplo, R13 é H ou metila.
[0319]Por exemplo, R13 é H.
[0320]Por exemplo, R3 é H.
[0321]Por exemplo, A- é Br- ou Cl-.
[0322]A presente invenção fornece os compostos da Fórmula (Ib), (Ic) ou (Id):
[0323]
Figure img0007
[0324]ou sais farmaceuticamente aceitáveis ou ésteres dos mesmos, em que Z, X2, R1, R2, R3, R4, R5, Rε, R11 e R12 são definidos neste relatório.
[0325]Um outro subconjunto dos compostos da fórmula (1) inclui aqueles da Fórmula (Ie), ou (Ig):
[0326]
Figure img0008
[0327]ou um sais farmaceuticamente aceitáveis ou ésteres dos mesmos, em que Z, X2, R2, R3, R4, Rε e R12 são definidos neste relatório.
[0328]Por exemplo, R2, R4 e R12 são , independentemente, alquila C1-Cε.
[0329]Por exemplo, R6 é arila C6-C10 ou heteroarila de 5 ou 6 membros, cada um entre os quais é, independentemente, opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2, em que Q2 é uma ligação ou ligante alquila C1-C3, e T2 é H, halo, ciano, -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)+A-, -C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -S(O)2Ra ou RS2, em que cada um entre Ra e Rb é, independentemente, H ou RS3, cada um entre RS2 e RS3 é, independentemente, alquila C1-C6, ou Ra e Rb, juntamente com o átomo de N ao qual eles são ligados, formam um anel heterocicloalquila de 4 a 7 membros tendo 0 ou 1 heteroá- tomo adicional, e cada um entre RS2, RS3, e o anel heterocicloalquila de 4 a 7 membros formado por Ra e Rb, é, independentemente, opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3, em que Q3 é uma ligação ou ligante alquila C1-C3 e T3 é selecionado a partir do grupo que consiste de halo, alquila C1-C6, heterocicloalquila de 4 a 7 membros, ORd, -S(O)2Rd e -NRdRe, cada um entre Rd e Re independentemente sendo H ou alquila C1-C6, ou -Q3-T3 é oxo; ou qualquer dois -Q2-T2 vizinhos, juntamente com os átomos aos quais eles são ligados, formam um anel de 5 ou 6 membros opcionalmente contendo 1 a 4 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S.
[0330]Um outro subconjunto dos compostos da Fórmula (I) inclui aqueles da Fórmula (II):
[0331]
Figure img0009
[0332]ou um sais farmaceuticamente aceitáveis ou ésteres dos mesmos, em que
[0333]Q2 é uma ligação ou ligante metila;
[0334]T2 é H, halo, -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)+A- ou -S(O)2NRaRb; e
[0335]R7 é piperidinila, tetra-hidropirano, ciclopentila ou ciclo-hexila, cada um opcionalmente substituído com -Q5-T5;
[0336]R8 é etila; e
[0337]Ra, Rb e Rc são definidos neste relatório.
[0338]Por exemplo, Q2 é uma ligação.
[0339]Por exemplo, Q2 é um ligante metila.
[0340]Por exemplo, T2 é -NRaRb ou -(NRaRbRc)+A-.
[0341]Um outro subconjunto dos compostos da Fórmula (I) inclui aqueles da Fórmula (IIa):
[0342]
Figure img0010
[0343]ou um sais farmaceuticamente aceitáveis ou ésteres dos mesmos, em que R7, R8, Ra, Rb e Rc são definidos neste relatório.
[0344]Os compostos da Fórmula (II) ou (IIa) podem incluir uma ou mais entre as características seguintes:
[0345]Por exemplo, cada um entre Ra e Rb é, independentemente, H ou alquila C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3.
[0346]Por exemplo, um entre Ra e Rb é H.
[0347]Por exemplo, Ra e Rb, juntamente com o átomo de N ao qual eles são ligados, formam um anel heterocicloalquila de 4 a 7 membros tendo 0 ou 1 heteroá- tomo adicional ao átomo de N (por exemplo, azetidinila, pirrolidinila, imidazolidinila, pirazolidinila, oxazolidinila, isoxazolidinila, triazolidinila, piperidinila, 1,2,3,6-tetra-hi- dropiridinila, piperazinila, morfolinila, 1,4-diazepanila, 1,4-oxazepanila, 2-oxa-5-azabi- ciclo[2,2,1]heptanila, 2,5- diazabiciclo[2,2,1]heptanila, e semelhantes) e o anel é opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3.
[0348]Por exemplo, Ra e Rb, juntamente com o átomo de N ao qual eles são ligados, formam azetidinila, pirrolidinila, imidazolidinila, pirazolidinila, oxazolidinila, iso- xazolidinila, triazolidinila, tetra-hidrofuranila, piperidinila, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinila, piperazinila ou morfolinila, e o anel é opcionalmente substituído com um ou mais -Q3- T3.
[0349]Por exemplo, um ou mais -Q3-T3 são oxo.
[0350]Por exemplo, Q3 é uma ligação ou ligante alquila C1-C3 não substituído ou substituído.
[0351]Por exemplo, T3 é H, halo, heterocicloalquila de 4 a 7 membros, alquila C1-C3, ORd, COORd,-S(O)2Rd ou -NRdRe.
[0352]Por exemplo, um entre Rd e Re é H.
[0353]Por exemplo, R7 é cicloalquila C3-C8 ou heterocicloalquila de 4 a 7 membros, cada um opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
[0354]Por exemplo, R7 é piperidinila, tetra-hidropirano, tetra-hidro-2H-tiopira- nila, ciclopentila, ciclo-hexila, pirrolidinila ou ciclo-heptila, cada um opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
[0355]Por exemplo, R7 é ciclopentila, ciclo-hexila ou tetra-hidro-2H-tiopiranila, cada um opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
[0356]Por exemplo, Q5 é NHC(O) e T5 é alquila C1-C6 ou alcóxi C1-C6.
[0357]Por exemplo, um ou mais -Q5-T5 são oxo.
[0358]Por exemplo, R7 é 1-óxido-tetra-hidro-2H-tiopiranila ou 1,1-dióxido-tetra- hidro-2H-tiopiranila.
[0359]Por exemplo, Q5 é uma ligação e T5 é amino, mono-alquilamino C1-C6, di-alquilamino C1-C6.
[0360]Por exemplo, Q5 é CO, S(O)2 ou NHC(O); e T5 é alquila C1-C6, alcoxila C1-C6, cicloalquila C3-C8 ou heterocicloalquila de 4 a 7 membros.
[0361]Por exemplo, R8 é H ou alquila C1-C6 que é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste de halo, hidroxila, COOH, C(O)O-alquila C1-C6, ciano, alcoxila C1-C6, amino, mono-alquilamino C1-C6 e di-alquilamino C1-C6.
[0362]Por exemplo, R8 é H, metila ou etila.
[0363]Um outro subconjunto dos compostos da Fórmula (I) inclui aqueles da Fórmula (III):
[0364]
Figure img0011
[0365]ou um sais farmaceuticamente aceitáveis ou ésteres dos mesmos,
[0366]em que
[0367]R3 é hidrogênio, alquila C1-C3 ou halo;
[0368]R4 é alquila C1-C3,
[0369]R7 é alquila C1-C6, cicloalquila C3-C8 ou heterocicloalquila de 4 a 7 membros, opcionalmente substituído com um ou mais Rs.
[0370]R8 é alquila C1-C6;
[0371]Rh é -Qh-Th, em que Qh é uma ligação, um ligante alquila C1-C3 ou N(RN); Th é ORh1 ou -NRh1Rh2, em que Rh1 e Rh2 são independentemente hidrogênio ou alquila C1-C6, ou um entre Rh1 e Rh2 é metila e o outro é um heterocicloalquila contendo N de 6 membros opcionalmente substituído com um ou dois metila, ou juntamente com o átomo de N ao qual eles são ligados, Rh1 e Rh2 formam um anel heterocicloalquila de 4 a 7 membros tendo 0 ou 1 heteroátomo adicional selecionado a partir de oxigênio e nitrogênio, em que o dito anel heterocicloalquila é opcionalmente substituído com um ou mais Rj;
[0372]Rj é alquila C1-C3, -NRNIRN2 ou um cicloalquila C3-C8 ou heterociclo de 5 ou 6 membros, cada cicloalquila ou heterociclo é, independentemente, opcionalmente substituído com Rj;
[0373]RN é hidrogênio, alquila C1-C6 ou cicloalquila C3-C8;
[0374]Rj é alquila C1-C3, -NRNIRN2 OU-NC(O)RN;
[0375]RNI e RN2 são, independentemente, hidrogênio, alquila C1-C6, cicloalquila C3-C8, heterociclo de 5 ou 6 membros, cada cicloalquila ou heterociclo é, independentemente, opcionalmente substituído com Rj.
[0376]Por exemplo, R3 é hidrogênio.
[0377]Por exemplo, R3 é halogênio, tal como, por exemplo, flúor ou cloro. Por exemplo, R3 é flúor.
[0378]Por exemplo, R4 é metila, etila, propila ou isopropila. Por exemplo, R4 é metila. Por exemplo, R4 é isopropila.
[0379]Por exemplo, R7 é heterocicloalquila de 4 a 7 membros (por exemplo, azetidinila, oxetanila, tietanila, pirrolidinila, imidazolidinila, pirazolidinila, oxazolidinila, isoxazolidinila, triazolidinila, tetra-hidrofuranila, piperidinila, 1,2,3,6-tetra-hidropiri- dinila, piperazinila, tetra-hidro-2H-piranila, 3,6-di-hidro-2H-piranila, tetra-hidro-2H-ti- opirano e morfolinila, e semelhantes).
[0380]Por exemplo, R7 é um cicloalquila ou heterocicloalquila de 5 ou 6 membros.
[0381]Por exemplo, R7 é um cicloalquila ou heterocicloalquila de 6 membros.
[0382]Em algumas modalidades, R7 é piperidinila, tetra-hidropiranila, ciclopentila ou ciclo-hexila.
[0383]Em algumas modalidades, Rj é metila. Em algumas modalidades, Rj é NH2.
[0384]Por exemplo, R8 é alquila C1, C2 ou C3. Por exemplo, R8 é metila. Por exemplo, R8 é etila.
[0385]Em algumas modalidades, Qh é uma ligação. Em outras, Qh é metileno.
[0386]Em algumas modalidades, Th é N(CHa)2.
[0387]Em algumas modalidades, um entre Rh1 e Rh2 é metila e o outro é um heterocicloalquila contendo N de 6 membros opcionalmente substituído com um ou dois metila. Por exemplo, o heterocicloalquila contendo N de 6 membros não contêm outros heteroátomos no anel. Por exemplo, o heterocicloalquila contendo N de 6 membros não é adicionalmente substituído, além de um ou dois grupos metila.
[0388]Em algumas modalidades, Rh1 e Rh2, juntamente com o átomo de N ao qual eles são ligados, formam um anel de 6 membros. Por exemplo, Th é selecionado a partir de piperidina, morfolina, piperazina e N-metil piperazina.
[0389]Por exemplo, Th é morfolina.
[0390]Em algumas modalidades, Rj é metila ou N(CHa)2. Em algumas modalidades, R1 é cicloalquila C3-C8 ou heterociclo de 5 ou 6 membros. Por exemplo, R1 é um cicloalquila de 6 membros ou heterociclo, substituído com zero ou um Rj.
[0391]Em algumas modalidades, RN é H ou metila.
[0392]Em certos compostos da Fórmula (III), os compostos da fórmula IIIa, R3 é hidrogênio, R4 é CH3 e Qh é metileno.
[0393]Em certos compostos da fórmula III, os compostos da fórmula IIIb, R3 é flúor, R4 é isopropila e Qh é uma ligação.
[0394]Em certos compostos da fórmula III, os compostos da fórmula IIIc, R3 é hidrogênio, R4 é propila ou isopropila e Qh é metileno.
[0395]Em certos compostos da fórmula III, os compostos da fórmula IIId, R3 é hidrogênio, R4 é propila ou isopropila e Qh é uma ligação.
[0396]Em certos compostos da fórmula III, os compostos da Fórmula (IIIe),
[0397]
Figure img0012
[0398]em que
[0399]R3 é H ou F
[0400]R4 é metila, i-propila ou n-propila,
[0401]Rh é
Figure img0013
em que Ri, é H, metila ou
[0402]Os compostos representativos da presente invenção incluem os compostos listados na Tabela 1. Na tabela abaixo, cada ocorrência de
Figure img0014
deve ser interpretada como
Figure img0015
Tabela 1
Figure img0016
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Figure img0059
Figure img0060
[0403]Conforme usado neste relatório, “alquila”, “ alquila Ci, C2, C3, C4, C5 ou C6’ ou “alquila C1-C6” é intencionado a incluir grupos hidrocarboneto alifático saturado de cadeia reta (linear) Ci, C2, C3, C4, C5 ou C6 e grupos hidrocarboneto alifático saturado ramificado C3, C4, C5 ou C6. Por exemplo, alquila C1-C6 é intencionado a incluir grupos alquila Ci, C2, C3, C4, C5 e C6. Exemplos de alquila incluem porções tendo de um a seis átomos de carbono, tais como, mas não limitados a, metila, etila, n-propila, i-propila, n-butila, s-butila, t-butila, n-pentila, s-pentila ou n-hexila.
[0404]Em certas modalidades, um alquila de cadeia reta ou ramificada tem seis ou menos átomos de carbono (por exemplo, C1-C6 para cadeia reta, C3-C6 para cadeia ramificada), e em uma outra modalidade, um alquila de cadeia reta ou ramificada tem quatro ou menos átomos de carbono.
[0405]Conforme usado neste relatório, o termo “cicloalquila” se refere a um sistema de mono-ou multi-anel de hidrocarboneto não aromático saturado ou insatu- rado (por exemplo, fundido, ligado em ponte, ou anéis espiro) tendo 3 a 30 átomos de carbono (por exemplo, C3-C10). Exemplos de cicloalquila incluem, mas não são limitados a, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, ciclo-heptila, ciclooctila, ci- clopentenila, ciclo-hexenila, ciclo-heptenila e adamantila. O termo “heterocicloalquila” se refere a um sistema de anel saturado ou insaturado de 3 a 8 membros não aromático monocíclico, 7 a 12 membros bicíclico (fundido, ligado em ponte, ou anéis espiro), ou 11 a 14 membros tricíclico (fundido, ligado em ponte, ou anéis espiro) tendo um ou mais heteroátomos (tais como O, N, S ou Se), a menos que especificado de outro modo. Exemplos de grupos heterocicloalquila incluem, mas não são limitados a, pipe-ridinila, piperazinila, pirrolidinila, dioxanila, tetra-hidrofuranila, isoindolinila, indolinila, imidazolidinila, pirazolidinila, oxazolidinila, isoxazolidinila, triazolidinila, tetra-hidrofuranila, oxiranila, azetidinila, oxetanila, tietanila, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinila, tetra-hidropi- ranila, di-hidropiranila, piranila, morfolinila, 1,4-diazepanila, 1,4-oxazepanila, 2-oxa-5- azabiciclo[2,2,1]heptanila, 2,5-diazabiciclo[2,2,1]heptanila, 2-oxa-6-azaes- piro[3,3]heptanila, 2,6-diazaespiro[3,3]heptanila, 1,4- dioxa-8-azaespiro[4,5]decanila e semelhantes.
[0406]O termo “alquila opcionalmente substituído” se refere a alquila não substituído ou alquila tendo substituintes designados que substituem um ou mais átomos de hidrogênio em um ou mais carbonos da estrutura de hidrocarboneto. Tais substituintes podem incluir, por exemplo, alquila, alquenila, alquinila, halogênio, hidroxila, alquilcarbonilóxi, arilcarbonilóxi, alcoxicarbonilóxi, ariloxicarbonilóxi, carboxilato, alqui- lcarbonila, arilcarbonila, alcoxicarbonila, aminocarbonila, alquilaminocarbonila, dial- quilaminocarbonila, alquiltiocarbonila, alcoxila, fosfato, fosfonato, fosfinato, amino (incluindo alquilamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino e alquilarilamino), acilamino (incluindo alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoila e ureido), amidino, imino, sulfidrila, alquiltio, ariltio, tiocarboxilato, sulfatos, alquilsulfinila, sulfonato, sulfamoila, sulfonamido, nitro, trifluorometila, ciano, azido, heterociclila, alquilarila, ou uma porção aromática ou heteroaromática.
[0407]Uma porção “arilalquila” ou “aralquila” é um alquila substituído com um arila (por exemplo, fenilmetila (benzila)). Uma porção “alquilarila” é um arila substituído com um alquila (por exemplo, metilfenila).
[0408]Conforme usado neste relatório, “ligante alquila” é intencionado a incluir grupos hidrocarboneto alifático divalente saturado de cadeia reta (linear) CI, C2, C3, C4, C5 ou C6 e grupos hidrocarboneto alifático saturado ramificado C3, C4, C5 ou C6. Por exemplo, o ligante alquila C1-C6 é intencionado a incluir grupos ligante alquila C1, C2, C3, C4, C5 e C6. Exemplos de ligante alquila incluem porções tendo de um a seis átomos de carbono, tais como, mas não limitadas a, metila (-CH2-), etila (-CH2CH2-), n-propila (-CH2CH2CH2-), i-propila (-CHCH3CH2-), n-butila (-CH2CH2CH2CH2-), s-bu- tila (-CHCH3CH2CH2-), i-butila (-C(CH3)2CH2-), n-pentila (-CH2CH2CH2CH2CH2-), s- pentila (-CHCH3CH2CH2CH2-) ou n-hexila (-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-).
[0409]“Alquenila” inclui grupos alifáticos insaturados análogos em comprimento e possível substituição aos alquilas descritos acima, ma que contêm pelo menos uma ligação dupla. Por exemplo, o termo “alquenila” inclui grupos alquenila de cadeia reta (por exemplo, etenila, propenila, butenila, pentenila, hexenila, heptenila, octenila, no- nenila, decenila), e grupos alquenila de cadeia ramificada. Em certas modalidades, um grupo alquenila de cadeia reta ou ramificada tem seis ou menos átomos de carbono em sua estrutura (por exemplo, C2-C6 para cadeia reta, C3-C6 para cadeia ramificada). O termo “C2- C6” inclui grupos alquenila contendo dois a seis átomos de carbono. O termo “C3-C6” inclui grupos alquenila contendo três a seis átomos de carbono.
[0410]O termo “alquenila opcionalmente substituído” se refere a alquenila não substituído ou alquenila tendo substituintes designados que substituem um ou mais átomos de hidrogênio em um ou mais átomos de carbono na estrutura de hidrocarboneto. Tais substituintes podem incluir, por exemplo, alquila, alquenila, alquinila, halogênio, hidroxila, alquilcarbonilóxi, arilcarbonilóxi, alcoxicarbonilóxi, ariloxicarboni- lóxi, carboxilato, alquilcarbonila, arilcarbonila, alcoxicarbonila, aminocarbonila, alqui- laminocarbonila, dialquilaminocarbonila, alquiltiocarbonila, alcoxila, fosfato, fosfonato, fosfinato, amino (incluindo alquilamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino e alquila- rilamino), acilamino (incluindo alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoila e ureido), amidino, imino, sulfidrila, alquiltio, ariltio, tiocarboxilato, sulfatos, alquilsulfinila, sulfonato, sulfamoila, sulfonamido, nitro, trifluorometila, ciano, heterociclila, alquilarila ou uma porção aromática ou heteroaromática.
[0411]“Alquinila” inclui grupos alifáticos insaturados análogos em comprimento e possível substituição aos alquilas descritos acima, mas que contêm pelo menos uma ligação tripla. Por exemplo, “alquinila” inclui grupos alquinila de cadeia reta (por exemplo, etinila, propinila, butinila, pentinila, hexinila, heptinila, octinila, noninila, decinila) e grupos alquinila de cadeia ramificada. Em certas modalidades, um grupo alquinila de cadeia reta ou ramificada tem seis ou menos átomos de carbono em sua estrutura (por exemplo, C2-C6 para cadeia reta, C3-C6 para cadeia ramificada). O termo “C2-C6” inclui grupos alquinila contendo dois a seis átomos de carbono. O termo “C3-C6” inclui grupos alquinila contendo três a seis átomos de carbono.
[0412]O termo “alquinila opcionalmente substituído” se refere a alquinila não substituído ou alquinila tendo substituintes designados que substituem um ou mais átomos de hidrogênio em um ou mais átomos de carbono na estrutura de hidrocarboneto. Tais substituintes podem incluir, por exemplo, alquila, alquenila, alquinila, halogênio, hidroxila, alquilcarbonilóxi, arilcarbonilóxi, alcoxicarbonilóxi, ariloxicarbonilóxi, carboxilato, alquilcarbonila, arilcarbonila, alcoxicarbonila, aminocarbonila, alquilami- nocarbonila, dialquilaminocarbonila, alquiltiocarbonila, alcoxila, fosfato, fosfonato, fosfinato, amino (incluindo alquilamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino e alquilarila- mino), acilamino (incluindo alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoila e ureido), amidino, imino, sulfidrila, alquiltio, ariltio, tiocarboxilato, sulfatos, alquilsulfinila, sulfonato, sulfamoila, sulfonamido, nitro, trifluorometila, ciano, azido, heterociclila, al- quilarila ou uma porção aromática ou heteroaromática.
[0413]Outras porções opcionalmente substituídas (tais como cicloalquila, heterocicloalquila, arila ou heteroarila opcionalmente substituído) incluem as porções não substituídas e as porções tendo um ou mais entre os substituintes designados. Por exemplo, heterocicloalquila substituído inclui aqueles substituídos com um ou mais grupos alquila, tais como 2,2,6,6-tetrametil-piperidinila e 2,2,6,6-tetrametil-1,2,3,6-te- tra-hidropiridinila.
[0414]“Arila” inclui grupos com aromaticidade, incluindo sistemas “conjugados” ou multicíclicos com pelo menos um anel aromático e não contêm qualquer heteroá- tomo na estrutura do anel. Exemplos incluem fenila, benzila, 1,2,3,4-tetra-hidronafta- lenila, etc.
[0415]Grupos “heteroarila” são grupos arila, conforme definido acima, exceto aqueles tendo a partir de um a quatro heteroátomos na estrutura do anel, e também podem ser referidos como “heterociclos de arila” ou “heteroaromáticos”. Conforme usado neste relatório, o termo “heteroarila” é intencionado a incluir um anel heterocíclico estável de 5, 6, ou 7 membros monocíclico ou de 7, 8, 9, 10, 11 ou 12 membros bicíclico aromático que consiste de átomos de carbono e um ou mais heteroátomos, por exemplo, 1 ou 1 a 2 ou 1 a 3 ou 1 a 4 ou 1 a 5 ou 1 a 6 heteroátomos, ou, por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 heteroátomos, independentemente selecionados a partir do grupo que consiste de nitrogênio, oxigênio e enxofre. O átomo de nitrogênio pode ser substituído ou não substituído (isto é, N ou NR em que R é H ou outros substituintes, conforme definido). Os heteroátomos de nitrogênio e enxofre podem ser opcionalmente oxidados (isto é, N^O e S(O)p, onde p = 1 ou 2). Deve ser observado que o número total de átomos de S e O no heterociclo aromático não é maior do que 1.
[0416]Exemplos de grupos heteroarila incluem pirrol, furano, tiofeno, tiazol, iso- tiazol, imidazol, triazol, tetrazol, pirazol, oxazol, isoxazol, piridina, pirazina, piridazina, pirimidina e semelhantes.
[0417]Além disso, os termos “arila” e “heteroarila” incluem grupos arila e heteroarila multicíclicos, por exemplo, tricíclicos, bicíclicos, por exemplo, naftaleno, ben- zoxazol, benzodioxazol, benzotiazol, benzoimidazol, benzotiofeno, metilenodioxife- nila, quinolina, isoquinolina, naftridina, indol, benzofurano, purina, benzofurano, dea- zapurina, indolizina.
[0418]No caso de anéis aromáticos multicíclicos, apenas um dos anéis precisa ser aromático (por exemplo, 2,3-di-hidroindol), embora todos os anéis possam ser aromáticos (por exemplo, quinolina). O segundo anel também pode ser fundido ou ligado em ponte.
[0419]O anel cicloalquila, heterocicloalquila, arila ou heteroarila pode ser substituído em uma ou mais posições no anel (por exemplo, o carbono formador de anel ou heteroátomo, tal como N) com tais substituintes, conforme descrito acima, por exemplo, alquila, alquenila, alquinila, halogênio, hidroxila, alcóxi, alquilcarbonilóxi, arilcarbonilóxi, alcoxicarbonilóxi, ariloxicarbonilóxi, carboxilato, alquilcarbonila, alquilami- nocarbonila, aralquilaminocarbonila, alquenilaminocarbonila, alquilcarbonila, arilcarbonila, aralquilcarbonila, alquenilcarbonila, alcoxicarbonila, aminocarbonila, alquiltiocarbonila, fosfato, fosfonato, fosfinato, amino (incluindo alquilamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino e alquilarilamino), acilamino (incluindo alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoila e ureido), amidino, imino, sulfidrila, alquiltio, ariltio, tiocarboxilato, sulfatos, alquilsulfinila, sulfonato, sulfamoila, sulfonamido, nitro, trifluorometila, ciano, azido, heterociclila, alquilarila, ou uma porção aromática ou heteroaromática. Grupos arila e heteroarila também podem ser fundidos ou ligados em ponte com anéis alicíclicos ou heterocíclicos, que não são aromáticos, de modo a formar um sistema multicíclico (por exemplo, tetralina, metilenodioxifenila).
[0420]Conforme usado neste relatório, “carbociclo” ou “anel carbocíclico” é intencionado a incluir qualquer anel monocíclico, bicíclico ou tricíclico estável tendo o número especificado de carbonos, qualquer um dos quais pode ser saturado, insatu- rado ou aromático. Carbociclo inclui cicloalquila e arila. Por exemplo, um carbociclo C3-C14 é intencionado a incluir um anel monocíclico, bicíclico ou tricíclico tendo 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 átomos de carbono. Exemplos de carbociclos incluem, mas não são limitados a, ciclopropila, ciclobutila, ciclobutenila, ciclopentila, ciclopen- tenila, ciclo-hexila, ciclo-heptenila, ciclo-heptila, ciclo-heptenila, adamantila, ciclo-oc- tila, ciclo-octenila, ciclo-octadienila, fluorenila, fenila, naftila, indanila, adamantila e te- tra-hidronaftila. Anéis ligados em ponte também são incluídos na definição de carbociclo, incluindo, por exemplo, [3,3,0]biciclo-octano, [4,3,0]biciclononano, [4,4,0]biciclo- decano e [2,2,2]biciclo-octano. Um anel ligado em ponte ocorre quando um ou mais átomos de carbono se ligam a dois átomos de carbono não adjacentes. Em uma modalidade, os anéis em ponte são um ou dois átomos de carbono. Deve ser observado que uma ponte sempre converte um anel monocíclico em um anel tricíclico. Quando um anel é ligado em ponte, os substituintes citados para o anel também podem estar presentes na ponte. Anéis fundidos (por exemplo, naftila, tetra-hidronaftila) e espiro também são incluídos.
[0421]Conforme usado neste relatório, “heterociclo” ou “grupo heterocíclico” inclui qualquer estrutura no anel (saturado, insaturado ou aromático) que contém pelo menos um heteroátomo no anel (por exemplo, N, O ou S). Heterociclo inclui heterocicloalquila e heteroarila. Exemplos de heterociclos incluem, mas não são limitados a, morfolina, pirrolidina, tetra-hidrotiofeno, piperidina, piperazina, oxetano, pirano, tetra- hidropirano, azetidina e tetraidrofurano.
[0422]Exemplos de grupos heterocíclicos incluem, mas não são limitados a, acridinila, azocinila, benzimidazolila, benzofuranila, benzotiofuranila, benzotiofenila, benzoxazolila, benzoxazolinila, benztiazolila, benztriazolila, benztetrazolila, benziso- xazolila, benzisotiazolila, benzimidazolinila, carbazolila, 4aH-carbazolila, carbolinila, cromanila, cromenila, cinolinila, deca-hidroquinolinila, 2H,6H-1,5,2-ditiazinila, di- hidrofuro[2,3-b]tetraidrofurano, furanila, furazanila, imidazolidinila, imidazolinila, imi- dazolila, IH-indazolila, indolnila, indolinila, indolizinila, indolila, 3H-indolila, isatinoila, isobenzofuranila, isocromanila, isoindazolila, isoindolinila, isoindolila, isoquinolinila, isotiazolila, isoxazolila, metilenodioxifenila, morfolinila, naftiridinila, octa-hidroisoquino- linila, oxadiazolila, 1,2,3-oxadiazolila, 1,2,4-oxadiazolila, 1,2,5-oxadiazolila, 1,3,4-oxa- diazolila, 1,2,4-oxadiazol5(4H)-ona, oxazolidinila, oxazolila, oxindolila, pirimidinila, fe- nantridinila, fenantrolinila, fenazinila, fenotiazinila, fenoxatinila, fenoxazinila, ftalazinila, piperazinila, piperidinila, piperidonila, 4-piperidonila, piperonila, pteridinila, purinila, pi- ranila, pirazinila, pirazolidinila, pirazolinila, pirazolila, piridazinila, pirido-oxazol, piridoi- midazol, piridotiazol, piridinila, piridila, pirimidinila, pirrolidinila, pirrolinila, 2H-pirrolila, pirrolila, quinazolinila, quinolinila, 4H-quinolizinila, quinoxalinila, quinuclidinila, tetra-hi- drofuranila, tetra-hidroisoquinolinila, tetra-hidroquinolinila, tetrazolila, 6H-1,2,5-tiadia- zinila, 1,2,3-tiadiazolila, 1,2,4-tiadiazolila, 1,2,5-tiadiazolila, 1,3,4-tiadiazolila, tiantre- nila, tiazolila, tienila, tienotiazolila, tieno-oxazolila, tienoimidazolila, tiofenila, triazinila, 1,2,3-triazolila, 1,2,4-triazolila, 1,2,5-triazolila, 1,3,4-triazolila e xantenila.
[0423]O termo “substituído”, conforme usado neste relatório, significa que qualquer um ou mais átomos de hidrogênio no átomo designado é substituído com uma seleção a partir dos grupos indicados, contanto que a valência normal do átomo designado não seja excedida, e que a substituição resulte em um composto estável. Quando um substituinte é oxo ou ceto (isto é, =O), então 2 átomos de hidrogênio no átomo são substituídos. Substituintes ceto não estão presentes nas porções aromáticas. Ligações duplas no anel, conforme usado neste relatório, são ligações duplas que são formadas entre dois átomos no anel adjacentes (por exemplo, C=C, C=N ou N=N). “Composto estável” e “estrutura estável” indicam um composto que é suficientemente robusto para sobreviver ao isolamento em um grau útil de pureza a partir de uma mistura de reação, e à formulação em um agente terapêutico eficaz.
[0424]Quando uma ligação a um substituinte é mostrada cruzar uma ligação que conecta dois átomos em um anel, então tal substituinte pode ser ligado a qualquer átomo no anel. Quando um substituinte é listado sem indicar o átomo por intermédio do qual tal substituinte é ligado ao restante do composto de uma dada fórmula, então tal substituinte pode ser ligado por intermédio de qualquer átomo em tal fórmula. As combinações de substituintes e/ou variáveis são permissíveis, mas apenas se tais combinações resultam em compostos estáveis.
[0425]Quando qualquer variável (por exemplo, RI) ocorre mais do que uma vez em qualquer constituinte ou fórmula para um composto, sua definição em cada ocorrência é independente de sua definição em outra ocorrência. Assim, por exemplo, se um grupo é substituído com 0 a 2 porções de RI, então o grupo pode ser opcionalmente substituído com até duas porções RI e RI em cada ocorrência é selecionado independentemente da definição de RI. Além disso, as combinações de substituintes e/ou variáveis são permissíveis, mas apenas se tais combinações resultam em compostos estáveis.
[0426]O termo “hidróxi” ou “hidroxila” inclui grupos com um -OH ou -O-.
[0427]Conforme usado neste relatório, “halo” ou “halogênio” se refere a flúor, cloro, bromo e iodo. O termo “perhalogenado”, em geral, se refere a uma porção em que todos os átomos de hidrogênio são substituídos por átomos de halogênio. O termo “haloalquila” ou “haloalcoxila” se refere a um alquila ou alcoxila substituído com um ou mais átomos de halogênio.
[0428]O termo “carbonila” inclui compostos e porções que contêm um carbono conectado com uma ligação dupla a um átomo de oxigênio. Exemplos de porções contendo um carbonila incluem, mas não são limitados a, aldeídos, cetonas, ácidos carboxílicos, amidas, ésteres, anidridos, etc.
[0429]O termo “carboxila” se refere a -COOH ou seu éster alquílico C1-C6.
[0430]“Acila” inclui porções que contêm o radical acila (R-C(O)-) ou um grupo carbonila. “Acila substituído” inclui grupos acila onde um ou mais entre os átomos de hidrogênio são substituídos, por exemplo, por grupos alquila, grupos alquinila, halogênio, hidroxila, alquilcarbonilóxi, arilcarbonilóxi, alcoxicarbonilóxi, ariloxicarbonilóxi, carboxilato, alquilcarbonila, arilcarbonila, alcoxicarbonila, aminocarbonila, alquilami- nocarbonila, dialquilaminocarbonila, alquiltiocarbonila, alcoxila, fosfato, fosfonato, fos- finato, amino (incluindo alquilamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino e alquilarila- mino), acilamino (incluindo alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoila e ureido), amidino, imino, sulfidrila, alquiltio, ariltio, tiocarboxilato, sulfatos, alquilsulfinila, sulfonato, sulfamoila, sulfonamido, nitro, trifluorometila, ciano, azido, heterociclila, al- quilarila ou uma porção aromática ou heteroaromática.
[0431]“Aroila” inclui porções com uma porção arila ou heteroaromática ligada a um grupo carbonila. Exemplos de grupos aroila incluem fenilcarbóxi, naftil carbóxi, etc.
[0432]“Alcoxialquila”, “alquilaminoalquila” e “tioalcoxialquila” incluem grupos alquila, conforme descrito acima, em que os átomos de oxigênio, nitrogênio ou enxofre substituem um ou mais átomos de carbono na estrutura de hidrocarboneto.
[0433]O termo “alcóxi” ou “alcoxila” inclui grupos alquila, alquenila e alquinila substituídos e não substituídos covalentemente ligados a um átomo de oxigênio. Exemplos de grupos alcóxi ou radicais alcoxila incluem, mas não são limitados a grupos metóxi, etóxi, isopropilóxi, propóxi, butóxi e pentóxi. Os grupos alcóxi podem ser substituídos com grupos, tais como alquenila, alquinila, halogênio, hidroxila, alquilcarbonilóxi, arilcarbonilóxi, alcoxicarbonilóxi, ariloxicarbonilóxi, carboxilato, alquilcarbonila, arilcarbonila, alcoxicarbonila, aminocarbonila, alquilaminocarbonila, dialquilaminocarbonila, alquiltiocarbonila, alcoxila, fosfato, fosfonato, fosfinato, amino (incluindo alquilamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino e alquilarilamino), acilamino (incluindo alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoila e ureido), amidino, imino, sulfidrila, alquiltio, ariltio, tiocarboxilato, sulfatos, alquilsulfinila, sulfonato, sulfamoila, sulfonamido, nitro, trifluorometila, ciano, azido, heterociclila, alquilarila ou uma porção aromática ou heteroaromática. Exemplos de grupos alcóxi substituídos com halogênio incluem, mas não são limitados a, fluorometóxi, difluorometóxi, trifluorometóxi, cloro- metóxi, diclorometóxi e triclorometóxi.
[0434]O termo “éter” ou “alcóxi” inclui compostos ou porções que contêm um oxigênio ligado a dois átomos de carbono ou heteroátomos. Por exemplo, o termo inclui “alcoxialquila”, que se refere a um grupo alquila, alquenila ou alquinila covalen- temente ligado a um átomo de oxigênio que é covalentemente ligado a um grupo alquila.
[0435]O termo “éster” inclui compostos ou porções que contêm um carbono ou um heteroátomo ligado a um átomo de oxigênio que é ligado ao carbono de um grupo carbonila. O termo “éster” inclui grupos alcoxicarbóxi, tais como metoxicarbonila, eto- xicarbonila, propoxicarbonila, butoxicarbonila, pentoxicarbonila, etc.
[0436]O termo “tioalquila” inclui compostos ou porções que contêm um grupo alquila conectado com um átomo de enxofre. Os grupos tioalquila podem ser substituídos com grupos, tais como alquila, alquenila, alquinila, halogênio, hidroxila, alquil- carbonilóxi, arilcarbonilóxi, alcoxicarbonilóxi, ariloxicarbonilóxi, carboxilato, carboxiá- cido, alquilcarbonila, arilcarbonila, alcoxicarbonila, aminocarbonila, alquilaminocarbo- nila, dialquilaminocarbonila, alquiltiocarbonila, alcoxila, amino (incluindo alquilamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino e alquilarilamino), acilamino (incluindo alquilcar- bonilamino, arilcarbonilamino, carbamoila e ureido), amidino, imino, sulfidrila, alquiltio, ariltio, tiocarboxilato, sulfatos, alquilsulfinila, sulfonato, sulfamoila, sulfonamido, nitro, trifluorometila, ciano, azido, heterociclila, alquilarila, ou uma porção aromática ou he- teroaromática.
[0437]O termo “tiocarbonila” ou “tiocarbóxi” inclui compostos e porções que contêm um carbono conectado com uma ligação dupla a um átomo de enxofre.
[0438]O termo “tioéter” inclui porções que contêm um átomo de enxofre ligado a dois átomos de carbono ou heteroátomos. Exemplos de tioéteres incluem, mas não são limitados a alqutioalquilas, alqutioalquenilas e alqutioalquinilas. O termo “alqutioalquilas” inclui porções com um grupo alquila, alquenila ou alquinila ligado a um átomo de enxofre que é ligado a um grupo alquila. Similarmente, o termo “alqutio- alquenilas” se refere a porções em que um grupo alquila, alquenila ou alquinila é ligado a um átomo de enxofre que é covalentemente ligado a um alquenila grupo; e alqutio- alquinilas” se refere a porções em que um grupo alquila, alquenila ou alquinila é ligado a um átomo de enxofre que é covalentemente ligado a um grupo alquinila.
[0439]Conforme usado neste relatório, “amina” ou “amino” se refere a -NH2não substituído ou substituído. “Alquilamino” inclui grupos de compostos em que o nitrogênio de -NH2 é ligada a pelo menos um grupo alquila. Exemplos de grupos alquilamino incluem benzilamino, metilamino, etilamino, fenotilamino, etc. “Dialquilamino” inclui grupos em que o nitrogênio de -NH2 é ligado a pelo menos dois grupos alquila adicionais. Exemplos de grupos dialquilamino incluem, mas não são limitados a, di- metilamino e dietilamino. “Arilamino” e “diarilamino” incluem grupos em que o nitrogênio é ligado a pelo menos um ou dois grupos arila, respectivamente. “Aminoarila” e “aminoarilóxi” se referem a arila e arilóxi substituído com amino. “Alquilarilamino”, “al- quilaminoarila” ou “arilaminoalquila” se refere a um grupo amino que é ligado a pelo menos um grupo alquila e a pelo menos um grupo arila. “Alquaminoalquila” se refere a um grupo alquila, alquenila ou alquinila ligado a um átomo de nitrogênio que também é ligado a um grupo alquila. “Acilamino” inclui grupos em que o nitrogênio é ligado a um grupo acila. Exemplos de acilamino incluem, mas não são limitados a, grupos alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoila e ureido.
[0440]O termo “amida” ou “aminocarbóxi” inclui compostos ou porções que contêm um átomo de nitrogênio que é ligado ao carbono de um grupo carbonila ou tiocar- bonila. O termo inclui grupos “alquaminocarbóxi” que incluem grupos alquila, alquenila ou alquinila ligados a um grupo amino que é ligado ao carbono de um grupo carbonila ou tiocarbonila. Ele também inclui grupos “arilaminocarbóxi” que incluem porções arila ou heteroarila ligadas a um grupo amino que é ligado ao carbono de um grupo carbonila ou tiocarbonila. Os termos “alquilaminocarbóxi”, “alquenilaminocarbóxi”, “al- quinilaminocarbóxi” e “arilaminocarbóxi” incluem porções em que porções alquila, alquenila, alquinila e arila, respectivamente, são ligadas a um átomo de nitrogênio que é, por sua vez, ligado ao carbono de um grupo carbonila. As amidas podem ser substituídas com substituintes, tais como alquila de cadeia reta, alquila de cadeia ramificada, cicloalquila, arila, heteroarila ou heterociclo. Os substituintes em grupos amida podem ser adicionalmente substituídos.
[0441]Os compostos da presente invenção que contêm nitrogênios podem ser convertidos em N-óxidos através do tratamento com um agente oxidante (por exemplo, ácido 3-cloroperoxibenzoico (mCPBA) e/ou peróxidos de hidrogênio) para fornecer outros compostos da presente invenção. Assim, todos os compostos contendo nitrogênio mostrados e reivindicados são considerados, quando deixados por valência e estrutura, para incluir o composto, conforme mostrado, e seu derivado de N-óxido (que pode ser designado como N^O ou N+-O-). Além disso, em outros exemplos, os nitrogênios nos compostos da presente invenção podem ser convertidos em compostos de N-hidróxi ou N-alcóxi. Por exemplo, compostos de N-hidróxi podem ser preparados por oxidação da amina precursora através de um agente oxidante, tal como m- CPBA. todos os compostos contendo nitrogênio mostrados e reivindicados também são considerados, quando deixados por valência e estrutura, para cobrir o composto, conforme mostrado, e seus derivados de N- hidróxi (isto é, N-OH) e N-alcóxi (isto é, N-OR, em que R é alquila C1-C6, C1-C6 alquenila, C1-C6 alquinila substituído ou não substituído, carbociclo de 3 a 14 membros ou heterociclo de 3 a 14 membros).
[0442]No presente relatório descritivo, a fórmula estrutural do composto representa um certo isômero, para conveniência, em alguns casos, mas a presente invenção inclui todos os isômeros, tais como isômeros geométricos, isômeros ópticos com base em um carbono assimétrico, estereoisômeros, tautômeros, e semelhantes, sendo entendido que nem todos os isômeros podem ter o mesmo nível de atividade. Além disso, um polimorfismo de cristal pode estar presente para os compostos representados pela fórmula. Deve ser observado que qualquer forma de cristal, mistura de forma de cristal ou anidrido ou hidrato da mesma é incluída no escopo da presente invenção. Além disso, o metabólito que é produzido pela degradação do presente composto in vivo é incluído no escopo da presente invenção.
[0443]“Isomerismo” significa compostos que têm fórmulas moleculares idênticas, mas diferem na sequência de união de seus átomos ou no arranjo de seus átomos no espaço. Isômeros que diferem no arranjo de seus átomos no espaço são denominados “estereoisômeros”. Estereoisômeros que não são imagens de espelho de um outro são denominados “diastereoisômeros”, e estereoisômeros que são imagens de espelho não superponíveis de um do outro são denominados “enantiômeros” ou, algumas vezes, isômeros ópticos. Uma mistura contendo quantidades iguais de formas enantioméricas individuais de quiralidade oposta é denominada uma “mistura racê- mica”.
[0444]Um átomo de carbono ligado a quatro substituintes não idênticos é denominado um “centro quiral”.
[0445]“Isômero quiral” significa um composto com pelo menos um centro quiral. Os compostos com mais do que um centro quiral podem existir como um diastereô- mero individual ou como uma mistura de diastereômeros, denominada “mistura dias- tereomérica”. Quando um centro quiral está presente, um estereoisômero pode ser caracterizado pela configuração absoluta (R ou S) de tal centro quiral. A configuração absoluta se refere ao arranjo no espaço dos substituintes ligados ao centro quiral. Os substituintes ligados ao centro quiral sob consideração são classificados, de acordo com a Sequence Rule de Cahn, Ingold e Prelog. (Cahn et al., Angew. Chem. Inter. Edit. 1966, 5, 385; errata 511; Cahn et al., Angew. Chem. 1966, 78, 413; Cahn e Ingold, J. Chem. Soc. 1951 (Londres), 612; Cahn et al., Experientia 1956, 12, 81; Cahn, J. Chem. Educ. 1964, 41, 116).
[0446]“Isômero geométrico” significa os diastereômeros que devem sua existência a rotação atrasada sobre as ligações duplas ou um ligante cicloalquila (por exemplo, 1,3-ciclobutila). Estas configurações são diferenciadas em seus nomes pelos prefixos cis e trans, ou Z e E, que indica que os grupos estão no mesmo lado ou lado oposto da ligação dupla na molécula, de acordo com as regras de Cahn- Ingold-Prelog.
[0447]Deve ser entendido que os compostos da presente invenção podem ser representados como isômeros quirais diferentes ou isômeros geométricos. Também deve ser entendido que quando os compostos têm formas isoméricas quirais ou isoméricas geométricas, todas as formas isoméricas são incluídas no escopo da presente invenção, e a nomenclatura dos compostos não exclui quaisquer formas isoméricas, sendo entendido que nem todos os isômeros podem ter o mesmo nível de atividade.
[0448]Além disso, as estruturas e outros compostos debatidos nesta invenção incluem todos os isômeros atrópicos dos mesmos, sendo entendido que nem todos os isômeros atrópicos podem ter o mesmo nível de atividade. “Isômeros atrópicos” são um tipo de estereoisômero em que os átomos de dois isômeros são arranjados de forma diferente no espaço. Isômeros atrópicos devem sua existência a uma rotação restrita causada pelo atraso de rotação de grandes grupos sobre uma ligação central. Tais isômeros atrópicos tipicamente existem como uma mistura, entretanto, como um resultado de avanços recentes em técnicas de cromatografia, foi possível separar misturas de dois isômeros atrópicos em casos selecionados.
[0449]“Tautômero” é um entre dois ou mais isômeros estruturais que existem em equilíbrio e é facilmente convertido em partir de uma forma isomérica em uma outra. Esta conversão resulta na migração formal de um átomo de hidrogênio acompanhado por uma troca de ligações duplas conjugadas adjacentes. Os tautômeros existem como uma mistura de um ajuste tautomérico na solução. Em soluções onde a tautomerização é possível, um equilíbrio químico dos tautômeros será atingido. A razão exata dos tautômeros depende de vários fatores, incluindo temperatura, solvente e pH. O conceito de tautômeros que são interconversíveis por tautomerizações é chamado tautomerismo.
[0450]Entre os vários tipos de tautomerismo que são possíveis, dois são comumente observados. No tautomerismo de ceto-enol, uma troca simultânea de elétrons e um átomo de hidrogênio ocorre. Tautomerismo na cadeia do anel surge como um resultado do grupo aldeído (-CHO) em uma molécula da cadeia de açúcar que reage com um dos grupos hidróxi (-OH) na mesma molécula para fornecer à mesma uma forma cíclica (forma de anel), conforme exibido por glicose.
[0451]Pares tautoméricos comuns são: tautomerismo de cetona-enol, amida- nitrila, lactama-lactima, amida-ácido imídico em anéis heterocíclicos (por exemplo, em nucleobases, tais como guanina, timina e citosina), imina-enamina e enamina- enamina. Um exemplo de equilíbrios ceto-enol é entre piridin-2(1H)-onas e os piridin- 2-óis correspondentes, conforme mostrado abaixo.
Figure img0061
[0452]Deve ser entendido que os compostos da presente invenção podem ser representados como tautômeros diferentes. Também deve ser entendido que quando os compostos têm formas tautoméricas, todas as formas tautoméricas são incluídas no escopo da presente invenção, e a nomenclatura dos compostos não exclui qualquer forma de tautômero. Será entendido que certos tautômeros podem ter um nível mais alto de atividade em relação a outros.
[0453]O termo “polimorfos de cristal”, “polimorfos” ou “formas de cristal” significa estruturas cristalinas em que um composto (ou um sal ou solvato do mesmo) pode cristalizar em arranjos de empacotamento de cristal diferentes, todos os quais têm a mesma composição elementar. Formas de cristal diferentes usualmente têm padrões de difração de raios X, infravermelho espectral, pontos de fusão, dureza de densidade, forma de cristal, propriedades ópticas e elétricas, estabilidade e solubilidade diferentes. O solvente de recristalização, taxa de cristalização, temperatura de armazenagem, e outros fatores podem fazer com que domine uma forma de cristal. Os polimorfos de cristal dos compostos podem ser preparados por cristalização sob condições diferentes.
[0454]Os compostos de qualquer uma entre as Fórmulas divulgadas neste relatório incluem os compostos por si só, assim como seus sais, seus ésteres, seus solvatos e seus pró-fármacos, se aplicáveis. Um sal, por exemplo, pode ser formado entre um ânion e um grupo positivamente carregado (por exemplo, amino) em um composto de benzeno substituído com arila ou heteroarila. Ânions adequados incluem cloreto, brometo, iodeto, sulfato, bissulfato, sulfamato, nitrato, fosfato, citrato, metanossulfonato, trifluoroacetato, glutamato, glicuronato, glutarato, malato, maleato, succinato, fumarato, tartrato, tosilato, salicilato, lactato, naftalenossulfonato e acetato (por exemplo, trifluoroacetato). O termo “ânion farmaceuticamente aceitável” se refere a um ânion adequado para formar um sal farmaceuticamente aceitável. Do mesmo modo, um sal também pode ser formado entre um cátion e um grupo negativamente carregado (por exemplo, carboxilato) em um composto de benzeno substituído com arila ou heteroarila. Cátions adequados incluem íon sódio, íon potássio, íon magnésio, íon cálcio e um cátion amônio, tal como íon tetrametilamônio. Os compostos de benzeno substituídos com arila ou heteroarila também incluem aqueles sais contendo átomos de nitrogênio quaternário. Exemplos de pró-fármacos incluem ésteres e outros derivados farmaceuticamente aceitáveis, que, após administração a um paciente, são capazes de fornecer compostos de benzeno substituídos com arila ou heteroarila ativos.
[0455]Adicionalmente, os compostos da presente invenção, por exemplo, os sais dos compostos, podem existir na forma hidratada ou não hidratada (o anidro) ou como solvatos com outras moléculas de solvente. Exemplos não limitantes de hidratos incluem mono-hidratos, di-hidratos, etc. Exemplos não limitantes de solvatos incluem solvatos de etanol, solvatos de acetona, etc.
[0456]“Solvato” significa formas de adição de solvente que contêm quantidades estequiométricas ou não estequiométricas de solvente. Alguns compostos têm uma tendência a capturar uma razão molar fixa de moléculas de solvente no estado sólido cristalino, assim, formando um solvato. Se o solvente for água, o solvato formado é um hidrato; e se o solvente for álcool, o solvato formado é um alcoolato. Os hidratos são formados pela combinação de uma ou mais moléculas de água com uma molécula da substância em que a água retém seu estado molecular como H2O.
[0457]Conforme usado neste relatório, o termo “análogo” se refere a um composto químico que é estruturalmente similar a um outro, mas difere levemente na composição (como na substituição de um átomo por um átomo de um elemento diferente ou na presença de um grupo funcional particular, ou na substituição de um grupo funcional por um outro grupo funcional). Assim, um análogo é um composto que é similar ou comparável em função e aparência, mas não na estrutura ou origem ao composto de referência.
[0458]Conforme definido neste relatório, o termo “derivado” se refere aos compostos que têm uma estrutura de núcleo comum, e são substituídos com vários grupos, conforme descrito neste relatório. Por exemplo, todos os compostos representados pela Fórmula (I) são compostos de benzeno substituídos com arila ou heteroarila, e têm a Fórmula (I) como um núcleo comum.
[0459]O termo “bioisóstero” se refere a um composto resultante da troca de um átomo ou de um grupo de átomos com um outro átomo ou grupo de átomos amplamente similar. O objetivo de uma substituição bioisostérica é criar um novo composto com propriedades biológicas similares ao composto precursor. A substituição bioisostérica pode ocorrer com base fisicoquímica ou topológica. Exemplos de bioisósteros de ácido carboxílico incluem, mas não são limitados a, acil sulfonimidas, tetrazóis, sulfonatos e fosfonatos. Veja, por exemplo, Patani e LaVoie, Chem. Rev. 96, 3147 - 3176, 1996.
[0460]A presente invenção é intencionada a incluir todos os isótopos de átomos que ocorrem nos presente compostos. Os isótopos incluem aqueles átomos tendo o mesmo número atômico, mas números de massa diferentes. Por via de exemplo geral e sem limitação, isótopos de hidrogênio incluem trítio e deutério, e isótopos de carbono incluem C-13 e C-14.
[0461]2. Síntese de Compostos de Benzeno Substituídos com Arila ou Heteroarila
[0462]A presente invenção fornece métodos para a síntese dos compostos de qualquer Fórmula divulgada neste relatório. A presente invenção também fornece métodos detalhados para a síntese de vários compostos da presente invenção divulgados, de acordo com os esquemas seguintes, conforme mostrado nos Exemplos.
[0463]Por toda a descrição, onde as composições são descritas tendo, incluindo, ou compreendendo componentes específicos, é considerado que as composições também consistem essencialmente de, ou consistem dos componentes citados. Similarmente, onde os métodos ou processos são descritos tendo, incluindo, ou compreendendo etapas de processo específicas, os processos também consistem essencialmente de, ou consistem das etapas de processamento citadas. Além disso, deve ser entendido que a ordem das etapas ou ordem para realizar certas ações é imaterial, contanto que a invenção permaneça operável. Além disso, duas ou mais etapas ou ações podem ser simultaneamente conduzidas.
[0464]Os processos sintéticos da invenção podem tolerar uma ampla variedade de grupos funcionais, portanto vários materiais de partida substituídos podem ser usados. Os processos, em geral, fornecem os composto finais desejados no ou em proximidade ao final do processo global, embora possa ser desejável, em certos exemplos, converter adicionalmente o composto em um sal farmaceuticamente aceitável, éster ou pró-fármaco do mesmo.
[0465]Os compostos da presente invenção podem ser preparados em uma variedade de maneiras usando materiais de partida comercialmente disponíveis, os compostos conhecidos na literatura, ou a partir de intermediários facilmente preparados, através da utilização de métodos e procedimentos sintéticos padrão conhecidos àqueles habilitados na técnica, ou que serão evidentes ao técnico habilitado na luz dos ensinamentos neste relatório. Métodos e procedimentos sintéticos padrão para a preparação de moléculas orgânicas e transformações e manipulações de grupo funcional podem ser obtidos a partir da literatura científica relevante ou a partir de manuais padrão no campo. Embora não limitados a qualquer uma ou várias fontes, textos clássicos, tais como Smith, M. B., March, J., March’s Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 5a edição, John Wiley & Sons: Nova Iorque, 2001; Greene, T.W., Wuts, P.G. M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3a edição, John Wiley & Sons: Nova Iorque, 1999; R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); L. Fieser e M. Fieser, Fieser e Fieser’s Reagents for Organico Synthesis, John Wiley e Sons (1994); e L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley e Sons (1995), incorporados como referência neste relatório, são úteis e manuais de referência reconhecidos de síntese orgânica conhecidos àqueles habilitados na técnica. As descrições seguintes dos métodos sintéticos são designadas para ilustrar, mas não limitar, procedimentos gerais para a preparação dos compostos da presente invenção.
[0466]Os compostos da presente invenção podem ser convenientemente preparados por uma variedade de métodos familiares àqueles habilitados na técnica. Os compostos desta invenção com qualquer Fórmula divulgada neste relatório podem ser preparados, de acordo com os procedimentos ilustrados nos Esquemas 1 a 10 abaixo, a partir de materiais de partida comercialmente disponíveis ou materiais de partida que podem ser preparados usando os procedimentos da literatura. Os grupos Z e R (tais como R2, R3, R4, R6, R7, R8 e R12) nos Esquemas 1 a 10 são definidos em qualquer uma entre as Fórmulas divulgadas neste relatório, a menos que de outro modo especificado.
[0467]Uma pessoa de habilidade comum na técnica observará que, durante as sequências de reação e esquemas sintéticos descritos neste relatório, a ordem de certas etapas pode ser modificada, tal como a introdução e remoção de grupos de proteção.
[0468]Uma pessoa de habilidade comum na técnica reconhecerá que certos grupos podem exigir proteção a partir das condições de reação por intermédio do uso dos grupos de proteção. Os grupos de proteção também podem ser usados para diferenciar grupos funcionais similares em moléculas. Uma lista de grupos de proteção e como introduzir e remover estes grupos pode ser encontrada em Greene, T.W., Wuts, P.G. M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3a edição, John Wiley & Sons: Nova Iorque, 1999.
[0469]Grupos de proteção preferidos incluem, mas não são limitados a:
[0470]Para uma porção hidroxila: TBS, benzila, THP, Ac
[0471]Para ácidos carboxílicos: éster benzílico, éster metílico, éster etílico, éster alílico
[0472]Para aminas: Cbz, BOC, DMB
[0473]Para dióis: Ac (x2) TBS (x2), ou, quando tomados juntos, acetonidas
[0474]Para tióis: Ac
[0475]Para benzimidazóis: SEM, benzila, PMB, DMB
[0476]Para aldeídos: di-alquil acetais, tais como dimetóxi acetal ou dietil acetila.
[0477]Nos esquemas de reação descritos neste relatório, múltiplos estereoisômeros podem ser produzidos. Quando nenhum estereoisômero particular é indicado, é entendido significar todos os estereoisômeros possíveis que podem ser produzidos a partir da reação. Uma pessoa de habilidade comum na técnica reconhecerá que as reações podem ser otimizadas para fornecer um isômero, preferencialmente, ou novos esquemas podem ser desenvolvidos para produzir um isômero único. Se misturas são produzidas, técnicas, tais como cromatografia em camada delgada preparativa, HPLC preparativa, HPLC quiral preparativa ou SFC preparativa podem ser usadas para separar os isômeros.
[0478]As abreviações seguintes são usadas por todo o relatório descritivo e são definidas abaixo: AAacetato de amônio ACNacetonitrila Acacetila AcOHácido acético atmatmosfera aq.aquoso BID ou b.i.d.bis in die (duas vezes ao dia) tBuOKt-butóxido de potássio Bnbenzila BOCterc-butóxi carbonila BOP(benzotriazol-1-ilóxi)tris(dimetilamino)-fosfôniohexafluorofosfato Cbzbenzilóxi carbonila CDCtaclorofórmio deuterado CH2CI2diclorometano COMUhexafluorofosfato de (1 -ciano-2-etóxi-2-oxoetilidenamino-óxi)dimetil- amino-morfolino-carbênio ddias DBU 1,8-diazabiciclo[5,4,0]undec-7-eno DCE 1,2 dicloroetano DCMdiclorometano DEADAzodicarboxilato de dietila DIAD D i-isopropilazodicarboxi lato DiBAL-Hhidreto de diisobutil alumínio DIPEAN,N-di-isopropiletilamina (base de Hunig) DMADimetilacetamida DMAPN, N dimetil-4-aminopiridina DMB2,4 dimetóxi benzila DMFN,N-dimetilformamida DMSOSulfóxido de dimetila DPPAAzida difenilfosfônica EA ou EtOAcAcetato de etila EDC ou EDCIN-(3-Dimetilaminopropil)-N’-etilcarbodi-imida Et2Oéter dietílico ELSDifração de Luz Evaporativa ESI-Modo negativo por eletrospray ESI+Modo positivo por eletrospray EtβN ou TEAtrietilamina EtOHetanol FAácido fórmico FC ou FCCCromatografia instantânea Hhoras H2Oágua HATUhexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-l-il)-N,N,N’,N’-tetrametilurônio HOAT1 -Hidróxi-7-azabenzotriazol HOBt1 -Hidroxibenzotriazol HO-SuN-Hidroxissuccinimida HCIcloreto de hidrogênio ou ácido clorídrico HPLCCromatografia líquida de alto desempenho K2CO3carbonato de potássio KHMDs Hexametildisilazida potássica LC/MS ou LC-MSCromatografia líquida-espectro de massas LDALítio di-isopropilamida LiHMDsLítio hexametildisilazida LGgrupo de partida Mmolar m/zrazão massa/carga m-CPBAácido meta-cloroperbenzoico MeCNAcetonitrila MeODd4-metanol MeIIodeto de metila MS3Apeneiras moleculares 3 A MgSO4Sulfato de magnésio Minminutos MsMesila MsClCloreto de mesila MsOMesilato MSEspectro de Massas MWlirradiação por micro-ondas Na2CO3carbonato de sódio Na2SO4sulfato de sódio NaHCO3bicarbonato de sódio NaHMDsHexametildisilazida sódica NaOHhidróxido de sódio NaHCO3bicarbonato de sódio Na2SO4Sulfato de sódio NISN-iodossuccinimida RMNRessonância magnética nuclear o/n ou O/Ndurante a noite Pd/C Paládio em carbono Pd(dppf)Cl2.DCM[1,1’-Bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II), complexo com diclorometano PPAAanidrido cíclico de ácido 1-propanofosfônico Pd(OH)2di-hidróxido de paládio PE Éter de Petróleo PGgrupo de proteção PMBpara-metoxibenzila p.o.por os (administração oral) ppmpartes por milhão prep HPLCCromatografia líquida de alto desempenho preparativa prep TLCCromatografia de camada delgada preparativa p-TsOHácido para-toluenossulfônico PyBOPhexafluorofosfato de (benzotriazol-1 -ilóxi)tripirrolidinofosfônio QD ou q.d.quaque die (uma vez ao dia) RBFfrasco de fundo redondo RP-HPLCCromatografia líquida de alto desempenho em fase reversa Rt ou RTTemperatura ambiente SEM(Trimetilsilil)etoximetila SEMClcloreto de (trimetilsilil)etoximetila SFCCromatografia super crítica SGCcromatografia em gel de sílica STABTriacetóxi boro-hidreto de sódio TBAFfluoreto de tetra-n-butilamônio TBMEéter terc-butil metílico TEATrietilamina TFAácido trifluoroacético TfOtriflato THFtetra-hidrofurano THPtetra-hidropirano TID ou t.i.dter in die (três vezes ao dia) TLCcromatografia em camada delgada TMSClCloreto trimetilsilila Tstosila TsOHácido tósico UVultravioleta
[0479] Esquema 1
Figure img0062
[0480]O Esquema 1 mostra a síntese de análogos de arila modificados após uma via geral que utiliza química bem estabelecida. Ácidos nitrobenzoicos substituídos, muitos dos quais são comercialmente disponíveis ou podem ser feitos de nitrações dos ácidos benzoicos substituídos apropriados ou outra química conhecida a aqueles habilitados na técnica, podem ser convertidos em seus ésteres metílicos através do tratamento com metiliodeto em um solvente polar, tal como DMF, na presença de uma base apropriada, tal como carbonato de sódio, em uma temperatura apropriada, tal como 60 °C (Etapa 1). O grupo nitro pode ser reduzido a uma amina usando um agente redutor apropriado, tal como ferro, na presença de um ácido, tal como cloreto de amônio, em um solvente prótico, tal como etanol, em uma temperatura apropriada, tal como 80 °C (Etapa 2). A introdução do R7 pode ser feita usando uma aminação redutiva com um cetona ou aldeído apropriado na presença de um agente redutor apropriado, tal como cianoboro-hidreto de sódio, e ácido catalítico, tal como ácido acético, em um solvente apropriado, tal como metanol. Uma variedade de grupos Rs pode ser introduzida por alquilação usando Rs-LG, onde LG é um grupo de partida, tal como iodo, na presença de uma base suave, tal como carbonato de césio, em um solvente polar apropriado, tal como acetonitrila, em uma temperatura apropriada, tal como 80 °C (Etapa 4). Alternativamente, os grupos Rs podem ser introduzidos por aminação redutiva com Rs-cetona ou Rs-aldeído na presença de um agente redutor apropriado, tal como cianoboro-hidreto de sódio, e ácido catalítico, tal como ácido acético, em um solvente apropriado, tal como metanol. A porção éster pode ser convertida em uma amida usando um protocolo de duas etapas padrão. O éster pode ser hidrolisado no ácido correspondente usando uma base adequada, tal como hidróxido de sódio, em um solvente polar, tal como etanol (Etapa 5). O ácido seria então submetido a uma reação de ligação amida padrão, em seguida a amina apropriada seria adicionada juntamente com um reagente de ligação amida adequado, tal como PYBOP, em um solvente adequado, tal como DMSO, para fornecer a amida desejada (Etapa 6).
[0481]Esquema 2
Figure img0063
[0482]Dependendo da natureza do substituinte R6, outra modificação química pode ser utilizada para converter o substituinte R6 em um substituinte R6 alternativo. Uma amostragem representativa de tais modificações pode incluir hidrogenação, remoção do grupo de proteção, seguido por reações de ligação amida adicionais, reações de ligação catalisadas por paládio, reações de aminação redutiva ou reações de alquilação. Por exemplo, conforme representado no Esquema 2, se R6 for um brometo, substituintes R6 alternativos depois podem ser introduzidos usando protocolos com base em metal de transição padrão que contam com um grupo de partida, tal como um brometo, como um ponto de conexão. O brometo seria combinado com um derivado de éster borônico apropriado, na presença de uma base suave e um catalisador de paládio em um solvente polar, tal como dioxano/água, em temperatura elevada para fornecer o novo substituinte R6 desejado (isto é, reação de Suzuki). Por exemplo, conforme representado no Esquema 3, se a reação de Suzuki for conduzida com um derivado de éster borônico portador de um grupo formila, outra modificação por reação de aminação redutiva com aminas primárias e secundárias (por exemplo, morfolina, dimetilamina) pode ser conduzida para introduzir grupos amina.
[0483]Esquema 3
Figure img0064
[0484]Dependendo da natureza do substituinte R7, outra modificação química subsequente à Etapa 6 do Esquema 1 pode ser utilizada para converter o substituinte R7 em um substituinte R7 alternativo. Por exemplo, um grupo amino protegido contido dentro de R7 pode ser submetido à reação de desproteção (por exemplo, clivagem do grupo Boc) para fornecer grupos amino livres. Tais grupos amino livres podem ser submetidos às reações de aminação redutiva ou reações de alquilação para fornecer aminas substituídas.
[0485]O Esquema 4 mostra a síntese geral de compostos de isonicotinamida 2,6-dissubstituídos. A reação de Suzuki na Etapa 1 de um composto de ácido aril borônico com material de partida de 2,6-dicloroisonicotinato de metila pode ser usada para introduzir um grupo arila que pode ser substituído com um grupo X funcional que é adequado para outra transformação. Tais grupos X incluem formila ou hidroximetila que podem ser facilmente transformados na Etapa 2 em vários grupos Y. Tais grupos Y incluem grupos aminometila, monoalquilaminometila e dialquilaminometila. O último pode ser preparado por aminação redutiva no caso onde X é formila ou através da conversão de X = hidroximetila em bromometila, seguido por alquilação com uma amina. Hidrólise de éster, uma etapa subsequente, fornece um intermediário de ácido que pode ser ligado com 3-(aminometil)-piridin-2(lH)-onas apropriadas para fornecer o penúltimo intermediário de 2-cloro-6-arila-isonicotino-amida. A reação de Suzuki ou reação de aminação depois fornece compostos substituídos na posição 2 com um grupo Z. No caso de uma reação de aminação, exemplos de Z podem ser monoalquilamino ou dialquilamino. No caso de uma reação de Suzuki, Z pode ser arila, di-hidroarila ou tetra-hidroarila, tal como ciclo-hexenila.
[0486]Esquema 4
Figure img0065
[0487]O Esquema 5 mostra a síntese geral de 6-aril-3-metil-picolinamidas tendo grupos monoalquilamino ou dialquilamino na posição 4. Partindo da oxidação de 3- bromo-6- cloropicolinato de metila ao N-óxido, seguido por cloração com oxicloreto de fósforo fornece 3-bromo-4,6-dicloropicolinato de metila. O grupo 4-cloro pode ser seletivamente substituído com diversas mono e dialquil aminas que também podem conter grupos funcionais ou funcionais protegidos que pode ser não mascarados em um estágio posterior. A metilação catalisada por paládio com tetrametilestanho, seguido por hidrólise de éster e ligação amida com 3-(aminometil)-piridin-2(1H)-onas apropriadas fornece os penúltimos intermediários de 2-cloro piridina. grupo de reação de ligação de Suzuki destes intermediários com ácidos aril borônicos resulta em substituição do grupo 2-cloro com um grupo arila. Assim, isto fornece 6-aril-3-metil- picolinamidas tendo grupos monoalquilamino ou dialquilamino na posição 4. O grupo arila que pode ser substituído com um grupo X funcional que permanece no produto final ou é convertido em um outro grupo por desproteção ou reação de conversão de grupo funcional, por exemplo, aminação redutiva.
[0488]Esquema 5
Figure img0066
[0489]Sínteses gerais de intermediários de 3-(aminometil)-piridin-2(1H)-onas para a reação de ligação amida a partir do Esquema 1 são representadas no Esquema 6 abaixo. Em um método, uma dicetona pode ser condensada com 2-cianoacetamida na presença de um reagente apropriado, tal como acetato de piperidina, em um solvente polar, tal como etanol, para fornecer uma cianopiridona (Etapa 9). Em um outro método, quando R3 é H, uma alquinil cetona apropriadamente substituída pode ser condensada com 2-cianoacetamida na presença de um reagente apropriado, tal como acetato de piperidina, em um solvente polar, tal como etanol, para fornecer uma cianopiridona (Etapa 11). O grupo ciano pode ser reduzido sob condições apropriadas, tais como hidrogenação, na presença de níquel Raney catalítico em um solvente polar, modificação química pode ser utilizada para converter cada um entre os mesmos, independentemente de um substituinte alternativo. Uma amostragem representativa de tais modificações pode incluir hidrogenação, remoção do grupo de proteção, seguido por reações de ligação amida adicionais, reações de ligação catalisadas por paládio, reações de aminação redutiva e reações de alquilação. O Esquema 4 representa uma variante da síntese geral por intermédio do Esquema 1 com base em materiais de partida de 3-amino-5-bromo-benzoato de metila 2-substituído (o substituinte é um grupo R12). Estes materiais de partida , por sua vez, podem ser preparados a partir de ácidos 3-nitro-benzoicos 2-substituídos que são comercialmente disponíveis ou podem ser preparados por nitração de ácidos benzoicos 2-substituídos. Assim, a bromação de ácidos 3-nitro-benzoicos 2- substituídos com um reagente adequado, tal como 1,3-dibromo-5,5-dimetil-2,4- imidazolidinediona produz os ácidos 3-nitro-5-bromo-benzoicos 2-substituídos apropriados. Uma variedade de esterificação e depois métodos de redução do grupo nitro podem ser sequencialmente implementados para preparar os materiais de partida de 3-amino-5-bromo-benzoato de metila 2-substituído a partir dos ácidos 3- tal como amônio em metanol, para fornecer a amina (Etapa 10).
[0490]Esquema 6
Figure img0067
[0491]Adicionalmente, dependendo da natureza do grupo R2, R3 ou R4, outra 1. Ureia H2O2, TFAA DCM, rt, 16h 2. POCl3, refluxo Etapa 1, 2 Etapa 3 2. éster de hidrólise Etapas 4, 5 ligação amina por exemplo PyBOP Etapa 6 condições de Suzuki Etapa 7 Etapa 9 Etapa 10 Etapa 11 Etapa 10 Redução Redução modificação química pode ser utilizada para converter cada um entre os mesmos, independentemente de um substituinte alternativo. Uma amostragem representativa de tais modificações pode incluir hidrogenação, remoção do grupo de proteção, seguido por reações de ligação amida adicionais, reações de ligação catalisadas por paládio, reações de aminação redutiva e reações de alquilação. O Esquema 4 representa uma variante da síntese geral por intermédio do Esquema 1 com base em materiais de partida de 3-amino-5-bromo-benzoato de metila 2-substituído (o substituinte é um grupo R12). Estes materiais de partida , por sua vez, podem ser preparados a partir de ácidos 3-nitro-benzoicos 2-substituídos que são comercialmente disponíveis ou podem ser preparados por nitração de ácidos benzoicos 2-substituídos. Assim, a bromação de ácidos 3-nitro-benzoicos 2- substituídos com um reagente adequado, tal como 1,3-dibromo-5,5-dimetil-2,4- imidazolidinediona produz os ácidos 3-nitro-5-bromo-benzoicos 2-substituídos apropriados. Uma variedade de esterificação e depois métodos de redução do grupo nitro podem ser sequencialmente implementados para preparar os materiais de partida de 3-amino-5-bromo-benzoato de metila 2-substituído a partir dos ácidos 3- nitro-5-bromo-benzoicos 2-substituídos.
[0492]Esquema 7
Figure img0068
[0493]Conforme representado no Esquema 7, o grupo R7 pode ser introduzido a partir de 3-amino-5-bromo-benzoatos de metila 2-substituídos na Etapa 1 usando uma aminação redutiva com uma R7-cetona ou R7-aldeído apropriado na presença de um agente redutor apropriado, tal como cianoboro-hidreto de sódio, e ácido catalítico, tal como ácido acético, em um solvente apropriado, tal como metanol. Similarmente, grupos R8 podem ser introduzidos na Etapa 2 por aminação redutiva com R8-cetona ou R8-aldeído na presença de um agente redutor apropriado, tal como cianoboro- hidreto de sódio, e ácido catalítico, tal como ácido acético, em um solvente apropriado, tal como metanol. Alternativamente, uma variedade de grupos R8 pode ser introduzida por alquilação usando R8-LG, onde LG é um grupo de partida, tal como iodo, na presença de uma base suave, tal como carbonato de césio, em um solvente polar apropriado, tal como acetonitrila, em uma temperatura apropriada, tal como 80 °C. Na Etapa 3, os grupos arila correspondentes a R6 podem ser introduzidos por reação de Suzuki do brometo intermediário com um ácido aril borônico ou derivado de éster apropriado, por exemplo, X-Ar- B(OH)2, na presença de uma base suave e um catalisador de paládio em um solvente polar, tal como dioxano/água, em temperatura elevada. O grupo X em X-Ar-B(OH)2 pode ser um substituinte completamente elaborado no anel arila ou pode ser um grupo funcional que pode ser convertido em um outro grupo por modificação do grupo funcional. Uma amostragem representativa de tais modificações pode incluir hidrogenação, remoção do grupo de proteção, seguido por reações de ligação amida adicionais, reações de ligação catalisadas por paládio, reações de aminação redutiva ou reações de alquilação. Por exemplo, se a reação de Suzuki for conduzida com um derivado de ácido borônico portador de um grupo formila, outra modificação por reação de aminação redutiva com aminas primárias e secundárias (por exemplo, morfolina, dimetilamina) pode ser conduzida para introduzir grupos amina. Na Etapa 4, a porção éster pode ser hidrolisada no ácido correspondente usando uma base adequada, tal como hidróxido de sódio, em um solvente polar, tal como etanol. Na Etapa 5, o ácido pode ser submetido à uma reação de ligação amida padrão, em seguida, a amina apropriada seria adicionada juntamente com um reagente de ligação amida adequado, tal como PYBOP, em um solvente adequado, tal como DMSO, para fornecer a amida desejada. Dependendo da natureza do substituinte R7, outra modificação química subsequente à Etapa 5 do Esquema 4 pode ser utilizada para converter o substituinte R7 em um substituinte R7 alternativo. Por exemplo, um grupo amino protegido contido dentro de R7 pode ser submetido à reação de desproteção (por exemplo, clivagem do grupo Boc) para fornecer grupos amino livres. Tais grupos amino livres podem ser submetidos à reações de aminação redutiva ou reações de alquilação para fornecer aminas substituídas.
[0494]O Esquema 8 abaixo representa a síntese geral de 2-monoalquilamino e 2- dialquilmino-3-substituído-6-aril-isonicotinamidas, em que o substituinte 3 corresponde a R12 e o grupo 6-arila corresponde a Rε, Fórmula I Na Etapa 1, o substituinte 3 pode ser introduzido pelo método descrito por Epsztain J. et al. Tetrahedron, 1991, v. 47, 1697 - 16708, por metalação de 2-cloro-isonicotinanilida com n-butillítio, seguido por captura com um alquiliodeto, tal como metiliodeto ou aldeído ou outro grupo eletrofílico.
[0495]Esquema 8
Figure img0069
[0496]Em casos onde o reagente de captura produz um substituinte com um grupo funcional, este grupo pode ser mascarado ou convertido em um outro grupo funcional compatível com as etapas químicas subsequentes. Na Etapa 2, a hidrólise de anilida amida sob condições ácidas padrão pode ser conduzida, seguido por síntese de éster metílico sob condições padrão, por exemplo, conforme mostrado com iodeto de metila e base, fornece isonicotinatos de metila 2-cloro-3-substituídos correspondentes. Na Etapa 4, um grupo alquilamino pode ser introduzido pela reação de ligação de Buchwald de uma R7NH2 monoalquilamina com os isonicotinatos de metila 2-cloro-3-substituídos. Esta reação é bem sustentada para diversos sistemas de 2-cloropiridina na literatura química. Em uma Etapa 5 opcional para compostos de dialquilamino, grupos Rs podem ser introduzidos por aminação redutiva com Rs- cetona ou Rs-aldeído na presença de um agente redutor apropriado, tal como cianoboro-hidreto de sódio, e ácido catalítico, tal como ácido acético, em um solvente apropriado, tal como metanol. Alternativamente, uma variedade de grupos Rs pode ser introduzida por alquilação usando R8-LG, onde LG é um grupo de partida, tal como iodo, na presença de uma base suave, tal como carbonato de césio, em um solvente polar apropriado, tal como acetonitrila, em uma temperatura apropriada, tal como 80 °C. Na Etapa 6, a oxidação ao N-óxido, seguido por cloração com oxicloreto de fósforo, fornece isonicotinatos de metila 6-cloro-2-mono ou dialquilamino-3-substituídos. Na Etapa 7, a porção éster pode ser hidrolisada no ácido correspondente usando uma base adequada, tal como hidróxido de sódio, em um solvente polar, tal como etanol. Na Etapa 8, o ácido pode ser submetido à uma reação de ligação amida padrão, em seguida, a amina ou 3-(aminometil)-piridin-2(1H)-ona substituída apropriada seria adicionada juntamente com um reagente de ligação amida adequado, tal como PYBOP, em um solvente adequado, tal como DMSO, para fornecer a amida desejada. Na Etapa 9, os grupos arila correspondentes a Re podem ser introduzidos por reação de Suzuki do brometo intermediário com um ácido aril borônico ou derivado de éster apropriado, por exemplo, X-Ar-B(OH)2, na presença de uma base suave e um catalisador de paládio em um solvente polar, tal como dioxano/água, em temperatura elevada. O grupo X em X-Ar-B(OH)2 pode ser um substituinte completamente elaborado no anel arila ou pode ser um grupo funcional que pode ser convertido em um outro grupo por modificação do grupo funcional. Uma amostragem representativa de tais modificações pode incluir hidrogenação, remoção do grupo de proteção, seguido por reações de ligação amida adicionais, reações de ligação catalisadas por paládio, reações de aminação redutiva ou reações de alquilação. Por exemplo, se a reação de Suzuki for conduzida com um derivado de ácido borônico portador de um grupo formila, outra modificação por reação de aminação redutiva com aminas primárias e secundárias (por exemplo, morfolina, dimetilamina) pode ser conduzida para introduzir grupos amina. Dependendo da natureza do substituinte R7, outras etapas de modificação química podem ser utilizadas para converter o substituinte R7 em um substituinte R7 alternativo. Por exemplo, um grupo amino protegido contido dentro de R7 pode ser submetido à reação de desproteção (por exemplo, clivagem do grupo Boc) para fornecer grupos amino livres. Tais grupos amino livres podem ser submetidos à reações de aminação redutiva ou reações de alquilação para fornecer aminas substituídas.
[0497]Esquema 9
Figure img0070
[0498]O Esquema 9 representa uma síntese de análogos de arila modificados após uma via geral que utiliza química bem estabelecida. A partida com um ácido benzoico substituído, tal como ácido 5-cloro-2-metilbenzoico, nitração usando condições padrão, tais como tratamento com H2SO4 conc. e HNO3 conc. pode fornecer o análogo de nitro. A esterificação do ácido pode ser obtida usando um agente alquilante, tal como iodeto de metila, na presença de uma base, tal como carbonato de sódio, em um solvente polar, tal como DMF. O grupo nitro pode ser reduzido usando condições, tais como ferro e cloreto de amônio, em um solvente prótico, tal como etanol, com aquecimento até uma temperatura, tal como 80 °C. A anilina resultante pode ser convertida em um brometo usando uma reação de Sandmeyer, tal tratamento com CuBr2 e nitrito de t-butila em um solvente, tal como acetonitrila. Uma ligação catalisada por paládio de um tiol com o brometo pode ser obtida usando uma fonte de paládio, tal como Pd(OAc)2 com um ligante, tal como Xanthphos, na presença de uma base, tal como N,N-di-isopropil etilamina em um solvente, tal como 1,4-dioxano, opcionalmente, aquecendo até uma temperatura, tal como 100 °C. O éster pode ser hidrolisado com uma base aquosa, tal como NaOH em água. O ácido resultante pode ser ligado à 3-(amino metil)-4,6-dimetilpiridin-2(1 H)-ona usando condições de ligação aminoácido padrão, tais como PyBOP em DMSO. O tioéter resultante pode ser oxidado ao sulfóxido ou sulfona correspondente através do uso dos equivalentes apropriados de um oxidante, tal como m-CPBA, em um solvente, tal como DCM. Substituintes de arila podem ser incorporados através do uso de ligações de paládio, tais como uma reação de Suzuki, conforme descrito acima.
[0499]Esquema 10
Figure img0071
[0500]O Esquema 10 representa uma síntese de análogos de arila modificados após uma via geral que utiliza química bem estabelecida. Partindo com uma anilina substituída, tal como 3-amino-5-cloro-2-metilbenzoato de metila, a anilina pode ser convertida em um fenol usando uma reação de Sandmeyer, tal como tratamento com solução de NaNO2 aquosa em um ácido aquoso, tal como H2SO4 a 50 %. O fenol pode ser alquilado usando um agente alquilante, tal como 4-metilbenzenossulfonato de tetra-hidro-2H-pirano-4-ila na presença de uma base apropriada, tal como carbonato de césio, em como solvente polar, tal como DMF, opcionalmente aquecendo até uma temperatura, tal como 80 °C. O éster pode ser hidrolisado com uma base aquosa, tal como NaOH em água. O ácido resultante pode ser ligado à 3-(amino metil)-4,6- dimetilpiridin-2(lH)-ona usando condições de ligação aminoácido padrão, tais como PyBOP em DMSO. Os substituintes de arila podem ser incorporados através do uso de ligações de paládio, tais como uma reação de Suzuki, conforme descrito acima.
[0501]3. Métodos de Tratamento
[0502]Os compostos da presente invenção inibem a atividade de histona metiltransferase de EZH2 ou um mutante da mesma e, consequentemente, a presente invenção também fornece métodos para tratar condições e doenças, o curso das quais pode ser influenciado pela modulação do estado de metilação das histonas ou outras proteínas, em que o dito estado de metilação é mediado, pelo menos em parte, pela atividade de EZH2. Em um aspecto da invenção, certos compostos divulgados neste relatório são candidatos para tratar ou prevenir certas condições e doenças. A modulação do estado de metilação de histonas, por sua vez, pode influenciar o nível de expressão de genes alvo ativados por metilação, e/ou genes alvo suprimidos por metilação. O método inclui administrar a um paciente em necessidade de tal tratamento, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo, solvato ou estereoisômero do mesmo.
[0503]O transtorno em que a metilação da proteína mediada por EZH2 desempenha um papel pode ser câncer ou uma condição pré-cancerosa. A presente invenção ainda fornece o uso de um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, éster, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo no tratamento de câncer ou pré-câncer, o curso do qual pode ser influenciado pela modulação de metilação da proteína mediada por EZH2, ou, para a preparação de um medicamento útil para o tratamento de tal câncer ou pré-câncer. Cânceres exemplares que podem ser tratados incluem linfomas, incluindo linfoma não Hodgkin, linfoma folicular (FL) e linfoma difuso de grandes células B (DLBCL); melanoma; e leucemia, incluindo CML. Condição pré-cancerosa exemplar inclui síndrome mielodisplásica (MDS; anteriormente conhecida como pré-leucemia).
[0504]A presente invenção também fornece métodos para proteger contra um transtorno em que a metilação da proteína mediada por EZH2 desempenha um papel em um paciente em necessidade dos mesmos através da administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, a um paciente em necessidade de tal tratamento. O transtorno pode ser câncer, por exemplo, câncer em que a metilação da proteína mediada por EZH2 desempenha um papel. A presente invenção também fornece o uso do composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, éster, pró-fármaco, metabólito, polimorfo, solvato, ou estereoisômero do mesmo, para a preparação de um medicamento útil para a prevenção de um transtorno celular proliferativo associado, pelo menos em parte, com a metilação da proteína mediada por EZH2.
[0505]Os compostos desta invenção podem ser usados para modular a metilação da proteína (por exemplo, histona), por exemplo, para modular a atividade da enzima histona metiltransferase ou histona demetilase. Pelo menos alguns dos compostos da invenção podem ser usados in vivo ou in vitro para modular a metilação da proteína. A metilação da histona foi relatada estar envolvida na expressão anormal de certos genes em cânceres, e no silenciamento de genes neuronais em células não neuronais. Pelo menos alguns compostos descritos neste relatório são candidatos adequados para tratar estas doenças, isto é, para diminuir a metilação ou restaurar a metilação em aproximadamente seu nível em células normais de contraparte.
[0506]Os compostos que são moduladores de metilação podem ser usados para modular a proliferação celular. Por exemplo, em alguns casos, a proliferação excessiva pode ser reduzida com agentes que diminuem a metilação, ao passo que a proliferação insuficiente pode ser estimulada com agentes que aumentam a metilação. Consequentemente, as doenças que podem ser tratadas pelos compostos da invenção podem incluir doenças hiperproliferativas, tais como crescimento celular benigno e crescimento celular maligno.
[0507]Conforme usado neste relatório, um “paciente em necessidade do mesmo” é um sujeito tendo um transtorno em que a metilação da proteína mediada por EZH2 desempenha um papel, ou um paciente tendo um risco aumentado de desenvolver tal transtorno em relação à população em geral. Um paciente em necessidade do mesmo pode ter uma condição pré-cancerosa. Preferivelmente, um paciente em necessidade do mesmo tem câncer. Um “paciente” inclui um mamífero. O mamífero pode ser, por exemplo, um ser humano ou mamífero não humano apropriado, tal como primata, camundongo, rato, cão, gato, vaca, cavalo, cabra, camelo, ovelha ou um porco. O paciente também pode ser um pássaro ou qualquer ave. Em uma modalidade, o mamífero é um ser humano.
[0508]Conforme usado neste relatório, o termo “transtorno celular proliferativo” se refere às condições em que o crescimento não regulado ou anormal, ou ambos, de células podem levar ao desenvolvimento de uma condição ou doença indesejada, que pode ser ou não cancerosa. Transtornos celulares proliferativos exemplares que podem ser tratados com os compostos da invenção abrangem uma variedade de condições em que a divisão celular é desregulada. Transtornos celulares proliferativos exemplares incluem, mas não são limitados a, neoplasmas, tumores benignos, tumores malignos, condições pré-cancerosas, tumores in situ, tumores encapsulados, tumores metastáticos, tumores líquidos, tumores sólidos, tumores imunológicos, tumores hematológicos, cânceres, carcinomas, leucemias, linfomas, sarcomas, e células que se dividem rapidamente. O termo “célula que se divide rapidamente” conforme usado neste relatório é definido como qualquer célula que se divide em uma taxa que excede ou é maior do que o que é esperado ou observado entre células vizinhas ou justapostas no mesmo tecido. Um transtorno celular proliferativo inclui um pré-cancer ou uma condição pré-cancerosa. Um transtorno celular proliferativo inclui câncer. Os métodos e usos fornecidos neste relatório podem ser usados para tratar ou aliviar um sintoma de câncer ou para identificar candidatos adequados para tais propósitos. O termo “câncer” inclui tumores sólidos, assim como, tumores hematológicos e/ou malignidades. Uma “célula de pré-cancer” ou “célula pré- cancerosa” é uma célula que manifesta um transtorno celular proliferativo que é um pré-cancer ou uma condição pré-cancerosa. Uma “célula de câncer” ou ‘‘célula cancerosa” é uma célula que manifesta um transtorno celular proliferativo que é um câncer. Quaisquer meios reproduzíveis de medição podem ser usados para identificar células de câncer ou células pré-cancerosas. Células de câncer ou células pré- cancerosas podem ser identificadas por tipificação ou graduação histológica de uma amostra de tecido (por exemplo, uma amostra de biópsia). As células de câncer ou células pré-cancerosas podem ser identificadas através do uso de marcadores moleculares apropriados.
[0509]As condições não cancerosas exemplares ou transtornos que podem ser tratados usando um ou mais compostos da presente invenção incluem, mas não são limitados a, artrite reumatoide; inflamação; doença autoimune; condições linfoproliferativas; acromegalia; espondilite reumatoide; osteoartrite; gota, outras condições artríticas; sepsia; choque séptico; choque endotóxico; sepsia gram- negativa; síndrome do choque tóxico; asma; síndrome da angústia respiratória do adulto; doença pulmonar obstrutiva crônica; inflamação pulmonar crônica; doença inflamatória intestinal; doença de Crohn; psoríase; eczema; colite ulcerativa; fibrose pancreática; fibrose hepática; doença renal aguda e crônica; síndrome do intestino irritável; pirese; restenose; malária cerebral; acidente vascular cerebral e lesão isquêmica; trauma neural; doença de Alzheimer; doença de Huntington; doença de Parkinson; dor aguda e crônica; rinite alérgica; conjuntivite alérgica; insuficiência cardíaca crônica; síndrome coronária aguda; caquexia; malária; hanseníase; leishmaniose; doença de Lyme; síndrome de Reiter; sinovite aguda; degeneração muscular, bursite; tendinite; tenossinovite; rupturas herniadas, ou síndrome do disco intervertebral deslocado; osteopetrose; trombose; restenose; silicose; sarcose pulmonar; doenças de reabsorsão óssea, tais como osteoporose; reação enxerto versus hospedeiro; esclerose múltipla; lúpus; fibromialgia; AIDS e outras doenças virais, tais como Herpes Zoster, Herpes Simplex I ou II, vírus da influenza e citomegalovírus; e diabetes mellitus.
[0510]Cânceres exemplares que podem ser tratados usando um ou mais compostos da presente invenção incluem, mas não são limitados a, carcinoma adrenocortical, cânceres relacionados à AIDS, linfoma relacionado à AIDS, câncer anal, câncer anorretal, câncer do canal anal, câncer de apêndice, astrocitoma cerebelar da infância, astrocitoma cerebral da infância, carcinoma de células basais, câncer de pele (não melanoma), câncer biliar, câncer do tubo bílico extra-hepático, câncer intrahepático do tubo bílico, câncer de bexiga, câncer de bexiga urinária, câncer de osso e articulação, osteossarcoma e histiocitoma fibroso maligno, câncer cerebral, tumor cerebral, glioma de tronco cerebral, astrocitoma cerebelar, astrocitoma cerebral/glioma maligno, ependimoma, meduloblastoma, tumores neuroectodérmicos primitivos supratentoriais, glioma visual do caminho e hipotalâmico, câncer de mama, adenomas/carcinoides brônquicos, tumor carcinoide, gastrointestinal, câncer do sistema nervoso, linfoma do sistema nervoso, câncer do sistema nervoso central, linfoma do sistema nervoso central, câncer cervical, cânceres da infância, leucemia linfocítica crônica, leucemia mielógena crônica, transtornos mieloproliferativos crônicos, câncer de cólon, câncer colorretal, linfoma cutâneo de células T, neoplasma linfoide, micose fungoide, Síndrome de Seziary, câncer do endométrio, câncer esofágico, tumor de células germinativas extracranianas, tumor de células germinativas extragonadais, câncer do tubo bílico extra-hepático, câncer de olho, melanoma intraocular, retinoblastoma, câncer da vesícula biliar, câncer gástrico (estômago), tumor carcinoide gastrointestinal, tumor estromal gastrointestinal (GIST), tumor de células germinativas, tumor de células germinativas ovarianas, tumor trofoblástico gestacional glioma, câncer de cabeça e pescoço, câncer hepatocelular (fígado), linfoma de Hodgkin, câncer hipofaríngeo, melanoma intraocular, câncer ocular, tumores das ilhotas (pâncreas endócrino), sarcoma de Kaposi, câncer renal, câncer de laringe, leucemia linfoblástica aguda, leucemia mieloide aguda, leucemia linfocítica crônica, leucemia mielógena crônica, leucemia de células pilosas, câncer de lábio e cavidade oral, câncer de fígado, câncer de pulmão, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de pulmão de células pequenas, linfoma relacionado à AIDS, linfoma não Hodgkin, linfoma do sistema nervoso central primário, macroglobulinemia de Waldenstram, meduloblastoma, melanoma, melanoma intraocular (olho), carcinoma de células de Merkel, mesotelioma maligno, mesotelioma, câncer de pescoço escamoso metastático, câncer de boca, câncer da língua, síndrome das neoplasias endócrinas múltiplas, micose fungoide, síndromes mielodisplásicas, doenças mielodisplásicas/mieloproliferativas, leucemia mielógena crônica, leucemia mieloide aguda, mieloma múltiplo, transtornos mieloproliferativos crônicos, câncer nasofaríngeo, neuroblastoma, câncer oral, câncer da cavidade oral, câncer orofaríngeo, câncer ovariano, câncer epitelial ovariano, tumor de ovário de baixo potencial maligno, câncer pancreático, câncer de células das ilhotas pancreáticas, câncer do seio paranasal e cavidade nasal, câncer da paratireoide, câncer de pênis, câncer de faringe, feocromocitoma, pineoblastoma e tumores neuroectodérmicos primitivos supratentoriais, tumor pituitário, neoplasma de células plasmáticas/mieloma múltiplo, blastoma pleuropulmonar, câncer de próstata, câncer de reto, pelve renal e ureter, câncer celular transicional, retinoblastoma, rabdomiossarcoma, câncer de glândulas salivares, família ewing de tumores de sarcoma, sarcoma de Kaposi, sarcoma de tecidos moles, câncer uterino, sarcoma uterino, câncer de pele (não melanoma), câncer de pele (melanoma), carcinoma de células de merkel da pele, câncer de intestino delgado, sarcoma de tecidos moles, carcinoma de células escamosas, câncer de estômago (gástrico), tumores neuroectodérmicos primitivos supratentoriais, câncer testicular, câncer de garganta, timoma, timoma e carcinoma tímico, câncer da tireoide, câncer de células transicionais de pelve renal e ureter e outros órgãos urinários, tumor trofoblástico gestacional, câncer de uretra, câncer uterino endometrial, sarcoma uterino, câncer de corpo uterino, câncer vaginal, câncer vulvar, e Tumor de Wilm.
[0511]Um “transtorno celular proliferativo do sistema hematológico” é um transtorno celular proliferativo que envolve células do sistema hematológico. Um transtorno celular proliferativo do sistema hematológico pode incluir linfoma, leucemia, neoplasmas mieloides, neoplasmas de mastócitos, mielodisplasia, gamopatia monoclonal benigna, granulomatose linfomatoide, papulose linfomatoide, policitemia vera, leucemia mielocítica crônica, metaplasia mieloide agnogênica e trombocitemia essencial. Um transtorno celular proliferativo do sistema hematológico pode incluir hiperplasia, displasia, e metaplasia de células do sistema hematológico. Em um aspecto, as composições da presente invenção podem ser usadas para tratar um câncer selecionado a partir do grupo que consiste de um câncer hematológico da presente invenção ou um transtorno celular proliferativo hematológico da presente invenção, ou usadas para identificar candidatos adequados para tais propósitos. Um câncer hematológico da presente invenção pode incluir mieloma múltiplo, linfoma (incluindo linfoma de Hodgkin, linfoma não Hodgkin, linfomas da infância, e linfomas de origem linfocítica e cutânea), leucemia (incluindo leucemia da infância, tricoleucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia mielocítica aguda, leucemia linfocítica crônica, leucemia mielocítica crônica, leucemia mielógena crônica, e leucemia de mastócitos), neoplasmas mieloides e neoplasmas de mastócitos.
[0512]Um “transtorno celular proliferativo do pulmão” é um transtorno celular proliferativo que envolve células do pulmão. Os transtornos celulares proliferativos do pulmão podem incluir todas as formas de transtornos celulares proliferativos que afetam as células do pulmão. Transtornos celulares proliferativos do pulmão podem incluir câncer de pulmão, uma condição de pré-cancer ou pré-cancerosa do pulmão, crescimentos benignos ou lesões do pulmão, e crescimentos malignos ou lesões do pulmão, e lesões metastáticas no tecido e órgãos no corpo, exceto no pulmão. Em um aspecto, as composições da presente invenção podem ser usadas para tratar câncer de pulmão ou transtornos celulares proliferativos do pulmão, ou usadas para identificar candidatos adequados para tais propósitos. Câncer de pulmão pode incluir todas as formas de câncer do pulmão. Câncer de pulmão pode incluir neoplasmas malignos de pulmão, carcinoma in situ, carcinoides de tumor típicos, e acarcinoides de tumor típicos. Câncer de pulmão pode incluir câncer de pulmão de células pequenas (“SCLC”), câncer de pulmão de células não pequenas (“NSCLC”), carcinoma de células escamosas, adenocarcinoma, carcinoma de células pequenas, carcinoma de células grandes, adenocarcinoma de células escamosas e mesotelioma. Câncer de pulmão pode incluir “carcinoma com mácula”, carcinoma bronquioalveolar, carcinoma de células gigantes, carcinoma de células fusiformes, e carcinoma neuroendócrino de grandes células. O câncer de pulmão pode incluir neoplasmas de pulmão tendo heterogeneidade histológica e ultraestrutural (por exemplo, tipos celulares mistos).
[0513]Os transtornos celulares proliferativos do pulmão podem incluir todas as formas de transtornos celulares proliferativos que afetam as células do pulmão. Transtornos celulares proliferativos do pulmão podem incluir câncer de pulmão, condições pré-cancerosas do pulmão. Transtornos celulares proliferativos do pulmão podem incluir hiperplasia, metaplasia, e displasia do pulmão. Transtornos celulares proliferativos do pulmão podem incluir hiperplasia induzida por asbesto, metaplasia escamosa, e metaplasia mesotelial reativa benigna. Transtornos celulares proliferativos do pulmão podem incluir substituição de epitélio colunar com epitélio escamoso estratificado, e displasia mucosal. Indivíduos expostos a agentes ambientais prejudiciais inalados, tal como fumo e asbesto podem estar em risco aumentado quanto ao desenvolvimento de transtornos celulares proliferativos do pulmão. Doenças pulmonares anteriores que podem predispor indivíduos ao desenvolvimento de transtornos celulares proliferativos do pulmão podem incluir doença pulmonar intersticial crônica, doença pulmonar necrosante, esclerodermia, doença reumatoide, sarcoidose, pneumonite intersticial, tuberculose, pneumonias repetidas, fibrose pulmonar idiopática, granulomata, asbestose, alveolite fibrosante e doença de Hodgkin.
[0514]Um “transtorno celular proliferativo do cólon” é um transtorno celular proliferativo que envolve células do cólon. Preferivelmente, o transtorno celular proliferativo do cólon é câncer de cólon. Em um aspecto, as composições da presente invenção podem ser usadas para tratar câncer de cólon ou transtornos celulares proliferativos do cólon, ou usadas para identificar candidatos adequados para tais propósitos. Câncer de cólon pode incluir todas as formas de câncer do cólon. Câncer de cólon pode incluir cânceres de cólon esporádicos e hereditários. Câncer de cólon pode incluir neoplasmas de cólon malignos, carcinoma in situ, carcinoides de tumor típicos, e acarcinoides de tumor típicos. Câncer de cólon pode incluir adenocarcinoma, carcinoma de células escamosas, e adenocarcinoma de células escamosas. Câncer de cólon pode estar associado com uma síndrome hereditária selecionada a partir do grupo que consiste de câncer colorretal não poliposo hereditário, polipose adenomatosa familiar, síndrome de Gardner, síndrome de Peutz-Jeghers, síndrome de Turcot e polipose juvenil. Câncer de cólon pode ser causado por uma síndrome hereditária selecionada a partir do grupo que consiste de câncer colorretal não poliposo hereditário, polipose adenomatosa familiar, síndrome de Gardner, síndrome de Pexitz-Jeghers, síndrome de Turcot e polipose juvenil.
[0515]Transtornos celulares proliferativos do cólon podem incluir todas as formas de transtornos celulares proliferativos que afetam células do cólon. Os transtornos celulares proliferativos do cólon podem incluir câncer de cólon, condições pré-cancerosas do cólon, pólipos adenomatosos do cólon e lesões metacrônicas do cólon. Um transtorno celular proliferativo do cólon pode incluir adenoma. Transtornos celulares proliferativos do cólon podem ser caracterizados por hiperplasia, metaplasia, e displasia do cólon. Doenças do cólon anteriores que podem predispor indivíduos ao desenvolvimento de transtornos celulares proliferativos do cólon podem incluir câncer de cólon anterior. A doença corrente que pode predispor indivíduos ao desenvolvimento de transtornos celulares proliferativos do cólon pode incluir doença de Crohn e colite ulcerativa. Um transtorno celular proliferativo do cólon pode estar associado com uma mutação em um gene selecionado a partir do grupo que consiste de p53, ras, FAP e DCC. Um indivíduo pode ter um risco elevado de desenvolvimento de um transtorno celular proliferativo do cólon, devido à presença de uma mutação em um gene selecionado a partir do grupo que consiste de p53, ras, FAP e DCC.
[0516]Um “transtorno celular proliferativo do pâncreas” é um transtorno celular proliferativo que envolve células do pâncreas. Transtornos celulares proliferativos do pâncreas podem incluir todas as formas de transtornos celulares proliferativos que afetam células pancreáticas. Transtornos celulares proliferativos do pâncreas podem incluir câncer de pâncreas, uma condição de pré-cancer ou pré-cancerosa do pâncreas, hiperplasia do pâncreas, e displasia do pâncreas, crescimentos benignos ou lesões do pâncreas, e crescimentos malignos ou lesões do pâncreas, e lesões metastáticas em tecido e órgãos no corpo, exceto no pâncreas. Câncer pancreático inclui todas as formas de câncer do pâncreas. Câncer pancreático pode incluir adenocarcinoma ductal, carcinoma adenoescamoso, carcinoma de células gigantes pleomórficas, adenocarcinoma mucinoso, carcinoma de células gigantes do tipo osteoclasto, cistoadenocarcinoma mucinoso, carcinoma acinar, carcinoma de células grandes não classificado, carcinoma de células pequenas, pancreatoblastoma, neoplasma papilar, cistadenoma mucinoso, neoplasma cístico papilar, e cistadenoma seroso. Câncer pancreático também pode incluir neoplasmas pancreáticos tendo heterogeneidade histológica e ultraestrutural (por exemplo, tipos celulares mistos).
[0517]Um “transtorno celular proliferativo da próstata” é um transtorno celular proliferativo que envolve células da próstata. Transtornos celulares proliferativos da próstata podem incluir todas as formas de transtornos celulares proliferativos que afetam células da próstata. Transtornos celulares proliferativos da próstata podem incluir câncer de próstata, uma condição de pré-cancer ou pré-cancerosa da próstata, crescimentos benignos ou lesões da próstata, e crescimentos malignos ou lesões da próstata, e lesões metastáticas no tecido e órgãos no corpo, exceto na próstata. Transtornos celulares proliferativos da próstata podem incluir hiperplasia, metaplasia e displasia da próstata.
[0518]Um “transtorno celular proliferativo da pele” é um transtorno celular proliferativo que envolve células da pele. Transtornos celulares proliferativos da pele podem incluir todas as formas de transtornos celulares proliferativos que afetam as células da pele. Transtornos celulares proliferativos da pele podem incluir uma condição de pré-cancer ou pré-cancerosa da pele, crescimentos benignos ou lesões da pele, melanoma, melanoma maligno e outros crescimentos malignos ou lesões da pele, e lesões metastáticas no tecido e órgãos no corpo, exceto na pele. Transtornos celulares proliferativos da pele podem incluir hiperplasia, metaplasia e displasia da pele.
[0519]Um “transtorno celular proliferativo do ovário” é um transtorno celular proliferativo que envolve células do ovário. Transtornos celulares proliferativos do ovário podem incluir todas as formas de transtornos celulares proliferativos que afetam células do ovário. Transtornos celulares proliferativos do ovário podem incluir uma condição de pré-cancer ou pré-cancerosa do ovário, crescimentos benignos ou lesões do ovário, câncer ovariano, crescimentos malignos ou lesões do ovário, e lesões metastáticas no tecido e órgãos no corpo, exceto no ovário. Transtornos celulares proliferativos da pele podem incluir hiperplasia, metaplasia, e displasia de células do ovário.
[0520]Um “transtorno celular proliferativo da mama” é um transtorno celular proliferativo que envolve células da mama. Transtornos celulares proliferativos da mama podem incluir todas as formas de transtornos celulares proliferativos que afetam células da mama. Transtornos celulares proliferativos da mama podem incluir câncer de mama, uma condição de pré-cancer ou pré-cancerosa da mama, crescimentos benignos ou lesões da mama, e crescimentos malignos ou lesões da mama, e lesões metastáticas no tecido e órgãos no corpo, exceto na mama. Transtornos celulares proliferativos da mama podem incluir hiperplasia, metaplasia, e displasia da mama.
[0521]Um transtorno celular proliferativo da mama pode ser uma condição pré- cancerosa da mama. Composições da presente invenção podem ser usadas para tratar uma condição pré-cancerosa da mama. Uma condição pré-cancerosa da mama pode incluir hiperplasia da mama atípica, carcinoma ductal in situ (DCIS), intracarcinoma ductal, carcinoma lobular in situ (LCIS), neoplasia lobular, e crescimento ou lesão estágio 0 ou grau 0 da mama (por exemplo, câncer de mama estágio 0 ou grau 0, ou carcinoma in situ). Uma condição pré-cancerosa da mama pode ser graduada, de acordo com o esquema de classificação TNM, conforme aceito pelo American Joint Committee on Cancer (AJCC), onde o tumor primário (T) foi avaliado como um estágio de T0 ou Tis; e onde os linfonodos regionais (N) foram avaliados como um estágio de N0; e onde a metástase distante (M) foi avaliada um estágio de M0.
[0522]O transtorno celular proliferativo da mama pode ser câncer de mama. Em um aspecto, as composições da presente invenção podem ser usadas para tratar câncer de mama, ou usadas para identificar candidatos adequados para tais propósitos. Câncer de mama pode incluir todas as formas de câncer da mama. Câncer de mama pode incluir cânceres de mama epiteliais primários. Câncer de mama pode incluir cânceres em que a mama está envolvida por outros tumores, tais como linfoma, sarcoma ou melanoma. Câncer de mama pode incluir carcinoma da mama, carcinoma ductal da mama, carcinoma lobular da mama, carcinoma não diferenciado da mama, cistossarcoma filoide da mama, angiossarcoma da mama, e linfoma primário da mama. Câncer de mama pode incluir câncer de mama Estágio I, II, IIIA, IIIB, IIIC e IV. Carcinoma ductal da mama pode incluir carcinoma invasivo, carcinoma invasivo in situ com componente intraductal predominante, câncer de mama inflamatório, e um carcinoma ductal da mama com um tipo histológico selecionado a partir do grupo que consiste de pústula, mucinoso (coloide), medular, medular com infiltrado linfocítico, papilar, fibroso, e tubular. Carcinoma lobular da mama pode incluir carcinoma invasivo lobular com componente predominante in situ, carcinoma invasivo lobular, e carcinoma lobular infiltrante. Câncer de mama pode incluir doença de Paget, doença de Paget com carcinoma intraductal, e doença de Paget com carcinoma invasivo ductal. Câncer de mama pode incluir neoplasmas da mama tendo heterogeneidade histológica e ultraestrutural (por exemplo, tipos celulares mistos).
[0523]Um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo, ou solvato do mesmo, pode ser usado para tratar câncer de mama, ou usado para identificar candidatos adequados para tais propósitos. Um câncer de mama que deve ser tratado pode incluir câncer de mama familiar. Um câncer de mama que deve ser tratado pode incluir câncer de mama esporádico. Um câncer de mama que deve ser tratado pode surgir em um paciente macho. Um câncer de mama que deve ser tratado pode surgir em uma paciente fêmea. Um câncer de mama que deve ser tratado pode surgir em uma paciente fêmea na pré-menopausa ou uma paciente fêmea na pós-menopausa. Um câncer de mama que deve ser tratado pode surgir em um paciente que apresenta ou é mais velho do que 30 anos de idade, ou um paciente mais novo do que 30 anos de idade. Um câncer de mama que deve ser tratado surgiu em um paciente que apresenta ou é mais velho do que 50 anos de idade, ou um paciente mais novo do que 50 anos de idade. Um câncer de mama que deve ser tratado pode surgir em um paciente que apresenta ou é mais velho do que 70 anos de idade, ou um paciente mais novo do que 70 anos de idade.
[0524]Um câncer de mama que deve ser tratado pode ser classificado para identificar uma mutação familiar ou espontânea em BRCA1, BRCA2, ou p53. Um câncer de mama que deve ser tratado pode ser classificado como tendo amplificação do gene um HER2/neu, conforme superexpressa HER2/neu, ou tendo um nível baixo, intermediário ou alto de expressão de HER2/neu. Um câncer de mama que deve ser tratado pode ser classificado para um marcador selecionado a partir do grupo que consiste de receptor de estrogênio (ER), receptor de progesterona (PR), receptor de fator de crescimento epidérmico humano-2, Ki-67, CA 15-3, CA 27-29, e c-Met. Um câncer de mama que deve ser tratado pode ser classificado como ER-desconhecido, ER-rico ou ER-deficiente. Um câncer de mama que deve ser tratado pode ser classificado como ER-negativo ou ER-positivo. A tipificação de ER de um câncer de mama pode ser realizada por quaisquer meios reproduzíveis. A tipificação de ER de um câncer de mama pode ser realizada, conforme apresentado em Onkologie 27: 175 - 179 (2004). Um câncer de mama que deve ser tratado pode ser classificado como PR-desconhecido, PR-rico ou PR-deficiente. Um câncer de mama que deve ser tratado pode ser classificado como PR-negativo ou PR-positivo. Um câncer de mama que deve ser tratado pode ser classificado como receptor positivo ou receptor negativo. Um câncer de mama que deve ser tratado pode ser classificado como associado com níveis sanguíneos elevados de CA 15-3, ou CA 27-29, ou ambos.
[0525]Um câncer de mama que deve ser tratado pode incluir um tumor da mama localizado. Um câncer de mama que deve ser tratado pode incluir um tumor da mama que está associado com uma biópsia de linfonodo sentinela negativo (SLN). Um câncer de mama que deve ser tratado pode incluir um tumor da mama que está associado com uma biópsia de linfonodo sentinela positivo (SLN). Um câncer de mama que deve ser tratado pode incluir um tumor da mama que está associado com um ou mais linfonodos axilares positivos, onde os linfonodos axilares foram graduados por qualquer método aplicável. Um câncer de mama que deve ser tratado pode incluir um tumor da mama que foi classificado por apresentar estado nodal negativo (por exemplo, nodo-negativo) ou estado nodal positivo (por exemplo, nodo-positivo). Um câncer de mama que deve ser tratado pode incluir um tumor da mama que apresentou metástase para outras localizações no corpo. Um câncer de mama que deve ser tratado pode ser classificado por apresentar metástase a uma localização selecionada a partir do grupo que consiste de osso, pulmão, fígado, ou cérebro. Um câncer de mama que deve ser tratado pode ser classificado de acordo com uma característica selecionada a partir do grupo que consiste de metastática, localizada, regional, local- regional, localmente avançada, distante, multicêntrica, bilateral, ipsilateral, contralateral, recém diagnosticada, recorrente, e inoperável.
[0526]Um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, éster, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, pode ser usado para tratar ou prevenir um transtorno celular proliferativo da mama, ou para tratar ou prevenir câncer de mama, em um paciente tendo um risco aumentado de desenvolver câncer de mama em relação à população em geral, ou usado para identificar candidatos adequados para tais propósitos. Um paciente com um risco aumentado de desenvolver câncer de mama em relação à população em geral é uma paciente fêmea com um histórico familiar ou histórico pessoal de câncer de mama. Um paciente com um risco aumentado de desenvolver câncer de mama em relação à população em geral é uma paciente fêmea tendo uma linhagem germinativa ou mutação espontânea em BRCA1 ou BRCA2, ou ambos. Um paciente com um risco aumentado de desenvolver câncer de mama em relação à população em geral é uma paciente fêmea com um histórico familiar de câncer de mama e uma linhagem germinativa ou mutação espontânea em BRCA1 ou BRCA2, ou ambos. Um paciente com um risco aumentado de desenvolver câncer de mama em relação à população em geral é uma fêmea que apresenta mais do que 30 anos de idade, mais do que 40 anos de idade, mais do que 50 anos de idade, mais do que 60 anos de idade, mais do que 70 anos de idade, mais do que 80 anos de idade, ou mais do que 90 anos de idade. Um paciente com um risco aumentado de desenvolver câncer de mama em relação à população em geral é um paciente com hiperplasia da mama atípica, carcinoma ductal in situ (DCIS), carcinoma intraductal, carcinoma lobular in situ (LCIS), neoplasia lobular, ou um crescimento ou lesão da mama estágio 0 (por exemplo, câncer de mama estágio 0 ou grau 0, ou carcinoma in situ).
[0527]Um câncer de mama que deve ser tratado pode ser histologicamente classificado de acordo com o sistema de Scarff- Bloom-Ricoardson, em que um tumor da mama foi avaliado como um escore de contagem de mitose de 1,2, ou 3; um escore de pleiomorfismo nuclear de 1,2, ou 3; um escore de formação de túbulo de 1, 2, ou 3; e um escore de Scarff-Bloom-Ricoardson total entre 3 e 9. Um câncer de mama que deve ser tratado pode ser avaliado como um grau de tumor, de acordo com o International Consensus Panel on the Treatment of Breast Cancer selecionado a partir do grupo que consiste de grau 1, grau 1 a 2, grau 2, grau 2 a 3, ou grau 3.
[0528]Um câncer que deve ser tratado pode ser graduado, de acordo com o sistema de classificação TNM do American Joint Committee on Cancer (AJCC), onde o tumor (T) foi avaliado como um estágio de TX, T1, T1mic, T1a, T1b, T1c, T2, T3, T4, T4a, T4b, T4c, ou T4d; e onde os linfonodos regionais (N) foram avaliados como um estágio de NX, N0, N1, N2, N2a, N2b, N3, N3a, N3b, ou N3c; e onde a metástase distante (M) pode ser avaliada como um estágio de MX, M0, ou M1. Um câncer que deve ser tratado pode ser graduado de acordo com uma classificação do American Joint Committee on Cancer (AJCC) como Estágio I, Estágio IIA, Estágio IIB, Estágio IIIA, Estágio IIIB, Estágio IIIC, ou Estágio IV. Um câncer que deve ser tratado pode ser avaliado como um grau de acordo com uma classificação do AJCC como Grau GX (por exemplo, o grau não pode ser avaliado), Grau 1, Grau 2, Grau 3 ou Grau 4. Um câncer que deve ser tratado pode ser graduado de acordo com uma classificação patológica do AJCC (pN) de pNX, pN0, PN0 (I-), PNO (I+), PNO (mol-), PNO (mol+), PN1, PNl(mi), PN1a, PN1b, PN1c, pN2, pN2a, pN2b, pN3, pN3a, pN3b, ou pN3c.
[0529]Um câncer que deve ser tratado pode incluir um tumor que foi determinado apresentar menos do que ou igual a cerca de 2 centímetros em diâmetro. Um câncer que deve ser tratado pode incluir um tumor que foi determinado apresentar de cerca de 2 a cerca de 5 centímetros em diâmetro. Um câncer que deve ser tratado pode incluir um tumor que foi determinado apresentar mais do que ou igual a cerca de 3 centímetros em diâmetro. Um câncer que deve ser tratado pode incluir um tumor que foi determinado ser maior do que 5 centímetros em diâmetro. Um câncer que deve ser tratado pode ser classificado por aparência microscópica como bem diferenciado, moderadamente diferenciado, deficientemente diferenciado, ou não diferenciado. Um câncer que deve ser tratado pode ser classificado por aparência microscópica com respeito à contagem de mitose (por exemplo, quantidade de divisão celular) ou pleiomorfismo nuclear (por exemplo, mudança nas células). Um câncer que deve ser tratado pode ser classificado por aparência microscópica como estando associado com áreas de necrose (por exemplo, áreas de células de morte ou degeneração). Um câncer que deve ser tratado pode ser classificado por apresentar um cariótipo anormal, tendo um número anormal de cromossomos, ou apresentar um ou mais cromossomos que são anormais na aparência. Um câncer que deve ser tratado pode ser classificado por apresentar aneuploide, triploide, tetraploide, ou por apresentar uma ploidia alterada. Um câncer que deve ser tratado pode ser classificado por apresentar uma translocação cromossômica, ou uma deleção ou duplicação de um cromossomo total, ou uma região de deleção, duplicação ou amplificação de uma porção de um cromossomo.
[0530]Um câncer que deve ser tratado pode ser avaliado por citometria de DNA, citometria de fluxo, ou citometria de imagem. Um câncer que deve ser tratado pode ser classificado por apresentar 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % ou 90 % de células no estágio de síntese de divisão celular (por exemplo, na fase S de divisão celular). Um câncer que deve ser tratado pode ser classificado por apresentar uma baixa fração na fase S ou uma alta fração na fase S.
[0531]Conforme usado neste relatório, uma “célula normal” é uma célula que não pode ser classificado como parte de um “transtorno celular proliferativo”. Um célula normal é desprovida de crescimento não regulado ou anormal, ou ambos, que pode levar ao desenvolvimento de uma condição ou doença indesejada. Preferivelmente, uma célula normal possui mecanismos de controle de ponto de verificação de ciclo celular que funcionam normalmente.
[0532]Conforme usado neste relatório, “contatar uma célula” se refere a uma condição em que um composto ou outra composição de matéria está em contato direto com uma célula, ou está perto o suficiente para induzir um efeito biológico desejado em uma célula.
[0533]Conforme usado neste relatório, “composto candidato” se refere a um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, éster, pró- fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, que foi ou será testado em um ou mais ensaios biológicos in vitro ou in vivo, de modo a determinar se tal composto provavelmente induz uma resposta biológica ou médica desejada em uma célula, tecido, sistema, animal ou ser humano que está sendo estudado por um pesquisador ou clínico. Um composto candidato é um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, éster, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo. A resposta biológica ou médica pode ser o tratamento de câncer. A resposta biológica ou médica pode ser o tratamento ou prevenção de um transtorno celular proliferativo. A resposta ou efeito biológico também pode incluir uma mudança na proliferação ou crescimento celular que ocorre in vitro ou em um modelo animal, assim como outras mudanças biológicas que são observáveis in vitro. Os ensaios biológicos in vitro ou in vivo podem incluir, mas não são limitados a, ensaios de atividade enzimática, ensaios de troca de mobilidade eletroforética, ensaios de gene repórter, ensaios de viabilidade celular in vitro, e os ensaios descritos neste relatório.
[0534]Conforme usado neste relatório, “monoterapia” se refere à administração de um composto ativo ou terapêutico único a um paciente em necessidade do mesmo. Preferivelmente, a monoterapia envolverá a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto ativo. Por exemplo, a monoterapia de câncer com o composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró- fármaco, metabólito, análogo ou derivado do mesmo, a um paciente em necessidade de tratamento de câncer. A monoterapia pode ser contrastada com terapia de combinação, em que uma combinação de múltiplos compostos ativos é administrada, preferivelmente com cada componente da combinação presente em uma quantidade terapeuticamente eficaz. A monoterapia com um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, pode ser mais eficaz do que a terapia de combinação na indução de um efeito biológico desejado.
[0535]Conforme usado neste relatório, “tratamento” ou “tratar” descreve o gerenciamento e cuidado de um paciente para o propósito de combater uma doença, condição, ou transtorno e inclui a administração de um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, para aliviar os sintomas ou complicações de uma doença, condição ou transtorno, ou para eliminar a doença, condição ou transtorno. O termo “tratar” também pode incluir o tratamento de uma célula in vitro ou um modelo animal.
[0536]Um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, também pode ser usado para prevenir uma doença, condição ou transtorno relevante, ou usado para identificar candidatos adequados para tais propósitos. Conforme usado neste relatório, “prevenção” ou “prevenir” descreve reduzir ou eliminar o início dos sintomas ou complicações de tal doença, condição ou transtorno.
[0537]Conforme usado neste relatório, o termo “aliviar” descreve um processo pelo qual a severidade de um sinal ou sintoma de um transtorno é diminuída. Com importância, um sinal ou sintoma pode ser aliviado sem ser eliminado. A administração de composições farmacêuticas da invenção podem levar à eliminação de um sinal ou sintoma, entretanto, a eliminação não é exigida. Dosagens eficazes devem ser esperadas diminuir a severidade de um sinal ou sintoma. Por exemplo, um sinal ou sintoma de um transtorno, tal como câncer, que pode ocorrer em múltiplas localizações, é aliviado se a severidade do câncer for diminuída dentro de pelo menos uma entre múltiplas localizações.
[0538]Conforme usado neste relatório, o termo “severidade” descreve o potencial de o câncer se transformar de um estado pré-canceroso, ou benigno, em um estado maligno. Alternativamente, ou além disso, a severidade descreve um estágio de câncer, por exemplo, de acordo com o sistema TNM (aceito pela International Union Against Cancer (UICC) e pelo American Joint Committee on Cancer (AJCC)) ou por outros métodos reconhecidos na técnica. O estágio do câncer se refere à extensão ou severidade do câncer, com base em fatores, tais como a localização do tumor primário, tamanho do tumor, número de tumores, e envolvimento de linfonodos (propagação de câncer em linfonodos). Alternativamente, ou além disso, a severidade descreve o grau de tumor por métodos reconhecidos na técnica (veja, National Cancer Institute, www.cancer.gov). o grau do tumor é um sistema usado para classificar células de câncer em termos de quanto anormais elas parecem sob um microscópio e quanto rapidamente o tumor provavelmente cresce e se espalha. muitos fatores são considerados para determinar o grau do tumor, incluindo a estrutura e padrão de crescimento das células. Os fatores específicos usados para determinar o grau do tumor variam com cada tipo de câncer. A severidade também descreve um grau histológico, também chamado diferenciação, que se refere ao quanto as células de tumor se assemelham às células normais do mesmo tipo de tecido (veja, National Cancer Institute, www.cancer.gov). Além disso, a severidade descreve um grau nuclear, que se refere ao tamanho e forma do núcleo nas células de tumor e à porcentagem de células de tumor que são divididas (veja, National Cancer Institute, www.cancer.gov).
[0539]A severidade também pode descrever o grau ao qual um tumor tem secretado fatores de crescimento, degradada a matriz extracelular, se torna vascularizado, perde adesão aos tecidos justapostos ou sofre metástase. Além disso, a severidade pode descrever o número de localizações às quais um tumor primário sofreu metástase. Finalmente, a severidade pode incluir a dificuldade de tratar tumores de tipos e localizações variados. Por exemplo, tumores inoperáveis, aqueles cânceres que têm maior acesso a múltiplos sistemas do corpo (tumores hematológicos e imunológicos), e aqueles que são mais resistentes aos tratamentos tradicionais são considerados mais severos. Nestas situações, prolongar a expectativa de vida do paciente e/ou reduzir a dor, diminuir a proporção de células cancerosas ou restringir as células a um sistema, e melhorar o estágio do câncer/grau do tumor/grau histológico/grau nuclear são considerados aliviar um sinal ou sintoma do câncer.
[0540]Conforme usado neste relatório, o termo “sintoma” é definido como uma indicação de doença, enfermidade, lesão, ou alguma coisa que não está correta no corpo. Os sintomas são percebidos ou notados pelo indivíduo que experiencia o sintoma, mas podem não ser facilmente notados por outros. Outros são definidos como não profissionais de saúde.
[0541]Conforme usado neste relatório, o termo “sinal” também é definido como uma indicação de que alguma coisa não está correta no corpo. Não obstante, os sinais são definidos como coisas que podem ser observadas por um médico, enfermeiro ou outro profissional da saúde.
[0542]Câncer é um grupo de doenças que podem causar quase todo sinal ou sintoma. Os sinais e sintomas dependerão de onde o câncer está, do tamanho do câncer, e de quanto ele afeta os órgãos ou estruturas vizinhos. Se um câncer se espalha (sofre metástase), então os sintomas podem aparecer em partes diferentes do corpo.
[0543]Conforme um câncer cresce, ele começa a empurrar os órgãos vizinhos, vasos sanguíneos e nervos. Esta pressão cria alguns dos sinais e sintomas de câncer. Se o câncer está em uma área crítica, tal como certas partes do cérebro, mesmo o menor tumor pode causar sintomas iniciais.
[0544]Algumas vezes, os cânceres iniciam em lugares onde ele não causa quaisquer sintomas até que o câncer se torne bastante grande. Cânceres de pâncreas, por exemplo, usualmente, não crescem tanto para que sejam sentidos na parte externa do corpo. Alguns cânceres pancreáticos não causam sintomas até que eles comecem a crescer em torno dos nervos vizinhos (isto causa uma dorsalgia). Outros crescem em torno do tubo bílico, que bloqueia o fluxo da bile e leva a um amarelamento da pele conhecido como icterícia. Quando um câncer pancreático causa estes sinais ou sintomas, ele usualmente atingiu um estágio avançado.
[0545]Um câncer também pode causar sintomas, tais como febre, fadiga ou perda de peso. Isto ocorre porque as células de câncer usam muito fornecimento de energia do corpo ou liberam substâncias que mudam o metabolismo do corpo. Ou o câncer pode fazer com que o sistema imune reaja em maneiras que produzam estes sintomas.
[0546]Algumas vezes, as células de câncer liberam substâncias na corrente sanguínea que causam sintomas não usualmente pensados resultar a partir de cânceres. Por exemplo, alguns cânceres do pâncreas podem liberar substâncias que causam coágulos de sangue que se desenvolvem nas veias das pernas. Alguns cânceres de pulmão promovem substâncias do tipo hormônio que afetam os níveis de cálcio no sangue, afetando nervos e músculos e causando fraqueza e vertigem.
[0547]Câncer apresenta vários sinais ou sintomas gerais que ocorrem quando uma variedade de subtipos de células de câncer está presente. A maioria das pessoas com câncer perderá peso em algum momento com sua doença. Uma perda de peso inexplicável (involuntário) de 10 libras ou mais pode ser o primeiro sinal de câncer, particularmente cânceres do pâncreas, estômago, esôfago ou pulmão.
[0548]Febre é muito comum com câncer, mas é mais frequentemente observada na doença avançada. Quase todos os pacientes com câncer terão febre em algum momento, especialmente se o câncer ou seu tratamento afeta o sistema imune e torna mais difícil para o corpo combater a infecção. Menos frequentemente, a febre pode ser um sinal de câncer precoce, tais como com leucemia ou linfoma.
[0549]A fadiga pode ser um sintoma importante, conforme o câncer progride. Pode acontecer anteriormente, no entanto, em cânceres, tais como com leucemia, ou se a câncer é causador de uma perda avançada de sangue, como em alguns cânceres de cólon ou de estômago.
[0550]A dor pode ser um sintoma precoce com alguns cânceres, tais como cânceres ósseos ou câncer testicular. Mas, na maioria das vezes, a dor é um sintoma de doença avançada.
[0551]Junto com cânceres da pele (veja próxima seção), alguns cânceres internos podem causar sinais na pele que podem ser observados. Estas mudanças incluem a aparência da pele mais escura (hiperpigmentação), amarela (icterícia), ou vermelha (eritema); coceira; ou crescimento excessivo do cabelo.
[0552]Alternativamente, ou além disso, subtipos de câncer apresentam sinais ou sintomas específicos. Mudanças nos hábito do intestino ou função da bexiga podem indicar câncer. Constipação a longo prazo, diarreia, ou uma mudança no tamanho das fezes pode ser um sinal de câncer de cólon. Dor com a urina, sangue na urina, ou uma mudança na função da bexiga (tal como urina mais frequente ou menos frequente) pode estar relacionado ao câncer de bexiga ou próstata.
[0553]Mudanças na condição ou aparência da pele de uma nova condição da pele podem indicar câncer. Cânceres de pele podem sangrar e ter aparência de ferida que não cicatriza. Uma ferida duradoura na boca pode ser um câncer oral, especialmente em pacientes que fumam, mastigam tabaco, ou, frequentemente, bebem álcool. Feridas no pênis ou vagina podem ser sinais de infecção ou um câncer precoce.
[0554]Hemorragia ou descarga incomum pode indicar câncer. Hemorragia incomum pode acontecer no câncer precoce ou avançado. Sangue na saliva (fleuma) pode ser um sinal de câncer de pulmão. Sangue nas fezes (ou fezes escuras ou pretas) pode ser um sinal de câncer de cólon ou reto. Câncer do colo do útero ou do endométrio (revestimento do útero) podem causar sangramento vaginal. Sangue na urina pode ser um sinal de câncer na bexiga ou renal. Uma descarga de sangue a partir do mamilo pode ser um sinal de câncer de mama.
[0555]Um espessamento ou caroço na mama ou em outras partes do corpo pode indicar a presença de um câncer. Muitos cânceres podem ser sentidos através da pele, a maioria na mama, testículo, linfonodos (glândulas), e os tecidos moles do corpo. Um caroço ou fornecimento pode ser um sinal de câncer precoce ou tardio. Qualquer caroço ou espessamento pode ser indicativo de câncer, especialmente se a formação for nova ou cultivada em tamanho.
[0556]Indigestão ou dificuldade para engolir pode indicar câncer. Embora estes sintomas comumente tenham outras causas, indigestão ou problemas de deglutição pode ser um sinal de câncer do esôfago, estômago ou faringe (garganta).
[0557]Mudanças recentes em uma verruga ou mancha podem ser indicativos de câncer. Qualquer verruga, mancha, ou sarda que muda em cor, tamanho, ou forma, ou perde suas bordas definidas indica o desenvolvimento potencial de câncer. Por exemplo, a lesão na pele pode ser um melanoma.
[0558]Uma tosse ou rouquidão persistente pode ser indicativo de câncer. Uma tosse que não passa pode ser um sinal de câncer de pulmão. A rouquidão pode ser um sinal de câncer da laringe (caixa de voz) ou tireoide.
[0559]Embora os sinais e sintomas listados acima sejam os mais comuns entre aqueles observados com câncer, existem muitos outros que são menos comuns e não são listados neste relatório.
[0560]O tratamento do câncer pode resultar em uma redução no tamanho de um tumor. Uma redução no tamanho de um tumor também podem ser referida como “regressão do tumor”. Preferivelmente, depois do tratamento, o tamanho do tumor seria reduzido em 5 % ou mais em relação a seu tamanho anterior ao tratamento; mais preferivelmente, o tamanho do tumor é reduzido em 10 % ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 20 % ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 30 % ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 40 % ou mais; ainda mais preferivelmente, reduzido em 50 % ou mais; e, mais preferivelmente, reduzido em mais do que 75 % ou mais. O tamanho de um tumor pode ser medido por quaisquer meios reproduzíveis de medição. O tamanho de um tumor pode ser medido como um diâmetro do tumor.
[0561]O tratamento do câncer pode resultar em uma redução no volume do tumor. Preferivelmente, depois do tratamento, o volume do tumor seria reduzido em 5 % ou mais em relação a seu tamanho anterior ao tratamento; mais preferivelmente, o volume do tumor é reduzido em 10 % ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 20 % ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 30 % ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 40 % ou mais; ainda mais preferivelmente, reduzido em 50 % ou mais; e, mais preferivelmente, reduzido em mais do que 75 % ou mais. O volume do tumor pode ser medido por quaisquer meios reproduzíveis de medição.
[0562]O tratamento do câncer pode resultar em uma diminuição no número de tumores. Preferivelmente, depois do tratamento, o número do tumor seria reduzido em 5 % ou mais em relação ao número anterior ao tratamento; mais preferivelmente, o número do tumor é reduzido em 10 % ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 20 % ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 30 % ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 40 % ou mais; ainda mais preferivelmente, reduzido em 50 % ou mais; e, mais preferivelmente, reduzido em mais do que 75 %. O número de tumores pode ser medido por quaisquer meios reproduzíveis de medição. O número de tumores pode ser medido por contagem de tumores visíveis ao olho nu ou em uma ampliação especificada. Preferivelmente, a ampliação especificada é de 2x, 3x, 4x, 5x, 10x, ou 50x.
[0563]O tratamento do câncer pode resultar em uma diminuição no número de lesões metastáticas em outros tecidos ou órgãos distantes do sítio de tumor primário. Preferivelmente, depois do tratamento, o número de lesões metastáticas seria reduzido em 5 % ou mais em relação ao número anterior ao tratamento; mais preferivelmente, o número de lesões metastáticas é reduzido em 10 % ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 20 % ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 30 % ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 40 % ou mais; ainda mais preferivelmente, reduzido em 50 % ou mais; e, mais preferivelmente, reduzido em mais do que 75 %. O número de lesões metastáticas pode ser medido por quaisquer meios reproduzíveis de medição. O número de lesões metastáticas pode ser medido por contagem de lesões metastáticas visíveis ao olho nu ou em uma ampliação especificada. Preferivelmente, a ampliação especificada é de 2x, 3x, 4x, 5x, 10x, ou 50x.
[0564]O tratamento do câncer pode resultar em um aumento no tempo de intervalo médio de uma população de pacientes tratados em comparação a uma população que recebe o portador sozinho. Preferivelmente, o tempo de sobrevivência médio seria aumentado em mais do que 30 dias; mais preferivelmente, em mais do que 60 dias; mais preferivelmente, em mais do que 90 dias; e, mais preferivelmente, em mais do que 120 dias. Um aumento no tempo de sobrevivência médio de uma população pode ser medido por quaisquer meios reproduzíveis. Um aumento no tempo de sobrevivência médio de uma população pode ser medido, por exemplo, através do cálculo para uma população da duração média de sobrevivência após a iniciação do tratamento com um composto ativo. Um aumento no tempo de sobrevivência médio de uma população também pode ser medido, por exemplo, através do cálculo para uma população da duração média de sobrevivência após a conclusão de uma primeira rodada do tratamento com um composto ativo.
[0565]O tratamento do câncer pode resultar em um aumento no tempo de intervalo médio de uma população de pacientes tratados em comparação a uma população de pacientes não tratados. Preferivelmente, o tempo de sobrevivência médio seria aumentado em mais do que 30 dias; mais preferivelmente, em mais do que 60 dias; mais preferivelmente, em mais do que 90 dias; e, mais preferivelmente, em mais do que 120 dias. Um aumento no tempo de sobrevivência médio de uma população pode ser medido por quaisquer meios reproduzíveis. Um aumento no tempo de sobrevivência médio de uma população pode ser medido, por exemplo, através do cálculo para uma população da duração média de sobrevivência após a iniciação do tratamento com um composto ativo. Um aumento no tempo de sobrevivência médio de uma população também pode ser medido, por exemplo, através do cálculo para uma população da duração média de sobrevivência após a conclusão de uma primeira rodada do tratamento com um composto ativo.
[0566]O tratamento do câncer pode resultar no aumento do tempo de sobrevivência médio de uma população de pacientes tratados em comparação a uma população que recebe monoterapia com um fármaco que não é um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, análogo ou derivado do mesmo. Preferivelmente, o tempo de sobrevivência médio seria aumentado em mais do que 30 dias; mais preferivelmente, em mais do que 60 dias; mais preferivelmente, em mais do que 90 dias: e, mais preferivelmente, em mais do que 120 dias. Um aumento no tempo de sobrevivência médio de uma população pode ser medido por quaisquer meios reproduzíveis. Um aumento no tempo de sobrevivência médio de uma população pode ser medido, por exemplo, através do cálculo para uma população da duração média de sobrevivência após a iniciação do tratamento com um composto ativo. Um aumento no tempo de sobrevivência médio de uma população também pode ser medido, por exemplo, através do cálculo para uma população da duração média de sobrevivência após a conclusão de uma primeira rodada do tratamento com um composto ativo.
[0567]O tratamento do câncer pode resultar em uma diminuição na taxa de mortalidade de uma população de pacientes tratados em comparação a uma população que recebe o portador sozinho. O tratamento do câncer pode resultar em uma diminuição na taxa de mortalidade de uma população de pacientes tratados em comparação a uma população não tratada. O tratamento do câncer pode resultar em uma diminuição na taxa de mortalidade de uma população de pacientes tratados em comparação a uma população que recebe monoterapia com um fármaco que não é um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró- fármaco, metabólito, análogo ou derivado do mesmo. Preferivelmente, a taxa de mortalidade seria diminuída em mais do que 2 %; mais preferivelmente, em mais do que 5 %; mais preferivelmente, em mais do que 10 %; e, mais preferivelmente, em mais do que 25 %. Uma diminuição na taxa de mortalidade de uma população de pacientes tratados pode ser medida por quaisquer meios reproduzíveis. Uma diminuição na taxa de mortalidade de uma população pode ser medida, por exemplo, através do cálculo para uma população do número médio de mortes relacionadas à doença por unidade de tempo após a iniciação do tratamento com um composto ativo. Uma diminuição na taxa de mortalidade de uma população também pode ser medida, por exemplo, através do cálculo para uma população do número médio de mortes relacionadas à doença por unidade de tempo após a conclusão de uma primeira rodada de tratamento com um composto ativo.
[0568]O tratamento do câncer pode resultar em uma diminuição na taxa de crescimento do tumor. Preferivelmente, depois do tratamento, a taxa de crescimento do tumor seria reduzida em pelo menos 5 % em relação ao número anterior ao tratamento; mais preferivelmente, a taxa de crescimento do tumor seria reduzida em pelo menos 10 %; mais preferivelmente, reduzida em pelo menos 20 %; mais preferivelmente, reduzida em pelo menos 30 %; mais preferivelmente, reduzida em pelo menos 40 %; mais preferivelmente, reduzida em pelo menos 50 %; ainda mais preferivelmente, reduzida em pelo menos 50 %; e, mais preferivelmente, reduzida em pelo menos 75 %. A taxa de crescimento do tumor pode ser medida por quaisquer meios reproduzíveis de medição. A taxa de crescimento do tumor pode ser medida, de acordo com uma mudança no diâmetro do tumor por unidade de tempo.
[0569]O tratamento do câncer pode resultar em uma diminuição no novo crescimento do tumor. Preferivelmente, depois do tratamento, o novo crescimento do tumor seria menor do que 5 %; mais preferivelmente, o novo crescimento do tumor seria menor do que 10 %; mais preferivelmente, menor do que 20 %; mais preferivelmente, menor do que 30 %; mais preferivelmente, menor do que 40 %; mais preferivelmente, menor do que 50 %; ainda mais preferivelmente, menor do que 50 %; e, mais preferivelmente, menor do que 75 %. O novo crescimento do tumor pode ser medido por quaisquer meios reproduzíveis de medição. O novo crescimento do tumor é medido, por exemplo, através da medição de um aumento no diâmetro de um tumor depois de uma redução do tumor anterior após o tratamento. Uma diminuição no novo crescimento do tumor é indicada pela não ocorrência de tumores depois que o tratamento foi interrompido.
[0570]Tratamento ou prevenção de um transtorno celular proliferativo pode resultar em uma redução na taxa de proliferação celular. Preferivelmente, depois do tratamento, a taxa de proliferação celular seria reduzida em pelo menos 5 %; mais preferivelmente, em pelo menos 10 %; mais preferivelmente, em pelo menos 20 %; mais preferivelmente, em pelo menos 30 %; mais preferivelmente, em pelo menos 40 %; mais preferivelmente, em pelo menos 50 %; ainda mais preferivelmente, em pelo menos 50 %; e, mais preferivelmente, em pelo menos 75 %. A taxa de proliferação celular pode ser medida por quaisquer meios reproduzíveis de medição. A taxa de proliferação celular é medida, por exemplo, através da medição do número de células que se dividem em uma amostra de tecido por unidade de tempo.
[0571]Tratamento ou prevenção de um transtorno celular proliferativo pode resultar em uma redução na proporção de células proliferativas. Preferivelmente, depois do tratamento, a proporção de células proliferativas seria reduzida em pelo menos 5 %; mais preferivelmente, em pelo menos 10 %; mais preferivelmente, em pelo menos 20 %; mais preferivelmente, em pelo menos 30 %; mais preferivelmente, em pelo menos 40 %; mais preferivelmente, em pelo menos 50 %; ainda mais preferivelmente, em pelo menos 50 %; e, mais preferivelmente, em pelo menos 75 %. A proporção de células proliferativas pode ser medida por quaisquer meios reproduzíveis de medição. Preferivelmente, a proporção de células proliferativas é medida, por exemplo, através da quantificação do número de células que se dividem em relação ao número de células que não se dividem em uma amostra de tecido. A proporção de células proliferativas pode ser equivalente ao índice mitótico.
[0572]Tratamento ou prevenção de um transtorno celular proliferativo pode resultar em uma diminuição no tamanho de uma área ou zona de proliferação celular. Preferivelmente, depois do tratamento, o tamanho de uma área ou zona de proliferação celular seria reduzido em pelo menos 5 % em relação a seu tamanho anterior ao tratamento; mais preferivelmente, reduzido em pelo menos 10 %; mais preferivelmente, reduzido em pelo menos 20 %; mais preferivelmente, reduzido em pelo menos 30 %: mais preferivelmente, reduzido em pelo menos 40 %; mais preferivelmente, reduzido em pelo menos 50 %; ainda mais preferivelmente, reduzido em pelo menos 50 %; e, mais preferivelmente, reduzido em pelo menos 75 %. O tamanho de uma área ou zona de proliferação celular pode ser medido por quaisquer meios reproduzíveis de medição. O tamanho de uma área ou zona de proliferação celular pode ser medido como um diâmetro ou largura de uma área ou zona de proliferação celular.
[0573]O tratamento ou prevenção de um transtorno celular proliferativo pode resultar em uma diminuição no número ou proporção de células tendo uma aparência ou morfologia anormal. Preferivelmente, depois do tratamento, o número de células tendo uma morfologia anormal seria reduzido em pelo menos 5 % em relação a seu tamanho anterior ao tratamento; mais preferivelmente, reduzido em pelo menos 10 %; mais preferivelmente, reduzido em pelo menos 20 %; mais preferivelmente, reduzido em pelo menos 30 %; mais preferivelmente, reduzido em pelo menos 40 %; mais preferivelmente, reduzido em pelo menos 50 %; ainda mais preferivelmente, reduzido em pelo menos 50 %; e, mais preferivelmente, reduzido em pelo menos 75 %. Uma aparência ou morfologia celular anormal pode ser medida por quaisquer meios reproduzíveis de medição. Uma morfologia celular anormal pode ser medido por microscópio, por exemplo, usando um microscópio de cultura de tecido invertido. Uma morfologia celular anormal pode tomar a forma de pleiomorfismo nuclear.
[0574]Conforme usado neste relatório, o termo “seletivamente” significa tendência a ocorrer em uma frequência maior em uma população em relação a uma outra população. As populações comparadas podem ser populações celulares. Um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, pode atuar seletivamente em um câncer ou célula pré-cancerosa, mas não em uma célula normal. Um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, pode atuar seletivamente para modular um alvo molecular (por exemplo, uma proteína metiltransferase alvo), mas não modula significantemente um outro alvo molecular (por exemplo, uma proteína metiltransferase não alvo). A invenção também fornece um método para inibir seletivamente a atividade de uma enzima, tal como uma proteína metiltransferase. Preferivelmente, um evento ocorre seletivamente na população A em relação à população B se ele ocorre mais do que duas vezes mais frequentemente na população A em comparação à população B. Um evento ocorre seletivamente se ele ocorre mais do que cinco vezes mais frequentemente na população A. Um evento ocorre seletivamente se ele ocorre mais do que dez vezes mais frequentemente na população A; mais preferivelmente, mais do que cinquenta vezes; ainda mais preferivelmente, mais do que 100 vezes; e, mais preferivelmente, mais do que 1000 vezes mais frequentemente na população A em comparação à população B. Por exemplo, a morte celular ocorre seletivamente nas células de câncer se ela ocorre mais do que duas vezes, conforme frequentemente nas células de câncer em comparação às células normais.
[0575]Um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, pode modular a atividade de um alvo molecular (por exemplo, uma proteína metiltransferase alvo). Modular se refere a estimular ou inibir uma atividade de um alvo molecular. Preferivelmente, um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, modula a atividade de um alvo molecular se ele estimula ou inibe a atividade do alvo molecular em pelo menos 2 vezes em relação à atividade do alvo molecular sob as mesmas condições, mas carecendo apenas da presença do dito composto. Mais preferivelmente, um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, modula a atividade de um alvo molecular se ele estimula ou inibe a atividade do alvo molecular em pelo menos 5 vezes, pelo menos 10 vezes, pelo menos 20 vezes, pelo menos 50 vezes, pelo menos 100 vezes em relação à atividade do alvo molecular sob as mesmas condições, mas carecendo apenas da presença do dito composto. A atividade de um alvo molecular pode ser medida por quaisquer meios reproduzíveis. A atividade de um alvo molecular pode ser medida in vitro ou in vivo. Por exemplo, a atividade de um alvo molecular pode ser medida in vitro por um ensaio de atividade enzimática ou um ensaio de ligação de DNA, ou a atividade de um alvo molecular pode ser medida in vivo através da avaliação para a expressão de um gene repórter.
[0576]Um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, não modula significantemente a atividade de um alvo molecular se a adição do composto não estimula ou inibe a atividade do alvo molecular em mais do que 10 % em relação à atividade do alvo molecular sob as mesmas condições, mas carecendo apenas da presença do dito composto.
[0577]Conforme usado neste relatório, o termo “isozima seletiva” significa inibição ou estímulo preferencial de uma primeira isoforma de uma enzima em comparação a uma segunda isoforma de uma enzima (por exemplo, inibição ou estímulo preferencial de uma proteína metiltransferase isozima alfa em comparação a um proteína metiltransferase isozima beta). Preferivelmente, um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, demonstra um mínimo de um diferencial de quatro vezes, preferivelmente um diferencial de dez vezes, mais preferivelmente, um diferencial de cinquenta vezes, na dosagem exigida para obter um efeito biológico. Preferivelmente, um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, demonstra este diferencial através da faixa de inibição, e o diferencial é exemplificado na IC50, isto é, uma inibição de 50 %, para um alvo molecular de interesse.
[0578]A administração de um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, a uma célula ou um paciente em necessidade do mesmo pode resultar na modulação (isto é, estímulo ou inibição) de uma atividade de uma proteína metiltransferase de interesse.
[0579]A presente invenção fornece métodos para avaliar a atividade biológica de um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró- fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo ou métodos para identificar um composto de teste como um inibidor de um mutante Y641 de EZH2. Em uma modalidade o método inclui a combinação de um mutante Y641 isolado de EZH2 com um substrato de histona, um doador de grupo metila (tal como S’-adenosilmetionina (SAM)), e um composto de teste, em que o substrato de histona compreende uma forma de H3-K27 selecionada a partir do grupo que consiste de H3-K27 não metilada, H3-K27 monometilada, H3-K27 dimetilada, e qualquer combinação das mesmas; e a realização de um ensaio para detectar a metilação de H3-K27 no substrato de histona, desse modo, identificando o composto de teste como um inibidor do mutante Y641 de EZH2 quando a metilação de H3-K27 na presença do composto de teste é menor do que a metilação de H3-K27 na ausência do composto de teste. O ensaio para detectar a metilação de H3-K27 pode ser selecionado para medir a taxa de metilação, a extensão da metilação, ou a taxa e extensão da metilação.
[0580]O mutante Y641 de EZH2 é isolado como um complexo PRC2 ou equivalente funcional do mesmo. Conforme usado neste relatório, o termo “isolado” significa substancialmente separado de outros componentes com os quais o complexo pode ser encontrado na natureza. Um composto pode ser isolado sem necessariamente ser purificado. Em uma modalidade, o mutante de EZH2 é isolado como um complexo de um mutante Y641 de EZH2 junto com EED e SUZ12. Em uma outra modalidade, o mutante de EZH2 é isolado como um complexo de um mutante Y641 de EZH2 junto com EED, SUZ12 e RbAp48. Sob condições apropriadas, um complexo PRC2 ou equivalente funcional do mesmo exibe atividade de histona metiltransferase para H3-K27. Em uma modalidade, o complexo é composto de polipeptídeos de componente recombinantemente expressado, por exemplo, EZ112, EED, SUZ12, com ou sem RbAp48.
[0581]O mutante Y641 isolado de EZH2 é combinado com um substrato de histona. Um substrato de histona inclui qualquer fonte adequada de polipeptídeos de histona ou fragmentos do mesmo que podem servir como substrato para EZH2. Em uma modalidade, o substrato de histona inclui histonas isoladas a partir de um paciente. As histonas podem ser isoladas de células de um paciente usando qualquer método adequado; tais métodos são bem conhecidos a pessoas habilitadas na técnica e não precisam ser especificados neste relatório. Veja, por exemplo, Fang et al. (2004) Methods Enzymol 377:213 - 26. De acordo com os Exemplos abaixo, em uma modalidade, o substrato de histona é fornecido como nucleossomas. De acordo com os Exemplos abaixo, em uma modalidade, o substrato de histona é fornecido como nucleossomas de eritrócitos aviários (galinha).
[0582]O substrato de histona fornecido pode incluir uma mistura de estados da modificação de histona, incluindo vários estados da metilação de H3-K27, conforme julgado por Western blotting com anticorpos específicos do estado de metilação de H3-K27. Em uma modalidade, o substrato de histona pode ser fornecido como histona H3 de comprimento total purificada. Tal histona H3 de comprimento total purificada pode ser fornecida como uma preparação homogênea em respeito de estados da metilação de H3-K27, ou como uma mistura de vários estados da metilação de H3- K27. Preparações homogêneas de histona H3 isolada em respeito de estados da metilação de H3-K27 podem ser preparadas, em parte, através da passagem em uma coluna de imunoafinidade carregada com anticorpos específicos do estado de metilação de H3-K27 adequados ou através de imunoprecipitação usando pérolas magnéticas revestidas com anticorpos específicos do estado de metilação de H3-K27 adequados. Alternativamente ou além disso, o estado de metilação de H3-K27 pode ser caracterizado como parte da realização do ensaio. Por exemplo, o substrato de histona do material de partida pode ser caracterizado como contendo 50 por cento de H3-K27 não metilada, 40 por cento de H3-K27 monometilada, 10 por cento de H3-K27 dimetilada, e 0 por cento de H3-K27 trimetilada.
[0583]Em uma modalidade, o substrato de histona inclui uma biblioteca de peptídeos ou um peptídeo adequado compreendendo uma ou mais sequências de aminoácidos relacionadas à histona H3, incluindo, em particular, uma sequência que abrange H3-K27. Por exemplo, em uma modalidade, o substrato de histona é um fragmento de peptídeo que corresponde aos resíduos de aminoácidos 21 a 44 da histona H3. A biblioteca de peptídeos ou peptídeo pode ser preparada por síntese de peptídeos, de acordo com técnicas bem conhecidas no ramo, e opcionalmente modificada, de modo a incorporar qualquer grau desejado de metilação de lisina correspondente à H3-K27. Conforme descrito nos Exemplos abaixo, tais peptídeos também podem ser modificados para incorporar uma marcação, tal como biotina, útil na realização de ensaios a jusante. Em uma modalidade, a marcação é anexada ao terminal amino (N) do(s) peptídeo(s). Em uma modalidade, a marcação é anexada ao terminal carbóxi (C) do(s) peptídeo(s).
[0584]A detecção da metilação de H3-K27 pode ser realizada usando qualquer método adequado. Em uma modalidade, a fonte de grupos metila doadores inclui grupos metila que são marcados com uma marcação detectável. A marcação detectável, em uma modalidade, é uma marcação isotópica, por exemplo, trítio. Outros tipos de marcações podem incluir, por exemplo, marcações fluorescentes.
[0585]A detecção da formação de H3-K27 trimetilada pode ser realizada usando qualquer método adequado. Por exemplo, a detecção da formação de H3-K27 trimetilada pode ser realizada usando um ensaio para detectar a incorporação de grupos metila marcados, tais como aqueles descritos acima, opcionalmente combinado com um método cromatográfico ou outro método para separar produtos marcados por tamanho, por exemplo, eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE), eletroforese capilar (CE), ou cromatografia líquida de alta pressão (HPLC). Alternativamente ou além disso, a detecção da formação de H3-K27 trimetilada pode ser realizada usando anticorpos que são específicos para H3-K27 trimetilada.
[0586]A detecção da conversão de H3-K27 monometilada em H3-K27 dimetilada pode ser realizada usando qualquer método adequado. Em uma modalidade, a conversão é medida usando anticorpos específicos para H3-K27 monometilada e H3-K27 dimetilada. Por exemplo, quantidades ou concentrações de partida de H3-K27 monometilada e H3-K27 dimetilada podem ser determinadas usando anticorpos específicos apropriados para H3-K27 monometilada e H3-K27 dimetilada. Após a combinação da enzima, substrato, doador de grupo metila, e composto de teste, quantidades ou concentrações resultantes de H3-K27 monometilada e H3-K27 dimetilada depois podem ser determinadas usando anticorpos específicos apropriados para H3-K27 monometilada e H3-K27 dimetilada. As quantidades ou concentrações iniciais e resultantes de H3-K27 monometilada e H3-K27 dimetilada depois podem ser comparadas. Alternativamente ou além disso, as quantidades ou concentrações iniciais e resultantes de H3-K27 monometilada e H3-K27 dimetilada depois podem ser comparadas a quantidades correspondentes de concentrações a partir de um controle negativo. Uma reação do controle negativo, em que nenhum agente de teste é incluído no ensaio, pode ser conduzida em paralelo ou como um controle histórico. Os resultados de tal reação de controle podem ser opcionalmente subtraídos a partir dos resultados correspondentes da reação experimental antes ou fazendo a comparação mencionada acima.
[0587]Pelo fato de que a forma dimetilada de H3-K27 pode ser ainda metilada no mesmo ensaio, uma redução na quantidade ou concentração de H3-K27 monometilada pode não parecer corresponder diretamente a um aumento na H3-K27 dimetilada. Neste exemplo, pode ser presumido, entretanto, que uma redução na quantidade ou concentração de H3-K27 monometilada é, por si só, refletiva da conversão de H3-K27 monometilada em H3-K27 dimetilada.
[0588]A detecção da conversão de H3-K27 dimetilada em H3-K27 trimetilada pode ser realizada usando qualquer método adequado. Em uma modalidade, a conversão é medida usando anticorpos específicos para H3-K27 dimetilada e H3-K27 trimetilada. Por exemplo, quantidades ou concentrações de partida de H3-K27 dimetilada e H3-K27 trimetilada podem ser determinadas usando anticorpos específicos apropriados para H3-K27 dimetilada e H3-K27 trimetilada. Após a combinação da enzima, substrato, e composto de teste, quantidades ou concentrações resultantes de H3-K27 dimetilada e H3-K27 trimetilada depois podem ser determinadas usando anticorpos específicos apropriados para H3-K27 dimetilada e H3-K27 trimetilada. As quantidades ou concentrações iniciais e resultantes de H3- K27 dimetilada e H3-K27 trimetilada depois podem ser comparadas. Alternativamente ou além disso, as quantidades ou concentrações iniciais e resultantes de H3-K27 dimetilada e H3-K27 trimetilada depois podem ser comparadas a quantidades correspondentes de concentrações a partir de um controle negativo. Uma reação do controle negativo, em que nenhum agente de teste é incluído no ensaio, pode ser conduzida em paralelo ou como um controle histórico. Os resultados de tal reação de controle podem ser opcionalmente subtraídos a partir dos resultados correspondentes da reação experimental antes ou fazendo a comparação mencionada acima.
[0589]Um agente de teste é identificado como um inibidor do mutante Y641 de EZH2 quando a metilação de H3-K27 com o composto de teste é menor do que a metilação de H3-K27 sem o composto de teste. Em uma modalidade, um agente de teste é identificado como um inibidor do mutante Y641 de EZH2 quando a formação de H3-K27 trimetilada na presença do composto de teste é menor do que formação de H3-K27 trimetilada na ausência do composto de teste.
[0590]A presente invenção também fornece um método para identificar um inibidor seletivo de um mutante Y641 de EZH2. Em uma modalidade, o método inclui a combinação de um mutante Y641 isolado de EZH2 com um substrato de histona, um doador de grupo metila (por exemplo, SAM), e um composto de teste, em que o substrato de histona compreende uma forma de 113-K27 selecionado a partir do grupo que consiste de H3-K27 monometilada, H3-K27 dimetilada, e uma combinação de H3- K27 monometilada e H3-K27 dimetilada, desse modo, formando uma mistura de teste; combinação de uma EZH2 do tipo selvagem isolada com um substrato de histona, um doador de grupo metila (por exemplo, SAM), e um composto de teste, em que o substrato de histona compreende uma forma de H3-K27 selecionada a partir do grupo que consiste de H3-K27 monometilada, H3-K27 dimetilada, e uma combinação de H3- K27 monometilada e H3-K27 dimetilada, desse modo, formando uma mistura controle; realização de um ensaio para detectar a trimetilação do substrato de histona na mistura de teste e na mistura controle; calcular a razão de (a) trimetilação com o mutante Y641 de EZH2 e o composto de teste (M+) para (b) trimetilação com o mutante Y641 de EZH2 sem o composto de teste (M-); calcular a razão de (c) trimetilação com EZH2 do tipo selvagem e o composto de teste (WT+) para (d) trimetilação com EZH2 do tipo selvagem sem o composto de teste (WT-); comparação da razão (a)/(b) com a razão (c)/(d); e identificação do composto de teste como um inibidor seletivo do mutante Y641 de EZH2 quando the razão (a)/(b) é menor do que a razão (c)/(d). Em uma modalidade, o método ainda inclui considerar um controle negativo sem composto de teste para a mistura de teste e a mistura controle.
[0591]Em alguns ensaios, reagentes imunológicos, por exemplo, anticorpos e antígenos, são utilizados. A fluorescência pode ser utilizada na medição da atividade enzimática em alguns ensaios. Conforme usado neste relatório, “fluorescência” se refere a um processo através do qual uma molécula emite um fóton como um resultado de absorver um fóton de entrada de maior energia pela mesma molécula. Métodos específicos para avaliar a atividade biológica dos compostos divulgado são descritos nos exemplos.
[0592]A administração de um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, a uma célula ou um paciente em necessidade do mesmo pode resultar na modulação (isto é, estímulo ou inibição) de uma atividade de um alvo intracelular (por exemplo, substrato). Vários alvos intracelulares podem ser modulados com os compostos da presente invenção, incluindo, mas não limitados à proteína metiltrasferase.
[0593]A ativação se refere à colocação de uma composição de matéria (por exemplo, proteína ou ácido nucleico) em um estado adequado para realizar uma função biológica desejada. Uma composição de matéria capaz de ser ativada também tem um estado não ativado. Uma composição de matéria ativada pode ter uma função biológica inibitória ou estimulante, ou ambas.
[0594]Elevação se refere a um aumento em uma atividade biológica desejada de uma composição de matéria (por exemplo, uma proteína ou um ácido nucleico). Elevação pode ocorrer através de um aumento na concentração de uma composição de matéria.
[0595]Conforme usado neste relatório, “uma via de ponto de verificação de ciclo celular” se refere a uma via bioquímica que está envolvida na modulação de um ponto de verificação de ciclo celular. Uma via de ponto de verificação de ciclo celular pode ter efeitos estimulantes ou inibitórios, ou ambos, em uma ou mais funções compreendendo um ponto de verificação de ciclo celular. Uma via de ponto de verificação de ciclo celular é compreendida de pelo menos duas composições de matéria, preferivelmente proteínas, as quais contribuem para a modulação de um ponto de verificação de ciclo celular. Uma via de ponto de verificação de ciclo celular pode ser ativada através de uma ativação de um ou mais membros da via de ponto de verificação de ciclo celular. Preferivelmente, uma via de ponto de verificação de ciclo celular é uma via de sinalização bioquímica.
[0596]Conforme usado neste relatório, “regulador de ponto de verificação de ciclo celular” se refere a uma composição de matéria que pode funcionar, pelo menos em parte, na modulação de um ponto de verificação de ciclo celular. Um regulador de ponto de verificação de ciclo celular pode ter efeitos estimulantes ou inibitórios, ou ambos, em uma ou mais funções compreendendo um ponto de verificação de ciclo celular. Um regulador de ponto de verificação de ciclo celular pode ser ou não uma proteína.
[0597]O tratamento de câncer ou de um transtorno celular proliferativo pode resultar em morte celular, e preferivelmente, morte celular resultaria em uma diminuição de pelo menos 10 % no número de células em uma população. Mais preferivelmente, morte celular significa uma diminuição de pelo menos 20 %; mais preferivelmente, uma diminuição de pelo menos 30 %; mais preferivelmente, uma diminuição de pelo menos 40 %; mais preferivelmente, uma diminuição de pelo menos 50 %; mais preferivelmente, uma diminuição de pelo menos 75 %. O número de células em uma população pode ser medido por quaisquer meios reproduzíveis. Várias células em uma população podem ser medidas por separador celular ativado por fluorescência (FACS), microscopia de imunofluorescência e microscópio de luz. Os métodos para medir a morte celular são mostrados em Li et al., Proc Natl Acad Sci USA. 100(5): 2674 - 8, 2003. Em um aspecto, a morte celular ocorre por apoptose.
[0598]Preferivelmente, uma quantidade eficaz de um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, não seria significantemente citotóxica a células normais. Uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto não é significantemente citotóxica a células normais se a administração do composto em uma quantidade terapeuticamente eficaz não induz a morte celular em mais do que 10 % de células normais. Uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto não afeta significantemente a viabilidade de células normais se a administração do composto em uma quantidade terapeuticamente eficaz não induz a morte celular em mais do que 10 % de células normais. Em um aspecto, a morte celular ocorre por apoptose.
[0599]Contatar uma célula com um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, pode induzir ou ativar a morte celular seletivamente nas células de câncer. A administração de um composto da presente invenção a um paciente em necessidade do mesmo, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, pode induzir ou ativar a morte celular seletivamente nas células de câncer. Contatar uma célula com um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, pode induzir a morte celular seletivamente em uma ou mais células afetadas por um transtorno celular proliferativo. Preferivelmente, a administração de um composto da presente invenção a um paciente em necessidade do mesmo, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, induziria a morte celular seletivamente em uma ou mais células afetadas por um transtorno celular proliferativo.
[0600]Um aspecto da presente invenção se refere a um método para tratar ou prevenir câncer (por exemplo, o curso do qual pode ser influenciado pela modulação da metilação da proteína mediada por EZH2) através da administração de um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, a um paciente em necessidade do mesmo, onde a administração do composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, resulta em um ou mais entre os seguintes: prevenção de proliferação de células de câncer através do acúmulo de células em uma ou mais fases do ciclo celular (por exemplo, G1, G1/S, G2/M), ou indução de senescência celular, ou promoção de diferenciação de células de tumor; promoção de morte celular nas células de câncer por intermédio de citotoxicidade, necrose ou apoptose, sem uma quantidade significante de morte celular em células normais, atividade antitumor em animais com um índice terapêutico de pelo menos 2. Conforme usado neste relatório, “índice terapêutico” é a dose máxima tolerada dividida pela dose eficaz. A presente invenção também se refere a um método usado para identificar candidatos adequados para tratar ou prevenir câncer.
[0601]Uma pessoa habilitada na técnica pode se referir a textos de referência geral para descrições detalhadas de técnicas conhecidas debatidas neste relatório ou técnicas equivalentes. Estes textos incluem Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley e Sons, Inc. (2005); Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual (3a edição), Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, Nova Iorque (2000); Coligan et al., Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, N.Y.; Enna et al., Current Protocols in Pharmacology, John Wiley & Sons, N.Y.; Fingl et al., The Pharmacological Basis of Therapeutics (1975), Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA, 18a edição (1990). Certamente, estes textos também podem ser referidos fazendo ou usando um aspecto da invenção.
[0602]Conforme usado neste relatório, “terapia de combinação” ou “coterapia” inclui a administração de um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, e pelo menos um segundo agente como parte de um regime de tratamento específico intencionado a fornecer o efeito benéfico a partir da coação destes agentes terapêuticos. O efeito benéfico da combinação pode incluir, mas não é limitado a, coação farmacocinética ou farmacodinâmica resultante da combinação de agentes terapêuticos. A administração destes agentes terapêuticos em combinação tipicamente é realizada durante um período de tempo definido (usualmente minutos, horas, dias ou semanas, dependendo da combinação selecionada). “Terapia de combinação” pode ser, mas geralmente não é, intencionada a abranger a administração de dois ou mais entre estes agentes terapêuticos como parte de regimes de monoterapia separados que incidentemente e arbitrariamente resultam nas combinações da presente invenção.
[0603]“Terapia de combinação” é intencionada a abranger a administração destes agentes terapêuticos em uma maneira sequencial, em que cada agente terapêutico é administrado em um tempo diferente, assim como a administração destes agentes terapêuticos, ou pelo menos dois entre os agentes terapêuticos, em uma maneira substancialmente simultânea. Administração substancialmente simultânea pode ser realizada, por exemplo, através da administração de uma única cápsula ao paciente tendo uma razão fixa de cada agente terapêutico ou em cápsulas múltiplas, únicas para cada um entre os agentes terapêuticos. Administração sequencial ou substancialmente simultânea de cada agente terapêutico pode ser efetuada por qualquer via apropriada incluindo, mas não limitado a, vias orais, vias intravenosas, vias intramusculares, e absorção direta através de tecidos da membrana mucosa. Os agentes terapêuticos podem ser administrados pela mesma via ou por vias diferentes. Por exemplo, um primeiro agente terapêutico da combinação selecionada pode ser administrado por injeção intravenosa, enquanto os outros agentes terapêuticos da combinação podem ser oralmente administrados. Alternativamente, por exemplo, todos os agentes terapêuticos podem ser oralmente administrados ou todos os agentes terapêuticos podem ser administrados por injeção intravenosa. A sequência em que os agentes terapêuticos são administrados não é estreitamente crítica.
[0604]“Terapia de combinação” também abrange a administração dos agentes terapêuticos, conforme descrito acima em combinação adicional com outros ingredientes biologicamente ativos e terapias sem fármaco (por exemplo, cirurgia ou tratamento por radiação). Onde a terapia de combinação compreende ainda um tratamento sem fármaco, o tratamento sem fármaco pode ser conduzido em qualquer tempo adequado contanto que um efeito benéfico a partir da coação da combinação dos agentes terapêuticos e do tratamento sem fármaco seja obtido. Por exemplo, em casos apropriados, o efeito benéfico ainda é obtido quando o tratamento sem fármaco é temporariamente removido da administração dos agentes terapêuticos, possivelmente durante dias ou ainda semanas.
[0605]Um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, análogo ou derivado do mesmo, pode ser administrado em combinação com um segundo agente quimioterápico. O segundo agente quimioterápico (também referido como um agente antineoplásico ou agente antiproliferativo) pode ser um agente alquilante; um antibiótico; um anti-metabólito; um agente desintoxicante; um interferon; um anticorpo policlonal ou monoclonal; um inibidor de EGFR; um inibidor de HER2; um inibidor de histona desacetilase; um hormônio; um inibidor mitótico; um inibidor de MTOR; um inibidor de multi-cinase; um inibidor de serina/treonina cinase; um inibidor de tirosina cinase; um inibidor de VEGF/VEGFR; um taxano ou derivado de taxano, um inibidor de aromatase, uma antraciclina, um fármaco alvejante de microtúbulos, um fármaco de veneno de topoisomerase, um inibidor de um alvo molecular ou enzima (por exemplo, uma cinase ou uma proteína metiltransferase), um fármaco análogo de citidina ou qualquer agente quimioterápico, antineoplásico ou antiproliferativo listado em www.cancer.org/docroot/cdg/cdg_0. asp.
[0606]Agentes alquilantes exemplares incluem, mas não são limitados a, ciclofosfamida (Cytoxan; Neosar); clorambucil (Leukeran); melfalano (Alkeran); carmustina (BiCNU); bussulfano (Busulfex); lomustina (CeeNU); dacarbazina (DTIC- Dome); oxaliplatina (Eloxatin); carmustina (Gliadel); ifosfamida (Ifex); mecloretamina (Mustargen); bussulfano (Myleran); carboplatina (Paraplatin); cisplatina (CDDP; Platinol); temozolomida (Temodar); tiotepa (Tioplex); bendamustina (Treanda); ou estreptozocina (Zanosar).
[0607]Antibióticos exemplares incluem, mas não são limitados a, doxorrubicina (Adriamycin); doxorrubicina lipossômica (Doxil); mitoxantrona (Novantrone); bleomicina (Blenoxane); daunorrubicina (Cerubidine); daunorrubicina lipossômica (DaunoXome); dactinomicina (Cosmegen); epirrubicina (Ellence); idarrubicina (Idamycin); plicamicina (Mithracin); mitomicina (Mutamycin); pentostatina (Nipent); ou valrubicina (Valstar).
[0608]Antimetabólitos exemplares incluem, mas não são limitados a, fluorouracil (Adrucil); capecitabina (Xeloda); hidroxiureia (Hydrea); mercaptopurina (Purinethol); pemetrexede (Alimta); fludarabina (Fludara); nelarabina (Arranon); cladribina (Cladribine Novaplus); clofarabina (Clolar); citarabina (Cytosar-U); decitabina (Dacogen); citarabina lipossômica (DepoCyt); hidroxiureia (Droxia); pralatrexato (Folotyn); floxuridina (FUDR); gencitabina (Gemzar); cladribina (Leustatin); fludarabina (Oforta); metotrexato (MTX; Rheumatrex); metotrexato (Trexall); tioguanina (Tabloid); TS-1 ou citarabina (Tarabine PFS).
[0609]Agentes desintoxicantes exemplares incluem, mas não são limitados a, amifostina (Ethyol) ou mesna (Mesnex).
[0610]Interferons exemplares incluem, mas não são limitados a, interferon alfa- 2b (Intron A) ou interferon alfa-2a (Roferon-A).
[0611]Anticorpos policlonais ou monoclonais exemplares incluem, mas não são limitados a, trastuzumabe (Herceptin); ofatumumabe (Arzerra); bevacizumabe (Avastin); rituximabe (Rituxan); cetuximabe (Erbitux); panitumumabe (Vectibix); tositumomabe/iodo131 tositumomabe (Bexxar); alemtuzumabe (Campath); ibritumomabe (Zevalin; In-111; Y-90 Zevalin); gemtuzumabe (Mylotarg); eculizumabe (Soliris) ordenosumabe.
[0612]Inibidores de EGFR exemplares incluem, mas não são limitados a, gefitinibe (Iressa); lapatinibe (Tykerb); cetuximabe (Erbitux); erlotinibe (Tarceva); panitumumabe (Vectibix); PKI-166; canertinibe (Cl-1033); matuzumabe (Emd7200) ou EKB-569.
[0613]Inibidores de HER2 exemplares incluem, mas não são limitados a, trastuzumabe (Herceptin); lapatinibe (Tykerb) ou AC-480.
[0614]Inibidores de histona desacetilase incluem, mas não são limitados a, vorinostate (Zolinza).
[0615]Hormônios exemplares incluem, mas não são limitados a, tamoxifeno (Soltamox; Nolvadex); raloxifeno (Evista); megestrol (Megace); leuprolida (Lupron; Lupron Depot; Eligard; Viadur); fulvestrante (Faslodex); letrozol (Femara); triptorelina (Trelstar LA; Trelstar Depot); exemestano (Aromasin); goserelina (Zoladex); bicalutamida (Casodex); anastrozol (Arimidax); fluoximesterona (Androxy; Halotestin); medroxiprogesterona (Provera; Depo- Provera); estramustina (Emcyt); flutamida (Eulexin); toremifeno (Fareston); degarelix (Firmagon); nilutamida (Nilandron); abarelix (Plenaxis); ou testolactona (Teslac).
[0616]Inibidores mitóticos exemplares incluem, mas não são limitados a, paclitaxel (Taxol; Onxol: Abraxane); docetaxel (Taxotere); vincristina (Oncovin; Vincasar PFS); vinblastina (Velban); etoposídeo (Toposar; Etopophos; VePesid); teniposídeo (Vumon); ixabepilona (Ixempra); nocodazol; epotilona; vinorelbina (Navelbine); camptotecina (CPT); irinotecano (Camptosar); topotecano (Hycamtin); ansacrina ou lamelarina D (LAM-D).
[0617]Inibidores de MTOR exemplares incluem, mas não são limitados a, everolimo (Afinitor) ou tensirolimo (Torisel); rapamune, ridaforolimo; ou AP23573.
[0618]Inibidores de multi-cinase exemplares incluem, mas não são limitados a, sorafenibe (Nexavar); sunitinibe (Sutent); BIBW 2992; E7080; Zd6474; PKC-412; motesanibe; ou AP24534.
[0619]Inibidores de serina/treonina cinase exemplares incluem, mas não são limitados a, ruboxistaurina; cloridreto de eril/easudil; flavopiridol; seliciclibe (CYC202; Roscovitrine); SNS- 032 (BMS-387032); Pkc412; briostatina; KAI-9803;SF1126; VX680; Azdl 152; Arry-142886 (AZD-6244); SCIO-469; GW681323; CC-401; CEP-1347 ou PD 332991.
[0620]Inibidores de tirosina cinase exemplares incluem, mas não são limitados a, erlotinibe (Tarceva); gefitinibe (Iressa); imatinibe (Gleevec); sorafenibe (Nexavar); sunitinibe (Sutent); trastuzumabe (Herceptin); bevacizumabe (Avastin); rituximabe (Rituxan); lapatinibe (Tykerb); cetuximabe (Erbitux); panitumumabe (Vectibix); everolimo (Afinitor); alemtuzumabe (Campath); gemtuzumabe (Mylotarg); tensirolimo (Torisel); pazopanibe (Votrient); dasatinibe (Sprycel); nilotinibe (Tasigna); vatalanibe (Ptk787; ZK222584); CEP-701; SU5614; MLN518; XL999; VX- 322; Azd0530; BMS- 354825; SKI-606 CP-690; AG-490; WHI-P154; WHI-P131; AC-220; ou AMG888.
[0621]Inibidores de VEGF/VEGFR exemplares incluem, mas não são limitados a, bevacizumabe (Avastin); sorafenibe (Nexavar); sunitinibe (Sutent); ranibizumabe; pegaptanibe; ou vandetinibe.
[0622]Fármacos alvejantes de microtúbulos exemplares incluem, mas não são limitados a, paclitaxel, docetaxel, vincristina, vinblastina, nocodazol, epotilonas e navelbina.
[0623]Fármacos de veneno de topoisomerase exemplares incluem, mas não são limitados a, teniposídeo, etoposídeo, adriamicina, camptotecina, daunorrubicina, dactinomicina, mitoxantrona, ansacrina, epirrubicina e idarrubicina.
[0624]Taxanos ou derivado de taxanos exemplares incluem, mas não são limitados a, paclitaxel e docetaxol.
[0625]Agentes quimioterápicos, antineoplásicos, antiproliferativos gerais exemplares incluem, mas não são limitados a, altretamina (Hexalen); isotretinoína (Accutane; Amnesteem; (Claravis; Sotret); tretinoína (Vesanoid); azacitidina (Vidaza); bortezomibe (Velcade) asparaginase (Elspar); levamisol (Ergamisol); mitotane (Lysodren); procarbazina (Matulane); pegaspargase (Oncaspar); denileucina diftitox (Ontak); porfímero (Photofrin); aldesleucina (Proleukin); lenalidomídeo (Revlimid); bexaroteno (Targretin); talidomídeo (Thalomid); tensirolimo (Torisel); trióxido de arsênio (Trisenox); verteporfina (Visudyne); mimosina (Leucenol); (tegafur 1 M - 5- cloro-2,4-di-hidroxipirimidina 0,4 M - oxonato de potássio 1 M) ou lovastatina.
[0626]Em um outro aspecto, o segundo agente quimioterápico pode ser uma citocina, tal como G-CSF (fator estimulante da colônia de granulócitos). Em um outro aspecto, um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, análogo ou derivado do mesmo, pode ser administrado em combinação com terapia de radiação. A terapia de radiação também pode ser administrada em combinação com um composto da presente invenção e um outro agente quimioterápico descrito neste relatório como parte de uma terapia de múltiplos agentes. Ainda em um outro aspecto, um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, análogo ou derivado do mesmo, pode ser administrado em combinação com combinações de quimioterapia padrão, tais como, mas não limitadas a, CMF (ciclofosfamida, metotrexato e 5- fluorouracil), CAF (ciclofosfamida, adriamicina e 5-fluorouracil), AC (adriamicina e ciclofosfamida), FEC (5-fluorouracila, epirrubicina, e ciclofosfamida), ACT ou ATC (adriamicina, ciclofosfamida, e paclitaxel), rituximabe, Xeloda (capecitabina), Cisplatina (CDDP), Carboplatina, TS-1 (tegafur, gimestate e otastate potássico em uma razão molar de 1:0,4:1), Camptotecina-11 (CPT-11, Irinotecano ou Camptosar™), CHOP (ciclofosfamida, hidroxidaunorrubicina, oncovin, e prednisona ou prednisolona), R-CHOP (rituximabe, ciclofosfamida, hidroxidaunorrubicina, oncovin, prednisona ou prednisolona), ou CMFP (ciclofosfamida, metotrexato, 5- fluorouracil e prednisona).
[0627]Em modalidades preferidas, um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco, metabólito, polimorfo ou solvato do mesmo, pode ser administrado com um inibidor de uma enzima, tal como uma cinase receptora ou não receptora. Cinases receptoras e não receptoras são, por exemplo, tirosina cinases ou serina/treonina cinases. Inibidores de cinase descritos neste relatório são moléculas pequenas, ácidos polinucleicos, polipeptídeos ou anticorpos.
[0628]Inibidores de cinase exemplares incluem, mas não são limitados a, Bevacizumabe (alvos VEGF), BIBW 2992 (alvos EGFR e Erb2), Cetuximabe/Erbitux (alvos Erbl), lmatinib/Gleevic (alvos Bcr-Abl), Trastuzumabe (alvos Erb2), Gefitinibe/Iressa (alvos EGFR), Ranibizumabe (alvos VEGF), Pegaptanibe (alvos VEGF), Erlotinibe/Tarceva (alvos Erbl), Nilotinibe (alvos Bcr-Abl), Lapatinibe (alvos Erbl e Erb2/Her2), GW-572016/ditosilato de lapatinibe (alvos HER2/Erb2), Panitumumabe/Vectibix (alvos EGFR), Vandetinibe (alvos RET/VEGFR), E7080 (múltiplos alvos, incluindo RET e VEGFR), Herceptina (alvos HER2/Erb2), PKI-166 (alvos EGFR), Canertinibe/CI-1033 (alvos EGFR), Sunitinibe/SU-11464/Sutent (alvos EGFR e FLT3), Matuzumabe/Emd7200 (alvos EGFR), EKB-569 (alvos EGFR), Zd6474 (alvos EGFR e VEGFR), PKC-412 (alvos VEGR e FLT3), Vatalanibe/Ptk787/ZK222584 (alvos VEGR), CEP-701 (alvos FLT3), SU5614 (alvos FLT3), MLN518 (alvos FLT3), XL999 (alvos FLT3), VX-322 (alvos FLT3), Azd0530 (alvos SRC), BMS-354825 (alvos SRC), SKI-606 (alvos SRC), CP-690 (alvos JAK), AG-490 (alvos JAK), WHI-P154 (alvos JAK), WHI-P131 (alvos JAK), sorafenibe/Nexavar (alvos RAF cinase, VEGFR-1, VEGFR-2, VEGFR-3, PDGFR-13, KIT, FLT-3, e RET), Dasatinibe/Sprycel (BCR/ABL e Src), AC-220 (alvos Flt3), AC-480 (alvos, todas as proteínas HER, “panHER”), Difosfato de motesanibe (alvos VEGF1 a 3, PDGFR, e c-kit), Denosumab (alvos RANKL, inibe SRC), AMG888 (alvos HER3), e AP24534 (múltiplos alvos, incluindo Flt3).
[0629]Inibidores de serina/treonina cinase exemplares incluem, mas não são limitados a, Rapamune (alvos mTOR/FRAPl), Deforolimo (alvos mTOR), Certican/Everolimo (alvos mTOR/FRAPl), AP23573 (alvos mTOR/FRAPl), Cloridreto de eril/fasudil (alvos RHO), Flavopiridol (alvos CDK), Seliciclibe/CYC202/Roscovitrina (alvos CDK), SNS-032/BMS- 387032 (alvos CDK), Ruboxistaurina (alvos PKC), Pkc412 (alvos PKC), Briostatina (alvos PKC), KAI-9803 (alvos PKC), SF1126 (alvos PI3K), VX-680 (alvos Aurora cinase), Azdl 152 (alvos Aurora cinase), Arry- 142886/AZD-6244 (alvos MAP/MEK), SCIO-469 (alvos MAP/MEK), GW681323 (alvos MAP/MEK), CC-401 (alvos JNK), CEP-1347 (alvos JNK) e PD 332991 (alvos CDK).
[0630]O transtorno em que a metilação da proteína mediada por EZH2 desempenha um papel pode ser uma doença neurológica. Os compostos desta invenção também podem ser usados para tratar ou estudar doenças neurológicas, tais como epilepsia, esquizofrenia, transtorno bipolar ou outros transtornos psicológicos e/ou psiquiátricos, neuropatias, atrofia músculo-esquelética, e doenças neurodegenerativas, por exemplo, uma doença neurodegenerativa. Doenças neurodegenerativas exemplares incluem: doença de Alzheimer, esclerose lateral amiotrófica (ALS) e doença de Parkinson. Uma outra classe de doenças neurodegenerativas inclui doenças causadas, pelo menos em parte, pela agregação de poli-glutamina. Doenças desta classe incluem: Doenças de Huntington, Atrofia Muscular Espinobulbar (SBMA ou Doença de Kennedy) Atrofia Dentatorrubropalidoluisiana (DRPLA), Ataxia Espinocerebelar 1 (SCA1), Ataxia Espinocerebelar 2 (SCA2), Doença de Machado-Joseph (MJD; SCA3), Ataxia Espinocerebelar 6 (SCA6), Ataxia Espinocerebelar 7 (SCA7) e Ataxia Espinocerebelar 12 (SCA12).
[0631]Qualquer outra doença em que a metilação epigenética, que é mediada por EZH2, desempenha um papel, pode ser tratada ou prevenida usando compostos e métodos descritos neste relatório, ou tais doenças e tratamentos potenciais das mesmas podem ser estudados com os compostos descritos neste relatório.
[0632]4. Composições Farmacêuticas
[0633]A presente invenção também fornece composições farmacêuticas compreendendo um composto de qualquer Fórmula divulgada neste relatório em combinação com pelo menos um excipiente ou portador farmaceuticamente aceitável.
[0634]Uma “composição farmacêutica” é uma formulação contendo os compostos da presente invenção em uma forma adequada para a administração a um paciente. Em uma modalidade, a composição farmacêutica está em massa ou na forma de dosagem unitária. A forma de dosagem unitária é qualquer uma entre uma variedade de formas, incluindo, por exemplo, uma cápsula, uma bolsa IV, um tablete, uma bomba única em um inalador aerossol ou um frasco. A quantidade de ingrediente ativo (por exemplo, uma formulação do composto divulgado ou sal, hidrato, solvato ou isômero do mesmo) em uma dose unitária da composição é uma quantidade eficaz e é variada, de acordo com o tratamento particular envolvido. Uma pessoa habilitada na técnica avaliará que algumas vezes é necessário fazer variações de rotina na dosagem, dependendo da idade e condição do paciente. A dosagem também dependerá da via de administração. Uma variedade de vias é considerada, incluindo oral, pulmonar, retal, parenteral, transdérmica, subcutânea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, por inalação, bucal, sublingual, intrapleural, intratecal, intranasal, e semelhantes. Formas de dosagem para a administração tópica ou transdérmica de um composto desta invenção incluem pós, pulverizações, unguentos, pastas, cremes, loções, géis, soluções, emplastros e inaladores. Em uma modalidade, o composto ativo é misturado sob condições estéreis com um portador farmaceuticamente aceitável, e com quaisquer preservantes, tampões ou propelentes que são exigidos.
[0635]Conforme usado neste relatório, a frase “farmaceuticamente aceitável” se refere àqueles compostos, ânions, cátions, materiais, composições, portadores, e/ou formas de dosagem que são, no escopo do julgamento médico, adequados para o uso em contato com os tecidos de seres humanos e animais sem toxicidade, irritação, resposta alérgica excessiva, ou outro problema ou complicação, compatível com uma razão benefício/risco razoável.
[0636]“Excipiente farmaceuticamente aceitável” significa um excipiente que é útil na preparação de uma composição farmacêutica que é, em geral, segura, não tóxica e nem biologicamente nem de outro modo indesejável, e inclui um excipiente que é aceitável para uso veterinário, assim como uso farmacêutico humano. Um “excipiente farmaceuticamente aceitável”, conforme usado no relatório descritivo e reivindicações, inclui um e mais do que um tal excipiente.
[0637]Uma composição farmacêutica da invenção é formulada para ser compatível com sua via de administração intencionada. Exemplos de vias de administração incluem administração parenteral, por exemplo, intravenosa, intradérmica, subcutânea, oral (por exemplo, inalação), transdérmica (tópica) e transmucosa. Soluções ou suspensões usadas para aplicação parenteral, intradérmica ou subcutânea podem incluir os componentes seguintes: um diluente estéril, tal como água para injeção, solução salina, óleos fixos, polietilenoglicóis, glicerina, propileno glicol ou outros solventes sintéticos; agentes antibacterianos, tais como álcool benzílico ou metil parabenos; antioxidantes, tais como ácido ascórbico ou bissulfito de sódio; agentes quelantes, tais como ácido etilenodiaminotetra-acético; tampões, tais como acetatos, citratos ou fosfatos, e agentes para o ajuste de tonicidade, tais como cloreto de sódio ou dextrose. O pH pode ser ajustado com ácidos ou bases, tais como ácido clorídrico ou hidróxido de sódio. A preparação parenteral pode ser envolvida em ampolas, seringas descartáveis ou frascos de múltiplas doses de vidro ou plástico.
[0638]Um composto ou composição farmacêutica da invenção pode ser administrado a um paciente em muitos entre os métodos bem conhecidos correntemente usados para tratamento quimioterápico. Por exemplo, para o tratamento de cânceres, um composto da invenção pode ser diretamente injetado nos tumores, injetado na corrente sanguínea ou cavidades do corpo ou tomados oralmente ou aplicados através da pele com emplastros. A dose escolhida deve ser suficiente para constituir tratamento eficaz, mas não tão alta, de modo a causar efeitos colaterais inaceitáveis. O estado da condição da doença (por exemplo, câncer, pré-cancer, e semelhantes) e a saúde do paciente devem ser, preferivelmente, monitorados durante um período de tempo razoável depois do tratamento.
[0639]O termo “quantidade terapeuticamente eficaz”, conforme usado neste relatório, se refere a uma quantidade de um agente farmacêutico para tratar, melhorar, ou prevenir uma doença ou condição identificada, ou para exibir um efeito terapêutico ou inibitório detectável. O efeito pode ser detectado por qualquer método de ensaio conhecido na técnica. A quantidade eficaz precisa para um paciente dependerá do peso corpóreo, tamanho e saúde do paciente; da natureza e extensão da condição; e do produto terapêutico ou combinação de produtos terapêuticos selecionados para a administração. Quantidades terapeuticamente eficazes para uma dada situação podem ser determinadas por experimentos de rotina feitos por pessoas habilitadas e julgamento do médico. Em um aspecto preferido, a doença ou condição que será tratada é câncer. Em um outro aspecto, a doença ou condição que será tratada é um transtorno celular proliferativo.
[0640]Para qualquer composto, a quantidade terapeuticamente eficaz pode ser estimada inicialmente em ensaios de cultura celular, por exemplo, de células neoplásicas, ou em modelos animais, usualmente ratos, camundongos, coelhos, cães ou porcos. O modelo animal também podem ser usado para determinar a faixa de concentração apropriada e via de administração. Tal informação depois pode ser usada para determinar doses e vias úteis para a administração em seres humanos. A eficácia terapêutica/profilática e toxicidade podem ser determinadas por procedimentos farmacêuticos padrão em culturas celulares ou animais experimentais, por exemplo, ED50 (a dose terapeuticamente eficaz em 50 % da população) e LD50 (a dose letal para 50 % da população). A razão de dose entre os efeitos tóxicos e terapêuticos é o índice terapêutico, e pode ser expressado como a razão, LD50/ED50. As composições farmacêuticas que exibem grandes índices terapêuticos são preferidas. A dosagem pode variar dentro de sua faixa dependendo da forma de dosagem utilizada, sensibilidade do paciente e a via de administração.
[0641]A dosagem e administração são ajustadas para fornecer níveis suficientes do(s) agente(s) ativo(s) ou manter o efeito desejado. Os fatores que podem ser levados em conta incluem a severidade do estado da doença, saúde geral do paciente, idade, peso, e sexo do paciente, dieta, tempo e frequência de administração, combinação(ões) de fármaco, sensibilidades de reação, e tolerância/resposta à terapia. Composições farmacêuticas de longa ação podem ser administradas a cada 3 a 4 dias, a cada semana, ou uma vez a cada duas semanas, dependendo da meia- vida e taxa de clearance da formulação particular.
[0642]As composições farmacêuticas contendo os compostos ativos da presente invenção podem ser preparadas em uma maneira que é, em geral, conhecida, por exemplo, por meio de processos de mistura, dissolução, granulação, drageamento, levigação, emulsificação, encapsulamento, captura ou liofilização convencionais. As composições farmacêuticas podem ser formuladas em uma maneira convencional usando um ou mais portadores farmaceuticamente aceitáveis compreendendo excipientes e/ou auxiliares que facilitam o processamento dos compostos ativos nas preparações que podem ser farmaceuticamente usadas. Certamente, a formulação apropriada é dependente da via de administração escolhida.
[0643]As composições farmacêuticas adequadas para uso injetável incluem soluções aquosas estéreis (onde solúveis em água) ou dispersões e pós estéreis para a preparação extemporânea de soluções injetáveis estéreis ou dispersão. Para a administração intravenosa, portadores adequados incluem solução salina fisiológica, água bacteriostática, Cremophor EL™ (BASF, Parsippany, N.J.) ou solução salina tamponada com fosfato (PBS). Em todos os casos, a composição deve ser estéril e deve ser fluida no grau que exista fácil seringabilidade. Ela deve ser estável sob as condições de fabricação e armazenagem e deve ser preservada contra a ação contaminante de micro-organismos, tais como bactérias e fungos. O portador pode ser um solvente ou meio de dispersão contendo, por exemplo, água, etanol, poliol (por exemplo, glicerol, propileno glicol e polietilenoglicol líquido, e semelhantes), e misturas adequadas dos mesmos. A fluidez apropriada pode ser mantida, por exemplo, através do uso de um revestimento, tal como lecitina, através da manutenção do tamanho de partícula exigido no caso de dispersão e através do uso de tensoativos. A prevenção da ação de micro-organismos pode ser obtida através de vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido ascórbico, timerosal, e semelhantes. Em muitos casos, será preferível incluir agentes isotônicos, por exemplo, açúcares, poliálcoois, tais como manitol e sorbitol, e cloreto de sódio na composição. A absorção prolongada das composições injetáveis pode ser realizada incluindo na composição um agente que retarda a absorção, por exemplo, monoestearato de alumínio e gelatina.
[0644]Soluções injetáveis estéreis podem ser preparadas através da incorporação do composto ativo na quantidade exigida em um solvente apropriado com uma combinação de ingredientes enumerados acima, conforme exigido, seguido por esterilização filtrada. Em geral, as dispersões são preparadas através da incorporação do composto ativo em um veículo estéril que contém um meio de dispersão básico e os outros ingredientes exigidos a partir daqueles enumerados acima. No caso de pós estéreis para a preparação de soluções injetáveis estéreis, os métodos de preparação são secagem a vácuo e liofilização que produz um pó do ingrediente ativo mais qualquer ingrediente desejado adicional a partir de uma solução filtrada previamente estéril do mesmo.
[0645]As composições orais, em geral, incluem um diluente inerte ou um portador farmaceuticamente aceitável comestível. Elas podem ser envolvidas em cápsulas de gelatina ou comprimidas em tabletes. Para o propósito de administração terapêutica oral, o composto ativo pode ser incorporado com excipientes e usado na forma de tabletes, pastilhas ou cápsulas. As composições orais também pode ser preparadas usando um portador fluido para o uso como um colutório, em que o composto no portador fluido é oralmente aplicado e expectorado ou engolido. Agentes de ligação farmaceuticamente compatíveis, e/ou materiais adjuvantes podem ser incluídos como parte da composição. Os tabletes, pílulas, cápsulas, pastilhas e semelhantes podem conter qualquer um entre os ingredientes seguintes, ou compostos de uma natureza similar: um aglutinante, tal como celulose microcristalina, goma tragacanto ou gelatina; um excipiente, tal como amido ou lactose, um agente desintegrante, tal como ácido algínico, Primogel, ou amido de milho; um lubrificante, tal como estearato de magnésio ou Sterotes; um deslizante, tal como dióxido de silício coloidal; um agente adoçante, tal como sacarose ou sacarina; ou um agente flavorizante, tal como menta, salicilato de metila, ou flavorizante de laranja.
[0646]Para a administração por inalação, os compostos são liberados na forma de uma pulverização por aerossol a partir de recipiente ou dispensador pressurizado, que contém um gás propelente adequado, por exemplo, um gás, tal como dióxido de carbono, ou um nebulizador.
[0647]A administração sistêmica também pode ser realizada por meios transmucosos ou transdérmicos. Para a administração transmucosa ou transdérmica, penetrantes apropriados à barreira a ser permeada são usados na formulação. Tais penetrantes são, em geral, conhecidos na técnica, e incluem, por exemplo, para a administração transmucosa, detergentes, sais biliares, e derivados de ácido fusídico. A administração transmucosa pode ser realizada através do uso de pulverizações nasais ou supositórios. Para a administração transdérmica, os compostos ativos são formulados em unguentos, pomadas, géis, ou cremes, conforme geralmente conhecido na técnica.
[0648]Os compostos ativos pode ser preparados com portadores farmaceuticamente aceitáveis que protegerão o composto contra eliminação rápida do corpo, tais como uma formulação de liberação controlada, incluindo implantes e sistemas de liberação microencapsulada. Polímeros biodegradáveis e biocompatíveis podem ser usados, tais como etileno vinil acetato, polianidridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres e ácido poliláctico. Os métodos para a preparação de tais formulações serão evidentes àqueles habilitados na técnica. Os materiais também pode ser comercialmente obtidos a partir da Alza Corporation e Nova Pharmaceuticals, Inc. Suspensões lipossômicas (incluindo lipossomas alvejados em células infectadas com anticorpos monoclonais para antígenos virais) também podem ser usados como portadores farmaceuticamente aceitáveis. Estes podem ser preparados, de acordo com métodos conhecidos àqueles habilitados na técnica, por exemplo, conforme descrito na Patente U.S. No 4.522.811.
[0649]É especialmente vantajoso formular composições orais ou parenterais na forma de unidade de dosagem por facilidade de administração e uniformidade da dosagem. A forma de unidade de dosagem, conforme usado neste relatório, se refere a unidades fisicamente distintas adequadas como dosagens unitárias para o paciente a ser tratado; cada unidade contendo uma quantidade pré-determinada de composto ativo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado em associação com o portador farmacêutico exigido. A especificação quanto às formas de unidade de dosagem da invenção são ditadas pela e diretamente dependentes das características únicas do composto ativo e do efeito terapêutico particular a ser obtido.
[0650]Em aplicações terapêuticas, as dosagens das composições farmacêuticas usadas, de acordo com a invenção, variam, dependendo do agente, da idade, peso e condição clínica do paciente, e da experiência e julgamento do médico ou profissional da saúde que administra a terapia, entre outros fatores que afetam a dosagem selecionada. Em geral, a dose deve ser suficiente para resultar em diminuição, e, preferivelmente, regressão do crescimento dos tumores e, também, preferivelmente, causando regressão completa do câncer. As dosagens podem variar de cerca de 0,01 mg/kg por dia a cerca de 5000 mg/kg por dia. Em aspectos preferidos, as dosagens podem variar de cerca de 1 mg/kg por dia a cerca de 1000 mg/kg por dia. Em um aspecto, a dose estará na faixa de cerca de 0,1 mg/dia a cerca de 50 g/dia; cerca de 0,1 mg/dia a cerca de 25 g/dia; cerca de 0,1 mg/dia a cerca de 10 g/dia; cerca de 0,1 mg a cerca de 3 g/dia; ou cerca de 0,1 mg a cerca de 1 g/dia, em doses únicas, divididas ou contínuas (a dose pode ser ajustada quanto ao peso do paciente em kg, área de superfície do corpo em m2, e idade em anos). Uma quantidade eficaz de um agente farmacêutico é aquela que fornece uma melhora objetivamente identificável, conforme observado pelo clínico ou outro observador qualificado. Por exemplo, a regressão de um tumor em um paciente pode ser medida com referência ao diâmetro de um tumor. A diminuição no diâmetro de um tumor indica regressão. A regressão também é indicada pela não reocorrência de tumores depois que o tratamento foi interrompido. Conforme usado neste relatório, o termo “maneira eficaz de dosagem” se refere à quantidade de um composto ativo para produzir o efeito biológico desejado em um paciente ou célula.
[0651]As composições farmacêuticas podem ser incluídas em um recipiente, pacote, ou dispensador juntamente com as instruções para a administração.
[0652]Os compostos da presente invenção ainda são capazes de formar sais. Todas estas formas também são consideradas no escopo da invenção reivindicada.
[0653]Conforme usado neste relatório, “sais farmaceuticamente aceitáveis” se referem a derivados dos compostos da presente invenção em que o composto precursor é modificado através da preparação de sais de ácido ou base do mesmo. Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não são limitados a, sais minerais ou de ácido orgânico de resíduos básicos, tais como aminas, sais alcalinos ou orgânicos de resíduos ácidos, tais como ácidos carboxílicos, e semelhantes. Os sais farmaceuticamente aceitáveis incluem os sais não tóxicos convencionais ou os sais de amônio quaternário do composto precursor formado, por exemplo, a partir de ácidos inorgânicos ou orgânicos não tóxicos. Por exemplo, tais sais não tóxicos convencionais incluem, mas não são limitados àqueles derivados de ácidos inorgânicos e orgânicos selecionados a partir de 2-acetoxibenzoico, 2- hidroxietano sulfônico, acético, ascórbico, benzeno sulfônico, benzoico, bicarbônico, carbônico, cítrico, edético, etano dissulfônico, 1,2-etano sulfônico, fumárico, glucoheptônico, glicônico, glutâmico, glicólico, glicolliarsanílico, hexilresorcínico, hidrabâmico, bromídrico, clorídrico, iodídrico, hidroximaleico, hidroxinaftoico, isetiônico, láctico, lactobiônico, lauril sulfônico, maleico, málico, mandélico, metano sulfônico, napsílico, nítrico, oxálico, pamoico, pantotênico, fenilacético, fosfórico, poligalacturônico, propiônico, salicílico, esteárico, subacético, succínico, sulfâmico, sulfanílico, sulfúrico, tânico, tartárico, tolueno sulfônico, e aminoácidos que ocorrem comumente, por exemplo, glicina, alanina, fenilalanina, arginina, etc.
[0654]Outros exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis incluem ácido hexanoico, ácido ciclopentano propiônico, ácido pirúvico, ácido malônico, ácido 3-(4- hidroxibenzoil)benzoico, ácido cinâmico, ácido 4-clorobenzenossulfônico, ácido 2- naftalenossulfônico, ácido 4-toluenossulfônico, ácido canforsulfônico, ácido 4- metilbiciclo-[2,2,2]-oct-2-eno-1-carboxílico, ácido 3-fenilpropionico, ácido trimetilacético, ácido butilacético terciário, ácido mucônico, e semelhantes. A presente invenção também abrange sais formados quando um próton ácido presente no composto precursor é substituído por um íon metálico, por exemplo, um íon de metal alcalino, um íon alcalino terroso, ou um íon alumínio; ou coordenado com uma base orgânica, tal como etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, trometamina, N- metilglucamina, e semelhantes. Na forma de sal, é entendido que a razão do composto para o cátion ou ânion do sal pode ser 1:1, ou qualquer razão, exceto 1:1, por exemplo, 3:1, 2:1, 1:2 ou 1:3.
[0655]Deve ser entendido que todas as referências aos sais farmaceuticamente aceitáveis incluem formas de adição de solvente (solvatos) ou formas de cristal (polimorfos), conforme definido neste relatório, do mesmo sal.
[0656]Os compostos da presente invenção também podem ser preparados como ésteres, por exemplo, ésteres farmaceuticamente aceitáveis. Por exemplo, um grupo com função ácido carboxílico em um composto pode ser convertido em seu éster correspondente, por exemplo, um metila, etila ou outro éster. Além disso, um grupo álcool em um composto pode ser convertido em seu éster correspondente, por exemplo, acetato, propionato ou outro éster.
[0657]Os compostos da presente invenção também podem ser preparados como pró-fármacos, por exemplo, pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis. O termo “pró-fármaco” se refere a qualquer composto que libera um fármaco precursor ativo in vivo. Visto que os pró-fármacos são conhecidos para realçar diversas qualidades desejáveis dos produtos farmacêuticos (por exemplo, solubilidade, biodisponibilidade, fabricação, etc.), os compostos da presente invenção podem ser liberados na forma de pró-fármaco. Assim, a presente invenção é intencionada a cobrir pró-fármacos dos compostos presentemente reivindicados, métodos de liberar os mesmos e composições contendo os mesmos. “Pró-fármacos” são intencionados a incluir quaisquer portadores covalentemente ligados que liberam um fármaco precursor ativo da presente invenção in vivo quando tal pró-fármaco é administrado a um paciente. Os pró-fármacos na presente invenção são preparados através da modificação de grupos funcionais presentes no composto em tal maneira que as modificações são clivadas, na manipulação de rotina ou in vivo, ao composto precursor. Os pró-fármacos incluem os compostos da presente invenção em que um grupo hidróxi, amino, sulfidrila, carbóxi ou carbonila é ligado a qualquer grupo que pode ser clivado in vivo para formar um grupo hidroxila livre, amino livre, sulfidrila livre, carbóxi livre ou carbonila livre, respectivamente.
[0658]Exemplos de pró-fármacos incluem, mas não são limitados a, ésteres (por exemplo, derivados de acetato, dialquilaminoacetatos, formiatos, fosfatos, sulfatos e benzoato) e carbamatos (por exemplo, N,N-dimetilaminocarbonila) de grupos hidróxi funcionais, ésteres (por exemplo, ésteres etílicos, morfolinoetanol ésteres) de grupos carboxila funcionais, derivados de N-acila (por exemplo, N-acetila) bases de N-Mannich, bases de Schiff e enaminonas de grupos amino funcionais, oximas, acetais, cetais e enol ésteres de grupos funcionais cetona e aldeído nos compostos da invenção, e semelhantes, Veja Bundegaard, H., Design of Prodrugs, p1-92, Elesevier, Nova Iorque-Oxford (1985);
[0659]Os compostos, ou sais farmaceuticamente aceitáveis, ésteres ou pró- fármacos dos mesmos, são administrados oralmente, nasalmente, transdermicamente, de forma pulmonar, por inalação, bucalmente, sublingualmente, intraperintonealmente, subcutaneamente, intramuscularmente, intravenosamente, retalmente, intrapleuralmente, intratecalmente e parenteralmente. Em uma modalidade, o composto é oralmente administrado. Uma pessoa habilitada na técnica reconhecerá as vantagens de certas vias de administração.
[0660]O regime de dosagem que utiliza os compostos é selecionado, de acordo com uma variedade de fatores, incluindo tipo, espécie, idade, peso, sexo e condição médica do paciente; a severidade da condição a ser tratada; a via de administração; a função renal e hepática do paciente; e o composto particular ou sal do mesmo utilizado. Um médico ou veterinário comumente habilitado pode facilmente determinar e prescrever a quantidade eficaz do fármaco exigido para prevenir, agir contra, ou interromper o progresso da condição.
[0661]As técnicas para a formulação e administração dos compostos divulgados da invenção podem ser encontradas em Remington: the Science and Practice of Pharmacy, 19a edição, Mack Publishing Co., Easton, PA (1995). Em uma modalidade, os compostos descritos neste relatório, e os sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são usados em preparações farmacêuticas em combinação com um portador ou diluente farmaceuticamente aceitável. Os portadores adequados farmaceuticamente aceitáveis incluem enchedores ou diluentes sólidos inertes e soluções aquosas estéreis ou orgânicas. Os compostos estarão presentes em tais composições farmacêuticas em quantidades suficientes para fornecer a quantidade de dosagem desejada na faixa descrita neste relatório.
[0662]Todas as porcentagens e razões usadas neste relatório, a menos que de outro modo indicado, estão em peso. Outras características e vantagens da presente invenção são evidentes a partir dos exemplos diferentes. Os exemplos fornecidos ilustram componentes diferentes e metodologia útil na prática da presente invenção. Os exemplos não limitam a invenção reivindicada. Com base na presente divulgação, o técnico habilitado pode identificar e utilizar outros componentes e metodologia útil para a prática da presente invenção.
[0663]Nos esquemas sintéticos descritos neste relatório, os compostos podem ser esboçados com uma configuração particular para simplicidade. Tais configurações particulares não devem ser interpretadas como limitantes da invenção a um outro isômero, tautômero, regioisômero ou estereoisômero, nem excluem misturas de isômeros, tautômeros, regioisômeros ou estereoisômeros; entretanto, será entendido que um dado isômero, tautômero, regioisômero ou estereoisômero pode ter um nível mais alto de atividade em relação a um outro isômero, tautômero, regioisômero ou estereoisômero.
[0664]Os compostos projetados, selecionados e/ou otimizados pelos métodos descritos acima, uma vez produzidos, podem ser caracterizados usando uma variedade de ensaios conhecidos àqueles habilitados na técnica para determinar se os compostos têm atividade biológica. Por exemplo, as moléculas podem ser caracterizadas por ensaios convencionais, incluindo, mas não limitados àqueles ensaios descritos abaixo, para determinar se elas têm uma atividade prognosticada, atividade de ligação e/ou especificidade de ligação.
[0665]Além disso, a triagem de alta produção pode ser usada para acelerar a análise usando tais ensaios. Como um resultado, pode ser possível triar rapidamente as moléculas descritas neste relatório quanto à atividade, usando técnicas conhecidas no ramo. Metodologias gerais para a realização de triagem de alta produção são descritas, por exemplo, em Devlin (1998) High Throughput Screening. Marcel Dekker; e Patente U.S. No 5.763.263. Ensaios de alta produção podem usar uma ou mais técnicas de ensaio diferentes incluindo, mas não limitadas àquelas descritas abaixo.
[0666]Todas as publicações e documentos de patente citadas neste relatório são incorporadas como referência como se cada publicação ou documento fosse específica e individualmente indicada para ser incorporada neste relatório como referência. A citação das publicações e documentos de patente não é intencionada como uma admissão de que é pertinente à técnica anterior, nem constitui qualquer admissão quanto aos conteúdos ou dados da mesma. A invenção descrita reconhecerá que a invenção pode ser praticada em uma variedade de modalidades e que a descrição precedente e exemplos abaixo são para propósitos de ilustração e não limitação das reivindicações que seguem.
[0667]5. Exemplos
[0668]Experimentos Gerais
[0669]RMN
[0670]Os espectros de RMN de 1H foram tomados usando CDCl3 a menos que de outro modo estabelecido e foram registrados a 400 ou 500 MHz usando um instrumentos com ímã Varian ou Oxford (500 MHz). As multiplicidades indicadas são s = singleto, d = dubleto, t = tripleto, q = quarteto, quint = quinteto, sxt = sexteto, m = multipleto, dd = dubleto de dubletos, dt = dubleto de tripletos; br indica um sinal amplo.
[0671]LCMS e HPLC
[0672]Shimadzu LC-Q, Shimadzu LCMS-2010EV ou Waters Acquity Ultra Performance LC. HPLC: Os produtos foram analisados por Shimadzu SPD-20A com coluna 150 x 4,5 mm YMC ODS- M80 ou coluna 150 x 4,6 mm YMC-Pack Pro C18 a 1,0 ml/min.
[0673]A fase móvel foi MeCN:H2O = 3:2 (contendo SDS a 0,3 % e H3PO4 a 0,05 %),
[0674]TFA a 0,05 % em água, TFA a 0,05 % em acetonitrila (gradiente Inicial 20 %, depois TFA/MeCN a 0,05 % a conc., a 95 % em 3 min. manter durante 0,5 min. entre 3,51 a 4,50 min, depois TFA/MeCN a 0,05 % conc. 20 %).
[0675]Alternativamente à LCMS, 2 métodos diferentes foram usados; em um deles usamos o pH alto (METCR1600) e o outro para mais compostos padrão (METCR1416).
[0676]Ácido fórmico a 0,1 % em água - Fase móvel “A” Ácido fórmico a 0,1 % em acetonitrila - Fase móvel “B” utilizando coluna Waters Atlantis dC18, 2,1 mm x 100 mm, 3 μm, com uma taxa de fluxo = 0,6 ml/min Temperatura da coluna = 40 °C; Tempo (min) %B 0,00 min 5 % B. 5,0 min 100 % B, 5,4 min 100 % B e 42 min 5 %B
[0677]O método de 3,5 minutos se refere à coluna Atlantis dC18, 2,1 mm x 50 mm, 3 μm, taxa de fluxo de 1 ml/min a 40 °C. Fase móvel A Ácido fórmico (aq.) 0,1 % fase móvel B ácido fórmico (MeCN) 0,1 %), injeção 3 μL, gradiente 0 min (5 % orgânico), 2,5 min (100 % orgânico), 2,7 min (100 % orgânico), 2,71 min (5 % orgânico), 3,5 min (5 % orgânico)
[0678]O método de 7,0 minuto se refere à coluna Atlantis dC18, 2,1 mm x 100 mm, 3 μm, taxa de fluxo de 0,6ml/min a 40 °C. Fase móvel A Ácido fórmico (aq.) 0,1 % fase móvel B ácido fórmico (MeCN) 0,1 %, injeção 3 μL, gradiente 0 min (5 % orgânico), 5 min (100 % orgânico), 5,4 min (100 % orgânico), 5,42 min (5 % orgânico), 7 min (5 % orgânico)
[0679]Os métodos de 3,5 e 7 minutos foram realizados em um sistema MS18 Shimadzu LCMS- 2010EV ou um MS19 Shimadzu LCMS-2010EV utilizando bombas de LC-20AB e detectores SPD- M20A PDA.
[0680]Os produtos foram purificados por HPLC/MS usando Waters AutoPurification System com 3100 Mass Detector.
[0681]As análises de HPLC também podem ser realizadas em um Shimdazu LC-2010 CHT usando uma coluna YMC ODS-A, C18, (150 x 4,6 x 5 μm) na temperatura ambiente com uma taxa de fluxo de 1,4 ml/min. Um volume de injeção de 10 μL é utilizado e a detecção ocorre por intermédio de UV/PDA. A fase móvel A é TFA a 0,05 % em água e a Fase móvel B é TFA a 0,05 % em acetonitrila com um programa de gradiente de Inicial 5 % B a 95 % B em 8 min, manter durante 1,5 min, a 9,51 a 12 min B. conc. 0,5 %. O diluente é a fase móvel
[0682]Outro
[0683]A cromatografia instantânea em coluna automática foi realizada em um Biotage Isolera versão 4. Cartucho de 10 g SNAP rodando a 12 ml/min ou uma cartucho de 25 g SNAP rodando a 25 ml/min e detectando a 254 nm e 280 nm.
[0684]A seleção de reduções de Nitrila pode ser realizada em um ThalesNano H-Cube®, de acordo com as condições descritas no procedimento experimental.
[0685]Exemplo 1: Síntese do Composto 1: 5-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropuridin-3-il)metil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida
Figure img0072
[0686]Etapa 1: ácido 5-bromo-2-metil-3-nitro benzoico
Figure img0073
[0687]À solução agitada de ácido 2-metil-3-nitrobenzoico (50 g, 276,2 mmols) em H2SO4 conc. (200 mL), 1,3-dibromo-5,5-dimetil-2,4-imidazolidinodiona (43,4 g, 151,8 mmols) foi adicionado às porções na temperatura ambiente e a massa de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 5 h. Em conclusão, a massa de reação foi vertida em água gelada, o precipitado sólido foi filtrado, o resíduo resultante foi lavado com água e seco sob vácuo para fornecer o composto desejado (71,7 g, 100 %).
[0688]Etapa 2: Síntese de 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoato de metila
Figure img0074
[0689]A uma solução agitada de ácido 5-bromo-2-metil-3-nitro benzoico (287 g, 1103 mmols) em DMF (150 mL), carbonato de sódio (468 g, 4415 mmols) e iodeto de metila (626,63 g, 4415 mmols) foram adicionados. A massa de reação resultante foi aquecida a 60 °C durante 8 h. Em conclusão, o precipitado sólido foi filtrado, o resíduo lavado com éter dietílico (5 vezes). As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas sob pressão reduzida, fornecendo o composto bruto desejado (302 g, 99 %).
[0690]Etapa 3: 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metila
Figure img0075
[0691]A uma solução agitada de 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoato de metila (150 g, 544 mmols) em etanol (750 mL), cloreto de amônio (150 g, 2777 mmols) dissolvido em água (750 mL) e pó de ferro (93,3 g, 1636 mmols) foram adicionados sob agitação. A massa de reação resultante foi aquecida a 80 °C durante 7 h. Em conclusão, a massa de reação foi filtrada através de celite, fornecendo lavagem de água e acetato de etila, o filtrado foi extraído com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas sob pressão reduzida, fornecendo o composto desejado.
[0692]Etapa 4: 5-bromo-3-(ciclopentilamino)-2-metilbenzoato de metila
Figure img0076
[0693]A uma solução agitada de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metila (0,3 g, 1,33 mmol) e ciclopentanona (0,56 g, 6,6 mmols) em metanol (3 mL), ácido acético (0,159 g, 2,6 mmols) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 3 h. Em seguida, cianoboro-hidreto de sódio (0,208 g, 3,3 mmols) foi adicionado e a reação agitada durante a noite. Em conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida para fornecer o composto desejado.
[0694]Etapa 5: 5-bromo-3-(ciclopentil(metil)amino)-2-metilbenzoato de metila
Figure img0077
[0695]A uma solução agitada do 5-bromo-3-(ciclopentilamino)-2-metilbenzoato de metila bruto (0,7 g, 2,25 mmols) em acetonitrila (15 mL), carbonato de césio (1,47 g, 4,50 mmols) e iodeto de metila (1,6 g, 11,26 mmols) foram adicionados; a massa de reação resultante foi aquecida a 80 °C durante 7 h. Em conclusão, a massa de reação foi esfriada até a temperatura ambiente e filtrada, o resíduo foi lavado com acetato de etila e o filtrado foi concentrado e depois purificado por cromatografia em coluna para fornecer o composto desejado (0,6 g, 82 %).
[0696]Etapa 6: 5-bromo-3-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Figure img0078
[0697]NaOH aquoso (0,11 g, 2,75 mmols) foi adicionado a uma solução de 5- bromo-3-(ciclopentil(metil)amino)-2-metilbenzoato de metila (0,6 g, 1,8 mmol) em MeOH (1,5 mL) e agitado a 60 °C durante 1 h. Depois da conclusão da reação, etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado usando HCl diluído até o pH 6 e o pH 4 foi ajustado usando ácido cítrico. A extração foi realizada usando acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas para fornecer o ácido respectivo (0,5 g, 87 %).
[0698]O ácido (0,5 g, 1,60 mmol) depois foi dissolvido em DMSO (3 mL) e 3- (amino metil)-4,6-dimetilpiridin-2(lH)-ona (0,49 g, 3,22 mmols) foi adicionada ao mesmo. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 15 min antes que PYBOP (1,25 g, 2,41 mmols) tenha sido adicionado à mesma e a agitação foi continuada durante a noite. Depois da conclusão da reação, a massa de reação foi vertida em gelo para obter sólido, este foi filtrado e lavado com acetonitrila, seguido por éter, para fornecer o composto desejado (0,315 g, 44 %).
[0699]Etapa 7: Síntese de 5-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2- di-hidropiridin-3-il)metil)-4’-formil-4-meti41,1’-bifenil]-3-carboxamida
Figure img0079
[0700]Uma solução de 5-bromo-3-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2- oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (1 equiv.), ácido (4- formilfenil)borônico (1,2 equiv.) e Pd (PPh3)4 (0,1 equiv.) em 1,4-dioxano (4 mL) foi purgada com argônio durante 10 min. Em seguida, uma solução de Na2CO3 2 M (3,6 equiv.) foi adicionada à mesma e argônio foi purgado novamente durante 10 min. A mistura de reação foi agitada a 100 °C durante 2 h. Depois da conclusão da reação, água foi adicionada à mesma e a extração foi realizada usando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas em Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica (tamanho da malha 60 a 120) para fornecer o composto desejado (0,1 g, 44 %).
[0701]Etapa 8: Síntese de 5-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2- di-hidropuridin-3-il)metil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida
Figure img0080
[0702]A uma solução agitada de 5-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2- oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4’-formil-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida (0,1 g, 0,212 mmol) e N,N-dimetilamina (0,047 g, 1,06 mmol) em metanol (3 mL), ácido acético (0,1 g, 0,21 mmol) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 3 h. Em seguida, cianoboro-hidreto de sódio (0,033 g, 0,53 mmol) foi adicionado e a reação agitada durante a noite. Em conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e resíduo purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer o composto desejado (0,04 g, 37 %). LCMS: 501,39 (M + 1)+; HPLC: 90,78 % (@ 254 nm) (Rt; 4,171; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5 % B a 95 % B em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO- d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 8,17 (t, 1H), 7,57 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,33 - 7,37 (m, 3H), 7,17 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,27 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,52 (t, 1H, J = 7,2 Hz), 3,04 (s, 2H), 2,54 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 2,15 (s, 6H), 2,09 (s, 3H), 1,70 - 1,72 (m, 2H), 1,61 (m, 2H), 1,43 - 1,50 (m, 4H).
[0703]Exemplo 2: Síntese do Composto 2: 5-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamide
Figure img0081
Composto 2
[0704]Uma solução de 5-bromo-3-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2- oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (1 equiv.), ácido (4- (morfolinometil)fenil)borônico (1,2 equiv.) e Pd (PPh3)4 (0,1 equiv.) em 1,4-dioxano (4 mL) foi purgada com argônio durante 10 min. Em seguida, uma solução de Na2CO3 2 M (3,6 equiv.) foi adicionada à mesma e argônio foi purgado novamente durante 10 min. A mistura de reação foi agitada a 100 °C durante 2 h. Depois da conclusão da reação, água foi adicionada à mesma e a extração foi realizada usando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas em Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica (tamanho da malha 60 a 120) para fornecer o composto desejado (0,02 g, 16 %). LCMS: 543,22 (M + 1)+; HPLC: 99,53 % (@ 254 nm) (Rt; 4,181; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A: TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5 % B a 95 % B em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 8,17 (t, 1H, J = 4,4 Hz), 7,98 (s, 1H), 7,73 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 7,57 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,37 (s, 2H), 7,17 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,27 (d, 2H, J = 4,8 Hz), 3,44 - 3,57 (m, 7H), 2,54 (s, 3H), 2,32 - 2,36 (m, 4H), 2,23 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 2,09 (s, 3H), 1,69 - 1,72 (m, 2H), 1,61 (m, 2H), 1,43 - 1,50 (m, 4H).
[0705]Exemplo 3: Síntese de 5-(ciclopentilamino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida
Figure img0082
[0706]Etapa 1: Síntese de 5-bromo-3-(ciclopentilamino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
[0707]NaOH aquoso (0,1 g, 2,5 mmols) foi adicionado a uma solução de 5- bromo-3-(ciclopentilamino)-2-metilbenzoato de metila (0,39 g, 1,25 mmol) em MeOH (5 mL) e agitado a 60 °C durante 1 h. Etanol foi removido sob pressão reduzida e a solução acidificada usando HCl diluído ao pH 6 e ácido cítrico ao pH 4. O produto foi extraído com acetato de etila e as camadas orgânicas combinadas foram concentradas para fornecer o ácido desejado (0,26 g, 0,82 mmol). O ácido foi dissolvido em DMSO (3 mL) e 3-(amino metil)-4,6-dimetilpiridin-2(lH)-ona (0,25 g, 1,68 mmol) foi adicionado à solução. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 15 min antes que PYBOP (0,65 g, 1,26 mmol) tenha sido adicionado à mesma e a agitação foi continuada durante a noite. A mistura de reação foi vertida em gelo para obter um sólido, e este sólido foi coletado por filtração e lavado com acetonitrila, seguido por éter, para fornecer 5-bromo-3-(ciclopentilamino)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0,178 g, 50 %).
[0708]Etapa 2: Síntese de 5-(ciclopentilamino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-4’-formil-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida
[0709]Uma solução de 5-bromo-3-(ciclopentilamino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2- di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (1 equiv.), ácido (4-formilfenil)borônico (1,2 equiv.) e Pd (PPh3)4 (0,1 equiv.) em 1,4-dioxano (4 mL) foi purgada com argônio durante 10 min. Em seguida, solução de Na2CO3 2 M (3,6 equiv.) foi adicionada à mesma e argônio foi purgado novamente durante 10 min. A mistura de reação foi agitada a 100 °C durante 2 h. Depois de esfriar até a temperatura ambiente, água foi adicionada à mistura e depois o produto foi extraído com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas em anidro Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica (tamanho da malha 60 a 120) para fornecer 5-(ciclopentilamino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4’- formil-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida.
[0710]Etapa 3: 5-(ciclopentilamino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida
[0711]A uma solução agitada de 5-(ciclopentilamino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2- di-hidropiridin-3-il)metil)-4’-formil-4-metil-[1,1-bifenil]-3-carboxamida (0,11 g, 0,24 mmol) e N,N-dimetilamina (0,044 g, 1,2 mmol) em metanol (3 mL) foi adicionado ácido acético (0,014 g, 0,24 mmol) e a solução foi agitada na temperatura ambiente durante 3 h. Em seguida, cianoboro-hidreto de sódio (0,030 g, 0,48 mmol) foi adicionado e a solução foi agitada durante a noite. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer 5- (ciclopentilamino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4’- ((dimetilamino)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida desejada
[0712]LCMS: 486,21 (M + 1)+; HPLC: 99,84 % (@ 254 nm) (Rt; 4,799; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,44 (s, 1H), 8,02 - 8,03 (m, 1H), 7,62 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,44 (s, 2H), 6,80 (s, 1H), 6,73 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,65 (d, 1H, J = 6,4 Hz), 4,27 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,89 (d, 2H, J = 5,2 Hz), 2,49 (7H ligado em Pico de Solvente), 1,98 - 2,19 (m, 11H). 1,55 - 1,70 (m, 6H).
[0713]Exemplo 4: Síntese de 5-(ciclopentilamino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida
Figure img0083
[0714]Uma solução de 5-bromo-3-(ciclopentilamino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2- di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (1 equiv.), ácido (4- (morfolinometil)fenil)borônico (1,2 equiv.) e Pd (PPh3)4 (0,1 equiv.) em 1,4-dioxano (4 mL) foi purgada com argônio durante 10 min. Em seguida, solução de Na2CO3 2 M (3,6 equiv.) foi adicionada à mesma e argônio foi purgado novamente durante 10 min. A mistura de reação foi agitada a 100 °C durante 2 h. Depois da conclusão da reação, água foi adicionada à mesma e a extração foi realizada usando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas em Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica (tamanho da malha 60 a 120) para fornecer 5-(ciclopentilamino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4- metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida que foi purificada novamente usando HPLC preparativa que forneceu o sal de TFA.
[0715]LCMS: 529,30 (M + 1)+; HPLC: 99,46 % (@ 254 nm) (Rt; 4,782; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 9,90 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,72 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,55 (d, 2H, J = 8 Hz), 6,83 (s, 1H), 6,76 (s, 1H), 5,86 (s, 1H),4,37 (s, 2H), 4,27 (d, 2H, J = 4 Hz), 3,89 - 3,98 (m, 3H), 3,28 - 3,31 (m, 2H), 3,14 (s, 2H), 2,19 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 1,98 - 1,99 (m, 2H), 1,70 (s, 2H), 1,55 (s, 4H).
[0716]Exemplo 5: Síntese de 2-(ciclohex-1-en-1-il)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-6-(4-((dimetilamino)metil)fenil)isonicotinamida
Figure img0084
[0717]Etapa 1: Síntese de 2-cloro-6-(4-(hidroximetil)fenil)isonicotinato de metila
[0718]Uma solução de 2,6-dicloroisonicotinato de metila (1 g, 4,85 mmols), ácido borônico (0,73 g, 4,8 mmols) e PdCl2(PPh3)2 (0,15 g, 0,218 mmol) em THF (20 mL) foi desgaseificada durante 15 min. Em seguida, Cs2CO3 foi adicionado e a massa de reação purgada novamente durante 10 min. A reação foi aquecida a 70 °C durante 2 h. Em conclusão, a massa de reação foi concentrada e purificada por cromatografia em coluna em gel de sílica, fornecendo 2-cloro-6-(4-(hidroximetil)fenil)isonicotinato de metila (0,45 g, 33 %).
[0719]Etapa 2: Síntese de 2-(4-(bromometil)fenil)-6-cloroisonicotinato de metila
[0720]A uma solução de 2-cloro-6-(4-(hidroximetil)fenil)isonicotinato de metila (0,67 g, 2,418 mmols) em DCM (10 mL), trifenil fosfina (1 g, 3,86 mmols) e tetrabrometo de carbono (1,63 g, 3,87 mmols) foram adicionados a 0 °C e a massa de reação agitada durante a noite na temperatura ambiente. Em conclusão, a massa de reação foi concentrada e purificada por cromatografia em coluna em gel de sílica, fornecendo 2-(4-(bromometil)fenil)-6-cloroisonicotinato de metila (0,53 g, 64 %).
[0721]Etapa 3: Síntese de 2-cloro-6-(4-((dimetilamino)metil)fenil)isonicotinato de metila
[0722]A uma solução de 2-(4-(bromometil)fenil)-6-cloroisonicotinato de metila (0,533 g, 1,56 mmol) em THF, dimetilamina (7,8 mL, solução 2 M em THF) foi adicionada e a massa de reação agitada na temperatura ambiente durante a noite. Em conclusão, a massa de reação foi concentrada e o produto bruto obtido foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica, obtendo 2-cloro-6-(4- ((dimetilamino)metil)fenil)isonicotinato de metila puro (0,48 g, 99 %).
[0723]Etapa 4: Síntese de 2-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin)metil)-6-(4-((dimetilamino)metil)fenil)isonicotinamida
[0724]A uma solução de 2-cloro-6-(4-((dimetilamino)metil)fenil)isonicotinato de metila (0,48 g, 1,578 mmol) em etanol (5 mL), NaOH (0,094 g, 2,368 mmols), dissolvido em água (1 mL), foi adicionado e a massa de reação aquecida a 60° C durante 1 h. Em conclusão, o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi lavado com éter e acidificado com HCl 1 N até o pH 8 e depois com ácido cítrico até o pH 5 a 6. A camada aquosa foi extraída com MeOH/DCM a 20 % e as camadas orgânicas combinadas foram concentradas sob pressão reduzida para fornecer o ácido (0,47 g, bruto) que foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. A uma solução deste ácido (0,47 g, 1,64 mmol) em DMSO (4 mL), PyBOP (1,26 g, 2,43 mmols) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 15 min. Em seguida, 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,49 g, 3,28 mmols) foi adicionada e a reação agitada durante a noite. Em conclusão, água foi adicionada e a camada aquosa extraída com MeOH/DCM a 20 %. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas e o resíduo purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica, fornecendo 2-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-6-(4-((dimetilamino)metil)fenil)isonicotinamida (0,3 g, 43,6 %)
[0725]Etapa 5: Síntese de 2-(ciclohex-]-en-1-il)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-6-(4-((dimetilamino)metil)fenil)isonicotinamida
[0726]A uma solução agitada de 2-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-6-(4-((dimetilamino)metil)fenil)isonicotinamida (0,11 g, 0,25 mmol), ácido borônico (0,059 g, 0,27 mmol) em mistura de dioxano/água (3 mL + 1,5 mL), Na2CO3 (0,098 g, 3,6 mmols) foi adicionado e a massa de reação purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (0,028 g, 0,025 mmol) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 10 min. A massa de reação foi aquecida a 100 °C durante 3 h. Em conclusão, a massa de reação foi filtrada através de celite e o leito de celite lavado com acetato de etila. Os filtrados combinados foram secos em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por coluna em gel de sílica para obter 2-(ciclo-hex-1-en-1-il)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-6-(4- ((dimetilamino)metil)fenil)isonicotinamida.
[0727]Dados Analíticos: LCMS: 471,30 (M + 1)+; HPLC: 95,64 % (@ 254 nm) (Rt; 5,661; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6. 400 MHz) δ 11,52 (s, 1H), 8,79 (t, 1H). 8,13 (s, 1H), 8,10 (d, 2H, J = 7,60 Hz), 7,81 (s, 1H), 7,41 (d, 2H, J = 7,60 Hz), 6,90 (bs, 1H), 5,88 (s, 1H), 4,34 (d, 2H, J = 4,8 Hz), 3,44 (s, 2H), 2,56 (bs, 2H), 2,26 (bs, 2H), 2,18 (s, 3H), 2,17 (s, 6H), 2,12 (s, 3H), 1,80 - 1,72 (m, 2H), 1,68 - 1,60 (m, 2H).
[0728]Exemplo 6: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)- 2-(4-((dimetilamino)metil)fenil)-6-(piperidin-1-il)isonicotinamida
Figure img0085
[0729]Etapa 1: Síntese de 2-cloro-6-(piperidin-1-il)isonicotinato de metila
[0730]Uma solução de 2,6-dicloroisonicotinato de metila (1 g, 4,85 mmols), piperidina (0,61 7,28 mmols), K2CO3 (1,38 g, 9,7 mmols) em acetonitrila (20 mL) foi aquecida a 90 °C durante 20 h. Depois da conclusão da reação, a massa de reação foi filtrada, o filtrado concentrado e purificado por coluna para obter 2-cloro-6- (piperidin-1-il)isonicotinato de metila puro (1,23 g, 90 %).
[0731]Etapa 2: Síntese de 2-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-6-(piperidin-1-il)isonicotinamida
[0732]A uma solução de 2-cloro-6-(piperidin-1-il)isonicotinato de metila (1,1 g, 4,33 mmols) em etanol (10 mL), NaOH (0,207 g, 5,196 mmols), dissolvido em água (2 mL), foi adicionado e a massa de reação aquecida a 60 °C durante 1 h. Em conclusão, o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi lavado com éter e acidificado com HCl 1 N até o pH 8 e depois com ácido cítrico até o pH 5 a 6. O sólido obtido foi filtrado, lavado com água e finalmente seco sob pressão reduzida para fornecer o ácido (0,92 g, 89 %) que foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. A uma solução deste ácido (0,9 g, 3,75 mmols) em DMSO (10 mL), PyBOP (3,9 g, 7,5 mmols) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 15 min. Em seguida, 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (1,5 g, 10 mmols) foi adicionada e a reação agitada durante a noite. Em conclusão, água foi adicionada e o sólido que precipitou foi filtrado, lavado com água e seco para obter 2-cloro-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-6-(piperidin-1-il)isonicotinamida (1 g, 74 %).
[0733]Etapa 3: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2- (4- formilfenil)-6-(piperidin-1-il)isonicotinamida
[0734]A uma solução agitada de 2-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-6-(piperidin-1-il)isonicotinamida (0,6 g, 1,6 mmol), ácido borônico (0,263 g, 1,76 mmol) em mistura de dioxano/água (15 mL + 5 mL), Na2CO3 (0,61 g, 5,76 mmols) foi adicionado e a massa de reação purgada durante 15 min com argônio. Em seguida, Pd(PPh3)4 (0,184 g, 0,16 mmol) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 10 min. A massa de reação foi aquecida a 100 °C durante 3 h. Em conclusão, a massa de reação foi filtrada através de celite e o leito de celite lavado com acetato de etila. Os filtrados combinados foram secos em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por coluna em gel de sílica para obter N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-2-(4-formilfenil)-6-(piperidin-1-il)isonicotinamida (0,5 g, 71 %).
[0735]Etapa 4: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2- (4-((dimetilamino)metil)fenil)-6-(piperidin-1-il)isonicotinamida
[0736]A uma solução de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2- (4- formilfenil)-6-(piperidin-1-il)isonicotinamida (0,2 g, 0,45 mmol) em metanol (12 mL), dimetil amina (2,6 mL, 4,5 mmols, solução 2 M em THF) e ácido acético (0,02 g, 0,45 mmol) foram adicionados e a massa de reação agitada na temperatura ambiente durante 90 min. Em seguida, a massa de reação foi esfriada a 0 °C e cianoboro-hidreto de sódio (0,056 g, 0,9 mmol) foi adicionado. A reação foi agitada a 0 °C durante 2 h e depois agitada na temperatura ambiente durante a noite. Em conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida, o resíduo tratado com água e extraído com acetato de etila. As camadas de acetato de etila combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica, obtendo N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-2-(4-((dimetilamino)metil)fenil)-6-(piperidin-1-il)isonicotinamida como sólido verde claro (0,173 g, 79 %).
[0737]Dados Analíticos: LCMS: 474,30 (M + 1)+; HPLC: 99,15 % (@ 254 nm) (Rt; 5,257; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 -12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,50 (s, 1H), 8,61 (t, 1H, J = 4,4 Hz), 8,03 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,52 (s, 1H), 7,40 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 7,13 (s, 1H), 5,87 (s, 1H), 4,32 (d, 2H, J = 4 Hz), 3,63 (bs, 6H), 2,26 (bs, 6H), 2,18 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,59 (bs, 6H).
[0738]Exemplo 7: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-2-(4-((dimetilamino)metil)fenil)-6-(isopropilamino)isonicotinamida
Figure img0086
[0739]Etapa 1: Síntese de 2-cloro-6-(isopropilamino)isonicotinato de metila
[0740]Uma solução de 2,6-dicloroisonicotinato de metila (1 g, 4,85 mmols), isopropil amina (0,286 g, 4,85 mmols), CS2CO3 (2,06 g, 6,3 mmols) em tolueno (30 mL) foi purgada com argônio durante 10 min. Em seguida, Pd(OAc)2 (0,108 g, 0,485 mmol) e BINAP (0,3 g, 0,485 mmol) foram adicionados e argônio foi purgado novamente durante 15 min. A massa de reação foi agitada a 80 °C durante 6 h. Em conclusão, a massa de reação foi filtrada e o resíduo completamente lavado com acetato de etila. Os filtrados combinados foram concentrados e purificados por coluna em gel de sílica para obter 2-cloro-6-(isopropilamino)isonicotinato de metila puro (0,3 g, 27,27 %).
[0741]Etapa 2: Síntese de 2-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-6-(isopropilamino)isonicotinamida
[0742]A uma solução de 2-cloro-6-(isopropilamino)isonicotinato de metila (0,393 g, 1,7 mmol) em etanol (4 mL), NaOH (0,082 g, 2,06 mmols), água (0,8 mL) foram adicionados e a massa de reação aquecida a 60 °C durante 1 h. Em conclusão, o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi lavado com éter e acidificado com HCl 1 N até o pH 8 e depois com ácido cítrico até o pH 5 a 6. O sólido obtido foi filtrado, lavado com água e finalmente seco sob pressão reduzida para fornecer o ácido (0,36 g, 97 %) que foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. A uma solução deste ácido (0,36 g, 1,68 mmol) em DMSO (1,5 mL), PyBOP (1,3 g, 2,5 mmols) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 15 min. Em seguida, 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,383 g, 2,5 mmol) foi adicionada e a reação agitada durante a noite. Em conclusão, água foi adicionada e a camada aquosa extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas em sulfato de sódio e concentradas para obter 2-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-6- (isopropilamino)isonicotinamida bruta (0,58 g, 100 %) que foi usada na etapa seguinte sem purificação adicional.
[0743]Etapa 3: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2- (4- formilfenil)-6-(isopropilamino)isonicotinamida
[0744]A uma solução agitada de 2-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-6-(isopropilamino)isonicotinamida (0,58 g, 1,67 mmol), ácido borônico (0,277 g, 1,84 mmol) em mistura de dioxano/água (7 mL + 3 mL), Na2CO3 (0,64 g, 6,037 mmols) foi adicionado e a massa de reação purgada durante 15 min com argônio. Em seguida, Pd(PPh3)4 (0,194 g, 0,168 mmol) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 10 min. A massa de reação foi aquecida a 100 °C durante 3 h. Em conclusão, a massa de reação foi filtrada através de celite e o leito de celite lavado com acetato de etila. Os filtrados combinados foram secos em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por coluna em gel de sílica para obter N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-2-(4-formilfenil)-6-(isopropilamino)isonicotinamida (0,6 g, 85,7 %).
[0745]Etapa 4: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2- (4-((dimetilamino)metil)fenil)-6-(isopropilamino)isonicotinamida
[0746]A uma solução de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2- (4- formilfenil)-6-(isopropilamino)isonicotinamida (0,6 g, 1,44 mmol) em metanol (6 mL), dimetil amina (7,1 mL, 14,33 mmols, solução 2 M em THF) e ácido acético (0,086 g, 1,44 mmol) foram adicionados e a massa de reação agitada na temperatura ambiente durante 1 h. Em seguida, cianoboro-hidreto de sódio (0,18 g, 2,8 mmols) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 2 h. Em conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida, o resíduo tratado com água e extraído com acetato de etila. As camadas de acetato de etila combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por HPLC prep., obtendo Síntese de molécula alvo de N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-(4-((dimetilamino)metil)fenil)-6- (isopropilamino)isonicotinamida como sólido amarelo claro.
[0747]Dados Analíticos: LCMS: 448,25 (M + 1)+; HPLC: 96,22 % (@ 254 nm) (Rt; 4,170, Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (CD3OD, 400 MHz) δ 8,01 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,67 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,39 (s, 1H), 7,19 (s, 1H), 6,14 (s, 1H), 4,50 (s, 2H), 4,40 (s, 2H), 4,17 - 4,11 (m, 1H), 2,89 (s, 6H), 2,38 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 1,33 (d, 6H, J = 6H).
[0748]Exemplo 8: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-2-metil-3-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H- pirazol-4-il)benzamida
Figure img0087
[0749]Etapa 1: Síntese de 5-bromo-2-metil-3-((tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)benzoato de metila
[0750]A uma solução agitada de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metila (2,5 g, 10,2 mmols) e di-hidro-2H-piran-4(3H)-ona (1,3 g, 13,3 mmols) em metanol (20 mL), ácido acético (0,61 g, 10,2 mmols) foi adicionado e a solução foi agitada na temperatura ambiente durante 1 8 h. Em seguida, cianoboro-hidreto de sódio (1,2 g, 20,48 mmols) foi adicionado a 0 °C e a agitação foi continuada durante a noite na temperatura ambiente. Em seguida, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material bruto foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer 5-bromo-2- metil-3-((tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzoato de metila (2,2 g, 66 %).
[0751]Etapa 2: Síntese de 5-bromo-2-metil-3-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)benzoato de metila
[0752]A uma solução agitada de 5-bromo-2-metil-3-((tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)benzoato de metila (1,0 g, 3,15 mmols) em acetonitrila (15 mL), carbonato de césio (1,97 g, 6,10 mmols) e iodeto de metila (2,15 g, 15,27 mmols) foram adicionados; a solução resultante foi aquecida a 80 °C durante 20 h. A solução foi esfriada até a temperatura ambiente, filtrada e o resíduo foi lavado com acetato de etila. O filtrado foi concentrado e o produto purificado por cromatografia em coluna para fornecer 5- bromo-2-metil-3-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzoato de metila (0,82 g, 80 %).
[0753]Etapa 3: Síntese de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-2-metil-3-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzamida
[0754]NaOH aquoso (0,19 g, 4,89 mmols) foi adicionado a uma solução de 5- bromo-2-metil-3-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzoato de metila (0,82 g, 2,4 mmols) em MeOH (20 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Etanol foi removido sob pressão reduzida e a solução acidificada usando HCl diluído ao pH 6 e ácido cítrico ao pH 4. O produto foi extraído com acetato de etila e as camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas para fornecer o ácido respectivo (0,70 g). O ácido depois foi dissolvido em DMSO (3 mL) e 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)- ona (0,74 g, 4,89 mmols) foi adicionada ao mesmo. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 15 min, em seguida, PYBOP (1,9 g, 3,6 mmols) foi adicionado à mesma e a agitação foi continuada durante a noite. A solução foi vertida em gelo para obter um sólido, este foi filtrado e lavado com acetonitrila, seguido por purificação com cromatografia em coluna para fornecer 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2- oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)benzamida (0,6 g, 54 %).
[0755]Etapa 4: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2- metil-3-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4- il)benzamida
[0756]A uma solução agitada de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzamida (1 equiv.) e 4-(2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol-1- il)etil)morfolina (1,2 equiv.) em mistura de dioxano/água (5 mL + 1 mL), Na2CO3 (3,6 equiv.) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (0,1 equiv.) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 10 min. A solução foi aquecida a 100 °C durante 4 h. A mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer a N- ((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(tetra-hidro-2H-piran- 4-il)amino)-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4-il)benzamida desejada (0,045 g, 36,9 %).
[0757]LCMS: 563,00 (M + 1)+; HPLC % 99,26 (@ 254 nm) (Rt; 3,774; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL., Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,17 (s, 1H), 8,06 (t, 1H, J = 4,8 Hz), 7,82 (s, 1H), 7,29 (s, 1H), 7,11 (s, 1H), 5,87 (s, 1H), 4,27 (d, 2H, J = 4,8 Hz), 4,21 (t, 2H, J = 6,4 Hz), 3,85 (d, 2H, J = 11,2 Hz), 3,54 (t, 4H), 3,23 - 3,26 (m, 2H), 2,99 (m, 1H), 2,72 (t, 2H, J = 6,4 Hz), 2,60 (s, 3H), 2,40 (bs, 4H), 2,20 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,58 - 1,59 (m, 4H).
[0758]Exemplo 9: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-2-metil-3-(metil(tetra-hidro-2H- piran-4-il)amino)-5-(1-metil-1H-pirazol-4- il)benzamide
Figure img0088
[0759]A uma solução agitada de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3 metil)-2-metil-3-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzamida (1 equiv.) e 1-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (1,2 equiv.) em mistura de dioxano/água (5 mL + 1 mL), Na2CO3 (3,6 equiv.) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (0,1 equiv.) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 10 min. A solução foi aquecida a 100 °C durante 4 h. A mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer N-((4,6-dimetil- 2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-5- (1-metil-1H-pirazol-4-il)benzamida desejada (0,02 g, 20 %).
[0760]LCMS: 464,30(M + 1)+; HPLC % 97,80 (@ 254 nm) (Rt; 4,286; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL,. Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de fluxo: 1,4 mL/min.: Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,12 (s, 1H), 8,06 (t, 1H), 7,81 (s, 1H), 7,28 (s, 1H), 7,10 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,27 (d, 2H, J = 4,8 Hz), 3,83 - 3,86 (m, 5H), 3,23 - 3,29 (m, 2H), 2,99 (m, 1H), 2,59 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,58 (m, 4H).
[0761]Exemplo 10: Síntese de 3-(ciclo-hexil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-metil-1 H-pirazol-4-il)benzamide
Figure img0089
[0762]Etapa 1: Síntese de 5-bromo-3-(ciclo-hexilamino)-2-metilbenzoato de metila
[0763]A uma solução agitada de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metila (5,0 g, 20,6 mmols) e ciclo-hexanona (4,03 g, 41,2 mmols) em metanol (50 mL), ácido acético (0,247 g, 20,6 mmols) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 3 h. Em seguida, cianoboro-hidreto de sódio (1,55 g, 24,6 mmols) foi adicionado e a reação agitada durante a noite. Em conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material bruto foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer 5-bromo-3-(ciclo-hexilamino)-2-metilbenzoato de metila (2,75 g, 41 %).
[0764]Etapa 2: Síntese de 5-bromo-3-(ciclo-hexil (metil)amino)-2-metilbenzoato de metila
[0765]A uma solução agitada de 5-bromo-3-(ciclo-hexilamino)-2-metilbenzoato de metila (2,75 g, 8,45 mmols) em acetonitrila (25 mL), carbonato de césio (5,45 g, 16,9 mmols) e iodeto de metila (6 g, 42,3 mmols) foram adicionados; a solução resultante foi aquecida a 80 °C durante 20 h. Em conclusão, a solução foi esfriada até a temperatura ambiente e filtrada, e o resíduo foi lavado com acetato de etila. O filtrado foi concentrado e depois purificado por cromatografia em coluna para fornecer 5- bromo-3-(ciclo-hexil(metil)amino)-2-metilbenzoato de metila (2,5 g, 87 %).
[0766]Etapa 3: Síntese de 5-bromo-3-(ciclo-hexil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil- 2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
[0767]NaOH aquoso (0,55 g, 14,7 mmols) foi adicionado a uma solução de 5- bromo-3-(ciclo-hexil(metil)amino)-2-metilbenzoato de metila (2,5 g, 7,35 mmols) em MeOH (15 mL) e agitado a 60 °C durante 1 h. Depois da conclusão da reação, etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado usando HCl diluído ao pH 6 e ácido cítrico ao pH 4. O produto foi extraído com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas para fornecer o ácido respectivo (2,5 g, 87 %). O ácido depois foi dissolvido em DMSO (20 mL) e 3-(amino metil)-4,6- dimetilpiridin-2(1H)-ona (2,34 g, 15,1 mmols) foi adicionada ao mesmo. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 15 min antes que PYBOP (5,85 g, 11,05 mmols) tenha sido adicionado à mesma e a agitação foi continuada durante a noite. Em seguida, a reação foi vertida em gelo para obter um sólido que foi coletado por filtração e lavado com acetonitrila. A purificação em coluna em sílica forneceu 5- bromo-3-(ciclo-hexil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 2-metilbenzamida (1,5 g, 44,19 %).
[0768]Etapa 4: Síntese de 3-(ciclo-hexil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2- di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzamida
[0769]A uma solução agitada de 5-bromo-3-(ciclo-hexil(metil)amino)-N-((4,6- dimetil- 2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (1 equiv.) e 1-metil-4- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (1,2 equiv.) em mistura de dioxano/água (5 mL + 1 mL), Na2CO3 (3,6 equiv.) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd (PPh3)4 (0,1 equiv.) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 10 min. A reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. Depois do esfriamento, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto. A purificação por cromatografia em coluna em gel de sílica forneceu o composto do título (0,02 g, 20 %).
[0770]LCMS: 462,40(M + 1)+; HPLC % 88,48 (@ 254 nm) (Rt; 4,683; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,11 (s, 1H), 8,06 (t, 1H), 7,79 (s, 1H), 7,22 (s, 1H), 7,06 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,26 (d, 2H, J = 4 Hz), 3,83 (s, 3H), 2,71 (t, 1H), 2,60 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,69 (m, 4H), 1,53 - 1,55 (m, 1H), 1,39 - 1,41 (m, 2H), 1,06 - 1,19 (m, 3H).
[0771]Exemplo 11: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-4-metil-5-(metil(piperidin-4-il)amino)-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamide
Figure img0090
[0772]Etapa 1: Síntese de 4-((5-bromo-3-(metoxicarbonil)amino)piperidino-1- carboxilato de terc-butila
[0773]A uma solução agitada de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metila (5,0 g, 20,6 mmol) e 4-oxopiperidino-1-carboxilato de terc-butila (8,2 g, 41,1 mmols) em metanol (50 mL), ácido acético (1,2 g, 20,6 mmols) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 8 h. Em seguida, cianoboro-hidreto de sódio (1,55 g, 24,6 mmols) foi adicionado a 0 °C e a reação agitada durante a noite na temperatura ambiente. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer 4-((5-bromo-3- (metoxicarbonil)amino)piperidino-1-carboxilato de terc-butila (5,0 g, 57 %).
[0774]Etapa 2: Síntese de 4-((5-bromo-3-(metoxicarbonil)-2- metilfenil(metil)amino) piperidino-1-carboxilato de terc-butila
[0775]A uma solução agitada de 4-((5-bromo-3- (metoxicarbonil)amino)piperidino-1-carboxilato de terc-butila (3,0 g, 7,06 mmols) em acetonitrila (25 mL), carbonato de césio (4,57 g, 14,1 mmols) e iodeto de metila (5,0 g, 35,2 mmols) foram adicionados. A reação foi aquecida a 80 °C durante 20 h. Em seguida, a reação foi esfriada até a temperatura ambiente e filtrado, lavando com acetato de etila. O filtrado foi concentrado e o produto purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer 4-((5-bromo-3-(metoxicarbonil)-2-metilfenil (metil)amino) piperidino-1-carboxilato de terc-butila (2,5 g, 81 %).
[0776]Etapa 3: Síntese de 4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2- di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino) piperidin-1-carboxilato de terc-butila
[0777]NaOH aquoso (0,37 g, 9,38 mmols) foi adicionado a uma solução de 4- ((5-bromo-3-(metoxicarbonil)-2-metilfenil(metil)amino)piperidino-1-carboxilato de terc- butila (2,0 g, 4,69 mmols) em MeOH (20 mL) e agitado a 60 °C durante 1 h. Depois da conclusão da reação, etanol foi removido sob pressão reduzida e a solução acidificada usando HCl diluído ao pH 6 e ácido cítrico ao pH 4. O produto foi extraído usando acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas para fornecer o ácido respectivo (1,7 g, 90 %). O ácido depois foi dissolvido em DMSO (10 mL) e 3-(amino metil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (1,42 g, 9,38 mmols) foi adicionado ao mesmo. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 15 min antes que PYBOP (3,66 g, 7,04 mmols) tenha sido adicionado à mesma e a agitação foi continuada durante a noite. Depois da conclusão, a massa de reação foi vertida em gelo para obter o sólido, este foi filtrado e lavado com acetonitrila, seguido por purificação com cromatografia em coluna para fornecer 4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil- 2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil) (metil)amino) piperidin-1- carboxilato de terc-butila (1,3 g, 50 %).
[0778]Etapa 4: Síntese de 4-((5-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)carbamoil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-il)(metil)amino)piperidino- 1-carboxilato de terc-butila
[0779]A uma solução agitada de 4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)piperidin-1-carboxilato de terc-butila (1 equiv.) e 4-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzil)morfolina (1,2 equiv.) em mistura de dioxano/água (5 mL + 1 mL), Na2CO3 (3,6 equiv.) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (0,1 equiv.) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 10 min. A reação foi aquecida a 100 °C durante 5 h. Depois do esfriamento, a mistura de reação foi diluída com água, e o produto foi extraído com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer 4-((5-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)carbamoil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-il)(metil)amino)piperidino- 1-carboxilato de terc-butila
[0780]Etapa 5: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4- metil-5-(metil(piperidin-4-il)amino)-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida
[0781]Uma solução agitada de 4-((5-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)carbamoil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-il)(metil)amino)piperidino- 1-carboxilato de terc-butila (1 mmol) em DCM (5 mL) foi esfriada a 0 °C e TFA (2 mL) foi adicionado à mesma. A reação foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h. Em conclusão, a solução foi concentrada à secura. O resíduo foi purificado por lavagens com solvente para fornecer o composto do título (0,07 g, 86 %).
[0782]LCMS: 558,45 (M + 1)+; HPLC % 98,81(@ 254 nm) (Rt;4,009; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 10,1 (bs, 1H), 8,51 (d, 1H), 8,16 (t, 2H), 7,77 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,57 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,42 (s, 1H), 7,26 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,33 (bs, 2H), 4,29 (d, 2H, J = 19,2 HZ), 3,96 (m, 2H), 3,25 (m, 4H), 3,15 (m, 4H), 2,89 - 2,91 (m, 2H), 2,64 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,81 (m, 4H).
[0783]Exemplo 12: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-4-metil-5-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-(morfolinometil)-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida
Figure img0091
[0784]A uma solução agitada de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzamida (1 equiv.) e 4-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzil)morfolina (1,2 equiv.) em mistura de dioxano/água (5 mL+ 1 mL), Na2CO3 (3,6 equiv.) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (0,1 equiv.) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 10 min. A solução foi aquecida a 100 °C durante 4 h. A mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer o composto do título (0,065 g, 55 %). LCMS: 559,35 (M + 1)+; HPLC 99,26 % (@ 254 nm) (Rt;3,983; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,15 (t, 1H), 7,58 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,36 (d, 3H, J = 8,4 Hz), 7,18 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,8 Hz), 3,84 (d, 2H, J = 11,2 Hz), 3,57 (m, 3H), 3,48 (m, 3H), 3,24 (m, 2H), 3,40 (m, 1H), 2,63 (s, 3H), 2,36 (m, 4H), 2,23 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,60 (m, 4H).
[0785]Exemplo 13: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-5-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida
Figure img0092
[0786]A uma solução agitada de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzamida (1 equiv.) e N,N- dimetil-1-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)metanamina (1,2 equiv.) em mistura de dioxano/água (5 mL + 1 mL), Na2CO3 (3,6 equiv.) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (0,1 equiv.) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 10 min. A solução foi aquecida a 100 °C durante 4 h. A mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer o composto do título (0,01 g, 9 %). LCMS: 517,30 (M + 1)+; HPLC % 98,12(@ 254 nm) (Rt; 3,972; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,16 (t, 1H), 7,58 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,34 - 7,36 (m, 2H), 7,18 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4 Hz), 3,84 (d, 2H, J = 10,8 Hz), 3,42 (s, 2H), 3,02 (m, 2H), 2,66 (m, 1H), 2,63 (s, 3H), 2,50 (3H ligado em pico de solvente), 2,23 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,60 (m, 4H).
[0787]Exemplo 14: Síntese de 5-(ciclo-hexil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida
Figure img0093
[0788]A uma solução agitada de 5-bromo-3-(ciclo-hexil(metil)amino)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (1 equiv.) e ácido (4- (morfolinometil) fenil) borônico (1,2 equiv.) em mistura de dioxano/água (5 mL + 1 mL), Na2CO3 (3,6 equiv.) foi adicionado e a solução foi purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd (PPh3)4 (0,1 equiv.) foi adicionado e a solução foi purgada novamente durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. Em conclusão, a mistura foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer o composto do título (0,070 g, 29 % de rendimento). LCMS: 557,40 (M + 1)+; HPLC % 98,83(@ 254 nm) (Rt; 4,303; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,15 (t, 1H, J = 4 Hz), 7,56 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,36 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,28 (s, 1H), 7,13 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,57 (m, 4H), 3,48 (s, 2H), 2,74 (t, 1H), 2,64 (s, 3H), 2,36 (m, 4H), 2,20 (s, 6H), 2. 10 (s, 3H), 1,69 - 1,71 (m, 3H), 1,53 - 1,56 (m, 2H). 1,41 - 1,44 (m, 2H), 1,10 - 1,23 (m, 3H).
[0789]Exemplo 15: Síntese de 3-(Ciclo-hexil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2- oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4- il)benzamide
Figure img0094
[0790]A uma solução agitada de 5-bromo-3-(ciclo-hexil(metil)amino)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (1 equiv.) e ácido (1-(2- morfolinoetil)-1H-pirazol-4-il) borônico (1,2 equiv.) em mistura de dioxano/água (5 mL + 1 mL), Na2CO3 (3,6 equiv.) foi adicionado e a solução foi purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd (PPh3)4 (0,1 equiv.) foi adicionado e a solução foi purgada novamente durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. Em conclusão, a mistura foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %). As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer o composto do título (0,06 g, 25 % de rendimento). LCMS: 561,35 (M + 1)+; HPLC % 96,87(@ 254 nm) (Rt; 4,209; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,44 (s, 1H), 8,15 (s, 1H), 8,06 (t, 1H), 7,81 (s, 1H), 7,22 (s, 1H), 7,06 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,8 Hz), 4,21 (t, 2H, J = 6 Hz), 3,54 (m, 4H), 2,72 (t, 2H, J = 6,8 Hz), 2,61 (s, 3H), 2,40 (m, 4H), 2,20 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,70 (m, 4H), 1,53 - 1,56 (m, 3H), 1,10- 1,23 (m, 4H).
[0791]Exemplo 16: Síntese de 5-(Ciclo-hexil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2- oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3- carboxamide
Figure img0095
[0792]A uma solução agitada de 5-bromo-3-(ciclo-hexil(metil)amino)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (1 equiv.) e ácido (4- ((dimetilamino)metil)fenil) borônico (1,2 equiv.) em mistura de dioxano/água (5 mL + 1 mL), Na2CO3 (3,6 equiv.) foi adicionado e a solução foi purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd (PPh3)4 (0,1 equiv.) foi adicionado e a solução foi purgada novamente durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. Em conclusão, a mistura foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer o composto do título (0,065 g, 29 % de rendimento). LCMS: 515,40 (M + 1)+; HPLC % 96,73(@ 254 nm) (Rt; 4,362; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,16 (t, 1H), 7,64 (d, 2H, J = 6,8 Hz), 7,45 (d, 2H), 7,30 (s, 1H), 7,16 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 2,75 (t, 1H), 2,65 (s, 3H), 2,32 - 2,42 (m, 6H), 2,20 (s, 6H), 2,10 (s, 3H), 1,69 (m, 4H), 1,53 - 1,56 (m, 1H), 1,42- 1,45 (m, 2H), 1,10 - 1,23 (m, 4H). [1H ligado em pico de solvente].
[0793]Exemplo 17: Síntese de 3-(Ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2- oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamide
Figure img0096
[0794]Etapa 1: Síntese de 3-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2- di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamida.
[0795]A uma solução agitada de 5-bromo-3-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6- dimetil- 2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0,5 g, 1,12 mmol) e ácido (6-formilpiridin-3-il)borônico (0,39 g, 1,68 mmol) em mistura de dioxano/água (15 mL + 3 mL), Na2CO3 (0,42 g, 4,09 mmols) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (0,130 g, 0,112 mmol) foi adicionado e a mistura foi purgada novamente durante 10 min. A massa de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer o composto do título (0,35 g, 66 % de rendimento).
[0796]Etapa 2: Síntese de 3-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2- di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
[0797]A uma solução agitada do composto 3-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamida (1 equiv.) e morfolina (5 equiv.) em metanol (10 mL), ácido acético (2 equiv.) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 18 h. Em seguida, cianoboro-hidreto de sódio (2,5 equiv.) foi adicionado a 0 °C e a reação agitada durante a noite na temperatura ambiente. Em conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material bruto foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer composto e o material bruto que foi purificado por HPLC preparativa, fornecendo o composto do título como um sal de TFA, (0,022 g, 22 %). LCMS: 544,35 (M + 1)+; HPLC % 98,42(@ 254 nm) (Rt; 4,143; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,75 (s, 1H), 8,17 (t, 1H), 8,01 (d, 1H, J = 7,6) 7,50 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 7,42 (s, 1H), 7,22 (s, 1H), 7,06 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H), 3,59 - 3,61 (m, 8H), 3,35 - 3,37 (m, 2H), 2,66 (s, 1H), 2,55 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,72 (m, 2H), 1,61 (m, 2H), 1,48 (m, 4H).
[0798]Exemplo 18: Síntese de 3-(Ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2- oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4- il)benzamide
Figure img0097
[0799]Uma solução de 5-bromo-3-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2- oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (1 equiv.), ácido (1-(2- morfolinoetil)- 1H- pirazol-4-il) borônico (1,2 equiv.) e Pd (PPh3)4 (0,1 equiv.) em 1, 4- dioxano (4 mL) foi purgada com argônio durante 10 min. Em seguida, 2 M Na2CO3 solução (3,6 equiv.) foi adicionada à mesma e a mistura foi purgada novamente durante 10 min. A mistura de reação foi agitada a 100 °C durante 2 h. Depois da conclusão da reação, água foi adicionada à mesma e a extração foi realizada usando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas em anidro Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica (tamanho da malha 60 a 120) para fornecer o composto do título (0,08 g, 66 %). LCMS: 547,35 (M + 1)+; HPLC % 97,60(@ 254 nm) (Rt; 4,071; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,44 (s, 1H), 8,17 (s, 1H), 8,05 (t, 1H), 7,81 (s, 1H), 7,30 (s, 1H), 7,10 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,26 (d, 2H, J = 4 Hz), 4,20 (d, 2H, J = 6,4 Hz), 3,49 - 3,53 (m, 6H), 2,72 (t, 2H), 2,40 (bs, 6H), 2,20 (s, 3H), 2,17 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,61 - 1,70 (m, 4H), 1,42- 1,50 (m, 4H).
[0800]Exemplo 19: Síntese de 3-(Ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2- oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzamide
Figure img0098
[0801]Uma solução de 5-bromo-3-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2- oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (1 equiv.), ácido (1-metil-1H- pirazol-4-il) borônico (1,2 equiv.) e Pd (PPh3)4 (0,1 equiv.) em 1, 4-dioxano (4 mL) foi purgada com argônio durante 10 min. Em seguida, solução de Na2CO3 2 M (3,6 equiv.) foi adicionada à mesma e a mistura foi purgada novamente durante 10 min. A mistura de reação foi agitada a 100 °C durante 2 h. Depois da conclusão da reação, água foi adicionada e a extração foi realizada usando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas em Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica (tamanho da malha 60 a 120) para fornecer o composto do título (0,07 g, 70 %) LCMS: 448,25 (M + 1)+; HPLC % 98,34(@ 254 nm) (Rt; 4,578; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSOd6, 400 MHz) δ 11,44 (s, 1H), 8,11 (s, 1H), 8,05 (t, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,29 (s, 1H), 7,09 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,26 (d, 2H, J = 3,2 Hz), 3,83 (s, 3H), 3,49 (m, 1H), 2,20 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,69 (m, 2H), 1,60 (m, 2H), 1,42- 1,49 (m, 4H). [3H ligado em pico de solvente].
[0802]Exemplo 20: Síntese de 5-(((1s,4s)-4-acetamidociclo-hexil)(metil)amino)- N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida
Figure img0099
[0803]Etapa 1: Síntese de ácido 5-bromo-2-metil-3-nitro benzoico
[0804]A uma solução agitada de ácido 2-metil-3-nitrobenzoico (50 g, 276,2 mmols) em H2SO4 conc. (200 mL) foi adicionada 1,3-dibromo-5,5-dimetil-2,4- imidazolidinodiona (43,4 g, 151,8 mmols) às porções na temperatura ambiente e a mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 5 h. Em conclusão, a mistura de reação foi vertida em água gelada, o precipitado resultante foi filtrado, o resíduo foi lavado com água e seco sob vácuo para fornecer ácido 5-bromo-2-metil-3- nitro benzoico (71,7 g, 99,9 %) que foi usado diretamente na etapa seguinte.
[0805]Etapa 2: Síntese de 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoato de metila
[0806]A uma solução agitada de ácido 5-bromo-2-metil-3-nitro benzoico (287 g, 1103 mmols) em DMF (150 mL) foi adicionado carbonato de sódio (468 g, 4415 mmols) e iodeto de metila (626,63 g, 4415 mmols). A mistura de reação resultante foi aquecida a 60 °C durante 8 h. Em conclusão, o sólido precipitado foi coletado por filtração, o resíduo lavado com éter dietílico (5 vezes). As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas sob pressão reduzida para fornecer metila 5- bromo-2-metil-3-nitrobenzoato (302 g, 99 %) que foi usado diretamente na etapa seguinte.
[0807]Etapa 3: Síntese de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metila
[0808]A uma solução agitada de 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoato de metila (150 g, 544 mmols) em etanol (750 mL) foi adicionado cloreto de amônio (150 g, 2777 mmols) dissolvido em água (750 mL) e pó de ferro (93,3 g, 1636 mmols) com agitação. A mistura de reação resultante foi aquecida a 80 °C durante 7 h. Em conclusão, a mistura de reação foi filtrada através de celite; o resíduo foi lavado com água e acetato de etila, o filtrado foi extraído com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas sob pressão reduzida para fornecer 3-amino-5-bromo-2- metilbenzoato de metila que foi usado diretamente na etapa seguinte.
[0809]Etapa 4: Síntese de 5-bromo-3-((4-((terc-butoxicarbonil)-amino)-ciclo- hexil)-amino)-2-metilbenzoato de metila
[0810]A uma solução agitada de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metila (5 g, 20,57 mmols) e (4-oxociclo-hexil)carbamato de terc-butila (5,6 g, 26,7 mmols) em metanol (50 mL) foi adicionado ácido acético (1,2 g, 20,57 mmols) e a mistura da reação agitada na temperatura ambiente durante 8 h. Em seguida, cianoboro-hidreto de sódio (1,6 g, 26,74 mmols) foi adicionado a 0 °C e a reação agitada durante a noite. Em conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material bruto foi purificado por cromatografia em coluna duas vezes eluindo com acetato de etila: hexano para fornecer 5-bromo-3-((4-((terc-butoxicarbonil)-amino)-ciclo-hexil)-amino)- 2-metilbenzoato de metila 4 g (44 %) de isômero não polar (isômero cis, contaminado com material de partida) e 3 g (33 %) de isômero polar puro (isômero trans).
[0811]Etapa 5: Síntese de 5-bromo-3-((1s,4s)-(4-((terc-butoxicarbonil)-amino)- ciclo-hexil)-(metil)-amino)-2-metilbenzoato de metila
[0812]A uma solução agitada de isômero cis de 5-bromo-3-((4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoato de metila (4 g, 9,09 mmols) em acetonitrila (50 mL) foi adicionado carbonato de césio (5,9 g, 18,18 mmol) e iodeto de metila (6,45 g, 45,45 mmols). A mistura de reação resultante foi aquecida a 80 °C durante 7 h. Em conclusão, a mistura de reação foi esfriada até a temperatura ambiente e filtrada, o resíduo foi lavado com acetato de etila e o filtrado concentrado em seguida, purificado por cromatografia em coluna para fornecer 4,0 g (44 %) do isômero cis menos polar, 5-bromo-3-(((1s,4s)-4-((terc-butoxicarbonil)-amino)- ciclohexil)-amino)-2-metilbenzoato) de metila e 3,0 g (33 %) de mais polar isômero trans, 5- bromo-3-(((1r,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)-amino)-ciclo-hexil)-amino)-2- metilbenzoato de metila.
[0813]Etapa 6: Síntese de (1s,4s)-(4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-carbamoil)-2-metilfenil)-(metil)-amino)-ciclo-hexil)carbamato de terc-butila
[0814]NaOH aquoso (0,23 g, 5,72 mmols) foi adicionado a uma solução de 5- bromo-3-(((1s,4s)-4-((terc-butoxicarbonil)-amino)-ciclo-hexil)-(metil)-amino)-2- metilbenzoato de metila (1,3 g, 2,86 mmols) em MeOH (20 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Depois da conclusão da reação, etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado usando HCl diluído até o pH 6 e ajustado ao pH 4 com ácido cítrico. A extração foi realizada usando acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas para fornecer o ácido bruto (1,13 g, 90,1 %).
[0815]O ácido (1,13 g, 2,57 mmols) depois foi dissolvido em DMSO (10 mL) e 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,87 g, 5,72 mmols) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 15 min antes de PYBOP (2,23 g, 4,28 mmols) foi adicionado e a agitação foi continuada durante a noite. Depois da conclusão da reação, a mistura de reação foi vertida em gelo para obter um sólido, este foi filtrado e lavado com acetonitrila, seguido por purificação com cromatografia em coluna para fornecer (1s,4s)-(4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-carbamoil)-2-metilfenil)-(metil)-amino)-ciclo- hexil)carbamato de terc-butila (0,8 g, 48,7 %).
[0816]Etapa 7: Síntese de 3-(((1s,4s)-4-aminociclo-hexil)-(metil)-amino)-5- bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)-metil)-2-metilbenzamida
[0817]A uma solução agitada de (4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-carbamoil)-2-metilfenil)-(metil)-amino)-ciclo-hexil)-carbamato de terc-butila (0,8 g, 1,39 mmol) em DCM (25 mL) a 0 °C foi adicionado TFA (5 mL). A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h. Em conclusão, a mistura de reação foi concentrada à secura. O resíduo foi basificado com bicarbonato de sódio aquoso ao pH 8 e a camada aquosa extraída com MeOH/DCM a 20 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas para fornecer 3-(((1s,4s)-4-aminociclo-hexil)-(metil)-amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)-metil)-2-metilbenzamida (600 mg, 90,9 %).
[0818]Etapa 8: Síntese de 3-((1s,4s)-(4-acetamidociclo-hexil)-(metil)-amino)-5- bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)-metil)-2-metilbenzamida
[0819]A uma solução agitada de 3-((4-aminociclo-hexil)-(metil)-amino)-5- bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)-metil)-2-metilbenzamida (0,275, 0,580 mmol) em DMF (5 mL), foi adicionado EDCI.HCl (0,168 g, 0,870 mmol), HOBt (0,078 g, 0,58 mmol) e ácido acético (0,07 g, 1,16 mmol), a mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 18 h. Em conclusão, água foi adicionada e os orgânicos extraídos com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas fornecendo material bruto que em seguida, purificado por cromatografia em coluna para fornecer 3-(((1s,4s)-4-acetamidociclo-hexil)-(metil)- amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)-metil)-2-metilbenzamida (0,25 g, 83,6 %).
[0820]Etapa 9: Síntese de 5-(((1s,4s)-4-acetamidociclo-hexil)(metil)amino)-N- ((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida
[0821]A uma solução agitada de 3-((4-acetamidociclo-hexil)-(metil)-amino)-5- bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)-metil)-2-metilbenzamida (1 equiv.) e 4-(4-(4, 4, 5, 5-tetrametil-1, 3, 2-dioxaborolan-2-il)benzil) morfolina (1,2 equiv.) em mistura de dioxano/água (5 mL + 1 mL) foi adicionado Na2CO3 (3,6 equiv.) e a solução purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (0,1 equiv.) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer o composto do título (0,06 g, 50,8 %). LCMS: 614,40 (M + 1)+; HPLC % 99,44(@ 254 nm) (Rt; 3,948; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,17 (t, 1H), 7,76 (d, 1H, J = 7,2 Hz), 7,55 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,36 (d, 3H, J = 8 Hz), 7,16 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,71 (bs, 1H), 3,57 (m, 4H), 3,47 (s, 2H), 2,98 (m, 1H), 2,59 (s, 3H), 2,36 (m, 4H), 2,26 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,74 - 1,81 (m, 5H), 1,49 - 1,56 (m, 3H), 1,40 - 1,48 (m, 3H).
[0822]Exemplo 21: 5-(((1r,4r)-4-acetamidociclo-hexil)(metil)amino)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamida preparada na forma análogo ao Exemplo 20 a partir do isômero trans, 5- bromo-3-(((1r,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)-amino)-ciclo-hexil)-amino)-2-metilbenzoato de metila intermediário descrito no Exemplo 20.
Figure img0100
[0823]Dados Analíticos de 1258-Trans: LCMS: 614,40 (M + 1)+; HPLC % 99,64 (@ 254 nm) (Rt; 3,917; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,16 (t, 1H), 7,76 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 7,57 (d, 2H, J = 7,2 Hz), 7,36 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,29 (s, 1H), 7,14 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H), 3,57 (bs, 5H), 3,48 (m, 2H), 2,71 (m, 1H), 2,64 (s, 3H), 2,36 (m, 4H), 2,20 (s, 6H), 2,10 (s, 3H), 1,68 - 1,81 (m, 7H), 1,51 - 1,53 (m, 2H), 1,10 - 1,13 (m, 2H).
[0824]Exemplo 22: Síntese de 3-(((1s,4s)-4-acetamidociclo-hexil)(metil)amino)- N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4- il)benzamide
Figure img0101
[0825]A uma solução agitada de 3-(((1s,4s)-4-acetamidociclo-hexil)-(metil)- amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)-metil)-2-metilbenzamida (1 equiv.) e 1-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (1,2 equiv.) em mistura de dioxano/água (5 mL + 1 mL) foi adicionado Na2CO3 (3,6 equiv.) e a solução purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (0,1 equiv.) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer o composto do título (0,02 g, 20 %). LCMS: 519,40 (M + 1)+; HPLC % 96,24 (@ 254 nm) (Rt; 4,247; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,44 (s, 1H), 8,10 (s, 1H), 8,07 (t, 1H), 7,79 (s, 1H), 7,75 (d, 1H, J = 7,2 Hz), 7,27 (s, 1H), 7,09 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,27 (d, 2H, J = 4,8 Hz), 3,83 (s, 3H), 3,69 (bs, 1H), 2,96 (m, 1H), 2,56 (s, 3H), 2,20 (s, 6H), 2,10 (s, 3H), 1,81 (s, 3H), 1,74 - 1,76 (m, 2H), 1,54 (m, 2H), 1,36 - 1,46 (m 4H).
[0826]Exemplo 23 Síntese de 3-(((1r,4r)-4-acetamidociclo-hexil)(metil)amino)- N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4- il)benzamide
Figure img0102
[0827]Preparada na forma análoga ao Exemplo 22 (0,06 g, 40 %). LCMS: 519,30 (M + 1)+; HPLC % 98,21 (@ 254 nm) (Rt; 4,155; Método: Coluna: YMC ODS- A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMS0-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,12 (s, 1H), 8,07 (t, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,66 (d, 1H, J = 7,2 Hz), 7,23 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,26 (d, 2H, J = 2,8 Hz), 3,83 (s, 3H), 3,44 (m, 1H), 2,66 - 2,69 (m, 1H), 2,61 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,78 - 1,80 (m, 2H), 1,74 (s, 3H), 1,67- 1,70 (m, 2H), 1,48 - 1,51 (m 2H), 1,10 - 1,13 (m, 2H).
[0828]Exemplo 24: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-2-metil-3-(metil(piperidil)benzamide
Figure img0103
[0829]Etapa 1: Síntese de 4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)carbamoil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)piperidino-1- carboxilato de terc-butila
[0830]4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)piperidin-1-carboxilato de terc-butila (0,5 g, 0,892 mmol), ácido (6- formilpiridin-3-il) borônico (0,31 g, 1,33 mmol) e Pd(PPh3)4 (0,103 g, 0,082 mmol) em 1,4-dioxano (10 mL) foi purgada com argônio durante 10 min. Em seguida, solução de 2 M Na2CO3 (0,34 g, 3,21 mmols) foi adicionada à mesma e novamente argônio foi purgado através da mesma durante 10 min. A mistura de reação foi agitada a 100 °C durante 2 h. Depois da conclusão da reação, água foi adicionada à mesma e a extração foi realizada usando MeOH a 5 % em DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas em anidro Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica (tamanho da malha 60 a 120) para fornecer 4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-5-(6- formilpiridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)piperidino-1-carboxilato de terc-butila (0,40 g, 87,9 %).
[0831]Etapa 2: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2- metil-3-(metil(piperidin-4-il)amino)-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
[0832]A uma solução agitada de 4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)carbamoil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)piperidino-1- carboxilato de terc-butila (1 equiv.) e morfolina (5 equiv.) em metanol (5 mL para 0,3 mmol), ácido acético (1 equiv.) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 4 h. Em seguida, agente redutor NaBH3CN (1 equiv.) foi adicionado e a reação agitada durante a noite. Em conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica, fornecendo desejado 4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)carbamoil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3- il)fenil)(metil)amino)piperidino-1-carboxilato de terc-butila. Este composto depois foi dissolvido em DCM (5 mL) e esfriado a 0 °C. TFA (2 mL) foi adicionada à mesma. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h. Em conclusão, a reação foi concentrada à secura. O resíduo foi purificado por lavagens com solvente para fornecer o composto do título (0,1 g, 65,78 %). LCMS: 559,35 (M + 1)+; HPLC: 95,60 % (@ 254 nm) (Rt; 3,906; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,96 (s, 1H), 8,67 (m, 1H), 8,22 (d, 2H, J = 8 Hz), 8,17 (t, 1H), 7,61 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,48 (s, 1H), 7,32 (s, 1H), 5,87 (s, 1H), 4,52 (s, 2H), 4,29 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,84 (bs, 4H), 3,26 (bs, 6H), 3,16 (t, 1H), 2,89 - 2,91 (m, 2H), 2,64 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,81 (bs, 4H).
[0833]Exemplo 25: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-2-metil-3-(metil(piperidin-4-il)amino)-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4- il)benzamide
Figure img0104
[0834]A uma solução agitada de 4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2- di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)piperidin-1-carboxilato de terc-butila (1 equiv.) e 4-(2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol-1- il)etil)morfolina (1,2 equiv.) em mistura de dioxano/água (5 mL + 1 mL), Na2CO3 (3,6 equiv.) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (0,1 equiv.) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 10 min. A reação foi aquecida a 100 °C durante 5 h. Depois do esfriamento, a mistura de reação foi diluída com água, e o produto foi extraído com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer 4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin- 3-il)metil)carbamoil)-2-metil-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4- il)fenil)(metil)amino)piperidino-1-carboxilato de terc-butila. Uma solução agitada deste composto (1 mmol) em DCM (5 mL) foi esfriado a 0 °C e TFA (2 mL) foi adicionada à mesma. A reação foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h. Em conclusão, a solução foi concentrada à secura. O resíduo foi purificado por lavagens com solvente para fornecer o composto do título (0,06 g, 89 %). LCMS: 562,40 (M + 1)+; HLPC: 99,01 % (@ 254 nm) (Rt; 3,838; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 8,52 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,23 (m, 1H), 8,05 (t, 1H), 8,00 (s, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,16 (s, 1H), 5,87 (s, 1H), 4,53 (t, 2H), 4,27 (d, 2H, J = 3,6 Hz), 3,25 (m, 4H), 3,10 - 3,16 (m, 4H), 2,87 (m, 2H), 2,60 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,1 8 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,79 (bs, 4H). [5 H ligado em pico de solvente]
[0835]Exemplo 26: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-2-metil-3-(metil(piperidin-4-il)amino)-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzamide
Figure img0105
[0836]A uma solução agitada de 4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)piperidin-1-carboxilato de terc-butila (1 equiv.) e 1-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (1,2 equiv.) em mistura de dioxano/água (5 mL + 1 mL), Na2CO3 (3,6 equiv.) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (0,1 equiv.) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 10 min. A reação foi aquecida a 100 °C durante 5 h. Depois do esfriamento, a mistura de reação foi diluída com água, e o produto foi extraído com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer 4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)carbamoil)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)fenil)(metil)amino)piperidino-1- carboxilato de terc-butila. Uma solução agitada deste composto (1 mmol) em DCM (5 mL) foi esfriado a 0 °C e TFA (2 mL) foi adicionada à mesma. A reação foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h. Em conclusão, a solução foi concentrada à secura. O resíduo foi purificado por lavagens com solvente para fornecer o composto do título (0,07 g, 87 %). LCMS: 463,30 (M + 1)+; HPLC: 98,02 % (@ 254 nm) (Rt; 4,145; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 8,47 (bs, 1H), 8,12 (s, 2H), 8,05 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,14 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,28 (m, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,24 - 3,27 (m, 2H), 3,11 (bs, 1H), 2,87 - 2,89 (m, 2H), 2,59 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,18 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,77 - 1,80 (m, 4H).
[0837]Exemplo 27: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-5-(metil(piperidin-4-il)amino)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamide
Figure img0106
[0838]A uma solução agitada de 4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)piperidin-1-carboxilato de terc-butila (1 equiv.) e N,N-dimetil-1-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)fenil)metanamina (1,2 equiv.) em mistura de dioxano/água (5 mL + 1 mL), Na2CO3 (3,6 equiv.) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (0,1 equiv.) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 10 min. A reação foi aquecida a 100 °C durante 5 h. Depois do esfriamento, a mistura de reação foi diluída com água, e o produto foi extraído com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer 4-((5-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2- di-hidropiridin-3-il)metil)carbanioil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil)-3- il)(metil)amino)piperidino-1-carboxilato de terc-butila. Uma solução agitada deste composto (1 mmol) em DCM (5 mL) foi esfriado a 0 °C e TFA (2 mL) foi adicionada à mesma. A reação foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h. Em conclusão, a solução foi concentrada à secura. O resíduo foi purificado por lavagens com solvente para fornecer o composto do título (0,06 g, 90 %). LCMS: 5 16,35 (M + 1)+; HPLC: 98,28 % (@ 254 nm) (R/;3,930; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 9,82 (bs, 1H), 8,51 (bs, 1H), 8,17 (s, 2H), 7,77 (d, 2H, J = 7,2 Hz), 7,55 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,43 (s, 1H), 7,27 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,30 (m, 4H), 3,25 (4H ligado em pico de solvente), 2,88 - 2,91 (m, 1H), 2,75 (s, 6H), 2,64 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,81 (m, 4H).
[0839]Exemplo 28: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-2-metil-3-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6-(morfolinometil)piridin-3- il)benzamide
Figure img0107
[0840]Etapa 1: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(6- formilpiridin-3-il)-2-metil-3-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzamida
[0841]A uma solução agitada de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzamida (0,4 g, 0,86 mmol) e ácido (6-formilpiridin-3-il) borônico (0,3 g, 1,29 mmol) em mistura de dioxano/água (10 mL + 2 mL), Na2CO3 (0,32 g, 3,09 mmols) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (0,092 g, 0,086 mmol) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 6 h. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2- metil-3-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzamida (0,28 g, 66 %).
[0842]Etapa 2: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3- (metil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
[0843]A uma solução agitada de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metil-3-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)benzamida (1 equiv.) e morfolina (5 equiv.) em metanol (10 mL), ácido acético (2 equiv.) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 18 h. Em seguida, cianoboro-hidreto de sódio (2,5 equiv.) foi adicionado a 0 °C e a reação agitada durante a noite na temperatura ambiente. Em conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material bruto foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer o composto do título (0,08 g, 70 %). LCMS: 560,30 (M + 1)+; HPLC: 99,22 % (@ 254 nm) (Rt; 3,944; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,76 (s, 1H), 8,17 (t, 1H), 8,02 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 7,50 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,41 (s, 1H), 7,23 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,8 Hz), 3,85 (d, 2H, J = l 1,2 Hz), 3,61 (s, 3H), 3,59 - 3,60 (m, 3H), 3,24 - 3,29 (m, 2H), 3,02 - 3,05 (m, 1H), 2,64 (s, 3H), 2,42 (bs, 4H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,61 (bs, 4H).
[0844]Exemplo 29: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(6-(hidroximetil)piridin-3-il)-2-metil-3-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)benzamide
Figure img0108
[0845]A uma solução agitada de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metil-3-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)benzamida (1 equiv.) e dimetilamina (5 equiv.) em metanol (10 mL), ácido acético (2 equiv.) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 18 h. Em seguida, cianoboro-hidreto de sódio (2,5 equiv.) foi adicionado a 0 °C e a reação agitada durante a noite na temperatura ambiente. Em conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material bruto foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer o composto do título. LCMS: 491,25 (M + 1)+; HPLC: 99,58 % (@ 254 nm) (Rt; 3,984; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMS0-d6 400 MHz) δ 11,47 (s, 1H), 8,75 (s, 1H), 8,19 (t, 1H), 8,05 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,52 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,41 (s, 1H), 7,24 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 5,44 (t, 1H, J = 5,6 Hz), 4,59 (d, 2H, J = 5,6 Hz), 4,28 (d, 2H, J = 4 Hz), 3,85 (d, 2H, J = 10,4 Hz), 3,32 (2H ligado em pico de solvente), 3,03 (m, 1H), 2,64 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,61 (bs, 4H).
[0846]Exemplo 30: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2-metil-3-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)benzamide
Figure img0109
[0847]A uma solução agitada de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metil-3-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)benzamida (1 equiv.) e dimetilamina (5 equiv.) em metanol (10 mL), ácido acético (2 equiv.) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 18 h. Em seguida, cianoboro-hidreto de sódio (2,5 equiv.) foi adicionado a 0 °C e a reação agitada durante a noite na temperatura ambiente. Em conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material bruto foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer o composto do título (0,03 g, 26 %). LCMS: 518,25 (M + 1)+; HPLC: 89,16 % (@ 254 nm) (Rt; 3,982; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 ml./min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 8,81 (s, 1H), 8,18 (t, 1H), 8,08 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,52 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,43 (s, 1H), 7,26 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,8 Hz), 3,83 - 3,86 (m, 4H), 3,32 (2H ligado em pico de solvente), 3,03 (m, 1H), 2,64 (s, 3H), 2,50 (3H ligado em pico de solvente), 2,40 (bs, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,60 (bs, 4H).
[0848]Exemplo 31: Síntese de 3-(Ciclo-hexil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2- oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamide
Figure img0110
[0849]Etapa 1: Síntese de 3-(ciclo-hexil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2- di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamida
[0850]A uma solução agitada de composto de bromo 5-bromo-3-(ciclo- hexil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2- metilbenzamida (0,6 g, 1,30 mmol) e ácido (6-formilpiridin-3-il) borônico (0,450 g, 1,95 mmol) em mistura de dioxano/água (8 mL + 2 mL), Na2CO3 (0,498 g, 4,5 mmols) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (0,15 g, 0,129 mmol) foi adicionado e a mistura foi purgada novamente durante 10 min. A massa de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer 3-(ciclo-hexil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamida (0,525 g, 83 %).
[0851]Etapa 2: Síntese de 3-(ciclo-hexil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2- di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
[0852]A uma solução agitada de composto 3-(ciclo-hexiI(metil)amino)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamida (1 equiv.) e morfolina (5 equiv.) em metanol (10 mL), ácido acético (2 equiv.) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 8 h. Em seguida, cianoboro-hidreto de sódio (2,5 equiv.) foi adicionado a 0 °C e a reação agitada durante a noite na temperatura ambiente. Em conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material bruto foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer 3-(ciclo-hexil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida (0,089 g, 53 % de rendimento). LCMS: 558,35 (M + 1)+; HPLC: 96,52 % (@ 254 nm) (Rt;4,375; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 8,75 (s, 1H), 8,18 (t, 1H), 8,01 (d, 1H, J = 6,8 Hz), 7,49 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,33 (s, 1H), 7,1 8 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 3,6 Hz), 3,59 - 3,61 (m, 6H), 2,75 (m, 1H), 2,65 (s, 3H), 2,43 (bs, 4H), 2,21 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,70 (bs, 4H), 1,53 - 1,56 (m, 1H), 1,42- 1,44 (m, 1H), 1,09 - 1,23 (m, 4H).
[0853]Exemplo 32: Síntese de 3-(Ciclo-hexil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2- oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2- metilbenzamida
Figure img0111
[0854]A uma solução agitada de composto 3-(ciclo-hexil(metil)amino)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamida (1 equiv.) e dimetilamina (5 equiv.) em metanol (10 mL), ácido acético (2 equiv.) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 8 h. Em seguida, cianoboro-hidreto de sódio (2,5 equiv.) foi adicionado a 0 °C e a reação agitada durante a noite na temperatura ambiente. Em conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material bruto foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer o composto do título (0,017 g, 11 % de rendimento). LCMS: 516,35 (M + 1)+; HPLC: 90,32 % (@ 254 nm) (Rt; 4,203; Método: Coluna: YMC ODS-A 1 50 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,78 (s, 1H), 8,18 (t, 1H), 8,05 (d, 1H, J = 6 Hz), 7,50 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,34 (s, 1H), 7,20 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,8 Hz), 3,75 (bs, 2H), 2,75 (m, 1H), 2,65 (s, 3H), 2,34 (bs, 6H), 2,22 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,69 - 1,71 (m, 4H), 1,54- 1,56 (m, 2H), 1,42 - 1,45 (m, 2H), 1,08 - 1,23 (m, 2H).
[0855]Exemplo 35: Síntese de 3-(Ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2- oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2- metilbenzamida
Figure img0112
[0856]A uma solução agitada de composto 3-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamida (1 equiv.) e dimetilamina (5 equiv.) em metanol (10 mL), ácido acético (2 equiv.) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 18 h. Em seguida, cianoboro-hidreto de sódio (2,5 equiv.) foi adicionado a 0 °C e a reação agitada durante a noite na temperatura ambiente. Em conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material bruto foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer composto e o material bruto que foi purificado por HPLC preparativa, fornecendo o composto do título como um sal de TFA, (0,12 g, 57 %). LCMS: 502,30 (M + 1)+; HPLC: 99,07 % (@ 254 nm) (Rt; 4,059; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min. Manter durante 1,5 min. 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,50 (s, 1H), 10,04 (bs, 1H), 8,96 (s, 1H), 8,22 (m, 2H), 7,57 - 7,61 (m, 1H), 7,35 (s, 1H), 5,87 (s, 1H), 4,49 (s, 2H), 4,28 (d, 2H, J = 2 Hz), 3,65 (bs, 1H), 2,83 (s, 6H), 2,65 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,12 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,73 (bs, 2H), 1,63 (bs, 2H), 1,50 (m, 4H).
[0857]Exemplo 36: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-5-(metil(piperidin-4-il)amino)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamide
Figure img0113
[0858]Etapa 1: Síntese de 5-bromo-3-(ciclopentilamino)-2-metilbenzoato de metila
[0859]A uma solução agitada de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metila (5 g, 20,57 mmols) e ciclopentanona (8,64 g, 102,8 mmols) em metanol (30 mL), ácido acético (2,46 g, 41,1 mmols) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 3 h. Em seguida, cianoboro-hidreto de sódio (3,23 g, 51,4 mmols) foi adicionado e a reação agitada durante a noite. Em conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material bruto foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer 5-bromo-3-(ciclopentilamino)-2-metilbenzoato de metila (4 g, 78,2 %).
[0860]Etapa 2: Síntese de 5-bromo-3-(ciclopentil(etil)amino)-2-metilbenzoato de metila
[0861]A uma solução agitada de 5-bromo-3-(ciclopentilamino)-2-metilbenzoato (2 g, 6,43 mmols) em DMF (15 mL), carbonato de césio (4,18 g, 12,8 mmols) e iodeto de etila (5,01 g, 32,15 mmols) foram adicionados; a mistura de reação resultante foi aquecida a 80 °C durante 18 h. Em conclusão, a mistura de reação foi esfriada até a temperatura ambiente e filtrada, o resíduo foi lavado com acetato de etila e o filtrado foi concentrado para fornecer o composto bruto desejado, que foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer 5-bromo-3-(ciclopentil(etil)amino)-2- metilbenzoato de metila (0,7 g, 32,1 %).
[0862]Etapa 3: Síntese de 5-bromo-3-(ciclopentil (etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2- oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
[0863]NaOH aquoso (0,126 g, 3,09 mmols) foi adicionado a uma solução de 5- bromo-3-(ciclopentil(etil)amino)-2-metilbenzoato de metila (0,7 g, 2,06 mmols) em etanol (5 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Depois da conclusão da reação, etanol foi removido sob pressão reduzida e a camada aquosa acidificada usando HCl diluído ao pH 6 e ácido cítrico ao pH 4. O produto foi extraído usando acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas para fornecer o ácido bruto (0,5 g, 75 %). O ácido (0,5 g, 1,53 mmol) depois foi dissolvido em DMSO (5 mL) e 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,467 g, 3,07 mmols) foi adicionada à mesma. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 15 min antes de PYBOP (1,19 g, 2,30 mmols) foi adicionada à mesma e a agitação foi continuada durante a noite. Depois da conclusão da reação, a mistura de reação foi vertida em gelo, extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas, em seguida, o produto foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer 5-bromo-3-(ciclopentil(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2- di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0,3 g, 42 %).
[0864]Etapa 4: Síntese de 5-(ciclopentil(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2- di-hidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida
[0865]A uma solução agitada de 5-bromo-3-(ciclopentil(etil)amino)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0,3 g, 0,653 mmol) e ácido (4-(morfolinometil)fenil) borônico (0,216 g, 0,98 mmol) em mistura de dioxano/água (5 mL + 1 mL), Na2CO3 (0,249 g, 2,35 mmols) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (0,075 g, 0,065 mmol) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 3 h. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer o composto do título (0,15 g, 41 %). LCMS: 557,35 (M + 1)+; HPLC: 99,13 % (@ 254 nm) (Rt; 4,128; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,44 (s, 1H), 8,17 (t, 1H), 7,57 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,41 (s, 1H), 7,37 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,20 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,8 Hz), 3,56 - 3,57 (m, 4H), 3,48 (s, 3H), 3,00 - 3,02 (m, 2H), 2,36 (m, 4H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,69 - 1,70 (m, 2H), 1,60 (m, 2H), 1,47 - 1,48 (m, 4H), 0,81 (t, 3H, J = 6,4 Hz).
[0866]Exemplo 37: Síntese de 3-(((1r,4r)-4-acetamidociclo-hexil)(metil)amino)- N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H- pirazol-4-il)benzamide
Figure img0114
[0867]A uma solução agitada de 3-(((1r,4r)-4-acetamidociclo-hexil)-(metil)- amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)-metil)-2-metilbenzamida (1 equiv.) e 4-(2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol-1- il)etil)morfolina (1,2 equiv.) em mistura de dioxano/água (5 mL + 1 mL) foi adicionado Na2CO3 (3,6 equiv.) e a solução purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (0,1 equiv.) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer o composto do título (0,050 g, 28 %). LCMS: 618,35 (M + 1)+; HPLC: 95,34 % (@ 254 nm) (Rt; 3,760; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,47 (s, 1H), 8,17 (s, 1H), 8,09 (t, 1H), 7,82 (s, 1H), 7,67 (d, 1H, J = 7,2 Hz), 7,23 (s, 1H), 7,08 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,26 (d, 2H, J = 3,2 Hz), 4,21 (t, 2H, J = 6 Hz), 3,44 - 3,53 (m, 5H), 2,72 (t, 3H, J = 5,6 Hz), 2,61 (s, 3H), 2,40 (m, 4H), 2,20 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,67 - 1,88 (m, 7H), 1,46 - 1,55 (m, 2H), 1,07 - 1,15 (m, 2H).
[0868]Exemplo 38: Síntese de 3-(((1s,4s)-4-acetamidociclo-hexil)(metil)amino)- N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H- pirazol-4-il)benzamide
Figure img0115
[0869]Preparar na forma análoga à do composto 37 (0,020 g, 11 %). LCMS: 618,35 (M + 1)+; HPLC: 99,00 % (@ 254 nm) (Rt; 3,732; Método: Coluna: YMC ODS- A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 8,16 (s, 1H), 8,09 (t, 1H), 7,82 (s, 1H), 7,77 (d, 1H ,J = 7,2 Hz), 7,28 (s, 1H), 7,09 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,45 (bs, 1H), 4,27 (d, 2H, J = 4 Hz), 4,22 (s, 2H), 3,70 (bs, 1H), 3,54 (m, 4H), 2,97 (m, 1H), 2,67 - 2,72 (m, 2H), 2,56 (s, 3H), 2,42 (m, 3H), 2,20 (s, 6H), 2,10 (s, 3H), 1,74 - 1,81 (m, 5H), 1,55 (m, 2H), 1,39 - 1,41 (m, 4H).
[0870]Exemplo 39: Síntese de 5-(((1r,4r)-4-acetamidociclo-hexil)(metil)amino)- N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil- [1,1’-bifenil]-3-carboxamida
Figure img0116
[0871]A uma solução agitada de 3-(((1r,4r)-4-acetamidociclo-hexil)-(metil)- amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)-metil)-2-metilbenzamida (1 equiv.) e N,N-dimetil-1-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)fenil)metanamina (1,2 equiv.) em mistura de dioxano/água (5 mL + 1 mL) foi adicionado Na2CO3 (3,6 equiv.) e a solução purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (0,1 equiv.) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer o composto do título (0,05 g, 30 %). LCMS: 572,35 (M + 1)+; HPLC: 96,88 % (@ 254 nm) (Rt; 3,900; Método: Coluna: YMC ODS- A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 8,18 (t, 1H), 7,67 (d, 1H, J = 6,8 Hz), 7,57 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,34 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,30 (s, 1H), 7,14 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,27 (d, 2H, J = 3,6 Hz), 3,39 (m, 3H), 2,72 (m, 1H), 2,64 (s, 3H), 2,20 (s, 6H), 2,15 (s, 6H), 2,10 (s, 3H), 1,78 - 1,81 (m, 2H), 1,74 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,51 - 1,56 (m, 2H), 1,08 - 1,23 (m, 2H).
[0872]Exemplo 40: Síntese de 5-(((1s,4s)-4-acetamidociclo-hexil)(metil)amino)- N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil- [1,1’-bifenil]-3-carboxamida
Figure img0117
[0873]Preparado na forma análoga à do Exemplo 39 (0,06 g, 36 %). LCMS: 572,35 (M + 1)+; HPLC: 94,79 % (@ 254 nm) (Rt; 3,936; Método: Coluna: YMC ODS- A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMS0-d6, 400 MHz) δ 11,47 (s, 1H), 8,19 (t, 1H), 7,78 (d, 1H, J = 7,2 Hz), 7,56 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,33 - 7,35 (m, 3H), 7,17 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 3,6 Hz), 3,70 (bs, 1H), 3,37 - 3,40 (m, 2H), 2,98 (m, 1H), 2,59 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,20 (m, 3H), 2,15 (s, 6H), 2,10 (s, 3H), 1,81 (s, 3H), 1,74 (m, 2H), 1,55 (m, 2H), 1,40 - 1,48 (m, 4H).
[0874]Exemplo 41: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2-metil-3-(metil(piperidin-4- il)amino)benzamide
Figure img0118
[0875]A uma solução agitada de 4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)carbamoil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)piperidino-1- carboxilato de terc-butila (1 equiv.) e morfolina (5 equiv.) em metanol (5 mL para 0,3 mmol), ácido acético (1 equiv.) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 4 h. Em seguida, agente redutor NaBH3CN (1 equiv.) foi adicionado e a reação agitada durante a noite. Em conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica, fornecendo 4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-5-(6- ((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)piperidino-1-carboxilato de terc-butila desejado. Este composto depois foi dissolvido em DCM (5 mL) e esfriado a 0 °C. TFA (2 mL) foi adicionada à mesma. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h. Em conclusão, a reação foi concentrada à secura. O resíduo foi purificado por lavagens com solvente para fornecer o composto do título (0,06 g, 40 %). LCMS: 517,25 (M + 1)+; HPLC: 99,07 % (@ 254 nm) (Rt; 3,913; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,48 (s, 1H), 10,08 (bs, 1H), 8,97 (s, 1H), 8,57 (bs, 1H), 8,23 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 8,18 (s, 1H), 7,60 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,50 (s, 1H), 7,34 (s, 1H), 5,87 (s, 1H), 4,49 (d, 2H), 4,30 (s, 2H), 3,25 (d, 2H), 3,16 (s, 1H), 2,89 (m, 2H), 2,83 (s, 6H), 2,64 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,81 (bs, 4H).
[0876]Exemplo 42: Síntese de 5-(((1s,4s)-4-aminociclo-hexil)(metil)amino)-N- ((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida
Figure img0119
[0877]Etapa 1: Síntese de 5-bromo-3-(((1s,4s)-4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(metil)-amino)-2-metilbenzoato de metila
[0878]A uma solução agitada do isômero cis menos polar, 5-bromo-3-(((1s,4s)- 4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoato de metila, (4 g, 9,09 mmols) em acetonitrila (50 mL), carbonato de césio (5,9 g, 18,18 mmols) e iodeto de metila (6,45 g, 45,45 mmols) foram adicionados. A mistura de reação resultante foi aquecida a 80 °C durante 7 h. A mistura de reação foi esfriada até a temperatura ambiente e filtrada, com os sólidos coletados sendo lavados com acetato de etila. O filtrado foi concentrado para fornecer o produto desejado que foi purificado por cromatografia em coluna e forneceu 5-bromo-3-(((1s,4s)-4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(metil)-amino)-2-metilbenzoato de metila (1,4 g, 34,14 %).
[0879]Etapa 2: Síntese de ((1s,4s)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila
[0880]NaOH aquoso (0,23 g, 5,72 mmols) foi adicionado a uma solução de 5- bromo-3-(((1s,4s)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(metil)-amino)-2- metilbenzoato de metila (1,3 g, 2,86 mmols) em MeOH (20 mL) e agitado a 60 °C durante 1 h. O etanol foi removido sob pressão reduzida e a mistura acidificada ao pH com HCl diluído e ao pH 4 com ácido cítrico. A mistura foi extraída com acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados foram secos e concentrados forneceu o respectivo ácido (1,1 g, 90,1 %).
[0881]O ácido (1,13 g, 2,57 mmols) depois foi dissolvido em DMSO (10 mL) e 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,87 g, 5,72 mmols) foi adicionada à mesma. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 15 min antes de PyBOP (2,23 g, 4,28 mmols) foi adicionado. A agitação depois foi continuada durante a noite. A mistura de reação foi vertida em água gelada. O precipitado resultante foi filtrado, lavado com acetonitrila e purificado por cromatografia em coluna para fornecer ((1s,4s)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila (0,8 g, 48,7 %).
[0882]Etapa 3: Síntese de ((1s,4s)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin- 3-il)metil)-carbamoil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-il)(metil)amino)-ciclo- hexil)carbamato de terc-butila
[0883]A uma solução agitada de ((1s,4s)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)ciclo-hexil)- carbamato de terc-butila (1 equiv.) e 4-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)benzil)morfolina (1,2 equiv.) em mistura de dioxano/água (5 mL + 1 mL), Na2CO3 (3,6 equiv.) foi adicionado. A solução depois foi purgada com argônio durante 15 min. Pd(PPh3)4 (0,1 equiv.) foi adicionado e a mistura de reação novamente purgada com argônio durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. A mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. Os extratos combinados foram secos em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer ((1s,4s)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-carbamoil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1-bifenil]-3-il)(metil)amino)-ciclo- hexil)carbamato de terc-butila (0,08 g, 45,71 %).
[0884]Etapa 4: Síntese de 5-(((1s,4s)-4-aminociclo-hexil)(metil)amino)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamida
[0885]Uma solução agitada de ((1s,4s)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-carbamoil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3- il)(metil)amino)-ciclo-hexil)carbamato de terc-butila (0,08 g) em DCM (5 mL) foi esfriado a 0 °C e TFA (2 mL) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h. A reação foi concentrada à secura fornecendo o composto do título como um sal de TFA (0,06 g, 88,2 %). LCMS: 572,40 (M + 1)+; HPLC: 95,39 % (@ 254 nm) (Rt; 3,719; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 10,05 (bs, 1H), 8,19 (t, 1H), 7,74 - 7,78 (m, 4H), 7,56 (d, 2H, J = 6,8 Hz), 7,46 (s, 1H), 7,24 (s, 1H), 5,87 (s, 1H), 4,38 (bs, 2H), 4,29 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,95 (m, 2H), 3,60 - 3,63 (m, 2H), 3,27 - 3,30 (m, 2H), 3,13 - 3,19 (m, 4H), 2,54 (s, 3H), 2,30 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,86 (m, 2H), 1,59 - 1,64 (m, 4H), 1,49 - 1,51 (m, 2H).
[0886]Exemplo 43: Síntese de 5-(((1r,4r)-4-acetamidociclo-hexil)(metil)amino)- N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida
Figure img0120
Etapa 1: Síntese de ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico
[0887]À solução agitada de ácido 2-metil-3-nitrobenzoico (50 g, 276,2 mmols) em H2SO4 conc. (200 mL), 1,3-dibromo-5,5-dimetil-2,4-imidazolidinodiona (43,4 g, 151,8 mmols) foi adicionado às porções na temperatura ambiente e a mistura de reação agitada na temperatura ambiente durante 5 h. A mistura de reação foi vertida em água gelada; o sólido que precipitou foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo fornecendo o composto desejado, ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico (71,7 g, 99,9 %) que foi em outras reações.
[0888]Etapa 2: Síntese de 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoato de metila
[0889]A uma solução agitada de ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico (287 g, 1103 mmols) em DMF (150 mL), carbonato de sódio (468 g, 4415 mmols) e iodeto de metila (626,63 g, 4415 mmols) foram adicionados. A mistura de reação depois foi aquecida a 60 °C durante 8 h. Os sólidos precipitados foram filtrados e lavados com éter dietílico (5 vezes). Os filtrados orgânicos combinados foram secos, concentrados sob pressão reduzida fornecendo o composto 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoato de metila desejado (302 g, 99 %) que foi usado nas outras reações.
[0890]Etapa 3: Síntese de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metila
[0891]A uma solução agitada de 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoato de metila (150 g, 544 mmols) em etanol (750 mL), cloreto de amônio (150 g, 2777 mmols) dissolvido em água (750 mL) e pó de ferro (93,3 g, 1636 mmols) foram adicionados sob agitação. A mistura de reação resultante foi aquecida a 80 °C durante 7 h. A mistura de reação foi filtrada através de Celite e os sólidos coletados lavados com água e acetato de etila. O filtrado foi extraído com acetato de etila e o extrato seco, concentrado sob pressão reduzida para fornecer o composto 3-amino-5-bromo-2- metilbenzoato de metila desejado que foi usado nas outras reações.
[0892]Etapa 4: Síntese de 5-bromo-3-((4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo- hexil)amino)-2-metil-benzoato de metila
[0893]A uma solução agitada de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metila (5,0 g, 20,6 mmols) e (4-oxociclo-hexil)carbamato de terc-butila (5,6 g, 26,7 mmols) em metanol (50 mL), ácido acético (1,2 g, 20,57 mmols) foi adicionado e a mistura de reação agitada na temperatura ambiente durante 8 h. Em seguida, cianoboro-hidreto de sódio (1,6 g, 26,74 mmols) foi adicionado a 0 °C e a reação agitada durante a noite. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o material bruto purificado por cromatografia em coluna (duas vezes) eluindo com acetato de etila/hexano para fornecer 4 g (44 %) de isômero cis menos polar, 5-bromo-3-(((1s,4s)-4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoato de metila (contaminado com algum material de partida) e 3 g (33 %) do isômero trans puro mais polar, 5-bromo-3- (((1r,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoato de metila.
[0894]Etapa 5: Síntese de 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(metil)-amino)-2-metilbenzoato de metila
[0895]A uma solução agitada do isômero trans mais polar, 5-bromo-3-(((1r,4r)- 4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoato de metila, (3 g, 6,81 mmols) em acetonitrila (40 mL), carbonato de césio (4,4 g, 13,62 mmols) e iodeto de metila (4,83 g, 34,05 mmols) foram adicionados. A mistura de reação resultante foi aquecida a 80 °C durante 7 h. A mistura de reação foi esfriada até a temperatura ambiente e filtrada e os sólidos lavados com acetato de etila. O filtrado foi concentrado para fornecer o composto bruto desejado que purificado por cromatografia em coluna forneceu 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(metil)amino)-2- metilbenzoato de metila (1,3 g, 43,33 %).
[0896]Etapa 6: Síntese de ((1r,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila
[0897]NaOH aquoso (0,23 g, 5,72 mmols) foi adicionado a uma solução de 5- bromo-3-(((1r,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(metil)amino)-2- metilbenzoato de metila (1,3 g, 2,86 mmols) em MeOH (20 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Depois da conclusão da reação, o metanol foi removido sob pressão reduzida e o resíduo acidificado ao pH 6 com HCl diluído e ao pH 4 com ácido cítrico. A mistura acidificada foi extraída com acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados foram secos e concentrados fornecendo o respectivo ácido (1 g, 83 %).
[0898]O ácido acima (1 g, 2,27 mmols) foi dissolvido em DMSO (5 mL) e 3- (aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,65 g, 4,54 mmols) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 15 min antes de PyBOP (1,7 g, 3,4 mmols) foi adicionado. A agitação foi continuada durante a noite. A mistura de reação foi vertida em água gelada. O precipitado resultante foi filtrado, lavado com acetonitrila e purificado por cromatografia em coluna para fornecer o composto ((1r,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)-ciclo-hexil)carbamato de terc-butila (0,7 g, 53,8 %).
[0899]Etapa 7: Síntese de ((1r,4r)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin- 3-il)metil)-carbamoil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-il)(metil)amino)-ciclo- hexil)carbamato de terc-butila
[0900]A uma solução agitada de ((1r,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2- di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)-ciclo-hexil)carbamato de terc-butila (1 equiv.) e 4-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzil)morfolina (1,2 equiv.) em mistura de dioxano/água (5 mL + 1 mL), Na2CO3 (3,6 equiv.) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (0,1 equiv.) foi adicionado e o frasco de reação foi purgado novamente durante 10 min. com argônio. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. A mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. Os extratos orgânicos combinados foram secos em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer ((1r,4r)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)carbamoil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-il)(metil)amino)ciclo- hexil)carbamato de terc-butila (0,07 g, 40 %)
[0901]Etapa 8: Síntese de 5-(((1r,4r)-4-aminociclo-hexil)(metil)amino)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamida
[0902]Uma solução agitada de ((1r,4r)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3- il)(metil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila (0,07 g) em DCM (5 mL) foi esfriada a 0 °C e TFA (2 mL) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h. A reação foi concentrada à secura fornecendo o composto do título como um sal de TFA (0,05 g, 84,74 %). LCMS: 572,60 (M + 1)+; HPLC: 88,92 % (@ 254 nm) (Rt; 3,546; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 10,05 (bs, 1H), 8,16 (t, 1H), 7,74 - 7,76 (m, 4H), 7,56 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,34 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,38 (bs, 2H), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,95 (m, 2H), 3,63 (m, 2H), 3,27 (m, 1H), 3,12 (m, 2H), 2,97 (m, 2H), 2,74 (t, 1H), 2,66 (s, 3H), 2,20 (s, 6H), 2,10 (s, 3H), 1,93 - 1,95 (m, 2H), 1,74 - 1,77 (m, 2H), 1,54 - 1,57 (m, 2H), 1,28 - 1,31 (m, 2H).
[0903]Exemplo 44: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]- 3-carboxamida
Figure img0121
[0904]Etapa 1: Síntese de ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico
Figure img0122
[0905]À solução agitada de ácido 2-metil-3-nitrobenzoico (100 g, 552 mmols) em H2SO4 conc. (400 mL), 1,3-dibromo-5,5-dimetil-2,4-imidazolidinodiona (88 g, 308 mmols) foi adicionada em uma maneira às porções na temperatura ambiente e a mistura de reação depois foi agitada na temperatura ambiente durante 5 h. A mistura de reação foi vertida em água gelada, o sólido precipitado foi separado por filtração, lavado com água e seco sob vácuo para fornecer o composto desejado como um sólido (140 g, 98 %). O composto isolado foi tomado diretamente na etapa seguinte. RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,31 (s, 1H), 8,17 (s, 1H), 2,43 (s, 3H).
[0906]Etapa 2: Síntese de 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoato de metila
Figure img0123
[0907]A uma solução agitada de ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico (285 g, 1105 mmols) em DMF (2,8L) na temperatura ambiente foi adicionado carbonato de sódio (468 g, 4415 mmols) seguido por adição de iodeto de metila (626,6 g, 4415 mmols). A mistura de reação resultante foi aquecida a 60 °C durante 8 h. Depois da conclusão (monitorada por TLC), a mistura de reação foi filtrada (para remover o carbonato de sódio) e lavada com acetato de etila (1 L X 3). O filtrado combinado foi lavado com água (3L X 5) e a fase aquosa foi retro extraída com acetato de etila (1L X 3). As camadas orgânicas combinadas foram secas em anidro sulfato de sódio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer o composto do título como um sólido (290g, 97 % de rendimento). O composto isolado foi tomado diretamente na etapa seguinte. RMN de 1H (CDCl3, 400 MHz) δ 8,17 (s, 1H), 7,91 (s, 1H), 3,96 (s, 3H), 2,59 (s, 3H).
[0908]Etapa 3: Síntese de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metila
Figure img0124
[0909]A uma solução agitada de 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoato de metila (290 g, 1058 mmols) em etanol (1,5 L) foi adicionado cloreto de amônio aquoso (283 g, 5290 mmols dissolvido em 1,5 L de água). A mistura resultante foi agitada a 80 °C e o pó de ferro (472 g, 8451 mmols) foi adicionado em uma maneira às porções. A mistura de reação resultante foi aquecida a 80 °C durante 12 h. Após a conclusão conforme determinado por TLC, a mistura de reação foi filtrado a quente em celite® e o leito de celite foi lavado com metanol (5 L) seguido por lavagem com MeOH a 30 % em DCM (5 L). O filtrado combinado foi concentrado a vácuo, o resíduo obtido foi diluído com solução de bicarbonato de sódio aquoso (2 L) e extraído com acetato de etila (5 L X 3). As camadas orgânicas combinadas foram secas em anidro sulfato de sódio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer o composto do título como um sólido (220 g, 85 %). O composto foi tomado diretamente na etapa seguinte. RMN de 1H (CDCl3, 400 MHz) δ 7,37 (s, 1H), 6,92 (s, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,80 (bs, 2H), 2,31 (s, 3H).
[0910]Etapa 4: Síntese de 5-bromo-2-metil-3-((tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)benzoato de metila
Figure img0125
[0911]A uma solução agitada de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metila (15 g, 61,5 mmols) e di-hidro-2H-piran-4(3)-ona (9,2 g, 92 mmols) em dicloroetano (300 mL) foi adicionado ácido acético (22 g, 369 mmols) e a mistura de reação agitada na temperatura ambiente durante 15 minutos, em seguida, a mistura de reação foi esfriada a 0 °C e triacetoxiboro-hidreto de sódio (39 g, 184 mmols) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada durante a noite na temperatura ambiente. Após a conclusão da reação como determinado por TLC, solução de bicarbonato de sódio aquoso foi adicionado à mistura de reação até que um pH de 7 a 8 foi obtido. A fase orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram secas em anidro sulfato de sódio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O composto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (malha de gel de sílica 100 a 200) eluindo com acetato de etila:hexano para fornecer o composto desejado como um sólido (14 g, 69 %). RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,01 (s, 1H), 6,98 (s, 1H), 5,00 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 3,84 - 3,87 (m, 2H), 3,79 (s, 3H), 3,54 - 3,56 (m, 1H), 3,43 (t, 2H, J = 12 Hz), 2,14 (s, 3H), 181 - 1,84 (m, 2H), 1,47- 1,55 (m, 2H).
[0912]Etapa 5: Síntese de 5-bromo-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2- metilbenzoato de metila
Figure img0126
[0913]A uma solução agitada de 5-bromo-2-metil-3-((tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)benzoato de metila (14 g, 42,7 mmols) em dicloroetano (150 mL) foi adicionado acetaldeído (3,75 g, 85,2 mmols) e ácido acético (15,3 g, 256 mmols). A mistura de reação resultante foi agitada na temperatura ambiente durante 15 minutos. A mistura foi esfriada a 0 °C e triacetoxiboro-hidreto de sódio (27 g, 128 mmols) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 3 horas. Após a conclusão da reação como determinado por TLC, solução de bicarbonato de sódio aquoso foi adicionado à mistura de reação até que um pH 7 a 8 foi obtido, a fase orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram secas em anidro sulfato de sódio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O composto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (malha em gel de sílica 100 a 200) eluindo com acetato de etila:hexano para fornecer o composto desejado como um líquido viscoso (14 g, 93 %). RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,62 (s, 1H), 7,52 (s, 1H), 3,80 (bs, 5H), 3,31 (t, 2H), 2,97 - 3,05 (m, 2H), 2,87 - 2,96 (m, 1H), 2,38 (s, 3H), 1,52 - 1,61 (m, 2H), 1,37 - 1,50 (m, 2H), 0,87 (t, 3H, J = 6,8 Hz).
[0914]Etapa 6: Síntese de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-3 -(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida
Figure img0127
[0915]A uma solução agitada de 5-bromo-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)-2-metilbenzoato (14 g, 39,4 mmols) em etanol (100 mL) foi adicionado NaOH aquoso (2,36 g, 59,2 mmols em 25 mL de água) e a mistura resultante foi agitada a 60 °C durante 1 h. Após a conclusão da reação como determinado por TLC, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo obtido foi acidificado com HCl 1N até que um pH 7 foi obtido e depois solução de ácido cítrico aquoso foi adicionado até que um pH 5 a 6 foi obtido. A camada aquosa foi extraída com MeOH a 10 % em DCM (200 mL X 3), as camadas orgânicas combinadas foram secas em anidro sulfato de sódio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer o ácido respectivo (14 g, 100 %).
[0916]O ácido acima (14 g, 40,9 mmols) depois foi dissolvido em DMSO (70 mL) e 3-(amino metil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (12,4 g, 81,9 mmols) foi adicionada à mesma. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 15 minutos, em seguida, PYBOP (31,9 g, 61,4 mmols) foi adicionado e a agitação foi continuada durante a noite na temperatura ambiente. Após a conclusão da reação como determinado por TLC, a mistura de reação foi vertida em água gelada (700 mL), agitada durante 30 minutos e o sólido precipitado foi coletado por filtração, lavado com água (500 mL) e ar seco. O sólido obtido foi agitado com acetonitrila (75 mL X 2), filtrado e ar seco. O sólido obtido foi novamente agitado com MeOH a 5 % em DCM (100 mL), filtrado e seco completamente sob vácuo para fornecer o composto do título como um sólido (14 g, 74 %). RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,47 (s, 1H), 8,23 (t, 1H), 7,30 (s, 1H), 7,08 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,23 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,81 (d, 2H, J = 10,4 Hz), 3,20 - 3,26 (m, 2H), 3,00 - 3,07 (m, 1H), 2,91 - 2,96 (m, 2H), 2,18 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,58 - 1,60 (m, 2H), 1,45 - 1,50 (m, 2H), 0,78 (t, 3H, J = 6,8 Hz).
[0917]Etapa 7: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5- (etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamide
Figure img0128
[0918]A uma solução agitada de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (14 g, 29,5 mmols) em mistura de dioxano/água (70 mL/14 mL) foi adicionado 4-(4-(4, 4, 5, 5-tetrametil-1, 3, 2- dioxaborolan-2-il)benzil)morfolina (13,4 g, 44,2 mmols) seguido por adição de Na2CO3 (11,2 g, 106,1 mmols). A solução foi purgada com argônio durante 15 minutos e depois Pd(PPh3)4 (3,40 g, 2,94 mmols) foi adicionado e a solução foi novamente purgada com argônio por um adicional de 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. Depois da conclusão (monitorada por TLC), a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em anidro sulfato de sódio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O composto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (malha em gel de sílica 100 a 200) eluindo com metanol:DCM ao composto do título como um sólido (12 g, 71 %). Dados Analíticos: LCMS: 573,35 (M + 1)+; HPLC: 99,5 % (@ 254 nm) (Rt; 3,999; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 8,19 (t, 1H), 7,57 (d, 2H, J = 7,2 Hz), 7,36 - 7,39 (m, 3H), 7,21 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 2,8 Hz), 3,82 (d, 2H, J = 9,6 Hz), 3,57 (bs, 4H), 3,48 (s, 2H), 3,24 (t, 2H, J = 10,8Hz), 3,07 - 3,09 (m, 2H), 3,01 (m, 1H), 2,36 (m, 4H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,64 - 1,67 (m, 2H), 1,51 - 1,53 (m, 2H), 0,83 (t, 3H, J = 6,4 Hz).
[0919]Etapa 8: Síntese de tricloridreto de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’- (morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida
Figure img0129
[0920]N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H- piran-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida (12 g, 21,0 mmols) foi dissolvido em HCl metanólico (200 mL) e agitada na temperatura ambiente durante 3 h. Depois de três horas de agitação, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O sólido obtido foi agitado com éter (100 mL X 2) para fornecer o sal desejado como um sólido (11 g, 77 %). Dados Analíticos de sal de tri-HCl: LCMS: 573,40 (M + 1)+; HPLC: 99,1 % (@ 254 nm) (Rt; 3,961; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (D2O 400 MHz) δ 7,92 (bs, 1H,) 7,80 (s, 1H), 7,77 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,63 (s, 1H), 7,61 (s, 1H), 6,30 (s, 1H), 4,48 (s, 2H), 4,42 (s, 2H), 4,09 - 4,11 (m, 4H), 3,95 - 3,97 (m, 2H), 3,77 (t, 3H, J = 10,4 Hz), 3,44 - 3,47 (m, 3H), 3,24 - 3,32 (m, 3H), 2,42 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,01 (m, 2H), 1,76 (m, 2H), 1,04 (t, 3H, J = 6,8 Hz).
[0921]Exemplo 45: Síntese de 3-(((1r,4r)-4-aminociclo-hexil)(metil)amino)-N- ((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4- il)benzamide
Figure img0130
[0922]Etapa 1: Síntese de ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin- 3-il)metil)carbamoil)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)fenil)(metil)amino)ciclo- hexil)carbamato de terc-butila
[0923]A uma solução agitada de ((1r,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2- di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)-ciclo-hexil)carbamato de terc-butila (1 equiv.) e 1-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (1,2 equiv.) em mistura de dioxano/água (5 mL + 1 mL), Na2CO3 (3,6 equiv.) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (0,1 equiv.) foi adicionado e o frasco de reação foi purgado novamente durante 10 min. com argônio. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. A mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. Os extratos orgânicos combinados foram secos em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)carbamoil)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)fenil)(metil)amino)ciclo- hexil)carbamato de terc-butila (0,07 g, 46,6 %)
[0924]Etapa 2: Síntese de 3-(((1r,4r)-4-aminociclo-hexil)(metil)amino)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4- il)benzamida
[0925]Uma solução agitada de ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4- il)fenil)(metil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila (0,07 g) em DCM (5 mL) foi esfriado a 0 °C e TFA (2 mL) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h. A reação foi concentrada à secura fornecendo o composto do título como um sal de TFA (0,07 g, 98,59 %). LCMS: 477,35 (M + 1)+; HPLC: 99,16 % (@ 254 nm) (Rt; 3,796; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 8,12 (s, 1H), 8,08 (t, 1H), 7,82 (s, 1H), 7,74 (m, 3H), 7,28 (s, 1H), 7,11 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,26 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,84 (s, 3H), 2,96 (bs, 1H), 2,73 (bs, 1H), 2,63 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,92 - 1,95 (m, 2H), 1,74 - 1,77 (m, 2H), 1,48 - 1,57 (m, 2H), 1,23 - 1,32 (m, 2H).
[0926]Exemplo 46: Síntese de 3-(((1s,4s)-4-aminociclo-hexil)(metil)amino)-N- ((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4- il)benzamide
Figure img0131
[0927]Etapa 1: Síntese de ((1s,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin- 3-il)metil)carbamoil)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)fenil)(metil)amino)ciclo- hexil)carbamato de terc-butila
[0928]A uma solução agitada de ((1s,4s)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)ciclo-hexil)- carbamato de terc-butila (1 equiv.) e 1-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan- 2-il)-1H-pirazol (1,2 equiv.) em mistura de dioxano/água (5 mL + 1 mL), Na2CO3 (3,6 equiv.) foi adicionado. A solução depois foi purgada com argônio durante 15 min. Pd(PPh3)4 (0,1 equiv.) foi adicionado e a mistura de reação novamente purgada com argônio durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. A mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. Os extratos combinados foram secos em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer ((1s,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)carbamoil)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)fenil)(metil)amino)ciclo- hexil)carbamato de terc-butila (0,05 g, 33,3 %).
[0929]Etapa 2: Síntese de 3-(((1s,4s)-4-aminociclo-hexil)(metil)amino)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4- il)benzamida
[0930]Uma solução agitada de ((1s,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4- il)fenil)(metil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila (0,05 g) em DCM (5 mL) foi esfriada a 0 °C e TFA (2 mL) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h. A reação foi concentrada à secura fornecendo o composto do título como um sal de TFA (0,03 g, 73,1 %). LCMS: 477,30 (M + 1)+; HPLC: 98,76 % (@ 254 nm) (Rt; 3,862; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ: Fase Móvel: A: 0,05 %, TFA em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 8,08 - 8,12 (m, 2H), 7,76 - 7,81 (m, 4H), 7,33 (s, 1H), 7,12 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,27 (d, 2H, J = 4 Hz), 3,83 (s, 3H), 3,16 (m, 2H), 2,50 (3H ligado em pico de solvente), 2,22 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,84 (m, 2H), 1,57 - 1,63 (m, 4H), 1,47 - 1,50 (m, 2H).
[0931]Exemplo 47: Síntese de 5-(((1s,4s)-4-aminociclo-hexil)(metil)amino)-N- ((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-[1,1- bifenil]-3-carboxamida
Figure img0132
[0932]Etapa 1: Síntese de ((1s,4s)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin- 3-il)metil)carbamoil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3- il)(metil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila
[0933]A uma solução agitada de ((1s,4s)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)ciclo-hexil)- carbamato de terc-butila (1 equiv.) e N,N-dimetil-1-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)fenil)metanamina (1,2 equiv.) em mistura de dioxano/água (5 mL + 1 mL), Na2CO3 (3,6 equiv.) foi adicionado. A solução foi purgada em seguida, com argônio durante 15 min. Pd(PPh3)4 (0,1 equiv.) foi adicionado e a mistura de reação novamente purgada com argônio durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. A mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. Os extratos combinados foram secos em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer ((1s,4s)-4-((5-(((4,6-dimetil-2- oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-[1,1’- bifenil]-3-il)(metil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila (0,100 g, 61 %).
[0934]Etapa 2: Síntese de 5-(((1s,4s)-4-aminociclo-hexil)(metil)amino)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida
[0935]Uma solução agitada de ((1s,4s)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3- il)(metil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila (0,10 g) em DCM (5 mL) foi esfriada a 0 °C e TFA (2 mL) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h. A reação foi concentrada à secura fornecendo o composto do título como um sal de TFA (0,05 g, 59,5 %). LCMS: 530,35 (M + 1)+; HPLC: 97,13 % (@ 254 nm) (Rt; 3,672; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,44 (s, 1H), 9,47 (bs, 1H), 8,17 (t, 1H), 7,74 - 7,76 (m, 4H), 7,55 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,44 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,30 (m, 4H), 3,12 (m, 2H), 2,74 (s, 6H), 2,54 (s, 3H), 2,30 (s, 3H), 2,12 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,84 (bs, 2H), 1,59 - 1,63 (m, 4H), 1,48 (m, 2H).
[0936]Exemplo 48: Síntese de 3-(((1s,4s)-4-aminociclo-hexil)(metil)amino)-N- ((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H- pirazol-4-il)benzamide
Figure img0133
[0937]Etapa 1: Síntese de ((1s,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin- 3-il)metil)carbamoil)-2-metil-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4- il)fenil)(metil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila
[0938]A uma solução agitada de ((1s,4s)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metiIfenil)(metil)amino)ciclo-hexil)- carbamato de terc-butila (1 equiv.) e 4-(2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)-1H-pirazol-1-il)etil)morfolina (1,2 equiv.) em mistura de dioxano/água (5 mL + 1 mL), Na2CO3 (3,6 equiv.) foi adicionado. A solução foi purgada em seguida, com argônio durante 15 min. Pd(PPh3)4 (0,1 equiv.) foi adicionado e a mistura de reação novamente purgada com argônio durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. A mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. Os extratos combinados foram secos em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metil-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4- il)fenil)(metil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila (0,120 g, 75,4 %).
[0939]Etapa 2: Síntese de 3-(((1s,4s)-4-aminociclo-hexil)(metil)amino)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H- pirazol-4- il)benzamida
[0940]Uma solução agitada de ((1s,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metil-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4- il)fenil)(metil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila (0,10 g) em DCM (5 mL) foi esfriada a 0 °C e TFA (2 mL) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h. A reação foi concentrada à secura fornecendo o composto do título como um sal de TFA (0,06 g, 58,82 %). LCMS: 576,40 (M + 1)+; HPLC: 96,89 % (@ 254 nm) (Rt; 3,481; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMS0-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,08 (t, 1H), 7,79 (s, 1H), 7,74 - 7,79 (m, 3H), 7,34 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,51 (bs, 2H), 4,27 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,16 (m, 6H), 2,50 (3H ligado em pico de solvente), 2,23 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,84 (bs, 2H), 1,57 - 1,63 (m, 4H), 1,47 - 1,49 (m, 2H). [3 H ligado em pico de solvente].
[0941]Exemplo 49: Síntese de 3-(((1s,4s)-4-aminociclo-hexil)(metil)amino)-N- ((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3- il)benzamide
Figure img0134
[0942]Etapa 1: Síntese de ((1s,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin- 3-il)metil)carbamoil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)-amino)ciclo- hexil)carbamato de terc-butila
[0943]A uma solução agitada de ((1s,4s)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)-ciclo- hexil)carbamato de terc-butila (0,5 g, 8,71 mmols) e ácido (6-formilpiridin-3-il) borônico (0,264 g, 1,13 mmol) em mistura de dioxano/água (10 mL + 2 mL), Na2CO3 (0,333 g, 2,8 mmols) foi adicionado. A solução depois foi purgada com argônio durante 15 min. Pd(PPh3)4 (0,1 g, 0,086 mmol) foi adicionado e a solução novamente purgada com argônio durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. A mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. Os extratos combinados foram secos em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer ((1s,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)carbamoil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)ciclo- hexil)carbamato de terc-butila (0,3 g, 57,3 %).
[0944]Etapa 2: Síntese de ((1s,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin- 3-il)metil)carbamoil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)fenil)(metil)amino)ciclo- hexil)carbamato de terc-butila
[0945]A uma solução agitada de ((1s,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)ciclo- hexil)carbamato de terc-butila (1 equiv.) e morfolino (5 equiv.) em metanol (10 mL), ácido acético (2 equiv.) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 18 h. Cianoboro-hidreto de sódio (2,5 equiv.) depois foi adicionado a 0 °C e a mistura de reação agitada durante a noite na temperatura ambiente. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer ((1s,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2--metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3- il)fenil)(metil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila.
[0946]Etapa 3: Síntese de 3-(((1s,4s)-4-aminociclo-hexil)(metil)amino)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3- il)benzamida
[0947]Uma solução agitada de ((1s,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3- il)fenil)(metil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila em DCM (5 mL) foi esfriada a 0 °C e TFA (2 mL) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h. A reação foi concentrada à secura e o produto purificado por lavagens com solvente para fornecer o composto do título como um sal de TFA (0,1 g, 94,33 %). LCMS: 573,45 (M + 1)+; HPLC: 98,94 % (@ 254 nm) (Rt; 3,618; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,47 (s, 1H), 8,94 (s, 1H), 8,19 - 8,21 (m, 2H), 7,80 (s, 3H), 7,60 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,49 (s, 1H), 7,31 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,52 (bs, 2H), 4,29 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,83 (bs, 4H), 3,27 (m, 4H), 3,14 - 3,21 (m, 2H), 2,55 (s, 3H), 2,30 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,87 (bs, 2H), 1,59 - 1,64 (m, 4H), 1,49 - 1,51 (m, 2H).
[0948]Exemplo 50: Síntese de 3-(((1r,4r)-4-aminociclo-hexil)(metil)amino)-N- ((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3- il)benzamide
Figure img0135
[0949]Etapa 1: Síntese de ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin- 3-il)metil)carbamoil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)-ciclo- hexil)carbamato de terc-butila
[0950]A uma solução agitada de ((1r,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2- di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)ciclo-hexil)-carbamato de terc-butila (0,4 g, 0,696 mmol) e ácido (6-formilpiridin-3-il) borônico (0,21 g, 0,906 mmol) em mistura de dioxano/água (8 mL + 2 mL), Na2CO3 (0,332 g, 3,13 mmols) foi adicionado. A solução de reação depois foi purgada com argônio durante 15 min. Pd(PPh3)4 (0,080 g, 0,069 mmol) foi adicionado e argônio purgado foi novamente realizado durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. A mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)-ciclo- hexil)carbamato de terc-butila (0,28 g, 66,98 %).
[0951]Etapa 2: Síntese de ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin- 3-il)metil)carbamoil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)fenil)(metil)-amino)ciclo- hexil)carbamato de terc-butila
[0952]A uma solução agitada de ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)-ciclo- hexil)carbamato de terc-butila (1 equiv.) e morfolina (5 equiv.) em metanol (10 mL), ácido acético (2 equiv.) foi adicionado. A reação foi agitada na temperatura ambiente durante 1 8 h. Cianoboro-hidreto de sódio (2,5 equiv.) depois foi adicionado a 0 °C e a reação agitada durante a noite na temperatura ambiente. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o material bruto foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- carbamoil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)fenil)(metil)-amino)ciclo- hexil)carbamato de terc-butila.
[0953]Etapa 3: Síntese de 3-(((1r,4r)-4-aminociclo-hexil)(metil)amino)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3- il)benzamida
[0954]Uma solução agitada de ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-carbamoil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)fenil(metil)- amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila em DCM (5 mL) foi esfriada a 0 °C e TFA (2 mL) foi adicionado à mesma. A massa de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h. A mistura de reação foi concentrada à secura e o produto sólido purificado por lavagens com solvente para fornecer o composto do título como um sal de TFA (0,07 g, 82,3 %). LCMS: 573,40 (M + 1)+; HPLC: 91,56 % (@ 254 nm) (Rt; 3,591; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 8,95 (s, 1H), 8,19 - 8,22 (m, 2H), 7,78 (bs, 3H), 7,61 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,40 (s, 1H), 7,27 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,52 (bs, 2H), 4,28 (d, 2H, J = 3,2 Hz), 3,84 (bs, 4H), 3,27 (bs, 4H), 2,97 (bs, 1H), 2,75 (m, 1H), 2,66 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,93 (m, 2H), 1,74 - 1,76 (m, 2H), 1,54 - 1,57 (m, 2H), 1,28 - 1,31 (m, 2H).
[0955]Exemplo 51: Síntese de 3-(((1r,4r)-4-aminociclo-hexil)(metil)amino)-N- ((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H- pirazol-4-il)benzamide
Figure img0136
[0956]Etapa 1: Síntese de ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin- 3-il)metil)carbamoil)-2-metil-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4- il)fenil)(metil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila
[0957]A uma solução agitada de ((1r,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2- di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)-ciclo-hexil)carbamato de terc-butila (1 equiv.) e 4-(2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol-1- il)etil)morfolino (1,2 equiv.) em mistura de dioxano/água (5 mL + 1 mL), Na2CO3 (3,6 equiv.) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (0,1 equiv.) foi adicionado e o frasco de reação foi purgado novamente durante 10 min. com argônio. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. A mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. Os extratos orgânicos combinados foram secos em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metil-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4- il)fenil)(metil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila (0,08 g, 45,45 %)
[0958]Etapa 2: Síntese de 3-(((1r,4r)-4-aminociclo-hexil)(metil)amino)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4- il)benzamida
[0959]Uma solução agitada de ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metil-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4- il)fenil)(metil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila (0,08 g) em DCM (5 mL) foi esfriada a 0 °C e TFA (2 mL) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h. A reação foi concentrada à secura para fornecer o composto do título como um sal de TFA (0,07 g, 86,41 %). LCMS: 576,45 (M + 1)+; HPLC: 98,26 % (@ 254 nm) (Rt; 3,413; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,08 (t, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,75 (m, 3H), 7,28 (s, 1H), 7,13 (s, 1H), 5,87 (s, 1H), 4,53 (t, 2H), 4,27 (d, 2H, J = 3,6 Hz), 2,97 - 3,1 6 (m, 4H), 2,67 - 2,71 (m, 1H), 2,62 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,92 - 1,94 (m, 2H), 1,72 (m, 2H), 1,52 - 1,55 (m, 2H), 1,23 - 1,29 (m, 2H).
[0960]Exemplo 52: Síntese de 3-(((1s,4s)-4-aminociclo-hexil)(metil)amino)-N- ((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)- 2-metilbenzamida
Figure img0137
[0961]Etapa 1: Síntese de ((1s,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin- 3-il)metil)-carbamoil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)- ciclo-hexil)carbamato de terc-butila
[0962]A uma solução agitada de ((1s,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilfenil)-(metil)amino)ciclo- hexil)carbamato de terc-butila (1 equiv.) e dimetilamina (5 equiv.) em metanol (10 mL), ácido acético (2 equiv.) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 18 h. Cianoboro-hidreto de sódio (2,5 equiv.) depois foi adicionado a 0 °C e a mistura de reação agitada durante a noite na temperatura ambiente. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer ((1s,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2- metilfenil)(metil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila.
[0963]Etapa 2: Síntese de 3-(((1s,4s)-4-aminociclo-hexil)(metil)amino)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2- metilbenzamida
[0964]Uma solução agitada de ((1s,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2- metilfenil)(metil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila em DCM (5 mL) foi esfriada a 0 °C e TFA (2 mL) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h. A reação foi concentrada à secura e o produto purificado por lavagens com solvente para fornecer o composto do título como um sal de TFA (0,07 g, 93,3 %). LCMS: 531,25 (M + 1)+; HPLC: 97,59 % (@ 254 nm) (Rt; 3,680; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMS0-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 10,01 (s, 1H), 8,95 (s, 1H), 8,20 (d, 2H, J = 5,2 Hz), 7,80 (bs, 3H), 7,59 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,51 (s, 1H), 7,32 (s, 1H), 5,87 (s, 1H), 4,48 (bs, 2H), 4,29 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,21 (m, 1H), 3,14 - 3,16 (m, 1H), 2,83 (s, 6H), 2,55 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,86 (bs, 2H), 1,59 - 1,64 (m, 4H), 1,49 - 1,51 (m, 2H).
[0965]Exemplo 53: Síntese de 3-(((1r,4r)-4-aminociclo-hexil)(metil)amino)-N- ((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)- 2-metilbenzamida
Figure img0138
[0966]Etapa 1: Síntese de ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin- 3-il)metil)carbamoil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2- metilfenil)(metil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila
[0967]A uma solução agitada de ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)-ciclo- hexil)carbamato de terc-butila (1 equiv.) e dimetilamina (5 equiv.) em metanol (10 mL), ácido acético (2 equiv.) foi adicionado. A reação foi agitada na temperatura ambiente durante 18 h. Cianoboro-hidreto de sódio (2,5 equiv.) depois foi adicionado a 0 °C e a reação agitada durante a noite na temperatura ambiente. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o material bruto foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-5-(6- ((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila.
[0968]Etapa 2: Síntese de 3-(((1r,4r)-4-aminociclo-hexil)(metil)amino)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridina-3-il)-3- metilbenzamida
[0969]Uma solução agitada de ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-5-(6-((dimetilarnino)metil)piridin-3-il)-2- metilfenil)(metil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila em DCM (5 mL) foi esfriada a 0 °C e TFA (2 mL) foi adicionado à mesma. A massa de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h. A mistura de reação foi concentrada à secura e o produto sólido purificado por lavagens com solvente para fornecer o composto do título como um sal de TFA (0,05 g, 66,6 %). LCMS: 531,30 (M + 1)+; HPLC: 97,59 % (@ 254 nm) (Rt; 3,564; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 10,01 (s, 1H), 8,95 (s, 1H), 8,20 (bs, 2H), 7,78 (bs, 2H), 7,59 (d, 1H, J = 6 Hz), 7,41 (s, 1H), 7,28 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,48 (bs, 2H), 4,29 (m, 2H), 2,97 (bs, 2H), 2,83 (s, 6H), 2,66 (s, 3H), 2,21 (s, 6H), 2,10 (s, 3H), 1,93 (m, 2H), 1,74 (m, 2H), 1,55 - 1,57 (m, 2H), 1,28 - 1,31 (m, 2H).
[0970]Exemplo 54: Síntese de 3-(((1r,4r)-4-acetamidociclo-hexil)(metil)amino- N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin- 3-il)benzamide
Figure img0139
[0971]O composto 54 foi preparado com o método similar àquele descrito no Exemplo 57.
[0972]Dados Analíticos de: LCMS: 615,55 (M + 1)+; HPLC: 98,75 % (@ 254 nm) (Rt; 3,854; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 8,75 (s, 1H), 8,18 (t, 1H), 8,02 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,67 (d, 1H, J = 7,2 Hz), 7,49 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,35 (s, 1H), 7,19 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,59 - 3,61 (m, 4H), 3,47 - 3,55 (m, 2H), 2,76 (t, 2H, J = 4 Hz), 2,65 (s, 3H), 2,42 (bs, 4H), 2,21 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,78 - 1,90 (m, 2H), 1,68 - 1,74 (m, 5H), 1,48 - 1,57 (m, 2H), 1,03 - 1,23 (m, 2H).
[0973]Exemplo 55: Síntese de 3-(((1s,4s)-4-acetamidociclo-hexil)(metil)amino)- N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3- il)-2-metilbenzamida
Figure img0140
[0974]Etapa 1: Síntese de 3-(((1s,4s)-4-acetamidociclo-hexil)(metil)amino)-N- ((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2- metilbenzamida
[0975]Ácido 3-(((1s,4s)-4-acetamidociclo-hexil)(metil)amino)-5-bromo-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0,65 g, 1,25 mmol) e (6- formiIpiridin-3-il) borônico (0,38 g, 1,63 mmol) em mistura de dioxano/água (10 mL + 2 mL) foi adicionado Na2CO3 (0,48 g, 4,53 mmols) e a solução purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (0,14 g, 0,12 mmol) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer cis-isômero 3- ((4-acetamidociclo-hexil)-(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamida (0,35 g, 51,16 %).
[0976]Etapa 2: Síntese de
[0977]A uma solução agitada de 3-(((1s,4s)-4- acetamidociclo- hexil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(6- formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamida (1 equiv.) e dimetilamina (5 equiv.) em 5 mL para 0,3 mmol; MeOH foi adicionado ácido acético (2 equiv.) e a reação agitada na temperatura ambiente. Em seguida, NaBH3CN (1,5 equiv.) foi adicionado e a reação agitada durante a noite. Em conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica ou, conforme especificado, o composto do título (0,006 g, 3,2 %). LCMS: 573,40 (M + 1)+; HPLC: 95,52 % (@ 254 nm) (Rt; 3,899; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,47 (s, 1H), 8,88 (s, 1H), 8,20 (t, 1H), 8,14 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 7,78 (d, 1H, J = 7,2 Hz), 7,55 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,44 (s, 1H), 7,26 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 3,2 Hz), 4,26 (bs, 1H), 3,71 (bs, 1H), 3,01 (bs, 1H), 2,61 - 2,66 (m, 8H), 2,28 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,81 (m, 5H), 1,56 (m, 2H), 1,40 - 1,46 (m, 2H), 1,23 (m, 2H). [2H ligado em pico de solvente].
[0978]Exemplo 56: Síntese de 3-(((1s,4s)-4-acetamidociclo-hexil)(metil)amino)- N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(6-(hidroximetil)piridin-3-il)-2- metilbenzamida
Figure img0141
[0979]O composto 56 foi preparado na mesmo reação como composto 55. LCMS: 546,40 (M + 1)+; HPLC: 99,40 % (@ 254 nm) (Rt; 3,845; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,47 (s, 1H), 8,74 (s, 1H), 8,20 (t, 1H), 8,04 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,77 (d, 1H, J = 7,2 Hz), 7,52 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 7,40 (s, 1H), 7,22 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 5,45 (t, 1H, J = 5,2 Hz), 4,59 (d, 2H, J = 5,6 Hz), 4,27 (d, 2H, J = 4 Hz), 3,71 (bs, 1H), 3,00 (bs, 1H), 2,60 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,81 (m, 5H), 1,56 (m, 2H), 1,40 - 1,48 (m, 4H).
[0980]Exemplo 57: Síntese de 3-(((1s,4s)-4-acetamidociclo-hexil)(metil)((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3- il)benzamide
Figure img0142
[0981]A uma solução agitada de 3-(((1s,4s)-4-acetamidociclo- hexil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(6- formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamida (1 equiv.) e morfolina (5 equiv.) em 5 mL para 0,3 mmol; MeOH foi adicionado ácido acético (2 equiv.) e a reação agitada na temperatura ambiente. Em seguida, NaBH3CN (1,5 equiv.) foi adicionado e a reação agitada durante a noite. Em conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica ou, conforme especificado, o composto do título (0,08 g, 43 %). LCMS: 615,40 (M + 1)+; HPLC: 99,64 % (@ 254 nm) (Rt; 3,900; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 8,75 (s, 1H), 8,19 (t, 1H), 8,01 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 7,77 (d, 1H, J = 7,2 Hz), 7,50 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,40 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,71 (bs, 1H), 3,59 - 3,61 (m, 4H), 3,50 (t, 1H, J = 4,4 Hz), 3,00 (bs, 1H), 2,68 (t, 1H, J = 4,4 Hz), 2,60 (s, 3H), 2,42 (bs, 4H), 2,27 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,81 (m, 5H), 1,56 (m, 2H), 1,40 - 1,45 (m, 2H), 1,16- 1,29 (m, 2H).
[0982]Exemplo 59: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-5-(propil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida
Figure img0143
[0983]Etapa 1: Síntese de 5-bromo-2-metil-3-((tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)benzoato de metila
[0984]A uma solução agitada de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metila (15 g, 61,5 mmols) e di-hidro-2H-piran-4(3)-ona (9,2 g, 92 mmols) em dicloroetano (300 mL) foi adicionado ácido acético (22 g, 369 mmols) e a mistura de reação agitada na temperatura ambiente durante 15 minutos, em seguida, a mistura de reação foi esfriada a 0 °C e triacetoxiboro-hidreto de sódio (39 g, 183,96 mmols) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada durante a noite na temperatura ambiente. Bicarbonato de sódio aquoso depois foi adicionado à mistura de reação ajustando o pH entre 7 a 8. A fase orgânica foi separada e a fase aquosa extraída com acetato de etila. Os extratos combinados foram secos em anidro sulfato de sódio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (malha em gel de sílica 100 a 200) eluindo com acetato de etila:hexano para fornecer 5-bromo-2-metil-3-((tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzoato de metila como um sólido branco amarelado (14 g, 69 %).
[0985]Etapa 2: Síntese de 5-bromo-2-metil-3-(propil(tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)benzoato de metila
[0986]A uma solução agitada de 5-bromo-2-metil-3-((tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)benzoato (1 g, 3,04 mmols) e propionaldeído (0,354 g, 6,09 mmols) em dicloroetano (10 mL), ácido acético (1,12 g, 18,2 mmols) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 10 minutos. Em seguida, triacetoxiboro-hidreto de sódio (1,94 g, 9,14 mmols) foi adicionado a 0 °C e a mistura de reação agitada na temperatura ambiente durante 2 h. O solvente depois foi removido sob pressão reduzida e água adicionada ao resíduo. A mistura foi extraída com DCM. Os extratos combinados foram secos em sulfato de sódio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer 5-bromo-2-metil-3-(propil(tetra-hidro-2H- piran-4-il)amino)benzoato de metila (0,96 g, 85,7 %). Etapa 3: Síntese de 5-bromo-N- ((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(propil(tetra-hidro-2H-piran- 4-il)amino)benzamida
[0987]NaOH aquoso (0,156 g, 3,8 mmols) foi adicionado a uma solução de 5- bromo-2-metil-3-(propil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzoato (0,96 g, 2,59 mmols) em etanol (5 mL). A mistura de reação foi agitada a 60 °C durante 1 h. O etanol depois foi removido sob pressão reduzida e o resíduo acidificado ao pH 6 usando HCl diluído e ao pH 4 com ácido cítrico. A mistura foi extraída com acetato de etila. Os extratos combinados foram secos, filtrados e concentrados fornecendo o respectivo ácido (0,8 g, 86,67 %).
[0988]O ácido acima (0,8 g, 2,24 mmols) foi dissolvido em DMSO (5 mL) e 3- (aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,683 g, 4,49 mmols) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 15 min antes de PyBOP (1,75 g, 3,36 mmols) foi adicionado à mesma e a agitação foi continuada durante a noite. A mistura de reação foi vertida em água gelada e extraída com MeOH/DCM a 10 %. Os extratos combinados foram secos, filtrados, e concentrados para obter o produto bruto que foi purificado por lavagens com solvente para fornecer 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(propil(tetra- hidro-2H-piran-4-il)amino)benzamida (0,9 g, 81,8 %).
[0989]Etapa 4: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4- metil-4’-(morfolinometil)-5-(propil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamida
[0990]A uma solução agitada de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(propil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzamida (0,2 g, 0,412 mmol) e 4-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzil)morfolina (0,148 g, 0,488 mmol) em mistura de dioxano/água (5 mL + 1 mL), Na2CO3 (0,108 g, 1,01 mmol) foi adicionado e a mistura de reação purgada com argônio durante 15 min. Pd(PPh3)4 (0,048 g, 0,042 mmol) depois foi adicionado e a mistura de reação novamente purgada com argônio durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 2 h. A mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. Os extratos combinados foram secos em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer o composto do título (0,20 g, 83,68 %). LCMS: 587,40 (M + 1)+; HPLC: 98,68 % (@ 254 nm) (Rt; 4,257; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 8,19 (t, 1H, J = 4,8 Hz), 7,56 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,38 (t, 3H, J = 8 Hz), 7,19 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,82 - 3,85 (m, 2H), 3,57 (m, 4H), 3,48 (s, 2H), 3,23 (t, 2H, J = 10,8 Hz), 2,94 - 3,02 (m, 3H), 2,36 (bs, 4H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,56 - 1,65 (m, 4H), 1,20 - 1,25 (m, 2H), 0,76 (t, 3H, J = 6,8 Hz).
[0991]Exemplo 60: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(isobutil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’- bifenil]-3-carboxam ida
Figure img0144
[0992]Etapa 1: Síntese de 5-bromo-3-(isobutil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)- 2-metilbenzoato de metila
[0993]A uma solução agitada de 5-bromo-2-metil-3-((tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)benzoato de metila (1 g, 3,04 mmols) e isobutiraldeído (1,09 g, 15,24 mmols) em metanol (15 mL), ácido acético (0,456 g, 7,6 mmols) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 8 h. Cianoboro-hidreto de sódio (0,522 g, 7,56 mmols) depois foi adicionado a 0 °C e a mistura de reação agitada durante a noite na temperatura ambiente. O solvente depois foi removido sob pressão reduzida e o produto bruto purificado por cromatografia em coluna para fornecer 5- bromo-3-(isobutil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoato de metila (0,52 g, 54,33 %).
[0994]Etapa 2: Síntese de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-3-(isobutil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida
[0995]NaOH aquoso (0,104 g, 2,61 mmols) foi adicionado a uma solução de 5- bromo-3-(isobutil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoato de metila (0,5 g, 1,30 mmol) em etanol (15 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. O etanol depois foi removido sob pressão reduzida e acidificado ao pH 6 com HCl diluído e ao pH 4 com ácido cítrico. A mistura foi extraída com acetato de etila. Os extratos combinados foram secos e concentrados fornecendo o respectivo ácido (0,375 g, 76,9 %).
[0996]O ácido acima (0,350 g, 9,45 mmols) depois foi dissolvido em DMSO (5 mL) e 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,283 g, 18,9 mmols) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 15 min antes de PyBOP (0,737 g, 14,17 mmols) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada durante a noite. A mistura de reação foi vertida em água gelada e o precipitado resultante foi coletado e purificado por lavagens com solvente fornecendo 5-bromo-N- ((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(isobutil(tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)-2-metilbenzamida (0,2 g, 42,01 %).
[0997]Etapa 3: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5- (isobutil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamida
[0998]A uma solução agitada de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(isobutil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (0,14 g, 0,277 mmol) e 4-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzil)morfolina (0,100 g, 0,333 mmol) em mistura de dioxano/água (5 mL + 1 mL), Na2CO3 (0,108 g, 1,01 mmol) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Pd(PPh3)4 (0,032 g, 0,027 mmol) depois foi adicionado e a mistura de reação novamente purgada com argônio durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 2 h. A mistura de reação depois foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. Os extratos combinados foram secos em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por HPLC preparativa para fornecer o composto do título como um sal de TFA (0,039 g, 23,49 %). LCMS: 601,30 (M + 1)+; HPLC: 99,88 % (@ 254 nm) (Rt; 5,225; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 9,83 (bs, 1H), 8,20 (t, 1H), 7,73 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,56 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,43 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,39 (bs, 2H), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,95 - 3,98 (m, 2H), 3,85 - 3,87 (m, 2H), 3,62 (t, 2H, J = 11,2 Hz), 3,15 - 3,31 (m, 9H), 2,84 (m, 1H), 2,26 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,62 (bs, 2H), 1,37 - 1,40 (m, 2H), 0,80 (d, 6H, J = 6 Hz).
[0999]Exemplo 61: Síntese de 5-((ciclopropilmetil)(tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’- (morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida
Figure img0145
[01000]Etapa 1: Síntese de 5-bromo-3-((ciclopropilmetil)(tetra-hidro-2H-piran- 4-il)amino)-2-metilbenzoato de metila
[01001]A uma solução agitada de 5-bromo-2-metil-3-((tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)benzoato de metila (1 g, 3,04 mmols) e ciclopropanocarbaldeído (1,06 g, 15,24 mmols) em metanol (15 mL), ácido acético (0,456 g, 7,6 mmols) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 8 h. Cianoboro- hidreto de sódio (0,488 g, 7,62 mmols) depois foi adicionado a 0 °C e a mistura de reação agitada durante a noite na temperatura ambiente. O solvente depois foi removido sob pressão reduzida e o produto bruto purificado por cromatografia em coluna para fornecer 5-bromo-3-((ciclopropilmetil)(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2- metilbenzoato de metila (0,275 g, 23,70 %).
[01002]Etapa 2: Síntese de 5-bromo-3-((ciclopropilmetil)(tetra-hidro-2H-piran- 4-il)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
[01003]NaOH aquoso (0,056 g, 1,45 mmol) foi adicionado a uma solução de 5- bromo-3-((ciclopropilmetil)(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoato de metila (0,275 g, 0,943 mmol) em etanol (5 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. O etanol depois foi removido sob pressão reduzida e acidificado ao pH 6 com HCl diluído e ao pH 4 com ácido cítrico. A mistura foi extraída com acetato de etila. Os extratos combinados foram secos e concentrados fornecendo o respectivo ácido (0,25 g, 93,28 %).
[01004]O ácido acima (0,250 g, 0,68 mmol) foi dissolvido em DMSO (3 mL) e 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,155 g, 1,02 mmol) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 15 min antes de PyBOP (0,708 g, 1,36 mmol) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada durante a noite. A mistura de reação foi vertida em água gelada e o precipitado resultante coletado e purificado por lavagens com solvente fornecendo 5-bromo-3- ((ciclopropilmetil)(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0,25 g, 73,31 %).
[01005]Etapa 3: Síntese de 5-((ciclopropilmetil)(tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’- (morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida
[01006]A uma solução agitada de 5-bromo-3-((ciclopropilmetil)(tetra-hidro-2H- piran-4-il)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0,25 g, 0,499 mmol) e 1-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzil)morfolino (0,181 g, 0,598 mmol) em mistura de dioxano/água (5 mL + 1 mL), Na2CO3 (0,19 g, 1,79 mmol) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Pd(PPh3)4 (0,057 g, 0,049 mmol) depois foi adicionado e a mistura de reação novamente purgada com argônio durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 2 h. A mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. Os extratos combinados foram secos em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por HPLC preparativa para fornecer o composto do título como um sal de TFA (0,085 g, 28,52 %). LCMS: 599,35 (M + 1)+; HPLC: 99,21 % (@ 254 nm) (Rt; 4,191; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,51 (s, 1H), 9,83 (bs, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,77 (d, 2H, J = 6,4 Hz), 7,53 - 7,58 (m, 3H), 7,28 (s, 1H), 5,87 (s, 1H), 4,39 (bs, 2H), 4,29 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,95 - 3,98 (m, 2H), 3,59 - 3,65 (m, 2H), 3,31 - 3,21 (m, 5H), 3,05 - 3,16 (m, 3H), 2,93 (m, 2H), 2,32 (m, 4H), 2,21 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,65 (bs, 2H), 1,50 (m, 2H), 0,66 (bs, 1H), 0,28 (d, 2H, J = 7,2 Hz).
[01007]Exemplo 62: Síntese de 5-(butil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-N- ((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida
Figure img0146
[01008]Composto 62
[01009]O composto 62 foi preparado com o método similar àquele descrito no Exemplo 61.
[01010]Dados Analíticos de sal de TFA: LCMS: 601,35 (M + 1)+; HPLC: 99,41 % (@ 254 nm) (Rt; 4,482; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,47 (s, 1H), 9,89 (bs, 1H), 8,22 (t, 1H), 7,75 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,57 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,44 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,39 (bs, 2H), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,95 - 3,98 (m, 3H), 3,83 - 3,86 (m, 4H), 3,21 - 3,30 (m, 4H), 3,08 - 3,11 (m, 4H), 2,24 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,62 (m, 4H), 1,20 (m, 4H), 0,79 (t, 3H, J = 6,4 Hz).
[01011]Exemplo 63: Síntese de 5-((ciclobutilmetil)(tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’- (morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida
Figure img0147
[01012]O composto 63 foi preparado com o método similar àquele descrito no Exemplo 61.
[01013]Dados Analíticos: LCMS: 613,35 (M + 1)+; HPLC: 99,25 % (@ 254 nm) (Rt; 4,586; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,18 (t, 1H), 7,56 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,41 (s, 1H), 7,37 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,20 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,45 (m, 2H), 4,28 (d, 2H, J = 4 Hz), 3,83 - 3,85 (m, 2H), 3,57 (m, 3H), 3,48 (s, 2H), 3,19 - 3,22 (m, 2H), 3,08 (bs, 2H), 2,86 (m, 1H), 2,36 (m, 4H), 2,20 (s, 6H), 2,10 (s, 3H), 1,70 - 1,78 (m, 4H), 1,56 - 1,63 (m, 6H).
[01014]Exemplo 64: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3- il)benzamide
Figure img0148
[01015]Etapa 1: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamida
[01016]A uma solução agitada de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3 -(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida
[01017](1 g, 2,15 mmols) e ácido (6-formilpiridin-3-il) borônico (0,539 g, 2,31 mmols) em mistura de dioxano/água (15 mL + 3 mL), Na2CO3 (0,82 g, 7,74 mmols) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (0,288 g, 0,25 mmol) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 10 min. A massa de reação foi aquecida a 80 °C durante 2 h. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer o composto desejado (0,60 g, 57 %).
[01018]Etapa 2: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3- il)benzamida
[01019]A uma solução agitada de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2- metilbenzamida (0,2 g, mmol) em dicloroetano (3 mL) foi adicionado morfolina (5 equiv.) em 5 mL de MeOH e ácido acético (2 equiv.) e a mistura foi agitada na temperatura ambiente durante 15 minutos. Em seguida, NaBH3CN (1,5 equiv.) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 16 horas. Depois da conclusão (monitorada por TLC), bicarbonato de sódio aquoso foi adicionado à mistura de reação até o pH 7 a 8, a fase orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram secas em anidro sulfato de sódio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O composto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (malha em gel de sílica 100 a 200) eluindo com acetato de etila: hexano para fornecer o composto do título como um sólido branco amarelado. LCMS: 574,25 (M + 1)+; HPLC: 97,17 % (@ 254 nm) (Rt; 3,906; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 8,75 (s, 1H), 8,20 (t, 1H), 8,01 (d, 1H, J = 7,2 Hz), 7,50 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 7,46 (s, 1H), 7,27 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 3,6 Hz), 3,81 - 3,83 (m, 2H), 3,59 - 3,61 (m, 6H), 3,22 - 3,30 (m, 2H), 3,08 - 3,10 (m, 2H), 3,03 (m, 1H), 2,43 (s, 4H), 2,25 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,65 - 1,67 (m, 2H), 1,51 - 1,53 (m, 2H), 0,83 (t, 3H, J = 6,4 Hz).
[01020]Exemplo 65: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-4’-((dimetilamino)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[1,1’- bifenil]-3-carboxam ida
Figure img0149
[01021]Etapa 1: Síntese de 5-bromo-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2- metilbenzoato de metila
[01022]A uma solução agitada de 5-bromo-2-metil-3-((tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)benzoato de metila (14 g, 42,68 mmols) e acetaldeído (3,75 g, 85,36 mmols) em dicloroetano (150 mL), ácido acético (15,36 g, 256,08 mmols) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 20 minutos. Triacetoxiboro-hidreto de sódio (27,01 g, 128,04 mmols) depois foi adicionado a 0 °C e a mistura de reação agitada na temperatura ambiente durante 2 h. O solvente depois foi removido sob pressão reduzida e água adicionada ao resíduo. A mistura foi extraída com DCM. Os extratos combinados foram secos em sulfato de sódio e concentrados sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer 5-bromo-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoato de metila (14 g, 93,33 %).
[01023]Etapa 2: Síntese de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida
[01024]NaOH aquoso (2,36 g, 59,15 mmols) foi adicionado a uma solução de 5-bromo-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoato de metila (14 g, 39,43 mmols) em etanol (100 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. O etanol depois foi removido sob pressão reduzida e acidificado ao pH 6 com HCl diluído e ao pH 4 com ácido cítrico. A mistura foi extraída com acetato de etila. Os extratos combinados foram secos e concentrados fornecendo o respectivo ácido (13,9 g, 100 %).
[01025]O ácido acima (10 g, 29,23 mmols) foi dissolvido em DMSO (25 mL) e 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (8,8 g, 58 mmols) e trietilamina (5,6 g, 58,4 mmols) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 15 min antes de PyBOP (22 g, 43,8 mmols) foi adicionado. A mistura de reação foi durante a noite. A mistura de reação foi vertida em água gelada e extraída com MeOH/DCM a 10 %. Os extratos combinados foram secos e concentrados para obter o produto bruto que purificado por lavagens com solvente para fornecer 5- bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran- 4-il)amino)-2-metilbenzamida (14 g, 73,68 %).
[01026]Etapa 3: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 4’-((dimetilamino)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3- carboxamida
[01027]A uma solução agitada de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (0,2 g, 0,42 mmol) e ácido (4-((dimetilamino)metil)fenil) borônico (0,15 g, 0,505 mmol) em mistura de dioxano/água (5 mL + 1 mL), Na2CO3 (0,16 g, 1,51 mmol) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Pd(PPh3)4 (0,048 g, 0,042 mmol) foi adicionado e a mistura de reação novamente purgada com argônio durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 2 h. A mistura de reação depois foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. Os extratos combinados foram secos em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer o composto do título (0,120 g, 53,8 %). LCMS: 531,30 (M + 1)+; HPLC: 94,88 % (@ 254 nm) (Rt; 3,949; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,19 (t, 1H, J = 4,4 Hz), 7,61 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,39 - 7,41 (m, 3H), 7,23 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,8 Hz), 3,62 - 3,84 (m, 4H), 3,22 - 3,38 (m, 2H), 3,02 - 3,06 (m, 3H), 2,30 (bs, 6H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,64 - 1,67 (m, 2H), 1,51 - 1,53 (m, 2H), 0,83 (t, 3H, J = 6,8 Hz).
[01028]Exemplo 66: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-((4-metilpiperazin-1-il)metil)- [1,1’-bifenil]-3-carboxamida
Figure img0150
[01029]A uma solução agitada de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (0,2 g, 0,42 mmol) e ácido (4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil) borônico (0,159 g, 0,505 mmol) em mistura de dioxano/água (5 mL + 1 mL), Na2CO3 (0,16 g, 1,51 mmol) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Pd(PPh3)4 (0,048 g, 0,042 mmol) depois foi adicionado e a mistura de reação novamente purgada com argônio durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 2 h. A mistura de reação depois foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. Os extratos combinados foram secos em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por HPLC preparativa para fornecer o composto do título como um sal de TFA (0,110 g, 44,7 %). LCMS: 586,40 (M + 1)+; HPLC: 96,03 % (@ 254 nm) (Rt; 3,803; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,23 (t, 1H), 7,69 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,47 (t, 3H, J = 8 Hz), 7,29 (s, 1H), 5,87 (s, 1H), 4,28 (d, 4H, J = 4 Hz), 3,93 (s, 3H), 3,83 - 3,86 (m, 2H), 3,43 (m, 2H), 3,16 - 3,27 (m, 8H), 2,81 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,66 (m, 2H), 1,57 (m, 2H), 0,84 (t, 3H, J = 6 Hz).
[01030]Exemplo 67: Síntese de 4’-((1R, 4R)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-5- ilmetil)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran- 4-il)amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida (0,1 g, 28 %);
Figure img0151
[01031]Etapa 1: Síntese de 5-bromo-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2- metilbenzoato de metila
[01032]A uma solução agitada de 5-bromo-2-metil-3-((tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)benzoato de metila (14 g, 43 mmols) e acetaldeído (3,75 g, 85,4 mmols) em dicloroetano (150 mL), foi adicionado ácido acético (15,36 g, 256 mmols). Depois da agitação na temperatura ambiente durante 20 minutos, triacetoxiboro-hidreto de sódio (27,0 g, 128 mmols) foi adicionado a 0 °C. A mistura foi agitada na temperatura ambiente durante 2 h e resfriada com bicarbonato de sódio aquoso. A fase orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer 5-bromo-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2- metilbenzoato de metila (14 g, 93 %).
[01033]Etapa 2: Síntese de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-3 -(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida
[01034]A uma solução agitada de 5-bromo-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)-2-metilbenzoato de metila (14 g, 39 mmols) em etanol (100 mL) foi adicionado NaOH aquoso (2,36 g, 59,1 mmols). Depois da agitação a 60 °C durante 1 h, etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado ao pH 4 usando HCl diluído seguido por solução de tampão ácido cítrico. A mistura foi extraída com acetato de etila, e as camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas para fornecer o ácido correspondente (13,9 g).
[01035]A uma solução agitada do ácido acima (10 g, 29 mmols), 3-(amino metil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (8,8 g, 58 mmols) e trietilamina (5,6 g, 58 mmols) em DMSO (25 mL) foi adicionado PYBOP (22 g, 44 mmols) a 0 °C. Depois da agitação durante a noite na temperatura ambiente, a mistura foi vertida em gelo e extraída com MeOH/CH2Cl2 a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas sob pressão reduzida para obter produto bruto. A trituração do material bruto com solvente forneceu 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (14 g, 73 %).
[01036]Etapa 3: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-formil-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida
[01037]A uma solução agitada de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (5,0 g, 10 mmols) e ácido (4-formilfenil) borônico (2,35 g, 15,8 mmols) em dioxano/água (30mL/10 mL) foi adicionado Na2CO3 (4,01 g, 37,9 mmols). A solução foi purgada com argônio durante 15 min., Pd(PPh3)4 (1,21 g, 1,05 mmol) e a mistura foi aquecida a 100 °C durante 2 h. A mistura foi deixada esfriar até a temperatura ambiente, diluída com água e extraída com MeOH/CH2Cl2 a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e o solvente removido sob pressão reduzida. O material resultante bruto foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran- 4-il)amino)-4’-formil-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida (3,5 g, 66 %).
[01038]O procedimento de aminação redutiva seguinte foi usado para sintetizar os Compostos 67 a 105
[01039]A uma solução agitada de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-formil-4-metil-[1,1’-bifenil]-3- carboxamida (1,0 mmol), a amina necessária (3,0 mmols) em dicloroetano (10 mL), foi adicionado ácido acético (6,0 mmols). Depois da agitação na temperatura ambiente durante 20 minutos, triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,63 g, 3,0 mmols) foi adicionado a 0 °C. A mistura foi agitada na temperatura ambiente durante 2 h e resfriada com bicarbonato de sódio aquoso. A fase orgânica foi separada e a fase aquosa extraída com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica ou por RP-HPLC para fornecer o produto na forma de base livre ou sal de trifluoroacetato.
[01040]Dados Analíticos de 4’-((1R, 4R)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-5- ilmetil)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran- 4-il)amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida: LCMS: 585,25 (M + 1)+; HPLC: 99,65 % (@ 254 nm) (Rt; 4,01 9; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,19 (t, 1H), 7,55 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,39 - 7,41 (m, 3H), 7,21 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,35 (s, 2H), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,93 (d, 2H, J = 7,2 Hz), 3,82 (d, 2H, J = 9,6 Hz), 3,72 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,44 - 3,53 (m, 3H), 3,22 - 3,27 (m, 1H), 3,01 - 3,09 (m, 2H), 2,73 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 2,23 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,79 - 1,82 (m, 1H), 1,51 - 1,67 (m, 5H), 0,82 (t, 3H, J = 6,8 Hz).
[01041]Exemplo 68: 4’-((1S, 4S)-2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptan-5-ilmetil)-N- ((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida (0,15g, 43 %);
Figure img0152
[01042]Dados Analíticos: LCMS: 585,35 (M + 1)+; HPLC: 98,99 % (@ 254 nm) (Rt; 3,95; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (bs, 1H,), 8,18 (s, 1H,), 7,56 - 7,54 (m, 2H), 7,41 - 7,39 (m, 3H), 7,21 (s, 1H), 5,87 (s, 1H), 4,34 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,93 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 3,83 - 3,81 (m, 2H), 3,74 - 3,72 (m, 2H), 3,52 (d, 1H, J = 6,8 Hz), 3,44 (s, 1H), 3,28 - 3,22 (m, 2H), 3,09 - 3,08(m, 3H), 2,73 (d, 1H J = 10Hz), 2,41 (d, 1H J = 10Hz), 2,24 (s,3H), 2,20 (s,3H), 2,10 (s,3H), 1,79 (m, 1H), 1,67 - 1,51 (m, 5H), 0,83 (t, 3H, J = 6,8 Hz).
[01043]Exemplo 69: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5- (etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-(pirrolodin-1-ilmetil)-[1,1’-bifeniI]-3- carboxamida (0,19 g)
Figure img0153
[01044]Composto 69
[01045]Dados Analíticos: LCMS: 557,25 (M + 1)+; HPLC: 97,70 % (@ 254 nm) (Rt; 4,075; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,19 (t, 1H, J = 4,4 Hz), 7,55 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,38 (d, 2H, J = 6,4 Hz), 7,35 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,81 - 3,84 (m, 2H), 3,58 (s, 2H), 3,22 - 3,27 (m, 2H), 3,06 - 3,09 (m, 2H), 2,99 - 3,04 (m, 1H), 2,43 (bs, 4H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,64 - 1,69 (m, 6H), 1,51 - 1,56 (m, 2H), 0,83 (t, 3H, J = 6,8 Hz).
[01046]Exemplo 70: (S)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5- (etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-(3-hidroxipirrolodin-1-ilmetil)-4-metil-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida sal de TFA, (0,15 g, 44 %)
Figure img0154
[01047]Dados Analíticos: LCMS: 573,40 (M + 1)+; HPLC: 97,97 % (@ 254 nm) (Rt; 3,965; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,47 (s, 1H), 10,03 - 10,30 (m, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,75 (d, 2H, J = 7,2 Hz), 7,60 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,52 (s, 1H), 7,32 (s, 1H), 5,87 (s, 1H), 4,45 - 4,46 (m, 2H), 4,39 - 4,40 (m, 2H), 4,29 (d, 2H, J = 5,2 Hz), 3,83 - 3,86 (m, 2H), 3,43 - 3,55 (m, 2H), 3,01 - 3,36 (m, 6H), 2,32 - 2,37 (m, 2H), 2,27 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,67 (m, 2H), 1,58 (m, 2H), 0,84 (t, 3H, J = 6,4 Hz).
[01048]Exemplo 71: (R)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5- (etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-(3-hidroxipirrolodin-1-ilmetil)-4-metil-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida, (0,125 g, 55 %
Figure img0155
[01049]Dados Analíticos: LCMS: 573,40 (M + 1)+; HPLC: 96,12 % (@ 254 nm) (Rt; 3,921; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,18 (t, 1H), 7,56 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,39 (s, 1H), 7,36 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,21 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,68 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4 Hz), 4,19 (bs, 1H), 3,81 - 3,84 (m, 2H), 3,56 - 3,59 (m, 2H), 3,22 - 3,25 (m, 2H), 3,08 - 3,09 (m, 2H), 3,01 (m, 1H), 2,57 - 2,67 (m, 2H), 2,32 (m, 2H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,97 - 2,00 (m, 1H), 1,64 - 1,67 (m, 2H), 1,51 - 1,53 (m, 3H), 0,83 (t, 3H, J = 6,4 Hz).
[01050]Exemplo 72: (S)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5- (etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-(3-fluoropirrolodin-1-ilmetil)-4-metil-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida (0,05 g).
Figure img0156
[01051]Dados Analíticos: LCMS: 575,35 (M + 1)+; HPLC: 98,44 % (@ 254 nm) (Rt; 4,081; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,18 (t, 1H), 7,56 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,39 (s, 1H), 7,34 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,21 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 5,09 - 5,25 (m, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4 Hz), 3,81 - 3,86 (m, 2H), 3,65 (s, 2H), 3,53 - 3,55 (m, 2H), 3,17 - 3,25 (m, 2H), 3,07 - 3,16 (m, 7H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,64 - 1,67 (m, 2H), 1,51 - 1,53 (m, 2H), 0,83 (t, 3H, J = 6,8 Hz).
[01052]Exemplo 73: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5- (etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-(piperazin-1-ilmetil)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamida sal de TFA, (0,18 g, 50 %)
Figure img0157
[01053]Dados Analíticos: LCMS: 572,10 (M + 1)+; HPLC: 96,61 % (@ 254 nm) (Rt; 3,736; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 8,81 (bs, 2H), 8,20 (s, 1H), 7,66 (d, 2H, J = 7,2 Hz), 7,47 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,42 (m, 1H), 7,25 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4 Hz), 3,82 - 3,85 (m, 4H), 3,11 - 3,27 (m, 9H), 2,88 (m, 4H), 2,25 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,65 (m, 2H), 1,53 - 1,55 (m, 2H), 0,83 (t, 3H, J = 6 Hz).
[01054]Exemplo 74: (R)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5- (etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-(3-fluoropirrolodin-1-ilmetil)-4-metil-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida, (0,07 g, 31 %);
Figure img0158
[01055]Dados Analíticos: LCMS: 575,35 (M + 1)+; HPLC: 97,53 % (@ 254 nm) (Rt; 4,079; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,18 (t, 1H), 7,57 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,38 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 7,36 (s, 1H), 7,22 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 5,12 - 5,26 (m, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4 Hz), 3,81 - 3,84 (m, 2H), 3,63 (s, 2H), 3,22 - 3,25 (m, 2H), 3,08 - 3,09 (m, 2H), 3,02 (m, 1H), 2,73 - 2,83 (m, 2H), 2,32 (m, 1H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,89 (m, 1H), 1,64 - 1,67 (m, 2H), 1,51 - 1,53 (m, 2H), 0,83 (t, 3H, J = 7,2 Hz).
[01056]Exemplo 75: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5- (etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-(piperidin-1-ilmetil)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamida, (0,1 g, 88 %;
Figure img0159
[01057]Dados Analíticos: LCMS: 571,25 (M + 1)+; HPLC: 98,25 % (@ 254 nm) (Rt; 4. 147; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 8,19 (t, 1H, J = 5,2 Hz), 7,55 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,39 (s, 1H), 7,34 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,21 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,82 - 3,83 (m, 2H), 3,43 (s, 2H), 3,24 (t, 2H, J = 11,2 Hz), 3,06 - 3,09 (m, 2H), 2,99 - 3,01 (m, 1H), 2,32 (bs, 4H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,64 - 1,67 (m, 2H), 1,47 - 1,56 (m, 6H), 1,38 - 1,39 (m, 2H), 0,83 (t, 3H, J = 7,2 Hz).
[01058]Exemplo 76: (S)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5- (etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-((3-hidroxipiperidin-1-il)metil)-4-metil-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida, (0,25 g, 71,4 %);
Figure img0160
[01059]Dados Analíticos: LCMS: 587,40 (M + 1)+; HPLC: 97,63 % (@ 254 nm) (Rt; 3,997; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,18 (t, 1H, J = 4,8 Hz), 7,56 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,39 (s, 1H), 7,34 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,21 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,55 (d, 1H, J = 4,8 Hz), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,81 - 3,84 (m, 2H), 3,51 - 3,54 (m, 2H), 3,43 - 3,45 (m, 1H), 3,06 - 3,09 (m, 3H), 2,99 - 3,01 (m, 2H), 2,79 (d, 1H, J = 6,8 Hz), 2,65 (d, 1H, J = 10,8 Hz), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,78 - 1,88 (m, 2H), 1,58 - 1,71 (m, 2H), 1,39 - 1,51 (m, 4H), 1,04 - 1,10 (m, 1H), 0,83 (t, 3H, J = 6,8 Hz).
[01060]Exemplo 77: (R)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5- (etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-((3-hidroxipiperidin-1-il)metil)-4-metil-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida, (0,11 g, 48,6 %);
Figure img0161
[01061]Dados Analíticos: LCMS: 587,45 (M + 1)+; HPLC: 98,65 % (@ 254 nm) (Rt; 3,976; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,44 (s, 1H), 8,18 (t, 1H), 7,56 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,39 (s, 1H), 7,35 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,21 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,81 - 3,84 (m, 2H), 3,40 - 3,54 (m, 3H), 3,22 - 3,25 (m, 2H), 3,08 - 3,09 (m, 2H), 3,02 (m, 1H), 2,78 - 2,80 (m, 2H), 2,66 (m, 2H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,80 - 1,86 (m, 3H), 1,53 - 1,67 (m, 3H), 1,40 - 1,51 (m, 3H), 1,04 - 1,06 (m, 1H), 0,83 (t, 3H, J = 6,8 Hz).
[01062]Exemplo 78: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5- (etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-((4-hidroxipiperidin-1-il)metil)-4-metil-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida, (0,2 g, 57 %);
Figure img0162
[01063]Dados Analíticos: LCMS: 587,20 (M + 1)+; HPLC: 99,89 % (@ 254 nm) (Rt; 1,456;Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 8,19 (t, 1H, J = 4,4 Hz), 7,56 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,39 (s, 1H), 7,34 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,21 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,53 (d, 1H, J = 3,6 Hz), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,81 - 3,84 (m, 2H), 3,44 (s, 3H), 3,22 - 3,27 (m, 2H), 3,07 - 3,09 (m, 2H), 3,01 - 3,06 (m, 1H), 2,66 (m, 2H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 2,00 - 2,04 (m, 2H), 1,64 - 1,67 (m, 4H), 1,51 - 1,53 (m, 2H), 1,36 - 1,39 (m, 2H), 0,83 (t, 3H, J = 7,2 Hz).
[01064]Exemplo 79: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5- (etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-((3-fluoropiperidin-1-il)metil)-4-metil-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida, (0,2 g, 56 %);
Figure img0163
[01065]Dados Analíticos: LCMS: 589,35 (M + 1)+; HPLC: 96,06 % (@ 254 nm) (Rt; 4,092;Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,18 (t, 1H), 7,57 (d, 2H, J = 7,2 Hz), 7,40 (s, 1H), 7,35 (d, 2H, J = 7,2 Hz), 7,22 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,56 - 4,68 (m, 1H), 4,28 (d, 2H), 3,81 - 3,84 (m, 2H), 3,52 (s, 2H), 3,22 - 3,28 (m, 3H), 3,08 - 3,09 (m, 2H), 3,02 (m, 1H), 2,65 - 2,72 (m, 1H), 2,39 (m, 2H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,78 - 1,81 (m, 2H), 1,64 - 1,68 (m, 2H), 1,50 - 1,53 (m, 4H), 0,83 (t, 3H).
[01066]Exemplo 80: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5- (etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-((4-fluoropiperidin-1-il)metil)-4-metil-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida, (0,09 g, 25 %);
Figure img0164
[01067]Dados Analíticos: LCMS: 589,30 (M + 1)+; HPLC: 95,46 % (@ 254 nm) (Rt; 4,156; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,18 (t, 1H), 7,56 (d, 2H), 7,39 (s, 1H), 7,37 (d, 2H), 7,21 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,62 - 4,74 (m, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 3,2 Hz), 3,81 - 3,84 (m, 2H), 3,49 (s, 2H), 3,22 - 3,25 (m, 3H), 3,08 - 3,09 (m, 3H), 3,02 (m, 1H), 2,32 (m, 2H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,82 - 1,85 (m, 2H), 1,64 - 1,67 (m, 4H), 1,51 - 1,53 (m, 2H), 0,83 (t, 3H, J = 6,4 Hz).
[01068]Exemplo 81: 4’-((4,4-difluoropiperidin-1-il)metil)-N-((4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida, (0,1 g, 27 %);
Figure img0165
[01069]Dados Analíticos: LCMS: 607,35 (M + 1)+; HPLC: 95,48 % (@ 254 nm) (Rt; 4,237; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 8,19 (t, 1H), 7,58 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,38 (d, 2H, J = 3,6 Hz), 7,36 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,81 - 3,84 (m, 2H), 3,56 (s, 2H), 3,22 - 3,27 (m, 2H), 3,08 - 3,09 (m, 2H), 2,99 - 3,01 (m, 1H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,90 - 1,99 (m, 4H), 1,64 - 1,67 (m, 2H), 1,48 - 1,56 (m, 2H), 0,83 (t, 3H, J = 6,4 Hz). [4 H ligado em pico de solvente].
[01070]Exemplo 82: 4’-(azetidin-1-ilmetil)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3- carboxamide
Figure img0166
[01071]Dados Analíticos: LCMS: 543,40 (M + 1)+; HPLC: 96,50 % (@ 254 nm) (Rt; 4,010; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,19 (t, 1H, J = 4,4 Hz), 7,54 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,38 (s, 1H), 7,32 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,20 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,81 - 3,84 (m, 2H), 3,52 (s, 2H), 3,22 - 3,27 (m, 2H), 2,98 - 3,11 (m, 7H), 2,23 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,94 - 2,01 (m,2H), 1,64 - 1,67 (m, 2H), 1,51 - 1,56 (m, 2H), 0,82 (t, 3H, J = 7,2 Hz).
[01072]Exemplo 83: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5- (etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-((3-hidroxiazetidin-1-il)metil)-4-metil-[1,1’- bifenil]-3-carboxam ida
Figure img0167
[01073]Dados Analíticos: LCMS: 559,80 (M + 1)+; HPLC: 96,10 % (@ 254 nm) (Rt; 3,917; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,18 (t, 1H), 7,54 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,38 (s, 1H), 7,31 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 7,20 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 5,28 (d, 1H, J = 6,4 Hz), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 4,17 - 4,19 (m, 1H), 3,81 - 3,84 (m, 2H), 3,56 (s, 2H), 3,48 (t, 2H, J = 6,4 Hz), 3,22 - 3,27 (m, 2H), 3,06 - 3,09 (m, 2H), 3,01 (m, 1H), 2,75 (t, 2H, J = 6,8 Hz), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,64 - 1,67 (m, 2H), 1,51 - 1,53 (m, 2H), 0,82 (t, 3H, J = 7,2 Hz).
[01074]Exemplo 84: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5- (etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-((3-fluoroazetidin-1-il)metil)-4-metil-[1,1’- bifenil]-3-carboxam ida
Figure img0168
[01075]Dados Analíticos: LCMS: 561,25 (M + 1)+; HPLC: 97,99 % (@ 254 nm) (Rt; 4,021; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,18 (t, 1H), 7,57 (d, 2H, J = 7,2 Hz), 7,37 - 7,40 (m, 3H), 7,22 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 5,27 (m, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,81 - 3,84 (m, 2H), 3,63 (s, 2H), 3,22 - 3,27 (m, 2H), 3,08 - 3,09 (m, 2H), 3,01 (m, 1H), 2,77 (m, 2H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,15 (s, 3H), 1,65 - 1,67 (m, 2H), 1,51 - 1,53 (m, 2H), 1,04 - 1,06 (m, 1H), 0,83 (t, 3H, J = 7,2 Hz) [2H ligado em pico de solvente].
[01076]Exemplo 86: 4’-((1,4-diazepan-1-il)metil)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2- di- hidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3- carboxamida
Figure img0169
[01077]Dados Analíticos: LCMS: 585,37 (M + 1)+; HPLC: 87,74 % (@ 254 nm) (Rt; 3,715; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,47 (s, 1H), 8,18 (t, 1H), 7,57 (d, 2H, J = 6,8 Hz), 7,39 (m, 3H), 7,21 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,29 (d, 2H), 3,81 - 3,84 (m, 2H), 3,66 (s, 2H), 3,08 - 3,09 (m, 3H), 3,02 (bs, 4H), 2,96 (m, 3H), 2,64 - 2,66 (m, 4H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,78 (m, 2H), 1,64 - 1,67 (m, 2H), 1,51 - 1,53 (m, 2H), 0,83 (t, 3H).
[01078]Exemplo 87: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5- (etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-((4-metil-1,4-diazepan-1-il)metil)-[1,1’- bifenil]-3-carboxam ida
Figure img0170
[01079]Dados Analíticos: LCMS: 600,30 (M + 1)+; HPLC: 99,46 % (@ 254 nm) (Rt; 3,713; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,44 (s, 1H), 8,17 (t, 1H), 7,56 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,38 (d, 2H, J = 5,6 Hz), 7,36 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 5,85 (s, 1H),4,28 (d, 2H, J = 5,2 Hz), 3,81 - 3,84 (m, 2H), 3,61 (s, 2H), 3,09 - 3,28 (m, 3H), 3,06 - 3,09 (m, 2H), 3,02 (m, 1H), 2,59 - 2,65 (m, 5H), 2,56 (t, 2H, J = 6 Hz), 2,24 (s, 6H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,64 - 1,72 (m, 4H), 1,51 - 1,53 (m, 2H), 0,83 (t, 3H, J = 6,4 Hz).
[01080]Exemplo 88: 4’-((1,4-oxazepan-4-il)metil)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2- di- hidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3- Carboxamide
Figure img0171
[01081]Dados Analíticos: LCMS: 587,40 (M + 1)+; HPLC: 96,85 % (@ 254 nm) (Rt; 4,055; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,18 (t, 1H, J = 4,8 Hz), 7,56 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,37 - 7,39 (m, 3H), 7,21 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,81 - 3,84 (m, 2H), 3,69 (t, 3H, J = 6 Hz), 3,64 (s, 1H), 3,59 - 3,61 (m, 2H), 3,22 - 3,27 (m, 2H), 2,99 - 3,09 (m, 3H), 2,59 - 2,64 (m, 4H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,77 - 1,83 (m, 2H), 1,64 - 1,67 (m, 2H), 1,48 - 1,56 (m, 2H), 0,83 (t, 3H, J = 7,2 Hz).
[01082]Exemplo 89: 4’-(aminometil)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida
Figure img0172
[01083]Dados Analíticos: LCMS: 503,40 (M + 1)+; HPLC: 79,83 % (@ 254 nm) (Rt; 3,846; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,19 (t, 1H), 7,63 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 7,47 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,39 (s, 1H), 7,23 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,92 (s, 2H), 3,81 - 3,84 (m, 2H), 3,22 - 3,32 (m, 2H), 3,08 - 3,10 (m, 2H), 3,01 (m, 1H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,65 - 1,67 (m, 2H), 1,51 - 1,56 (m, 2H), 0,83 (t, 3H, J = 6,8 Hz).
[01084]Exemplo 90: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5- (etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-((metilamino)metil)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamide
Figure img0173
[01085]Dados Analíticos: LCMS: 517,30 (M + 1)+; HPLC: 98,05 % (@ 254 nm) (Rt; 3,886;Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,51 (s, 1H), 8,19 (t, 1H, J = 4,4 Hz), 7,55 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,38 (d, 2H), 7,36 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,81 - 3,84 (m, 2H), 3,66 (s, 2H), 3,11 - 3,25 (m, 3H), 3,04 - 3,09 (m, 2H), 2,99 - 3,01 (m, 1H), 2,26 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,65 - 1,67 (m, 2H), 1,48 - 1,56 (m, 2H), 0,83 (t, 3H, J = 6,8 Hz).
[01086]Exemplo 91: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5- (etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-((etilamino)metil)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamide
Figure img0174
[01087]Dados Analíticos: LCMS: 531,35 (M + 1)+; HPLC: 98,28 % (@ 254 nm) (Rt; 3,977; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.: Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,18 (t, 1H, J = 4,8 Hz), 7,55 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,39 (s, 1H), 7,37 (d, 2H, J = 2 Hz), 7,21 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 6 Hz), 3,81 - 3,84 (m, 2H), 3,71 (s, 2H), 3,22 - 3,28 (m, 2H), 3,01 - 3,11 (m, 3H), 2,52 - 2,55 (m, 2H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,65 - 1,67 (m, 2H), 1,50 - 1,53 (m, 2H), 1,03 (t, 3H, J = 7,2 Hz), 0,83 (t, 3H, J = 6,8 Hz).
[01088]Exemplo 92: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5- (etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-((isopropilamino)metil)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamida sal de TFA
Figure img0175
[01089]Dados Analíticos de sal de TFA: LCMS: 545,40 (M + 1)+; HPLC: 94,74 % (@ 254 nm) (Rt; 4,081;Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,47 (s, 1H), 8,66 (bs, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,74 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,57 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,43 (s, 1H), 7,27 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 4,19 (t, 2H), 3,82 - 3,85 (m, 2H), 3,25 (t, 2H, J = 10,8 Hz), 3,09 - 3,22 (m, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,65 (m, 2H), 1,53 - 1,55 (m, 3H), 1,28 (d, 6H, J = 6,4 Hz), 0,83 (t, 3H, J = 6,8 Hz).
[01090]Exemplo 93: 4’-((ciclopropilmetil)amino)metil)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2- di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3- carboxamide
Figure img0176
[01091]Dados Analíticos: LCMS: 557,35 (M + 1)+; HPLC: 96,44 % (@ 254 nm) (Rt; 4,182; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,19 (t, 1H), 7,55 (d, 2H, J = 7,2 Hz), 7,37 - 7,39 (m, 3H), 7,21 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,81 - 3,84 (m, 2H), 3,73 (s, 2H), 3,22 - 3,24 (m, 3H), 3,06 - 3,09 (m, 2H), 3,01 (m, 1H), 2,36 (d, 2H, J = 6,8 Hz), 2,23 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,64 - 1,67 (m, 2H), 1,51 - 1,56 (m, 2H), 0,81 - 0,84 (m, 4H), 0,38 - 0,39 (m, 2H), 0,07 - 0,08 (m, 2H).
[01092]Exemplo 94: 4’-((dietil)amino)metil)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3- carboxamide
Figure img0177
[01093]Dados Analíticos: LCMS: 559,20 (M + 1)+; HPLC: 98,33 % (@ 254 nm) (Rt; 4,126; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.: Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min. Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,47 (s, 1H), 8,19 (t, 1H, J = 5,2 Hz), 7,55 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,38 (d, 2H, J = 5,2 Hz), 7,36 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,81 - 3,83 (m, 2H), 3,54 (s, 2H), 3,22 - 3,37 (m, 2H), 3,06 - 3,11 (m, 2H), 2,99 - 3,01 (m, 1H), 2,43 - 2,47 (m, 4H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,64 - 1,67 (m, 2H), 1,48 - 1,56 (m, 2H), 0,98 (t, 6H, J = 7,2 Hz), 0,83 (t, 3H, J = 6,8 Hz).
[01094]Exemplo 95: (R)-4’-(((2,3-di-hidroxipropil)amino)metil)-N-((4,6-dimetil-2- oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[1,1’- bifenil]-3-carboxam ida
Figure img0178
[01095]Dados Analíticos: LCMS: 599,35 (M + 1)+; HPLC: 93,58 % (@ 254 nm) (Rt; 3,808; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,18 (t, 1H, J = 4,8 Hz), 7,56 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,37 - 7,39 (m, 3H), 7,16 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,51 - 4,56 (m, 2H), 4,28 (d, 2H, J = 4,8 Hz), 3,81 - 3,84 (m, 2H), 3,73 (s, 2H), 3,55 (m, 1H), 3,11 - 3,25 (m, 3H), 3,01 - 3,09 (m, 3H), 2,56 - 2,61 (m, 1H), 2,41 - 2,46 (m, 2H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,15 (s, 3H), 1,65 - 1,67 (m, 2H), 1,48 - 1,56 (m, 2H), 0,83 (t, 3H, J = 6,8 Hz).
[01096]Exemplo 96: (S)-4’-(((2,3-di-hidroxipropil)amino)metil)-N-((4,6-dimetil-2- oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[1,1’- bifenil]-3-carboxam ida
Figure img0179
[01097]Dados Analíticos: LCMS: 577,25 (M + 1)+; HPLC: 96,96 % (@ 254 nm) (Rt; 3,812; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,19 (t, 1H, J = 4,8 Hz), 7,55 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,37 - 7,39 (m, 3H), 7,21 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,55 (m, 3H), 4,28 (d, 2H, J = 4,8 Hz), 3,81 - 3,83 (m, 2H), 3,72 (s, 2H), 3,55 (bs, 1H), 3,22 - 3,28 (m, 3H), 3,01 - 3,11 (m, 3H), 2,57 - 2,60 (m, 1H), 2,41 - 2,45 (m, 2H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,64 - 1,67 (m, 2H), 1,51 - 1,56 (m, 2H), 0,83 (t, 3H, J = 7,2 Hz).
[01098]Exemplo 97: 4’-(((ciclopropilmetil)(metil)amino)metil)-N-((4,6-dimetil-2- oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida
Figure img0180
[01099]Dados Analíticos: LCMS: 571,40 (M + 1)+; HPLC: 99,80 % (@ 254 nm) (Rt; 4,243; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,18 (t, 1H, J = 4,8 Hz), 7,57 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,40 (s, 1H), 7,37 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,22 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,81 - 3,83 (m, 2H), 3,53 (s, 2H), 3,11 - 3,25 (m, 2H), 2,99 - 3,09 (m, 3H), 2,25 - 2,32 (m, 2H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 6H), 2,10 (s, 3H), 1,65 - 1,67 (m, 2H), 1,48 - 1,56 (m, 2H), 0,88 (m, 1H), 0,83 (t, 3H, J = 7,2 Hz), 0,46 - 0,47 (m, 2H), 0,081 (m, 2H).
[01100]Exemplo 98: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5- (etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-(((2-hidroxietil)amino)metil)-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida
Figure img0181
[01101]Dados Analíticos: LCMS: 547,35 (M + 1)+; HPLC: 96,46 % (@ 254 nm) (Rt; 3,862; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,44 (s, 1H), 8,19 (t, 1H, J = 4,4 Hz), 7,55 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,38 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 7,37 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,47 (bs, 2H), 4,28 (d, 2H, J = 3,6 Hz), 3,81 -3,83 (m, 2H), 3,72 (s, 2H), 3,46 (m, 2H), 3,22 - 3,27 (m, 2H), 3,07 - 3,09 (m, 2H), 3,01 -3,06 (m, 1H), 2,55 - 2,57 (m, 2H), 2,23 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,64 - 1,67 (m, 2H), 1,51 - 1,53 (m, 2H), 0,83 (t, 3H, J = 6,8 Hz).
[01102]Exemplo 99: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5- (etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-(((3-hidroxipropil)amino)metil)-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida
Figure img0182
[01103]Dados Analíticos: LCMS: 561,30 (M + 1)+; HPLC: 96,82 % (@ 254 nm) (Rt; 3,911; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,47 (s, 1H), 8,19 (t, 1H), 7,55 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,39 (d, 2H), 7,37 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,46 (bs, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,81 - 3,83 (m, 2H), 3,69 (s, 2H), 3,45 (t, 2H, J = 6,4 Hz), 3,22 - 3,27 (m, 2H), 3,07 - 3,09 (m, 2H), 3,01 - 3,06 (m, 1H), 2,23 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 1,64 - 1,67 (m, 2H), 1,51 - 1,61 (m, 4H), 0,83 (t, 3H, J = 6,8 Hz) [1 H ligado em pico de solvente].
[01104]Exemplo 100: 4’-((bis(2-hidroxietil)amino)metil)-N-((4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida sal de TFA
Figure img0183
[01105]Dados Analíticos de sal de TFA: LCMS: 591,25 (M + 1)+; HPLC: 99,00 % (@ 254 nm) (Rt; 3,860; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,47 (s, 1H), 9,38 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 7,77 (d, 2H, J = 3,2 Hz), 7,65 (s, 2H), 7,63 (s, 1H), 7,33 (s, 1H), 5,87 (s, 1H), 4,46 (s, 2H), 4,29 (d, 2H, J = 4,8 Hz), 3,78 - 3,90 (m, 6H), 3,18 - 3,28 (m, 9H), 2,27 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,58 - 1,67 (m, 4H), 0,85 (t, 3H, J = 6,8 Hz).
[01106]Exemplo 101: 4’-(((2-aminoetil)amino)metil)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2- di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3- carboxamide
Figure img0184
[01107]Dados Analíticos: LCMS: 546,35 (M + 1)+; HPLC: 93,12 % (@ 254 nm) (Rt; 3,721;Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,47 (s, 1H), 9,19 (bs, 1H), 8,20 (t, 1H), 7,99 (bs, 2H), 7,74 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,57 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,42 (s, 1H), 7,26 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,26 - 4,29 (m, 3H), 3,82 - 3,84 (m, 2H), 3,11 - 3,27 (m, 8H), 3,03 (s, 2H), 2,24 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,64 - 1,67 (m, 2H), 1,55 (m, 2H), 0,83 (t, 3H, J = 6Hz).
[01108]Exemplo 102: 4’-(((3-aminopropil)amino)metil)-N-((4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida sal de TFA
Figure img0185
[01109]Dados Analíticos de sal de TFA: LCMS: 560,20 (M + 1)+; HPLC: 98,90 % (@ 254 nm) (Rt; 3,611; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,48 (s, 1H), 8,93 (bs, 2H), 8,20 (t, 1H), 7,79 (bs, 2H), 7,73 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,55 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,43 (s, 1H), 7,27 (s, 1H), 5,87 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 4,19 (m, 2H), 3,81 - 3,85 (m, 2H), 3,25 (t, 2H, J = 11,2 Hz), 3,11 - 3,16 (m, 3H), 3,01 (m, 3H), 2,87 - 2,88 (m, 1H), 2,24 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,89 - 1,92 (m, 2H), 1,65 - 1,68 (m, 2H), 1,53 - 1,55 (m, 2H), 0,83 (t, 3H, J = 6,8 Hz).
[01110]Exemplo 103: 4’-(((2,2-difluoroetil)amino)metil)-N-((4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[1,1’- bifenil]-3-carboxam ida
Figure img0186
[01111]Dados Analíticos: LCMS: 567,30 (M + 1)+; HPLC: 92,86 % (@ 254 nm) (Rt; 3,984; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 8,19 (t, 1H), 7,57 (d, 2H, J = 7,2 Hz), 7,38 - 7,40 (m, 3H), 7,21 (s, 1H), 6,01 (t, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,81 - 3,84 (m, 2H), 3,77 (s, 2H), 3,22 - 3,28 (m, 2H), 3,06 - 3,09 (m, 2H), 3,01 (m, 1H), 2,84 (t, 2H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,65 - 1,67 (m, 2H), 1,51 - 1,53 (m, 2H), 0,83 (t, 3H,1 = 6,8 Hz).
[01112]Exemplo 104: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5- (etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-(((2,2,2-trifluoroetil)amino)metil)-[1,1’- bifenil]-3-carboxam ida
Figure img0187
[01113]Dados Analíticos: LCMS: 585,25 (M + 1)+; HPLC: 99,52 % (@ 254 nm) (Rt; 4,175;Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 8,19 (t, 1H), 7,58 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,39 - 7,40 (m, 3H), 7,21 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,80 - 3,83 (m, 4H), 2,93 - 3,27 (m, 8H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,64 - 1,67 (m, 2H), 1,51 - 1,53 (m, 2H), 0,83 (t, 3H, J = 6,8 Hz).
[01114]Exemplo 105: 4’-(2-oxa-6-azaspiro[3,3]heptan-6-ilmetil)-N-((4,6-dimetil- 2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil- [1,1’-bifenil]-3-carboxamida
Figure img0188
[01115]Dados Analíticos: LCMS: 585,40 (M + 1)+; HPLC: 99,67 % (@ 254 nm) (Rt; 3,99; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (bs, 1H,), 8,18(s, 1H), 7,55 - 7,54 (m, 2H), 7,38 (s, 1H), 7,31 - 7,29 (m, 2H), 7,20 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,60 (s, 3H), 4,28 (d, 2H, J = 4,8 Hz), 3,83 - 3,81 (m, 2H), 3,53 (s, 2H), 3,83 - 3,81(m, 2H), 3,32 (2 prótons ligados em pico de solvente), 3,24 - 3,22 (m, 4H), 3,09 - 3,01 (m, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,67 - 1,64 (m, 2H), 1,53 - 1,51(m, 2H), 0,83 (t, 3H, J = 6,4 Hz).
[01116]Exemplo 108: Síntese de 5-(((1r,4r)-4-aminociclo-hexil)(metil)amino)-N- ((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida
Figure img0189
[01117]Etapa 1: Síntese de ((1r,4r)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin- 3-il)metil)carbamoil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3- il)(metil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila
[01118]A uma solução agitada de ((1r,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)-ciclo- hexil)carbamato de terc-butila (1 equiv.) e N,N-dimetil-1-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)fenil)metanamina (1,2 equiv.) em mistura de dioxano/água (5 mL + 1 mL), Na2CO3 (3,6 equiv.) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (0,1 equiv.) foi adicionado e o frasco de reação foi purgado novamente durante 10 min. com argônio. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. A mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. Os extratos orgânicos combinados foram secos em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer ((1r,4r)-4-((5- (((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-4’-((dimetilamino)metil)-4- metil-[1,1’-bifenil]-3-il)(metil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila (0,08 g, 48,78 %)
[01119]Etapa 2: Síntese de 5-(((1r,4r)-4-aminociclo-hexil)(metil)amino)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida
[01120]Uma solução agitada de ((1r,4r)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3- il)(metil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila (0,08 g) em DCM (5 mL) foi esfriada a 0 °C e TFA (2 mL) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h. A reação foi concentrada à secura fornecendo o composto do título como um sal de TFA (0,06 g, 89,55 %). LCMS: 530,35 (M + 1)+; HPLC: 89,74 % (@ 254 nm) (Rt; 3,557; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 9,74 (bs, 1H), 8,17 (t, 1H), 7,74 - 7,76 (m, 4H), 7,55 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,36 (s, 1H), 7,22 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,28 - 4,31 (m, 4H), 2,97 (bs, 1H), 2,74 (d, 6H, J = 4,4 Hz), 2,66 (s, 3H), 2,20 (d, 6H, J = 2 Hz), 2,10 (s, 3H), 1,92 - 1,95 (m, 2H), 1,74 - 1,77 (m, 2H), 1,52 - 1,57 (m, 2H), 1,28 - 1,30 (m, 2H) [1H ligado em pico de solvente].
[01121]Exemplo 109: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4- il)benzamide
Figure img0190
[01122]A uma solução agitada de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (0,2 g, 0,42 mmol) e ácido (1-metil-1H-pirazol-4-il) borônico (0,105 g, 0,505 mmol) em mistura de dioxano/água (5 mL + 1 mL), Na2CO3 (0,16 g, 1,51 mmol) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Pd(PPh3)4 (0,048 g, 0,042 mmol) depois foi adicionado e a mistura de reação novamente purgada com argônio durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 2 h. A mistura de reação depois foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. Os extratos combinados foram secos em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer o composto do título (0,100 g, 50 %). LCMS: 478,20 (M + 1)+; HPLC: 95,82 % (@ 254 nm) (Rt; 4,322; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,12 (s, 1H), 8,10 (t, 1H), 7,81 (s, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,13 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,27 (d, 2H, J = 4,8 Hz), 3,81 - 3,83 (m, 5H), 3,21 - 3,26 (m, 2H), 2,98 - 3,08 (m, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,17 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,63 - 1,66 (m, 2H), 1,48 - 1,52 (m, 2H), 0,86 (t, 3H, J = 7,2 Hz).
[01123]Exemplo 110: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2- metilbenzamida
Figure img0191
[01124]Etapa 1: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamida
[01125]A uma solução agitada de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (1 g, 2,15 mmols) e ácido (6-formilpiridin-3-il)borônico (0,539 g, 2,31 mmols) em mistura de dioxano/água (15 mL + 3 mL), Na2CO3 (0,82 g, 7,74 mmols) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd (PPh3)4 (0,288 g, 0,25 mmol) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 10 min. A massa de reação foi aquecida a 80 °C durante 2 h. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer o composto desejado (0,60 g, 57 %).
[01126]Etapa 2: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2- metilbenzamida
[01127]A uma solução agitada de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2- metilbenzamida (0,102 g, 0,203 mmol) e dimetilamina (0,044 g, 2 M 0,507 mL, 1,01 mmol) em dicloroetano (3 mL), ácido acético (0,073 g, 1,021 mmol) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 20 minutos. Em seguida, triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,129 g, 0,609 mmol) foi adicionado a 0 °C e a reação agitada durante 4 h na temperatura ambiente. Em conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e água foi adicionada, a extração foi realizada usando MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida, fornecendo o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer o composto do título (0,08 g, 75 %). LCMS: 532,30 (M + 1)+; HPLC: 97,53 % (@ 254 nm) (Rt; 3,878; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 8,75 (d, 1H, J = 1,2 Hz), 8,20 (t, 1H, J = 4,8 Hz), 8,02 (d, 1H,J = 6,4 Hz), 7,49 (s, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,27 (s, 1H), 5,87 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,8 Hz), 3,81 -3,84 (m, 2H), 3,56 (s, 2H), 3,22 - 3,24 (m, 2H), 3,02 - 3,12 (m, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,21 (s, 6H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,65 - 1,67 (m, 2H), 1,50 - 1,56 (m, 2H), 0,82 (t, 3H, J = 6,8 Hz).
[01128]Exemplo 111: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-5-(6-((4-metilpiperazin-1- il)metil)piridin-3-il)benzamide
Figure img0192
[01129]Etapa 1a: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamida o
Figure img0193
[01130]A uma solução agitada de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilibenzamida
[01131](1 g, 2,15 mmols) e ácido (6-formilpiridin-3-il)borônico (0,539 g, 2,31 mmols) em mistura de dioxano/água (15 mL + 3 mL), Na2CO3 (0,82 g, 7,74 mmols) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd (PPh3)4 (0,288 g, 0,25 mmol) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 10 min. A massa de reação foi aquecida a 80 °C durante 2 h. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer o composto desejado (0,60 g, 57 %).
[01132]Etapa 1b: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3- (etH(tetra-hidro-2H-piran-4-H)amino)-5-(6-(hidroximetH)piridin-3-H)-2-metilbenzamida
Figure img0194
[01133]Quando a reação acima foi repetida em uma escala de 1,5 g, N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6- (hidroximetil)piridin-3-il)-2-metilbenzamida foi isolada (0,350 g, 22 %).
[01134]Etapa 2: Síntese de 5-(6-(bromometil)piridin-3-il)-N-((4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida
Figure img0195
[01135]A uma solução agitada de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6-(hidroximetil)piridin-3-il)-2- metilbenzamida (0,35 g, 0,694 mmol) em DCM (5 mL), trifenil fosfina (0,361 g, 1,38 mmol) foi adicionada e agitada na temperatura ambiente durante 10 min. Finalmente, CBr4 (0,31 8 g, 1,38 mmol) foi adicionado às porções e a solução resultante foi agitada na temperatura ambiente durante 18 h. Em conclusão, água foi adicionada à massa de reação e a extração foi realizada usando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio, concentradas sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que, em seguida, a purificação em coluna forneceu o composto desejado (0,35 g, 89 %).
[01136]Etapa 3: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 3-(etil(tetra-hidro-211-piran-4-il)amino)-2-metil-5-(6-((4-metilpiperazin-1- il)metil)piridin-3-il)benzamida
[01137]À solução agitada de 5-(6-(bromometil)piridin-3-il)-N-((4,6-dimetil-2- oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2- metilbenzamida (0,175 g, 0,309 mmol) dissolvida em THF (2 mL), foi adicionada 1- metil-piperazina (0,309 g, 1,54 mmol) na temperatura ambiente e agitada na mesma temperatura durante 18 h. Em conclusão, água foi adicionada à massa de reação e a extração foi realizada usando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida, fornecendo o material bruto que, em seguida, foi purificado por HPLC preparativa para fornecer o composto do título como um sal de TFA (0,028 g, 15 %). LCMS: 587,40 (M + 1)+; HPLC: 98,05 % (@ 254 nm) (Rt; 3,831; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 8,89 (s, 1H), 8,21 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,59 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,35 (s, 1H), 5,87 (s, 1H), 4,29 (d, 2H, J = 4 Hz), 3,96 - 4,04 (m, 2H), 3,83 - 3,86 (m, 2H), 3,16 - 3,43 (m, 13H), 2,81 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,67 (m, 2H), 1,56 (m, 2H), 0,84 (t, 3H, J = 6,4 Hz).
[01138]Exemplo 112: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4,4’-dimetil-[1,T-bifenil]-3-carboxamida
Figure img0196
[01139]A uma solução agitada de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (200 mg, 0,42 mmol) ácido e p-tolil borônico (86 mg, 0,63 mmol) em dioxano (3 mL), solução de Na2CO3 2 M aquosa (0,75 mL, 1,51 mmol) foi adicionada e a solução foi purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (48 mg, 0,04 mmol) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 15 min. A massa de reação foi aquecida a 100 °C durante 2 h. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 % (3 vezes). A camada orgânica combinada foi seca em sulfato de sódio. A remoção do solvente sob pressão reduzida, seguido por purificação cromatográfica em coluna forneceu o composto do título (150 mg, 73 %). LCMS: 488,20 (M + 1)+; HPLC: 99,33 % (@ 254 nm) (Rt; 5,393; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 8,19 (t, 1H), 7,51 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,37 (s, 1H), 7,25 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,19 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,81 -3,83 (m, 2H), 3,22 - 3,27 (m, 2H), 3,07 - 3,09 (m, 2H), 3,01 (m, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,64 - 1,67 (m, 2H), 1,51 - 1,55 (m, 2H), 0,82 (t, 3H, J = 6,8 Hz).
[01140]Exemplo 113: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-(hidroximetil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3- carboxamide
Figure img0197
[01141]A uma solução agitada de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (200 mg, 0,42 mmol) e ácido 4-(hidroximetil)fenilborônico (96 mg, 0,63 mmol) em dioxano (2,5 mL), solução de Na2CO3 2 M aquosa (0,75 mL, 1,51 mmol) foi adicionada e a solução foi purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (48 mg, 0,04 mmol) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 15 min. A massa de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 % (3 vezes). A camada orgânica combinada foi seca em sulfato de sódio. A remoção do solvente sob pressão reduzida, seguido por purificação cromatográfica em coluna, forneceu o composto do título (130 mg, 62 %). LCMS: 504,15 (M + 1)+; HPLC: 98,86 % (@ 254 nm) (Rt; 4,240; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,19 (t, 1H), 7,57 (d, 2H, J = 7,2 Hz), 7,39 (s, 1H), 7,37 (d, 2H), 7,21 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 5,20 (t, 1H, J = 5,2 Hz), 4,52 (d, 2H, J = 5,6 Hz), 4,28 (d, 2H, J = 3,6 Hz), 3,81 -3,84 (m, 2H), 3,22 - 3,32 (m, 2H), 3,08 - 3,09 (m, 2H), 3,01 (m, 1H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,65 - 1,67 (m, 2H), 1,51 -1,53 (m, 2H), 0,83 (t, 3H, J = 6,4 Hz).
[01142]Exemplo 114: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-3’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]- 3-carboxamida
Figure img0198
[01143]Etapa 1: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-3’-formil-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida
[01144]A uma solução agitada de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (400 mg, 0,84 mmol) e ácido (3-formilfenil)borônico (189 mg, 1,26 mmol) em dioxano (2 mL), solução de Na2CO3 2 M aquosa (1,5 mL, 3,03 mmols) foi adicionada e a solução foi purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (97 mg, 0,08 mmol) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 15 min. A massa de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 % (3 vezes). A camada orgânica combinada foi seca em sulfato de sódio. A remoção do solvente sob pressão reduzida, seguido por purificação cromatográfica em coluna, forneceu o composto do título (270 mg, 64 %).
[01145]Etapa 2: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-3’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamida
[01146]A uma solução agitada de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-3’-formil-4-metil-[1,1’-bifenil]-3- carboxamida (270 mg, 0,53 mmol) e morfolina (94 mg, 1,07 mmol) em dicloroetano (5 mL), ácido acético (194 mg, 3,23 mmols) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 30 minutos. Em seguida, triacetoxiboro-hidreto de sódio (343 mg, 1,61 mmol) foi adicionado à mistura de reação a 0 °C, deixada atingir a temperatura ambiente e a agitação continuada durante a noite. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com diclorometano, lavada com água, solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada e seca em sulfato de sódio. A remoção do solvente sob pressão reduzida, seguido por purificação cromatográfica em coluna, forneceu o composto do título (200 mg, 65 %). LCMS: 573,25 (M + 1)+; HPLC: 90,21 % (@ 254 nm) (Rt; 4,048; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,20 (t, 1H), 7,52 (s, 1H), 7,49 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,39 (d, 1H, J = 5,6 Hz), 7,29 (d, 1H, J = 7,2 Hz), 7,20 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,82 - 3,84 (m, 2H), 3,56 (m, 4H), 3,52 (s, 2H), 3,22 - 3,30 (m, 2H), 3,08 - 3,10 (m, 2H), 3,01 (m, 1H), 2,37 (s, 4H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,65 - 1,67 (m, 2H), 1,51 - 1,54 (m, 2H), 0,83 (t, 3H, J = 6,4 Hz).
[01147]Exemplo 115: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5- (etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-((3-(morfolinometil)azetidin-1-il)metil)- (1,1’-bifenil]-3-carboxamida
Figure img0199
[01148]O Composto 115 foi preparado com o método similar àquele descrito no Exemplo 67. Dados Analíticos: LCMS: 642,45 (M + 1)+; HPLC: 93,13 % (@ 254 nm) (Rt; 3,803; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,18 (t, 1H), 7,54 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,38 (s, 1H), 7,31 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,20 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4 Hz), 3,81 - 3,83 (m, 2H), 3,52 - 3,53 (m, 6H), 3,22 - 3,24 (m, 2H), 3,07 - 3,09 (m, 2H), 3,01 (m, 1H), 2,79 (s, 2H), 2,56 - 2,58 (m, 2H), 2,29 (m, 2H), 2,28 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,64 - 1,67 (m, 2H), 1,5 1 -1,53 (m, 2H), 0,82 (t, 3H, J = 6,8 Hz).
[01149]Exemplo 116: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-5-((tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamide
Figure img0200
[01150]Etapa 1: Síntese de 4-metil-4’-(morfolinometil)-5-((tetra-hidro-2H-piran- 4-il)amino)-[1,1’-bifenil]-3-carboxilato de metila
[01151]A uma solução agitada de 5-bromo-2-metil-3-((tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)benzoato de metila (600 mg, 1,83 mmol) e 4-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)benzil]morfolina (833 mg, 2,75 mmols) em dioxano (9mL), solução de Na2CO3 2 M aquosa (3,30 mL, 6,60 mmols) foi adicionada e a solução foi purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (211 mg, 0,18 mmol) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 15 min. A massa de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 % (3 vezes). A camada orgânica combinada foi seca em sulfato de sódio. A remoção do solvente sob pressão reduzida, seguido por purificação cromatográfica em coluna, forneceu o composto do título (500 mg, 77 %).
[01152]Etapa 2: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 4-metil-4’-(morfolinometil)-5-((tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamida
[01153]NaOH aquoso (73m g, 1,76 mmol) foi adicionado a uma solução agitada de 4-metil-4’-(morfolinometil)-5-((tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-[1,1’-bifenil]-3- carboxilato de metila (500 mg, 1,17 mmol) em etanol (10 mL) e a agitação continuada a 60 °C durante 1 h. Depois da conclusão, etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado usando HCl diluído até o pH 6. A camada aquosa foi extraída acetato de etila (5 vezes) e a camada orgânica combinada foi seca em sulfato de sódio. A remoção do solvente sob pressão reduzida forneceu o ácido respectivo (350 mg, 72,4 %).
[01154]A uma solução esfriada em gelo agitada do ácido acima (200 mg, 0,48 mmol) em DMF (10 mL) EDCI (139 mg, 0,73 mmol) e trietilamina (0,17 mL, 1,21 mmol) foram adicionados. Em seguida, depois de 15 minutos de intervalo de agitação a 0 °C, HOBT (78 mg, 0,58 mmol), seguido por 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (148 mg, 0,97 mmol) foram adicionados. A mistura de reação foi deixada atingir a temperatura ambiente e a agitação continuada durante a noite. Em conclusão, a massa de reação foi vertida em gelo, extraída com MeOH/DCM a 10 % (5 vezes). A camada orgânica combinada foi lavada com água e seca em sulfato de sódio. A remoção do solvente sob pressão reduzida, seguido por lavagens com solvente, forneceu o composto do título (50 mg, 19 %). LCMS: 545,15 (M + 1)+; HPLC: 95,86 % (@ 254 nm) (Rt; 4,382; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) 5 11,45 (s, 1H), 8,03 (m, 1H), 7,71 (bs, 1H), 7,54 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 7,34 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 6,85 (s, 1H), 6,70 (s, 1H), 5,83 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 4,58 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 4,26 (d, 2H, J = 4 Hz), 4,04 (d, 2H, J = 4,8 Hz), 3,85 - 3,88 (m, 2H). 3,62 (m, 1H), 3,57 (t, 2H), 3,41 - 3,47 (m, 3H), 2,32 - 2,36 (m, 4H), 2,19 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 1,88 - 1,91 (m, 2H), 1,50 - 1,52 (m, 2H).
[01155]Exemplo 117: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(etilamino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida
Figure img0201
[01156]Etapa 1: Síntese de 5-bromo-3-(etilamino)-2-metilbenzoato de metila
[01157]A uma solução agitada de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metila (1,0 g, 4,09 mmols) e acetaldeído (180 mg, 4,09 mmols) em dicloroetano (10 mL), ácido acético (1,47 g, 24,58 mmols) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 30 minutos. Em seguida, triacetoxiboro-hidreto de sódio (2,6 g, 12,29 mmols) foi adicionado a 0 °C, deixado atingir a temperatura ambiente e a agitação continuada durante 2 h. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com diclorometano, lavada com água, solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada e seca em sulfato de sódio. A remoção do solvente sob pressão reduzida, seguido por purificação cromatográfica em coluna forneceu o composto desejado (600 mg, 55 %).
[01158]Etapa 2: Síntese de 5-(etilamino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’- bifenil]-3-carboxilato de metila
[01159]A uma solução agitada de 5-bromo-3-(etilamino)-2-metilbenzoato de metila (600 mg, 2,2 mmols) e 4-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)benzil]morfolina (1,0 g, 3,3 mmols) em dioxano (5 mL), solução de Na2CO3 2 M aquosa (3,96 mL, 7,93 mmols) foi adicionada e a solução foi purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (255 mg, 0,22 mmol) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 15 min. A massa de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 % (3 vezes). A camada orgânica combinada foi seca em sulfato de sódio. A remoção do solvente sob pressão reduzida, seguido por purificação cromatográfica em coluna, forneceu o composto desejado (800 mg. 98 %).
[01160]Etapa 3: Síntese de ácido 5-(etilamino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’- bifenil]-3-carboxílico
[01161]NaOH aquoso (130 mg, 3,25 mmols) foi adicionado a uma solução agitada de composto 6 (800 mg, 2,17 mmols) em etanol (10 mL) e a agitação continuada a 60 °C durante 1 h. Depois da conclusão, etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado usando HCl diluído até o pH ~6. A camada aquosa foi extraída acetato de etila (5 vezes) e a camada orgânica combinada foi seca em sulfato de sódio. A remoção do solvente sob pressão reduzida, forneceu o composto desejado (700 mg, 91 %). LCMS: 355,05 (M + 1)+; HPLC: 89,74 % (@ 254 nm) (Rt; 3,854; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (CD3OD, 400 MHz) δ 8,24 (s, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,84 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,71 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 4,45 (s, 2H), 4,06 (d, 2H, J = l 1,2 Hz), 3,79 (t, 2H, J = 12 Hz), 3,53 (q, 2H, J = 7,2 Hz), 3,40 - 3,43 (m, 2H), 3,22 - 3,31 (m, 2H), 2,66 (s, 3H), 1,45 (t, 3H, J = 7,2 Hz).
[01162]Etapa 4: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 5-(etilamino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1-bifenil]-3-carboxamida
[01163]Ácido 5-(etilamino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1-bifenil]-3-carboxílico (300 mg, 0,84 mmol) foi dissolvido em DMSO (2 mL) e 3-(aminometil)-4,6- dimetilpiridin-2(1H)-ona (257 mg, 1,69 mmol) foi adicionada ao mesmo. Depois de 15 minutos de agitação na temperatura ambiente, PyBOP (660 mg, 1,26 mmol) foi adicionado à mistura de reação e a agitação foi continuada durante a noite. Depois da conclusão, a massa de reação foi vertida em gelo, extraída com MeOH/DCM a 10 % (5 vezes). A camada orgânica combinada foi lavada com água e seca em sulfato de sódio. A remoção do solvente sob pressão reduzida, seguido por lavagens com solvente, forneceu o composto do título (100 mg, 24 %). LCMS: 489,20 (M + 1)+; HPLC: 96,41 % (@ 254 nm) (Rt; 4,060; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (OMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 9,90 (s, 1H), 8,06 (t, 1H), 7,73 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,55 (d, 2H, J = 7,2 Hz), 6,80 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 5,86 (s, 1H), 4,38 (s, 2H), 4,27 (d, 2H, J = 4 Hz), 3,95 (m, 2H), 3,62 - 3,65 (m, 2H), 3,28 - 3,31 (m, 2H), 3,20 - 3,24 (m, 2H), 3,14 - 3,19 (m, 2H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 1,21 (t, 3H, J = 6,8 Hz).
[01164]Exemplo 118: Síntese de 5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4- (hidroximetil)-6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)- [1,1’-bifenil]-3-carboxamida
Figure img0202
[01165]Etapa 1: Síntese de terc-butildimetil(prop-2-in-1-ilóxi)silano
[01166]A uma solução agitada esfriada em gelo de prop-2-in-1-ol (10,0 g, 178,3 mmols) e imidazol (18,2 mg, 267,5 mmols) em dicloroetano (500 mL), foi adicionado TBDMSCl (40,24 g, 267,5 mmols) e a agitação continuada a 0 °C durante 1,5 h. Em conclusão, solução de cloreto de amônio aquosa saturada foi adicionada à mistura de reação e extraída com acetato de etila (3 vezes). A camada orgânica combinada foi seca em sulfato de sódio. A remoção do solvente sob pressão reduzida, seguido por lavagens com solvente, forneceu o composto desejado (20 g, 67 %).
[01167]Etapa 2: Síntese de 5-((terc-butildimetilsilil)óxi)pent-3-in-2-ona
[01168]A uma solução agitada de terc-butildimetil(prop-2-in-1-ilóxi)silano (20,0 g, 116,9 mmols) em THF (400 mL) a -78 °C foi adicionado n-BuLi (90 mL, 140,0 mmols) e a mistura de reação foi deixada atingir a temperatura ambiente em 2 h. Em seguida, a mistura de reação foi esfriada a -78 °C e eterato de borotrifluoreto (18 mL, 140,0 mmols) foi adicionado. Depois de 10 minutos de agitação, anidrido acético (15 mL, 153,0 mmols) foi adicionado e a mistura de reação foi deixada atingir a temperatura ambiente com em 2,5 h. A reação foi resfriada com solução de NaOH 1 N aquosa e extraída com acetato de etila (3 vezes). A camada orgânica combinada foi seca em sulfato de sódio. A remoção do solvente sob pressão reduzida, seguido por lavagens com solvente, forneceu C (13 g, 52 %).
[01169]Etapa 3: Síntese de 4-(((terc-butildimetilsilil)óxi)metil)-6-metil-2-oxo-1,2- di-hidropiridino-3-carbonitrila
[01170]A uma solução agitada do composto 5-((terc-butildimetilsilil)óxi)pent-3- in-2-ona (13,0 g, 61,0 mmols) e cianoacetamida (6,2 g, 73,2 mmols) em uma mistura de etanol e água (9:1) (270 mL) na temperatura ambiente foi adicionado piperidinoacetato (catalítico) e a mistura de reação foi aquecida em refluxo durante 5 h. Depois da remoção do solvente, água foi adicionada e o produto sólido foi filtrado. O produto sólido em lavagem com água, seguido por éter e hexano, forneceu o composto desejado (5,5 g, 32 %).
[01171]Etapa 4: Síntese de 3-(aminometil)-4-(((terc-butildimetilsilil)óxi)metil)-6- metilpiridin-2(1H)-ona
[01172]A uma solução agitada de 4-(((terc-butildimetilsilil)óxi)metil)-6-metil-2- oxo-1,2-di-hidropiridino-3-carbonitrila (5,5 g, 19,7 mmols) em metanol (100 mL) e amônia (30 mL) foi adicionado níquel Raney (quantitativo) e a mistura de reação foi agitada na presença de hidrogênio sob pressão por balão durante 14 h. Em conclusão, a mistura de reação foi filtrada através de celite e lavada com metanol. A remoção do solvente sob pressão reduzida, forneceu o composto desejado (3,5 g, 63 %).
[01173]Etapa 5: Síntese de 5-bromo-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-N- ((4-(hidroximetil)-6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
[01174]NaOH aquoso (70 mg, 1,7 mmol) foi adicionado a uma solução agitada de 5- bromo-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoato de metila (400 mg, 1,1 mmol) em etanol (60 mL) e a agitação continuada a 60 °C durante 1 h. Depois da conclusão, etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado usando HCl diluído até o pH ~6. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (5 vezes) e a camada orgânica combinada foi seca em sulfato de sódio. A remoção do solvente sob pressão reduzida forneceu o ácido respectivo (320 mg, 83,55 %).
[01175]O ácido acima (400 mg, 1,1 mmol) depois foi dissolvido em DMSO (4 mL) e 3-(aminometil)-4-(((terc-butildimetilsilil)óxi)metil)-6-metilpiridin-2(1H)-ona (525 mg, 1,7 mmol) foi adicionada ao mesmo. Depois de 15 minutos de agitação na temperatura ambiente, PyBOP (900 mg, 1,6 mmol) foi adicionado à mistura de reação e a agitação foi continuada durante a noite. Depois da conclusão, a massa de reação foi vertida em gelo, extraída com MeOH/DCM a 10 % (5 vezes). A camada orgânica combinada foi lavada com água e seca em sulfato de sódio. A remoção do solvente sob pressão reduzida, seguido por lavagens com solvente, forneceu o composto desejado (230 mg, 40 %).
[01176]Etapa 6: Síntese 5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4- (hidroximetil)-6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)- [1,1’-bifenil]-3-carboxamida
[01177]A uma solução agitada de 5-bromo-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)-N-((4-(hidroximetil)-6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2- metilbenzamida (250 mg, 0,5 mmol) e 4-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)benzil]morfolina (230 mg, 7,6 mmols) em dioxano (5 mL), solução de Na2CO3 2 M aquosa (0,9 mL, 1,8 mmol) foi adicionada e a solução foi purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd (PPh3)4 (57 mg, 0,05 mmol) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 15 min. A massa de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 % (3 vezes). A camada orgânica combinada foi seca em sulfato de sódio. A remoção do solvente sob pressão reduzida, seguido por purificação cromatográfica em coluna, forneceu o composto do título (60 mg, 25 %). LCMS: 589,35 (M + 1)+; HPLC: 95,58 % (@ 254 nm) (Rt; 3,524; Método: Coluna: YMC ODS- A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,54 (s, 1H), 8,22 (t, 1H), 7,57 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,38 (d, 2H, J = 5,6 Hz), 7,36 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 6,16 (s, 1H), 5,28 (m, 1H), 4,52 (d, 2H, J = 4,8 Hz), 4,25 (d, 2H, J = 3,6 Hz), 3,81 - 3,83 (m, 2H), 3,57 (m, 4H), 3,48 (s, 2H), 3,01 - 3,09 (m, 3H), 2,36 (m, 4H), 2,23 (s, 3H), 2,15 (s, 3H), 1,64 - 1,67 (m, 2H), 1,51 - 1,53 (m, 2H), 1,23 (m, 2H), 0,82 (t, 3H, J = 6,4 Hz).
[01178]Exemplo 119: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridil)metil)- 4-metil-4’-(morfolinometil)-5-(N-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)acetamido)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamide
Figure img0203
[01179]Etapa 1: Síntese de 5-bromo-2-metil-3-(N-(tetra-hidro-2H-piran-4- il)acetamido)benzoato de metila
[01180]Uma solução de 5-bromo-2-metil-3-((tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)benzoato de metila (520 mg, 1,58 mmol) foi aquecido a 70 °C em Acético 3 ml de anidrido durante 6 h. A mistura de reação foi esfriada até a temperatura ambiente e resfriada com NaHCO3 sat. e extraído com acetato de etila. A camada orgânica foi seca em Na2SO4, concentrada e purificada por gel de sílica (100 a 200) cromatografia em coluna para fornecer o alvo composto (400 mg, 68 %).
[01181]Etapa 2: Síntese de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-2-metil-3-(N-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)acetamido)benzamida
[01182]Uma mistura de 5-bromo-2-metil-3-(N-(tetra-hidro-2H-piran-4- il)acetamido) benzoato de metila (400 mg, 1,08 mmol) e NaOH (47 mg, 1,13 mmol) em 5 ml de etanol:água (2: 1) foi aquecida a 70 °C durante 2 h. A mistura de reação foi concentrada à secura e o material bruto dissolvido em água, o pH foi ajustado entre 5 a 6 através da adição lenta de HCl e extraído com MeOH a 10 % em DCM. A camada orgânica foi seca em Na2SO4 e concentrada sob pressão reduzida para fornecer 400 mg de ácido.
[01183]A mistura de ácido bruto (400 mg, 1,23 mmol), 3-(aminometil)-4,6- dimetilpiridin-2(1H)-ona (370 mg, 2,46 mmols), PyBOP (960 mg, 1,85 mmol) e trietil amina (0,17 ml, 1,23) foi agitada em 2 ml de DMSO na temperatura ambiente durante a noite. A mistura de reação foi diluída com água e o composto foi extraído em MeOH a 10 % em DCM, seco em Na2SO4, concentrado e o produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica (100 a 200) para fornecer 5-bromo-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(N-(tetra-hidro-2H-piran-4- il)acetamido)benzamida (95 mg, 17,3 %).
[01184]Etapa 3: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 4-metil-4’-(morfolinometil)-5-(N-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)acetamido)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamida
[01185]Uma solução de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-2-metil-3-(N-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)acetamido)benzamida (50 mg, 0,10 mmol), ácido (4-(morfolinometil)fenil) borônico (41 mg, 0,13 mmol), carbonato de sódio (27 mg, 0,25 mmol) em 3 ml de dioxano foi desgaseificada com argônio durante 20 min, Pd(PPh3) (12 mg, 0,0012 mmol) foi adicionado à mistura e aquecido a 100 °C durante a noite. A reação foi esfriada até a temperatura ambiente e diluída com água, antes da extração com MeOH a 10 % em DCM, as camadas orgânicas foram secas em Na2SO4, concentradas e o produto bruto resultante purificado por cromatografia em gel de sílica (100 a 200) para obter o composto do título (26 mg, 23 %).
[01186]LCMS: 609,35 (M + 23)+; HPLC: 97,81 % (@ 254 nm) (Rt; 4,407; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,48 (bs, 1H), 8,41 (t, 1H), 7,67 - 7,69 (m, 2H), 7,39 - 7,56 (m, 4H), 5,87 (s, 1H), 4,54 - 4,57 (m, 1H), 4,30 - 4,31 (d, 2H, J = 4 Hz), 3,77 - 3,85 (m, 2H), 3,50 - 3,58 (m, 6H), 2,37 (m, 4H), 2,22 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,88 - 1,91 (m, 1H), 1,51 - 1,65 (m, 6H), 2 prótons ligados em pico de solvente.
[01187]Exemplo 120: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-3’-fluoro-4-metil-4’-(morfolinometil)- [1,1’-bifenil]-3-carboxamida
Figure img0204
[01188]Etapa 1: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-3’-fluoro-4’-formil-4-metil-[1,1’-bifenil]-3- carboxamida
[01189]A uma solução agitada de ácido 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (300 mg, 0,63 mmol) e ácido (3-fluoro-4-formilfenil) borônico (160 mg, 0,94 mmol) em dioxano (6 mL), solução de Na2CO3 2 M aquosa (1,15 mL, 2,3 mmols) foi adicionada e a solução foi purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (72 mg, 0,06 mmol) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 15 min. A massa de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 % (3 vezes). A camada orgânica combinada foi seca em sulfato de sódio. A remoção do solvente sob pressão reduzida, seguida por purificação cromatográfica em coluna, forneceu o composto do título (288 mg, 88 %).
[01190]Etapa 2: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-3’-fluoro-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida
[01191]A uma solução agitada de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-3’-fluoro-4’-formil-4-metil-[1,1’-bifenil]- 3-carboxamida (285 mg, 0,55 mmol) e morfolina (149 mg, 1,64 mmol) em dicloroetano (5 mL), ácido acético (0,2 mL, 3,29 mmols) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 30 minutos. Em seguida, triacetoxiboro-hidreto de sódio (349 mg, 1,64 mmol) foi adicionado à mistura de reação a 0 °C, deixada atingir a temperatura ambiente e a agitação continuada durante a noite. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com diclorometano, lavada com água, solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada e seca em sulfato de sódio. A remoção do solvente sob pressão reduzida seguido por purificação cromatográfica em coluna e HPLC prep. forneceu o composto do título (70 mg, 20 %). LCMS: 591,45 (M + 1)+; HPLC: 98,96 % (@ 254 nm) (Rt; 4,034; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,5 (bs, 1H), 10,1 (bs, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,66 - 7,73 (m, 3H), 7,54 (s, 1H), 7,36 (s, 1H), 5,88 (s, 1H), 4,44 (s, 2H), 4,30 (m, 5H), 3,96 (m, 2H), 3,66 - 3,86 (m, 6H), 3,17 - 3,34 (m, 4H), 2,27 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,57- 1,67 (m, 4H), 0,84 (t, 3H, J = 6 Hz).
[01192]Exemplo 121: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2’-fluoro-4-metil-4’-(morfolinometil)- [1,1’-bifenil]-3-carboxamida
Figure img0205
[01193]Etapa 1: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 5-(etiI(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2’-fluoro-4’-formil-4-metil-[1,1’-bifenil]-3- carboxamida
[01194]A uma solução agitada de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (300 mg, 0,62 mmol) e ácido (2-fluoro-4-formilfenil) borônico (158 mg, 0,94 mmol) em dioxano (3 mL), solução de Na2CO3 2 M aquosa (1,13 mL, 2,26 mmols) foi adicionada e a solução foi purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (72 mg, 0,06 mmol) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 15 min. A massa de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 % (3 vezes). A camada orgânica combinada foi seca em sulfato de sódio. A remoção do solvente sob pressão reduzida seguida por purificação cromatográfica em coluna forneceu o composto desejado (300 mg, 91 %).
[01195]Etapa 2: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2’-fluoro-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida
[01196]A uma solução agitada de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2’-fluoro-4’-formil-4-metil-[1,1’-bifenil]- 3-carboxamida (300 mg, 0,57 mmol) e morfolino (100 mg, 1,15 mmol) em dicloroetano (4 mL), ácido acético (207 mg, 3,46 mmols) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 30 minutos. Em seguida, triacetoxiboro-hidreto de sódio (367 mg, 1,73 mmol) foi adicionado à mistura de reação a 0 °C, deixada atingir a temperatura ambiente e a agitação continuada durante a noite. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com diclorometano, lavada com água, solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada e seca em sulfato de sódio. A remoção do solvente sob pressão reduzida, seguida por purificação cromatográfica em coluna, forneceu o composto do título (300 mg, 87,97 %).
[01197]LCMS: 591,30 (M + 1)+; HPLC: 96,03 % (@ 254 nm) (Rt; 4,077; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMS0-d6, 400 MHz) δ 11, 45 (bs, 1H), 8,17 (t, 1H), 7,47 (t, 1H, J = 8 Hz), 7,30 (s, 1H), 7,21 - 7,23 (m, 2H), 7,10 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,81 - 3,84 (m, 2H), 3,50 - 3,59 (m, 6H), 3,22 - 3,25 (m, 2H), 3,00 - 3,06 (m, 3H), 2,38 (m, 4H), 2,25 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1, 51 - 1,66 (m, 4H), 0,83 (t, 3H, J = 6,8 Hz).
[01198]Exemplo 122: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2’,4-dimetil-4’-(morfolinometil)-[1,1’- bifenil]-3-carboxam ida
Figure img0206
[01199]Etapa 1: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-formil-2’,4-dimetil-[1,1’-bifenil]-3- carboxamida
[01200]A uma solução agitada de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (400 mg, 0,84 mmol) e 3-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzaldeído (310 mg, 1,26 mmol) em dioxano (2 mL), solução de Na2CO3 2 M aquosa (1,5 mL, 3,03 mmols) foi adicionada e a solução foi purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (97 mg, 0,08 mmol) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 15 min. A massa de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 % (3 vezes). A camada orgânica combinada foi seca em sulfato de sódio. A remoção do solvente sob pressão reduzida seguida por purificação cromatográfica em coluna forneceu o composto desejado (300 mg, 69,28 %).
[01201]Etapa 2: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2’,4-dimetil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamida
[01202]A uma solução agitada de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-formil-2’,4-dimetil-[1,1’-bifenil]-3- carboxamida (410 mg, 0,79 mmol) e morfolino (210 mg, 2,38 mmols) em dicloroetano (10 mL), ácido acético (280 mg, 4,77 mmols) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 30 minutos. Em seguida, triacetoxiboro-hidreto de sódio (580 mg, 2,71 mmols) foi adicionado à mistura de reação a 0 °C, deixada atingir a temperatura ambiente e a agitação continuada durante a noite. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com diclorometano, lavada com água, solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada e seca em sulfato de sódio. A remoção do solvente sob pressão reduzida, seguida por purificação cromatográfica em coluna, forneceu o composto do título (125 mg, 26,76 %).
[01203]LCMS: 587,55 (M + 1)+; HPLC: 97,23 % (@ 254 nm) (Rt; 4,065; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (bs, 1H), 9,91 (bs, 1H), 8,17 (bs, 1H), 7,32 - 7,42 (m, 3H), 7,15 (bs, 1H), 6,92 (bs, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,27 - 4,35 (m, 4H), 3,86 (m, 2H), 3,64 - 3,67 (m, 3H), 3,12 - 3,32 (m, 10H), 2,33 (bs, 6H), 2,19 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,55 - 1,64 (m, 4H), 0,84 (t, 3H, J = 6 Hz), 2 prótons ligados em pico de solvente.
[01204]Exemplo 123: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolino-4-carbonil)-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida
Figure img0207
[01205]A uma solução agitada de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (300 mg, 0,63 mmol) e morfolino(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)fenil)metanona (260 mg, 0,82 mmol) em dioxano (10 mL), solução de Na2CO3 2 M aquosa (1,13 mL, 2,27 mmols), foi adicionada e a solução foi purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (72 mg, 0,06 mmol) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 15 min. A massa de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 % (3 vezes). A camada orgânica combinada foi seca em sulfato de sódio. A remoção do solvente sob pressão reduzida, seguida por purificação cromatográfica em coluna, forneceu o composto do título (250 mg, 68 %). LCMS: 587,35 (M + 1)+; HPLC: 93,85 % (@ 254 nm) (Rt; 4,535; Método: Coluna: YMC ODS- A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (bs, 1H), 8,21 (t, 1H), 7,69 - 7,71 (m, 2H), 7,45 - 7,49 (m, 3H), 7,26 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,29 (d, 2H, J = 4 Hz), 3,82 - 3,84 (m, 2H), 3,48 - 3,60 (m, 8H), 3,23 - 3,25 (m, 2H), 3,09 - 3,11 (m, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,52 - 1,68 (m, 4H), 0,83 (t, 3H, J = 6,8 Hz).
[01206]Exemplo 124: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(etil(1-(metilsulfonil)piperidin-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’- bifenil]-3-
Figure img0208
[01207]À solução agitada de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 5-(etil(piperidin-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1-bifenil]-3-carboxamida (0,2 g, 0,35 mmol) em DCM (8 mL) foi adicionado trietil amina (0,106 g, 1,04 mmol) e cloreto de mesila (0,08 g, 0,69 mmol) a 0 °C. A mistura de reação resultante foi agitada na temperatura ambiente durante 2 h. Depois da conclusão, água foi adicionada à mistura de reação e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida, fornecendo o material bruto que depois foi dissolvido em metanol (10 mL) e NaOH adicionado (0,021 g, 0,52 mmol). A mistura foi agitada na temperatura ambiente por 15 h. Depois da conclusão, a extração foi realizada usando MeOH/DCM a 20 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio, concentradas e o material bruto foi purificado por lavagens com solvente, fornecendo o composto do título (0,1 g, 45,45 %).
[01208]LCMS: 650,85 (M + 1)+; HPLC: 95,37 % (@ 254 nm) (Rt; 4,258; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (bs, 1H), 8,18 (t, 1H), 7,57 - 7,59 (m, 3H), 7,37 - 7,39 (m, 2H), 7,22 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,29 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,58 (m, 4H), 3,48 - 3,52 (m, 4H), 3,09 - 3,11 (m, 2H), 2,94 (m, 1H), 2,82 (s, 3H), 2,67 - 2,72 (m, 2H), 2,36 (m, 4H), 2,24 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,81 - 1,83 (m, 2H), 1,59 - 1,61 (m, 2H), 0,84 (t, 3H, J = 6 Hz).
[01209]Exemplo 125: Síntese de 5-((1-acetilpiperidin-4-il)(etil)amino)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamide
Figure img0209
[01210]A uma solução agitada de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(etil(piperidin-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamida (0,25 g, 0,44 mmol) e ácido acético (0,052 g, 0,86 mmol) em DMF (3 mL), EDCI (0,123 g, 0,64 mmol) e HOBt (0,087 g, 0,64 mmol) foi adicionado seguido pela adição de trietilamina (0,108g, 1,06 mmol) e a reação foi agitada na temperatura ambiente durante a noite. Depois da conclusão da reação, água foi adicionada à mesma e a extração foi realizada usando MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas em anidro Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer o composto do título (0,1 g, 37,31 %).
[01211]LCMS: 614,75 (M + 1)+; HPLC: 97,57 % (@ 254 nm) (Rt; 4,140; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6 400 MHz) δ 11,45 (bs, 1H), 8,19 (t, 1H), 7,57 (d, 2H, J = 7,2 Hz), 7,37 - 7,39 (m, 3H), 7,22 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,29 (d, 2H, J = 4,4Hz), 3,78 (m, 1H), 3,49 - 3,58 (m, 6H), 2,99 - 3,08 (m, 4H), 2,36 (m, 4H), 2,24 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,97 (s, 3H), 1,74 (m, 2H), 1,31 - 1,52 (m, 2H), 0,83 (t, 3H, J = 6,8 Hz), 2 prótons ligados em pico de solvente.
[01212]Exemplo 126: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(etil(piperidin-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamide
Figure img0210
[01213]Etapa 1: Síntese de 4-((5-bromo-3-(metoxicarbonil)-2- metilfenil)amino)piperidina-1-carboxilato de terc-butila
[01214]A uma solução agitada de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metila (4,5 g, 18,44 mmols) e 4-oxopiperidino-1-carboxilato de terc-butila (11,01 g, 55,33 mmols) em dicloroetano (50 mL), ácido acético (6,64 g, 110,6 mmols) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 10 min. Em seguida, triacetoxiboro-hidreto de sódio (11,72 g, 55,28 mmols) foi adicionado a 0 °C e a reação agitada durante a noite na temperatura ambiente. Em conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material bruto foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer o composto desejado (5,2 g, 66,24 %).
[01215]Etapa 2: Síntese de 4-((5-bromo-3-(metoxicarbonil)-2-metilfenil)(etil)- amino)-piperidina-1-carboxilato de terc-butila
[01216]A uma solução agitada de 4-((5-bromo-3-(metoxicarbonil)-2- metilfenil)amino)piperidina-1-carboxilato de terc-butila (5 g, 11,70 mmols) e acetaldeído (1,58 g, 35,12 mmols) em dicloroetano (60 mL), ácido acético (4,24 g, 70,66 mmols) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 10 min. Em seguida, triacetoxiboro-hidreto de sódio (7,44 g, 35,09 mmols) foi adicionado a 0 °C e a reação agitada na temperatura ambiente durante 2 h. Em conclusão, a reação foi resfriada com bicarbonato de sódio aquoso, a fase orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida, para fornecer o material bruto foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer o produto desejado (5 g, 93,45 %).
[01217]Etapa 3: Síntese de 4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metil-fenil)(etil)amino)piperidina-1-carboxilato de terc-butila
[01218]NaOH aquoso (0,7 g, 17,50 mmols) foi adicionado a uma solução de 4- ((5-bromo-3-(metoxicarbonil)-2-metilfenil)amino)piperidina-1-carboxilato de terc-butila (5 g, 10,94 mmols) em etanol (50 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Depois da conclusão da reação, etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado usando HCl diluído até o pH 6 e ajustado usando ácido cítrico ao pH 4. A extração foi realizada usando acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas, fornecendo o ácido respectivo (4,8 g, 99,17 %).
[01219]O ácido acima (4,8 g, 10,90 mmols) depois foi dissolvido em DMSO (20 mL) e 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (3,32 g, 21,81 mmols) foi adicionada à mesma. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 15 min antes de PYBOP (8,50 g, 16,35 mmols) foi adicionado à mesma e a agitação foi continuada durante a noite. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer 4-((5- bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metil- fenil)(etil)amino)piperidina-1-carboxilato de terc-butila (4,4 g, 70,96 %).
[01220]Etapa 4: Síntese de 4-((5-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)carbamoil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-il)(etil)amino)piperidina-1- carboxilato de terc-butila
[01221]A uma solução agitada de 4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metil-fenil)(etil)amino)piperidina-1-carboxilato de terc-butila (2 g, 3,47 mmols) e ácido 4-(morfolinometil)-fenil) borônico (1,58 g, 5,21 mmols) em mistura de dioxano/água, Na2CO3 (1,32 g, 12,45 mmols) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (0,4 g, 0,35 mmol) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 90 °C durante 3,5 h. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer composto desejado (1,6 g, 68,66 %).
[01222]Etapa 5: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 5-(etil(piperidin-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida
[01223]4-((5-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-4- metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-il)(etil)amino)piperidina-1-carboxilato de terc- butila (1,3 g, 0,1,93 mmol) foi tomado em DCM (20 mL), ao mesmo, TFA (10 mL) foi adicionado a 0 °C e agitada na temperatura ambiente durante 2 h. Em conclusão da reação, o solvente foi removido sob pressão reduzida, a reação foi resfriada com bicarbonato de sódio aquoso e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida para obter produto bruto; que em seguida, purificado por lavagens com acetonitrila para fornecer o composto do título (0,9 g, 81,81 %).
[01224]LCMS: 572,35 (M + 1)+; HPLC: 96,59 % (@ 254 nm) (Rt; 3,964; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,19 (t, 1H), 7,57 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,38 (m, 3H), 7,21 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,29 (d, 2H, J = 4 Hz), 3,48 - 3,57 (m, 8H), 2,98 - 3,10 (m, 4H), 2,88 (m, 1H), 2,36 (m, 4H), 2,24 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,70 - 1,73 (m, 2H), 1,48 - 1,51 (m, 2H), 0,84 (t, 3H, J = 6,8 Hz).
[01225]Exemplo 127: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(etil(1-pivaloilpiperidin-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamide
Figure img0211
[01226]N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(piperidin-4- il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida (0,2 g, 0,34 mmol) foi dissolvida em DMSO (2 mL) e ácido piválico (0,107 g, 1,04 mmol) e trietil amina (0,106 g, 1,04 mmol) foi adicionado à mesma. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 15 min antes de PYBOP (0,27 g, 0,52 mmol) foi adicionada à mesma e a agitação foi continuada durante a noite. Depois da conclusão da reação, a mistura de reação foi vertida em gelo, extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas para obter produto bruto; que em seguida, purificado por cromatografia em coluna para fornecer o composto do título (0,14 g, 60,86 %).
[01227]LCMS: 656,65 (M + 1)+; HPLC: 97,51 % (@ 254 nm) (Rt; 4,555; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (bs, 1H), 8,18 (t, 1H), 7,57 (d, 2H, J = 7,2), 7,37 - 7,40 (m, 3H), 7,21 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,21 - 4,29 (m, 4H), 3,49 - 3,58 (m, 6H), 3,06 - 3,08 (m, 3H), 2,73 - 2,79 (m, 2H), 2,37 (m, 4H), 2,24 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,75 - 1,78 (m, 2H), 1,38 - 1,41 (m, 2H), 1,17 (s, 9H), 0,83 (t, 3H, J = 7,2 Hz).
[01228]Exemplo 128: Síntese de 5-(((1r,4r)-4-aminociclo-hexil)(etil)amino)-N- ((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’- bifenil]-3-carboxam ida
Figure img0212
[01229]Etapa 1: Síntese de 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoato de metila
[01230]A uma solução agitada de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metila (5 g, 20,57 mmols) e (4-oxociclo-hexil)carbamato de terc-butila (5,6 g, 26,74 mmols) em dicloroetano (50 mL), ácido acético (7,4 g, 123,33 mmols) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 10 min. Em seguida, triacetoxiboro-hidreto de sódio (13 g, 61,72 mmols) foi adicionado a 0 °C e a reação agitada durante a noite na temperatura ambiente. Em conclusão, a reação foi resfriada com bicarbonato de sódio aquoso, a fase orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida, para fornecer o material bruto foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer o composto do título (3,5 g, 38,88 %).
[01231]Etapa 2: Síntese de 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)- amino)ciclo-hexil)-(etil)-amino)-2-metilbenzoato de metila
[01232]A uma solução agitada de 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoato de metila (1,4 g, 3,18 mmols) e acetaldeído (0,419 g, 9,52 mmols) em dicloroetano (20 mL), ácido acético (1,14 g, 19,0 mmols) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 10 min. Em seguida, triacetoxiboro-hidreto de sódio (2 g, 9,43 mmols) foi adicionado a 0 °C e a reação agitada na temperatura ambiente durante 2 h. Em conclusão, a reação foi resfriada com bicarbonato de sódio aquoso, a fase orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida, para fornecer o material bruto foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer o composto do título (1,25 g, 84,45 %).
[01233]Etapa 3: Síntese de ((1r,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2- di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(etil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc- butila
[01234]NaOH aquoso (0,16 g, 4,0 mmols) foi adicionado a uma solução de 5- bromo-3-(((1r,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)-amino)ciclo-hexil)-(etil)-amino)-2- metilbenzoato de metila (1,25 g, 2,67 mmols) em etanol (10 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Depois da conclusão da reação, etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificada usando HCl diluído até o pH 6 e ajustado usando ácido cítrico ao pH 4. A extração foi realizada usando acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas, fornecendo o ácido respectivo (1,1 g, 90 %).
[01235]O ácido acima (1,1 g, 2,42 mmols) depois foi dissolvido em DMSO (10 mL) e 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,736 g, 4,84 mmols) foi adicionada à mesma. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 15 min antes de PYBOP (1,88 g, 3,61 mmols) foi adicionado à mesma e a agitação foi continuada durante a noite. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer o composto do título (0,75 g, 53,57 %).
[01236]Etapa 4: Síntese de ((1r,4r)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin- 3-il)-metil)-carbamoil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1-bifenil]-3-il)-(etil)-amino)-ciclo- hexil)carbamato de terc-butila
[01237]A uma solução agitada de ((1r,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(etil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila (0,7 g, 1,19 mmol) e ácido (4-(morfolinometil)fenil) borônico (0,489 g, 1,78 mmol) em mistura de dioxano/água, Na2CO3 (0,454 g, 4,28 mmols) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (0,137 g, 0,119 mmol) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 90 °C durante 3,5 h. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer o composto do título (0,55 g, 67,48 %).
[01238]Etapa 5: Síntese de 5-(((1r,4r)-4-aminociclo-hexil)(etil)amino)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1-bifenil]-3- carboxamida
[01239]((1r,4r)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)-metil)- carbamoil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-il)-(etil)-amino)-ciclo- hexil)carbamato de terc-butila (0,55 g, 0,80 mmol) foi tomado em DCM (10 mL), ao mesmo, TFA (3 mL) foi adicionado a 0 °C e agitada na temperatura ambiente durante a noite. Em conclusão da reação, o solvente foi removido sob pressão reduzida, e a reação resfriada com bicarbonato de sódio aquoso e extraída com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida para obter produto bruto que em seguida, purificado por lavagens com acetonitrila para fornecer o composto do título (0,42 g, 89,36 %).
[01240]LCMS: 586,45 (M + 1)+; HPLC: 98,38 % (@ 254 nm) (Rt; 3,667; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,18 (t, 1H), 7,56 (d, 2H, J = 7,6), 7,35 - 7,38 (m, 3H), 7,18 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,29 (d, 2H, J = 3,2Hz), 3,58 (m, 4H), 3,49 (m, 2H), 3,09 - 3,10 (m, 2H), 2,63 - 2,66 (m, 2H), 2,37 (m, 4H), 2,21 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,75 - 1,78 (m, 4H), 1,40 - 1,43 (m, 2H), 1,05 - 1,08 (m, 2H), 0,83 (t, 3H, J = 6,4 Hz).
[01241]Exemplo 129: Síntese de 5-(((1r,4r)-4-acetamidociclo-hexil)(etil)amino)- N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida
Figure img0213
[01242]A uma solução agitada de 5-(((1r,4r)-4-aminociclo-hexil)(etil)amino)-N- ((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida (0,25 g, 0,42 mmol) e ácido acético (0,151 g, 0,85 mmol) em DMF (3 mL), EDCI (0,123 g, 0,64 mmol) e HOBt (0,057 g, 0,42 mmol) foi adicionado seguido pela adição de trietilamina (0,064g, 0,63 mmol) e a reação foi agitada na temperatura ambiente durante a noite. Depois da conclusão da reação, água foi adicionada à mesma e a extração foi realizada usando MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas em anidro Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer o composto do título (0,11 g, 41,04 %).
[01243]LCMS: 628,35 (M + 1)+; HPLC: 98,79 % (@ 254 nm) (Rt; 3,902; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (bs, 1H), 8,18 (t, 1H), 7,56 - 7,66 (m, 3H), 7,36 - 7,38 (m, 3H), 7,18 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,29 (d, 2H, J = 4Hz), 3,99 (m, 1H), 3,48 - 3,58 (m, 6H), 3,10 - 3,11 (m, 2H), 2,67 (m, 1H), 2,37 (m, 4H), 2,22 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,74 - 1,79 (m, 6H), 1,43 - 1,46 (m, 2H), 1,08 - 1,11 (m, 2H), 0,81 - 0,94 (t, 4H).
[01244]Exemplo 130: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-fluoro-4-metil-4’-(morfolinometil)- [1,1’-bifenil]-3-carboxamida
Figure img0214
[01245]Etapa 1: ácido 6-fluoro- 2-metil-3-nitrobenzoico
[01246]Uma solução de ácido 2-fluoro-6-metilbenzoico (2 g, 12,98 mmols) em H2SO4 concentrado (15,77 ml, 295,85 mmols) foi esfriada a -5°C em um acetona/banho de gelo em ar. Uma mistura de ácido nítrico concentrado (1,08 ml, 16,87 mmols) e H2SO4 concentrado (1 ml, 18,76 mmols) foi adicionado às gotas à mistura de reação a -5 a 0 °C durante 15 minutos. A mistura de reação amarela clara foi agitada a -5 a 0 °C durante 30 minutos antes de ser vertida em gelo (100 g). O precipitado resultante foi filtrado e dissolvido em EtOAc (50 ml) e a fase orgânica foi lavada com água desionizada (25 ml) seguida por salmoura (25 ml). A fase orgânica foi seca em MgSO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para fornecer 2 g (77 %) de ácido 6-fluoro-2-metil-3-nitrobenzoico como um sólido branco. LC-MS 99 %, 1,31 min (método LC-MS de 3 minutos), m/z = 198,0, RMN de 1H (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 8,04 (dd, J = 9,1, 5,0 Hz, 1H), 7,16 (t, J = 8,6 Hz, 1H), 2,63 (s, 3H).
[01247]Etapa 2: Síntese de ácido 3-bromo-2-fiuoro-6-metil-5-nitrobenzoico
[01248]A uma solução de ácido 6-fluoro- 2-metil-3-nitrobenzoico (100 mg, 0,5 mmol) em H2SO4 concentrado (0,5 ml, 9,38 mmols) foi adicionado 1,3-dibromo-5,5- dimetilimidazolidino-2,4-diona (79 mg, 0,28 mmol) na temperatura ambiente e sob nitrogênio. A mistura de reação foi agitada durante 6 horas e um precipitado foi formado. A mistura de reação foi adicionada lentamente à água desionizada (3 ml) e o precipitado resultante foi filtrado. O sólido foi lavado com água desionizada (2 ml) e ar seco durante 2 horas para fornecer 123 mg (88 %) de ácido 3- bromo-2-fluoro-6- metil-5-nitrobenzoico como um sólido amarelo claro. LC-MS 94 %, 1,61 min (método LC-MS de 3 minutos), m/z = 275,9/277,9 (ES-), RMN de 1H (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 8,25 (d, J = 6,2 Hz, 1H), 2,58 (s, 3H).
[01249]Etapa 3: Síntese de 3-bromo-2-fluoro-6-metil-5-nitrobenzoato de metila
[01250]A uma solução de ácido 3-bromo-2-fluoro-6-metil-5-nitrobenzoico (2,41 g, 8,67 mmols) em N,N-Dimetilformamida (25 ml) na temperatura ambiente e sob nitrogênio foi adicionado K2CO3 (2,4 g, 17,34 mmols) seguido por iodometano (0,7 ml, 11,27 mmols). A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 2 horas antes de ser diluída com água desionizada (100 ml) e extraída com EtOAc (3 x 50 ml). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com saturado NaHCO3(aq) (50 ml) e depois seca em MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado duas vezes por FCC (sílica 50 g, cartucho Isolute, gradiente de eluentes; 98:2 Heptano:EtOAc a 9: 1 Heptano:EtOAc) para fornecer 2,43 g (89 %) de 3-bromo-2-fluoro-6-metil-5-nitrobenzoato de metila como um sólido branco. LC-MS 99 %, 2,18 min (método LC-MS de 3 minutos), m/z = nenhuma ionização, RMN de 1H (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 8,22 (d, J = 6,21 Hz, 1H), 4,00 (s, 3H), 2,48 (s, 311).
[01251]Etapa 4: Síntese de 3-amino-5-bromo-6-fluoro-2-metilbenzoato de metila
[01252]A uma solução de 3-bromo-2-fluoro-6-metil-5-nitrobenzoato de metila (2,43 g, 8,32 mmols) em Metanol (80 ml) na temperatura ambiente foi adicionado cloreto de amônio (4,37 g, 83,2 mmols) seguido por água desionizada (40 ml). A mistura foi aquecida a 70 °C em ar antes da adição de ferro (2,79 g, 49,92 mmols). A reação se tornou marrom durante 2,5 horas e foi agitada a 70 °C. Esta mistura foi deixada esfriar até a temperatura ambiente e foi filtrada através de Kieselgel. A almofada do filtro foi lavada com MeOH (80 ml) e o filtrado concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em saturado NaHCO3(aq) (50 ml) e EtOAc (150 ml). As fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com saturado NaHCO3(aq) (50 ml) antes de ser seca em MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por FCC (sílica 50 g, cartucho Isolute, gradiente de eluentes; 95:5 Heptano:EtOAc a 7:3 Heptano:EtOAc) para fornecer 2,23 g (95 %, 77 % de rendimentos corrigidos) de 3-amino-5-bromo-6-fluoro-2-metilbenzoato de metila como um óleo amarelado. O material foi tomado através da etapa seguinte sem purificação adicional. LC-MS 81 %, 1,87 min (método LC-MS de 3 minutos), m/z = 261,9/263,9, RMN de 1H (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 6,89 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,60 (s, 2H), 2,08 (s, 3H).
[01253]Etapa 5: Síntese de 3-bromo-2-fluoro-6-metil-5-[(oxan-4- il)amino]benzoato de metila
[01254]A uma solução de 3-amino-5-bromo-6-fluoro-2-metilbenzoato de metila (2,23 g, 8,08 mmols) em 1,2-Dicloroetano (32 ml) na temperatura ambiente e sob nitrogênio foi adicionado oxan-4-ona (1,49 ml, 16,17 mmols) seguido por ácido acético (2,78 ml, 48,5 mmols). Esta solução foi agitada durante 5 minutos antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (5,14 g, 24,25 mmols) na temperatura ambiente. Depois da agitação durante 5,5 horas não houve material de partida não reagido presente por LCMS. Água desionizada (32 ml) foi adicionada e a mistura foi neutralizada com sólido NaHCO3. As fases foram separadas e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 32 ml). Os extratos orgânicos combinados foram secos em MgSO4, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por FCC (sílica 50 g, cartucho Isolute, gradiente de eluentes; Heptano:EtOAc 95:5 a Heptano:EtOAc 6:4) para fornecer 2,3 g (82 %) de 3- bromo-2-fluoro-6-metil-5-[(oxan- 4-il)amino]benzoato de metila como um sólido branco amarelado. LC-MS 99 %, 2,13 min (método LC-MS de 3 minutos), m/z = 245,9/247,9, RMN de 1H (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 6,78 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 4,01 (dt, J = 11,9, 3,4 Hz, 2H), 3,93 (s, 3H), 3,53 (td, J = 11,7, 2,1 Hz, 2H), 3,49 - 3,42 (m, 1H), 3,34 (s, 1H), 2,04 (s, 5H), 1,48 (qd, J = 11,0, 4,2 Hz, 2H).
[01255]Etapa 6: Síntese de 3-bromo-5-[etil(oxan-4-il)amino]-2-fluoro-6- metilbenzoato de metila
[01256]A uma solução de 3-bromo-2-fluoro-6-metil-5-[(oxan-4- il)amino]benzoato de metila (500 mg, 1,44 mmol) em 1,2-Dicloroetano (15 ml) na temperatura ambiente e sob nitrogênio foi adicionado acetaldeído (0,81 ml, 14,44 mmols) seguido por ácido acético (0,5 ml, 8,67 mmols). Esta solução foi agitada durante 5 minutos antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (3,06 g, 14,44 mmols) na temperatura ambiente. Depois da agitação durante 2 horas água desionizada (20 ml) foi adicionada e a mistura foi neutralizada com sólido NaHCO3. As fases foram separadas e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 20 ml). Os extratos orgânicos combinados foram secos em MgSO4, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por FCC (sílica 10 g, cartucho Isolute, gradiente de eluentes; Heptano:EtOAc 95:5 a Heptano:EtOAc 85:15) para fornecer 519 mg (96 %) de 3-bromo-5-[etiI(oxan-4-il)amino]-2-fluoro- 6-metilbenzoato de metila como um claro óleo amarelado que solidificou após repouso. LC-MS 94 %, 2,45 min (método LC-MS de 3 minutos), m/z = 373,9/375,9, RMN de 1H (500 MHz, Clorofórmio- d) δ ppm 7,33 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 3,95 (s, 5H), 3,32 (td, J = 11,7, 2,1 Hz, 2H), 3,00 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 2,88 (tt, J = 10,9, 4,0 Hz, 1H), 2,25 (s, 3H), 1,73 - 1,54 (m, 4H), 0,85 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
[01257]Etapa 7: Síntese de ácido 3-bromo-5-[etil(oxan-4-il)amino]-2-fluoro-6- metilbenzoico
[01258]A uma solução de 3-bromo-5-[etil(oxan-4-il)amino]-2-fluoro-6- metilbenzoato de metila (519 mg, 1,39 mmol) em Tetra-hidrofurano (13 ml) e MeOH (4 ml) foi adicionado 4M NaOH (13,87 ml). A mistura de reação foi agitada a 50 °C em ar durante 72 horas. A mistura de reação foi acidificada ao pH 2 - 3 com 6M HCl e extraída com DCM (5 x 15 ml). Os extratos orgânicos combinados foram secos em MgSO4, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para fornecer 526 mg (95 %) de ácido 3-bromo-5-[etil(oxan-4-il)amino]-2-fluoro-6-metilbenzoico como uma espuma bege. LC-MS 88 %, 1,77 min (método LC-MS de 3 minutos), m/z = 359,9/361,9, RMN de 1H (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 7,43 - 7,31 (m, 1H), 4,00 (d, J = 11,3 Hz, 2H), 3,41 - 3,29 (m, 2H), 3,16 - 2,91 (m, 3H), 2,40 (s, 3H), 1,84 - 1,59 (m, 4H), 0,99 - 0,82 (m, 3H).
[01259]Etapa 8: Síntese de 3-bromo-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil]-5-[etil(oxan-4-il)amino]-2-fluoro-6-metilbenzamida
[01260]A uma solução de ácido 3-bromo-5-[etil(oxan-4-il)amino]-2-fluoro-6- metilbenzoico (200 mg, 0,56 mmol) em N,N-Dimetilformamida (2 ml) na temperatura ambiente e sob nitrogênio foi adicionado PyBOP (346,72 mg, 0,67 mmol) seguido por N-etil-N-(propan-2-il)propan-2-amina (145 μL, 0,83 mmol) e 3-(aminometil)-4,6- dimetil-1,2-di-hidropiridin- 2-ona (89 %, 104 mg, 0,61 mmol). Depois da agitação durante 1 hora na temperatura ambiente, nenhum material de partida foi observado por LCMS. EtOAc (20 ml) foi adicionado à mistura de reação e este depois foi lavado com água desionizada (5 ml) seguido por saturado NaHCO3(aq) (3 x 5 ml). A fase orgânica foi seca em MgSO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo depois foi purificado por FCC (5 g sílica, cartucho Isolute, gradiente de eluentes; 100 % DCM a 97:3 DCM:MeOH) para fornecer 112 mg (41 %) de 3-bromo-N-[(4,6-dimetil- 2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-5-[etil(oxan-4-il)amino]-2-fluoro-6-metilbenzamida como um sólido amarelado claro. LC-MS 97 %, 1,85 min (método LC-MS de 3 minutos), m/z = 494,0/496,0, RMN de 1H (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 11,66 (s, 1H), 7,23 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 5,95 (s, 1H), 4,65 - 4,43 (m, 2H), 3,93 (d, J = 11,0 Hz, 2H), 3,38 - 3,22 (m, 2H), 2,97 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 2,91 - 2,79 (m, 1H), 2,37 (s, 3H), 2,24 - 2,11 (m, 6H), 1,72 - 1,53 (m, 4H), 0,83 (t, J = 7,0 Hz, 3H).
[01261]Etapa 9: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-fluoro-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]- 3-carboxamida
[01262]A uma solução de 3-bromo-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil]-5-[etil(oxan-4-il)amino]-2-fluoro-6-metilbenzamida (112 mg, 0,23 mmol) em 1,4-Dioxano (2 ml) e Água (1 ml) foi adicionado 4-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)benzil]morfolina (103 mg, 0,34 mmol) seguido por Na2CO3 (84,04 mg, 0,79 mmol). A solução foi purgada com nitrogênio durante 5 minutos antes da adição de paládio - trifenilfosfina (1:4) (26 mg, 0,02 mmol). A mistura amarelada depois foi purgada com nitrogênio durante 5 minutos antes de ser aquecida a 100 °C. Depois de 4 horas, LCMS não indicou material de partida não reagido. A mistura de reação escura foi diluída com água desionizada (5 ml) e extraída com MeOH a 10 % em DCM (5 x 5 ml). Os extratos orgânicos combinados foram secos em MgSO4, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por FCC (5 g, cartucho Isolute, gradiente de eluentes; 99:1 DCM:MeOH a 95:5 DCM:MeOH) para fornecer 69 mg (52 %) do composto do título como um sólido branco amarelado. LC-MS 97 %, 2,70 min (método LC-MS de 7 minutos), m/z = 591,2, RMN de 1H (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 12,10 (br s, 1H), 7,53 - 7,30 (m, 4H), 7,1 3 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 7,07 (br s, 1H), 5,88 (s, 1H), 4,55 (br s, 2H), 3,93 (d, J = 11,2 Hz, 2H), 3,73 - 3,69 (m, 4H), 3,52 (s, 2H), 3,30 (t, J = 10,8 Hz, 2H), 3,02 (q, J = 6,9 Hz, 2H), 2,92 (ddd, J = 14,6, 10,7, 3,7 Hz, 1H), 2,46 (s, 4H), 2,35 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,12 (s, 3H), 1,79 - 1,43 (m, 4H), 0,86 (t, J = 7,0 Hz, 3H).
[01263]Exemplo 131: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-((3-oxomorfolino)metil)-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida
Figure img0215
[01264]Etapa 1: Síntese de 4’-(bromometil)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3- carboxamida
[01265]A uma solução agitada esfriada em gelo de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-(hidroximetil)-4-metil- [1,1’-bifenil]-3-carboxamida (450 mg, 0,89 mmol) em DCM (10 mL) foi adicionado trifenil fosfina (469 mg, 1,78 mmol) e tetrabrometo de carbono (741 mg, 2,25 mmols). A mistura de reação foi deixada atingir a temperatura ambiente e a agitação continuada durante 16h. Em conclusão, a remoção do solvente sob pressão reduzida seguido por purificação cromatográfica em coluna forneceu composto 8 (300 mg, 59 %).
[01266]Etapa 2: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-((3-oxomorfolino)metil)-[1,1’-bifenil]- 3-carboxamida
[01267]A uma solução agitada esfriada em gelo de 4’-(bromometil)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4- metil-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida (250 mg, 0,44 mmol) e morfolin-3-ona (67 mg, 0,66 mmol) em DMF (30 mL) foi adicionado hidreto de sódio (27 mg, 0,66 mmol). Depois de 10 minutos, o gelo foi removido e a agitação continuada durante 16h na temperatura ambiente. Em conclusão, água foi adicionada e extraída com DCM (3 vezes). A camada orgânica combinada foi seca em sulfato de sódio. A remoção do solvente sob pressão reduzida, seguido por purificação cromatográfica em coluna e prep. HPLC forneceu o composto do título (75 mg, 29 %). LCMS: 587,35 (M + 1)+;
[01268]HPLC: 98,69 % (@ 254 nm) (Rt; 4,604; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,50 (bs, 1H), 8,25 (m, 1H),7,65 (m,2H), 7,37 - 7,35 (m, 3H), 5,87 (s, 1H), 4,59 (m, 2H), 4,29 (d, 2H), 4,12 (s, 2H), 3,82 (m, 4H), 3,28 (m, 4H), 3,17 - 3,09 (m, 2H), 2,32 - 2,28 (m, 4H), 2,22 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,57 (m, 4H), 0,86 (t, 3H).
[01269]Exemplo 132: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-thiopiran-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’- bifenil]-3-carboxam ida
Figure img0216
[01270]Etapa 1: Síntese de 5-bromo-2-metil-3-((tetra-hidro-2H-thiopiran-4- il)amino) benzoato de metila
[01271]A uma solução agitada de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metila (2,5 g, 10,24 mmols) e di-hidro-2H-thiopiran-4(3H)-ona (1,42 g, 12,29 mmols) em dicloroetano (50 mL), ácido acético (3,6 mL, 61,47 mmols) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 10 min. A mistura de reação foi esfriada a 0 °C e triacetoxiboro-hidreto de sódio (6,5 g, 30,73 mmols) foi adicionado e agitada na temperatura ambiente durante a noite. A mistura de reação foi neutralizada com NaHCO3 sat. e o composto foi extraído em DCM, seco em Na2SO4, concentrado sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia em coluna do produto bruto forneceu 5-bromo-2-metil-3-((tetra-hidro-2H-thiopiran-4-il)amino) benzoato de metila (2,5 g, 71,0 %).
[01272]Etapa 2: Síntese de 5-bromo-3-(etil(tetra-hidro-2H-thiopiran-4-il)amino)- 2-metilbenzoato de metila
[01273]A uma solução agitada de 5-bromo-2-metil-3-((tetra-hidro-2H-thiopiran- 4-il)amino) benzoato de metila (2,5 g, 5,83 mmols) e acetaldeído (513 mg, 11,66 mmols) em dicloroetano (50 mL), ácido acético (2,0 ml, 34,9 mmols) foi adicionado e reação foi agitada na temperatura ambiente durante 20 minutos. A mistura de reação foi esfriada a 0 °C e triacetoxiboro-hidreto de sódio (3,7 g, 17,49 mmols) foi adicionado e agitado na temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi neutralizada com NaHCO3 sat. e o composto foi extraído em DCM, seco em Na2SO4, concentrado sob pressão reduzida. O material bruto foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer 5-bromo-3-(etil(tetra-hidro-2H- thiopiran-4-il)amino)-2-metilbenzoato de metila (2,0 g, 74,0 %).
[01274]Etapa 3: Síntese de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)amino)-2-metilbenzamida
[01275]Uma mistura de 5-bromo-3-(etil(tetra-hidro-2H-thiopiran-4-il)amino)-2- metilbenzoato de metila (2,0 g, 5,39 mols) e NaOH (0,323 g, 8,08 mols) em 3 ml de etanol:água (2: 1) foi aquecida a 70 °C durante 2 h. A mistura de reação foi concentrada à secura e o bruto foi particionado entre água e DCM, a camada orgânica foi seca em Na2SO4; concentrada sob pressão reduzida para fornecer 1,8 g de ácido.
[01276]O ácido bruto (1,8 g, 5,04 mmols), 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin- 2(1H)- ona (1,53 mg, 10,08 mmols) e PyBOP (3,9 g, 7,56 mmols) mistura foi agitado em 3 ml de DMSO na temperatura ambiente durante a noite. A mistura de reação foi diluída com água e composto foi extraído em DCM. A camada orgânica foi seca em Na2SO4, concentrada sob pressão reduzida e purificada por cromatografia em coluna em gel de sílica (100 a 200 malhas) (eluída a MeOH a 4 % em DCM) para fornecer 5- bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H- thiopiran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (1,5 g, 60,7 %).
[01277]Etapa 4: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropirin-3-il)metil)-5- (etil(tetra-hidro-2H-thiopiran-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamida
[01278]Uma solução de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-thiopiran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (800 mg, 1,629 mmol), 4-(4-(4,4,5, 5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzil)morfolina (740 mg, 2,443 mmols), carbonato de sódio (621 mg, 5,86 mmols) em 20 ml de dioxano foi desgaseificado com argônio durante 20 min, Pd(PPh3) (188 mg, 0,16 mmol) foi adicionado à mistura e aquecida a 100 °C durante a noite. A reação foi esfriada até a temperatura ambiente e diluída com água, o composto foi extraído em MeOH a 10 % em DCM, seco em Na2SO4, concentrado e o bruto foi purificado por cromatografia em gel de sílica (100 a 200) para obter o composto do título (700 mg, 73,0 %).
[01279]LCMS: 589,25 (M + 1)+; HPLC: 96,75 % (@ 254 nm) (Rt; 4,869; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; 0,05 %> TFA em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5 % B a 95 % B em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 -12 min B a 5 %); RMN de 1H (D2O, 400 MHz) δ 7,78 - 7,89 (m, 4H), 7,64 - 7,66 (m, 2H), 6,33 (s, 1H), 4,52 (s, 2H), 4,45 (s, 2H), 4,13 (d, J = 13,2 Hz, 2H), 3,77 - 3,89 (m, 5H), 3,49 (d, J = 12,0 Hz, 2H), 3,30 - 3,33 (m, 2H), 2,73 - 2,82 (m, 5H), 2,44, 2,38, 2,30 (3s, 9H), 1,89 (m, 2H), 1,06 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
[01280]Exemplo 133: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(etil(1-oxidotetra-hidro-2H-thiopiran-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)- [1,1’-bifenil]-3-carboxamida
Figure img0217
[01281]A uma solução esfriada de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-thiopiran-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida (200 mg, 0,34 mmol) em 2 ml de DCM, m-CPBA (70 mg, 0,41 mmol) foi adicionado a 0 °C e agitado na temperatura ambiente durante 2 h (monitorado por TLC). A reação foi resfriada com NaHCO3 sat., o composto foi extraído em DCM, seco em Na2SO4, concentrado sob pressão reduzida e purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica (100 - 200) para obter o composto do título (60 mg, 29,3 %).
[01282]LCMS: 605,25(M + 1)+; HPLC: 44,06 % & 54,42 % (@ 254 nm) (Rt; 4,092&4,448; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 -12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,18 (t, 1H), 7,59 - 7,57 (m,2H), 7,39 - 7,37 (m, 3H), 7,23- 7,21 (m, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,29 (d, 2H,J = 4 Hz),3,58 (m,3H), 3,48(m, 3H), 3,18 - 2,86 (m,5H), 2,67 - 2,59 (m,4H), 2,37 - 2,33 (m,4H), 2,25 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,77 (m, 2H),0,85 (t,3H).
[01283]Exemplo 134: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5- (etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-3’,4-dimetil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil] 3- carboxamide
Figure img0218
[01284]Composto 134 foi preparado com o método similar àquele descrito no Exemplo 131. Dados Analíticos: LCMS: 587,4 (M + 1)+; HPLC: 98,76 % (@ 254 nm) (Rt; 4,11; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 -12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (bs, 1H), 8,17 (bs, 1H), 7,41 -7,20 (m, 5H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, J = 4 Hz, 2H), 3,82 (d, J = 10 Hz, 2H), 3,55 (m, 4H), 3,44 (bs, 2H), 3,27 - 3,22 (m, 2H), 3,09 - 3,01 (m, 3H), 2,39 (m, 7H), 2,23 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,67 - 1,51 (m, 4H), 0,83 (t, J = 6,8 Hz, 3H).
[01285]Exemplo 135: 4-óxido de 4-((3’-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)carbamoil)-5’-(etil(1-oxidotetra-hidro-2H-thiopiran-4-il)amino)-4’-metil-[1,1’- bifenil]-4-il)metil)morfolina
Figure img0219
[01286]Durante a purificação por HPLC prep. mencionada acima, 4-óxido de 4- ((3’-(((4,6-Dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-5’-(etil(1-oxidotetra- hidro-2H-thiopiran-4-il)amino)-4’-metil-[1,1’-bifenil]-4-il)metil)morfolina também foi isolado.
[01287]LCMS: 621,40 (M + 1)+; HPLC: 98,69 % (@ 254 nm) (Rt; 4,157; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 -12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMS0-d6, 400 MHz) δ 12,18 (s, 1H), 11,45 (s, 1H), 8,20 (t, 1H), 7,79 (d, 2H, J = 6,8 Hz), 7,62 (d, 2H, J = 6,8 Hz), 7,45 (s, 1H), 7,27 (s, 2H), 5,86 (s, 1H), 4,89 (s, 2H), 4,30 (d, 2H, J = 4 Hz), 4,00 - 3,80 (m, 7H), 3,19 (m, 2H), 3,00 - 2,85 (m, 4H), 2,70 - 2,60 (m, 2H), 2,30 (bs, 2H), 2,26 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,75 (m, 2H), 0,87 (t, 3H, J = 6 Hz).
[01288]Exemplo 136: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-((1,1-dioxidotetra-hidro-2H-thiopiran-4-il)(etil)amino)-4-metil-4’- (morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida
Figure img0220
[01289]A uma solução esfriada do composto N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-thiopiran-4-il)amino)-4-metil-4’- (morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida (200 mg, 0,34 mmol) em 2 ml de DCM, m- CPBA (117 mg, 0,68 mmol) foi adicionado a 0 °C e agitado na temperatura ambiente durante 2 horas (monitorado por TLC). A reação foi resfriada com NaHCO3 saturado e extraída com DCM, seca em Na2SO4 e concentrada sob pressão reduzida. Depois da cromatografia em coluna, o composto do título foi obtido como o sal de TFA depois da purificação adicional por HPLC prep. (80 mg, 38,1 %).
[01290]LCMS: 621,45 (M + 1)+; HPLC: 99,93 % (@ 254 nm) (Rt; 4,522; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 -12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 12,22 (s, 1H), 11,45 (s, 1H), 8,20 (t, 1H), 7,78 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,61 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,43 (s, 1H), 7,28 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,89 (s, 2H), 4,29 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 4,00 - 3,80 (m, 7H), 3,32 (m, 2H), 3,04 (m, 4H), 2,65 - 2,55 (m, 2H), 2,26 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,17 (m, 2H), 2,10 (s, 3H), 1,78 (m, 2H), 0,83 (t, 3H, J = 6,4&7,2 Hz).
[01291]Exemplo 137: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4,4’-dimetil-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida
Figure img0221
[01292]A uma solução agitada de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4,4’-dimetil-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida (200 mg, 0,35 mmol) em diclorometano na temperatura ambiente, m-CPBA (60 mg, 0,35 mmol) foi adicionado e a agitação continuada durante a noite na temperatura ambiente. Em conclusão, a reação foi resfriada por adição de solução de bicarbonato de sódio aquoso saturado e extraída com MeOH/DCM a 10 % (3 vezes). A camada orgânica combinada foi seca em sulfato de sódio. A remoção do solvente sob pressão reduzida seguido por lavagem com solvente forneceu o composto do título (120 mg, 58 %). LCMS: 589,35 (M)+; HPLC: 95,56 % (@ 254 nm) (Rt; 4,143; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 -12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,5 (bs, 1H), 8,22 (t, 1H), 7,66 - 7,60 (m, 4H), 7,42 (s, 1H), 7,21 (s, 1H,), 5,85 (s, 1H), 4,34 - 4,28 (m, 4H,), 4,12 - 4,07 (m, 2H), 3,83 - 3,81 (m, 2H), 3,62 - 3,60 (m, 2H), 3,42 - 3,39 (m, 2H), 3,33 - 3,22 (m, 2H), 3,16 - 3,08 (m, 3H), 2,65 - 2,62 (m, 2H), 2,25 - 2,10 (m, 9H), 1,67- 1,51 (m, 4H),0,83(t,3H, J = 6,8Hz).
[01293]Exemplo 138: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-5-((tetra-hidro-2H-piran-4-il)(2,2,2- trifluoroetil)amino)-[1,T-bifenil]-3-carboxamida
Figure img0222
[01294]Etapa 1: Síntese de ácido 5-bromo-2-metil-3-nitro benzoico
[01295]Uma solução de ácido 5-bromo-2-metilbenzoico (5,0 g, 23 mmols) em H2SO4 concentrado (27 ml, 512 mmols) foi esfriada a 5 °C em um acetona/banho de gelo. Uma mistura de ácido nítrico concentrado (1,9 ml, 30 mmols) e H2SO4 concentrado (2,8 ml, 52 mmols) foi adicionado às gotas à mistura de reação entre -5 a 0 °C durante 15 minutos. A mistura de reação amarelada foi agitada entre -5 a 0 °C durante 2 horas e um precipitado amarelo foi formado. A mistura de reação foi vertida em gelo (150 g) e o precipitado depois foi coletado por filtração. O precipitado foi seco ao ar para fornecer o composto do título (5,5 g, 52 %) como um sólido claro amarelado. LC-MS 57 %, 1,82 min (método LC-MS de 3,5 minutos), nenhuma ionização; RMN de 1H (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8,29 (s, 1H) 8,13 (d, J = 1,58 Hz, 1H) 2,43 (s, 3H).
[01296]Etapa 2: Síntese de 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoato de metila
[01297]A uma solução de ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico (5,5 g, 21 mmols) em DMF (42 ml) sob nitrogênio, foi adicionado Na2CO3 (3,4 g, 32 mmols) seguido por iodometano (2,0 ml, 32 mmols). A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura foi diluída com água desionizada (150 ml) e extraída com EtOAc (4 x 50 ml). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com NaHCO3 saturado (aq) (2 x 50 ml), secas em MgSO4, filtradas e concentradas a vácuo para fornecer o composto do título (6,3 g, 61 %) como um óleo amarelado. LC-MS 57 %, 2,20 min (método LC-MS de 3,5 minutos), nenhuma ionização; RMN de 1H (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 7,38 (d, J = 2,05 Hz, 1H) 7,23 (d, J = 2,05 Hz, 1H) 3,20 (s, 3H) 1,82 (s, 3H).
[01298]Etapa 3: Síntese de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metila
[01299]A uma solução de 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoato de metila (6,3 g, 21 mmols) em metanol (150 ml) foi adicionado cloreto de amônio (11,0 g, 209 mmols) seguido por água desionizada (75 ml). A mistura foi aquecida a 70 °C antes da adição de ferro (7,0 g, 125 mmols). A mistura de reação foi agitada a 70 °C durante 2 horas, antes de ser deixada esfriar até a temperatura ambiente e filtrada através de Kieselgel. A almofada do filtro foi lavada com MeOH (150 ml) e o filtrado concentrado a vácuo. O resíduo foi dissolvido em NaHCO3 saturado (aq) (50 ml) e EtOAc (150 ml). As fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com NaHCO3 saturado (aq) (3 x 50 ml), secas em MgSO4, filtradas e concentradas a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia instantânea em coluna (50g sílica, cartucho Isolute, 5 - 20 % EtOAc:Heptanos) para fornecer o composto do título (3,0 g, 51 %) como um óleo amarelo claro espesso. LC-MS 87 %, 1,89 min (método LC-MS de 3,5 minutos), m/z = 243,9, 244,9, 245,9, 246,9; RMN de 1H (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 7,34 (d, J = 1,89 Hz, 1H) 6,95 (d, J = 1,89 Hz, 1H) 3,88 (s, 3H) 3,80 (br. s., 2H) 2,29 (s, 3H).
[01300]Etapa 4: Síntese de 5-bromo-2-metil-3-((oxan-4-il)amino]benzoato de metila
[01301]A uma solução de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metila (3,0 g, 12 mmols) em 1,2-Dicloroetano (48 ml) sob nitrogênio, foi adicionado oxan-4-ona (2,3 ml, 25 mmols) seguido por ácido acético (4,2 ml, 74 mmols). A mistura de reação foi agitada durante 5 minutos antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (7,8 g, 37 mmols). Depois da agitação durante 64 horas, água desionizada (100 ml) foi adicionada e a mistura foi neutralizada com NaHCO3 sólido. As fases foram separadas e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (4 x 50 ml). Os extratos orgânicos combinados foram secos em MgSO4, filtrados e concentrados a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia instantânea em coluna (sílica 50 g, cartucho Isolute, 10 - 30 % EtOAc:Heptanos) para fornecer o composto do título (3,5 g 85 %) como um sólido branco. LC-MS 99,8 %, 2,18 min (método LC-MS de 3,5 minutos), m/z = 327,9, 328,9, 329,9, 330,9; RMN de 1H (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 7,24 (d, J = 1,73 Hz, 1H) 6,85 (d, J = 1,58 Hz, 1H) 4,03 (dt, J = 11,82, 3,31 Hz, 2H) 3,88 (s, 3H) 3,66 (br.s., 1H) 3,56 (td, J = 11,55, 1,97 Hz, 2H) 3,47 - 3,55 (m, 1H) 2,24 (s, 3H) 2,06 (d, J = 13,56 Hz, 2H) 1,47 - 1,60 (m, 2H).
[01302]Etapa 5: Síntese de 5-bromo-2-metil-3-[(oxan-4-il)(2,2,2- trifluoroetil)amino]benzoato de metila
[01303]Em um RBF de 2 pescoços de 100 ml, contendo 5-bromo-2-metil-3- [(oxan-4-il)amino]benzoato de metila (500 mg, 1,5 mmol) e TFA (15 ml), foi adicionado tetra-hidroborato de sódio (1,0 g, 26 mmols) às porções durante 5 minutos. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 2 horas e depois aquecida a 50 °C durante 3 horas e tratada com uma alíquota adicional de NaBH4 (300 mg) durante 25 minutos. A mistura de reação depois foi aquecida a 60 °C durante 2 horas e agitada na temperatura ambiente durante 17 horas. A mistura de reação foi tratada com TFA (5 ml) e NaBH4 (200 mg) e aquecida novamente a 60 °C durante 3,5 horas. Uma alíquota adicional de NaBH4 (200 mg) foi adicionada durante 15 minutos, junto com TFA (5 ml) e aquecimento continuando durante um adicional de 3 horas, antes de ser deixada em repouso na temperatura ambiente durante a noite. A mistura de reação foi vertida em gelo (75 ml) e agitada até que o gelo foi fundido. A mistura de reação depois foi basificada pela adição de 6M NaOH (aq) (40 ml) e re-ajustado ao pH 7 usando 1M HCl (aq) (40 ml). A suspensão branca resultante foi coletada por filtração, o sólido lavado com água (20 ml) e seco à vacuo a 40 °C durante 3 horas para fornecer o composto do título (577 mg, 91 %) como um sólido branco. LC-MS 98,2 %, 2,42 min (método LC-MS de 3,5 minutos), m/z = 409,90, 410,9, 411,90, 412,9; RMN de 1H (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 7,80 (d, J = 1,73 Hz, 1H) 7,41 (d, J = 1,73 Hz, 1H) 4,01 (dd, J = 11,1, 4,10 Hz, 2H) 3,91 (s, 3H) 3,64 (d, J = 5,20 Hz, 2H) 3,32 (t, J = 11,82 Hz, 2H) 2,99 (tt, J = 11,43, 3,63 Hz, 1H) 2,48 (s, 3H) 1,80 (dd, J = 12,53, 1,50 Hz, 2H) 1,54 - 1,62 (m, 2H).
[01304]Etapa 6: Síntese de ácido 5-bromo-2-metil-3-[(oxan-4-il)(2,2,2- trifluoroetil)amino]benzoico
[01305]A uma solução agitada de 5-bromo-2-metil-3-[(oxan-4-il)(2,2,2- trifluoroetil)amino]benzoato de metila (572 mg, 1,4 mmol) em uma mistura de THF (14 ml) e MeOH (2,1 ml), foi adicionado 4M NaOH (aq) (13,9 ml). A mistura de reação foi agitada a 50 °C durante 5,5 horas e depois agitada na temperatura ambiente durante 17 horas. THF foi removido através de concentração à vacuo e o resíduo aquoso foi acidificado ao pH 4 com 6M HCl (aq) (9,5 ml). A suspensão resultante foi deixada em repouso na temperatura ambiente durante 20 minutos antes de coletar o sólido por filtração. A torta sólida foi lavada com água (20 ml) e seca sob alto vácuo durante 2 horas para fornecer o composto do título (507 mg, 90 %) como um sólido branco. LC- MS 98 %, 2,04 min (método LC-MS de 3,5 minutos), m/z = 395,9, 396,9, 397,9, 398,9; RMN de 1H (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 7,97 (d, J = 1,73 Hz, 1H) 7,48 (d, J = 1,73 Hz, 1H) 4,02 (dd, J = 11,35, 3,94 Hz, 2H) 3,65 (br. s, 2H) 3,33 (t, J = 11,59 Hz, 2H) 3,00 (tt, J = 11,49, 3,80 Hz, 1H) 2,55 (s, 3H) 1,82 (d, J = 11,98 Hz, 2H) 1,55 - 1,69 (m, 2H). OH não visível.
[01306]Etapa 7: Síntese de 5-bromo-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil]-2-metil-3-[(oxan-4-il)(2,2,2-trifluoroetil)amino]benzamida
[01307]Uma solução agitada de 5-bromo-2-metil-3-[(oxan-4-il)(2,2,2- trifluoroetil)amino]benzoato de metila (250 mg, 0,63 mmol) em DMF seca (3,0 ml) a 0 °C sob um balão de nitrogênio, foi tratada com HATU (288 mg, 0,76 mmol) e DIPEA (220 μL, 1,3 mmol) às gotas. A solução resultante foi agitada durante 5 minutos e depois tratada com 3-(aminometil)-4,6-dimetil-1,2-di-hidropiridin-2-ona (89 %, 119 mg, 0,69 mmol). A suspensão resultante foi agitada a 0 °C durante 20 minutos e depois agitada na temperatura ambiente durante 16,5 horas. A mistura de reação foi tratada com 3-(aminometil)-4,6-dimetil-1,2-di-hidropiridin-2-ona (30 mg). A agitação foi continuada durante um adicional de 23 horas e a mistura de reação depois foi particionada entre água (30 ml) e CH2CI2 (20 ml). As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com CH2Cl2 (3 x 20 ml). Os orgânicos combinados foram lavados com uma solução saturada de NaHCO3 (aq) (50 ml), água (60 ml), salmoura (2 x 40 ml), secos em MgSO4, filtrados e concentrados à vacuo. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia em coluna instantânea (cartucho de 10 g SNAP, Isolera, 0 a 10 % MeOH/CH2Cl2) e triturado a partir de éter (10 ml) com sonicação. O precipitado resultante foi coletado por filtração e seco à vacuo para fornecer o composto do título (249 mg, 74 %) como um sólido branco. LC- MS 100 %, 4,08 min (método LC-MS de 7 minutos), m/z = 530,0, 531,0, 532,0, 533,0; RMN de 1H (500 MHz, Acetona) δ 10,67 (s, 1H), 7,55 (d, J = 1,8 Hz, 2H), 7,27 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 5,90 (s, 1H), 4,40 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 3,90 (dd, J = 11,2, 4,6 Hz, 4H), 3,28 (t, J = 11,6 Hz,2H), 3,07 - 2,97 (m, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,29 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 1,76 (dd, J = 12,3, 1,6 Hz, 2H), 1,61 (qd, J = 12,0, 4,5 Hz, 2H).
[01308]Etapa 8: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 4-metil-4’-(morfolinometil)-5-((tetra-hidro-2H-piran-4-il)(2,2,2-trifluoroetil)amino)-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida
[01309]Em um RBF de 2 pescoços, 5-bromo-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil]-2-metil-3-[(oxan-4-il)(2,2,2-trifluoroetil)amino]benzamida (200 mg, 0,38 mmol), 4-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzil]morfolina (126 mg, 0,41 mmol) em 1,4-dioxano (3,0 ml) foi tratada com uma solução contendo Na2CO3 (140 mg, 1,3 mmol) em água (1,0 ml). Nitrogênio foi borbulhado através da mistura usando uma agulha longa durante 5 minutos antes da adição de paládio- trifenilfosfina (1:4) (44 mg, 0,04 mmol). Nitrogênio foi borbulhado através da suspensão amarela durante um adicional de 5 minutos antes de aquecer a mistura de reação a 100 °C durante 5,5 horas. A mistura de reação foi diluída com água (10 ml) e MeOH a 10 % em CH2Cl2 (10 ml). As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com MeOH a 10 % em CH2Cl2 (3 x 15 ml). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (40 ml), secos em MgSO4, filtrados e concentrados à vacuo. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia em coluna (cartucho de 10 g SNAP, Isolera, 0 a 4 % MeOH:CH2Cl2) para fornecer o composto do título (193 mg, 82 %) como um pó-branco amarelado. LC-MS 100 %, 3,34 min (método LC-MS de 7 minutos), m/z = 627,5; RMN de 1H (500 MHz, Acetona) δ 10,76 (s, 1H), 7,65 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,60 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,57 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,39 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 5,91 (s, 1H),4,44 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 3,97 (s, 2H), 3,90 (dd, J = 11,4, 4,1 Hz, 2H), 3,61 (t, J = 4,6 Hz, 4H), 3,50 (s, 2H), 3,29 (t, J = 11,5 Hz, 2H), 3,06 (tt, J = 11,4, 3,8 Hz, 1H), 2,39 (d, J = 5,0 Hz, 7H), 2,34 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 1,82 (dd, J = 12,3, 1,7 Hz, 2H), 1,70 - 1,56 (m, 2H).
[01310]Exemplo 139: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-4-etil-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamide
Figure img0223
[01311]Etapa 1: Síntese de 5-cloro-2-[2-(trimetilsilil)etinil]benzoato de metila
[01312]A uma solução de 2-bromo-5-clorobenzoato de metila (14,8 g, 59 mmols) em TEA (124 ml, 889,82 mmols) foi adicionado iodeto de cobre(I) (338 mg, 1,78 mmol) e trifenilfosfina (778 mg, 2,97 mmols) na temperatura ambiente e sob nitrogênio. Esta mistura apresentou nitrogênio borbulhado através da mesma durante 10 minutos antes da adição de etinil(trimetil)silano (12,45 ml, 89 mmols) e Pd(OAc)2 (266 mg, 1,19 mmol). A mistura de reação foi agitada a 50 °C durante 20 horas antes de ser concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em água desionizada (50 ml) e EtOAc (50 ml) e filtrado através de Celite. A torta do filtro foi lavada com EtOAc (50 ml) antes que as fases sejam separadas e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 50 ml). Os extratos orgânicos combinados foram secos em MgSO4, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por FCC (sílica 10 g, cartucho Isolute, gradiente de eluentes; Heptano:EtOAc 99:1 a Heptano:EtOAc 85:15) para fornecer 16,2 g (102,4 %) de 5-cloro-2-[2- (trimetiIsilil)etinil]benzoato de metila como um óleo laranja que solidificou após repouso. A amostra continha heptano. LC-MS 91 %, 2,57 min (método LC-MS de 3 minutos), m/z = 267,4/268,9, RMN de 1H (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 7,89 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,51 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,41 (dd, J = 8,3, 2,3 Hz, 1H), 3,92 (s, 3H), 0,27 (s, 9H).
[01313]Etapa 2: Síntese de 5-cloro-2-etinilbenzoato de metila
[01314]A uma solução de 5-cloro-2-[2-(trimetilsilil)etinil]benzoato de metila (10 g, 37,5 mmols) em Metanol (150 ml) foi adicionado K2CO3 (10,36 g, 75 mmols) na temperatura ambiente e em ar. A mistura de reação foi agitada durante 1 hora antes de ser concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em água desionizada (50 ml) e EtOAc (50 ml). As fases foram separadas e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 50 ml). Os extratos orgânicos combinados foram secos em MgSO4, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por FCC (sílica 50 g, cartucho Isolute, gradiente de eluentes; Heptano:EtOAc 95:5 a Heptano:EtOAc 9:1) para fornecer 5,75 g (55,2 %) de 5-cloro-2- etinilbenzoato de metila como um óleo laranja que solidificou sob repouso. Este material continha 30 % de éster etílico que foi adequado para o uso sem qualquer outra purificação. LC-MS 38 %, 1,98 min (método LC-MS de 3 minutos), m/z = 195,0/196,9, RMN de 1H (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 7,93 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,45 (dd, J = 8,3, 2,3 Hz, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,43 (s, 1H).
[01315]Etapa 3: Síntese de 5-cloro-2-etilbenzoato de metila
[01316]A uma solução de 5-cloro-2-etinilbenzoato de metila (5,34 g, 27,44 mmols) em Acetato de etila (135 ml) foi adicionado Pd/C (10 %) (50 % água, 2,92 g, 1,37 mmol). A mistura de reação foi agitada sob uma atmosfera de hidrogênio na temperatura ambiente durante 3 horas. LCMS indicou que a reação não chegou à conclusão e a mistura foi filtrada através de Celite. A torta do filtro lavada com EtOAc (50 ml) e o filtrada foi concentrada sob pressão reduzida para fornecer 5,12 g (93,9 %) de 5-cloro-2-etilbenzoato de metila como um óleo marrom que foi adequado para o uso sem qualquer outra purificação. LC-MS 56 %, 2,21 min (método LC-MS de 3 minutos), m/z = 198,9/200,9, RMN de 1H (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 7,84 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,39 (dd, J = 8,3, 2,3 Hz, 1H), 7,21 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 3,90 (s, 3H), 2,94 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 1,21 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
[01317]Etapa 4: Síntese de 5-cloro-2-etil-3-nitrobenzoato de metila
[01318]Uma solução de 5-cloro-2-etilbenzoato de metila (5,12 g, 25,77 mmols) em H2SO4 concentrado (31 ml, 587 mmols) foi esfriado a -5 °C em um acetona/banho de gelo em ar. Uma mistura de ácido nítrico concentrado (2,15 ml, 33,5 1 mmols) e H2SO4 concentrado (2 ml, 37,52 mmols) foi adicionado às gotas à mistura de reação entre -5 a 0 °C durante 15 minutos. A mistura de reação amarela clara foi agitada entre -5 a 0 °C durante 1 hora antes de ser vertida em gelo (500 ml) e esta foi extraída com EtOAc (3 x 100 ml). As fase orgânicas combinadas foram lavadas com água desionizada (100 ml) e depois salmoura (100 ml). A fase orgânica foi seca em MgSO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. LCMS e RMN mostrou -30 % de hidrólise do éster. O material bruto foi dissolvido em Metanol (30 ml) e esfriado a 0 °C sob nitrogênio onde SOCl2 (2,25 ml, 30,93 mmols) foi adicionado lentamente. A mistura de reação depois foi aquecida em refluxo durante 6 horas antes de ser concentrada sob pressão reduzida para fornecer 6,18 g (98,4 %) de 5-cloro-2-etil-3-nitrobenzoato de metila como um óleo laranja. O produto continha 1:1 mistura de 3-nitro:6-nitro isômeros junto com algum éster etílico que foi adequado para o uso sem qualquer outra purificação.
[01319]Etapa 5: Síntese de 3-amino-5-cloro-2-etilbenzoato de metila
[01320]A uma solução de 5-cloro-2-etil-3-nitrobenzoato de metila (6,18 g, 25,36 mmols) em Metanol (250 ml) na temperatura ambiente foi adicionado cloreto de amônio (13,31 g, 253,65 mmols) seguido por Água desionizada (125 ml). A mistura foi aquecida a 70 °C em ar antes da adição de ferro (8,5 g, 152,19 mmols). A reação apresentou uma cor escura durante 2,5 horas e foi agitada a 70 °C. Esta mistura foi deixada esfriar até a temperatura ambiente e foi filtrada através de Kieselgel. A almofada do filtro foi lavada com MeOH (250 ml) e o filtrado concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em saturado NaHCO3(aq) (50 ml) e EtOAc (150 ml). As fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com saturado NaHCO3(aq) (2 x 50 ml) antes de ser seca em MgSO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por FCC (sílica 50 g, cartucho Isolute, gradiente de eluentes; Heptano:EtOAc 95:5 a Heptano:EtOAc 75:25) para fornecer 2,42 g (22 %, 7 % de rendimentos corrigidos) de 3-amino-5-cloro-2-etilbenzoato de metila como um óleo amarelo. O produto contém ~25 % de éster etílico e ~15 % de produtos de 4-nitro possíveis. O material foi tomado através da etapa seguinte sem purificação adicional. LC-MS 31 %, 2,00 min (método LC-MS de 3 minutos), m/z = 295,0, RMN de 1H (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 7,17 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 6,79 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,86 - 3,81 (m, 2H), 2,74 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 1,20 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
[01321]Etapa 6: Síntese de 5-cloro-2-etil-3-[(oxan-4-il)amino]benzoato de metila
[01322]A uma solução de 3-amino-5-cloro-2-etilbenzoato de metila (1,5 g, 7,02 mmols) em 1,2-Dicloroetano (28 ml) na temperatura ambiente e sob nitrogênio foi adicionado oxan-4-ona (1,3 ml, 14,04 mmols) seguido por ácido acético (2,41 ml, 42,12 mmols). Esta solução foi agitada durante 5 minutos antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (4,46 g, 21,06 mmols) na temperatura ambiente. Depois da agitação durante 20 horas, água desionizada (28 ml) foi adicionada e a mistura foi neutralizada com NaHCO3 sólido. As fases foram separadas e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 28 ml). Os extratos orgânicos combinados foram secos em MgSO4, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por FCC (sílica 50 g, cartucho Isolute, gradiente de eluentes; Heptano:EtOAc 95:5 a Heptano:EtOAc 8:2) para fornecer 1,76 g (84 %. 50 % de rendimentos corrigidos) de 5-cloro-2-etil-3-[(oxan-4-il)amino]benzoato de metila como um sólido branco. O produto contém ~25 % de éster etílico. O material foi tomado através da etapa seguinte sem purificação adicional. LC-MS 60 %, 2,27 min (método LC-MS de 3 minutos), m/z = 298,0/300,0, RMN de 1H (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 7,07 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,71 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 4,01 (dt, J = 11,8, 3,4 Hz, 2H), 3,87 (s, 3H), 3,82 - 3,76 (m, 1H), 3,64 - 3,47 (m, 3H), 2,79 - 2,63 (m, 2H), 2,06 (d, J = 13,2 Hz, 2H), 1,55 - 1,46 (m, 2H), 1,1 8 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
[01323]Etapa 7: Síntese de ácido 5-cloro-2-etil-3-[etil(oxan-4-il)amino] benzoico
[01324]A uma solução de 5-cloro-2-etil-3-[(oxan-4-il)amino]benzoato de metila (350 mg, 1,18 mmol) em DCE (10 ml) na temperatura ambiente e sob nitrogênio foi adicionado acetaldeído (0,66 ml, 11,75 mmols) seguido por ácido acético (0,4 ml, 7,05 mmols). Esta solução foi agitada durante 5 minutos antes da adição de triacetoxiboro- hidreto de sódio (2,49 g, 11,75 mmols) na temperatura ambiente. Depois da agitação durante um adicional de 23 h, acetaldeído (0,66 ml, 11,75 mmols) foi adicionado, seguido por triacetoxiboro-hidreto de sódio (2,49 g, 11,75 mmols). Depois da agitação durante um adicional de 3 horas, água desionizada (15 ml) foi adicionada e a mistura foi neutralizada com sólido NaHCO3. As fases foram separadas e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 1 5 ml). Os extratos orgânicos combinados foram secos em MgSO4, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por FCC (sílica 10 g, cartucho Isolute, gradiente de eluentes; Heptano:EtOAc 99:1 a Heptano:EtOAc 85:15) para fornecer o composto do título (317 mg) como uma mistura 2:1 de ésteres metílicos e etílicos que foram usados no estágio seguinte.
[01325]À mistura de ésteres foi adicionado THF (10ml) e 4M NaOH (9,7 ml, 38,9mmols) e a reação foi agitada a 50 °C durante 27 horas, em seguida, MeOH (5 ml) foi adicionado à mistura de reação e esta foi agitada durante um adicional de 21 h a 50 °C. A mistura de reação foi acidificada ao pH 2 - 3 com 6M HCl e extraída com DCM (5 x 10 ml). Os extratos orgânicos combinados foram secos em MgSO4, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para fornecer o composto do título como cristais laranjas (289 mg, 79 % em duas etapas). LC-MS 100 %, 2,09 min (método LC-MS de 3,5 minutos), m/z = 312,0/314,0, RMN de 1H (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,73 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 3,99 (d, J = 11,0 Hz, 2H), 3,38 - 3,29 (m, 2H), 3,20 - 3,03 (m, 4H), 3,02 - 2,91 (m, 1H), 1,78 -1,61 (m, 4H), 1,13 (t, J = 7,4 Hz, 3H), 0,91 (t, J = 7,0 Hz, 3H).
[01326]Etapa 8: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 4-etil-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamida
[01327]A uma solução de ácido 5-cloro-2-etil-3-[etil(oxan-4-il)amino]benzoico (191 mg, 0,61 mmol) em DMF (3 ml) a 0 °C foi adicionado HATU (280 mg, 0,74 mmol) seguido por DIPEA (213 μL, 1,26 mmol) e 3-(aminometil)-4,6-dimetil-1,2-di- hidropiridin-2-ona (89 %, 115 mg, 0,67 mmol). A reação foi agitada na temperatura ambiente durante 3 h depois de que a reação foi vertida em água desionizada (50 ml) e o sólido resultante foi filtrado e lavado com água. A fase aquosa foi lavada com DCM (3 x 50 ml), os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (30 m), secos com MgSO4, filtrado e evaporado para fornecer um óleo. O sólido e o óleo foram combinados e purificados usando uma coluna isolada de 10 g eluindo com MeOH a 0 % a 3 % em DCM e evaporados, seguido por purificação usando um Isolute 10 g eluindo com MeOH a 0 % a 3 % em EtOAc para fornecer o composto do título como um sólido branco amarelado (234 mg, 79 %). LC-MS 92 %, 1,78 min (método LC-MS de 3,5 minutos), m/z = 446,2/448. A uma solução agitada de 5- cloro-N-[(4,6-dimetil- 2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-2-etil-3-[etil(oxan-4-il)amino]benzamida (117 mg, 0,26 mmol) em uma mistura desgaseificada de diglima (4 ml) e MeOH (2 ml) que foi borbulhada com gás nitrogênio foi adicionado 2’-(diciclo-hexilfosfanil)-N,N- dimetilbifenil-2-amina (21 mg, 0,05 mmol), paládio diacetato (5,89 mg, 0,03 mmol), césio fluoreto (120 mg, 0,79 mmol) e 4-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)benzil]morfolina (119 mg, 0,39 mmol). A borbulhagem com nitrogênio continuou durante 10 min e depois a reação foi aquecida a 70 °C durante 16 h e 4-[4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzil]morfolina (119 mg, 0,39 mmol) foi adicionado e o aquecimento continuado durante 6 h. A reação depois foi esfriada até a temperatura ambiente e filtrada através de Keiselguhr, a torta sendo lavada com MeOH. Água destilada (20 ml) foi adicionada ao filtrado que depois foi extraído com EtOAc (3 x 50 ml), os orgânicos combinados foram em seguida, lavados com salmoura (2 x 50 ml), secos com MgSO4, filtrados e evaporados. O resíduo resultante foi purificado usando uma coluna Isolute de 25 g eluindo com um gradiente de MeOH a 0 % a 10 % em DCM para fornecer o composto do título como um sólido amarelo claro (32 mg, 21 %). LC-MS 99 %, 2,72 min (método LC-MS de 7 minutos), m/z = 294,3 (M + H/2), 1H NMR (500 MHz, Acetona-d6) δ 10,80 (s, 1H), 7,60 - 7,54 (m, 3H), 7,51 (s, 1H), 7,39 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 7,36 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 5,92 (s, 1H), 4,45 (d, J = 5,6 Hz, 2H), 3,88 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 3,66 - 3,56 (m, 4H), 3,51 (s, 2H), 3,29 (t, J = 11,2 Hz, 2H), 3,17 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 3,09 (t, J = 11,2 Hz, 1H), 2,98 (q, J = 7,4 Hz, 2H). 2,41 (s, 4H), 2,36 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 1,76 (d, J = 11,2 Hz, 2H), 1,65 - 1,56 (m, 2H), 1,08 (t, J = 7,4Hz, 3H), 0,91 (t, J = 7,0 Hz, 3H).
[01328]Exemplo 140: Síntese de 3’-ciano-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’- (morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida
Figure img0224
[01329]Etapa 1: Síntese de 5-bromo-2-(morfolinometil)benzonitrila
[01330]A uma solução agitada de 5-bromo-2-formilbenzonitrila (200 mg, 0,95 mmol) e morfolina (248 mg, 2,85 mmols) em dicloroetano (10 mL), ácido acético (342 mg, 5,7 mmols) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 30 minutos. Em seguida, triacetoxiboro-hidreto de sódio (604 mg, 2,85 mmols) foi adicionado à mistura de reação a 0 °C, deixado atingir a temperatura ambiente e a agitação continuada durante a noite. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com diclorometano, lavada com água, solução de bicarbonato de sódio saturada aquosa e seca em sulfato de sódio. A remoção do solvente sob pressão reduzida, seguido por purificação cromatográfica em coluna forneceu o composto desejado (150 mg, 56 %).
[01331]Etapa 2: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)benzamida
[01332]A uma mistura agitada de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (1,0 g, 2,1 mmols), bispinacolato de diboro (2,67 g, 10,5 mmols) e acetato de potássio (610 mg, 6,31 mmols) em dioxano (10 mL) foi purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, complexo de 1,1’-bis(difenilfosfino)ferroceno-paládio(II)dicloreto- diclorometano (85 mg, 0,10 mmol) foi adicionado e o argônio foi purgado novamente durante 15 min. A massa de reação foi aquecida a 80 °C durante 7 h. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 % (3 vezes). A camada orgânica combinada foi seca em sulfato de sódio. A remoção do solvente sob pressão reduzida, seguido por purificação cromatográfica em coluna forneceu o composto desejado (250 mg, 27 %).
[01333]Etapa 3: Síntese de 3’-ciano-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]- 3-carboxamida
[01334]A uma solução agitada de 5-bromo-2-(morfolinometil)benzonitrila (190 mg, 0,68 mmol) e N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro- 2H- piran-4-il)amino)-2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzamida (200 mg, 0,45 mmol) em dioxano (6 mL), solução de Na2CO3 2M aquosa (0,81 mL, 1,63 mmol) foi adicionada e a solução foi purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (52 mg, 0,04 mmol) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 15 min. A massa de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 % (3 vezes). A camada orgânica combinada foi seca em sulfato de sódio. A remoção do solvente sob pressão reduzida, seguido por purificação cromatográfica em coluna, forneceu o composto do título (16 mg, 6 %). LCMS: 598,20 (M + 1)+; HPLC: 89,15 % (@ 254 nm) (Rt; 4,039; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 -12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (bs, 1H), 8,20 (t, 1H), 8,15 (s, 1H), 7,94 (d, 1H, J = 6,8 Hz), 7,63 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,51 (s, 1H), 7,31 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,29 (m, 2H), 3,84 - 3,82 (m, 2H), 3,66 - 3,58 (m, 6H), 3,32 (m, 5H), 3,11 -3,03 (m, 4H), 2,25 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,65 - 1,51 (m, 4H), 0,82 (t, 3H, J = 6 Hz).
[01335]Exemplo 141: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(((1 r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamide
Figure img0225
[01336]Etapa 1: ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico
[01337]À solução agitada de ácido 2-metil-3-nitrobenzoico (100 g, 552,48 mmols) em cone. H2SO4 (400 mL), 1,3-dibromo-5,5-dimetil-2,4-imidazolidinodiona (87,98 g, 307,70 mmols) foi adicionado em uma maneira às porções na temperatura ambiente. A mistura de reação depois foi agitada na temperatura ambiente durante 5 h. A mistura de reação foi vertida em água gelada, o sólido precipitado coletado por filtração, lavado com água e seco sob vácuo para fornecer ácido 5-bromo-2-metil-3- nitrobenzoico desejado como sólido branco amarelado (140 g, 97,90 % de rendimento). RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,31 (s, 1H), 8,17 (s, 1H), 2,43 (s, 3H).
[01338]Etapa 2: 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoato de metila
[01339]A uma solução agitada de ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico (285 g, 1104,65 mmols) em DMF (2,8 L) foi adicionado carbonato de sódio (468 g, 4415,09 mmols) seguido por adição de iodeto de metila (626,63 g, 441 5 mmols) na temperatura ambiente. A mistura resultante de reação foi agitada a 60 °C durante 8 h. A mistura de reação depois foi filtrada para remover os sólidos colocados em suspensão que foram bem lavados com acetato de etila (3 x 1 L). Os filtrados combinados foram bem lavados com água (5 x 3 L) e a fase aquosa retro extraída com acetato de etila (3 x 1 L). Os extratos orgânicos combinados foram secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para fornecer 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoato de metila como um sólido branco amarelado (290 g, 97 % de rendimento). RMN de 1H (CDCl3, 400 MHz) δ 8,17 (s, 1H), 7,91 (s, 1H), 3,96 (s, 3H), 2,59 (s, 3H).
[01340]Etapa 3: 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metila
[01341]A uma solução agitada de 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoato de metila (290 g, 1058,39 mmols) em etanol (1,5 L) foi adicionado aquoso cloreto de amônio (283 g, 5290 mmols dissolvidos em 1,5 L água). A mistura resultante foi agitada e aquecida a 80 °C seguido por adição de pó de ferro (472 g, 8451 mmols) em porções a 80 °C. A mistura de reação resultante foi aquecida a 80 °C durante 12 h. A mistura de reação depois foi filtrada a quente através de Celite® e o leito de Celite® bem lavado com metanol (5 L) e depois com MeOH a 30 % em DCM (5 L). Os filtrados combinados foram concentrados a vácuo e o resíduo obtido foi diluído com bicarbonato aquoso (2 L) e extraídos com acetato de etila (3 x 5 L). As camadas orgânicas combinadas foram secas em anidro sulfato de sódio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metila como um sólido marrom (220 g, 89,41 % de rendimento).
[01342]Uma porção do produto (5 g) foi dissolvido em etanol quente (20 mL), o resíduo insolúvel separado por filtração e o líquido precursor concentrado para obter 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metila (3,5 g, 70 % de rendimento) com 93,81 % de pureza de HPLC como um sólido marrom claro. RMN de 1H (CDCl3, 400 MHz) δ 7,37 (s, 1H), 6,92 (s, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,80 (bs, 2H), 2,31 (s, 3H).
[01343]Etapa 4: 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo- hexil)amino)-2-metilbenzoato de metila
[01344]A uma solução agitada de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metila (5 g, 20,5 mmols) e terc-butil (4-oxociclo-hexil)carbamato (5,69 g, 26,7 mmols) em dicloroetano (50 mL), ácido acético (7,4 g, 123 mmols) foi adicionado e a reação foi agitada na temperatura ambiente durante 10 minutos. Triacetoxiboro-hidreto de sódio (13,1 g, 61,7 mmols) depois foi adicionado a 0 °C e reação foi agitada na temperatura ambiente durante 16 horas. A reação foi resfriada com bicarbonato de sódio aquoso, a fase orgânica separada e a fase aquosa extraída com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram secas em anidro sulfato de sódio e concentradas a vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica (tamanho de malha de 100 a 200) eluindo com 10 % de acetato de etila em hexano para fornecer 3,5 g do isômero mais polar (trans), 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoato de metila, como sólido (38,46 %). RMN de 1H (CDCl3, 400 MHz) δ 7,21 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 4,41 (bs, 1H), 3,85 (s, 3H), 3,60 (m, 1H), 3,45 (m, 1H), 3,20 (m, 1H), 2,22 (s, 3H), 2,15 (bs, 2H), 2,05 (bs, 2H), 1,45 (s, 9H), 1,30 (m, 4H).
[01345]Etapa 5: 5-bromo-3-(((l r,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)- (etil)amino)-2-metilbenzoato de metila
[01346]A uma solução agitada de 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((terc- butoxicarbonil)amino)-ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metilbenzoato de metila (55 g, 0,124 mol) e acetaldeído (11 g, 0,25 mol) em dicloroetano (550 mL), ácido acético (44,64 g, 0,744 mol) foi adicionado e a mistura de reação agitada na temperatura ambiente durante 10 minutos. Triacetoxiboro-hidreto de sódio (79 g, 0,372 mol) depois foi adicionado a 0 °C e a mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 16 horas. A reação foi resfriada com bicarbonato de sódio aquoso, a fase orgânica separada e a fase aquosa extraída com diclorometano. Os extratos combinados foram secos em anidro sulfato de sódio e concentrado à vacuo. O composto bruto foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica (tamanho de malha de 100 a 200) eluindo com 10 % de acetato de etila em hexano para fornecer 44 g de 5-bromo- 3-(((l r,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)-(etil)amino)-2-metilbenzoato de metila (75,2 %) como sólido. RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,55 (s, 1H), 7,45 (s, 1H), 6,65 (d, 1H), 3,80 (s, 3H), 3,15 (bs, 1H), 3,05 (q, 2H), 2,60 (m, 1H), 2,30 (s, 3H), 1,75 (m, 4H), 1,40 (m, 2H), 1,35 (s, 9H), 1,10 (m, 2H), 0,80 (t, 3H).
[01347]Etapa 6: ((l r,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(etil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila
[01348]NaOH aquoso (3,5 g, 0,08 mol em 10 mL H2O) foi adicionado a uma solução de 5-bromo-3-(((l r,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)-(etil)amino)- 2-metilbenzoato de metila (25 g, 0,053 mol) em EtOH (100 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. O etanol depois foi removido sob pressão reduzida e acidificado ao pH 8 com HCl diluído e ao pH 6 com ácido cítrico. A mistura foi extraída com 10 % de metanol em DCM (3 x 200 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas fornecendo o ácido respectivo (24,2 g, 99,0 %). RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 13,13 (s, 1H), 7,54 (s, 1H), 7,43 (s, 1H), 6,68 (d, 1H), 3,14 (bs, 1H), 3,03 (q, 2H), 2,56 (m, 1H), 2,33 (s, 3H), 1,80- 1,65 (m, 4H), 1,40 (m, 2H), 1,35 (s, 9H), 1,10 (m, 2H), 0,77 (t, 3H).
[01349]O ácido (24 g, 0,053 mol) foi dissolvido em DMSO (100 mL) e 3- (aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (16 g, 0,106 mol) e trietilamina (5,3 g, 0,053 mol) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 15 min antes de PyBop (41 g, 0,079 mmol) foi adicionado e a agitação depois foi continuada durante a noite na temperatura ambiente. A mistura de reação foi vertida em água gelada (1 L). O precipitado resultante foi coletado por filtração, bem lavado com água (2 x 1 L) e seco. O produto obtido foi purificado novamente através de lavagens com acetonitrila (3 x 200 mL) e DCM (100 mL) para fornecer ((l r,4r)-4-((5- bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2- metilfenil)(etil)amino)ciclo-hexil)-carbamato de terc-butil (24 g, 77 %). RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,47 (s, 1H), 8,24 (t, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,04 (s, 1H), 6,67 (d, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,24 (d, 2H), 3,13 (bs, 1H), 3,01 (q, 2H), 2,53 (m, 1H), 2,18 (s, 3H), 2,10 (s, 6H), 1,80 - 1,65 (m, 4H), 1,40 (m, 2H), 1,35 (s, 9H), 1,10 (m, 2H), 0,77 (t, 3H).
[01350]Etapa 7: ((1r,4r)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)carbamoil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-il)(etil)amino)ciclo- hexil)carbamato de terc-butila
[01351]A uma solução agitada de ((l r,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(etil)amino)ciclo-hexil)-carbamato de terc-butila (24 g, 0,041 mol) e 4-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)benzil)morfolina (18 g, 0,061 mol) em mistura de dioxano/água (160 mL + 40 mL), Na2CO3 (15 g, 0,15 mol) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Pd(PPh3)4 (4,7 g, 0,041 mol) depois foi adicionado e a mistura de reação novamente purgada com argônio durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. A mistura de reação depois foi diluída com MeOH/DCM a 10 % (500 mL) e filtrada. O filtrado foi concentrado, diluído com água (500 mL) e extraído com MeOH a 10 % em DCM (3 x 500 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica (100 a 200 malhas) eluindo com MeOH a 7 % em DCM para fornecer ((1r,4r)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3- il)(etil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila (20 g, 71,43 %). RMN de 1H (DMSO- d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 8,20 (t, 1H), 7,56 (d, 2H), 7,36 (m, 3H), 7,17 (s, 1H), 6,66 (d, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H), 3,57 (bs, 4H), 3,48 (s, 2H), 3,20 - 3,05 (m, 3H), 2,62 (m, 1H), 2,36 (bs, 4H), 2,20 (s, 6H), 2,10 (s, 3H), 1,75 (m, 4H), 1,42 (m, 2H), 1,35 (s, 9H), 1,10 (m, 2H), 0,82 (t, 3H).
[01352]Etapa 8: 5-(((l r,4r)-4-aminociclo-hexil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2- oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamida
[01353]A uma solução agitada de ((1r,4r)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3- il)(etil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila (20 g, 0,03 mol) em DCM (200 mL) a 0 °C, TFA (75 mL) foi adicionado e a reação foi agitada durante 2 h na temperatura ambiente. A mistura de reação depois foi concentrada à secura e o resíduo basificado com solução de bicarbonato saturado aquoso (300 mL) ao pH 8. A mistura foi extraída com 20 % de metanol em DCM (4 x 200 m). Os extratos combinados foram secos em NA2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer 5-((1r,4r)-4- aminociclo-hexil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4- metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida (15,5 g, 91 %) que foi usado na reação seguinte. RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,18 (bs, 1H), 7,57 (d, 2H), 7,38 (m, 3H), 7,20 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,29 (d, 2H), 3,57 (bs, 4H), 3,48 (s, 2H), 3,31 (bs, 2H), 3,10 (m, 2H), 2,91 (m, 1H), 2,67 (m, 1H), 2,36 (bs, 4H), 2,21 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,90 (m, 2H), 1,83 (m, 2H), 1,45 (m, 2H), 1,23 (m, 2H), 0,83 (t, 3H).
[01354]Etapa 9: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(((1r,4r)-4- (dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamida
[01355]A uma solução agitada de 5-(((1r,4r)-4-aminociclo-hexil)(etil)amino)-N- ((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida (14 g, 0,023 mol) em diclorometano (150 mL) foi adicionada solução de formaldeído aquosa a 35 % (2,4g, 0,080 mol) a 0 °C. Depois da agitação durante 20 min, Na(OAc)3BH (12,2 g, 0,057 mol) foi adicionado e a agitação continuada durante 2h a 0 °C. Água (100 mL) depois foi adicionada à mistura de reação e a mistura extraída com 20 % de metanol em DCM (3 x 200 mL). Os extratos combinados foram secos em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna com alumina básica eluindo com MeOH a 6 a 7 % em DCM para fornecer o composto do título (10 g, 63,6 %). LCMS: 614,65 (M + 1)+; HPLC: 98,88 % (@ 210 - 370 nm) (Rt; 3,724; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H), 8,17 (t, 1H), 7,56 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,36 (m, 3H), 7,17 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,29 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,57 (bs, 4H), 3,48 (s, 2H), 3,09 (q, 2H), 2,66 (m, 1H), 2,36 (bs, 4H), 2,21 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,11 (s, 9H), 1,79 (m, 4H), 1,36 (m, 2H), 1,11 (m, 2H), 0,82 (t, 3H, J = 6,4&6,8 Hz).
[01356]Exemplo 142: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-((2-metoxietil)(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)- [1,1’-bifenil]-3-carboxamida
Figure img0226
[01357]Etapa 1: Síntese de 5-bromo-3-((2-metoxietil)(tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)-2-metilbenzoato de metila
[01358]A uma solução agitada de 5-bromo-2-metil-3-((tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)benzoato de metila (400 mg, 1,22 mmol) e 2-metoxiacetaldeído (1,3 mg, 17,56 mmols) em 7 ml de dicloroetano, ácido acético (0,42 mL, 7,33 mmols) foi adicionado e agitado na temperatura ambiente durante 20 minutos. A mistura de reação foi esfriada a 0 °C e triacetoxiboro-hidreto de sódio (777 mg, 3,66 mmols) foi adicionado e agitado na temperatura ambiente durante 2 h. A mistura de reação depois foi neutralizada com NaHCO3 sat. e extraída com DCM, e a camada orgânica foi seca em Na2SO4, concentrada sob pressão reduzida para fornecer 260 mg de produto bruto.
[01359]Etapa 2: Síntese de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-3-((2-metoxietil)(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida
[01360]Uma mistura de 5-bromo-3-((2-metoxietil)(tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)-2-metilbenzoato de metila (260 mg, 0,67 mmol) e NaOH (40 mg, 1,01 mmol) em 5 ml de etanol:água (2:1) foi aquecida a 70 °C durante 2 h. A mistura de reação foi concentrada à secura e o bruto dissolvido em água, o pH foi ajustado entre 5 a 6 através da adição lenta de HCl e o composto foi extraído em MeOH a 10 % em DCM. A camada orgânica foi seca em Na2SO4, concentrada sob pressão reduzida para fornecer 230 mg de ácido.
[01361]O ácido bruto (230 mg, 0,62 mmol), 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin- 2(1H)-ona (188 mg, 1,24 mmol), PyBOP (483 mg, 0,93 mmol) e trietil amina (0,17 ml, 1,238) a mistura foi agitada em 3 ml de DMSO na temperatura ambiente durante a noite. A mistura de reação foi diluída com água e o composto foi extraído em MeOH a 10 % em DCM, seca em Na2SO4, concentrada e o bruto foi purificado por cromatografia em gel de sílica (100 a 200) em coluna para fornecer 5-bromo-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-((2-metoxietil)(tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)-2-metilbenzamida (110 mg, 35 %).
[01362]Etapa 3: Síntese N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5- ((2- metoxietil)(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida
[01363]Uma solução de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-3-((2-metoxietil)(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (110 mg, 0,21 mmol), ácido (4-(morfolinometil)fenil)borônico (99 mg, 0,33 mmol), carbonato de sódio (83 mg, 0,78 mmol) em 4 ml de dioxano foi desgaseificado com argônio durante 20 min, Pd(PPh3) (25 mg, 0,02 mmol) foi adicionado à mistura e aquecido a 100 °C durante a noite. A reação foi esfriada até a temperatura ambiente e diluída com água, o composto foi extraído em MeOH a 10 % em DCM, seco em Na2SO4, concentrado e o produto bruto purificado por cromatografia em gel de sílica (100 a 200) para obter o composto do título (50 mg, 38 %).
[01364]LCMS: 603,45 (M + 1)+; HPLC: 99,60 % (@ 254 nm) (Rt; 4,492; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (bs, 1H), 8,20 (t, 1H), 7,58 (d, 2H, J = 7,2Hz), 7,47 (s, 1H), 7,37 (d, 2H, J = 7,2Hz), 7,23 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,29 (d, 2H, J = 3,6 Hz), 3,82 - 3,85 (m, 2H), 3,49 - 3,58 (m, 6H), 3,15- 3,3,23 (m, 9H), 2,98 (m, 1H), 2,36 (m, 4H), 2,23 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,51 - 1,68 (m, 4H).
[01365]Exemplo 143: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(etil- d5(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamide
Figure img0227
[01366]Etapa 1: Síntese de 5-bromo-3-(etil-d5 (tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)- 2-metilbenzoato de metila.
[01367]A uma solução agitada do composto 5-bromo-2-metil-3-((tetra-hidro-2H- piran-4-il)amino)benzoato de metila (1 g, 3,05 mmols) e triacetoxiborodeuterid de sódio (0,2 g, 4,76 mmols) em dicloroetano (15 mL), ácido acético (1,65 g, 27,5 mmols) foi adicionado e a reação agitada a 5 a 10 °C durante 2 h. Em seguida, acetaldeído- d4 (0,264 g, 6,00 mmols) foi adicionado a 0 °C e a reação agitada na temperatura ambiente durante a noite. Em conclusão, a reação foi resfriada com bicarbonato de sódio aquoso, a fase orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida, para fornecer o material bruto foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer o produto desejado (1 g, 91 %).
[01368]Etapas 2 e 3: Síntese de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(ethyI-d5 (tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida
[01369]NaOH aquoso (0,166 g, 4,15 mmols) foi adicionado a uma solução de composto 5-bromo-3-(etil-d5(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoato de metila (1 g, 2,77 mmols) em etanol (10 mL) e agitado a 60 °C durante 1 h. Depois da conclusão da reação, etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado usando HCl diluído até o pH 6 e o pH 4 foi ajustado usando ácido cítrico. A extração foi realizada usando acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas, fornecendo o ácido respectivo (0,7 g, 2,01 mmols, 73 %), que depois foi dissolvido em DMSO (7 mL) e 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,61, 1 g, 4,01 mmols) foi adicionada à mesma. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 15 min antes de PYBOP (1,56 g, 3,01 mmols) foi adicionado à mesma e a agitação foi continuada durante a noite. Depois da conclusão de conversão, a massa de reação foi vertida em gelo, extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas para obter produto bruto; que em seguida, purificado por lavagens com solvente para fornecer o produto desejado (0,6 g, 62 %).
[01370]Etapa 4: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 5-(etil-d5 (tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-formil-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida
[01371]A uma solução agitada do composto 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2- di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil-d5(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (0,3 g, 0,62 mmol) e ácido (4-(morfolinometil) fenil) borônico (0,283 g, 0,93 mmol) em mistura de dioxano/água, Na2CO3 (0,24 g, 2,26 mmols) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd (PPh3)4 (0,072 g, 0,062 mmol) foi adicionado e a mistura foi purgada novamente durante 10 min. A massa de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer o composto desejado do título (0,22 g, 61 %). Dados Analíticos de N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(etil-d5 (tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)- 4’-formil-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida: LCMS: 578,35 (M + 1)+; HPLC: 98,50 % (@ 254 nm) (Rt; 4,176; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (bs, 1H), 8,19 (t, 1H), 7,57 (d, 2H, J = 7,6), 7,36 - 7,39 (m, 3H), 7,21 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,29 (d, 2H, J = 3,2 Hz), 3,81 - 3,84 (m, 2H), 3,48 - 3,57 (m, 6H), 3,22- 3,25 (m, 2H), 3,02 (m, 1H), 2,36 (m, 4H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,51 - 1,67 (m, 4H).
[01372]Exemplo 144: Síntese de 5-((2,2-difluoroetil)(tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’- (morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida
Figure img0228
[01373]Etapa 1: Síntese de 5-bromo-3-[(2,2-difluoroetil)(oxan-4-il)amino]-2- metilbenzoato de metila
[01374]Em um RBF de 2 pescoços de 100 ml, uma solução agitada de 5-bromo- 2-metil-3-[(oxan-4-il)amino]benzoato de metila (500 mg, 1,5 mmol) em ácido difluoroacético (15 ml), foi tratada com tetra-hidroborato de sódio (1000 mg, 26 mmols) às porções durante 12 minutos. A mistura de reação foi aquecida a 50 °C e agitada durante 4 horas. A mistura de reação foi deixada atingir a temperatura ambiente e depois vertida em gelo (130 ml) e deixada durante 5 minutos. A mistura foi basificada pela adição de 6M NaOH (aq) (35 ml) e o pH ajustado a 7 usando 1M HCl (aq) (20 ml). A suspensão resultante foi deixada em repouso até que a solução se tornou clara e o sólido resultante coletado por filtração e seco à vacuo a 40 °C para fornecer o composto do título (572 mg, 96 %) como um sólido branco. LC-MS 100 %, 2,32 min (método LC-MS de 3,5 minutos), m/z = 391,9, 392,9, 393,9, 394,9; 1H NMR (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 7,79 (d, J = 1,89 Hz, 1H) 7,44 (d, J = 1,89 Hz, 1H) 5,44 - 5,71 (m, 1H) 4,00 (dd, J = l 1,51, 4,10 Hz, 2H) 3,91 (s, 3H) 3,41 (td, J = 13,99, 4,18 Hz, 2H) 3,32 (t, J = 11,27 Hz, 2H) 2,97 (tt, J = 11,37, 3,84 Hz, 1H) 2,47 (s, 3H) 1,72 - 1,81 (m, 2H) 1,59 - 1,67 (m, 2H).
[01375]Etapa 2: Síntese de ácido 5-bromo-3-[(2,2-difluoroetil)(oxan-4-il)amino]- 2-metilbenzoico
[01376]A uma solução agitada de 5-bromo-3-[(2,2-difluoroetil)(oxan-4-il)amino]-2- metilbenzoato de metila (571 mg, 1,5 mmol) em uma mistura de THF (14,6 ml) e MeOH (2,2 ml), foi adicionado 4M NaOH (14,6 ml). A mistura de reação foi agitada a 50 °C durante 7 horas. O calor foi retirado e a mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 16,5 horas. THF foi removido à vacuo e o resíduo aquoso foi acidificado ao pH 4 pela adição de HCI 6 M (aq) (10 ml) com esfriamento em gelo. O sólido resultante foi coletado por filtração e lavado com água (20 ml), seco à vacuo a 30 a 40 °C durante 3 horas para fornecer o composto do título (526 mg, 96 %) como um sólido bege claro. LC- MS 100 %, 1,98 min (método LC-MS de 3,5 minutos), m/z = 377,9, 378,9, 379,9, 380,9; RMN de 1H (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 7,91 (d, J = 1,58 Hz, 1H) 7,49 (d, J = 1,58 Hz, 1H) 5,43 - 5,75 (m, 1H) 4,01 (dd, J = 11,43, 3,55 Hz, 2H) 3,42 (td, J = 13,95, 3,78 Hz, 2H) 3,32 (t, J = 11,35 Hz, 2H) 2,98 (tt, J = 11,37, 3,53 Hz, 1H) 2,52 (s, 3H) 1,77 (d, J = 10,88 Hz, 2H) 1,56 - 1,69 (m, 2H). OH não visível.
[01377]Etapa 3: Síntese de 5-bromo-3-[(2,2-difluoroetil)(oxan-4-il)amino]-N- [(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-2-metilbenzamida
[01378]Uma solução agitada de ácido 5-bromo-3-[(2,2-difluoroetil)(oxan-4- il)amino]-2-metilbenzoico (250 mg, 0,66 mmol) em DMF seca (3,0 ml) a 0 °C sob um balão de nitrogênio, foi tratada com HATU (327 mg, 0,86 mmol) e DIPEA (230 μL, 1,3 mmol) às gotas. A solução resultante foi agitada durante 5 minutos e depois tratada com 3-(aminometil)-4,6-dimetil-1,2-di-hidropiridin-2-ona (89 %, 136 mg, 0,79 mmol). A suspensão resultante foi agitada a 0 °C durante 20 minutos e depois agitada na temperatura ambiente durante a noite. Depois de 18 horas, 3-(aminometil)-4,6-dimetil- 1,2-di-hidropiridin-2-ona (25 mg) foi adicionado e a agitação continuada durante um adicional de 25 horas. A mistura de reação foi diluída com água (30 ml) e CH2CI2 (30 ml). As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com CH2CI2 (3 x 15 ml). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com uma solução saturada de NaHCO3 (aq) (45 ml), água (2 x 50 ml), salmoura (2 x 50 ml), secas (MgSO4), filtradas e concentradas à vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (cartucho de 10 g SNAP, Isolera, 0 a 3 % MeOH:CH2Cl2) e depois triturado com éter. O sólido resultante foi coletado por filtração e seco à vacuo a 40 °C para fornecer o composto do título (259 mg, 77 %) como um sólido branco amarelado. LC-MS 100 %, 4,04 min (método LC-MS de 7 minutos), m/z = 512,0, 513,0, 514,0, 515,0; RMN de 1H (500 MHz, Acetona) δ 10,71 (s, 1H), 7,57 - 7,49 (m, 2H), 7,25 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 5,91 (s, 1H), 5,76 (tt, J = 56,2, 4,3 Hz, 1H), 4,40 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 3,88 (dd, J = 11,3, 4,2 Hz, 2H), 3,52 (td, J = 14,6, 4,2 Hz, 2H), 3,33 - 3,23 (m, 2H), 3,02 (tt, J = 11,6, 3,9 Hz, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 1,73 (dd, J = 12,4, 1,9 Hz, 2H), 1,59 (qd, J = 12,2, 4,5 Hz, 2H).
[01379]Etapa 4: Síntese de 5-((2,2-difluoroetil)(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)- N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida
[01380]Em um RBF de 2 pescoços, 5-bromo-3-[(2,2-difluoroetil)(oxan-4- il)amino]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-2-metilbenzamida (200 mg, 0,39 mmol) e 4-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzil]morfolina (130 mg, 0,43 mmol) em dioxano (3,0 ml) foi tratado com uma solução de Na2CO3 (145 mg, 1,4 mmol) em água (1,0 ml). A mistura foi brevemente sonicada e nitrogênio foi borbulhado através da suspensão resultante com uma agulha longa durante 5 minutos. A suspensão depois foi tratada com paládio-trifenilfosfano (1:4) (45 mg, 0,04 mmol) e nitrogênio foi borbulhado através da suspensão resultante durante um adicional de 5 minutos. A mistura de reação depois foi aquecida a 100 °C durante 8 horas e agitada na temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura de reação foi tratada com água (20 ml) e MeOH/CH2CI2 a 10 % (15 ml). As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com MeOH/CH2Cl2 a 10 % (3 x 15 ml). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (55 ml), secos (MgSO4), filtrados e concentrados à vacuo. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia em coluna (cartucho de 10 g SNAP, Isolera, 0 a 5 % MeOH/CH2Cl2) e tratado com éter (10 ml), brevemente sonicado, aquecido em um banho de água e esfriado em gelo. O sólido branco resultante foi coletado por filtração e lavado com éter (5 ml). O sólido foi seco à vacuo a 40 °C durante 35 horas para fornecer o composto do título (159 mg, 67 %) como um sólido branco amarelado. LC-MS 100 %, 3,09 min (método LC-MS de 7 minutos), m/z = 609,15; RMN de 1H (500 MHz, Acetona) δ 10,72 (s, 1H), 7,63 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,60 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,54 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 7,41 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,39 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 5,91 (s, 1H), 5,76 (ttt, J = 56,4, 30,4, 4,4 Hz, 1H), 4,44 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 3,89 (dd, J = 11,4, 3,9 Hz, 2H), 3,65 - 3,55 (m, 6H), 3,50 (s, 2H), 3,29 (t, J = 11,3 Hz, 2H), 3,07 (tt, J = 11,5, 3,6 Hz, 1H), 2,40(s, 4H), 2,37 (s, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 1,82 - 1,75 (m, 2H), 1,61 (qd, J = 11,9, 4,1 Hz, 2H).
[01381]Exemplo 145: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3- (((1s,4s)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4- il)benzamide
Figure img0229
[01382]Etapa 1: Síntese de 3-(((1s,4s)-4-aminociclo-hexil)(etil)amino)-5-bromo- N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
[01383]A uma solução esfriada de composto ((1s,4s)-4-((5-bromo-3-(((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(etil)amino)ciclo- hexil) carbamato de terc-butila (1,0 g, 1,60 mmol) em 10 ml de DCM, 2 ml de TFA foi adicionado às gotas e a mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 2 h. A massa de reação foi concentrada à secura sob pressão reduzida, e o bruto obtido foi dissolvido em MeOH a 10 % em DCM e lavada com NaHCO3 sat, água e salmoura. A fase orgânica foi seca em Na2SO4, concentrada sob pressão reduzida para obter o composto bruto desejado (650 mg, 81 %).
[01384]Etapa 2: Síntese de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-3-(((1s,4s)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metilbenzamida
[01385]A uma solução agitada do composto bruto 3-(((1s,4s)-4-aminociclo- hexil)(etil)amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2- metilbenzamida (650 mg, 1,32 mmol) e formaldeído (0,5 ml de 38 % de solução, 13,26 mmols) em 10 ml de metanol, cianoboro-hidreto de sódio (82 mg, 1,32 mmol) foi adicionado a 0 °C e agitada na temperatura ambiente durante a noite. A mistura de reação foi particionada entre água e MeOH a 10 % em DCM, a camada orgânica foi seca em Na2SO4, concentrada sob pressão reduzida. O bruto foi purificado por purificação em coluna com alumina básica para fornecer o produto composto desejado (450 mg, 65 %).
[01386]Etapa 3: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 3-(((1s,4s)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4- il)benzamida
[01387]Uma solução de composto 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(((1s,4s)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2- metilbenzamida (150 mg, 0,29 mmol), ácido (1 -metil-1H-pirazol-4-il) borônico (72 mg, 0,34 mmol), carbonato de sódio (110 mg, 1,06 mmol) em 10 ml de dioxano foi desgaseificado com argônio durante 20 min, Pd(PPh3) (33 mg, 0,03 mmol) foi adicionado à mistura e aquecido a 100 °C durante a noite. A reação foi esfriada até a temperatura ambiente e diluída com água, o composto foi extraído em MeOH a 10 % em DCM, seco em Na2SO4, concentrado e o bruto foi purificado por cromatografia em gel de sílica (100 a 200) para obter o composto do título (40 mg, 26 %).
[01388]Dados Analíticos: LCMS: 519,40 (M + 1)+; HPLC: 95,98 % (@ 254 nm) (Rt; 3,987; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μ L, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45(bs, 1H), 8,12 - 8,09 (m, 2H), 7,80 (s, 1H), 7,29 (s, 1H), 7,10 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,27 (d, 2H, J = 4,8 Hz), 3,84 (s, 3H), 3,07 - 305 (m, 2H), 2,67 - 2,63 (m, 2H), 2,21 (s, 3H), 2,15 (s, 3H), 2,12 - 2,11 (s, 3H+3H+3H), 1,79- 1,75 (m, 4H), 1,36 - 1,11 (m, 4H), 0,80 (t, 3H, J = 6,0 Hz).
[01389]Exemplo 146: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5- (((1s,4s)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-4-metil-4’-((4-metil-1,4-diazepan-1- il)metil)-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida
Figure img0230
[01390]Etapa 1: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 5-(((1s,4s)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-4’-formil-4-metil-[1,1’-bifenil]-3- carboxamida
[01391]Uma solução de composto 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(((1s,4s)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2- metilbenzamida (380 mg, 0,73 mmol), ácido (4-formilfenil)borônico (165 mg, 1,10 mmol), carbonato de sódio (280 mg, 2,6 mmols) em 5 ml de dioxano foi desgaseificado com argônio durante 20 min, Pd(PPh3) (84 mg, 0,07 mmol) foi adicionado à mistura e aquecido a 100 °C durante 5 h. A reação foi esfriada até a temperatura ambiente e diluída com água, o composto foi extraído em MeOH a 10 % em DCM, seco em Na2SO4, concentrado e o bruto foi purificado por cromatografia em gel de sílica (100 a 200) para obter o composto desejado (250 mg, 63 %).
[01392]Etapa 2: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 5-(((1s,4s)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-4-metil-4’-((4-metil-1,4-diazepan-1- il)metil)-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida
[01393]A uma solução agitada do composto N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-5-(((1s,4s)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-4’-formil-4- metil-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida (90 mg, 0,16 mmol) e 1-metil-1,4-diazepan (0,56 g, 0,49 mmol) em 2 ml de metanol, ácido acético (0,03 mL, 0,49 mmol) foi adicionado e agitado na temperatura ambiente durante 20 minutos. A mistura de reação foi esfriada a 0 °C e cianoboro-hidreto de sódio (25 mg, 0,41 mmol) foi adicionado e agitado na temperatura ambiente durante 4 h. A mistura de reação foi neutralizada com NaHCO3 sat. e o composto foi extraído em DCM, seco em Na2SO4, concentrado sob pressão reduzida, purificado por prep. HPLC para fornecer o composto do título (26 mg, 25 %).
[01394]Dados Analíticos de sal de TFA: LCMS: 641,50 (M + 1)+; HPLC: 97,72 % (@ 254 nm) (Rt; 3,783; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 -12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-D6, 400 MHz) δ 11,45 (bs, 1H), 9,54 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,74 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,57 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,42 (s, 1H), 7,26 (s, 1H), 5,87 (s, 1H), 4,29 (d, J = 4,0 Hz, 2H), 3,83 (m, 4H), 3,25 (m, 3H), 3,17 - 3,12 (m, 4H), 2,84 (s, 3H), 2,69, 2,68 (2s, 6H), 2,24 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 2,10 - 1,89 (m, 6H), 1,46 - 1,44 (m, 4H), 0,84 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
[01395]Exemplo 147: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5- (((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexilXetil)amino)-4-metil-[1,T-bifenil]-3-carboxamida
Figure img0231
[01396]Etapa 1: 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)- (etil)amino)-2-metilbenzoato de metila
[01397]A uma solução agitada de 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((terc- butoxicarbonil)amino)-ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoato de metila (10 g, 22,72 mmols) e acetaldeído (2,99 g, 67,95 mmols) em dicloroetano (100 mL), ácido acético (8,18 g, 136,33 mmols) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 20 minutos. Em seguida, triacetoxiboro-hidreto de sódio (14,45 g, 68,16 mmols) foi adicionado a 0 °C e mistura de reação agitada durante a noite na temperatura ambiente. O solvente foi removido sob pressão reduzida, o resíduo absorvido em água e extraído usando MeOH/DCM a 5 %. Os extratos combinados foram secos e concentrados para fornecer 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)-(etil)amino)-2-metilbenzoato de metila que foi usado nas reações adicionais (9 g, 84,66 %).
[01398]Etapa 2: ((1r,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila
[01399]NaOH aquoso (1,15 g, 28,84 mmols) foi adicionado a uma solução de 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)-(etil)amino)-2- metilbenzoato de metila (9 g, 19,23 mmols) em etanol (10 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. O etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado ao pH 6 usando HCl diluído e depois ao pH 4 usando ácido cítrico. A mistura foi extraída com acetato. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas para fornecer o ácido respectivo (8,6 g, 98,50 %).
[01400]O ácido acima (8,6 g, 18,90 mmols) foi dissolvido em DMSO (7 mL) e 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (5,74g, 37,80mmols) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 15 min antes de PyBOP (14,70 g, 28,35 mmols) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada durante a noite. A mistura de reação foi vertida em água gelada e extraída com MeOH/DCM a 10 %. Os extratos combinados foram secos e concentrados para obter o produto bruto que purificado por lavagens com solvente para fornecer ((1r,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)amino)ciclo- hexil)carbamato de terc-butila (10,2g, 91,89 %).
[01401]Etapa 3: 3-(((1r,4r)-4-aminociclo-hexil)(etil)amino)-5-bromo-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
[01402]((1r,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila (3 g, 5,10 mmols) foi absorvido em DCM (20 mL) ao qual TFA (5 mL) depois foi adicionado. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h. O solvente foi removido sob pressão reduzida e solução de NaHCO3 saturado foi adicionada. A mistura foi extraída com MeOH/DCM a 10 % e os extratos combinados lavados com água e salmoura, secos em anidro Na2SO4, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para fornecer 3-(((1r,4r)-4-aminociclo-hexil)(etil)amino)-5-bromo-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (2,2 g, 87,50 %).
[01403]Etapa 4: 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3- (((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metilbenzamida
[01404]3-(((1r,4r)-4-aminociclo-hexil)(etil)amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2- oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (2,2 g, 4,50 mmols) foi dissolvido em DCM (25 mL) e esfriado a 0 °C; formalina (0,49 g, 16,26 mmols) depois foi adicionada. A mistura de reação foi agitada a mesma temperatura durante 20 minutos. Triacetoxiboro-hidreto de sódio (2,39 g, 11,22 mmols) depois foi adicionado e a mistura de reação agitada na temperatura ambiente durante 1 h. O solvente foi removido sob pressão reduzida e água foi adicionada ao resíduo. A mistura foi extraída usando MeOH/DCM a 10 %. Os extratos combinados foram secos e concentrados sob pressão reduzida fornecendo 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2- metilbenzamida (2,3 g, 98,71 %) que foi usado em reações adicionais.
[01405]Etapa 5: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(((1r,4r)-4- (dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida
[01406]A uma solução agitada de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2- metilbenzamida (1 eq) e ácido fenilborônico (1,5 eq) em mistura de dioxano/água, Na2CO3 (3,6 eq) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Pd (PPh3)4 (0,1 eq) depois foi adicionado e a mistura de reação novamente purgada com argônio durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 2 h. A mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. Os extratos combinados foram secos em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia em gel de sílica para fornecer o composto do título como um sal de TFA (0,07 g, 23,92 %). LCMS: 515,45 (M + 1)+; HPLC: 92,45 % (@ 254 nm) (Rt; 4,672; Método: Coluna: YMC ODS- A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,48 (bs, 1H), 9,41 (bs, 1H), 8,23 (bs, 1H), 7,63 (d, 2H, J = 4,8Hz), 7,50 - 7,20 (m, 5H), 5,86 (s, 1H), 4,29 (d, 2H), 3,12 (m, 3H), 2,68 (s, 6H), 2,25 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,95 (m, 4H), 1,44 (m, 4H), 0,84 (t, 3H).
[01407]Exemplo 148: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5- (((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-4,4’-dimetil-[1,1-bifenil]-3- carboxamide
Figure img0232
[01408]Etapa 1: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(((1r,4r)-4- (dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-4,4’-dimetil-[1,1’-bifenil]-3-carboxamida
[01409]A uma solução agitada de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2- metilbenzamida (1 eq) e ácido p-tolilborônico (1,5 eq) em mistura de dioxano/água, Na2CO3 (3,6 eq) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Pd (PPh3)4 (0,1 eq) depois foi adicionado e a mistura de reação novamente purgada com argônio durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 2 h. A mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. Os extratos combinados foram secos em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia em gel de sílica para fornecer o composto do título como um sal de TFA (0,15 g, 51,30 %). LCMS: 529,40 (M + 1)+; HPLC: 93,61 % (@ 254 nm) (Rt; 4,761; Método: Coluna: YMC ODS- A 1 50 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,47 (bs, 1H), 9,40 (bs, 1H), 8,21 (bs, 1H), 7,53 (d, 2H, J = 6,8 Hz), 7,38 (bs, 1H), 7,26 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 5,86 (s, 1H), 4,29 (d, 2H, J = 4 Hz), 3,15 (m, 2H), 2,69 (s, 3H), 2,68 (s, 3H), 2,33 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,95 (m, 4H), 1,44 (m, 4H), 0,84 (t, 3H).
[01410]Exemplo 149: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5- (((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-4-metil-4’-(trifluorometil)-[1,1’-bifenil]- 3-carboxamida
Figure img0233
[01411]Etapa 1: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(((1r,4r)-4- (dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-4-metil-4’-(trifluorometil)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamida
[01412]A uma solução agitada de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2- metilbenzamida (1 eq) e ácido (4-(trifluorometil)fenil) borônico (1,5 eq) em mistura de dioxano/água, Na2CO3 (3,6 eq) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Pd(PPh3)4 (0,1 eq) depois foi adicionado e a mistura de reação novamente purgada com argônio durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 2 h. A mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. Os extratos combinados foram secos em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia em gel de sílica para fornecer o composto do título como um sal de TFA (0,08 g, 23,52 %). LCMS: 583,45 (M + 1)+; HPLC: 94,04 % (@ 254 nm) (Rt; 5,168; Método: Coluna: YMC ODS-A 1 50 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,48 (s, 1H), 9,41 (bs, 1H), 8,27 (bs, 1H), 7,88 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,81 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,51 (s, 1H), 7,34 (s, 1H), 5,87 (s, 1H), 4,30 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,16 (m, 3H), 2,85 (m, 1H), 2,69 (s, 3H), 2,68 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,94 (m, 4H), 1,45 (m, 4H), 0,85 (t, 3H, J = 6,8 Hz).
[01413]Exemplo 150: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5- (((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-4-metil-4’-(metilsulfonil)-[1,1’-bifenil]- 3-carboxamida
Figure img0234
[01414]Etapa 1: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(((1r,4r)-4- (dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-4-metil-4’-(metilsulfonil)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamida
[01415]A uma solução agitada de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2- metilbenzamida (1 eq) e ácido (4-(metilsulfonil)fenil) borônico (1,5 eq) em mistura de dioxano/água, Na2CO3 (3,6 eq) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Pd(PPh3)4 (0,1 eq) depois foi adicionado e a mistura de reação novamente purgada com argônio durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 2 h. A mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. Os extratos combinados foram secos em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia em gel de sílica para fornecer o composto do título como um sal de TFA (0,12 g, 34,68 %). LCMS: 593,45 (M + 1)+; HPLC: 98,74 % (@ 254 nm) (Rt; 4,194; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 -12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,48 (bs, 1H), 9,43 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 7,99 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 7,93 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 7,51 (s, 1H), 7,34 (s, 1H), 5,87 (s, 1H), 4,30 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,24 (s, 3H), 3,30 (m, 3H), 2,80 (m, 1H), 2,69 (s, 3H), 2,68 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,93 (m, 4H), 1,45 (m, 4H), 0,84 (t, 3H, J = 6,8 Hz).
[01416]Exemplo 151: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- (((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(pirimidin-5-il)benzamide
Figure img0235
[01417]Composto 151
[01418]Etapa 1: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4- (dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(pirimidin-5-il)benzamida
[01419]A uma solução agitada de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2- metilbenzamida (1 eq) e ácido pirimidin-5-ilborônico (1,5 eq) em mistura de dioxano/água, Na2CO3 (3,6 eq) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Pd(PPh3)4 (0,1 eq) depois foi adicionado e a mistura de reação novamente purgada com argônio durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 2 h. A mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. Os extratos combinados foram secos em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia em gel de sílica para fornecer N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin- 3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(pirimidin-5- il)benzamida sal de TFA (0,12 g, 39,33 %). LCMS: 517,60 (M + 1)+; HPLC: 99,55 % (@ 210 nm - 370 nm) (Rt; 3,996; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,47 (bs, 1H), 9,43(bs, 1H), 9,18 (s, 1H), 9,14 (s, 2H), 8,22 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,41 (s, 1H), 5,87 (s, 1H), 4,30 (d, 2H), 3,14 (m, 3H), 2,69 (s, 3H+3H), 2,27 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 2,11 - 2,07 (m, 4H), 1,95 (m, 4H), 1,44 (m, 4H), 0,84 (t, 3H).
[01420]Exemplo 152: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-(furan-2-il)-2- metilbenzamida sal de TFA
Figure img0236
[01421]Etapa 1: síntese de 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)-ciclo hexil)amino)-2-metilbenzoato de metila
Figure img0237
[01422]A uma solução agitada de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metila (5,0 g, 2,0 mmols) e 4-N-Boc-aminociclo-hexanona (5,69 g, 2,67 mmols) em dicloroetano (50 mL) foi adicionado ácido acético (7,4 g, 12 mmols). Triacetoxiboro- hidreto de sódio (13,1 g, 6,17 mmols) foi adicionado a 0 °C e a mistura foi agitada na temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura de reação foi resfriada com bicarbonato de sódio aquoso, a fase orgânica separada e a fase aquosa extraída com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram secas em anidro sulfato de sódio e concentradas à vacuo. O composto bruto foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica (tamanho de malha 100 a 200) eluindo com 10 % de acetato de etila em hexano para fornecer 3,5 g do isômero trans mais polar 5-bromo-3- (((1r,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)-amino)-ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoato (38 %) de isômero como um sólido branco amarelado. RMN de 1H (CDCl3, 400 MHz) δ 7,21 (s, 1H), 6,89 (s, 1H), 4,41 (bs, 1H), 3,85 (s, 3H), 3,41 - 3,64 (m, 2H), 2,11 - 2,21 (m, 6H), 1,42 (s, 9H), 1,22 - 1,36 (m, 5H),
[01423]Etapa 2: síntese de síntese de 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((terc- butoxicarbonil)-amino)-ciclo-hexil)(etil)-amino)-2-metilbenzoato de metila
Figure img0238
[01424]A uma solução agitada de 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)- amino)-ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoato (55 g, 0,12 mol) e acetaldeído (11 g, 0,25 mol) em dicloroetano (550 mL) foi adicionado ácido acético (44,6 g, 0,74 mol). Triacetoxiboro-hidreto de sódio (79 g, 0,37 mol) foi adicionado a 0 °C e a mistura foi agitada na temperatura ambiente durante 16 horas. Bicarbonato de sódio aquoso foi adicionado, a fase orgânica foi separada e a fase aquosa extraída com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram secas em anidro sulfato de sódio e concentradas à vacuo. O bruto composto foi purificado por cromatografia em coluna em sílica para fornecer o composto do título (35 g, 59 %) como um sólido branco amarelado.
[01425]Etapa 3: síntese de ((1r,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)-metil)carbamoil)-2-metilfenil(etil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc- butila
Figure img0239
[01426]A uma solução agitada de 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)- amino)-ciclo-hexil)(etil)-amino)-2-metilbenzoato de metila (25 g, 0,053 mol) em EtOH (100 mL) foi adicionado NaOH aquoso (3,5 g, 0,08 mol em H2O 10 mL). Depois da agitação a 60 °C durante 1 h, a mistura foi acidificada ao pH 4 e extraída com 10 % de metanol em DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas para fornecer 24,2 g do ácido correspondente. A uma solução agitada de ácido (24 g, 0,053 mol) e 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (16 g, 0,11 mol) e trietil amina (5,3 g, 0,053 mmol) em DMSO (50 mL) foi adicionado PyBop (41 g, 0,079 mol). Depois da agitação durante a noite na temperatura ambiente, a mistura foi vertida em água gelada e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida. O material bruto foi lavado com água (1 L X 2) seguido por acetonitrila (150 mL X 3) para fornecer o composto do título (24 g, 77 %).
[01427]Etapa 4: síntese de 3-(((1r,4r)-4-aminociclo-hexil)(etil)amino)((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metal)-2-metilbenzamida
Figure img0240
[01428]A uma solução agitada de ((1r,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)-metil)carbamoil)-2-etilfenil(etil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila (6,0 g, 10 mols) em DCM (30 mL), foi adicionado TFA (10 mL) a 0 °C. A mistura de reação foi agitada durante 2 h na temperatura ambiente e concentrada à secura. O resíduo foi neutralizado através da adição de solução de bicarbonato saturada (40 mL) seguido por extração com 20 % de metanol em DCM (100 mL X 4). As fases orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente foi removido sob pressão reduzida para fornecer 5,0 g do composto do título que foi usado sem purificação adicional.
[01429]Etapa 4: síntese de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-3-(((1r, 4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metilbenzamida
Figure img0241
[01430]A uma solução agitada de 3-(((1r,4r)-4-aminociclo-hexil)(etil)amino)-5- bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (5,0 g, 10 mmols) em diclorometano (50 mL) foi adicionada solução de formaldeído aq. a 35 % (2,9 g, 36 mmols) a 0 °C. Na(OAc)3BH (5,43g, 25,6 mmols) foi adicionado e a mistura foi agitada durante 2 h a 0 °C. Água (100 mL) foi adicionada seguido por extração com 20 % de metanol em DCM (200 mL X 3). As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em alumina básica eluindo com MeOH a 6 a 7 % em DCM para fornecer o composto do título (4,5 g, 94 %).
[01431]Procedimento de reação de Suzuki geral para a síntese dos Compostos 152 a 156, 158 a 162, 165 e 167
[01432]A uma solução agitada de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2- metilbenzamida (1 eq.) e ácidos borônicos/ésteres pinacólicos (1,2 eq.) em mistura de dioxano/água (4:1), foi adicionado Na2CO3 (3,6 eq.). A solução foi purgada com argônio durante 15 min. Pd(PPh3)4 (0,1 eq.) foi adicionado. A mistura de a reação agitada foi aquecida a 100 °C durante 2 a 4 h sob argônio. Depois do esfriamento até a temperatura ambiente, a mistura foi diluída com MeOH/DCM a 10 % e filtrada. O filtrado foi concentrado, diluído com água e extraído com MeOH a 10 % em DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica (100 a 200 malhas) ou por HPLC preparativa para fornecer produtos como base livre ou sal de TFA respectivamente.
[01433]Dados Analíticos de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil- 3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-(furan-2-il)-2-metilbenzamida sal de TFA (0,08g, 27 %); LCMS: 505,55 (M + 1)+; HPLC: 97,76 % (@ 210 nm - 370 nm) (Rt; 4,192; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 -12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (bs, 1H), 8,21 (s, 1H), 8,17 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,42 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 6,93(s, 1H), 6,57 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,29 (d, 2H), 3,08 - 3,06 (m, 3H), 2,67 (m, 1H), 2,21 (s, 3H+3H+3H), 2,18 - 2,11 (s, 3H+3H), 1,80 (m, 4H), 1,37- 1,19 (m, 4H), 0,81 (t, 3H).
[01434]Exemplo 153: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil-3- (((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(quinolin-8-il)-benzamida sal de TFA (0,09 g, 27 %;
Figure img0242
[01435]Dados Analíticos de sal de TFA: LCMS: 566,70 (M + 1)+; HPLC: 93,94 % (@ 210 nm - 370 nm) (Rt; 4,352; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO- d6, 400 MHz) δ 11,43 (bs, 1H), 9,34 (bs, 1H), 8,88 (s, 1H), 8,45 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 8,16 (t, 1H), 8,00 (d, 1H, J = 7,2Hz), 7,80 - 7,79 (m, 1H), 7,70 - 7,69 (m, 1H), 7,59 - 7,57 (m, 1H), 7,49 (m, 1H), 7,29 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 3,6 Hz), 3,16 - 3,11 (m, 3H), 2,70 - 2,69 (m, 1H+3H+3H), 2,30 (s, 3H), 2,19(s, 3H), 2,09 (s, 3H), 1,99 (m, 4H), 1,45 (m,4H), 0,93 (t, 3H).
[01436]Exemplo 154: 5-(2-aminopirimidin-5-il)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino-2- metilbenzamida sal de TFA (0,14g, 45 %);
Figure img0243
[01437]Dados Analíticos de sal de TFA: LCMS: 532,65(M + 1)+; HPLC: 98,49 % (@ 210 nm - 370 nm) (Rt; 3,692; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min 5 %B); RMN de 1H (DMSO- d6, 400 MHz) δ 11,48 (bs, 1H), 9,45 (bs, 1H), 8,17(s, 1H), 7,42 (s, 1H), 7,24 (s, 1H), 5,87 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,12(m, 3H), 2,69 (s, 3H+3H), 2,23 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,96 (m, 4H), 1,43 (m, 4H), 0,83 (t, 3H).
[01438]Exemplo 155: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil-3- (((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(piridina-4-il)-benzamida sal de TFA (0,17g, 56 %;
Figure img0244
[01439]Dados Analíticos de sal de TFA: LCMS: 516,60 (M + 1)+; HPLC: 92,58 % (@ 210 nm - 370 nm) (Rt; 3,775; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO- d6, 400 MHZ) δ 11,45 (bs, 1H), 9,74 (bs, 1H), 8,85 (d, 2H, J = 5,2 Hz), 8,30 (t, 1H), 8,24 (d, 2H, J = 4,8 Hz), 7,71 (s, 1H), 7,55 (s, 1H), 5,88 (s, 1H), 4,31 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,16 (m, 3H), 2,79 (m, 1H), 2,69 (s, 3H+3H), 2,28 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,98 - 1,90 (m, 4H), 1,47 - 1,45 (m, 4H), 0,84 (t, 3H).
[01440]Exemplo 156: sal de TFA de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(tiofen-3-il)- benzamida (0,07 g, 56 %);
Figure img0245
[01441]Dados Analíticos de sal de TFA: LCMS: 521,55 (M + 1)+; HPLC: 98,64 % (@ 210 nm - 370 nm) (Rt; 4,366; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min 5 % B); RMN de 1H (DMSO- d6, 400 MHz) δ 11,47 (bs, 1H), 9,45 (bs, 1H), 8,18 (s, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,54 (m, 2H), 7,32 (s, 1H), 5,87 (s, 1H), 4,29 (d, 2H), 3,13 (m, 3H), 2,69 (m, 6H+1H), 2,22 (s, 3H+3H), 2,11 (s, 3H), 1,96 (m, 4H), 1,44 (m, 4H), 0,84 (t, 3H).
[01442]Exemplo 158: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3- (((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(6-metilpiridin-3- il)benzamide
Figure img0246
[01443]Dados Analíticos: LCMS: 530,55 (M + 1)+; HPLC: 96,45 % (@ 210 nm - 370 nm) (Rt; 4,192; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) 511,45 (bs, 1H), 8,70 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 7,95 - 7,90 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,39 (s, 1H), 7,35 - 7,30 (d, 1H, J = 7,6Hz), 7,22 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,29 (d, 2H), 3,05 - 3,15 (m, 2H), 2,60 - 2,70 (m, 1H), Três prótons ligados em pico de solvente, 2,25 - 2,35 (m, 6H+1H), 2,0 - 2,25 (3H+3H+3H), 1,70 - 1,90 (m, 4H), 1,30 - 1,20 (m, 2H), 1,0 - 1,20 (m, 2H), 0,75 - 0,85 (t, 3H)
[01444]Exemplo 159: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil-3- (((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-2- metilbenzamida sal de TFA (0,13 g, 50 %);
Figure img0247
[01445]Dados Analíticos de sal de TFA: LCMS: 534,60 (M + 1)+; HPLC: 96,65 % (@ 210 nm - 370 nm) (Rt; 4,352; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO- d6, 400 MHz) δ 11,46 (bs, 1H), 9,42 (s, 1H), 8,17 (s, 1H), 7,13(s, 1H), 6,92 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,25 - 4,30 (d, 2H), 3,0 - 3,20 (m, 3H), 2,65 - 2,75 (m, 3H+3H), Três prótons ligados em pico de solvente, 2,39 (s, 3H), 2,05 - 2,25 (m, 3H+3H+3H+1H), 1,90 - 2,0 (m, 2H), 1,80 - 1,90 (m, 2H), 1,35 - 1,50 (m, 4H), 0,80 - 0,90 (t, 3H).
[01446]Exemplo 160: 5-(1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2- di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2- metilbenzamida sal de TFA (0,06 g, 58%);
Figure img0248
[01447]Dados Analíticos de sal de TFA: LCMS: 533,80 (M + 1)+; HPLC: 90,76 % (@ 254 nm) (Rt; 5,583; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHZ) δ 11,45 (bs, 1H), 9,27 (s, 1H), 8,11 (s, 1H), 7,52 (s, 1H), 7,11 (s, 1H), 6,95 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,20 - 4,30 (d, 2H), 3,76 (s, 2H), 3,0 - 3,20 (m, 2H), 2,60 - 2,75 (m, 3H+3H), 2,33 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,80 - 2,0 (m, 4H), 1,35 - 1,50 (m, 4H), 0,80 - 0,90 (t, 3H).
[01448]Exemplo 161: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil-3- (((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-(1-metilpirazol-3-il)-2- metilbenzamida sal de TFA (0,1 g, 33 %);
Figure img0249
[01449]Dados Analíticos de sal de TFA: LCMS: 519,45 (M + 1)+; HPLC: 96,61 % (@ 254 nm) (Rt; 6,026; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μ L, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6,400 MHz) δ 11,47 (bs, 1H), 9,46 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,28 (s, 1H), 7,06 (s, 1H), 6,38 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,20 - 4,25 (d, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,0 - 3,15 (m, 3H), 2,60 - 2,80 (m, 1H+3H+3H), 2,24 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,80 - 2,0 (m, 2H+2H), 1,40 - 1,50 (m, 4H), 0,80 - 0,90 (t, 3H).
[01450]Exemplo 162: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil-3- (((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-(piridin-3-il)-2-metilbenzamida sal de TFA (0,1 g, 33 %;
Figure img0250
[01451]Dados Analíticos de sal de TFA: LCMS: 516,50 (M + 1)+; HPLC: 89,96 % (@ 254 nm) (Rt; 6,026; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6,400 MHz) δ 11,46 (bs, 1H), 9,35 (s, 1H), 8,96 (s, 1H), 8,63 (s, 1H), 8,22 (m, 2H), 7,61 (s, 1H), 7,51 (s, 1H), 7,33 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,25 - 4,35 (d, 2H), 3,05 - 3,15 (m, 3H), 2,6 - 2,80 (m, 1H+3H+3H), 2,25 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,90 - 2,0 (m, 2H+2H), 1,40 - 1,50 (m, 4H), 0,80 - 0,90 (t, 3H).
[01452]Exemplo 163: N N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5- (((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-4-metil-4’-(2H-tetrazol-5-il)-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida
Figure img0251
[01453]A uma solução agitada de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2- metilbenzamida (1 eq) e 5-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)-2H- tetrazol (1,5 eq) em mistura de dioxano/água, Na2CO3 (3,6 eq) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Pd(PPh3)4 (0,1 eq) depois foi adicionado e a mistura de reação novamente purgada com argônio durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 2 h. A mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. Os extratos combinados foram secos em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia em gel de sílica em seguida, HPLC prep. para fornecer o composto do título como um sal de TFA (0,125 g, 35,50 %). LCMS: 583,40 (M + 1)+; HPLC: 90,26 % (@ 210 - 370 nm) (Rt; 4,130; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (bs, 1H), 9,32 (bs, 1H), 8,23 - 8,11 (m, 3H), 7,90 (d, 2H, J = 7,2 Hz), 7,50 (s, 1H), 7,34 (s, 1H), 5,87 (s, 1H,), 4,30 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,59 (s, 1H), 3,13 (m, 3H), 2,69 - 2,68 (m, 6H), 2,26 - 2,10 (m, 9H), 1,94 (m, 4H), 1,44 (m, 4H) 0,85 (m, 3H).
[01454]Exemplo 164: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3- (((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(2-metilpirimidina-5- il)benzamide
Figure img0252
[01455]A uma solução agitada de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2- metilbenzamida (1 eq) e 2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)pirimidina (1,5 eq) em mistura de dioxano/água, Na2CO3 (3,6 eq) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Pd(PPh3)4 (0,1 eq) depois foi adicionado e a mistura de reação novamente purgada com argônio durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 2 h. A mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. Os extratos combinados foram secos em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia em gel de sílica em seguida, HPLC prep para fornecer o composto do título como um sal de TFA (0,08 g, 25,97 %). LCMS: 531,65 (M + 1)+; HPLC: 99,61 % (@ 21 0 - 370 nm) (Rt; 3,981; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,5 1 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,47 (bs, 1H), 9,46 (bs, 1H), 9,00 (m, 2H), 8,20 (s, 1H), 7,53 (s, 1H), 7,35 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,29 (m, 2H), 3,125 - 3,127(m, 3H), 2,69 - 2,50 (m, 10H), 2,25 - 2,10 (m, 9H), 1,94 (m, 4H), 1,43 (m, 4H), 0,83 (m, 3H).
[01456]Exemplo 165: 5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2- di-hidropiridin-3-il)metil-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino-2- metilbenzamida sal de TFA (0,18 g, 69 %)
Figure img0253
[01457]Dados Analíticos de sal de TFA: LCMS: 533,80 (M + 1)+; HPLC: 87,18 % (@ 210 - 370 nm) (Rt; 3,946; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (D2O-d6, 400 MHz) δ 7,93 (s, 1H), 7,62 - 7,57 (m, 2H), 6,31 (s, 1H), 4,492 - 4,494 (m, 2H), 3,92 - 3,80 (m, 6H), 3,33 (m, 1H), 2,82 (m, 6H), 2,39 - 2,28 (m, 16H), 1,66 (m, 4H), 1,04 (m, 3H).
[01458]Exemplo 166: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3- (((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(tiazol-4-il)benzamide
Figure img0254
[01459]A uma solução agitada de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2- metilbenzamida (1 eq) e 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)tiazol (1,5 eq) em mistura de dioxano/água, Na2CO3 (3,6 eq) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Pd(PPh3)4 (0,1 eq) depois foi adicionado e a mistura de reação novamente purgada com argônio durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 2 h. A mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. Os extratos combinados foram secos em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia em gel de sílica em seguida, HPLC prep para fornecer o composto do título como um sal de TFA (0,07 g, 28,40 %). LCMS: 522,50 (M + 1)+; HPLC: 99,22 % (@ 210 - 370 nm) (Rt; 4,114; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,48 (bs, 1H), 9,36 (bs, 1H), 9,18 (s, 1H), 8,19 (bs, 2H), 7,79 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 5,87 (s, 1H), 4,30 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,11 (m, 3H), 2,73 - 2,68 (m, 7H), 2,22 (s, 6H), 2,11 (s, 3H), 1,95 (m, 4H), 1,44 (m, 4H), 0,83 (t, 3H).
[01460]Exemplo 167: sal de TFA de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(tiofen-2-il)- benzamida (0,05 g, 50 %).
Figure img0255
[01461]Dados Analíticos: LCMS: 521,55 (M + 1)+; HPLC: 88,13 % (@ 210 - 370 nm) (Rt; 4,412; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,47 (bs, 1H), 9,32 (bs, 1H), 8,22 (t, 1H), 7,53 - 7,38 (m, 3H), 7,20 - 7,13 (m, 2H), 5,87 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 3,6 Hz), 3,10 (m, 3H), 2,69 - 2,68 (m, 7H), 2,21 (s, 6H), 2,11 (s, 3H), 1,95 - 1,90 (m, 4H), 1,44 (m, 4H), 0,83 (t, 3H).
[01462]Exemplo 168: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(tiazol-2-il)- benzamida sal de TFA
Figure img0256
[01463]Etapa 1: síntese de 3-(((1r,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)-amino)-ciclo- hexil)-(etil)-amino)-2-metil-5-(tiazol-2-il)benzoato de metila
[01464]A uma solução agitada de 3-(((1r,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)-amino)- ciclo-hexil)-(etil)-amino)-2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzoato de metila (0,5 g, 1,2 mmol) e 2-bromotiazol (0,22 g, 1,38 mmol) em mistura de dioxano/água, foi adicionado Cs2CO3 (0,94 g, 2,88 mmols) na temperatura ambiente. A solução foi purgada com argônio durante 15 min. e PdCl2(PPh3)2 (0,08 g, 0,11 mmol) foi adicionado. A mistura foi aquecida a 100 °C durante 3 h sob argônio, diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O material bruto foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer o composto do título (0,36 g, 71 %).
[01465]Etapa 2: síntese de ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin- 3-il)metil)carbamoil)-2-metil-5-(tiazol-2-il)-fenil)-(etil)-amino)-ciclo-hexil)-carbamato de terc-butila
[01466]A uma solução agitada de 3-(((1r,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)-amino)- ciclo-hexil)-(etil)-amino)-2-metil-5-(tiazol-2-il)benzoato de metila (0,36 g, 0,76 mmol) em etanol (5 mL) foi adicionado NaOH aquoso (0,064 g, 1,60 mmol) na temperatura ambiente. A mistura foi aquecida a 60 °C durante 1 h. e o concentrado sob pressão reduzida. O concentrado foi acidificado ao pH 4 e extraído com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas para fornecer 0,26 g de ácido bruto. A uma solução agitada de ácido bruto (0,26 g, ca. 0,56 mmol) e 3-(amino metil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,17g, 1,13 mmol) em DMSO (3 mL) foi adicionado PYBOP (0,44g, 0,85 mmol) na temperatura ambiente. Depois da agitação durante a noite, a mistura foi vertida em gelo e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas, e concentradas sob pressão reduzida para fornecer o composto do título (0,15 g) que foi usado diretamente na etapa seguinte.
[01467]Etapa 3: síntese de 3-(((1r,4r)-4-aminociclo-hexil)(etil)amino)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(tiazol-2-il)benzamida
[01468]A uma solução agitada de ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metil-5-(tiazol-2-il)-fenil)-(etil)-amino)-ciclo-hexil)- carbamato de terc-butila (0,15 g, 0,25 mmol) em diclorometano (3 mL) foi adicionado TFA (1 mL). A mistura foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h., concentrada sob pressão reduzida e a solução de NaHCO3 foi adicionada ao concentrado. Depois da extração com MeOH/DCM a 10 %, as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, secas em anidro Na2SO4 e concentradas sob pressão reduzida para fornecer 0,11 g do composto do título que foi usado diretamente na etapa seguinte.
[01469]Etapa 4: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil-3- (((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(tiazol-2-il)-benzamida sal de TFA
[01470]A uma solução agitada de 3-(((1r,4r)-4-aminociclo-hexil)(etil)amino)-N- ((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(tiazol-2-il)benzamida (0,1 g, 0,20 mmol) em metanol (3 mL) foi adicionada formalina (0,06 g, 2,0 mmols) a 0 °C. Cianoboro-hidreto de sódio (0,025 g, 0,59 mmol) foi adicionado, e a mistura foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h. A mistura de reação foi resfriada com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas sob pressão reduzida a um sólido que foi purificado por HPLC preparativa para fornecer o composto do título como um sal de TFA (0,06 g, 56 %). Dados Analíticos de TFA Sal: LCMS: 522,60 (M + 1)+; HPLC: 92,00 % (@ 210 - 370 nm) (Rt; 4,255; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (bs, 1H), 9,39 (bs, 1H), 8,30 (t, 1H), 7,90 (d, 1H, J = 3,2 Hz), 7,78 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 7,71 (s, 1H), 7,47 (s, 1H), 5,88 (s, 1H), 4,30 (d, 2H, J = 4 Hz), 3,11 (m, 3H), 2,77 - 2,68 (m, 7H), 2,24 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,96 - 1,89 (m, 4H), 1,45 (m, 4H), 0,84 (t, 3H, J = 6,4 Hz).
[01471]Exemplo 169: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(1-metil-1H- imidazol-2-il)-benzamida
Figure img0257
[01472]Etapa 1: síntese de 3-(((1r,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)-amino)-ciclo- hexil)-(etil)amino)-2-metil-5-(1-metil-1H-imidazol-2-il)benzoato de metila
[01473]A uma solução agitada de 3-(((1r,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)-amino)- ciclo-hexil)-(etil)-amino)-2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzoato de metila (0,5 g, 1,15 mmol) e 2-bromo-1-metil-1H-imidazol (0,22 g, 1,38 mmol) em mistura de dioxano/água foi adicionado Cs2CO3 (0,94 g, 2,88 mmols) sob argônio. PdCl2(PPh3)2 (0,08 g, 0,11 mmol) foi adicionado e a mistura foi aquecida a 100 °C durante 4 h sob argônio. Água foi adicionada e a mistura foi extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente foi removido sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer 3-(((1r,4r)-4-((terc- butoxicarbonil)-amino)-ciclo-hexil)-(etil)amino)-2-metil-5-(1-metil-1H-imidazol-2- il)benzoato de metila (0,22 g, 40 %).
[01474]Etapa 2: síntese de ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin- 3-il)metil)carbamoil)-2-metil-5-(1-metil-1H-imidazol-2-il)-fenil)-(etil)-amino)ciclo- hexil)carbamato de terc-butila
[01475]A uma solução agitada de 3-(((1r,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)-amino)- ciclo-hexil)-(etil)amino)-2-metil-5-(1-metil-1H-imidazol-2-il)benzoato de metila (0,22 g, 0,47 mmol) em etanol (3 mL) foi adicionado NaOH aquoso (0,028 g, 0,70 mmol). Depois da agitação a 60 °C durante 1 h., a mistura foi concentrada sob pressão reduzida, acidificada ao pH 4 e extraída com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas para fornecer 0,16 g de ácido bruto. A uma solução agitada do ácido bruto (0,16g, 0,35 mmol) e 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin- 2(1H)-ona (0,11 g, 0,70 mmol) em DMSO (3 mL) foi adicionado PYBOP (0,27g, 0,53 mmol). Depois da agitação durante a noite a mistura foi vertida em água gelada e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer 0,12 g de ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metil-5-(1- metil-1H-imidazol-2-il)-fenil)-(etil)-amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila que foi usada diretamente sem purificação adicional.
[01476]Síntese de 3-(((1r,4r)-4-aminociclo-hexil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2- oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-metil-1H-imidazol-2-il)benzamida
[01477]A uma solução agitada de ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metil-5-(1-metil-1H-imidazol-2-il)-fenil)-(etil)- amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butila (0,12 g, 0,20 mmol) em DCM (3 mL) foi adicionado TFA (1 mL). Depois da agitação durante 1 h. na temperatura ambiente, a mistura foi concentrada sob pressão reduzida. Solução de NaHCO3 saturada foi adicionada ao resíduo seguido por extração com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura; secas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer 0,1 g de 3-(((1r,4r)-4-aminociclo-hexil)(etil)amino)- N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-metil-1H-imidazol-2- il)benzamida que foi usado diretamente sem purificação adicional.
[01478]Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3- (((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(1-metil-1H-imidazol-2- il)benzamida sal de TFA
[01479]A uma solução agitada de 3-(((1r,4r)-4-aminociclo-hexil)(etil)amino)-N- ((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-metil-1H-imidazol-2- il)benzamida (0,1 g, 0,20 mmol) em metanol (3 mL) foi adicionada formalina (0,06 g, 2,0 mmols) a 0 °C. Cianoboro-hidreto de sódio (0,025 g, 0,59 mmol) foi adicionado, e a mistura foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h. Água foi adicionada seguido por extração com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas sob pressão reduzida a um sólido que foi purificado por HPLC preparativa para fornecer o composto do título como um sal de TFA (0,03 g, 28 %). Dados Analíticos de TFA Sal: LCMS: 519,65 (M + 1)+; HPLC: 96,10 % (@ 254 nm) (Rt; 3,976; Método: Coluna: YMC ODS-A 1 50 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,47 (bs, 1H), 9,60 (bs, 1H), 8,24 (bs, 1H), 7,82 (s, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,52 (s, 1H), 7,35 (s, 1H), 5,87 (s, 1H), 4,30 (bs, 2H), 3,86 (s, 3H), 3,10 (m, 3H), 2,69 (bs, 7H), 2,28 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,96 - 1,88 (m, 4H), 1,46 (m, 4H), 0,84 (bs, 3H).
[01480]Exemplo 170: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3- (((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(6-(4-metilpiperazin-1- il)piridin-3-il)benzamide
Figure img0258
[01481]Composto 170 foi preparado com o método similar àquele descrito no Exemplo 183 abaixo.
[01482]Dados Analíticos: LCMS: 614,75 (M + 1)+; HPLC: 98,17 % (@ 210 - 370 nm) (Rt; 3,598; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 -12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (bs, 1H), 10,10 (bs, 1H), 9,68 (bs, 1H), 8,21 (m, 2H), 7,47 (s, 1H), 7,38 (s, 1H), 7,16 (s, 1H), 7,05 (d, 1H, J = 4,8 Hz), 5,87 (s, 1H), 4,54 - 4,51 (m, 2H), 4,30 (d, 2H, J = 4 Hz), 3,53 (m, 2H), 3,13 (m, 7H), 2,86 (s, 3H), 2,76 - 2,68 (m, 7H), 2,24 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,97 - 1,90 (m, 4H), 1,43 (m, 4H), 0,83 (t, 3H, J = 6,4 Hz).
[01483]Exemplo 171: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3- (etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-5-(6-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3- il)benzamide
Figure img0259
[01484]Composto 171 foi preparado com o método similar àquele descrito no Exemplo 183 abaixo.
[01485]Dados Analíticos: LCMS: 573,75 (M + 1)+; HPLC: 95,92 % (@ 210 - 370 nm) (Rt; 3,891; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (bs, 1H), 8,19 (t, 1H), 8,14 (d, 1H, J = 4,8 Hz), 7,44 (s, 1H), 7,32 (s, 1H), 6,97 (s, 1H), 6,88 (d, 1H, J = 4,8 Hz), 5,86 (s, 1H), 4,29 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 3,84 - 3,81 (m, 2H), 3,54 (m, 4H), 3,28 - 3,22 (m, 2H), 3,10 - 3,02 (m, 3H), 2,42 (m, 4H), 2,24 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,66 - 1,50 (m, 4H), 0,82 (t, 3H, J = 6,4 Hz).
[01486]Exemplo 172: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3- (((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(6-(piperazin-1-il)piridin-3- il)benzamide
Figure img0260
[01487]Composto 172 foi preparado com o método similar àquele descrito no Exemplo 183 abaixo.
[01488]Dados Analíticos: LCMS: 600,75 (M + 1)+; HPLC: 99,58 % (@ 210 - 370 nm) (Rt; 3,460; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6,400 MHz) δ 11,46 (bs, 1H), 9,59 (bs, 1H), 8,92 (bs, 2H), 8,47 (s, 1H),8,16(s, 1H), 7,92 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 7,39 (bs, 1H), 7,21 (bs, 1H), 7,01 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 5,87 (s, 1H), 4,29 (d, 2H, J = 5,2 Hz), 3,75 (q, 4H, J = 5,2 Hz), 3,22 (m, 4H), 3,12 (m, 3H), 2,75 (m, 1H), 2,69 (s, 3H), 2,68 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,97 (m, 4H), 1,44 (m, 4H), 0,83 (t, 3H, J = 6,8 Hz).
[01489]Exemplo 173: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3- (etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-5-(6-(piperazin-1-il)piridin-3-il)benzamide
Figure img0261
[01490]Composto 173 foi preparado com o método similar àquele descrito no Exemplo 183 abaixo.
[01491]Dados Analíticos: LCMS: 559,55 (M + 1)+; HPLC: 98,43 % (@ 210 - 370 nm) (Rt; 3,731; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6,400 MHz) δ 11,45 (bs, 1H), 8,86 (s, 2H), 8,48 (bs, 1H), 8,21 (bs, 1H), 7,94 (bs, 1H), 7,45 (bs, 1H), 7,25 (bs, 1H), 7,02 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 5,87 (s, 1H), 4,29 (d, 2H, J = 3,6 Hz), 3,83 (m, 3H), 3,76 (bs, 4H), 3,30 - 3,15 (m, 7H), 3,10 (m, 1H), 2,25 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,75 - 1,50 (m, 4H), 0,84 (t, 3H).
[01492]Exemplo 174: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(pirazin-2-il)- benzamide
Figure img0262
[01493]Etapa 1: síntese de 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)-amino)- ciclo-hexil)(etil)-amino)-2-metilbenzoato de metila
[01494]A uma solução agitada de 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)- amino)-ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoato (10 g, 23 mmols) e acetaldeído (2,99 g, 68 mmols) em dicloroetano (100 mL), foi adicionado ácido acético (8,18 g, 136 mmols) e a reação agitada na temperatura ambiente durante 20 minutos. Triacetoxiboro-hidreto de sódio (14,45 g, 68 mmols) foi adicionado a 0 °C e a mistura foi agitada durante a noite na temperatura ambiente. O solvente foi removido sob pressão reduzida e água foi adicionada seguido por extração com MeOH/DCM a 5 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas para fornecer 9 g do composto do título que foi usado sem purificação adicional.
[01495]Etapa 2: síntese de 3-(((1r,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)-amino)-ciclo- hexil)-(etil)-amino)-2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzoato de metila
[01496]A uma solução agitada de 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)- amino)-ciclo-hexil)(etil)-amino)-2-metilbenzoato de metila (2,0 g, 4,3 mmols) e bis pinacolatodiboro (5,42 g, 21 mmols) em dioxano foi adicionado acetato de potássio (1,25 g, 12,82 mmols) sob argônio. PdCl2(dppf)DCM (0,35 g, 0,42 mmol) foi adicionado e a mistura foi aquecida a 80 °C durante 3 h sob argônio. Água foi adicionada seguido por extração com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer o composto do título (1,3 g, 70 %).
[01497]Etapa 3: síntese de 3-(((1r,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)-amino)-ciclo- hexil)-(etil)-amino)-2-metil-5-(pirazin-2-il)benzoato de metila
[01498]A uma solução agitada de 3-(((1r,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)-amino)- ciclo-hexil)-(etil)-amino)-2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzoato de metila (0,50 g, 1,15 mmol) e 2-bromopirazina (0,24 g, 1,49 mmol) em mistura de dioxano/água,) foi adicionado CS2CO3 (0,94g, 2,89 mmols sob argônio. PdCl2(PPh3)2 (0,08 g, 0,11 mmol) foi adicionado e a mistura foi aquecida a 100 °C durante 3 h. sob argônio. Água foi adicionada seguido por extração com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer o composto do título (0,29 g, 53 %).
[01499]Etapa 4: síntese de ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin- 3-il)-metil)carbamoil)-2-metil-5-(pirazin-2-il)-fenil)-(etil)-amino)-ciclo-hexil)-carbamato de terc-butila
[01500]A uma solução agitada de 3-(((1r,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)-amino)- ciclo-hexil)-(etil)-amino)-2-metil-5-(pirazin-2-il)benzoato de metila (0,29 g, 0,62 mmol) em etanol (3 mL) foi adicionado NaOH aquoso (0,037 g, 0,93 mmol) na temperatura ambiente. Depois da agitação a 60 °C durante 1 h., a mistura foi concentrada sob pressão reduzida, acidificada ao pH 4 e extraída com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas para fornecer 0,24 g de ácido bruto. A uma solução agitada do ácido bruto (0,24g, 0,52 mmol) e 3-(aminometil)-4,6- dimetiIpiridin-2(1H)-ona (0,16g, 1,05 mmol) em DMSO (3 mL) foi adicionado PYBOP (0,41 g, 0,79 mmol). Depois da agitação durante a noite a mistura foi vertida em água gelada e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer 0,3 g do composto do título que foi usado diretamente sem purificação adicional.
[01501]Etapa 5: síntese de 3-(((1r,4r)-4-aminociclo-hexil)(etil)amino)-N-((4,6- dimetil- 2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(pirazin-2-il)benzamida
[01502]A uma solução agitada de ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)-metil)carbamoil)-2-metil-5-(pirazin-2-il)-fenil)-(etil)-amino)-ciclo-hexil)- carbamato de terc-butila (0,3 g, 0,51 mmol) em DCM (3 mL) foi adicionado TFA (1 mL). Depois da agitação na temperatura ambiente durante 1 h., a mistura foi concentrada sob pressão reduzida. Solução de NaHCO3 saturada foi adicionada seguido por extração com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, secas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer 0,24 g do composto do título que foi usado diretamente sem purificação adicional.
[01503]Etapa 6: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(pirazin-2-il)benzamida sal de TFA
[01504]A uma solução agitada de 3-(((1r,4r)-4-aminociclo-hexil)(etil)amino)-N- ((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(pirazin-2-il)benzamida (0,24 g, 0,51 mmol) em metanol (3 mL) foi adicionada formalina (0,15 g, 5,1 mmols) a 0 °C. Cianoboro-hidreto de sódio (0,06 g, 1,0 mmol) foi adicionado, e a mistura foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h. Água foi adicionada seguido por extração com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas sob pressão reduzida. O sólido obtido foi purificado por HPLC preparativa para fornecer o composto do título como um sal de TFA (0,12 g, 47 %). Dados Analíticos de sal de TFA: LCMS: 517,50 (M + 1)+; HPLC: 99,49 % (@ 210 - 370 nm) (Rt; 4,072; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMS0-d6, 400 MHz) δ 11,47 (bs, 1H), 9,45 (bs, 1H), 9,26 (s, 1H), 8,71 (s, 1H), 8,61 (s, 1H), 8,23 (t, 1H), 7,92 (s, 1H), 7,74 (s, 1H), 5,88 (s, 1H), 4,31 (d, 2H, J = 4 Hz), 3,13 (m, 3H), 2,78 (m, 1H), 2,69 (d, 6H, J = 4,8 Hz), 2,28 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 2,12 (s, 3H), 1,96 - 1,92 (m, 4H), 1,45 (m, 3H), 0,84 (t, 3H, J = 6,4 Hz).
[01505]Exemplo 175: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(5-metilpirazin-2- il)-benzamida
Figure img0263
[01506]Etapa 1: síntese de 3-(((1r,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)-amino)-ciclo- hexil)-(etil)-amino)-2-metil-5-(5-metilpirazin-2-il)benzoato de metila
[01507]A uma solução agitada de 3-(((1r,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)-amino)- ciclo-hexil)-(etil)-amino)-2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzoato de metila
[01508](0,40 g, 0,92 mmol) e 2-bromo-5-metilpirazina (0,21 g, 1,19 mmol) em mistura de dioxano/água foi adicionado CS2CO3 (0,75 g, 2,30 mmols) sob argônio. PdCl2(PPh3)2 (0,064 g, 0,092 mmol) foi adicionado e a mistura foi aquecida a 100 °C durante 3 h. sob argônio. Água foi adicionada seguido por extração com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente foi removido sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer o composto do título (0,3 g, 56 %).
[01509]Etapa 2: síntese de ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin- 3-il)metil)carbamoil)-2-metil-5-(5-metilpirazin-2-il)-fenil)-(etil)-amino)-ciclo- hexil)carbamato de terc-butila
[01510]A uma solução de 3-(((1r,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)-amino)-ciclo-hexil)- (etil)-amino)-2-metil-5-(5-metilpirazin-2-il)benzoato de metila (0,29 g, 0,49 mmol) em etanol (3 mL)) foi adicionado NaOH aquoso (0,029 g, 0,75 mmol) na temperatura ambiente. Depois da agitação a 60 °C durante 1 h., a mistura foi concentrada sob pressão reduzida, acidificada ao pH 4 e extraída com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas para fornecer 0,25 g de ácido bruto. A uma solução agitada do ácido bruto (0,25 g, 0,44 mmol) e 3-(aminometil)-4,6- dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,13g, 0,88 mmol) em DMSO (3 mL) foi adicionado PYBOP (0,34g, 0,66 mmol) na temperatura ambiente. Depois que a agitação foi continuada durante a noite, a mistura foi vertida em água gelada e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer 0,2 g do composto do título que foi usado diretamente sem purificação adicional.
[01511]Etapa 3: síntese de 3-(((1r,4r)-4-aminociclo-hexil)(etil)amino)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(5-metilpirazin-2-il)benzamida
[01512]A uma solução agitada de ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metil-5-(5-metilpirazin-2-il)-fenil)-(etil)-amino)-ciclo- hexil)carbamato de terc-butila (0,2 g, 0,33 mmol) em DCM (3 mL) foi adicionado TFA (1 mL). Depois da agitação na temperatura ambiente durante 1 h., a mistura foi concentrada sob pressão reduzida. Solução de NaHCO3 saturada foi adicionada seguido por extração com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, secas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer 0,15 g do composto do título que foi usado diretamente sem purificação adicional.
[01513]Etapa 4: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil-3- (((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(5-metilpirazin-2-il)- benzamida sal de TFA
[01514]A uma solução agitada de 3-(((1r,4r)-4-aminociclo-hexil)(etil)amino)-N- ((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(5-metilpirazin-2- il)benzamida (0,15 g, 0,29 mmol) em metanol (3 mL) foi adicionada formalina (0,089 g 2,98 mmols) a 0 °C. Cianoboro-hidreto de sódio (0,037 g, 0,59 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada na temperatura ambiente durante 1 h. Água foi adicionada seguido por extração com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas sob pressão reduzida. O sólido obtido foi purificado novamente por HPLC preparativa ao composto do título como um sal de TFA (0,12 g, 75 %). Dados Analíticos de sal de TFA: LCMS: 531,50 (M + 1)+; HPLC: 88,93 % (@ 210 - 370 nm) (Rt; 4,130; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,49 (bs, 1H), 9,54 (bs, 1H), 9,10 (s, 1H), 8,59 (s, 1H), 8,23 (t, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,69 (s, 1H), 5,87 (s, 1H), 4,30 (bs, 2H), 3,12 (m, 3H), 2,77 - 2,69 (m, 7H), 2,53 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,95 - 1,91 (m, 4H), 1,44 (m, 4H), 0,83 (t, 3H).
[01515]Exemplo 176: Síntese de 5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil- N-((6-metil-2-oxo-4-propil-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4’-(morfolinometil)-[1,1’- bifenil]-3-carboxam ida
Figure img0264
[01516]Etapa 1: Síntese de 6-metil-2-oxo-4-propil-1,2-di-hidropiridino-3- carbonitrila
[01517]A uma solução agitada de t-BuOK (1 g, 8,9 mmols) em DMSO (15 mL) na temperatura ambiente, foi adicionado composto cianoacetamida (0,824 g, 9,8 mmols) e (E)-hept-3-en-2-ona (1 g, 8,91 mmols). A mistura de reação foi agitada durante 30 min na temperatura ambiente. t-BuOK adicional (3 g, 26,7 mmols) foi adicionado e a reação foi agitada na temperatura ambiente na presença de ar. Em conclusão, ela foi diluída com H2O e lentamente por HCl 4 N. O sólido precipitado foi filtrado, lavado com água e seco. O produto bruto foi triturado com éter para fornecer o composto do título (0,5 g, 33 %).
[01518]Etapa 2: Síntese de 3-(aminometil)-6-metil-4-propilpiridin-2(1H)-ona
[01519]A uma solução de 6-metil-2-oxo-4-propil-1,2-di-hidropiridino-3- carbonitrila (1,3 g, 7,38 mmols) em metanol e solução de amônia aq. (50 mL, 9:1), quantidade catalítica de Raney Níquel foi adicionada. A massa de reação foi agitada na temperatura ambiente sob pressão de hidrogênio (pressão por balão) durante 5 h. Em conclusão de reação, ela foi filtrada através de leito de celite e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer o composto do título (1,2 g, 92 %).
[01520]Etapa 3: Síntese de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida
[01521]NaOH aquoso (2,36 g, 59,15 mmols) foi adicionado a uma solução de 5-bromo-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoato de metila (14 g, 39,43 mmols) em etanol (100 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Depois da conclusão da reação, etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado usando HCl diluído até o pH 6 e o pH 4 foi ajustado usando ácido cítrico. A extração foi realizada usando acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas, fornecendo o ácido respectivo (13,9 g, 99 %).
[01522]O ácido acima (0,6g, 1,75 mmol) depois foi dissolvido em DMSO (5 mL) e 3-(aminometil)-6-metil-4-propilpiridin-2(1H)-ona (0,64 g, 3 mmols) e trietil amina (0,49 g, 5,26 mmols) foi adicionada à mesma. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 15 min antes de PyBOP (1,36 g, 2,63 mmols) foi adicionado à mesma e a agitação foi continuada durante a noite. Depois da conclusão da reação, a mistura de reação foi vertida em gelo, extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas para obter produto bruto; que em seguida, purificado por lavagens com solvente para fornecer 5 o composto do título (0,75 g, 84,7 %).
[01523]Etapa 4: Síntese de 5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-N- ((6-metil-2-oxo-4-propil-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamida
[01524]A uma solução agitada de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (0,3 g, 0,59 mmol) e ácido 4-((morfolino)metil) fenilborônico éster pinacólico (0,22 g, 0,71 mmol) em mistura de dioxano/água (5 mL + 1 mL), Na2CO3 (0,23 g, 2,14 mmols) foi adicionado e a solução foi purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (0,068 g, 0,059 mmol) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 10 min. A massa de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer o composto do título (0,25 g, 70 %). LCMS: 601,55 (M + 1)+; HPLC: 97,21 % (@ 210 - 370 nm) (Rt; 4,380; Método: Coluna: YMC ODS-A 1 50 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (bs, 1H), 8,16 (bs, 1H), 7,57 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,38 (t, 3H, J = 6,8 Hz), 7,21 (s, 1H), 5,89 (s, 1H), 4,30 (m, 2H), 3,84 - 3,82 (m, 2H), 3,57 (bs, 3H), 3,48 (s, 3H), 3,28 - 3,22 (m, 2H), 3,09 - 3,02 (m, 3H), 2,36 (bs, 4H), 2,25 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,67 - 1,54 (m, 6H), 0,93 (t, 3H, J = 7 Hz), 0,84 (t, 3H). 2H ligado em pico de solvente.
[01525]Exemplo 177: Síntese de N-((5-bromo-4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’- (morfolinometil)-[1, 1 ’-bifenil]-3-carboxam ida
Figure img0265
[01526]Etapa 1: Síntese de 5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’- (morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-carboxilato de metila
[01527]A uma solução agitada de 5-bromo-3-(etil-(tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)-2-metilbenzoato de metila (1 g, 2,82 mmols) e ácido 4-((morfolino)metil) fenilborônico éster pinacólico (1,03 g, 3,38 mmols) em mistura de dioxano/água (10 mL + 2 mL), Na2CO3 (1,08 g, 10,14 mmols) foi adicionado e a solução purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, Pd(PPh3)4 (0,325 g, 0,28 mmol) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 10 min. A massa de reação foi aquecida a 100 °C durante 2 h. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica para fornecer o composto do título (0,75 g, 59 %).
[01528]Etapa 2: Síntese de 5-bromo-4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridino-3- carbonitrila:
[01529]A uma suspensão agitada de 4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridino-3- carbonitrila (5 g, 33,78 mmols) em AcOH (25 mL) foi adicionado bromo às gotas (2,5 mL) na temperatura ambiente. A solução resultante foi agitada durante 1 h. O solvente foi removido sob pressão reduzida. O sólido obtido foi recristalizado em EtOH quente e H2O para fornecer o composto do título como um sólido branco (5,5 g, 72 %).
[01530]Etapa 3: Síntese de 3-(aminometil)-5-bromo-4,6-dimetilpiridin-2(1H)- ona
[01531]A uma solução agitada de 5-bromo-4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridino-3- carbonitrila (1 g, 4,44 mmols) e NiCl2,6H2O (0,21 g, 0,89 mmol) em metanol a 0 °C, NaBH4 (0,68 g, 17,78 mmols) foi adicionado às porções. A mistura de reação depois foi agitada na temperatura ambiente durante o período da noite. Em conclusão, ela foi acidificada usando 3N HCl e agitada na temperatura ambiente durante 3 h. O solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi lavado com éter dietílico e basificado com NH4OH aq. O composto foi extraído em MeOH a 10 % em DCM e seco em Na2SO4 anidro para fornecer o composto do título (0,96 g, 94 %) que foi usado como tal para a reação de ligação.
[01532]Etapa 4: Síntese de N-((5-bromo-4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]- 3-carboxamida
[01533]NaOH aquoso (0,06 g, 1,66 mmol) foi adicionado a uma solução de composto 7 (0,5 g, 1,11 mmol) em EtOH:H2O (4:1) (10 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Depois da conclusão da reação, etanol foi removido sob pressão reduzida e a massa de reação foi acidificada usando HCl diluído até o pH 6 e o pH 4 foi ajustado usando ácido cítrico. A extração foi realizada usando MeOH a 10 % em DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas fornecendo o respectivo ácido (0,35 g, 72 %).
[01534]O ácido acima (0,266 g, 0,61 mmol) depois foi dissolvido em DMSO (2,5 mL) e 3-(aminometil)-5-bromo-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,42 g, 1,83 mmol) e trietil amina (0,095 g, 0,91 mmol) foram adicionados ao mesmo. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 15 min antes de PYBOP (0,63 g, 1,22 mmol) foi adicionada à mesma e a agitação foi continuada durante a noite. Depois da conclusão da reação, a massa de reação foi vertida em gelo, extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas para obter produto bruto; que em seguida, purificado por lavagens com solvente para fornecer o composto do título (0,035 g, 7,6 %).
[01535]LCMS: 653,65 (M + 1)+, HPLC: 89,23 % (@ 210 - 370 nm) (Rt;4,421; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,88 (bs, 1H), 8,30 (bs, 1H), 7,76 (m, 2H), 7,57 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,44 (bs, 1H), 7,27 (bs, 1H), 4,39 (m, 4H), 3,99 - 3,96 (m, 5H), 3,84 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 3,65 - 3,62 (m, 2H), 3,28 - 3,23 (m, 4H), 3,12 (m, 4H), 2,35 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 1,65 - 1,55 (m, 4H), 0,84 (t, 3H).
[01536]Exemplo 178: 4-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamide
Figure img0266
[01537]Composto 178 foi preparado com o método similar àquele descrito no Exemplo 177.
[01538]Dados Analíticos: LCMS: 593,60 (M + 1)+; HPLC: 95,50 % (@ 210 - 370 nm) (Rt; 4,566; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 8,34 (m, 1H), 7,61 - 7,24 (m, 6H), 5,86 (s, 1H), 4,29 (m, 2H), 3,86 - 3,84 (m, 2H), 3,57 - 3,49 (m, 6H), 3,25 - 3,16 (m, 5H), 2,36 (m, 4H), 2,21 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,68 - 1,58 (m, 4H), 0,86 (t, 3H).
[01539]Exemplo 179: Síntese de 5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((5- fluoro-4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’- bifenil]-3-carboxamida
Figure img0267
[01540]Etapa 1: Síntese de 5-fluoro-4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridino-3- carbonitrila
[01541]A uma solução agitada de 2-cianoacetamida (689 mg, 8,2 mmols) em anidro EtOH (7,0 ml) a 75 °C, foi adicionado 3-fluoropentano-2,4-diona (880 mg, 7,5 mmols), seguido por piperidina (96 μL, 0,97 mmol). A mistura de reação foi agitada nesta temperatura durante 3 horas e a mistura de reação deixada atingir a temperatura ambiente antes de ser armazenada no refrigerador durante 4 dias. O sólido bege foi coletado por filtração e enxaguado com EtOH frio (4 x 0,4 ml) até que o filtrado se tornou claro. O sólido bege resultante foi seco à vacuo a 40 °C durante 5 horas para fornecer o composto do título (733 mg, 58 %) como um sólido bege. LC-MS 97 %, 1,18 min (método LC-MS de 3,5 minutos); m/z = 166,9, RMN de 1H (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 13,67 (br. s., 1H) 2,46 (d, J = 2,05 Hz, 3H) 2,45 (d, J = 2,84 Hz, 3H).
[01542]Etapa 2: Síntese de 3-(aminometil)-5-fluoro-4,6-dimetil-1,2-di- hidropiridin-2-ona
[01543]Uma solução de 0,05M 5-fluoro-4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridino-3- carbonitrila (731 mg, 4,4 mmols) em 1,75M NH3/MeOH (87 ml) foi passado através do H-Cube a 80 °C e 50 bar em uma taxa de fluxo de 1 ml/min. A solução resultante foi concentrada a vacuo. O sólido resultante foi dividido em 2 lotes e 350 mg do produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (cartucho de 25 g SNAP, Isolera, MeOH a 0 a 25 % (contendo 10 % de NH4OH):CH2Cl2) para fornecer o composto do título (307 mg, 20 %) como um sólido branco amarelado e uma mistura 1:1 de produto:material de partida. LC-MS (ELS) 100 %, 0,23 min (método LC-MS de 3,5 minutos), m/z = 170,9, RMN de 1H (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 3,79 (s, 2H) 2,31 (d, J = 2,84 Hz, 3H) 2,25 (d, J = 2,05 Hz, 3H).
[01544]Etapa 3: Síntese de 5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((5-fluoro- 4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]- 3-carboxamida
[01545]Uma solução agitada de ácido 3-[etil(oxan-4-il)amino]-2-metil-5-[4- (morfolin-4-ilmetil)fenil]benzoico (100 mg, 0,22 mmol) em DMF anidra (4,0 ml) a 0 °C sob um balão de nitrogênio, foi tratada com HATU (99 mg, 0,26 mmol) e DIPEA (75 μL, 0,43 mmol) às gotas. A solução resultante foi agitada durante 10 minutos e depois tratada com 3-(aminometil)-5-fluoro-4,6-dimetil-1,2-di-hidropiridin-2-ona (50 %, 81 mg, 0,24 mmol). A suspensão resultante foi agitado a 0 °C durante 30 minutos e depois agitada na temperatura ambiente durante 8 horas. A mistura de reação foi particionada entre água (20 ml) e CH2Cl2 (15 ml). As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com CH2Cl2 (3 x 15 ml). Os orgânicos combinados foram lavados com uma solução saturada de NaHCO3 (aq) (40 ml), água (2 x 25 ml), salmoura (20 ml), secos (MgSO4), filtrados e concentrados à vacuo. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia instantânea em coluna (cartucho de 10 g SNAP, Isolera, 0 a 6 % MeOH/CH2Cl2) e depois dissolvido em uma mistura de EtOAc (40 ml) e CH2Cl2 (10 ml), e lavado com água (6 x 30 ml), salmoura (2 x 30 ml), seco (MgSO4), filtrado e concentrado à vacuo. O sólido foi completamente seco à vacuo a 40 °C durante 40 horas para fornecer 5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((5-fluoro-4,6-dimetil-2- oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3- carboxamida (93 mg, 73 %) como um sólido branco pulverulento. LC-MS 100 %, 2,76 min (método LC-MS de 7 minutos), m/z = 591,2; RMN de 1H (500 MHz, Clorofórmio- d) δ 11,79 (s, 1H), 7,44 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,34 (d, J = 8,4 Hz, 3H), 7,08 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,56 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 3,95 (d, J = 11,2 Hz, 2H), 3,76 - 3,66 (m, 4H), 3,51 (s, 2H), 3,31 (td, J = 11,3, 2,7 Hz, 2H), 3,10 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 3,00 (tt, J = 9,6, 4,6 Hz, 1H), 2,45 (s, 4H), 2,43 (d, J = 1,8 Hz, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,13 (d, J = 2,7 Hz, 3H), 1,74 - 1,62 (m, 4H), 0,89 (t, J = 7,0 Hz, 3H). Um próton considerado ser coincidente com pico de solvente.
[01546]Exemplo 180: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3- (((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(1-metil-1H-imidazol-4- il)benzamide
Figure img0268
[01547]Composto 180 foi preparado com o método similar àquele descrito no Exemplo 169.
[01548]Dados Analíticos: LCMS: 519,55 (M + 1)+; HPLC: 89,93 % (@ 210 - 370 nm) (Rt; 3,676; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,50 (bs, 1H), 9,77 (bs, 1H), 9,11 (s, 1H), 8,20 - 8,17 (m, 2H), 7,60 (s, 1H), 7,38 (s, 1H), 5,87 (s, 1H), 4,30 (d, 2H, J = 5,2 Hz), 3,87 (s, 3H), 3,11 (m, 3H), 2,68 - 2,67 (m, 6H), 2,72 - 2,64 (m, 1H), 2,22 (s, 6H), 2,11 (s, 3H), 1,99 - 1,87 (m, 4H), 1,48 - 1,40 (m, 4H), 0,81 (t, 3H, J = 6,8 Hz).
[01549]Exemplo 181: 4’-(azetidino-1-carbonil)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-5-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cicloexil)(etil)amino)-4-metil-[1,1’- bifenil]-3-carboxam ida
Figure img0269
[01550]Dados Analíticos: LCMS: 598,60 (M + 1)+; HPLC: 94,88 % (@ 210 - 370 nm) (Rt; 3,823; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,44 (bs, 1H), 9,56 (bs, 1H), 8,21 (m, 1H), 8,05 - 7,96 (m, 4H), 7,54 (bs, 1H), 7,38 (bs, 1H), 5,87 (s, 1H), 4,82 - 4,81 (m, 2H), 4,31 (d, 2H, J = 4,8 Hz), 3,69 (t, 2H, J = 5,6 Hz), 3,17 - 3,14 (m, 3H), 2,77 (bs, 1H), 2,69 - 2,68 (m, 6H), 2,26 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,97 - 1,91 (m, 4H), 1,46 - 1,44 (m, 4H), 0,85 (t, 3H, J = 6,8 Hz). 2H é ligado em pico de solvente.
[01551]Exemplo 182: N3-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-
[01552](((1r,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-N4’-(3-hidroxipropil)-4- metil-[1,1’-bifenil]-3,4’-dicarboxamida
Figure img0270
[01553]Dados Analíticos: LCMS: 617,70 (M + 1)+; HPLC: 93,27 % (@ 210 - 370 nm) (Rt; 4,009; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 ml./min.: Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 - 12 min B a 5 %): RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (bs, 1H), 9,47 (bs, 1H), 8,48 (m, 1H), 8,23 (bs, 1H), 7,93 - 7,73 (m, 4H), 7,47 (bs, 1H), 7,31 (bs, 1H), 5,87 (s, 1H), 4,31 - 4,30 (m, 2H), 3,47 (t, 2H, J = 6 Hz), 3,34 - 3,33 (m, 2H), 3,13 (bs, 3H), 2,69 - 2,68 (m, 6H), 2,26 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,96 (m, 4H), 1,69 (t, 2H, J = 6,6 Hz), 1,45 (m, 4H), 0,85 (t, 3H). 1H é ligado em pico de solvente.
[01554]Exemplo 183: 3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-N-((6- metil-2-oxo-4-propil-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(6-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3- il)benzamide
Figure img0271
[01555]Dados Analíticos: LCMS: 601,65 (M + 1)+; HPLC: [99,85 % (@ 210 nm- 370 nm) (Rt; 4,256; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter a 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,48 (bs, 1H), 9,84 (bs, 1H), 8,47 (bs, 1H), 8,17 (bs, 1H), 7,94 (s, 1H), 7,41 (m, 2H), 7,04 (d, 1H, J = 8 Hz), 5,89 (s, 1H), 4,44 (d, 2H, J = 12Hz), 4,30 (s, 2H), 3,84 (bs, 2H), 3,52 (d, 2H, J = 9Hz), 3,12 - 3,24 (m, 8Hz), 2,85 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,54 - 1,65 (m, 6H), 0,84 - 0,94 (m, 6H). 3 Prótons ligados em pico de solvente.
[01556]Exemplo 184: Síntese de 3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil- N-((6-metil-2-oxo-4-propil-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(6-(piperazin-1-il)piridin-3- il)benzamide
Figure img0272
[01557]Uma solução de 5-bromo-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2- metil-N-((6-metil-2-oxo-4-propil-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)benzamida (0,7 g, 1,38 mmol), éster de boronato respectivo (0,601 g, 2,08 mmols), e tetracis (0,160 g, 0,138 mmol) em dioxano (10 mL) foi purgada com argônio durante 10 min. A esta, Na2CO3 aq. (0,529 g, 4,99 mmols, 2 mL) foi adicionado e novamente desgaseificado durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 16 h. Em conclusão, a mesma foi concentrada para obter material bruto que foi purificado em coluna para fornecer o composto do título (0,50 g, 61,5 %). Dados Analíticos: LCMS: 587,55 (M + 1)+; HPLC: 97,87 % (@ 210 a 370 nm) (Rt; 4,217; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (bs, 1H), 8,38 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 8,14 (t, 1H, J = 4,4 Hz), 7,78 (dd, 1H, J = 2,4, 9,2 Hz), 7,35 (d, 1H, J = 1,2 Hz), 7,15 (d, 1H, J = 1,2 Hz), 6,85 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 5,88 (s, 1H), 4,29 (d, 2H, J = 4,8 Hz), 3,82 (d, 2H, J = 10 Hz), 3,43 (t, 4H, J = 5,2 Hz), 3,24 (t, 2H, J = 11,2 Hz), 3,10 - 2,98 (m, 3H), 2,78 (t, 4H, J = 4,8 Hz), 2,22 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,67- 1,47 (m, 6H), 0,93 (t, 3H, J = 7,2 Hz), 0,81 (t, 3H, J = 6,8 Hz).
[01558]Exemplo 185: Síntese de 3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4- isopropil-6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(piperazin-1-il)piridin- 3-il)benzamide
Figure img0273
[01559]Uma solução de 5-bromo-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4- isopropil- 6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0,5 g, 0,99 mmol), 1-(5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2-il)piperazina (0,43 g, 1,48 mmol), e tetracis (0,114 g, 0,09 mmol) em dioxano (7 mL) foi purgada com argônio durante 10 min. A esta, Na2CO3 aq. (0,377 g, 3,5 mmols, 2 mL) foi adicionado e novamente desgaseificado durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 16 h. Em conclusão, a mesma foi concentrada para obter material bruto que foi purificado em coluna para fornecer o composto do título (0,35 g, 60,13 %).
[01560]Dados Analíticos: LCMS: 586,36(M + 1)+; HPLC: 97,03 % (@ 210 - 370 nm) (Rt; 4,10; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (bs, 1H), 8,37 (bs, 1H), 8,17 (bs, 1H), 7,78 (d, 1H, J = 7,6Hz), 7,35 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 6,85 (d, 1H, J = 8,8Hz), 5,99 (s, 1H), 4,34 (d, 2H, J = 4Hz), 3,83 - 3,81 (m, 2H), 3,42 (bs, 4H), 3,27 - 3,21 (m, 3H), 3,02 - 3,01 (m, 3H), 2,77 (bs, 4H), 2,22 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 1,67 - 1,49 (m, 4H), 1,13 (s, 3H), 1,12 (s, 3H), 0,81 (t, 3H, J = 6,4Hz).
[01561]Exemplo 186: Síntese de 3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4- isopropil-6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(4-metilpiperazin-1- il)piridin-3-il)benzamide
Figure img0274
[01562]Etapa 1: Síntese de 4-isopropil-6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridino-3- carbonitrila
[01563]A uma solução agitada de 2-cianoacetamida (4,1 g, 49 mmols) e t-BuOK (4,9 g, 44,6 mmols) em DMSO a 0 °C, 5-metil-hex-3-en-2-ona (5 g, 44,6 mmols) foi adicionada e agitada durante 30 min. t-BuOK adicional (15 g, 133,9 mmols) foi adicionado à mistura de reação e agitado na temperatura ambiente durante 1 h adicional. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com água (50 mL) e lentamente acidificada com HCl 4 N. O precipitado foi filtrado e lavado com água e seco para fornecer o composto B (2,2 g, 28,2 %).
[01564]Etapa 2: Síntese de 3-(aminometil)-4-isopropil-6-metilpiridin-2(1H)-ona
[01565]A uma solução de composto de ciano B (2,2 g, 12,5 mmols) em metanol e solução de amônia aq. (10 mL, 4:1), quantidade catalítica de Raney Níquel foi adicionada. A massa de reação foi agitada na temperatura ambiente sob pressão de hidrogênio (pressão por balão) durante 4 h. Na conclusão da reação, a mesma foi filtrada através de leito de celite e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer o composto do título (2 g, 91 %).
[01566]Etapa 3: Síntese de 5-bromo-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-N- ((4-isopropil-6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
[01567]Ácido 5-bromo-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoico (2,0 g, 0,0058 mol) foi dissolvido em DMSO (20 mL) e 3-(aminometil)-4-isopropil-6- metilpiridin-2(1H)-ona (2,1 g, 11,7 mmols) e trietil amina (0,585 g, 5,8 mmols) foi adicionada à mesma. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente durante 15 min antes que PyBOP (4,5 g, 8,7 mmols) tenha sido adicionado à mesma e a agitação foi continuada durante a noite. Depois da conclusão da reação, a mistura de reação foi vertida em gelo e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas para obter produto bruto; que, em seguida, foi purificado por lavagens com solvente para fornecer o composto do título (2,0 g, 68,9 %).
[01568]Etapa 4: Síntese de 3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4- isopropil-6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(4-metilpiperazin-1- il)piridin-3-il)benzamida
[01569]Uma solução de 5-bromo-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4- isopropil-6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0,3 g, 0,99 mmol), éster pinacólico de ácido borônico respectivo (0,216 g, 0,715 mmol), e tetracis (0,068 g, 0,0596 mmol) em dioxano (10 mL) foi purgada com argônio durante 10 min. A esta, Na2CO3 aq. (0,227 g, 2,14 mmols, 2 mL) foi adicionado e novamente desgaseificado durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 16 h. Em conclusão, a mesma foi concentrada para obter material bruto que foi purificado usando HPLC prep. para fornecer o composto do título como um sal de TFA (0,12 g, 33,6 %).
[01570]Dados Analíticos de Sal de TFA: MS: 601,55 (M + 1)+. HPLC: 96,78 % (@ 210 a 370 nm) (Rt; 4,197; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,49 (bs, 1H), 9,94 (bs, 1H), 8,493 (d, 1H,6 Hz), 7,957 (bs, 1H), 7,65 - 7,258 (m, 3H), 7,056 (d, 1H, 8,4 Hz), 6,014 (s, 1H), 4,46 (d, 2H, 12,8 Hz), 4,349 (d, 2H, 4,8 Hz), 3,849 (d, 2H, 7,2Hz), 3,530 (d, 2H, 10,8 Hz), 3,28 - 3,075 (m, 10H), 2,85 (s, 3H), 2,26 (bs, 3H), 2,14 (s, 3H), 1,64 (bs, 2H), 1,56 (bs, 2H), 1,14 (s, 3H), 1,12 (s, 3H), 0,845 (t, 3H, 7,6 Hz).
[01571]Exemplo 187: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-5-(6-(4-(1-metilpiperidin-4- il)piperazin-1-il)piridin-3-il)benzamide
Figure img0275
[01572]A uma solução agitada de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-5-(6-(piperazin-1-il)piridin-3- il)benzamida (0,1 g, 0,179 mmol) e 1-metilpiperidin-4-ona (0,04 g, 0,358 mmol) em dicloroetano (2 mL), ácido acético (0,07 mL, 1,07 mmol) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 15 min. Em seguida, triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,113 g, 0,53 mmol) foi adicionado a 0 °C e a reação agitada durante a noite na temperatura ambiente. Em conclusão, a reação foi resfriada com bicarbonato de sódio aquoso, a fase orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por HPLC prep. para fornecer o composto do título como um sal de TFA (0,08 g, 22,72 %).
[01573]Dados Analíticos do sal de TFA: ESMS: 656,41 (M + 1)+; HPLC: [97,76 %. @ 210 nm a 370 nm) (Rt; 3,667; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO- d6, 400 MHz) δ 11,49 (bs, 1H), 10,33 (bs, 1H), 9,86 (bs, 1H), 8,49 (bs, 1H), 8,20 (bs, 1H), 7,96 (bs, 1H), 7,24 - 7,39 (m, 2H), 7,07 (d, 1H, J = 9Hz), 5,87 (s, 1H), 4,47 (bs, 2H), 4,28 (d, 2H, J = 4Hz), 3,84 (s, 2H), 3,60 (d, 5H, J = 1 l Hz), 3,16 - 3,28 (m, 7H), 2,99 (bs, 2H), 2,79 (s, 3H), 2,11 -2,25 (m, 11H), 1,87- 1,90 (m, 2H), 1,56 - 1,64 (m, 3H), 0,85 (s, 3H).
[01574]Exemplo 188: Síntese de 3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4- isopropil-6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(4-(1-metilpiperidin-4- il)piperazin-1-il)piridin-3-il)benzamide
Figure img0276
[01575]A uma solução agitada de 3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4- isopropil-6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(piperazin-]-il)piridin- 3-il)benzamida (0,3 g, 0,51 mmol) e 1-metilpiperidin-4-ona (0,086 g, 0,76 mmol) em dicloroetano (5 mL), ácido acético (0,18 g, 3,06 mmols) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 20 minutos. Em seguida, triacetoxiboro- hidreto de sódio (0,33 g, 1,55 mmol) foi adicionado a 0 °C e a reação agitada na temperatura ambiente durante 2 h. Em conclusão, a reação foi resfriada com bicarbonato de sódio aquoso, a fase orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida para fornecer o material bruto foi purificado por HPLC prep. para fornecer o composto do título (0,12 g, 34,38 %).
[01576]Dados Analíticos: LCMS: 683,45 (M + 1)+; HPLC: 98,65 % (@ 210 a 370 nm) (Rt; 4,04; Método: Coluna: YMC ODS-A 1 50 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,47 (bs, 1H), 10,24 (bs, 1H), 9,79 (bs, 1H), 8,46 (bs, 1H), 8,19 (bs, 1H), 7,92 (bs, 1H), 7,38 (bs, 1H), 7,19 (bs, 1H), 7,06 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 6,0 (s, 1H), 4,47 (bs, 2H), 4,34 (d, 2H, J = 7,6Hz), 3,83(d, 2H J = 8,8Hz), 3,6 (d, 4H, J = 12Hz), 3,43 (m, 1H), 3,27 - 3,16(m, 8H), 2,99 - 2,97 (m, 3H), 2,79 (s, 3H), 2,37 - 2,33 (m,3H), 2,24 (bs, 3H), 2,13 (s, 3H), 1,90- 1,82 (m, 2H), 1,64- 1,53 (m, 4H), 1,13 (s, 3H), 1,12 (s, 3H), 0,83 (t, 3H, J = 6,8Hz)
[01577]Exemplo 189: Síntese de 3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil- N-((6-metil-2-oxo -4-propil-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(6-(4-(1-metilpiperidin-4- il)piperazin -1-il)piridin-3-il)benzamide
Figure img0277
[01578]A uma solução agitada de 3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2- metil-N-((6-metil-2-oxo-4-propil-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(6-(piperazin-1- il)piridin-3-il)benzamida (0,45 g, 0,76 mmol) e 1-metilpiperidin-4-ona (0,173 g, 1,53 mmol) em dicloroetano (10 mL), ácido acético (0,276 g, 4,6 mmols) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 20 minutos. Em seguida, triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,488 g, 2,3 mmol) foi adicionado a 0 °C e a reação agitada na temperatura ambiente durante 2 h. Em conclusão, a reação foi resfriada com bicarbonato de sódio aquoso, a fase orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer o composto do título (0,215 g, 41 %).
[01579]Dados Analíticos: LCMS: 684,45 (M + 1)+; HPLC: 93,41 % (@ 210 nm a 370 nm) (Rt; 4,140; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (bs, 1H), 8,38(s, 1H), 8,13 (bs, 1H), 7,78 (d, 1H, J = 9Hz), 7,35 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 6,8 (d, 1H, J = 9), 5,88 (s, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 4Hz), 3,82 (d, 2H, 10Hz), 3,49 (s, 4H), 3,24 (t, 2H, J = 11 Hz), 3,0 - 3,08 (m, 3H), 2,78 (d, 2H, J = 10Hz), 2,56 (s, 4H), 2,22 (s, 3H), 2,13 (s, 1H), 2,11 (s, 1H), 1,57- 1,86 (m, 6H), 1,46 - 1,55 (m, 6H), 0,91 (t, 3H, J = 8Hz), 0,81 (t, 3H, J = 6Hz).
[01580]Exemplo 190: Síntese de 3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4- isopropil-6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6- (morfolinometil)piridin-3-il)benzamide
Figure img0278
[01581]Etapa 1: Síntese de 3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6- formilpiridin-3-il)-N-((4-isopropil-6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2- metilbenzamida
[01582]Uma solução de 5-bromo-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4- isopropil- 6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0,4 g, 0,793 mmol), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)picolinaldeído (0,28 g, 1,19 mmol) e tetracis (0,091 g, 0,079 mmol) em dioxano (5 mL) foi purgada com argônio durante 10 min. A esta, Na2CO3 aq. (0,301 g, 2,83 mmols) foi adicionado e novamente desgaseificado durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 16 h. Em conclusão, a mesma foi concentrada para obter material bruto que foi purificado em coluna para fornecer o composto do título (0,28g, 66,50 %).
[01583]Etapa 2: Síntese de 3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4- isopropil-6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6- (morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
[01584]A uma solução agitada de 3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6- formilpiridin-3-il)-N-((4-isopropil-6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2- metilbenzamida (0,28 g, 0,528 mmol) e morfolina (0,07 g, 0,79 mmol) em dicloroetano (3 mL), ácido acético (0,19 g, 3,16 mmols) foi adicionado e a reação agitada na temperatura ambiente durante 20 minutos. Em seguida, triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,33 g, 1,55 mmol) foi adicionado a 0 °C e a reação agitada na temperatura ambiente durante 2 h. Em conclusão, a reação foi resfriada com bicarbonato de sódio aquoso, a fase orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida para fornecer o material bruto foi purificado por HPLC prep. para fornecer o composto do título (0,12 g, 38,70 %).
[01585]Dados Analíticos do sal de TFA: LCMS: 601,36 (M + 1)+; HPLC: 95,48 % (@ 210 - 370 nm) (Rt; 4,28; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL., Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO- d6, 400 MHz) δ 11,45 (bs, 1H), 10,45 (bs, 1H), 8,95 (s, 1H), 8,23 - 8,21 (m, 2H), 7,62 - 7,52 (m, 2H), 7,34 (bs, 1H), 6,01 (s, 1H), 4,55 (s, 2H), 4,35 (d, 2H, J = 5,2Hz), 3,84 (bs, 6H), 3,29 - 3,13 (m, 8H), 2,27 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 1,66 - 1,56 (m, 4H), 1,13 (s, 3H), 1,12 (s, 3H), 0,83 (t, 3H, J = 6,8). prótons 2H ligados em pico de solventes.
[01586]Exemplo 191: Síntese de 3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil- N-((6-metil-2-oxo-4-propil-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(6-(morfolinometil)piridin-3- il)benzamide
Figure img0279
[01587]Etapa 1: Síntese de 3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6- formilpiridin-3-il)-2-metil-N-((6-metil-2-oxo-4-propil-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)benzamida
[01588]Uma solução de 5-bromo-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2- metil-N-((6-metil-2-oxo-4-propil-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)benzamida (0,5g, 0,99 mmol), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)picolinaldeído (0,346 g, 1,48 mmol), e tetracis (0,114 g, 0,99 mmol) em dioxano (10 mL) foi purgada com argônio durante 10 min. A esta, Na2CO3 aq. (0,378 g, 3,56 mmol, 1,8 mL) foi adicionado e novamente desgaseificado durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 16 h. Em conclusão, a mesma foi concentrada para obter material bruto que foi purificado em coluna para fornecer o composto do título (0,40 g, 76,0 %).
[01589]Etapa 2: Síntese de 3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-N- ((6-metil-2-oxo-4-propil-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(6-(morfolinometil)piridin-3- il)benzamida
[01590]A uma solução agitada de 3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6- formilpiridin-3-il)-2-metil-N-((6-metil-2-oxo-4-propil-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)benzamida (0,315 g, 0,59 mmol) em EDC (8 mL) a 0 °C, foi adicionada morfolina (0,1 g, 1,18 mmol) e agitada na temperatura ambiente durante 10 min. NaBH(OAc)3 (0,377 g, 1,78 mmol) depois foi adicionado e agitado durante 16 h. Em conclusão, a reação foi resfriada com água. MeOH (8 mL) foi adicionado e as camadas foram separadas e extraídas com MeOH a 10 % em DCM, e purificadas em cromatografia em coluna para fornecer o composto do título (0,2 g, 56 %).
[01591]Dados Analíticos: LCMS: 602,60 (M + 1)+; HPLC: 98,12 % (@ 210 nm a 370 nm) (Rt; 4,374; Método: Coluna: YMC ODS-A 1 50 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,48 (s, 1H), 8,75 (s, 1H), 8,19 (t, 1H, J = 4Hz), 7,99 - 8,02 (m, 1H), 7,49 (t, 2H, J = 8Hz), 7,26 (s, 1H), 5,88 (s, 1H), 4,29 (d, 2H, J = 4Hz), 3,82 (d, 2H, J = 10Hz), 3,59 - 3,61 (m, 6H), 3,24 (t, 2H, J = 12Hz), 2,99 - 3,10 (m, 3H), 2,42 (s, 4H), 2,25 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,48 - 1,67 (m, 6H), 0,926 (t, 3H, J = 8Hz), 0,824 (t, 3H, J = 7Hz).
[01592]Exemplo 192: N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(6- (4-(dimetilamino)piperidin-1-il)piridin-3-il)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2- metilbenzamida
Figure img0280
[01593]Etapa 1: Síntese de (1-(5-(3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)carbamoil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metilfenil)piridin-2- il)piperidin-4-il)carbamato de terc-butila (9):
[01594]A uma solução agitada de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (0,35 g, 0,736 mmol) e éster pinacólico de ácido borônico respectivo (0,35 g, 0,88 mmol) em dioxano (5 mL), Na2CO3 (0,28 g, 2,65 mmols) foi adicionado e a solução foi purgada com argônio durante 15 min. Em seguida, tetracis (0,085 g, 0,073 mmol) foi adicionado e argônio foi purgado novamente durante 10 min. A massa de reação foi aquecida a 100 °C durante 4 h. Em conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com MeOH/DCM a 10 %. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida e purificado em cromatografia em coluna para fornecer o composto do título (0,39 g, 79 %)
[01595]Etapa 2: Síntese de 5-(6-(4-aminopiperidin-1-il)piridin-3-il)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2- metilbenzamida (10):
[01596]A uma solução agitada de (1-(5-(3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-5-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4- metilfenil)piridin-2-il)piperidin-4-il)carbamato de terc-butila (0,39 g, 0,058 mmol) em DCM (4 mL) a 0 °C, TFA (2 mL) foi adicionado e a reação foi agitada durante 1 h na temperatura ambiente. Depois da conclusão, a reação foi concentrada à secura. O resíduo depois foi basificado com solução de bicarbonato sat. aquosa (30 mL) até o pH 8 e a camada aquosa extraída com metanol a 20 % em DCM (50 mL x 4). A fase orgânica combinada foi seca em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o composto do título (0,3 g, 90,63 %) que foi usado para a reação seguinte.
[01597]Etapa 3: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 5-(6-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)piridin-3-il)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)- 2-metilbenzamida
[01598]A uma solução agitada de 5-(6-(4-aminopiperidin-1-il)piridin-3-il)-N- ((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)-2-metilbenzamida (0,3 g, 0,524 mmol) em DCM (3 mL) a 0 °C, foi adicionada solução de formalina aq. entre 37 a 41 % (0,277 g, 1,31 mmol) e agitada temperatura ambiente durante 10 min. NaBH(OAc)3 (0,277 g, 1,31 mmol) depois foi adicionado e agitado durante 2 h. Em conclusão, a reação foi resfriada com água. MeOH (10 mL) foi adicionado e as camadas foram separadas e extraídas com MeOH a 10 % em DCM, e purificadas em coluna para fornecer o composto do título (0,12 g, 38 %).
[01599]Dados Analíticos: LCMS: 602,00 (M + 1)+; HPLC: 97,22 % (@ 210 a 370 nm) (Rt; 3,757; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 1 0 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (bs, 1H), 8,38 (s, 1H), 8. 15 (t, 1H), 7,78 (d, 1H, J = 8,4Hz), 7,35 (s, 1H), 7,16 (s, 1H), 6,90 (d, 1H, J = 8,8Hz), 5,85 (s, 1H), 4,35 (d, 2H, J = 13,2Hz), 4,28 (d, 2H, J = 4Hz), 3,82 (d, 2H, J = 10Hz), 3,30 - 3,20 (m, 2H), 3,10 - 3,00 (m, 3H), 2,90 - 2,80 (m, 2H), 2,28 (s, 6H), 2,22 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,1 0 (s, 3H), 1,90 - 1,80 (m, 3H), 1,70 - 1,60 (m, 2H), 1,60 - 1,50 (m, 2H), 1,40 - 1,30 (m, 2H), 0,82 (t, 3H, J = 6,4Hz).
[01600]Exemplo 193: Síntese de 5-(6-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)piridin-3- il)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-isopropil-6-metil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Figure img0281
[01601]Síntese de (1-(5-(3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(((4-isopropil- 6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-4-metilfenil)piridin-2-il)piperidin- 4-il)carbamato de terc-butila
[01602]Uma solução de 5-bromo-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4- isopropil-6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0,35 g, 0,69 mmol), (1-(5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2-il)piperidin-4- il)carbamato de terc-butila (0,33 g, 0,83 mmol), e tetracis (0,079 g, 0,069 mmol) em dioxano (5 mL) foi purgada com argônio durante 10 min. A esta, Na2CO3 aq. (0,263 g, 2,48 mmols, 2 mL) foi adicionado e novamente desgaseificado durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 16 h. Em conclusão, a mesma foi concentrada para obter material bruto que foi purificado em coluna para fornecer o composto do título (0,31 g, 63 %).
[01603]Síntese de 5-(6-(4-aminopiperidin-1-il)piridin-3-il)-3-(etil(tetra-hidro-2H- piran-4-il)amino)-N-((4-isopropil-6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2- metilbenzamida
[01604](1-(5-(3-(Etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(((4-isopropil-6-metil-2- oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-4-metilfenil)piridin-2-il)piperidin-4- il)carbamato de terc-butila (0,31 g, 0,44 mmol) foi tomado em DCM (5 mL) e TFA (1 mL) foi adicionado ao mesmo e agitado na temperatura ambiente durante 2 h. Depois da conclusão da reação, o solvente foi removido sob pressão reduzida e solução de NaHCO3 saturada foi adicionada ao mesmo. A extração foi realizada usando MeOH/DCM a 10 %; as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura; secas em Na2SO anidro; filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer o composto do título (0,26 g, 98,11 %)
[01605]Síntese de 5-(6-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)piridin-3-il)-3-(etil-(tetra- hidro-2H-piran-4-il)-amino)-N-((4-isopropil-6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)-metil)- 2-metilbenzamida
[01606]A uma solução agitada de 5-(6-(4-aminopiperidin-1-il)piridin-3-il)-3- (etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-isopropil-6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin- 3-il)metil)-2-metilbenzamida (0,26 g, 0,43 mmol) em DCM (4 mL), formalina (0,045 g, 1,51 mmol) foi adicionada e a reação agitada a 0 °C durante 10 minutos. Em seguida, triacetóxiboro-hidreto de sódio (0,23 g, 1,08 mmol) foi adicionado a 0 °C e a reação agitada durante 1 h. Em conclusão, água foi adicionada à massa de reação e a extração foi realizada usando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução de bicarbonato, secas em sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida para fornecer o material bruto que, em seguida, foi purificado por lavagens com solvente para fornecer o composto do título (0,17 g, 62 %).
[01607]Dados Analíticos: LCMS: 629,70 (M + 1)+; HPLC: 97,74 % (@ 210 a 370 nm) (Rt; 4,176; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 10,33 (bs, 1H), 8,39 (d, 1H), 8,16 (t, 1H), 7,81 (d, 1H, J = 6,8Hz), 7,35 (s, 1H), 7,16 (s, 1H), 6,97 (d, 1H, J = 9,2Hz), 5,99 (s, 1H), 4,50 (d, 2H, J = 12,8Hz), 4,34 (d, 2H, J = 4,4Hz), 3,82 (d, 2H, J = 9,6Hz), 3,39 (m, 1H), 3,24 (m, 3H), 3,10 - 3,00 (m, 3H), 2,90 - 2,80 (m, 2H), 2,69 (s, 6H), 2,22 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,10 - 2,05 (m, 2H), 1,70 - 1,60 (m, 2H), 1,60- 1,45 (m, 4H), 1,13 (d, 6H, J = 6,4Hz), 0,82 (t, 3H, J = 6,8Hz).
[01608]Exemplo 194: Síntese de 5-(6-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)piridin-3- il)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-N-((6-metil-2-oxo-4-propil-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)benzamide
Figure img0282
[01609]Síntese de (1-(5-(3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-5-(((6- metil-2-oxo-4-propil-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)fenil)piridino-2-il)piperidin- 4-il)carbamato de terc-butila
[01610]Uma solução de 5-bromo-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2- metil-N-((6-metil-2-oxo-4-propil-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)benzamida (0,5 g, 0,99 mmol), éster pinacólico de ácido borônico respectivo (0,6 g, 1,48 mmol), e tetracis (0,114 g, 0,99 mmol) em dioxano (7 mL) foi purgada com argônio durante 10 min. A esta, Na2CO3 aq. (0,377 g, 3,5 mmols, 2 mL) foi adicionado e novamente desgaseificado durante 10 min. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C durante 16 h. Em conclusão, a mesma foi concentrada para obter material bruto que foi purificado em coluna para fornecer o composto do título (0,40 g, 57,47 %).
[01611]Síntese de 5-(6-(4-aminopiperidin-1-il)piridin-3-il)-3-(etil(tetra-hidro-2H- piran-4-il)amino)-2-metil-N-((6-metil-2-oxo-4-propil-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)benzamida
[01612]A uma solução agitada de (1-(5-(3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)- 4-metil-5-(((6-metil-2-oxo-4-propil-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)fenil)piridino- 2-il)piperidin-4-il)carbamato de terc-butila (0,4 g, 0,00051 mol) em DCM (10 mL) a 0 °C, TFA (10 mL) foi adicionado e a reação foi agitada durante 2 h na temperatura ambiente. Depois da conclusão, a reação foi concentrada à secura. O resíduo depois foi basificado com solução de bicarbonato sat. aquosa (80 mL) até o pH 8 e a camada aquosa extraída com metanol a 20 % em DCM (60 mL x 4). A fase orgânica combinada foi seca em Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o composto do título (0,315 g, 92,1 %) que foi usado para a reação seguinte.
[01613]Síntese de 5-(6-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)piridin-3-il)-3-(etil(tetra- hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-N-((6-metil-2-oxo-4-propil-1,2-di-hidropiridin-3- il)metil)benzamida
[01614]A uma solução agitada de 5-(6-(4-aminopiperidin-1-il)piridin-3-il)-3- (etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-N-((6-metil-2-oxo-4-propil-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)benzamida (0,315 g, 0,52 mmol) em DCM (8 mL) a 0 °C, foi adicionada solução de formalina aq. entre 37 a 41 % (0,078 g, 2,6 mmols) e agitada na temperatura ambiente durante 10 min. NaBH(OAc)3 (0,275 g, 1,3 mmol) depois foi adicionado e agitado durante 2 h. Em conclusão, a reação foi resfriada com água. MeOH (8 mL) foi adicionado e as camadas foram separadas e extraídas com MeOH a 10 % em DCM, e recristalizadas a partir de éter, acetonitrila e pentano para fornecer o composto do título (0,27 g, 82 %).
[01615]Dados Analíticos: LCMS: 630,00 (M + 1)+; HPLC: 98,21 % (@ 210 a 370 nm) (Rt; 4,155; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase Móvel: A; TFA a 0,05 % em água/B; TFA a 0,05 % em acetonitrila; Vol de Inj.: 10 μL, Temp. de Col.: 30 °C; Taxa de Fluxo: 1,4 mL/min.; Gradiente: B a 5 % a B a 95 % em 8 min, Manter durante 1,5 min, 9,51 a 12 min B a 5 %); RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 8,37 (d, 1H, J = 1,6Hz), 8,13 (t, 1H, J = 4,4Hz), 7,76 (dd, 1H, J = 2,4&9,2Hz), 7,35 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 6,89 (d, 1H, J = 8,8Hz), 5,88 (s, 1H), 4,25 - 4,35 (m, 4H), 3,82 (d, 2H, J = 10Hz), 3,24 (m, 2H), 3,10 - 3,00 (m, 3H), 2,90 - 2,80 (m, 2H), 2,35 (m, 1H), 2,22 (s, 3H), 2,18 (s, 6H), 2,11 (s, 3H), 1,80 (m, 2H), 1,70 - 1,60 (m, 2H), 1,60 - 1,45 (m, 4H), 1,40 - 1,30 (m, 2H), 0,93 (t, 3H, J = 7,2Hz), 0,81 (t, 3H, J = 6,8Hz).
[01616]Exemplo 195: Síntese de 3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((5- fluoro-4-isopropil-6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(piperazin-1- il)piridin-3-il)benzamide
Figure img0283
[01617]Etapa 1: Síntese de 5-fluoro-4-isopropil-6-metil-2-oxo-1,2-di- hidropiridino-3- carbonitrila
[01618]A uma solução agitada de 6-metil-2-oxo-4-(propan-2-il)-1,2-di- hidropiridino-3-carbonitrila (225 mg, 1,277 mmol) em MeCN (6 mL) foi adicionado Selectfluor (620 mg, 1,75 mmol). A mistura de reação foi agitada a 50 °C durante 3 h. Depois do esfriamento a 23 °C, a mistura de reação foi concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (EtOAc-heptano a 50 % a 100 % para obter o composto do título (90 mg, 36 %). RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3,39 (m, 1H), 2,44 (d, J = 3,1 Hz, 3H), 1,41 (dd, J = 7,0, 3,1 Hz, 6H); LCMS E-S (M + H) = 195,2.
[01619]Etapa 2: Síntese de 3-(aminometil)-5-fluoro-4-isopropil-6-metilpiridin- 2(1H)-ona
[01620]5-Fluoro-4-isopropil-6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridino-3-carbonitrila (100 mg, 0,515 mmol) em frasco de 100 mL foi dissolvido em uma mistura de MeOH (6 mL) e NH3aq 2 mL (2 mL, 25 %). A redução foi conduzida usando H-Cube com Ni Raney como um catalisador na temperatura ambiente durante 3 a 4 h. Na conclusão da reação (monitorada por TLC), a reação foi concentrada sob pressão reduzida para fornecer o composto do título como um sólido cinza (90 mg, 90 %). RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 4,04 (s, 2H), 3,22 (m, 1H), 2,24 (d, J = 3,4 Hz, 3H), 1,32 (dd, J = 7,0, 1,8 Hz, 6H); LCMS E-S (M + H) = 199,2.
[01621]Etapa 3: 4-(5-(3-(Etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-5- (metoxicarbonil)-4-metilfenil)piridin-2-il)piperazino-1-carboxilato de terc-butila
[01622]Preparado após o procedimento geral da reação de ligação de Suzuki
[01623]RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8,42 (dd, J = 2,4 Hz, 1H), 7,70 - 7,74 (m, 2H), 7,41 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 6,72 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 3,97 (m, 2H), 3,93 (s, 3H), 3,58 (s, 8H), 3,34 (m, 2H), 3,11 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 3,02 (m, 1H), 2,53 (s, 3H), 1,64 - 1,76 (m, 4H), 1,50 (s, 9H), 0,91 (t, J = 7,0 Hz, 3H). MS (ES) (M +H) = 539,5.
[01624]Etapa 4: Síntese de 4-(5-(3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(((5- fluoro-4-isopropil-6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-4- metilfenil)piridin-2-il)piperazino-1-carboxilato de terc-butila
[01625]Hidrólise de 4-(5-(3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-5- (metoxicarbonil)-4-metilfenil)piridin-2-il)piperazino-1-carboxilato de terc-butila, após os métodos similares para os exemplos descritos anteriormente, resultaram em um ácido carboxílico bruto correspondente ácido 5-(6-(4-(terc-butoxicarbonil)piperazin-1- il)piridin-3-il)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoico. Este ácido depois foi ligado com 3-(aminometil)-5-fluoro-4-isopropil-6-metilpiridin-2(1H)-ona após os métodos similares descritos anteriormente. Depois da purificação por HPLC em fase reversa (ACN-H2O contendo ácido fórmico a 0,1 %), o composto do título foi obtido. RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,33 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 7,81 (dd, J = 2,6, 8,8 Hz, 1H), 7,41 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,26 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,91 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 4,54 (s, 2H), 3,92 (m, 2H), 3,46 - 3,56 (m, 9H), 3,34 (m, 2H), 3,07 - 3,18 (m, 3H), 2,33 (s, 3H), 2,24 (d, J = 3,2 Hz, 3H), 1,74 - 1,77 (m, 2H), 1,62 - 1,69 (m, 2H), 1,49 (s, 9H), 1,37 (dd, J = 1,6, 6,8 Hz, 6H), 0,90 (t, J = 6,8 Hz, 3H); MS (ES) (M + H) 705,7.
[01626]Etapa 5: Síntese de formiato de 3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)- N-((5-fluoro-4-isopropil-6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)etil)-2-metil-5-(6- (piperazin-1-il)piridin-3-il)benzamida
[01627]A uma solução de 4-(5-(3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(((5- fluoro-4-isopropil-6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-4- metilfenil)piridin-2-il)piperazino-1-carboxilato de terc-butila (450 mg, 0,639 mmol) em etanol (4,3 mL) na temperatura ambiente foi adicionado HCl em 4 M em dioxano (2 mL, 8,00 mmol). LC/MS depois de 2 h mostrou produto e material de partida remanescente. HCl adicional em 4 M em 1,4-dioxano (1,5 ml, 6,00 mmols) foi adicionado, e LC/MS depois de um total 4 h mostrou que a reação foi concluída. A mistura de reação foi concentrada à secura, submetida à azeotropia com tolueno- metanol para fornecer sal de cloridreto bruto (454 mg, 111 %). 125 mg de amostra de sal de cloridreto bruto foram purificados por HPLC em fase reversa/MS (ACN-H2O, ácido fórmico a 0,1 %) para fornecer formiato de 3-(etil(tetra-hidro-2H- piran-4- il)amino)-N-((5-fluoro-4-isopropil-6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5- (6-(piperazin-1-il)piridin-3-il)benzamida (65 mg) como uma película vítrea incolor. RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,35 - 8,40 (m, 2H), 7,86 (dd, J = 2,4, 8,8 Hz, 1H), 7,42 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,27 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 4,54 (s, 2H), 3,92 (m, 2H), 3,84 (m, 4H), 3,54 (m, 1H), 3,30 - 3,38 (m, 6H), 3,07 - 3,1 8 (m, 3H), 2,33 (s, 3H), 2,24 (d, J = 2,8 Hz, 3H), 1,73 - 1,76 (m, 2H), 1,62 - 1,68 (m, 2H), 1,37 (d, J = 6,8 Hz, 6H), 0,89 (t, J = 6,8 Hz, 3H); MS (ES)(M +H) 605,6.
[01628]Exemplo 196: Síntese de 3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((5- fluoro-4-isopropil-6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(4- metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)benzamide
Figure img0284
[01629]A uma solução de cloridreto de 3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)- N-((5-fluoro-4-isopropil-6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6- (piperazin-1-il)piridin-3-il)benzamida (160 mg, 0,25 mmol) em metanol (2 mL) a 0 °C foi adicionada solução a 35 % de formaldeído em água (0,196 mL, 2,495 mmols). Depois da agitação durante 20 min, cianoboro-hidreto de sódio (31,4 mg, 0,499 mmol) foi adicionado. Depois de 1,5 h a 0 °C, a reação foi resfriada com água (3 mL), banho frio foi removido, a mistura foi agitada durante 10 min. Em seguida, DCM (10 mL) e NaHCO3 aq saturado (1 mL) foram adicionados. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com DCM (2 x 15 mL) e os extratos orgânicos combinados foram secos em sulfato de sódio, filtrados e concentrados. O produto foi purificado por HPLC em fase reversa/MS (ACN-H2O, ácido fórmico a 0,5 %) para fornecer formiato de 3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((5-fluoro-4-isopipil-6-metil-2-oxo-1,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)benzamida (31 mg, 0,047 mmol, 19 % de rendimento) como uma película vítrea incolor.
[01630]RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,42 (br.s, 1H), 8,38 (d, J = 2,4 Hz, 1H),7,85 (dd,J = 2,8, 8,8 Hz, 1H), 7,42 (d,J = 1,6 Hz, 1H), 7,27 (d,J = 1,6 Hz, 1H), 6,98 (d,J = 8,8 Hz, 1H), 4,54 (s, 2H), 3,91 (m, 2H), 3,82 (br. s, 4H), 3,54 (m, 1H), 3,31 - 3,38 (m, 2H), 3,05 - 3,21 (m, 7H), 2,81 (s, 3H), 2,33 (s, 3H), 2,24 (d, J = 2,8 Hz, 3H), 1,73 - 1,76 (m, 2H), 1,58 - 1,68 (m, 2H), 1,37 (dd, J = 1,6, 6,8 Hz, 6H), 0,89 (t, J = 6,8 Hz, 3H); MS (ES) (M + H) 619,7.
[01631]Exemplo 197: Síntese de 3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-N fluoro-4-isopropil-6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6- (morfolinometil)piridin-3-il)benzamide
Figure img0285
[01632]Etapa 1: 3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)arnino)-2-metil-5-(6- (morfolinometil)piridin-3-il)benzoato de metila
[01633]O Composto 197 foi preparado após o procedimento geral da reação de ligação de Suzuki. RMN de 1H (400 MHz, CDC13) δ ppm 8,77 (dd, J = 0,9, 2,4 Hz, 1H), 7,84 (dd, J = 2,4, 7,9 Hz, 1H), 7,78 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,49 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,45 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 3,98 (m, 2H), 3,94 (s, 3H), 3,75 - 3,78 (m, 4H), 3,72 (s, 2H), 3,34 (m, 2H), 3,13 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,03 (m, 1H), 2,56 (m, 7H), 1,64 - 1,76 (m, 4H), 0,92 (t, J = 7,1 Hz, 3H). MS (ES) (M +H) = 454,5.
[01634]Etapa 2: Formiato de 3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((5- fluoro-4-isopropil-6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6- (morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
[01635]A hidrólise de 3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-5-(6- (morfolinometil)piridin-3-il)benzoato de metila, após os métodos similares descrito anteriormente, resultaram no ácido carboxílico correspondente ácido 3-(etil(tetra- hidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6-morfolinometil)piridin-3-il)benzoico. Este ácido depois foi ligado com 3-(aminometil)-5-fluoro-4-isopropil-6-metilpiridin-2(1H)-ona, após um método similar descrito anteriormente. Depois da purificação por HPLC em fase reversa (ACN-H2O contendo ácido fórmico a 0,1 %), o composto do título foi obtido. RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,77 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 8,25 (br. s, 1H), 8,07 (dd, J = 2,3, 8,2 Hz, 1H), 7,61 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,52 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 4,54, (s, 2H), 3,97 (s, 2H), 3,91 (m, 2H), 3,78 (m, 4H), 3,55 (m, 1H), 3,35 (m, 2H), 3,08 - 3,20 (m, 3H), 2,81 (m, 4H), 2,36 (s, 3H), 2,24 (d, J = 2,9 Hz, 3H), 1,60 - 1,77 (m, 4H), 1,37 (dd, J = 1,5, 7,0 Hz, 6H), 0,90 (t, J = 6,9 Hz, 3H). MS (ES) (M +H) 620,6.
[01636]Exemplo 198: Protocolo de Bioensaio e Métodos Gerais
[01637]Protocolo para Ensaios de Enzima PRC2 do Tipo selvagem e Mutante
[01638]Materiais Gerais. S-adenosilmetionina (SAM), S-adenosilhomociteína (SAH), bicina, KCl, Tween20, dimetilsulfóxido (DMSO) e gelatina de pele bovina (BSG) foram adquiridos a partir da Sigma-Aldrich no mais alto nível de pureza possível. Ditiotreitol (DTT) foi adquirido a partir da EMD. 3H-SAM foi adquirido a partir da American Radiolabeled Chemicals com uma atividade específica de 80 Ci/mmol. Flashplates de estreptavidina de 384 poços foram adquiridas a partir da PerkinElmer.
[01639]Substratos. Peptídeos representativos de resíduos de histona H3 humana 21 a 44 contendo uma lisina não modificada 27 (H3K27meO) ou lisina dimetilada 27 (H3K27me2) foram sintetizados com um motivo tag de afinidade ao ligante C terminal G(K-biotina) e uma cap de amida C-terminal pela 21st Century Biochemicals. Os peptídeos foram purificados por cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) em mais do que 95 % de pureza e confirmados por cromatografia líquida-espectrometria de massas (LC-MS). As sequências são listadas abaixo. H3K27meO: ATKAARKSAPATGGVKKPHRYRPGGK(biotina)-amida (SEQ ID NO: 1) H3K27me2: ATKAARK(me2)SAPATGGVKKPHRYRPGGK(biotina)-amida (SEQ ID NO: 2)
[01640]Oligonucleossomas de eritrócitos de galinha foram purificados a partir do sangue da galinha, de acordo com procedimentos estabelecidos.
[01641]Complexos de PRC2 Recombinante. Os complexos de PRC2 humanos foram purificados como complexos de enzima de 4 componentes co-expressados em células de Spodoptera frugiperda (sf9) usando um sistema de expressão de baculovírus. As subunidades expressadas foram EZH2 do tipo selvagem (NM_004456) ou mutantes de EZH2 Y641 F, N, H, S ou C gerados a partir do constructo de EZH2 do tipo selvagem, EED (NM_003797), Suz12 (NM_015355) e RbAp48 (NM_005610). A subunidade EED continha uma tag FLAG N-terminal que foi usada para purificar o complexo de 4 componentes total a partir de lisatos celulares sf9. A pureza dos complexos satisfez ou excedeu 95 %, conforme determinado por SDS-PAGE e análise Agilent Bioanalyzer. As concentrações de concentrações de estoque de enzima (em geral, 0,3 a 1,0 mg/mL) foi determinada usando um ensaio de Bradford contra uma albumina de soro bovino (BSA) padrão.
[01642]Procedimento geral para Ensaios de Enzima PRC2 em Substratos de Peptídeo. Os ensaios foram realizados em um tampão que consiste de bicina 20 mM (pH = 7,6), DTT 0,5 mM, BSG a 0,005 % e Tween20 a 0,002 %, preparado no dia do uso. Os compostos em DMSO a 100 % (1 μL) foram marcados em placas de fundo em V de 384 poços de polipropileno (Greiner) usando uma Platemate 2 X 3 equipada com uma cabeça de pipeta de 384 canais (Thermo). DMSO (1 μL) foi adicionado às colunas 11, 12, 23, 24, as linhas A a H para o controle sinal máximo, e SAH, um produto e inibidor conhecido de PRC2 (1 μL) foi adicionado às colunas 11, 12, 23, 24, linhas I a P para o controle sinal mínimo. Um coquetel (40 μL) contendo a enzima PRC2 do tipo selvagem e peptídeo H3K27meO ou qualquer uma entre as enzimas mutantes Y641 e peptídeo H327me2 foi adicionado por Multidrop Combi (Thermo). Os compostos foram deixados incubar com PRC2 durante 30 min a 25 °C, em seguida, um coquetel (10 μL) contendo uma mistura de não radioativo e 3H-SAM foi adicionado para iniciar a reação (volume final = 51 μL). Em todos os casos, as concentrações finais foram as seguintes: enzima PRC2 do tipo selvagem ou mutante foi de 4 nM, SAH nos poços controle sinal mínimo foi de 1 mM e a concentração de DMSO foi de 1 %. As concentrações finais do resto dos componentes são indicadas na Tabela 2, abaixo. Os ensaios foram interrompidos pela adição de SAM não radioativa (10 μL) em uma concentração final de 600 μM, que dilui a 3H-SAM em um nível onde sua incorporação no substrato de peptídeo já não é detectável. 50 μL da reação na placa de polipropileno de 384 poços depois foram transferidos a uma Flashplate de384 poços e os peptídeos biotinilados foram deixados ligar na superfície de estreptavidina durante pelo menos 1 h antes da lavagem três vezes com Tween20 a 0,1 % em um lavador de placa Biotek ELx405. As placas foram, em seguida, lidas em um leitor de placa PerkinElmer TopCount para medir a quantidade de peptídeo marcado com 3H ligado à superfície de Flashplate, medida como desintegrações por minuto (dpm) ou, alternativamente, referida como contagens por minuto (cpm). Tabela 2: Concentrações finais dos componentes para cada variação de ensaio com base na identidade de EZH2 (EZH2 do tipo selvagem ou mutante Y641)
Figure img0286
[01643]O procedimento geral para o Ensaio de Enzima PRC2 do Tipo selvagem em Substrato de Oligonucleossoma. Os ensaios foram realizados em um tampão que consiste de bicina 20 mM (pH = 7,6), DTT 0,5 mM, BSG a 0,005 %, KCl 100 mM e Tween20 a 0,002 %, preparado no dia do uso. Os compostos em DMSO a 100 % (1 μL) foram marcados em placas de fundo em V de 384 poços de polipropileno (Greiner) usando uma Platemate 2 X 3 equipada com uma cabeça de pipeta de 384 canais (Thermo). DMSO (1 μL) foi adicionado às colunas 11, 12, 23, 24, linhas A - H para o controle sinal máximo, e SAH, um produto e inibidor conhecido de PRC2 (1 μL) foi adicionado às colunas 11, 12, 23, 24, linhas I a P para o controle sinal mínimo. Um coquetel (40 μL) contendo a enzima PRC2 do tipo selvagem e oligonucleossoma de eritrócitos de galinha foi adicionado por Multidrop Combi (Thermo). Os compostos foram incubados com PRC2 durante 30 min a 25 °C, em seguida, um coquetel (10 μL) contendo uma mistura de SAM não radioativo e 3H foi adicionado para iniciar a reação (volume final = 51 μL). As concentrações finais foram as seguintes: enzima PRC2 do tipo selvagem foi de 4 nM, SAM não radioativo foi de 430 nM, 3H-SAM foi de 120 nM, olignonucleossoma de eritrócitos de galinha foi de 120 nM, SAH nos poços controle sinal mínimo foi de 1 mM e a concentração de DMSO foi de 1 %. O ensaio foi interrompido pela adição de SAM não radioativo (10 μL) em uma concentração final de 600 μM, que dilui o 3H-SAM em um nível onde sua incorporação no olignonucleossoma de eritrócitos de galinha substrato já não é detectável. 50 μL da reação na placa de polipropileno de 384 poços depois foram transferidos a uma Flashplate de 384 poços e os nucleossomas de eritrócitos de galinha foram imobilizados na superfície da placa, que depois foi lavada três vezes com Tween20 a 0,1 % em um lavador de placa Biotek ELx405. As placas foram, em seguida, lidas em um leitor de placa PerkinElmer TopCount para medir a quantidade de oligonucleossoma de eritrócitos de galinha marcada com 3H ligado à superfície de Flashplate, medida como desintegrações por minuto (dpm) ou, alternativamente, referida como contagens por minuto (cpm).
Figure img0287
Onde dpm = desintegrações por minuto, cmpd = sinal em poço de ensaio, e mín e máx são os controles de sinal máximo e mínimo respectivos. Ajuste de IC50 de quatro parâmetros
Figure img0288
Onde o topo e fundo são deixados flutuar normalmente, mas podem ser fixados a 100 ou 0, respectivamente, em um ajuste de 3 parâmetros. O Coeficiente de Hill normalmente deixado flutuar, mas também pode ser fixado a 1 em um ajuste de 3 parâmetros. Y é a % de inibição e X é a concentração do composto.
[01644]Os valores de IC50 para os ensaios de enzima PRC2 em substrato de peptídeos (por exemplo, EZH2 do tipo selvagem e Y641F) são apresentadas na Tabela 3 abaixo.
[01645]Ensaio de Metilação de WSU-DLCL2
[01646]As células de suspensão WSU-DLCL2 foram adquiridos a partir da DSMZ (German Collection of Microorganisms and Cell Cultures, Braunschweig, Alemanha). Meio RPMI/Glutamax, Penicilina-Estreptomicina, Soro Fetal Bovino Inativado por Calor, e D-PBS foram adquiridos a partir da Life Technologies, Grand Island, NY, USA. O Tampão de Extração e o Tampão de Neutralização (5X) foram adquiridos a partir da Active Motif, Carlsbad, CA, USA. O anticorpo anti-Histona H3 de coelho foi adquirido a partir da Abcam, Cambridge, MA, USA. Anti-H3K27me3 de coelho e anti-coelho-IgG conjugada a HRP foram adquiridas a partir da Cell Signaling Tecnologia, Danvers, MA, USA. O substrato TMB “Super sensitive” foi originados da BioFX Laboratories, Owings Mills, MD, USA. Albumina de soro bovino livre de IgG foi adquirida a partir da Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA, USA. PBS com Tween (10X PBST) foi adquirida a partir da KPL, Gaithersburg, MD, USA. Ácido sulfúrico foi adquirido a partir da Ricca Chemical, Arlington, TX, USA. As placas Immulon ELISA foram adquiridas a partir da Thermo, Rochester, NY, USA. As placas de cultura celular de fundo em V foram adquiridos a partir da Corning Inc., Corning, NY, USA. As placas de polipropileno de fundo em V foram adquiridas a partir da Greiner Bio-One, Monroe, NC, USA.
[01647]As células de suspensão WSU-DLCL2 foram mantidas em meio de crescimento (RPMI 1640 suplementado com soro fetal bovino inativado por calor 10 % v/v e 100 unidades/mL de penicilina-estreptomicina) e cultivadas a 37 °C sob CO2 a 5 %. Sob condições de ensaio, as células foram incubadas em Meio de Ensaio (RPMI 1640 suplementado com soro fetal bovino inativado por calor 20 % v/v e 100 unidades/mL de penicilina-estreptomicina) a 37 °C sob CO2 a 5 % em um agitador de placa.
[01648]As células WSU-DLCL2 foram semeadas em meio de ensaio em uma concentração de 50.000 células por mL a uma placa de fundo em V de 96 poços de cultura celular com 200 por poço. O Composto (1 μL) a partir de placas de fonte de 96 poços foi adicionado diretamente à placa celular de fundo em V. As placas foram incubadas em um titulador-agitador de placa a 37°C, CO2 a 5 % durante 96 horas. Depois de quatro dias de incubação, as placas foram giradas a 241 x g durante cinco minutos e o meio foi aspirado suavemente a partir de cada poço de placa celular sem perturbar a pelota celular. A pelota foi recolocada em suspensão em DPBS 200 μL e as placas foram giradas novamente a 241 x g durante cinco minutos. O sobrenadante foi aspirado e tampão de Extração frio (4°C) (100 μL) foi adicionado por poço. As placas foram incubadas a 4°C em agitador orbital durante duas horas. As placas foram giradas a 3427 x g x 10 minutos. O sobrenadante (80 μL por poço) foi transferido a seu poço respectivo em placa de polipropileno de fundo em V de 96 poços. O Tampão de Neutralização 5X (20 μL, por poço) foi adicionado à placa de polipropileno de fundo em V contendo o sobrenadante. Placas de polipropileno em fundo V contendo preparação de histona bruta (CHP) foram incubadas em agitador orbital x cinco minutos. Preparações de Histona Bruta foram adicionadas (2μL por poço) a cada poço respectivo, placas de ELISA em duplicata de 96 poços contendo 100 μL, o Tampão Revestimento (1 X PBS + BSA 0,05 % p/v). As placas foram vedadas e incubadas durante a noite a 4 °C. No dia seguinte, as placas foram lavadas três vezes com 300 μL, por poço 1 X PBST. Os poços foram bloqueado durante duas horas com 300 μL, por poço de Diluente (de ELISA (PBS (1 X) BSA (2 % p/v) e Tween20 (0,05 % v/v)). As placas foram lavadas três vezes com 1 X PBST. Para a placa de detecção de Histona H3, 100 μL por poço foram adicionados de anticorpo anti-Histona-H3 (Abcam, ab 1791) diluído 1:10.000 em Diluente de ELISA. Para a placa de detecção de trimetilação H327, 100 μL, por poço foram adicionados de anti- H3K27me3 diluído 1:2000 em diluente de ELISA. As placas foram incubadas durante 90 minutos na temperatura ambiente. As placas foram lavadas três vezes com 300 μL. 1 X PBST por poço. Para a detecção de Histona H3, 100 μL, de anticorpo IgG anti-coelho conjugado a HRP diluído a 1:6000 em diluente de ELISA foram adicionados por poço. Para a detecção de H3K27me3, 100 μL de anticorpo IgG anti-coelho conjugado a HRP diluído a 1:4000 em diluente de ELISA foram adicionados por poço. As placas foram incubadas na temperatura ambiente durante 90 minutos. As placas foram lavadas quatro vezes com 1 X PBST 300 por poço. O substrato TMB 100 μL foi adicionado por poço. As placas de Histona H3 foram incubadas durante cinco minutos na temperatura ambiente. As placas de H3K27me3 foram incubadas durante 10 minutos na temperatura ambiente. A reação foi resfriada com ácido sulfúrico 1 N (100 por poço). A absorvância para cada placa foi lida a 450 nm.
[01649]Primeiro, a razão para cada poço foi determinada por:
Figure img0289
[01650]Cada placa incluiu oito poços controle de DMSO apenas tratamento (Inibição Mínima), assim como oito poços controle para inibição máxima (poços de fundo).
[01651]A média dos valores de razão para cada tipo de controle foi calculada e usada para determinar a porcentagem de inibição para cada poço de teste na placa. O composto de teste foi diluído em série três vezes em DMSO durante um total de dez concentrações de teste, iniciando a 25 μM. A porcentagem de inibição foi determinada e as curvas de IC50 foram geradas usando poços em duplicata por concentração do composto. Os valores IC50 para este ensaio são apresentados na Tabela 3 abaixo.
Figure img0290
[01652]Análise de Proliferação Celular
[01653]As células de suspensão WSU-DLCL2 foram adquiridas a partir da DSMZ (German Collection of Microorganisms and Cell Cultures, Braunschweig, Alemanha). Meio RPMI/Glutamax, Penicilina-Estreptomicina, Soro Fetal Bovino Inativado por Calor foram adquiridos a partir da Life Technologies, Grand Island, NY, USA. As placas de polipropileno de fundo em V de 384 poços foram adquiridas a partir da Greiner Bio-One, Monroe, NC, USA. Placas brancas opacas de 384 poços de cultura celular foram adquiridas a partir da Perkin Elmer, Waltham, MA, USA. CellTiter Glo(R) foi adquiridos a partir da Promega Corporation, Madison, WI, USA. O leitor de placas SpectraMax M5 foi adquirido a partir da Molecular Devices LLC, Sunnyvale, CA, USA.
[01654]As células de suspensão WSU-DLCL2 foram mantidas em meio de crescimento (RPMI 1640 suplementado com 10 % v/v de soro fetal bovino inativado por calor e cultivado a 37 °C sob CO2 a 5 %. Sob condições de ensaio, as células foram incubadas em Meio de ensaio (RPMI 1640 suplementado com 20 % v/v de soro fetal bovino inativado por calor e 100 unidades/mL de penicilina-estreptomicina) a 37 °C sob CO a 5 %.
[01655]Para a avaliação do efeito dos compostos na proliferação da linhagem celular WSU- DLCL2, células exponencialmente crescentes foram plaqueadas em placas opacas brancas de 384 poços em uma densidade de 1250 células/ml em um volume final de 50 μL de meio de ensaio. Uma placa de fonte de composto foi preparada através da realização de diluições em série 3 vezes em triplicata de nove pontos em DMSO, iniciando a 10 mM (concentração de topo final do composto no ensaio foi de 20 μM e o DMSO foi de 0,2 %). Uma alíquota 100 nL a partir da placa de estoque do composto foi adicionada ao mesmo poço respectivo na placa celular. O controle de inibição de 100 % consistiu de células tratadas com concentração final de 200 nM de estaurosporina e o controle de inibição de 0 % consistiu de células tratadas com DMSO. Depois da adição dos compostos, as placas de ensaio foram incubadas durante 6 dias a 37 °C, CO2 a 5 %, umidade relativa > 90 % durante 6 dias. A viabilidade celular foi medida por quantização de ATP presente nas culturas celulares, adicionando 35 μL de reagente Cell Titer Glo® às placas celulares. A luminescência foi lida no SpectraMax M5. A concentração que inibe a viabilidade celular em 50 % foi determinada usando um ajuste de 4-parâmetros da curva de resposta de doses normalizada. Os valores da IC50 para este ensaio também são apresentados na Tabela 3 abaixo.
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[01656]Exemplo 199: Derivação da Concentração Citotóxica Mais Baixa (LCC)
[01657]É bem estabelecido que a proliferação celular procede através da divisão celular que resulta em uma dobra do número de células depois da divisão, em relação ao número de células antes da divisão. Sob um conjunto fixo de condições ambientais (por exemplo, pH, concentração iônica, temperatura, densidade celular, teor de meio de proteínas e fatores de crescimento, e semelhantes), células serão proliferadas por dobra consecutiva (isto é, divisão), de acordo com a equação seguinte, contanto que nutrientes suficientes e outros fatores exigidos estejam disponíveis.
[01658]
Figure img0298
[01659]onde Nt é o número celular em um ponto no tempo (t) depois da iniciação do período de observação, N0 é o número celular na iniciação do período de observação, t é o tempo depois da iniciação do período de observação e tD é o intervalo de tempo exigido para a dobra celular, também referido como o tempo de dobra. A equação A.1 pode ser convertida na forma mais conveniente de uma equação exponencial em base e, tomando vantagem da igualdade, 0,693 = ln(2). 0.693/
[01660]
Figure img0299
[01661]A constante de taxa para a proliferação celular (kp) está inversamente relacionada ao tempo de dobra, como segue.
[01662]
Figure img0300
[01663]Equação de combinação A.2 e A.3 fornece,
[01664
Figure img0301
[01665]Assim, de acordo com equação A.4, o número celular é esperado aumentar exponencialmente com o tempo (Figura 1 A) durante o período anterior do crescimento celular referido como crescimento em fase log. Equações exponenciais como a equação A.4 podem ser linearizadas tomando o logaritmo natural de cada lado.
[01666]
Figure img0302
[01667]Assim, um lote de ln(Nt) como uma função de tempo é esperado produzir uma linha reta ascendente com inclinação igual a kp e intercepção de y igual a ln(N0), conforme ilustrado na Figura 1 B.
[01668]Mudanças nas condições ambientais podem resultar em uma mudança na taxa de proliferação celular que é quantificável como mudanças na constante de taxa de proliferação kp. Entre as condições que podem resultar em uma mudança na taxa de proliferação é a introdução ao sistema de um composto antiproliferativo na iniciação do período de observação (isto é, a t = 0). Quando um composto antiproliferativo tem um impacto imediato sobre a proliferação celular, espera-se que diagramas de ln(Nt) como uma função de tempo continuem sendo lineares em todas as concentrações do composto, com valores decrescentes de kp em concentrações aumentadas do composto.
[01669]Dependendo da base mecanicista de ação antiproliferativa, alguns compostos podem não efetuar imediatamente uma mudança na taxa de proliferação. Em vez disso, pode ser um período de latência antes que o impacto do composto seja realizado. Em tais casos, um lote de ln(Nt) como uma função de tempo aparecerá bifásico, e um ponto no tempo em que o impacto do composto inicia pode ser identificada como o ponto de parada entre as fases (Figura 2). Não obstante, se um impacto do composto sobre a proliferação é imediato ou começa depois de um período de latência, a constante de taxa para a proliferação em cada concentração do composto é melhor definido pela inclinação de ln(Nt) vs. curva de tempo a partir do ponto no tempo em que o impacto do composto começa até o final do período de observação do experimento.
[01670]Um composto aplicado em células crescentes pode afetar a proliferação observada em uma das duas vias gerais: através da inibição de divisão celular adicional (citoestase) ou através da morte celular (citotoxicidade). Se um composto é citostático, concentração aumentada do composto reduzirá o valor de kp até que não exista outra divisão celular. Neste ponto, a taxa de crescimento celular, e, portanto, o valor de kp, será zero. Se, por outro lado, o composto é citotóxico, em seguida, o valor de kp será composto de duas constantes de taxa: uma constante de taxa para crescimento celular continuado na presença do composto (kg) e uma constante de taxa para a morte celular pelo composto (kj). A constante de taxa global para a proliferação em uma concentração fixa de composto, assim, será a diferença entre os valores absolutos destas constantes de taxa opostas.
[01671]
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[01672]Em concentrações do composto para as quais a taxa de crescimento celular excede aquela da morte celular, o valor de kp terá um valor positivo (isto é, kp > 0). Em concentrações do composto para as quais a taxa de crescimento celular é menor do que aquela para a morte celular, o valor de kp terá um valor negativo (isto é, kp < 0) e o número celular diminuirá com o tempo, indicativo de citotoxicidade robusta. Quando kg corresponde exatamente a kj, em seguida, a constante de taxa de proliferação global, kp, terá um valor de zero. Assim, podemos definir a concentração citotóxica mais baixa (LCC) como aquela da concentração do composto que resulta em um valor de kp igual a zero, porque qualquer concentração maior do que isto resultará em citotoxicidade claramente observável. Nota bene: em concentrações abaixo do LCC não é provável que ocorra morte celular, mas, em uma taxa que é menor do que aquela da proliferação celular residual. O tratamento neste relatório não é intencionado a definir os detalhes biológicos de ação do composto. Em vez disso, o objetivo neste relatório é definir meramente um parâmetro prático com o qual objetivamente quantifica a concentração do composto na qual a taxa de morte celular excede novo crescimento celular. De fato, o LCC representa um ponto de parada ou concentração crítica acima do qual a citotoxicidade franca é observada, ao invés de uma concentração citotóxica por si. Neste respeito, a LCC pode ser similar a outra métrica de ponto de parada físico, tal como a concentração de micela crítica (CMC) usada para definir a concentração de lipídeos, detergente ou outra espécie de tensoativo acima da qual todas as moléculas se incorporam em estruturas micelares.
[01673]Tradicionalmente, o impacto dos compostos antiproliferativos sobre o crescimento celular foi o mais comumente quantificado pelo valor de IC50, que é definido como aquela concentração do composto que reduz a taxa of proliferação celular à metade daquela observada na ausência de composto (isto é, para a amostra veículo ou solvente controle; Figura 2). A IC50, entretanto, não permite que o investigador diferencie entre compostos citostáticos e citotóxicos. A LCC, ao contrário, permite facilmente que uma pessoa faça tal diferenciação e ainda quantifique a concentração na qual a transição para comportamento citotóxico robusto ocorre.
[01674]Se uma pessoa limita a janela de tempo de observação entre o início do impacto (conforme definido acima e na Figura 2) e o final do experimento, em seguida, os dados, em geral, se ajustarão adequadamente a uma equação linear quando plotada como ln(Nt) como uma função de tempo (vide supra). A partir de ajustes deste tipo, o valor de kp pode ser determinado em cada concentração de composto testado. Um replot do valor de kp como uma função da concentração do composto ([I]) terá a forma de um isoterma descendente, com um valor máximo a [I] = 0 de kmáx (definido pela amostra veículo ou solvente controle) e um valor mínimo na concentração infinita do composto de kmín Figura 3).
[01675]
Figure img0304
[01676]onde Imid é a concentração do composto, fornecendo um valor de kp que é a metade entre os valores de kmax e kmin (observe que o valor de Imid não é o mesmo da IC50, exceto no caso de um composto completo e puramente citostático). Assim, o ajuste dos dados de replot à equação A.7 fornece estimativas de kmax, kmin e Imid. Se um composto é citostático (conforme definido neste relatório), o valor de kmin não pode ser menor do que zero. Para compostos citotóxicos, kmin será menor do que zero e o valor absoluto de kmin estará diretamente relacionado à eficácia do composto em células de morte.
[01677]Os valores ajustados derivados da equação A.7 também podem ser usados para determinar o valor da LCC. Por definição, quando [I] = LCC, kp = 0. Assim, sob estas condições, a equação A.7 é dada.
[01678]
Figure img0305
[01679]O reagrupamento algébrico da equação A.8 produz uma equação para a LCC.
[01680]
Figure img0306
[01681]Esta análise é simples de implementar com software de ajuste de curva não linear e pode ser aplicada durante os ensaios celulares da atividade do composto por toda o processo de descoberta e desenvolvimento do fármaco. Desta maneira, a LCC pode fornecer uma métrica valiosa para a determinação do SAR do composto (relacionamento estrutura-atividade).
[01682]A Tabela 4 abaixo fornece dados de LCC e IC50 para certos compostos da invenção em células WSU-DLCL2.
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Figure img0308
[01683]Exemplo 200: Ensaios In vivo
[01684]Camundongos
[01685]Camundongos fêmeas Fox Chase SC1D® (CB17/Icr-Prkdcscid/IcrIcoCrl, Charles River Laboratories) ou camundongos nus atímicos (Crl:NU(Ncr)-Foxn1mu Charles River Laboratories) apresentavam 8 semanas de vida e uma faixa de peso corpóreo (BW) de 16,0 a 21,1 g no D1 do estudo. Aos animais foi fornecida água à vontade (osmose reversa Cl 1 ppm) e NIH 31 Modified and Irradiated Lab Diet® que consiste de 18,0 % de proteína bruta, 5,0 % de gordura bruta, e 5,0 % de fibra bruta. Os camundongos foram alojados em colchão Enrich-o’cobs(TM) irradiado em microisolantes estáticos em um ciclo de luz de 12 horas entre 20 a 22 °C (68 a 72 °F) e 40 a 60 % de umidade. Todos os procedimentos são condescendentes com as recomendações do Guide for Care and Use of Laboratory Animals com respeito a procedimentos de restrição, agrícola, cirúrgicos, regulação de alimentação e fluido e cuidado veterinário.
[01686]Cultura Celular do Tumor
[01687]Linhagens celulares de linfoma humano foram obtidas a partir de fontes diferentes (ATCC, DSMZ), por exemplo, WSU-DLCL2 obtida a partir da DSMZ. As linhagens celulares foram mantidas em Piedmont como culturas de suspensão em meio RPMI-1640 contendo 100 unidades/mL de penicilina G-sal de sódio, 100 g/mL de estreptomicina e 25 g/mL de gentamicina. O meio foi suplementado com soro fetal bovino a 10 % e glutamina 2 mM. As células foram cultivadas em frascos de cultura de tecido em um incubador umedecido a 37 °C, em uma atmosfera de CO2 a 5 % e ar a 95 %.
[01688]Implante do Tumor In Vivo
[01689]Linhagens celulares de linfoma humano, por exemplo, células WSU- DLCL2, foram coletadas durante o crescimento de fase mid-log, e recolocadas em suspensão em PBS com 50 %) Matrigel(TM) (BD Biosciences). Cada camundongo recebeu 1 x 107 células (0,2 mL de suspensão celular) subcutaneamente no flanco direito.
[01690]Os tumores foram calibrados em duas dimensões para monitorar o crescimento conforme o volume médio abordou a faixa de 80 a 120 mm3 desejada. O tamanho do tumor, em mm3, foi calculado a partir de:
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[01691]onde w = largura e/ = comprimento, em mm, do tumor. O peso do tumor pode ser estimado assumindo que 1 mg é equivalente a 1 mm3 do volume do tumor. Depois de 10 a 30 dias, os camundongos com tumores de 108 a 126 mm3 foram organizados em grupos tratamento com volume médio dos tumores de 117 a 119 mm3.
[01692]Artigos de Teste
[01693]Os composto de testes foram armazenados na temperatura ambiente e protegidos da luz. Em cada dia do tratamento, formulações do composto frescas (por exemplo, formulação do Composto 44 sal de tri-HCl ou Composto 87 sal de tri-HCl), foram preparadas através da suspensão dos pós em carboximetilcelulose sódica a 0,5 % (NaCMC) e Tween(c) 80 a 0,1 % em água desionizada. O composto 141 (base livre) foi dissolvido em solução salina estéril e o pH foi ajustado a 4,5 com HCl fresco a cada dia. Os veículos, NaCMC a 0,5 % e Tween® 80 0,1 % em água desionizada ou solução salina estéril pH 4,5, foram usado para tratar os grupos controle nos mesmos programas. As formulações foram armazenadas longe da luz a 4 °C antes da administração. A menos que de outro modo especificado, os compostos referidos a e testados neste experimento foram, em suas formas de sal específicas, mencionados neste parágrafo.
[01694]Plano de Tratamento
[01695]Os camundongos foram tratados em doses do composto variando de 12,5 a 600 mg/kg e em programas de TID (três vezes a dia a cada 8 h), BID (2 vezes ao dia a cada 12 h) ou QD (uma vez um dia) para várias quantidades de dias por gavagem oral (Composto 44 ou 87) ou injeções por intermédio da via intraperitoneal (Composto 141). Cada dose foi liberada em um volume de 0,2 mL/20 g de camundongo (10 mL/kg), e ajustada para o último peso registrado de animais individuais. A duração de tratamento máxima foi de 28 dias.
[01696]Análise do Volume do Tumor Médio (MTV) e Inibição do Crescimento do Tumor (TGI)
[01697]A eficácia do tratamento foi determinada no último dia do tratamento. MTV(n), o volume do tumor médio para o número de animais, n, avaliável no último dia, foi determinado para cada grupo. A porcentagem da inibição do crescimento do tumor (% de TGI) pode ser definida de várias maneiras. Primeiro, a diferença entre o MTV(n) do grupo controle designado e o MTV(n) do grupo tratado com fármaco é expressada como uma porcentagem do MTV(n) do grupo controle:
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[01698]Uma outra maneira de calcular a % de TG1 é tomando a mudança do tamanho do tumor a partir do dia 1 ao dia n com n sendo o último dia do tratamento.
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[01699]Toxicidade
[01700]Os animais foram pesados diariamente nos Dias 1 a 5, e depois duas vezes por semana até a conclusão do estudo. Os camundongos foram examinados com frequência para sinais evidentes de quaisquer efeitos colaterais adversos relacionados ao tratamento que foram documentados. A toxicidade aceitável para a dose máxima tolerada (MTD) foi definida como uma perda de BW média do grupo menor do que 20 % durante o teste, e não mais do que 10 % de mortalidade devido a mortes por TR. Uma morte foi classificada como TR se ela foi atribuível a efeitos colaterais do tratamento, conforme evidenciado por sinais clínicos e/ou necropsia, ou devido a causas desconhecidas durante o período de dosagem. Uma morte foi classificada como NTR se houve evidência de que a morte não foi relacionada aos efeitos colaterais do tratamento. As mortes por NTR durante o intervalo de dosagem tipicamente seriam categorizadas como NTRa (devido a um acidente ou erro humano) ou NTRm (devido à disseminação do tumor confirmada por necropsia por invasão e/ou metástase). Animais oralmente tratados que morreram de causas desconhecidas durante o período de dosagem podem ser classificados como NTRu quando o desempenho do grupo não suporta uma classificação de TR e necropsia, para descartar um erro de dosagem, não é possível.
[01701]Amostragem
[01702]Nos dias 7 ou 28 durante os estudos, os camundongos foram experimentados em uma forma pré-específica para avaliar a inibição alvo nos tumores. Os tumores foram coletados a partir de camundongos especificados sob condições livres de RNAse e divididos em duas partes. Tecido de tumor congelado a partir de cada animal foi congelado em N2 líquido e pulverizado com um almofariz e pilão.
[01703]Análises Estatísticas e Gráficas
[01704]Todas as análises estatísticas e gráficas foram realizadas com Prism 3.03 (GraphPad) para Windows. Para testar a significância estatística entre os grupos controle e tratados no curso de tempo de tratamento total, um teste ANOVA de medidas repetidas, seguido por pós teste de múltipla comparação de Dunnets ou um teste ANOVA bidirecional foram utilizados. Prism relata os resultados como não significantes (ns) em P > 0,05, significantes (representados por “*”) em 0,01 < P < 0,05, muito significantes (“**”) em 0,001 < P < 0,01 e extremamente significantes (“***”) em P < 0,001.
[01705]Extração de Histona
[01706]Para o isolamento de histonas, 60 a 90 mg de tecido de tumor foram homogeneizados em 1,5 ml de tampão de extração nuclear (Tris-HCl 10 mM, MgCl2 10 mM, KCl 25 mM, Triton X-100 a 1 %, Sacarose a 8,6 %, mais um tablete 1 de inibidor de protease Roche 836145) e incubados em gelo durante 5 minutos. Os núcleos foram coletados por centrifugação a 600 g durante 5 minutos a 4 °C e lavados uma vez em PBS. O sobrenadante foi removido e as histonas extraídas durante uma hora, com vórtex a cada 15 minutos, com ácido sulfúrico frio 0,4 N. Os extratos foram clarificados por centrifugação a 10000 g durante 10 minutos a 4 °C e transferidos a um tubo microcentrifugador fresco contendo volume 10x de acetona gelada. As histonas foram precipitadas a -20 °C durante 2 horas durante a noite, peletizadas por centrifugação a 10000 g durante 10 minutos e recolocadas em suspensão em água.
[01707]ELISA
[01708]As histonas foram preparadas em concentrações equivalentes em tampão de revestimento (PBS + BSA a 0,05 %), produzindo 0,5 ng/μl de amostra, e 100 μl de amostra ou padrão foram adicionados em duplicata a 2 placas de ELISA de 96 poços (Thermo Labsystems, Immulon 4HBX #3885). As placas foram vedadas e incubadas durante a noite a 4 °C. No dia seguinte, as placas foram lavadas 3x com PBST 300 pl/poço (PBS + Tween 20 a 0,05 %; PBST 10X, KPL #51-14-02) em um lavador de placa Bio Tek. As placas foram bloqueadas com 300 μl/poço de diluente (PBS + BSA a 2 % + Tween 20 a 0,05 %), incubadas na temperatura ambiente durante 2 horas, e lavadas 3x com PBST. Todos os anticorpos foram diluídos em diluente. 100 μl^o de anti-H3K27me3 (CST #9733, estoque de glicerol a 50 % 1:1.000) ou H3 anti-total (Abcam ab1791, glicerol a 50 % 1:10.000) foram adicionados a cada placa. As placas foram incubadas durante 90 min na temperatura ambiente e lavadas 3x com PBST. 100 μl/poço de anti-Rb-IgG-HRP (Cell Signaling Technology, 7074) foram adicionados 1:2.000 à placa de H3K27Me3 e 1:6.000 à placa H3 e incubados durante 90 min na temperatura ambiente. As placas foram lavadas 4X com PBST. Para detecção, 100 μl/poço de substrato de TMB (BioFx Laboratories, #TMBS) foram adicionados e as placas incubadas no escuro na temperatura ambiente durante 5 min. A reação foi resfriada com 100 μl/poço de H2SO4 1 N. A absorvância a 450 nm foi lida em leitor Microplate SpectaMax M5.
[01709]Resultados:
[01710]Estudo PD de 7 dia com o Composto 87
[01711]De modo a testar se o Composto 87 pode modular a marca de histona H3K27me3 em tumores in vivo, camundongos portadores de tumor de xenoenxerto de WSU-DLCL2 foram tratados com o Composto 87 em 200 mg/kg de BID ou 400 mg/kg de QD ou veículo (programa BID) durante 7 dias. Foram apresentados 4 animais por grupo. Os animais foram submetidos à eutanásia 3 h depois da última dose e o tumor foi preservado em um estado congelado, conforme descrito acima. Após a extração de histona, as amostras foram aplicadas aos ensaios ELISA usando anticorpos dirigidos contra o estado trimetilado de histona H3 27 (H3K27me3) ou histona H3 total. Com base nestes dados, a razão de H3K27 global a totalmente metilada foi calculada. A Figura 4 mostra as razões de metilação global média para todos os grupos, conforme medido por ELISA e indica inibição alvo, variando ap. 62,5 % (400 mg/kg QD x 7) e 37,5 % (200 mg/kg BID x 7) em comparação ao veículo.
[01712]Estudo da eficácia de 28 dias com o Composto 141 em modelo de xenoenxerto WSU-DLCL2
[01713]De modo a testar se o Composto 141 pode induzir uma inibição de crescimento do tumor in vivo, camundongos portadores de tumor de xenoenxerto de WSU-DLCL2 tratados com o Composto 141 a 12,5, 25 ou 50 mg/kg QD durante 28 dias por intermédio de injeção intraperitoneal. O volume do tumor e pesos corpóreos foram determinados duas vezes por semana. O Composto 141 foi bem tolerado em todas as doses com perda de peso corpóreo mínima. Uma coorte paralela de camundongos (n = 4 por grupo) foi tratada nas mesmas doses durante 7 dias, e os camundongos foram submetidos à eutanásia no dia 7, 3 h depois da última dose para a amostragem e avaliação do tumor da inibição alvo. A Figura 5 mostra o resultado de ELISA medindo a metilação global de H3K27me3 normalizada em H3 total. A inibição alvo dependente da dose variando de 39 % a 67 % em comparação ao veículo pode ser observada.
[01714]A Figura 6 mostra o crescimento do tumor durante o curso de tratamento de 28 dias para os grupos tratados com veículo ou Composto 141.
[01715]Um efeito da administração do veículo fornecido por intermédio da via intraperitoneal pode ser observado, conforme o crescimento do tumor foi mais lento no grupo veículo vs. o grupo não tratado. Apenas o grupo de dose mais alta do Composto 141 (50 mg/kg QD x 28) mostrou inibição de crescimento do tumor em comparação ao grupo veículo (33 % calculado a partir do dia 1, 43 % calculado a partir do dia 7). O crescimento do tumor não foi estatisticamente significante em comparação ao veículo quando do uso de um ANOVA de medições repetidas, seguido por pós teste de Dunnets, mas o tamanho do tumor terminal foi significantemente menor no grupo DQ 50 mg/kg em comparação ao veículo (ANOVA bidirecional, pós teste de Bonferroni, p < 0,0001).
[01716]Estudo de eficácia com doses aumentadas do Composto 44 em modelo de xenoenxerto WSU-DLCL2
[01717]De modo a testar se o composto 44 pode induzir um efeito anti-tumor in vivo, camundongos portadores de tumor de xenoenxerto WSU-DLCL2 foram tratados com o Composto 44 a 37,5, 75 ou 150 mg/kg de TID durante 28 dias. Foram apresentados 12 camundongos por grupo quanto à eficácia do experimento. Uma coorte paralela foi dosada durante 7 dias nas mesmas doses e programas para a avaliação da inibição alvo depois de 7 dias (n = 6 por grupo). A Figura 7 mostra o crescimento do tumor durante o curso de tratamento de 28 dias para os grupos veículo e tratados com o composto 44. Uma inibição de crescimento do tumor dependente de dose clara pode ser observada. Apenas o grupo dose mais alta foi estatisticamente significante a partir do veículo através de ANOVA de medições repetidas e pós teste de Dunnett. A inibição de crescimento do tumor para o grupo dose mais alta foi 58 % (a partir do dia 1) ou 73 % (a partir do dia 7) em comparação ao veículo.
[01718]As histonas foram extraídas a partir de tumores coletados depois de 7 dias da dosagem (coorte PD paralela) e no fim do estudo no dia 28 para a eficácia da coorte (3 h depois da última dose para ambos os coortes). A Figura 8 mostra que a marca de H3K27me3 metila é modulada com o tratamento em uma matéria dose dependente e que existe melhor inibição do alvo estatisticamente significante no dia 28 em comparação ao dia 7 para o grupo dose mais alta (150 mg/kg de TID).
[01719]Estudo da eficácia com o Composto 44 em programas de dose diferentes
[01720]Para avaliar se o Composto 44 levaria à inibição de crescimento do tumor em outros programas de dosagem, mas TID, um estudo da eficácia de xenoenxerto WSU-DLCL2 foi realizado, onde os programas TID, BID e QD foram comparados lado a lado. Foram apresentados 12 animais por grupo, e os camundongos foram tratados durante 28 dias. A Figura 9 mostra o crescimento do tumor durante o curso de tratamento de 28 dias para os grupos veículo e tratados com Composto 44. A inibição de crescimento do tumor pode ser obtida em todas as doses e programas (Tabela 5 abaixo: resumo das inibições de crescimento do tumor induzidas por programas de dosagem do Composto 44 diferentes em xenoenxertos WSU-DLXC2). Embora apenas 150 mg/kg de TID e 225 mg/kg de BID tenham sido estatisticamente significantes a partir do veículo por ANOVA de medições repetidas e pós teste de Dunnett, todos os tamanhos do tumor terminais nos grupos tratados com o Composto 44 foram estatisticamente diferentes do veículo por ANOVA bidirecional e pós teste de Bonferroni (p < 0,0001).
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[01721]No dia 28, os camundongos foram submetidos à eutanásia e os tumores foram coletados 3 h depois da última dose para a avaliação da inibição alvo. A Figura 10 mostra que o tratamento com o Composto 44 induziu graus similares de inibição alvo para todas as doses e programas.
[01722]Exemplo 201: Efeito anti-câncer do Composto 44 no modelo de xenoenxerto de camundongo de linfoma de grandes células B difusas humanas KARPAS-422
[01723]O Composto 44 (forma de Sal de HCl) foi testado quanto a sua atividade anti-câncer em modelo de xenoenxerto de camundongo KARPAS-422, que é um modelo de xenoenxerto de camundongo de linfoma de grandes células B difusas humanas. A menos que de outro modo especificado, o Composto 44 referido a e testado neste experimento foi sua forma de sal de tri-HCl. 45 camundongos fêmeas de CAnN.Cg-Foxn1nu/CrlCrlj (Charles River Laboratories, Japão) com tumores KARPAS-422, cujo volume médio do tumor (TV) atingiu aproximadamente 150 mm3 foram selecionadas com base em seus TVs, e foram aleatoriamente divididas em cinco grupos. A administração oral do Composto 44 (80,5, 161, 322 e 644 mg/kg) ou veículo foi iniciada no dia 1. O Composto 44 foi dado uma vez ao dia no dia 1 e dia 29 e duas vezes ao dia, todos os dias, a partir do dia 2 ao dia 28. O volume de administração (0,1 mL/10 g de peso corpóreo) foi calculado a partir do peso corpóreo antes da administração. O TV e o peso corpóreo foram medidos duas vezes na semana. O projeto para este experimento é mostrado na Tabela 6.
Figure img0313
[01724]O TV é calculado a partir de medições do calibrador pela fórmula para o volume de um prolato elipsoide (L x W2)/2, onde L e W são as medições de comprimento e largura ortogonal respectivas (mm).
[01725]Os dados são expressados como a média ± desvio padrão(SD). As diferenças no TV entre os grupos tratados com veículo e tratados com o Composto 44 foram analisadas por uma análise de medições repetidas de variância (ANOVA), seguido pelo teste de comparação múltiplo do tipo Dunnett. Um valor de P < 0,05 (dois lados) foi considerado estatisticamente significante. As análises estatísticas foram realizadas usando o pacote de software Prism 5 versão 5.04 (GraphPad Software, Inc., CA, USA).
[01726]Durante o período de tratamento, a dosagem de 644 mg/kg resultou na morte de dois entre os nove camundongos. A dose máxima tolerada foi determinada como 322 mg/kg, em que a dosagem nenhuma mortalidade ou nenhuma perda de peso corpóreo foi registrada no estudo (Figura 11 e Tabela 7).
[01727]O Composto 44 mostrou efeitos antitumor significantes contra um xenoenxerto KARPAS-422 de linfoma de grandes células B difuso humano em todas as doses no dia 29 em uma maneira dose dependente (Figura 12). O efeito de inibição do crescimento do tumor foi observado a 80,5 mg/kg. As regressões do tumor foram observadas a 161 e 322 mg/kg.
Figure img0314
[01728]INCORPORAÇÃO COMO REFERÊNCIA
[01729]A divulgação total de cada um entre os documentos de patente e artigos científicos referidos neste relatório é incorporada como referência para todos os propósitos.
[01730]EQUIVALENTES
[01731]A invenção pode ser realizada em outras formas específicas sem divergir do espírito ou características essenciais da mesma. As modalidades precedentes, portanto, devem ser consideradas em todos os respeitos ilustrativos ao invés de limitar a invenção descrita neste relatório. O escopo da invenção é, assim, indicado pelas reivindicações anexas ao invés da descrição precedente, e todas as mudanças no significado e faixa de equivalência das reivindicações são abrangidas na mesma.

Claims (7)

1. Uso de um composto da Fórmula:
Figure img0315
ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, CARACTERIZADO pelo fato de que é para a fabricação de um medicamento para o tratamento ou prevenção de câncer, em que um segundo agente quimioterá- pico ou quimioterapia padrão são combinados com o medicamento para o dito tratamento.
2. Uso, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que o segundo agente quimioterápico é selecionado a partir de agentes quimioterápicos, antineoplásicos, antiproliferativos gerais e combinações dos mesmos para o tratamento ou prevenção de câncer.
3. Uso, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que o segundo agente quimioterápico é selecionado a partir de altretamina (Hexalen); iso- tretinoína (Accutane; Amnesteem; Claravis; Sotret); tretinoína (Vesanoid); azacitidina (Vidaza); bortezomibe (Velcade) asparaginase (Elspar); levamisol (Ergamisol); mito- tane (Lysodren); procarbazina (Matulane); pegaspargase (Oncaspar); denileucina dif- titox (Ontak); porfímero (Photofrin); aldesleucina (Proleukin); lenalidomídeo (Revli- mid); bexaroteno (Targretin); talidomida (Thalomid); tensirolimo (Tori-sel); trióxido de arsênio (Trisenox); verteporfina (Visudyne); mimosina (Leucenol); (1 M tegafur- 5- cloro-2,4-di-hidroxipirimidina 0,4 M - 1 M oxonato de potássio), lovastatina e combinações dos mesmos.
4. Uso, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que o segundo agente quimioterápico é selecionado a partir de lenalidomídeo (Revlimid), rituximabe e combinações dos mesmos.
5. Uso, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que a quimioterapia padrão é selecionada a partir de CMF (ciclofosfamida, metotrexato e 5-fluorouracil), CAF (ciclofosfamida, adriamicina e 5-fluorouracil), AC (adriamicina e ciclofosfamida), FEC (5-fluorouracila, epirubicina, e ciclofosfamida), ACT ou ATC (adriamicina, ciclofosfamida, e paclitaxel), rituximabe, Xeloda (capecitabina), Cisplatina (CDDP), Carboplatina, TS-1 (tegafur, gimestate e otastate potássico em uma razão molar de 1:0,4:1), Camptotecina-11 (CPT-11, Irinotecano ou Camptosar™), CHOP (ciclofosfamida, hidroxidaunorrubicina, oncovin, e prednisona ou predniso- lona), R-CHOP (rituximabe, ciclofosfamida, hidroxideunorrubicina, oncovin, predni- sona ou prednisolona), ou CMFP (ciclofosfamida, metotrexato, 5-fluorouracil e predni- sona).
6. Uso, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que a quimioterapia padrão é selecionada a partir de CHOP (ciclofosfamida, hidroxideu- norrubicina, oncovin, e prednisona ou prednisolona) e R-CHOP (rituximabe, ciclofos- famida, hidroxidaunorrubicina, oncovin, prednisona ou prednisolona).
7. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, CARACTERIZADO pelo fato de que o composto e o segundo agente são formulados para serem administrados em sequência.
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