NO323694B1 - Fast produkt som kan anvendes i forbindelse med fertilisering in vitro, anvendelse derav ved fremstilling av en vandig opplosning og fremgangsmate for fremstilling av en vandig opplosning. - Google Patents
Fast produkt som kan anvendes i forbindelse med fertilisering in vitro, anvendelse derav ved fremstilling av en vandig opplosning og fremgangsmate for fremstilling av en vandig opplosning. Download PDFInfo
- Publication number
- NO323694B1 NO323694B1 NO20021309A NO20021309A NO323694B1 NO 323694 B1 NO323694 B1 NO 323694B1 NO 20021309 A NO20021309 A NO 20021309A NO 20021309 A NO20021309 A NO 20021309A NO 323694 B1 NO323694 B1 NO 323694B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- mas
- aqueous solution
- preparation
- cholest
- oocytes
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 41
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 title claims description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 7
- 239000012265 solid product Substances 0.000 title claims description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title description 3
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 title description 2
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 claims description 25
- LFQXEZVYNCBVDO-PBJLWWPKSA-N 4,4-dimethyl-5alpha-cholesta-8,14,24-trien-3beta-ol Chemical compound C([C@@]12C)C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]1CCC1=C2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@@H](CCC=C(C)C)C)CC=C21 LFQXEZVYNCBVDO-PBJLWWPKSA-N 0.000 claims description 20
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 19
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 19
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 6
- MCKLJFJEQRYRQT-APGJSSKUSA-N 20-hydroxycholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@@](C)(O)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 MCKLJFJEQRYRQT-APGJSSKUSA-N 0.000 claims description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 claims description 2
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 230000021121 meiosis Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 abstract 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract 1
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 22
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 14
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 6
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 4
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 3
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- AWBZPJQUWZBRII-UHFFFAOYSA-N (10S)-3c-Hydroxy-10r.13c-dimethyl-17c-((R)-1.5-dimethyl-hexyl)-(5tH)-Delta8.14-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren Natural products CC12CCC(O)CC1CCC1=C2CCC2(C)C(C(C)CCCC(C)C)CC=C21 AWBZPJQUWZBRII-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AWBZPJQUWZBRII-CXDHQSPESA-N 5alpha-cholesta-8,14-dien-3beta-ol Chemical compound C([C@@]12C)C[C@H](O)C[C@@H]1CCC1=C2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)CCCC(C)C)CC=C21 AWBZPJQUWZBRII-CXDHQSPESA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 108010086677 Gonadotropins Proteins 0.000 description 1
- 102000006771 Gonadotropins Human genes 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 108010006578 follitropin alfa Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002622 gonadotropin Substances 0.000 description 1
- 229940094892 gonadotropins Drugs 0.000 description 1
- 229940057854 gonal f Drugs 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 210000003339 pole cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002342 ribonucleoside Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
- A61K31/575—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of three or more carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, ergosterol, sitosterol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/81—Packaged device or kit
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører et fast produkt som kan anvendes i forbindelse med fertilisering in vitro. Videre vedrører oppfinnelsen anvendelse derav ved fremstilling av en vandig oppløsning og fremgangsmåte for fremstilling av en vandig oppløsning.
OPPFINNELSENS BAKGRUNN
Flere meioseaktiverende stoffer (heretter betegnet MAS) er blitt funnet. Når MAS holdes i et medium som innholder oocytter, blir oocyttene mer tilbøyelige til å bli fertilisert. Et hovedproblem ved bruken av MAS er imidlertid at de vanligvis har svært lav oppløselighet.
OPPSUMMERING AV OPPFINNELSEN
Ett formål med denne oppfinnelsen er å utvikle et preparat som innholder MAS eller et derivat derav, som kan oppløses i et vandig medium.
Et annet formål er å utvikle et preparat som inneholder MAS eller et derivat derav, som kan oppløses i et vandig medium uten noen fysisk påvirkning, slik som oppvarming, omrøring eller ultralydbehandling.
NÆRMERE BESKRIVELSE AV OPPFINNELSEN
Oppløseligheten av et foretrukket MAS, dvs. FF-MAS, i vann er svært lav, dvs. ca. 20 pikogram /ml (svarende til 2 x 10"<5> ug/ml), og i etanol er oppløseligheten vesentlig større, dvs. ca. 4 mg/ml. I henhold til våre preliminære undersøkelser er den største oppløseligheten av FF-MAS i en blanding av etanol og vann (1:2,5) ca. 0,4 mg/ ml. Flere andre MAS har en lignende lav oppløselighet i vann.
Overraskende er det nå funnet at et fast preparat som innholder humant serumalbumin, eventuelt i rekombinant form, og en MAS-forbindelse valgt fra gruppen bestående av 4,4-dimetyl-5a-cholesta-8,14,24-trien-3p-ol, 4,4-dimetyl-5o>cholest-8,14,24-trien-3p<->ol-hemisuksinat, 5a-cholest-8,14-dien-3 p-ol, 5a-cholest-8,14-dien-3p-ol-hemisuksinat, (20S)-cholest-5-en-3p, 20-diol, 3p-hydroksy-4,4-dimetyl-5a-chola-8,14-dien-24-syre-N-(metionin)amid og cholest-5-en-16p-ol, har en god oppløselighet i vann. Det humane serumalbumin er en bestanddel som, når den tilsettes til MAS, gir et preparat som kan anvendes til å fremstille en vandig oppløsning som. inneholder MAS.
Preparatene ifølge denne oppfinnelsen har fortrinnsvis et innhold av vann under 10 %, fortrinnsvis under 5 %, mer foretrukket under 1 % (vekt/vekt).
Fortrinnsvis har preparatene ifølge denne oppfinnelsen et innhold av organisk oppløsningsmiddel under 10 %, fortrinnsvis under 5 %, mer foretrukket under 1 %
(vekt/vekt). -
Preparatene ifølge denne oppfinnelsen har fortrinnsvis et innhold av MAS under
1 %, fortrinnsvis under 0,1 %, mer foretrukket under 0,05 % (vekt/vekt).
Foretrukne preparater ifølge denne oppfinnelsen er slike som kan behandles med et vandig medium som inneholder ikke noe eller bare lave konsentrasjoner av organisk oppløsningsmiddel, og som resulterer i en oppløsning som innholder MAS. Disse vandige media innholder fortrinnsvis mindre enn 1 %, fortrinnsvis mindre enn 0,3 %, mer foretrukket mindre enn 0,1 % organisk oppløsningsmiddel (vekt/vekt).
Tidligere har flere forsøk på å fremstille preparater som oppfyller dette kravet, vært mislykket.
Her betegner uttrykket MAS forbindelser som formidler meiosen av oocytter. Nærmere bestemt er MAS forbindelser som i testen beskrevet i eksempel 1 nedenunder har en prosentvis kjønnscellevesikkelnedbrytning (heretter betegnet GVB) som er signifikant høyere enn kontrollen. MAS-forbindelser er slike som har en prosentvis GVB på minst 50 %, fortrinnsvis minst 80 %. MAS-forbindelsene er som nevnt 4,4-dimetyl-5a-cholesta-8,14, 24-trien-3p-ol (heretter betegnet FF-MAS); 4,4-dimetyl-5a-cholest-8, 14,24-trien-3p-ol-hemisiiksinat; 5a-cholest-8,14-dien-3p<->ol; 5ct-cholest-8,14-dien-3p<->ol-hemisuksinat; (20S)-cholest-5-en-3p, 20-diol; 3p-hydroksy-4,4-dimetyl-5a-chola-8,14-dien-24-syre-N-(metionin)amid; og cholest-5-en-16P-ol.
Én måte å fremstille preparatene ifølge denne oppfinnelsen på, er å blande en oppløsning av MAS i et organisk oppløsningsmiddel, slik som etanol, med en vandig oppløsning av serumalbuminet, og deretter å vente inntil pppløsningsmidlet er fordampet. Fordampningen kan fremskyndes ved å bruke kontinuerlig luftstrømning over produktet, vakuum eller hvilke som helst andre gjennomførbare metoder for å fjerne oppløsnings-midlet. Det markedsførte produkt kan være et avleveringssystem som har én eller flere forsenkninger eller fordypninger. Heretter har disse forsenkningene og fordypningene fellesbetegnelsen fordypninger. Minst én av disse fordypningene inneholder et preparat ifølge oppfinnelsen. En passende måte å plassere ut det faste MAS i disse, er først å plassere en oppløsning som inneholder MAS og additivet i fordypningen, og deretter fordampe oppløsningen. På denne måte plasseres fordampningsresten, det vil si preparatet ifølge oppfinnelsen, direkte i fordypningen i anordningen (avleverings-systemet).
Ettersom preparatet ifølge oppfinnelsen skal anvendes til behandlingen av oocytter, er det viktig at preparatet ifølge oppfinnelsen ikke inneholder bestanddeler som påvirker oocyttene negativt.
Én måte å anvende preparatene ifølge oppfinnelsen på, er å oppløse preparatet i et vandig medium, slik som vann, og så om ønsket tilsette andre bestanddeler som kan ha en gunstig innflytelse på modningen av oocyttene.
En annen måte å bruke preparatet på, er å oppløse det i et medium som normalt brukes til modning in vitro.
Foreliggende oppfinnelse er ytterligere illustrert ved hjelp av de følgende eksempler. Trekkene som er beskrevet i beskrivelsen ovenfor og i de etterfølgende eksempler, kan i enhver kombinasjon derav være av avgjørende betydning for realisering av oppfinnelsen i diverse former derav.
Eksempel 1
Metode brukt til bestemmelse av hvorvidt en forbindelse er et MAS eller ikke.
Oocytter ble erholdt fira ikke kjønnsmodne hunnmus (CS7BL/6J x DB A/2 J Fl, Bomholtgaard, Danmark) som veide 13-16 gram, som ble oppbevart under regulert temperatur (20-22 °C), lys (lys fra klokken 06.00 til 18.00) og relativ fuktighet (50-70 %). Musene fikk en intraperitoneal injeksjon av 0,2 ml gonadotropiner (Gonal-F, Serono) innholdende 20IU FSH, og 48 timer senere ble dyrene avlivet ved hjelp av hals-dislokasjon. Ovariene ble dissekert ut og oocyttene ble isolert i Hx-medium (se nedenunder) under et stereomikroskop ved hjelp av manuell oppbrytning av folliklene under anvendelse av et par nåler størrelse 27 G. Kuleformede oocytter som har en intakt germinal vesikkel (heretter betegnet GV) ble delt i cumulusinnelukkede oocytter (heretter betegnet CEO) og nakne oocytter (heretter betegnet NO), og plassert i a-minimalt essensielt medium (ot-MEM uten ribonukleosider, Gibco BRL, katalog nr. 22561) supplert med 3 mg/ml bovint serumalbumin (BSA, Sigma, katalog nr. A-7030), 5 mg/ml humant serumalbumin (HSA, Statens Seruminstitut, Danmark), 0,23 mM pyruvat (Sigma, katalog nr. S-8636), 2 mM glutamin (Flow katalog nr. 16-801), 100 IU/ml penicillin og 100 jig/ml streptomycin (Flow katalog nr. 16-700). Dette medium ble supplert med 3 mM hypoxantin (Sigma, katalog nr. H-9377) og betegnet Hx-medium.
Oocyttene ble skyllet tre ganger i Hx-medium og oocytter med jevn størrelse ble inndelt i grupper av CEO og NO. CEO og NO ble dyrket i 4-brønners multiskåler (Nunclon, Danmark) hvor hver brønn inneholdt 0,4 ml Hx-medium og forbindelsen som skulle testes, i en konsentrasjon på 10 um. En kontrollbrønn (dvs.35-45 oocytter dyrket i identisk medium uten noen tilsetning av testforbindelser) ble alltid dyrket samtidig med tre testbrønner (35-45 oocytter pr. brønn supplert med testforbindelse).
Oocyttene ble dyrket i en fuktet atmosfære av 5 % C02 i luft i 24 timer ved
37 °C. Ved slutten av dyrkningsperioden ble antallet oocytter med henholdsvis GV, GVB og polceller (PB) tellet ved å anvende et stereomikroskop (Wildt, Leka MZ 12). Prosent-andelen av GVB, definert som prosentandel av oocytter som gjennomgikk GVB pr. totaliantall oocytter i den brønnen, ble beregnet som:
% GVB - ((antall GVB + antall PB)/ totalantall oocytter) x 100.
Eksempel 2
Metode brukt til å bestemme hvorvidt en forbindelse kan brukes som additiv i preparatene ifølge oppfinnelsen eller ikke.
Et additiv for FF-MAS-preparater er kjennetegnet ved:
Forbedring av oppløseligheten av FF-MAS i etanol/vann (1: 2,5 volum/volum)
Sikring av en klar oppløsning av FF-MAS etter rekondisjonering av preparatet i MEM ALPHA medium.
Sikring av at prosent GVB er minst 50 %, fortrinnsvis 80 %, når det testes på oocytter erholdt fra ikke kjønnsmodne hunnmus.
Fremstilling av en mettet etanoloppløsning av FF-MAS. Den blandes med den vandige oppløsning av additivet i forholdet 1:2,5. Ved visuell inspeksjon kontrolleres det at rikelig FF-MAS er tilgjengelig i oppløsningen. Oppløsningen roteres i 24 timer ved romtemperatur. Oppløsningen filtreres gjennom 0,22 fim filter, innholdet av FF-MAS bestemmes ved hjelp av HPLC og oppløseligheten beregnes. 350 fil overføres til 4-brønners skål og det inndampes til tørrhet ved romtemperatur. 500 fil MEM ALPHA medium (Gibcobal) tilsettes. Dersom det fås en klar oppløsning innen en halv time, testes preparatet med hensyn på oocytter erholdt fra ikke kjønnsmodne hunnmus. Erholdte prosent GVB er minst 50 %, fortrinnsvis 80 %, se eksempel 1.
Eksempel 3
Preparat som inneholder humant serumalbumin (HSA).
I dette eksemplet ble det fremstilt tre produkter. Under henvisning til tabellen nedenunder inneholdt standardoppløsningen av FF-MAS brukt for produkt 1,2 og 3 henholdsvis 50, 500 og 3 330 fig /ml. For hvert av produktene inneholdt standard-oppløsningen av HSA 20 % HSA. Mengden av standardoppløsningene som ble brukt er angitt i tabellen. For produkt 1 ble for eksempel 400 fil av FF-MAS-standardoppløsning-en blandet med 1 000 ul av HSA-standardoppløsningen. Etter blanding av disse standard-oppløsningene var oppløsningene klare og det ble ikke observert noen utfelling i dem. Etter blanding ble mengden angitt i tabellen overført til 4-brønners multiskåler (Nuclon, Danmark). For produkt 1 ble for eksempel 350 fil av blandingen overført til multiskålen. Til sist ble oppløsningen inndampet til tørrhet ved romtemperatur. Etter inndamping fremkommer noen av produktene som en opalescerende, klar film i skålene, andre er usynlige for menneskeøyet. Den høyeste konsentrasjonen av FF-MAS oppløst i dette eksemplet er 0,95 mg/ml.
Før bruk tilsettes 500 ul MEM ALPHA medium (Gibcobal) og en klar oppløsning av FF-MAS og HSA fås innen en halv time ved romtemperatur.
Eksempel 4
Preparater som inneholder humant serumalbumin (HSA).
Analogt med det som er beskrevet i eksemplet ovenfor, ble det fremstilt oppløsninger av FF-MAS i vann/etanol inneholdende HSA ved de konsentrasjonene som er angitt nedenunder, ved hjelp av prøveblanding ved romtemperatur. Etter fremstilling var oppløsningene klare og det ble ikke observert noen utfelling. Oppløsningene ble overført til 4-brønners multiskåler (Nuclon, Danmark). Til sist ble oppløsningene inndampet til tørrhet ved romtemperatur.
Før bruk ble 500 ul MEM ALPHA medium (Gibcobal) tilsatt og i løpet av en halv time ved romtemperatur fås det en klar oppløsning av FF-MAS og HSA.
Preparatene ble testet på oocytter erholdt fra ikke kjønnsmodne hunnmus. Prosent GVB for det respektive preparat er angitt i tabellen nedenunder.
Eksempel 5
Preparater som inneholder humant serumalbumin (HSA).
Analogt med det som er beskrevet i eksemplet ovenfor, ble det fremstilt oppløsninger av FF-MAS i vann/etanol inneholdende HSA med de konsentrasjonene som er angitt nedenunder, ved hjelp av prøveblanding ved romtemperatur. Etter fremstilling var oppløsningene klare og det ble ikke observert noen utfelling. Oppløsningene ble overført til 4-brønners multiskåler (Nuclon, Danmark). Til sist ble oppløsningene inndampet til tørrhet ved romtemperatur.
Før bruk tilsettes 500 ul MEM ALPHA medium (Gibcobal) og i løpet av en halv time ved romtemperatur fås en klar oppløsning av FF-MAS og HSA.
Konsentrasjonen av FF-MAS etter rekondisjonering ble bestemt ved hjelp av HPLC og resultatene er angitt nedenunder. Preparatene ble testet på oocytter erholdt fra ikke kjønnsmodne hunnmus. Prosent GVB for de respektive preparater er angitt nedenunder.
Claims (9)
1. Fast produkt,
karakterisert ved at det inneholder humant serumalbumin, eventuelt i rekombinant form, og en MAS-forbindelse valgt fra gruppen bestående av 4,4-dimetyl-5a-cholesta-8,14,24-trien-3p-ol, 4,4-dimetyl-5a-cholest-8,14,24-trien-3p-ol-hemisuksinat, 5a-cholest-8,14-dien-3p<->ol, 5a-cholest-8,14-dien-3p-ol-hemisuksinat, (20S)-cholest-5-en-3p, 20-diol, 3p-hydroksy-4,4-dimetyl-5a-chola-8,14-dien-24-syre-N-(metionin)amid og cholest-5-en-16p-ol.
2. Preparat ifølge krav 1,
karakterisert ved at innholdet av vann er under 10 %, fortrinnsvis under 5 %, mer foretrukket under 1 % (vekt/vekt).
3. Preparat ifølge hvilket som helst av de forutgående krav,
karakterisert ved at innholdet av organisk oppløsningsmiddel er under 10 %, fortrinnsvis under 5 %, mer foretrukket under 1 % (vekt/vekt).
4. Preparat ifølge hvilket som helst av de forutgående krav,
karakterisert ved at innholdet av en MAS-forbindelse er under 50 fortrinnsvis under 20 %, mer foretrukket under 10 %, mest foretrukket under 5% (vekt/vekt);
5. Preparat ifølge hvilket som helst av de forutgående krav,
karakterisert ved atMAS-forbindelsener4,4-dimetyl-5a-cholesta-8,14,24-trien-3p-ol.
6. Anvendelse av et preparat ifølge hvilket som helst av de forutgående krav ved fremstilling av en vandig oppløsning som, når den brukes til behandling av oocytter, resulterer i en prosentvis kjønnscellevesikkelnedbrytning (GVB) på minst 50 %, og fortrinnsvis minst 80 %, når MAS er FF-MAS.
7. Fremgangsmåte for fremstilling av en vandig oppløsning, karakterisert ved at det anvendes et preparat ifølge hvilket som helst av de forutgående krav slik at innholdet av en MAS-forbindelse blir minst 0,001 ug/ml, fortrinnsvis minst 0,01 ug/ml, mer foretrukket minst 0,1 Mg/ml, enda mer foretrukket minst 0,5 ug/ml.
8. Fremgangsmåte ifølge krav 7,
karakterisert ved at det fremstilles en vandig oppløsning hvor innholdet av en MAS-forbindelse ikke er mer enn 0,1 g/ml, fortrinnsvis ikke mer enn 0,01 g/ml.
9. Fremgangsmåte ifølge kravene 7-8,
karakterisert ved at det fremstilles en vandig oppløsning hvor innholdet av organisk oppløsningsmiddel er mindre enn 0,1 %, fortrinnsvis mindre enn 0,05 %, mest foretrukket mindre enn 0,01 %.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DKPA199901308 | 1999-09-16 | ||
| PCT/DK2000/000500 WO2001019354A2 (en) | 1999-09-16 | 2000-09-11 | Composition for ivf |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO20021309D0 NO20021309D0 (no) | 2002-03-15 |
| NO20021309L NO20021309L (no) | 2002-03-15 |
| NO323694B1 true NO323694B1 (no) | 2007-06-25 |
Family
ID=8103409
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO20021309A NO323694B1 (no) | 1999-09-16 | 2002-03-15 | Fast produkt som kan anvendes i forbindelse med fertilisering in vitro, anvendelse derav ved fremstilling av en vandig opplosning og fremgangsmate for fremstilling av en vandig opplosning. |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6844313B1 (no) |
| EP (1) | EP1216059B1 (no) |
| JP (1) | JP2003509365A (no) |
| KR (1) | KR100757909B1 (no) |
| CN (1) | CN1222319C (no) |
| AT (1) | ATE306942T1 (no) |
| AU (1) | AU781994B2 (no) |
| BR (1) | BR0014058A (no) |
| CA (1) | CA2382908A1 (no) |
| CZ (1) | CZ2002591A3 (no) |
| DE (1) | DE60023324T2 (no) |
| ES (1) | ES2252048T3 (no) |
| HU (1) | HUP0202630A3 (no) |
| IL (1) | IL148234A0 (no) |
| MX (1) | MXPA02002439A (no) |
| NO (1) | NO323694B1 (no) |
| PL (1) | PL202224B1 (no) |
| RU (1) | RU2263516C2 (no) |
| UA (1) | UA78183C2 (no) |
| WO (1) | WO2001019354A2 (no) |
| ZA (1) | ZA200201383B (no) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ20012671A3 (cs) * | 1999-02-26 | 2002-01-16 | Novo Nordisk A/S | Způsob in vitro oplodnění s pouľitím kultivačního média obsahujícího sterol aktivující meiosu |
| ATE306942T1 (de) | 1999-09-16 | 2005-11-15 | Novo Nordisk As | Zusammensetzung zur in-vitro befruchtung |
| WO2001062258A2 (en) * | 2000-02-25 | 2001-08-30 | Schering Aktiengesellschaft | Improvement of implantation rate using ff-mas |
| US6988613B2 (en) | 2001-02-06 | 2006-01-24 | Novo Nordisk A/S | Composition for IVF |
| EP1245572A1 (en) | 2001-03-26 | 2002-10-02 | Schering Aktiengesellschaft | Aminosterol compounds, their use in the preparation of meiosis-regulating medicaments and method for their preparation |
Family Cites Families (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4175074A (en) | 1976-08-23 | 1979-11-20 | Deshmukh Arvind D | Serum-soluble cholesterol compounds and method for their preparation |
| US4751219A (en) | 1985-02-05 | 1988-06-14 | Nederlandse Centrale Organisatie Voor Toegepast-Natuur-Wetenschappelijk Onderzoek | Synthetic glycolipides, a process for the preparation thereof and several uses for these synthetic glycolipides |
| AU4312489A (en) * | 1988-09-23 | 1990-04-18 | Cetus Corporation | Lipid microemulsions for culture media |
| DE4221880A1 (de) | 1992-07-03 | 1994-01-05 | Alfatec Pharma Gmbh | Feste und flüssige Lösungen von schwer wasserlöslichen Arzneistoffen |
| EP0674506B1 (en) * | 1992-12-02 | 2000-08-23 | Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. | Controlled release growth hormone containing microspheres |
| US5716777A (en) * | 1994-06-23 | 1998-02-10 | Novo Nordisk A/S | Regulation of meiosis using sterols |
| US6281015B1 (en) * | 1994-12-16 | 2001-08-28 | Children's Medical Center Corp. | Localized delivery of factors enhancing survival of transplanted cells |
| EP0813595A1 (en) | 1995-03-06 | 1997-12-29 | Novo Nordisk A/S | Stimulation of meiosis |
| CN1191543A (zh) | 1995-06-23 | 1998-08-26 | 诺沃挪第克公司 | 减数分裂调控化合物 |
| GB9625175D0 (en) * | 1996-12-04 | 1997-01-22 | Medi Cult As | Serum-free cell culture media |
| IL130249A0 (en) * | 1996-12-20 | 2000-06-01 | Novo Nordisk As | Meiosis regulating compounds |
| KR20010013401A (ko) | 1997-06-04 | 2001-02-26 | 에프.지.엠. 헤르만스 | 감수분열 조절용 17β-알릴옥시(티오)알킬-안드로스탄유도체 |
| HUP9701554D0 (en) | 1997-09-18 | 1997-11-28 | Human Oltoanyagtermeloe Gyogys | Pharmaceutical composition containing plazma proteins |
| CA2333320A1 (en) | 1998-05-26 | 1999-12-02 | Schering Aktiengesellschaft | Treatment of infertility with camp-increasing compounds alone or in combination with at least one meiosis-stimulating compound |
| CZ20012671A3 (cs) * | 1999-02-26 | 2002-01-16 | Novo Nordisk A/S | Způsob in vitro oplodnění s pouľitím kultivačního média obsahujícího sterol aktivující meiosu |
| ATE306942T1 (de) | 1999-09-16 | 2005-11-15 | Novo Nordisk As | Zusammensetzung zur in-vitro befruchtung |
-
2000
- 2000-09-11 AT AT00958274T patent/ATE306942T1/de not_active IP Right Cessation
- 2000-09-11 MX MXPA02002439A patent/MXPA02002439A/es active IP Right Grant
- 2000-09-11 ES ES00958274T patent/ES2252048T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-11 DE DE60023324T patent/DE60023324T2/de not_active Expired - Fee Related
- 2000-09-11 CZ CZ2002591A patent/CZ2002591A3/cs unknown
- 2000-09-11 CA CA002382908A patent/CA2382908A1/en not_active Abandoned
- 2000-09-11 IL IL14823400A patent/IL148234A0/xx unknown
- 2000-09-11 BR BR0014058-9A patent/BR0014058A/pt not_active Application Discontinuation
- 2000-09-11 EP EP00958274A patent/EP1216059B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-11 JP JP2001522989A patent/JP2003509365A/ja active Pending
- 2000-09-11 HU HU0202630A patent/HUP0202630A3/hu unknown
- 2000-09-11 WO PCT/DK2000/000500 patent/WO2001019354A2/en active IP Right Grant
- 2000-09-11 RU RU2002109794/15A patent/RU2263516C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-09-11 PL PL353968A patent/PL202224B1/pl not_active IP Right Cessation
- 2000-09-11 AU AU69850/00A patent/AU781994B2/en not_active Ceased
- 2000-09-11 KR KR1020027003526A patent/KR100757909B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2000-09-11 CN CNB008128820A patent/CN1222319C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2000-09-14 US US09/661,696 patent/US6844313B1/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-11-09 UA UA2002032077A patent/UA78183C2/uk unknown
-
2002
- 2002-02-19 ZA ZA200201383A patent/ZA200201383B/en unknown
- 2002-03-15 NO NO20021309A patent/NO323694B1/no not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2382908A1 (en) | 2001-03-22 |
| DE60023324D1 (de) | 2005-11-24 |
| DE60023324T2 (de) | 2006-07-20 |
| ZA200201383B (en) | 2002-11-27 |
| HUP0202630A2 (hu) | 2002-12-28 |
| JP2003509365A (ja) | 2003-03-11 |
| UA78183C2 (en) | 2007-03-15 |
| RU2263516C2 (ru) | 2005-11-10 |
| EP1216059A2 (en) | 2002-06-26 |
| AU6985000A (en) | 2001-04-17 |
| CN1222319C (zh) | 2005-10-12 |
| AU781994B2 (en) | 2005-06-23 |
| ATE306942T1 (de) | 2005-11-15 |
| MXPA02002439A (es) | 2002-07-30 |
| KR100757909B1 (ko) | 2007-09-11 |
| WO2001019354A2 (en) | 2001-03-22 |
| BR0014058A (pt) | 2004-03-30 |
| IL148234A0 (en) | 2002-09-12 |
| HUP0202630A3 (en) | 2004-06-28 |
| WO2001019354A3 (en) | 2001-06-14 |
| NO20021309D0 (no) | 2002-03-15 |
| ES2252048T3 (es) | 2006-05-16 |
| NO20021309L (no) | 2002-03-15 |
| PL353968A1 (en) | 2003-12-15 |
| CN1373675A (zh) | 2002-10-09 |
| KR20020032593A (ko) | 2002-05-03 |
| US6844313B1 (en) | 2005-01-18 |
| EP1216059B1 (en) | 2005-10-19 |
| CZ2002591A3 (cs) | 2002-08-14 |
| PL202224B1 (pl) | 2009-06-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Therien et al. | Major proteins of bovine seminal plasma modulate sperm capacitation by high-density lipoprotein | |
| Juengel et al. | Apoptosis during luteal regression in cattle | |
| Oliphant et al. | Sperm surface components involved in the control of the acrosome reaction | |
| Cox et al. | NPA binding activity is peripheral to the plasma membrane and is associated with the cytoskeleton. | |
| Cameron et al. | In vitro development of the sea urchin male pronucleus | |
| King et al. | Hormonal regulation of final maturation of striped bass oocytes in vitro | |
| Selman et al. | Experimental conditions for oocyte maturation in the zebrafish, Brachydanio rerio | |
| Sridaran et al. | GnRH agonist treatment decreases progesterone synthesis, luteal peripheral benzodiazepine receptor mRNA, ligand binding and steroidogenic acute regulatory protein expression during pregnancy | |
| Younes et al. | Estradiol and progesterone binding in human term placental cytosol | |
| NO323694B1 (no) | Fast produkt som kan anvendes i forbindelse med fertilisering in vitro, anvendelse derav ved fremstilling av en vandig opplosning og fremgangsmate for fremstilling av en vandig opplosning. | |
| Salzano et al. | Evaluation of factors involved in the failure of ovum capture in superovulated buffaloes | |
| Bonnamy et al. | Estrous cycle-related changes of high affinity luteinizing hormone/human chorionic gonadotropin binding sites in the rat uterus | |
| O'Malley et al. | Mechanisms of steroid hormone action | |
| WEST et al. | Immunocytochemistry versus binding assays of the estrogen receptor in the reproductive tract of spayed and hormone-treated macaques | |
| Carlson et al. | Alterations in the cellular membranes of regressing rat corpora lutea | |
| Liu et al. | Fibronectin protected bovine preantral follicles from the deleterious effects of kisspeptin | |
| Abdennebi et al. | Maintenance of sexual immaturity in male mice and bucks by immunization against N-terminal peptides of the follicle-stimulating hormone receptor | |
| Tyler et al. | The effect of progesterone and estradiol on gonadotropin–induced oocyte maturation in isolated ovarian follicles from mice | |
| Hunter et al. | Resumption of follicle growth in gilts after ovarian autografting | |
| Kavaldzhieva et al. | The Death of Sperm Cells | |
| EP1359881A1 (en) | Process and container with low oxygen content and further containing mas | |
| Chen et al. | Effect of peritoneal fluid on sperm motility parameters in women with endometriosis | |
| Contreras | Effect of progesterone on acrosome reaction, hypoosmotic swelling test, and DNA stability in human spermatozoa | |
| Quinn | Assessment of gonadotroph functions in mutant mouse pituitary fragments perifused with different GnRH pulse frequencies | |
| Demoulin et al. | Inhibin and ovarian function |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |