NL1031384C2

NL1031384C2 - Gesubstitueerde aryl-1,4-pyrazinederivaten.

Info

Publication number: NL1031384C2
Application number: NL1031384A
Authority: NL
Inventors: Patrick Robert Verhoest; Robert Louis Hoffman
Original assignee: Pfizer Prod Inc
Priority date: 2005-03-17
Filing date: 2006-03-16
Publication date: 2007-01-23
Also published as: JP2008533124A; CA2601600A1; WO2006114666A8; MA29336B1; TWI315670B; MX2007011423A; ZA200707933B; NO20075209L; GT200600116A; AP2007004174A0; NL1031384A1; CN101160304A; EP1871763A1; US20060211710A1; BRPI0606284A2; CR9436A; KR20070113294A; DOP2006000056A; TNSN07355A1; WO2006114666A1

Description

GESUBSTITUEERDE ARYL-1,4-PYRAZINEDERIVATEN

ACHTERGROND VAN DE UITVINDING

Deze uitvinding heeft betrekking op gesubstitueerde aryl-1,4-pyrazinederivaten en werkwijzen voor het bereiden 5 ervan, farmaceutische preparaten die deze bevatten en werkwijzen voor het gebruik ervan bij het behandelen van een stoornis of aandoening die kan worden veroorzaakt of bevorderd door antagoniseren van een CRF-receptor, waaronder, maar niet beperkt tot, stoornissen geïnduceerd of be-10 vorderd door CRF, zoals angststoornissen en depressie en stress-gerelateerde stoornissen. Bovendien heeft de onderhavige uitvinding betrekking op het gebruik van dergelijke verbindingen als sondes voor de lokalisatie van CRFi-receptoren in cellen of weefsels.

15 Corticotropine afgevende factor (corticotropin relea sing factor, CRF) is een uit 41 aminozuren opgebouwd peptide dat de voornaamste fysiologische regulator is van de van pro-opiomelanocortine (POMC) afgeleide peptidesecretie uit het voorste gedeelte van de hypofyse [J. Rivier et 20 al., Proc. Natl. Acad. Sci (USA), 80:4851 (1983); W. Vale et al., Science, 213:1394 (1981)]. Naast de endocriene rol ervan bij de hypofyse heeft de immunohistochemische lokalisatie van CRF aangetoond dat het hormoon een algemene extrahypothalamische verspreiding in het centrale zenuw-25 stelsel heeft en een breed spectrum van autonome, elektrofysiologische en gedragseffecten produceert die consistent zijn met een rol als neurotransmitter of neuromodulator in 1031384 2 de hersenen [W. Vale et al., Ree. Prog. Horm. Res., 39:245 (1983); F. Koob, Persp. Behav. Med., 2:39 (1985); E.B. De Souza et al., J. Neurosci., 5:3189 (1985)]. Er is ook bewijs dat CRF een belangrijke rol speelt bij het integreren 5 van de respons in het immuunsysteem op fysiologische, psychologische en immunologische stressoren [J.E. Blalock, Physiological Reviews, 69:1 (1989); J.E. Morley, Life Sci. 41:527 (1987)].

Er is bovendien bewijs dat CRF een rol speelt bij 10 psychiatrische stoornissen en neurologische ziekten, waaronder depressie, angst-gerelateerde stoornissen en voedingsstoornissen. Ook is een rol voor CRF gepostuleerd in de etiologie en pathofysiologie van de ziekte van Alzheimer, ziekte van Parkinson, ziekte van Huntington, progres-15 sieve supranucleaire paralyse en amyotrofe laterale sclerose, aangezien deze een verband kennen met de dysfunctie van CRF-neuronen in het centrale zenuwstelsel [zie voor een overzicht: E.B. De Souza, Hosp. Practice, 23:59 (1988)].

20 Angststoornissen zijn een groep van ziekten, die er kend zijn in het vakgebied, die fobiestoornissen, angst-toestanden, post-traumatische stress-stoornis en atypische angststoornissen omvat [The Merck Manual of Diagnosis and Therapy, 16e editie (1992)]. Emotionele stress is vaak een 25 versnellende factor in angststoornissen, en dergelijke stoornissen reageren in het algemeen op medicijnen die de respons op stress verminderen.

Bij een affectieve stoornis of een ernstige depressie is de concentratie van CRF aanzienlijk hoger in de vloei-30 stof van hersenen en ruggenmerg (cerebral spinal fluid; CSF) van personen die geen geneesmiddelen gebruiken [C.B. Nemeroff et al., Science, 226:1342 (1984); C.M. Banki et al., Am. J. Psychiatry, 144:873 (1987); R.D. France et al., Biol. Psychiatry, 28:86 (1988); M. Arato et al., Bi-35 ol. Psychiatry, 25:355 (1989)]. Verder is de dichtheid van CRF-receptoren aanzienlijk minder in de frontale cortex van slachtoffers van zelfmoord, hetgeen overeenstemt met 3 een hypersecretie van CRF [C.W. Memeroff et al., Arch.

Gen. Psychiatry, 45:577 (1988)]. Bovendien is er een afge-zwakte respons van adrenocorticotropine (ACTH) op CRF (i.v. toegediend) waargenomen bij depressieve patiënten 5 [P.W. Gold et al., Am. J. Psychiatry, 141:619 (1984); F.

Holsboer et al., Psychoneuroendocrinology, 9:147 (1984); P.W. Gold et al., New Engl. J. Med., 314:1129 (1986)].

Preklinische studies bij ratten en niet-humane primaten | verschaffen extra ondersteuning voor de hypothese dat hy-10 persecretie van CRF betrokken kan zijn bij de symptomen die worden waargenomen bij menselijke depressie [R.M.

Sapolsky, Arch. Gen. Psychiatry, 46:1047 (1989)]. Er is ook voorlopig bewijs dat tricyclische antidepressiva de CRF-gehalten kunnen wijzigen en dus de aantallen recepto-15 ren in de hersenen kunnen moduleren [Grigoriadis et al., Neuropsychopharmacology, 2:53 (1989)].

CRF is ook geïmpliceerd in de etiologie van angst-gerelateerde stoornissen, en er is van bekend dat het bij dieren anxiogene effecten produceert. Interacties tussen 20 benzodiazepine-/non-benzodiazepine-anxiolytica en CRF zijn aangetoond bij diverse modellen voor angstgedrag [D.R.

Britton et al., Life Sci., 31:363 (1982). Voorlopige stu dies met gebruik van de veronderstelde de CRF-receptor-antagonist a-helicaal CRF van schapen (9-41), in diverse 25 gedragsparadigma's toont dat de antagonist "anxiolyticum-achtige" effecten produceert die kwalitatief overeenkomen met die van de benzodiazepinen [C.W. Berridge en A.J.

Dunn, Horm. Behav., 21:393 (1987), Brain Research, Re views, 15:71 (1990)].

30 Neurochemische, endocriene en receptorbindingstudies hebben alle interacties aangetoond tussen CRF en benzodia-zepine-anxiolytica, hetgeen verder bewijs verschaft voor de betrokkenheid van CRF bij deze stoornissen. Chlodiaze-poxide verzwakt de "anxiogene" effecten van CRF in zowel 35 de conflictproef [K.T. Britton et al., Psychopharmacology, 86:170 (1985); K.T. Britton et al., Psychopharmacology, 94:306 (1988)] als de akoestische schrikproef [N.R. Swerd- 4 low et al., Psychopharmacology, 88:147 (1986)] bij ratten. De benzodiazepinereceptorantagonist Ro 15-1788, die zonder gedragsactiviteit alleen was in de conflictproef, keerde de effecten van CRF om op een dosisafhankeli j ke wijze, 5 terwijl de inverse benzodiazepineagonist FG 7142 de werkingen van CRF versterkte [K.T. Britton et al., Psychop-harmacology, 94:396 (1988)]. De werkingsmechanismen en de werkingsplaatsen waardoor de gebruikelijke anxiolytica en antidepressiva hun therapeutische effecten produceren moe-10 ten nog worden opgehelderd. Voorlopige studies die de effecten van een CRFi-receptoragonistpeptide (a-helicaal CRF9-41) bij diverse gedragsparadigma' s onderzoeken, hebben aangetoond dat de CRFi-antagonist "anxiolyticum-achtige" effecten produceert die kwalitatief vergelijkbaar zijn met 15 die van de benzodiazepinen [zie voor een overzicht: G.F. Koob en K.T. Britton, in : Corticotropin-Releasing Factor: Basic and Clinical Studies of a Neuropeptide, E.B. De Souza en C.B. Nemeroff, redacteuren, CRC Press, blz. 221 (1990)].

20 Het gebruik van CRFi-antagonisten voor de behandeling van Syndroom X is ook beschreven in Amerikaanse octrooiaanvrage 09/696.822, ingediend op 26 oktober 2000, nu gepubliceerd als Amerikaans octrooischrift 6.589.947 en Europese octrooiaanvrage 003094414, ingediend op 26 okto-25 ber 2000, die hierin in hun geheel worden opgenomen door referentie. Werkwijzen voor het gebruik van CRFi-antago-nisten voor het behandelen van congestieve hartinsuffi-ciëntie worden beschreven in Amerikaanse octrooiaanvrage Serienr. 09/248.073, ingediend op 10 februari 1999, nu 30 Amerikaans octrooischrift 6.043.260 (28 maart 2000), die ook hierin in hun geheel zijn opgenomen door verwijzing.

Van CRF is bekend dat het een algemene extrahypotha-lamische verspreiding in het CZS kent, hetgeen daarin bij-draagt aan een breed spectrum van autonome gedrags- en fy-35 siologische effecten [zie bijv. Vale et al., 1983; Koob, 1985, en E.B. De Souza et al., 1985]. De CRF-concentraties zijn bijvoorbeeld in aanzienlijke mate gestegen in de 5 vloeistof van hersenen en ruggenmerg van patiënten die getroffen zijn door een affectieve stoornis of een ernstige depressie [zie bijv. Nemeroff et al., 1984; Banki et al., 1987; France et al., 1988; Arato et al., 1989]. Van over-5 matige CRF-niveaus is bovendien bekend dat deze in diermo-dellen anxiogene effecten produceren [zie bijv. Britton et al., 1982; Berridge en Dunn, 1986 en 1987] en van CRFi-antagonisten is bekend dat deze anxiolytische effecten produceren; dienovereenkomstig worden de therapeutisch ef-10 fectieve hoeveelheden van de verbindingen die hierin worden verschaft, bijvoorbeeld bepaald door de anxiolytische effecten van variërende hoeveelheden van de verbindingen in dergelijke diermodellen te beoordelen.

In de volgende octrooischriften of octrooiaanvragen 15 worden verbindingen beschreven als antagonisten van CRFi-receptoren; W001/60806, WO97/35901, W098/29119, W097/36886, WO07/36898, en de Amerikaanse octrooischriften 5.872.136; 5.880.140 en 5.883.105. De verbindingen zijn bruikbaar voor het behandelen van stoornissen van het CZS, 20 met name affectieve stoornissen en acute en chronische neurologische stoornissen.

In Amerikaanse octrooipublicatie 2003-0144297, die hierin in haar geheel is opgenomen door verwijzing, worden eveneens verbindingen als antagonisten van CRF beschreven.

25

SAMENVATTING VAN DE UITVINDING

We hebben ontdekt dat verbindingen met de formule I, die hierna wordt beschreven, alsmede farmaceutisch aanvaardbare zouten daarvan, antagonisten van CRFi zijn, en 30 dus bruikbaar bij de behandeling van stoornissen en ziekten geassocieerd met CRFi-receptoren, waaronder CZS-gere-lateerde stoornissen en ziekten van het CZS.

De onderhavige uitvinding voorziet dus in een verbinding met de formule I 35 6 hRv.nv.r22

Rf N R4 of een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan, waarin

Ri C1-C6 alkyl, C2-C6 alkenyl, C2-C6 alkynyl, C(0)Ci~C6 5 alkyl, C(0)C2-C6 alkenyl of C(0)C2-C6 alkynyl is, R2 Ci-C6 alkyl, C2-C6 alkenyl of C2-C6 alkynyl is, R22 Ci-C6 alkyl, C2-C6 alkenyl of C2-C6 alkynyl is, R3 Ci-C6 alkyl, C2-C6 alkenyl, C2-C6 alkynyl, halogeen, OCi-C6 alkyl, OC2-C6 alkenyl of OC2~C6 alkynyl is, 10 R4 Ci-C6 alkyl, C2-C6 alkenyl, C2-C6 alkynyl, halogeen, OCi-C6 alkyl, OC2-C6 alkenyl, OC2-C6-alkynyl of NR5R6 is, R5 waterstof, Ci-C6 alkyl, C2-C6 alkenyl of C2-Ce alkynyl, en 15 Re is waterstof, Ci~C6 alkyl, 02-06 alkenyl of C2-C6 alkynyl.

In een ander aspect voorziet de onderhavige uitvinding in een werkwijze voor de behandeling van een stoornis of ziekte die wordt geassocieerd met CRFi-receptoren, of 20 een stoornis waarvan de behandeling kan worden uitgevoerd of vergemakkelijkt door antagoniseren van CRFi bij een zoogdier, met name bij een mens, zoals gegeneraliseerde angststoornis, sociale angststoornis, paniekstoornis, ob-sessief-compulsieve stoornis, angst met co-morbide depres-25 sieve ziekte, affectieve stoornis, angst, eetstoornissen en depressie, waarbij de werkwijze het toedienen van de verbinding met de formule I aan het zoogdier omvat.

In een ander aspect voorziet de onderhavige uitvinding in een farmaceutisch preparaat dat een farmaceutisch 30 aanvaardbare drager of excipiënt en een verbinding van de 7 onderhavige uitvinding omvat. De verbinding van de onderhavige uitvinding kan in het preparaat aanwezig zijn in een hoeveelheid die therapeutisch effectief is voor de behandeling van een stoornis of ziekte die wordt geassoci-5 eerd met CRFi-receptoren, of een stoornis waarvan de behandeling kan worden uitgevoerd of vergemakkelijkt door antagoniseren van CRFi bij een zoogdier, en met name bij een mens.

In een ander aspect voorziet de onderhavige uitvin-10 ding in een werkwijze voor het behandelen van een stoornis die zich uit als hypersecretie van CRF bij een zoogdier, die toedienen aan het zoogdier van een therapeutisch effectieve hoeveelheid van een verbinding van de onderhavige uitvinding omvat.

15 Bij voorkeur is het zoogdier een zoogdier dat behoef te heeft aan de hierin beschreven behandeling.

In een ander aspect voorziet de onderhavige uitvinding in een werkwijze voor het screenen op liganden voor CRFi-receptoren, welke werkwijze omvat: a) het uitvoeren 20 van een concurrerende binding-assay met CRFi-receptoren, een verbinding van de onderhavige uitvinding die is voorzien van een detecteerbaar label en een kandidaatligand, en b) het bepalen van het vermogen van het kandidaatligand tot het verdringen van de gelabelde verbinding.

25 In een ander aspect voorziet de onderhavige uitvin ding in een werkwijze voor het detecteren van CRF-recep-toren in weefsel omvattende: a) het in contact brengen van een verbinding van de onderhavige uitvinding die is voorzien van een detecteerbaar label, met een weefsel, onder 30 omstandigheden die binding van de verbinding aan het weefsel mogelijk maken en b) het detecteren van de gelabelde verbinding die aan het weefsel is gebonden.

In een ander aspect voorziet de onderhavige uitvinding in een werkwijze voor het remmen van de binding van 35 CRF aan een CRFi-receptor omvattende het in contact brengen van een verbinding van de onderhavige uitvinding met een oplossing die cellen bevat die de CRFi-receptor tot 8 expressie brengen, waarbij de verbinding in de oplossing aanwezig is in een concentratie voldoende om de binding van CRF aan de CRFi-receptor te remmen.

In een ander aspect voorziet de onderhavige uitvin-5 ding in een werkwijze voor het verlagen van het niveau van de binding van CRF in vitro aan cellen die de CRFi-recep-tor tot expressie brengen omvattende het in contact brengen van een verbinding volgens conclusie 1 met een oplossing die de cellen bevat, waarbij de verbinding in de op-10 lossing aanwezig is in een concentratie die toereikend is om de niveaus van de binding van CRF aan de cellen in vitro te verlagen.

In een ander aspect voorziet de onderhavige uitvinding in een te vervaardigen artikel omvattende: a) een 15 verpakkingsmateriaal, b) een verbinding van de onderhavige uitvinding en c) een label of een bijsluiter die in het verpakkingsmateriaal aanwezig is en aangeeft dat de verbinding effectief is voor het behandelen van een stoornis of ziekte die wordt geassocieerd met CRFi-receptoren, of 20 een stoornis waarvan de behandeling kan worden gerealiseerd of vergemakkelijkt door antagoniseren van CRFi bij een zoogdier.

In nog een ander aspect voorziet de onderhavige uitvinding in het gebruik van een verbinding van de onderha-25 vige uitvinding in een binding-assay, waarbij één of meer van de verbindingen kunnen worden samengevoegd met een label, waarbij het label direct of indirect voor een detecteerbaar signaal kan zorgen. Diverse labels omvatten ra-dio-isotopen, fluorescerende stoffen, verbindingen die 30 chemiluminescentie vertonen, specifieke bindingsmoleculen, deeltjes, bijv. magnetische deeltjes, en dergelijke.

In nog een ander aspect heeft de onderhavige uitvinding betrekking heeft op het gebruik van de verbindingen van de onderhavige uitvinding (met name de gelabelde ver-35 bindingen van de onderhavige uitvinding) als sondes voor de lokalisatie van receptoren in cellen en weefsels en als standaarden en reagentia voor het gebruik bij het bepalen i 9 van de receptorbindingseigenschappen van de proefverbin-dingen.

Voorbeelden van uitvoeringsvormen van de onderhavige uitvinding omvatten verbindingen met de formule I, waarin 5 Ri ethyl of C(0)CH3 is.

Voorbeelden van uitvoeringsvormen van de onderhavige uitvinding omvatten ook verbindingen met de formule I

waarin R2 ethyl is en R22 ethyl is.

Voorbeelden van uitvoeringsvormen van de onderhavige 10 uitvinding omvatten ook verbindingen met de formule I

waarin R3 C1-C6 alkyl, C2-C6 alkenyl of C2-C6 alkynyl is.

waarin R4 NR5R6 is.

15 Voorbeelden van uitvoeringsvormen van de onderhavige

uitvinding omvatten ook verbindingen met de formule I

waarin R3 C1-C6 alkyl, C2-C6 alkenyl of C2-C6 alkynyl is en R4 NR5R6 is.

Voorbeelden van uitvoeringsvormen van de onderhavige 20 uitvinding omvatten ook verbindingen met de formule I

waarin R3 methyl is en R4 N(CH3)2 is.

Een verbinding van de onderhavige uitvinding kan een gunstige oplosbaarheid in water en maagvloeistoffen vertonen. Als een voorbeeld kan een verbinding van de onderha-25 vige uitvinding waarin R4 NR5R6 is, gunstige oplosbaarheid in water en maagvloeistoffen vertonen. Als een ander voorbeeld kan een verbinding van de onderhavige uitvinding waarin R3 C1-C6 alkyl is en R4 NR5R6 is, gunstige oplosbaarheid in water en maagvloeistoffen vertonen. In een ander 30 voorbeeld van een uitvoeringsvorm kan een verbinding van de onderhavige uitvinding waarin R3 methyl is en R4 N(CH3)2 is, gunstige oplosbaarheid in water en maagvloeistoffen vertonen.

Zoals hierin gebruikt is "halogeen" een groep gekozen 35 uit -F, -Cl, -Br en -I.

10

Zoals hierin gebruikt betekent de term "C1-C6 alkyl" verzadigde resten met zowel rechte als vertakte keten van 1-6 koolstofatomen.

Zoals hierin gebruikt betekent de term "C2-C6 alkenyl" 5 resten met zowel rechte als vertakte keten van 1-6 koolstof atomen die één of meer dubbele bindingen bevatten.

Zoals hierin gebruikt betekent de term "C2-C6 alkynyl" resten met zowel rechte als vertakte keten van 1-6 koolstof atomen die één of meer drievoudige bindingen bevatten. 10 Zoals hierin gebruikt heeft de term "farmaceutisch aanvaardbaar zout" betrekking op een zout bereid uit farmaceutisch aanvaardbare niet-toxische zuren, waaronder anorganische zuren en organische zuren. Geschikte niet-toxische zouten omvatten zouten van anorganische en orga-15 nische zuren met basische resten zoals aminen bijvoorbeeld van azijnzuur, benzeensulfonzuur, benzoëzuur, kamfersul-fonzuur, citroenzuur, etheensulfonzuur, fumaarzuur, glu-conzuur, glutaminezuur, waterstofbromide, waterstofchlori-de, isethionzuur, melkzuur, maleïnezuur, appelzuur, aman-20 delzuur, methaansulfonzuur, slijmzuur, salpeterzuur, pa-moëzuur, pantotheenzuur, fosforzuur, barnsteenzuur, zwavelzuur, wijnsteenzuur, p-tolueensulfonzuur, en dergelijke, en alkali- of organische zouten van zuurresten zoals carbonzuren, bijvoorbeeld alkali- en aardalkalimetaalzou-25 ten die zijn afgeleid van de volgende basen: natriumhydri-de, natriumhydroxide, kaliumhydroxide, calciumhydroxide, aluminiumhydroxide, lithiumhydroxide, magnesiumhydroxide, zinkhydroxide, ammoniak, trimethylammoniak, triethylammo-niak, ethyleendiamine, lysine, arginine, ornithine, choli-30 ne, N,N'-dibenzylethyleendiamine, chloorprocaïne, diethanolamine, procaine, N-benzylfenethylamine, diethylamine, piperazine, tris(hydroxymethyl)aminomethaan, tetrame-thylammoniumhydroxide en dergelijke. Farmaceutisch aanvaardbare zouten van de verbindingen met de formule I kun-35 nen worden bereid door in reactie brengen van de vrije zuur- of basevormen van deze verbindingen met een stoichi-ometrische hoeveelheid van de geschikte base of het ge- 11 schikte zuur in water of in een organisch oplosmiddel, of in een mengsel van de twee; in het algemeen verdienen niet-waterige media als ether, ethylacetaat, ethanol, is-opropanol of acetonitril de voorkeur. Verzamelingen van 5 geschikte zouten worden aangetroffen in Remington's Pharmaceutical Sciences, 17e editie, Mack Publishing Company, Easton, PA, VS, 1985, biz. 1418, waarvan de beschrijving hierin wordt opgenomen door verwijzing.

In een voorbeelduitvoeringsvorm is het zout van een 10 verbinding met de formule I en p-tolueensulfonzuur een farmaceutisch aanvaardbaar zout van een verbinding met de formule I.

De term "therapeutisch effectieve hoeveelheid" van een verbinding van de onderhavige uitvinding betekent een 15 hoeveelheid die effectief is voor het antagoniseren van een abnormaal niveau van CRF of het behandelen van de symptomen van affectieve stoornis, angst, depressie of andere stoornissen die hierboven zijn beschreven, bij een patiënt.

20 De term "verbinding van de onderhavige uitvinding" betekent een verbinding met de formule I of een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan.

De uitvinding waarvoor rechten worden gevraagd, omvat ook prodrugs van de verbindingen met de formule I. De term 25 "prodrug" zoals hierin wordt gebruikt betekent een covalent gebonden drager die het actieve oorspronkelijke geneesmiddel met de formule I in vivo afgeeft wanneer een dergelijke prodrug wordt toegediend aan een zoogdierpa-tiënt. Prodrugs van de verbindingen met de formule I zijn, 30 binnen de strekking van een gedegen medisch voordeel, geschikt voor gebruik in contact met de weefsels van mensen en lagere diersoorten zonder overmatige toxiciteit, irritatie, allergische reactie en dergelijke, zoals behorend bij een redelijke verhouding van voordeel/risico en zijn 35 effectief voor hun beoogde gebruik, net als de zwitter-ionische vormen, waar mogelijk, van de verbindingen van de onderhavige uitvinding. De term "prodrug" betekent verbin- 12 dingen die in vivo snel worden omgezet, zodat de oorspronkelijke verbinding met de formule I wordt verkregen, bijvoorbeeld door hydrolyse in het bloed. Functionele groepen die snel kunnen worden omgezet door metabolische splitsing 5 in vivo vormen een klasse van groepen die reactief zijn met de carboxylgroep van de verbindingen van de onderhavige uitvinding. Deze omvatten, maar zijn niet beperkt tot dergelijke groepen als alkanoyl (zoals acetyl, propionyl, butyryl en dergelijke), ongesubstitueerde en gesubsti-10 tueerde aroyl (zoals benzoyl en gesubstitueerde benzoyl), alkoxycarbonyl (zoals ethoxycarbonyl), trialkylsilyl (zoals trimethyl- en triethylsilyl), mono-esters die worden gevormd met dicarbonzuren (zoals succinyl) en dergelijke. Vanwege het gemak waarmee de metabolisch af te splitsen 15 groepen van de verbindingen die bruikbaar zijn volgens de onderhavige uitvinding in vivo kunnen worden gesplitst, fungeren de verbindingen die dergelijke groepen dragen als prodrugs. De verbindingen die de metabolisch af te splitsen groepen dragen, hebben als voordeel dat deze een bete-20 re biologische beschikbaarheid kunnen vertonen als resultaat van een grotere oplosbaarheid en/of absorptiesnelheid die is verleend aan de oorspronkelijke verbinding dankzij de aanwezigheid van de metabolisch af te splitsen groep. Een diepgaande bespreking van prodrugs wordt gegeven in de 25 volgende: Design of Prodrugs, H. Bundgaard en anderen,

Elsevier, 1985; Methods in Enzymology, K. Widder et al., red., Academie Press, 42, blz. 309-396, 25, 1985; A Textbook of Drug Design and Development, Krogsgaard-Larsen and H. Bundgaard en anderen; Hoofdstuk 5; "Design and Applica-30 tions of Prodrugs", blz. 113-191, 1991; Advanced Drug Delivery Reviews, H. Bundgaard, 8, blz. 1-38, 1992; Journal of Pharmaceutical Sciences, 77, blz. 285, 30, 1988; Chem. Pharm. Bull., N. Nakeya et al., 32, blz. 692, 1984; Pro-drugs as Novel Delivery Systems, T. Higuchi en V. Stella, 35 Vol. 14 van de A.C.S. Symposium Series, en Bioreversible Carriers in Drug Design, Edward B. Roche en anderen, American Pharmaceutical Association en Pergamon Press, 1987, 13 die hierin zijn opgenomen door verwijzing. "Prodrugs" worden geacht elke covalent gebonden drager te zijn die het actieve oorspronkelijke geneesmiddel met de formule I in vivo afgeeft wanneer een dergelijke prodrug wordt toege-5 diend aan een zoogdierpatiënt. De prodrugs van de verbindingen met de formule I worden bereid door modificeren van de in de verbinding aanwezige functionele groepen op een zodanige wijze dat de modificaties worden gesplitst, zowel door middel van een routinematige manipulatie als in vivo, 10 in de oorspronkelijke verbinding.

Prodrugs omvatten verbindingen waarin hydroxy-, amine- of sulfhydrylgroepen zijn gebonden aan een groep die, wanneer deze worden toegediend aan een zoogdierpatiënt, wordt gesplitst, zodat een vrije hydroxyl-, amino- of 15 sulfhydrylgroep wordt gevormd. Voorbeelden van prodrugs omvatten, maar zijn niet beperkt tot, acetaat-, formiaat-en benzoaatderivaten van functionele alcohol- en amino-groepen in de verbindingen met de formule I en dergelijke.

Van een label voorziene verbindingen van de onderha-20 vige uitvinding kunnen worden gebruikt voor in vitro studies zoals autoradiografie van weefselgedeelten of voor in vivo werkwijzen, bijv. PET- of SPECT-scans. De verbindingen van de onderhavige uitvinding zijn met name bruikbaar als standaarden en reagentia bij het bepalen van het ver-25 mogen van een mogelijk farmacon om zich te binden aan de CRFi-receptor.

De hierin gegeven verbindingen kunnen één of meer asymmetrische centra of vlakken hebben, en alle diastereo-mere vormen van de verbinding zijn vervat in de onderhavi-30 ge uitvinding.

Vele geometrische isomeren van olefinen, dubbele C=N-bindingen en dergelijke kunnen ook in de verbindingen aanwezig zijn, en alle dergelijke stabiele isomeren worden overwogen in de onderhavige uitvinding. De verbindingen 35 van de onderhavige uitvinding kunnen in de optisch zuivere vorm worden geïsoleerd, bijvoorbeeld door scheiding van de racemische vorm door middel van de gebruikelijke werkwij- 14 zen zoals kristallisatie in aanwezigheid van een schei-dingsmiddel, of chromatografie met bijvoorbeeld een chira-le HPLC-kolom, of worden gesynthetiseerd door middel van een asymmetrische syntheseroute die de bereiding van enan-5 tiomeer verrijkt materiaal mogelijk maakt. De onderhavige uitvinding omsluit alle mogelijke tautomeren van de verbindingen met de formule I.

UITVOERIGE BESCHRIJVING VAN DE UITVINDING 10 Voorbeelden van verbindingen van de onderhavige uit vinding zijn als volgt: (IR,2S)-azijnzuur-1-[5-(6-dimethylamino-2-methylpyri-dine-3-yl)-3,6-diethylpyrazine-2-ylamino]indaan-2-ylester, (IR,2S)-azijnzuur-1-[5-(6-dimethylamino-2-methylpyri-15 dine-3-yl)-3,6-diethylpyrazine-2-ylamino)indaan-2-ylester, tolueen-4-sulfonzuur en (IR,2S)-[5-(6-dimethylamino-2-methylpyridine-3-yl)-3,6-diethylpyrazine-2-yl](2-ethoxyindan-l-yl)amine.

Verbindingen van de onderhavige uitvinding kunnen 20 worden bereid met gebruik van de reacties die worden afge-beeld in de volgende schema's, of variaties daarvan die voor de deskundigen bekend zijn. Zoals geïllustreerd in schema A voor een voorbeeld van een verbinding van de onderhavige uitvinding, kan het aminopyrazine A-II worden 25 bereid uit het geschikt gefunctionaliseerde chloorpyrazine AI (zie schema B) door reactie met het geschikte heterocyclische of carbocyclische amine in aanwezigheid van een overgangsmetaalkatalysator (bijv. palladium(II)acetaat of tris(dibenzylideenaceton)dipalladium(0)) , base (bijv. na-30 trium- of kalium-tert-butoxide) in oplosmiddelen zoals, maar niet beperkt tot, tolueen, TMF of dioxaan (zie bijvoorbeeld Buchwald, S.L. et al., J. Org. Chem., 2000, 65, 1158. De acetaatvorming kan worden bereikt door koppeling met azijnzuuranhydride of acetylchloride in aanwezigheid 35 van een base (zie A-III). Ethers kunnen worden gevormd door koppelen aan een alkyljodide van het natriumalkoxide van A-II. Halogenering van A-III kan worden bewerkstelligd 15 met een aantal werkwijzen die bij de deskundigen bekend zijn, waarvoor reagentia zoals N-chloorsuccinimide, N-broomsuccinimide, N-joodsuccinimide, broom, jood, pyridi-niumtribromide in oplosmiddelen zoals dichloormethaan, 5 azijnzuur, DMF, enz. worden gebruikt, zodat het halogeen-pyrazine A-IV wordt verkregen. Vorming van verbindingen waarvoor rechten worden gevraagd wordt bewerkstelligd door een door een overgangsmetaal gekatalyseerde koppelingsre-actie van A-IV en een geschikt metalloarylreagens zoals 10 arylboronzuren (zie bijvoorbeeld Miyaura, N. et al., Chem. Rev. 1995, 95, 2457), arylstannanen (zie bijvoorbeeld Mitchell, T.N., Synthesis, 1992, 803) of aryl-Grignard- verbindingen (zie bijvoorbeeld Miller, J.A., Tetrahedron Lett., 1998, 39, 7275).

15

Schema A

CQ"oh Ο?- _'NH2 A-l BINAP, Pd(0Ac)2 ^ A-ll A N-joodsuccinimide

Ac20, E^N, DMF Ό DMF

Or ο Am o Q>"A Bls(dlfenylfosfino)ferroceen

W

A-A, *°Βγ>

** M, A*V

A-V I I

Schema B illustreert de bereiding van monochloorpyra-20 zinen, zoals A-I. In de monochloorpyrazinen van schema B kunnen R2 en R22 dezelfde Ci-C6-alkylgroepen, zoals ethyl, 16 of verschillende Ci-Ce-alkylgroepen zijn; hiervoor worden geschikte aminozuren gekoppeld. De hierna getoonde reac-tievolgorde volgt die beschreven in Chemical and Pharmaceutical Bulletin of Japan, 1979, 27, 2027.

5

Schema B

h2n r2 + h2n r22___ yTR,_^ CVVR- co2h co2h

H

10 Schema C geeft de vorming weer van een voorbeeld- boronzuur als koppelingsfragment. Boronzuren kunnen worden gevormd via metaal-halogeenuitwisseling of door middel van koppelingswerkwijzen met palladium die bij de deskundigen bekend zijn.

15

Schema C

Ψ boh2 1) Mei, Base

N I 2) n-BuLi, B(OiPr)3 f| T

yN 3) hci yN

NH2 -- 20 Behalve voor de hierboven beschreven aandoeningen zijn de verbindingen van de onderhavige uitvinding bruikbaar voor het behandelen van diverse stoornissen bij een zoogdier, met name bij een mens, zoals sociale angststoornis, paniekstoornis, obsessief-compulsieve stoornis, angst 25 met co-morbide depressieve ziekte, affectieve .stoornis, angst, depressie, prikkelbare-darm-syndroom, post-trauma-tische stress-stoornis, supranucleaire paralyse, immuun-suppressie, gastro-intestinale ziekte, anorexia nervosa of andere voedingsstoornissen, onthoudingssymptomen van drugs 30 of alcohol, stoornis met betrekking tot misbruik van chemische stoffen (bijv. nicotine, cocaïne, ethanol, opiaten 17 of andere drugs), ontstekingsstoornis, fertiliteitsproble-men, stoornissen waarvan de behandeling kan worden uitgevoerd of vergemakkelijkt door antagoniseren van CRFx, waaronder, maar niet beperkt tot, stoornissen geïnduceerd 5 of bevorderd door CRF, een stoornis gekozen uit ontste-kingsstoornissen zoals reumatoïde artritis en osteoartri-tis, pijn, astma, psoriasis en allergieën, gegeneraliseerde angststoornis, paniek, fobieën, obsessief-compulsieve stoornis, post-traumatische stress-stoornis, slaapstoor-10 nissen die worden veroorzaakt door stress, pijnperceptie zoals fibromyalgie, stemmingsstoornissen zoals depressie, waaronder ernstige depressie, enkelvoudige episode van depressie, steeds terugkerende depressie, kindermisbruik-geïnduceerde depressie en of postnatale depressie, dysthe-15 mie, bipolaire stoornissen, cyclothymie, vermoeidheidssyndroom, stress-geïnduceerde hoofdpijn, kanker, infecties door humaan immunodeficiëntievirus (HIV), neurodegenera-tieve ziekten zoals ziekte van Alzheimer, ziekte van Parkinson en ziekte van Huntington, huidstoornissen zoals acné 20 en psoriasis, gastro-intestinale ziekten zoals ulcera, prikkelbare-darm-syndroom, ziekte van Crohn, spastische colon, diarree en post-operatieve ilius en overgevoeligheid van de colon geassocieerd met psychopathologische stoornissen of stress, hemorragische stress, psychotische 25 episoden die worden veroorzaakt door stress, euthyroïd-ziekte-syndroom, syndroom van ontoereikend antidiuretisch hormoon (ADH), obesitas, infertiliteit, hoofdtrauma’s, trauma van het ruggenmerg, ischemisch neuronaal letsel (bijv. cerebrale ischemie zoals cerebrale hippocampale 30 ischemie), excitotoxisch neuronaal letsel, epilepsie, cardiovasculaire en hart-gerelateerde stoornissen, waaronder hypertensie, tachycardie en congestieve hartinsufficiën-tie, beroerte, immuundysfuncties, waaronder stress-geïnduceerde immuundysfuncties (bijv. stress-geïnduceerde 35 koortsen, stress-syndroom bij varkens, koorts bij transport van rundvee, paroxistische fibrillatie bij paarden en dysfuncties geïnduceerd door opsluiting bij kippen, stress ______ 18 bij het scheren bij schapen of mens-dierinteractie-gerelateerde stress bij honden), spierspasmen, urine-incontinentie, seniele dementie van het Alzheimer-type, dementie door meervoudig infarct, amyotrofe laterale scle-5 rose, chemische afhankelijkheden en verslavingen (bijv. afhankelijkheden van alcohol, cocaïne, heroïne, benzodi-azepinen of andere drugs), osteoporose, psychosociale dwerggroei en hypoglykemie.

Een verbinding van de onderhavige uitvinding kan voor 10 het behandelen van de hierin beschreven aandoeningen bij een zoogdier of een mens worden toegediend op een wijze die voor contact van het actieve middel met de werkings-plaats in het lichaam van het zoogdier of de mens zorgt. De verbindingen kunnen worden toegediend op een gebruike-15 lijke wijze die beschikbaar is voor gebruik van farmaca, hetzij als een afzonderlijk therapeutisch middel, hetzij samen met therapeutische middelen. Het kan alleen worden toegediend, maar zal in het algemeen worden toegediend met een farmaceutische drager gekozen op grond van de gekozen 20 toedieningsroute en de farmaceutische standaardpraktijk.

De toegediende dosering zal variëren afhankelijk van het gebruik en bekende factoren zoals het farmacodynami-sche karakter van het desbetreffende middel en de wijze en route van de toediening, de leeftijd, het gewicht en de 25 gezondheid van de ontvanger, de aard en de mate van symptomen, de soort van de gelijktijdige behandeling, de frequentie van de behandeling en het gewenste effect.

Voor gebruik bij de behandeling van de hierin beschreven ziekten of aandoeningen kan een verbinding van de 30 onderhavige uitvinding oraal worden toegediend in een dosering van het actieve bestanddeel van 0,002 tot 200 mg/kg lichaamsgewicht. Gewoonlijk zal een dosis van 0,01 tot 10 mg/kg in verdeelde doses een tot vier maal daags, of in een preparaat voor langdurige aangifte, effectief zijn 35 voor het verkrijgen van het gewenste farmacologische effect .

19

Het actieve bestanddeel kan oraal in vaste doserings-vormen, zoals capsules, tabletten en poeders, of in vloeibare vormen zoals elixers, siropen en/of suspensies worden toegediend. De verbindingen van de onderhavige uitvinding 5 kunnen ook parenteraal worden toegediend in preparaten in een steriele vloeistof. Doseringsvormen (preparaten) die geschikt zijn voor toediening bevatten ongeveer 1 mg tot ongeveer 100 mg actief bestanddeel per eenheid. In deze farmaceutische preparaten zal het actieve bestanddeel 10 doorgaans aanwezig zijn in een hoeveelheid van ongeveer 0,5 tot 95 gew.% op grond van het totale gewicht van het preparaat.

De verbindingen van de onderhavige uitvinding kunnen ook worden gebruikt als reagentia of standaarden bij de 15 biochemische studie van de neurologische functie, dysfunc-tie en ziekte.

BEREIDINGEN EN VOORBEELDEN

De onderhavige uitvinding wordt verder geïllustreerd 20 met de volgende voorbeelden en bereidingen, die niet dienen te worden uitgelegd als beperkend voor de onderhavige uitvinding in beschermingsomvang of geest tot de specifieke procedures die daarin worden beschreven.

25 VOORBEELD A

CRFi-receptor-binding-assay voor de beoordeling van de biologische activiteit

Het volgende is een beschrijving van de isolering van membranen uit hersenen van ratten voor gebruik in de stan-30 daardbinding-assay, alsmede een beschrijving van de binding-assay zelf. Deze is gebaseerd op een gemodificeerd protocol beschreven door De Souza (De Souza, 1987).

Voor het bereiden van hersenmembranen voor binding-assays wordt de frontale cortex van ratten gehomogeniseerd 35 in 10 ml ijskoude weefselbuffer (50 mM HEPES-buffer met pH = 7,0, die 10 mM MgCl2, 2 mM EGTA, 1 pg/ml aprotinine, 1 pg/ml leupeptine een 1 pg/ml pepstatine bevat). Het homo- 20 genaat wordt gedurende 10 minuten gecentrifugeerd bij 48000 x g en de ontstane pellet wordt opnieuw gehomogeniseerd in 10 ml weefselbuffer. Na een extra centrifugatie gedurende 10 minuten bij 48000 x g wordt de pellet opnieuw 5 gesuspendeerd tot een eiwitconcentratie van 300 pg/ml.

Binding-assays worden uitgevoerd in platen met 96 putjes in een eindvolume van 300 μΐ. De assays worden geïnitieerd door de toevoeging van 150 μΐ membraansuspen-sie aan 150 μΐ assay-buffer die 125I-schapen-CRF (eindcon-10 centratie 150 pM) en diverse concentraties van remmers bevat. De assay-buffer is dezelfde als hierboven wordt beschreven voor het membraanpreparaat met de toevoeging van nog 0,1% ovalbumine en 0,15 ml bacitracine. Radioligandbinding wordt na 2 uur bij kamertemperatuur beëindigd door 15 filtratie door Packard GF/C-unifilterplaten (voorgeweekt met 0,3% polyethyleenimine) met gebruik van een celoogster van Packard. Filters worden driemaal gewassen met ijskoude fosfaatbuffer-zoutoplossing met pH = 7,0 die 0,01% Triton X-100 bevat. De radioactiviteit van de filters wordt vast-20 gesteld in een Packard TopCount. De niet-specifieke binding wordt bepaald in aanwezigheid van een overmaat (10 pm) a-helicale CRF.

Als alternatief kunnen weefsels en cellen die CRF-receptoren van nature tot expressie brengen, zoals humane 25 neuroblastoom IMR-32-cellen (ATCC; Hogg et al., 1996) worden gebruikt in binding-assays die analoog zijn aan die welke hierboven worden beschreven.

IC5o-waarden worden berekend met gebruik van standaardwerkwijzen uit de stand der techniek, zoals met het 30 niet-lineaire programma voor passend maken van de kromme RS/1 (BBN Software Products Corp., Cambridge, MA, VS). Een verbinding wordt als actief beschouwd indien deze een IC50-waarde van minder dan ongeveer 10 micromolair (μΜ) voor de remming van de CRFi-receptoren heeft. De bindingsaffini-35 text van de verbindingen met de formule I die wordt uitge-drukt als de IC50-waarde varieert in het algemeen van ongeveer 0,5 nanomolair tot ongeveer 10 micromolair. Voor- 21 keursverbindingen met de formule I vertonen een IC50 van 1 micromolair of minder, verbindingen met de formule I die meer voorkeur hebben, vertonen een IC50 van minder dan 100 nanomolair, en verbindingen met de formule I die nog meer 5 voorkeur hebben, vertonen een IC50 van minder dan 10 nanomolair .

VOORBEELD B

Remming van CRF-gestimuleerde adenylaatcyclaseactivi-10 teit

Remming van CRF-gestimuleerde adenylaatcyclaseactivi-teit kan worden uitgevoerd zoals tevoren is beschreven [G. Battaglia et al., Synapse, 1:572 (1987)]. In het kort: de assays worden gedurende 10 minuten bij 37°C uitgevoerd in 15 200 ml buffer die 100 mM Tris-HCl (pH =7,4 bij 37°C) , 10 mM MgCl2, 0,4 mM EGTA, 0,1% BSA, 1 mM isobutylme-thylxanthine (IBMX), 250 eenheden/ml fosfocreatinekinase, 5 mM creatinefosfaat, 100 mM guanosine-5'-trifosfaat, 100 nM o-CRF, antagonistische peptiden (in diverse concentra-20 ties) en 0,8 mg oorspronkelijk vochtig weefsel (ongeveer 40-60 mg eiwit) bevat. Reacties worden geïnitieerd door de toevoeging van 1 mM ATP/[32P]-ATP (ongeveer 2-4 mCi/buis) en beëindigd door de toevoeging van 100 ml 50 mM Tris-HCl, 45 mM ATP en 2% natriumdodecylsulfaat. Om de gevormde hoe-25 veelheid cAMP te volgen, wordt 1 ml [3H]-cAMP (ongeveer 40.000 dpm) aan elke buis toegevoegd voorafgaand aan de scheiding. De scheiding van [32P]-cAMP van [32P]-ATP wordt uitgevoerd door opeenvolgende elutie over Dowex- en alumina kolommen.

30 Als alternatief kan de adenylaatcyclaseactiviteit worden beoordeeld in platen met 96 putjes door gebruik te maken van de Adenylyl Cyclase Activation FlashPlate Assay van NEN Life Sciences volgens de verschafte protocollen. In het kort: een vaste hoeveelheid van een radiolabel 35 voorziene cAMP wordt toegevoegd aan platen met 96 putjes die zijn voorbekleed met anti-cyclisch AMP-antilichaam. De cellen of weefsels worden toegevoegd en gestimuleerd in 22 aanwezigheid of afwezigheid van remmers. Ongelabeld cAMP dat door de cellen wordt geproduceerd, zal het van een ra-diolabel voorziene cAMP uit het antilichaam verdringen. Het gebonden, van een radiolabel voorziene cAMP produceert 5 een lichtsignaal dat kan worden gedetecteerd met gebruik van een scintillatieteller voor microplaten, zoals de Packard TopCount. Verhogen van de hoeveelheden ongelabeld cAMP leidt tot een daling van het detecteerbare signaal over een ingestelde incubatietijd (2-24 uur).

10 VOORBEELDEN Bereiding 1 (IR,2S)-1-(3,6-Diethylpyrazine-2-ylamino)indaan-2-ol In een reactor met glazen binnenwand van 200 1, die 15 was doorgeblazen met stikstof, werden (IR,2S)-(+)-cis-1-amino-2-indanol (2,5 kg, 16,1 mol, 1,5 eq.), palladium-(II)acetaat (72 g, 0,3 mol, 3 mol%), 2,2'-bis(difenyl- fosf ino)-1,1'-binaftyl (200 g, 0,3 mol, 3 mol%) en cesium-carbonaat (7,0 kg, 21,5 mol, 2,0 eq.) gebracht, waarna to-20 lueen (65 1, uit voorraadvat) volgde. Aan de geroerde witte suspensie werd 3-chloor-2,5-diethylpyrazine (1,83 kg, 10,7 mol, 1,0 eq.) bij kamertemperatuur toegevoegd en de inhoud werd gedurende 2 uur verhit tot reflux (110°C), waarna de reactie volgens HPLC als verlopen werd beoor-25 deeld (4 druppels reactiemengsel werden toegevoegd aan water en vervolgens geëxtraheerd in 1 ml MTBE, het oplosmiddel werd verwijderd en het werd verdund met 1,5 ml CH3CN/water). Aan het reactiemengsel bij omgevingstemperatuur werden methyl-t-butylether (45 1, uit voorraadvat) en 30 water (45 1) toegevoegd en de lagen werden gescheiden. De organische laag werd voor de tweede maal gewassen met water (45 ml) en vervolgens geëxtraheerd met methyl-t-butylether (45 1, uit voorraadvat). De gecombineerde organische lagen werden vervolgens onder vacuüm geconcentreerd 35 tot een minimaal volume. Dimethylformamide (4 gallon, E&M Science) werd toegevoegd en de ontstane zwarte oplossing werd overgebracht in een fles van 20 1. Voor (1R,2S)-1- 23 (3,6-diethylpyrazine-2-ylamino)indaan-2-ol werd met gebruik van kwantitatieve HPLC een opbrengst (2,27 kg, 73 %) bepaald. Dit materiaal werd zonder verdere zuivering gebruikt. Volgens HPLC was de retentietijd van de titelver-5 binding 2,1 min. Kolom: 150 mm x 4,6 mm, Luna 5μ fenyl- hexyl; 50/50 = CH3CN/water + 0,1% TFA met gradiënt tot 75/25 + 0,1% CH3CN/water + 0,1% TFA.

IR (diffuse reflectie): 3435, 3241, 2962, 2935, 2912, 2873, 1581, 1547, 1500, 1453, 1184, 1163, 1047, 744, 733 10 cm-1; OAMS, ESI+: 384,0; MS(CI): m/z = 284 (MH+) .

HRMS (FAB), ber. Voor Ci7H2iN30+Hi: 284,1763; gevonden: 284,1754.

[ot]25o = 12° (c = 0,55, methyleenchloride) .

15 Anal. ber. voor CnH2iN30: C, 72,06; H, 7,47; N, 14,83.

Gevonden: C,72,15; H, 7,53; N, 14,41.

Bereiding 2 (IR, 2S)-Azijnzuur-1-(3,6-diethyl-5-joodpyrazine-2-yl-20 amino)indaan-2-ylester

In een reactor van 1200 1 met glazen binnenwand, die was doorgeblazen met stikstof, werden (IR,2S)-1-(3,6-di-ethylpyrazine-2-ylamino)indaan-2-ol (25 kg, 86,1 mol, 1 eq.), 4-dimethylaminopyridine (1,0 kg, 8,6 mol, 10 mol%) 25 en tetrahydrofuran (139 1, uit voorraadvat) gebracht, werd gevolgd door triethylamine (18 kg, 177,9 mol, 2,1 eq.). Aan deze oplossing werd azijnzuuranhydride (10,6 kg, 103,8 mol, 1,2 eq.) toegevoegd terwijl een inwendige temperatuur lager dan 30°C werd gehandhaafd. Na gedurende 3 uur roeren 30 bij 20-25°C liet HPLC (3 druppels toegevoegd aan 1,0 ml methanol, vervolgens verdund met 0,5 ml water) onvolledige reactie zien. Er werd meer azi jnzuuranhydride (2,4 kg, 23,8 mol, 0,3 eq.) toegevoegd en de inhoud werd gedurende nog 1 uur geroerd, waarna opnieuw werd getest en de reac-35 tie als verlopen werd beoordeeld. Methanol (6,3 kg, 197,2 mol) werd toegevoegd om de overmaat azijnzuuranhydride op te gebruiken en er werd gedurende 1 uur geroerd waarna het 24 mengsel werd verdund met methyl-2-butylether (200 1) en water (200 1) die citroenzuur (2,30 kg, 119,7 molen) bevatten. De fasen werden gescheiden en de waterlaag werd geëxtraheerd met methyl-t-butylether (100 1) . De gecombi-5 neerde organische fasen werden gewassen met IN natriumhydroxide in water (200 1) en water (2 x 100 1). De gecombineerde organische lagen werden onder vacuüm gedestilleerd tot minder dan 75 1, waarna dimethylformamide (150 1, uit voorraadvat) werd toegevoegd en het concentreren werd 10 voortgezet tot een tankvolume van -160 1. Deze oplossing werd toegevoegd aan een tweede reactor van 1200 1 met glazen binnenwand die N-joodsuccinimide (30,0 kg, 133,3 mol, 1,5 eq. ) bevatte. Vervolgens werd gedurende 3 uur verhit tot 55°C, waarna de reactie volgens HPLC als verlopen werd 15 beoordeeld (3 druppels reactiemengsel in water en vervolgens geëxtraheerd in 1 ml MTBE, het oplosmiddel werd verwijderd en het werd verdund met 1,5 ml CH3CN/water). Het mengsel van omgevingstemperatuur werd verdund met methyl-t-butylether (200 1) en behandeld met water (200 1) dat 20 natriumthiosulfaat-pentahydraat (22,6 kg, 91 mol) bevatte. De lagen werden gescheiden en de waterlaag werd geëxtraheerd met methyl-t-butylether (100 1) . De gecombineerde organische lagen werden gewassen met water (3 x 100 1) en vervolgens onder vacuüm gedestilleerd tot een klein volu-25 me, zodat onzuivere (IR,2S)-azijnzuur-1-(3,5-diethyl-5-joodpyrazine-2-ylamino)indan-2-ylester werd verkregen. De zuivering werd gedaan over silica (500 kg), waarbij werd geëlueerd met 20/80 EtOAc/octaan en fracties van 200 1 werden verzameld. Concentratie van de juiste kolomfracties 30 terwijl octaan werd toegevoegd gaf een suspensie die werd gekoeld tot 0°C, gefiltreerd en gewassen met octaan, en vervolgens met stikstof gedroogd, zodat 31,1 kg (80 %) ti-telverbinding als een witte, vaste stof werd verkregen. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d5) δ 7,28 (m, 4H) , 6,66 (d, J=9Hz, 35 1H), 5,80 (m, 1H) , 5,68 (m, 1H) , 3,29 (m, 1H) , 3,01 (d, J = 17 Hz, 1H), 2,69 (m, 4H) , 1,88 (s, 3H) , 1,15 (m, 6H) ; 13C-NMR (DMS0-d6) δ 169, 72, 153, 75, 151,01, 143, 73, 141,24, 25 139,89, 127,80, 126,75, 124,72, 124,39, 100,66, 74,33, 57,01, 36,82, 31,04, 24,71, 20,86, 12,60, 11,17.

Bereiding 3 5 (5-Broom-6-methylpyridine-2-yl)dimethylamine

Aan een oplossing van 5-broom-6-methylpyridine-2-yl-amine (4 g, 0,021 mol) in tetrahydrofuran (105 ml) werd natriumhydride (60%, 1,2 eq., 1 g) toegevoegd. Na 30 minuten werd joodmethaan (1,56 ml, 1,2 eq.) toegevoegd. Na nog 10 24 uur werden natriumhydride (60%, 1,2 eq., 1 g) en jood methaan (1,56 ml, 1,2 e.q.) toegevoegd. Het reactiemengsel werd gedurende 72 uur geroerd en uitgegoten in 1 N NaOH, geëxtraheerd met ethylether, gedroogd op magnesiumsulfaat, gefiltreerd en geconcentreerd. MPLC-chromatografie (Biota-15 ge), waarbij werd geëlueerd met 2-10% ethylacetaat/hexaan verschafte de titelverbinding als een olie (4,31 g, 96%). 1H-NMR (400 MHz, CDC13) Ö 7,45 (d, J=8,7 Hz, 1 H), 6,20 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 3,01 (s, 6H), 2,46 (s, 3H).

20 Bereiding 4 (5-Boronzuur-6-methylpyridine-2-yl)dimethylamine Aan een oplossing van (5-broom-6-methylpyridine-2-yl)dimethylamine (1,0 g, 0,0046 mol) in tetrahydrofuran (1,6 ml)/tolueen (6,6 ml) werd druppelsgewijs onder een 25 stikstofatmosfeer bij -78°C n-BuLi (2,24 ml van 2,5 M) toegevoegd. Na 30 minuten werd triisopropylboraat (1,28 ml) druppelsgewijs toegevoegd. Na 30 minuten liet men het reactiemengsel opwarmen tot omgevingstemperatuur en werd gedurende 30 minuten geroerd, waarna de toevoeging van 7 30 ml 1 N HC1 volgde. Het reactiemengsel werd gedurende 1 uur geroerd en de reactie afgebroken met 1 N NaOH (tot pH = 8) . Extractie met ethylacetaat, drogen met magnesiumsulfaat en concentratie verschafte een witte, vaste stof. Fijnwrijven met hexaan en affiltreren verschaften de ti-35 telverbinding als een witte, vaste stof (550 mg, 65%).

XH-NMR (400 MHz, DMSO) δ 7,90 (m, 1H) , 6,45 (m, 1H) , 3,01 (s, 6H), 2,63 (s, 3H).

26

Voorbeeld 1 (IR,2S)-Azijnzuur-1-[5-(6-dimethylamino-2-methylpyridine-3-yl)-3,6-diethylpyrazine-2-ylamino]indaan-2-ylester 5 Een schone en droge driehals rondbodemkolf van 1 1, die was uitgerust met een mechanische roerder, een stikstof inlaatbuis en een refluxkoeler, werd gevuld met te-trahydrofuran (8,60 mol, 700 ml, 620 g) , (5-boronzuur-6-methylpyridine-2-yl)dimethylamine (1,00 equiv. [beperkend 10 reagens]; 194 mmol; 35,0 g), (IR, 2S)-azijnzuur-1-(3,6-diethyl-5-joodpyrazine-2-ylamino)indaan-2-ylester (0,500 equiv. ; 97,2 mmol; 43,9 g), Pd(0Ac)2 (0,0200 equiv.; 3,89 mmol; 873 mg), 1,1'-bis(difenylfosfino)ferroceen (0,0200 equiv. ; 3,89 mmol; 2,16 g) , kaliumwaterstoffluoride, 99-15 100 gew.%/gew. (4,00 equiv. 7,78 mmol; 61,0 g) . Het reac- tiemengsel werd verhit tot 60°C en gedurende 18 uur daarop gehouden. Vervolgens liet men het reactiemengsel afkoelen tot kamertemperatuur, werd het gefiltreerd en werd het product geïsoleerd via chromatografie (20% METB/hexaan). 20 Er werd 42 g gewenst product verkregen. Dit werd zonder verdere zuivering gebruikt (laagsmeltende vaste stof). 1H-NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,37 (m, . 1H) , 7,28(m, 4H) , 6,40 (d, J=8,7 Hz, 1H), 6,05 (m, 1H) , 5,72 (m, 1H) , 4,82 (d, J=9,l

Hz, 1H) , 3,33 (dd, J= 17,0, 5,0 Hz, 1 H) , 3,08 (s, 6H) , 25 2,05 (m, 1H) , 2,67 (k, J=7,5 Hz, 2H) , 2,49 (k,J=7,5 Hz, 2H) , 2,23 (s, 3H) , 1,94 (s, 3H) , 1,27 (m, 3H) , 1,12 (t, J=7,5 Hz, 3H); MS: (hoofdpiek van M+H: m/z = 460,4) .

30 Voorbeeld 2 (IR,2S)-Azijnzuur-1-[5-(6-dimethylamino-2-methylpyridine-3-yl)-3,6-diethylpyrazine-2-ylamino]indaan-2-ylester, to- lueen-4-sulfonzuur

Een schone en droge rondbodemkolf die was gespoeld 35 met 2-methyl-THF werd gevuld met 650 ml 2-methyl-THF, 65 g (IR,2S)-azijnzuur-1-[5-(6-dimethylamino-2-methylpyridine-3-yl)-3,6-diethylpyrazine-2-ylamino]indaan-2-ylester. Deze 27 oplossing werd gefiltreerd in een smetteloos schone, met 2-methyl-THF (2 1) gespoelde rondbodemkolf. Hieraan werden door filtratie een oplossing van 150 ml 2-methyl-THF en 34,4 g p-tolueensulfonzuur-monohydraat toegevoegd. De op-5 lossing van het zout werd verhit tot 60°C en men liet afkoelen tot kamertemperatuur. Men liet het product kristalliseren bij omgevingstemperatuur en het product werd geïsoleerd via filtratie, waarbij werd gewassen met gefiltreerde 2-methyl-THF en werd gedurende de nacht gedroogd 10 in een vacuümoven bij 45°C. Het product (79,2 g, 89% opbrengst) was consistent met de gewenste structuur en het röntgenpoederdiffractiepatroon kwam overeen met dat van de gewenste polymorfe vorm.

1H-NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,80 (d, J=8,3 Hz, 2 H) , 7,67 (d, 15 J=9,5 Hz, 1H), 7,34 (m, 1H), 7,29 (m, 3H) , 7,15 (d, J=8,7

Hz, 2 H) , 6,72 (d, J = 9,1 Hz, 1 H) , 6,03 (m, 1H) , 5,72 (m, 1H) , 4,97 (d, J=9,l Hz, 1H) , 3,39 (s, 6H) , 3,39 (s, 6H) , 3,34 (dd, J = 17,4, 5,4 Hz, 1H) , 3,09 (d, J=17,0 Hz, 1H), 2,63 (m, 2H) , 2,57 (s, 3H) , 2,42 (k, J=7,5Hz, 2H) , 20 2,32 (s, 3H) , 1,96 (s, 3H) , 1,27 (t, J=7,5 Hz, 3H) , 1,15 (t, J=7,5 Hz, 3H); MS:(hoofdpiek van M + H: m/z = 460,1). Anal. ber. voor C34H41N5O5S: C, 65,65; H, 6,54; N, 11,08; S, 5,07.

Gevonden: C, 64,27; H, 6,57; N, 10,94; 25 S, 5,41

Bereiding 5 (IR,2S)-1-[5-(6-Dimethylamino-2-methylpyridine-3-yl)-3,6-diethylpyrazine-2-ylamino]indaan-2-ol 30 Aan een oplossing van (IR,2S)-1-(3,6-diethyl-5-jood- pyrazine-2-ylamino)indaan-2-ol (1 g) in benzeen (20 ml) werden (5-boronzuur-6-methylpyridine-2-yl)dimethylamine (880 mg, 2 eq.), dichloorpalladiumditrifenylfosfine (171 mg, 0,1 eq.) en 2N natriumcarbonaatoplossing (4 ml) toege-35 voegd, en het reactiemengsel werd gedurende 18 uur verhit tot 75 °C. Men liet het reactiemengsel af koelen tot omgevingstemperatuur, en het reactiemengsel werd uitgegoten in 28 een verzadigde bicarbonaatoplossing en tweemaal geëxtraheerd met ethylacetaat. De organische laag werd gedroogd met magnesiumsulfaat, gefiltreerd en geconcentreerd. Zuivering via MPLC (Biotage), waarbij werd geëlueerd met 20-5 40% ethylacetaat/hexaan, verschafte de titelverbinding (355 mg, 36%).

1H-NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,23 (m, 5H) , 6,40 (d, J=8,3 Hz, 1H) , 6,57 (t, J=5,4 Hz, 1H) , 4,80 (m, 2H) , 3,21 (m, 2H) , 3,08 (s, 6H) , 2,70 (k, J=7,5 Hz, 2H) , 2,51 (k, J=7,5 Hz, 10 2H) , 2,23 (s, 3H) , 1,28 (t, J=7,5 Hz, 3H) , 1,12 (t, J=7,5

Hz, 3H); MS: (hoofdpiek van M+H: m/z = 418,3).

Voorbeeld 3 (IR,2S)-[5-(6-Dimethylamino-2-methylpyridine-3-yl)-3,6-15 diethylpyrazine-2-yl](2-ethoxyindaan-l-yl)amine

Aan een oplossing van (IR, 2S)-1-[5-(6-dimethylamino-2-methylpyridine-3-yl)-3,6-diethylpyrazine-2-ylamino]in-daan-2-ol (93 mg) in dimethylformamide (2,2 ml) werd bij 0°C onder N2 natriumhydride (11 mg, 1,2 eq.) toegevoegd. 20 Na 5 minuten werd joodethaan (1,2 eq.) toegevoegd. Na 2 uur werd het reactiemengsel uitgegoten in verzadigde natriumbicarbonaat, geëxtraheerd met methyleenchloride, gedroogd op magnesiumsulfaat, gefiltreerd en geconcentreerd. Zuivering via MPLC (Biotage), waarbij werd geëlueerd met 25 5-20% ethylacetaat/hexaan, verschafte de titelverbinding (61 mg).

1H-NMR (400 MHz, CDCI3) δ 7,43 (d, J=6,6 Hz, 1H) , 7,25 (m, 1H) , 7,23 (m, 3H) , 6,40 (d, J=8,3 Hz, 1H) , 5,79 (m, 1H) , 5,26 (d, J=7,9 Hz, 1H) , 4,35 (m, 1H) , 3,66 (m, 1H) , 3,46 30 (m, 1H), 3,10 (m, 2H) , 3,09 (s, 6H) , 2,70 (k. J=7,5 Hz, 2H), 2,50 (k, J=7,5 Hz, 2H), 2,24 (s, 3H), 1,28 (t, J=7,5

Hz, 3H), 1,12 (m, 6H); MS: (hoofdpiek van M+H: m/z = 446, 3) .

De waarde van Ki, de bindingsconstante aan de CRFi-re-35 ceptor, werd gemeten voor voorbeeldverbindingen van de onderhavige uitvinding. De verbinding van voorbeeld 1, (IR,2S)-azijnzuur-1-[5-(6-dimethylamino-2-methylpyridine- 29 3-yl)-3,6-diethylpyrazine-2-ylamino]indaan-2-yl)ester, bleek een Ki van 19 nM te hebben. De verbinding van voorbeeld 3, (IR,2S)-[5-(6-dimethylamino-2-methylpyridine-3-yl)-3,6-diethylpyrazine-2-yl]-(2-ethoxyindaan-l-yl)amine, 5 bleek een Ki van 13 nM te hebben. Deze resultaten geven sterk bewijs ten gunste van het vermogen van de verbindingen van de onderhavige uitvinding om te fungeren als antagonisten van de CRFi-receptor.

De hierin beschreven specifieke uitvoeringsvormen 10 zijn bedoeld als illustratie van aspecten van de onderhavige uitvinding, maar zijn niet bedoeld om de bescher-mingsomvang van de onderhavige uitvinding op enigerlei wijze te beperken. Het is de bedoeling dat alle equivalente uitvoeringsvormen onder de beschermingsomvang van de 15 onderhavige uitvinding vallen. Diverse modificaties van de uitvinding, behalve die welke hierin worden getoond en beschreven, zullen voor de deskundigen uit de voorgaande beschrijving duidelijk zijn. Dergelijke modificaties worden eveneens beschouwd binnen de beschermingsomvang van de 20 aangehechte conclusies te vallen.

1031384

Claims

1. Verbinding met de formule I HfiylV/R22 R2 R3 n^r4 5 of een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan, waarin Ri Ci-C6 alkyl, C2-C6 alkenyl, C2-C6 alkynyl, C(0)C;l-C6 alkyl, C(0)C2-C6 alkenyl of C(0)C2-C6 alkynyl is, R2 Ci-Ce alkyl, C2-C6 alkenyl of C2-C6 alkynyl is,

2. Verbinding volgens conclusie 1, of een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan, waarin Rj. ethyl of C(0)CH3 is.

3. Verbinding volgens conclusie 1, of een farmaceu tisch aanvaardbaar zout daarvan, waarin R2 ethyl is en R22 ethyl is. 1 0 3 1 38 4 ·/ ·

4. Verbinding volgens conclusie 1, of een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan, waarin R3 Ci-C6 alkyl, C2-C6 alkenyl of C2-C6 alkynyl is.

5. Verbinding volgens conclusie 1, of een farmaceu tisch aanvaardbaar zout daarvan, waarin R4 NR5R6 is.

6. Verbinding volgens conclusie 5, of een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan, waarin R3 Ci-C6 alkyl, C2-

7. Verbinding volgens conclusie 6, of een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan, waarin R3 methyl is en R4 N(CH3)2 is. 15

8. Verbinding gekozen uit de groep bestaande uit: (1R,2S)-azijnzuur-1-[5-(6-dimethylamino-2-methylpyridine- 3-yl)-3,6-diethylpyrazine-2-ylamino] indaan-2-yl)ester, 20 (1R,2S)-azijnzuur-1-[5-(6-dimethylamino-2-methylpyridine- 3-yl)-3,6-diethylpyrazine-2-ylamino] indaan-2-yl)ester, to-lueen-4-sulfonzuur en (IR,2S)-[5-(6-dimethylamino-2-methylpyridine-3-yl)-3,6- 25 diethylpyrazine-2-yl]-(2-ethoxyindaan-l-yl)amine, of een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan.

9. Farmaceutisch preparaat dat een farmaceutisch aanvaardbare drager en een verbinding volgens conclusie 1, of 30 een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan, omvat.

10. Gebruik van een verbinding volgens conclusie 1, of een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan, voor de bereiding van een geneesmiddel voor de behandeling van een 35 stoornis gekozen uit de groep bestaande uit gegeneraliseerde angststoornis, sociale angststoornis, paniekstoornis, obsessief-compulsieve stoornis, angst met co-morbide depressieve ziekte, affectieve stoornis, angst, eetstoornissen, bipolaire stoornis en depressie bij een zoogdier.

10 C6 alkenyl of C2-C6 alkynyl is.

10 R22 Ci-Ce alkyl, C2-C6 alkenyl of C2-C6 alkynyl is, R3 Ci-C6 alkyl, C2-C6 alkenyl, C2-C6 alkynyl, halogeen, 0Ci-C6 alkyl, OC2-C6 alkenyl of OC2-C6 alkynyl is, R4 Ci-Ce alkyl, C2-C6 alkenyl, C2-C6 alkynyl, halogeen, OCi-Ce alkyl, OC2-C6 alkenyl, 0C2-C6 alkynyl of NR5R6 is,

15 R5 waterstof, Ci-C6 alkyl, C2-C6 alkenyl of C2-C6 alky nyl is, en R6 waterstof, Ci-C6 alkyl, C2-C6 alkenyl of C2-C6 alkynyl is. 20

11. Gebruik van een verbinding volgens conclusie 1, 5 of een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan, voor de bereiding van een geneesmiddel voor het behandelen van een stoornis die zich uit door hypersecretie van CRF bij een zoogdier.

12. Werkwijze voor het screenen op liganden voor CRFj.- receptoren, welke werkwijze omvat: a) het uitvoeren van een concurrerende binding-assay met CRFi-receptoren, een verbinding volgens conclusie 1, of een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan, die is voorzien van een detec-15 teerbaar label en een kandidaatligand, en b) het bepalen van het vermogen van het kandidaat ligand tot het verdringen van de gelabelde verbinding of het zout.

13. Werkwijze voor het detecteren van CRF-receptoren 20 in weefsel omvattende: a) het in contact brengen van een verbinding volgens conclusie 1, of een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan, die is voorzien van een detecteerbaar label, met een weefsel, onder omstandigheden die de binding van de verbinding of het zout aan het weefsel 25 mogelijk maken en b) het detecteren van de gelabelde verbinding of het zout die aan het weefsel is gebonden.

14. Werkwijze voor het remmen van de binding van CRF aan een CRFi-receptor, omvattende het in contact brengen 30 van een verbinding volgens conclusie 1, of een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan, met een oplossing die cellen bevat die de CRFx-receptor tot expressie brengen, waarbij de verbinding of het zout in de oplossing aanwezig is in een concentratie voldoende om de binding van CRF aan 35 de CRFi-receptor te remmen.

15. Werkwij ze voor het verlagen van het niveau van de binding van CRF in vitro aan cellen die de CRFi-receptor tot expressie brengen, omvattende het in contact brengen van een verbinding volgens conclusie 1, of een farmaceu-5 tisch aanvaardbaar zout daarvan, met een oplossing die de cellen bevat, waarbij de verbinding of het zout in de oplossing aanwezig is in een concentratie voldoende om de niveaus van de binding van CRF aan de cellen in vitro te verlagen. 10 -o-o-o- 1031384