MX2012014480A - Anticuerpos de peptido relacionado con el gen calcitonina. - Google Patents
Anticuerpos de peptido relacionado con el gen calcitonina.Info
- Publication number
- MX2012014480A MX2012014480A MX2012014480A MX2012014480A MX2012014480A MX 2012014480 A MX2012014480 A MX 2012014480A MX 2012014480 A MX2012014480 A MX 2012014480A MX 2012014480 A MX2012014480 A MX 2012014480A MX 2012014480 A MX2012014480 A MX 2012014480A
- Authority
- MX
- Mexico
- Prior art keywords
- seq
- amino acid
- human
- acid sequence
- cgrp antibody
- Prior art date
Links
- 108090000932 Calcitonin Gene-Related Peptide Proteins 0.000 claims abstract description 94
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 35
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 29
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 claims abstract description 28
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 27
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 27
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 25
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 claims abstract description 18
- 102100038518 Calcitonin Human genes 0.000 claims description 90
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 52
- DNKYDHSONDSTNJ-XJVRLEFXSA-N chembl1910953 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)N)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)[C@@H](C)O)C1=CN=CN1 DNKYDHSONDSTNJ-XJVRLEFXSA-N 0.000 claims description 48
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 23
- 208000019695 Migraine disease Diseases 0.000 claims description 19
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 108060001064 Calcitonin Proteins 0.000 claims description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 3
- 102000004414 Calcitonin Gene-Related Peptide Human genes 0.000 abstract 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 28
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 16
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 13
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- JDNTWHVOXJZDSN-UHFFFAOYSA-N iodoacetic acid Chemical compound OC(=O)CI JDNTWHVOXJZDSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 8
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 8
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 8
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 7
- 206010015866 Extravasation Diseases 0.000 description 6
- 230000036251 extravasation Effects 0.000 description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- KRQUFUKTQHISJB-YYADALCUSA-N 2-[(E)-N-[2-(4-chlorophenoxy)propoxy]-C-propylcarbonimidoyl]-3-hydroxy-5-(thian-3-yl)cyclohex-2-en-1-one Chemical compound CCC\C(=N/OCC(C)OC1=CC=C(Cl)C=C1)C1=C(O)CC(CC1=O)C1CCCSC1 KRQUFUKTQHISJB-YYADALCUSA-N 0.000 description 4
- 241001269524 Dura Species 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 206010027599 migraine Diseases 0.000 description 4
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 3
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 3
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 3
- 210000003127 knee Anatomy 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 210000000427 trigeminal ganglion Anatomy 0.000 description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 206010064012 Central pain syndrome Diseases 0.000 description 2
- 102000003688 G-Protein-Coupled Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108090000045 G-Protein-Coupled Receptors Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 2
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000003491 cAMP production Effects 0.000 description 2
- 229940111134 coxibs Drugs 0.000 description 2
- 239000003255 cyclooxygenase 2 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 210000003191 femoral vein Anatomy 0.000 description 2
- 108010006205 fluorescein isothiocyanate bovine serum albumin Proteins 0.000 description 2
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 229940127240 opiate Drugs 0.000 description 2
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 2
- 210000003625 skull Anatomy 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 201000009032 substance abuse Diseases 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 108010078311 Calcitonin Gene-Related Peptide Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000014468 Calcitonin Gene-Related Peptide Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001789 Calcitonin Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102100038520 Calcitonin receptor Human genes 0.000 description 1
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 238000001061 Dunnett's test Methods 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010015719 Exsanguination Diseases 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 208000004454 Hyperalgesia Diseases 0.000 description 1
- 208000035154 Hyperesthesia Diseases 0.000 description 1
- 108010058683 Immobilized Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010060820 Joint injury Diseases 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 208000000060 Migraine with aura Diseases 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 102000003797 Neuropeptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000189 Neuropeptides Proteins 0.000 description 1
- 206010054956 Phonophobia Diseases 0.000 description 1
- 206010034960 Photophobia Diseases 0.000 description 1
- 241000220010 Rhode Species 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003271 compound fluorescence assay Methods 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 238000010924 continuous production Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013480 data collection Methods 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 208000013158 disturbed vision Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 1
- KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N hyaluronan Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)C1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H](C(O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N 0.000 description 1
- 229940099552 hyaluronan Drugs 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 210000004283 incisor Anatomy 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 230000003447 ipsilateral effect Effects 0.000 description 1
- 210000005067 joint tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000000629 knee joint Anatomy 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 210000002414 leg Anatomy 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 238000011694 lewis rat Methods 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 206010052787 migraine without aura Diseases 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- AEMBWNDIEFEPTH-UHFFFAOYSA-N n-tert-butyl-n-ethylnitrous amide Chemical compound CCN(N=O)C(C)(C)C AEMBWNDIEFEPTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 229940105631 nembutal Drugs 0.000 description 1
- 210000004126 nerve fiber Anatomy 0.000 description 1
- 208000029986 neuroepithelioma Diseases 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 210000000929 nociceptor Anatomy 0.000 description 1
- 108091008700 nociceptors Proteins 0.000 description 1
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000037081 physical activity Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 210000004761 scalp Anatomy 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000012453 sprague-dawley rat model Methods 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 210000003901 trigeminal nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000008728 vascular permeability Effects 0.000 description 1
- 230000000304 vasodilatating effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/26—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against hormones ; against hormone releasing or inhibiting factors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/06—Antimigraine agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/57527—Calcitonin gene related peptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/57545—Neuropeptide Y
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/57563—Vasoactive intestinal peptide [VIP]; Related peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
- C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
La presente invención provee un anticuerpo de péptido relacionado con gen de calcitonina diseñado humano (CGRP) o su fragmento de unión a antígeno. Además, la presente invención provee el uso de anticuerpos de péptido relacionados con gene de calcitonina diseñado humano (CGRP) o su fragmento de unión a antígeno para el tratamiento de dolor de osteoartritis.
Description
ANTIC U ERPOS DE PEPTI DO RELAC IONADO CON E L G EN
CALCITO N 1 NA
La presente invención se encuentra en el campo de la medicina, particularmente en el campo de los anticuerpos para el péptido relacionado con el gen calcitonina (CGRP). Más particularmente, la invención se refiere a anticuerpos de CGRP y al uso de los anticuerpos de CGRP para la terapia de dolor por osteoartritis o migrañas.
El péptido relacionado con el gen calcitonina (CGRP) es un neuropéptido de 37 aminoácidos secretado por los nervios de los sistemas nervioso central y periférico. CGRP se distribuye ampliamente en nervios sensoriales, en el sistema periférico y central y despliega un gran número de diferentes actividades biológicas. CGRP se informa que juega un papel. Cuando se libera de fibras trigeminales u otros nervios, CGRP se piensa que media su respuesta biológica mediante la unión a receptores de la superficie celular específica.
Se ha informado que CGRP juega un papel en migrañas como CGRP se libera en la estimulación de nervios sensoriales y tiene potente actividad vasodilatoria. La liberación de CGRP incrementa la permeabilidad vascular y posterior dispersión de proteína de plasma (extravasación de proteína de plasma) en tejidos inervados por fibras del nervio trígeminal durante la estimulación de estas fibras. Además, estudios han reportado que la infusión de CGRP en pacientes que padecen de migrañas ha resultado en síntomas tipo migraña.
También se ha reportado que CGRP juega un papel en osteoartritis (OA) . OA es una condición crónica que afecta un gran porcentaje de gente en todo el mundo. El dolor en artritis se caracteriza por hiperalgesia (excesivamente sensible a estímulos normalmente no nocivos) y dolor espontáneo (dolor durante el reposo). Inflamación de la articulación causa sensibilización periférica y central. En la sensibilización periférica, los nociceptores que contienen CGRP con alto umbral normalmente responden primero a la presión ligera asociada con el movimiento de la articulación normal. CGRP actúa como un facilitador local de los procesos inflamatorios. Este proceso continuo eventualmente lleva a sensibilización central en la médula espinal tal como neuronas que se tornan sensibles a la estimulación de tejido inflamado así como no inflamado. En modelos pre-clínícos de dolor OA en la rata, un incremento en el número de fibras nerviosas positivas CGRP se observa, correlacionado positivamente con la cantidad de dolor.
El estándar común de cuidado para el dolor OA consiste de fármacos anti-inflamatorios no esteroidales (NSAI D) e inhibidores de Cox-2 selectivos. Con el tiempo, muchos pacientes llegarán a ser insensibles a estos tratamientos o no serán capaces de tolerar las dosis altas necesitadas para aliviar efectivamente el dolor. El seguimiento del tratamiento consiste de inyecciones intra-articulares (hialuronano) u opiatos. El tratamiento final es el reemplazo quirúrgico de la articulación total. Muchos de estos tratamientos tienen efectos secundarios negativos, que varían de gastrointestinal (NSAI D) a cardiovascular
(inhibidores de Cox-2), son problemáticos y/o no muy eficaces (inyecciones intra-articulares), tienen el riesgo de abuso (opiatos), o se restringen a solo 1 articulación (inyecciones intra-articulares, cirug ía).
Aunque los anticuerpos de CGRP para el tratamiento de migrañas y para el tratamiento de dolor de inflamación se han descrito (migrañas-WO 2007/076336 y WO 2007/054809; ver OA, Antibody G 1 de WO2009/109908A1 ), todavía hay una necesidad de alternativas. Preferiblemente, el tratamiento alternativo es seguro y eficaz. Más preferiblemente, el tratamiento alternativo para OA proporcionará alivio al dolor duradero a través de múltiples articulaciones que es tolerable a los pacientes sin el riesgo de dependencia y/o abuso.
La presente invención provee un anticuerpo de CG R P diseñado humano que comprende una región variable de cadena ligera (LCVR) y una región variable de cadena pesada (HCVR), en donde dicha LCVR comprende secuencias de aminoácidos de LCDR1 , LCDR2 y LCDR3 y HCVR com prende secuencias de aminoácidos HCDR1 , HCDR2 y HCDR3 que se seleccionan del grupo que consta de :
a) LCDR1 es RASQDI DNYLN (SEQ I D NO: 3), LCDR2 es YTSEYHS (SEQ I D NO: 4), LCDR3 es QQGDALPPT (SEQ ID NO: 5), HCDR 1 es GYTFGNYWMQ (SEQ I D NO: 1 2) , HCDR2 es AIYEGTGDTRYIQKFAG (SEQ ID NO: 1 3), y HCDR3 es LSDYVSGFSY (SEQ I D NO: 14);
b) LCDR 1 es RASQDI DNYLN (SEQ I D NO: 3) , LCDR2 es YTSEYHS (SEQ ID NO: 4), LCDR3 es QQGDALPPT (SEQ ID NO: 5), HCDR1 es GYTFGNYWMQ (SEQ I D NO: 12), HCDR2 es
AIYEGTGKTVYIQKFAG (SEQ ID NO: 15), y HCDR3 es LSDYVSGFSY (SEQ ID NO: 14);
. c) LCDR1 es RASKDESKYLN (SEQ ID NO: 6), LCDR2 es YTSGYHS (SEQ ID NO: 7), LCDR3 es QQGDALPPT (SEQ ID NO: 5), HCDR1 es GYTFGNYWMQ (SEQ ID NO: 12), HCDR2 es AIYEGTGKTVYIQKFAD (SEQ ID NO: 16), y HCDR3 es LSDYVSGFGY (SEQ ID NO: 39);
d) LCDR1 es RASRPIDKYLN (SEQ ID NO: 8), LCDR2 es YTSEYHS (SEQ ID NO: 4), LCDR3 es QQGDALPPT (SEQ ID NO: 5), HCDR1 es GYTFGNYWMQ (SEQ ID NO: 12), HCDR2 es AIYEGTGKTVYIQKFAG (SEQ ID NO: 15), y HCDR3 es LSDYVSGFGY (SEQ ID NO: 39); y
e) LCDR1 es RASQDIDKYLN (SEQ ID NO: 9), LCDR2 es YTSGYHS (SEQ ID NO: 7), LCDR3 es QQGDALPPT (SEQ ID NO: 5), HCDR1 es GYTFGNYWMQ (SEQ ID NO: 12), HCDR2 es AIYEGTGKTVYIQKFAG (SEQ ID NO: 15), y HCDR3 es LSDYVSGFGY (SEQ ID NO: 39),
en donde el anticuerpo de CGRP diseñado humano se une a CGRP humano.
La presente invención provee un anticuerpo de CGRP diseñado humano que comprende una LCVR y una HCVR en donde LCDR1 es SEQ ID NO: 3, LCDR2 es SEQ ID NO: 4, LCDR3 es SEQ ID NO: 5, HCDR1 es SEQ ID NO: 12, HCDR2 es SEQ ID NO: 13, y HCDR3 es SEQ ID NO: 14, en donde el anticuerpo de CGRP humano diseñado se une a CGRP humano. La presente invención provee un anticuerpo de CGRP humano diseñado o fragmento de unión a antigeno del mismo que comprende una LCVR y una HCVR en donde LCDR1 es SEQ ID NO: 3, LCDR2 es SEQ ID NO: 4, LCDR3 es SEQ ID NO: 5, HCDR1 es SEQ ID NO: 12, HCDR2 es SEQ ID NO: 15, y HCDR3 es SEQ ID NO: 14, en donde el anticuerpo de CGRP humano diseñado se une a CGRP humano. La presente invención provee un anticuerpo de CGRP humano diseñado que comprende una LCVR y una HCVR en donde LCDR1 es SEQ ID NO: 6, LCDR2 es SEQ ID NO: 7, LCDR3 es SEQ ID NO: 5, HCDR1 es SEQ ID NO: 12, HCDR2 es SEQ ID NO: 16, y HCDR3 es SEQ ID NO: 39, en donde el anticuerpo de CGRP humano diseñado se une a CGRP humano. La presente invención provee un anticuerpo de CGRP humano diseñado que comprende una LCVR y una HCVR en donde LCDR1 es SEQ ID NO: 8, LCDR2 es SEQ ID NO: 4, LCDR3 es SEQ ID NO: 5, HCDR1 es SEQ ID NO: 12, HCDR2 es SEQ ID NO: 15, y HCDR3 es SEQ ID NO: 39, en donde el anticuerpo de CGRP humano diseñado se une a CGRP humano. La presente invención provee un anticuerpo de CGRP humano diseñado que comprende una LCVR y una HCVR en donde LCDR1 es SEQ ID NO: 9, LCDR2 es SEQ ID NO: 7, LCDR3 es SEQ ID NO: 5, HCDR1 es SEQ ID NQ: 12, HCDR2 es SEQ ID NO: 15, y HCDR3 es SEQ ID NO: 39, en donde el anticuerpo de CGRP humano diseñado se une a CGRP humano.
La presente invención provee un anticuerpo de CGRP humano diseñado que comprende una LCVR y una HCVR en donde LCDR1 es RASX1X2IX3X4YLN (SEQ ID NO: 10), LCDR2 es YTSX5YHS (SEQ ID NO: 11), LCDR3 es QQGDALPPT(SEQ ID NO: 5) y HCDR1 es
GYTFGNYWMQ (SEQ ID N0:12), HCDR2 es AIYEGTGX6TX7YIQKFAX8 (SEQ ID NO: 37), y HCDR3 es LSDYVSGFX9Y (SEQ ID NO: 38), en donde X, es Q, R, o K; X2 es D o P, X3 es D o S, X4 es N o K, X5 es G o E, X6 es K o D, X7 es V o R, X8 es D o G, y X9 es G o S, en donde el anticuerpo se une a CGRP humano.
En otra modalidad, la presente invención provee un anticuerpo de CGRP humano diseñado que comprende una región variable de cadena ligera (LCRV) y una región variable de cadena pesada (HCRV), en donde la LCVR comprende:
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASX1X2IX3X4YLNWYQQKPGKAPKLLIY YTSX5YHSGVPSRFSGSGSGTDFTX6TISSLQPEDX7ATYYCQQGDALPPTF GX8GTKX9EIK en donde Xi es Q, K, o R; X2 es D o P; X3 es D o S; X4 es K o N; X5 es E o G; X6 es F o L; X7 es I o F; X8 es Q o G; y X9 es L o V. (SEQ ID NO: 42)
y la HCVR comprende:
QVQLVQSGAEVKKPGXiSVKVSCKASGYTFGNYWMQWVRQAPGQGLEW MGAIYEGTGX2TX3YIQ FAX4RVTX5TX6DX7STSTX8YMELSSLRSEDTAVYY CARLSDYVSGFX9YWGQGTX10VTVSS, en donde X,= A o S; X2= K o D; X3=V o R; X4= G o D; X5= M o I; X6=R o A; X7=T o K; X8=V o A; X9=G o S; y Xi0=L o T. (SEQ ID NO: 43), en donde el anticuerpo se une a CGRP humano.
En otra modalidad, la presente invención provee un anticuerpo de CGRP diseñado humano que comprende una región variable de cadena ligera (LCVR) y una región variable de cadena pesada (HCVR), en donde LCVR y HCVR son secuencias de
aminoácidos seleccionados del grupo que consta de:
a. LCVR es SEQ ID NO: 17 y HCVR es SEQ ID NO: 22; b. LCVR es SEQ ID NO: 18 y HCVR es SEQ ID NO: 23; c. LCVR es SEQ ID NO: 19 y HCVR es SEQ ID NO: 24; d. LCVR es SEQ ID NO: 20 y HCVR es SEQ ID NO: 25; y e. LCVR es SEQ ID NO: 21 y HCVR es SEQ ID NO: 26.
La presente invención provee un anticuerpo de CGRP diseñado humano que comprende una LCVR de SEQ ID NO: 17 y una HCVR de SEQ ID NO: 22. En una modalidad preferida, La presente invención provee un anticuerpo de CGRP humano diseñado que comprende una LCVR de SEQ ID NO: 18 y una HCVR de SEQ ID NO: 23. La presente invención provee un anticuerpo de CGRP humano diseñado que comprende una LCVR de SEQ ID NO: 19 y una HCVR de SEQ ID NO: 24. La presente invención provee un anticuerpo de CGRP humano diseñado que comprende una LCVR de SEQ ID NO: 20 y una HCVR de SEQ ID NO: 25. La presente invención provee un anticuerpo de CGRP humano diseñado que comprende una LCVR de SEQ ID NO: 21 y una HCVR de SEQ ID NO: 26.
La presente invención también provee un anticuerpo de CGRP humano diseñado que comprende una cadena ligera (LC) y una cadena pesada (HC), en donde las secuencias de aminoácidos de LC y HC se seleccionan del grupo que consta de:
a) LC es SEQ ID NO: 27 y HC es SEQ ID NO: 32;
b) LC es SEQ ID NO: 28 y HC es SEQ ID NO: 33;
c) LC es SEQ ID NO: 29 y HC es SEQ ID NO: 34;
d) LC es SEQ ID NO: 30 y HC es SEQ ID NO: 35; y e) LC es SEQ OD NO: 31 y HC es SEQ ID NO: 36.
En una modalidad, el anticuerpo de CGRP humano diseñado comprende una LC de SEQ ID NO: 27 y una HC de SEQ ID NO: 32. En otra modalidad, el anticuerpo de CGRP humano diseñado comprende una LC de SEQ ID NO: 28 y una HC de SEQ ID NO: 33. En otra modalidad, el anticuerpo de CGRP humano diseñado comprende una LC de SEQ ID NO: 29 y una HC de SEQ ID NO: 34. En otra modalidad, el anticuerpo de CGRP humano diseñado comprende una LC de SEQ ID NO: 30 y una HC de SEQ ID NO: 35. En otra modalidad, el anticuerpo de CGRP humano diseñado comprende una LC de SEQ ID NO: 31 y una HC de SEQ ID NO: 36. En otra modalidad, el anticuerpo de CGRP humano diseñado comprende dos cadenas ligeras y dos cadenas pesadas en donde cada secuencia de aminoácidos de LC es SEQ ID NO: 27 y cada secuencia de aminoácidos de HC es SEQ ID NO: 32. En una modalidad, el anticuerpo de CGRP humano diseñado comprende dos cadenas ligeras y dos cadenas pesadas en donde cada secuencia de aminoácidos de LC es SEQ ID NO: 28 y cada secuencia de aminoácidos de HC es SEQ ID NO: 33. En una modalidad, el anticuerpo de CGRP humano diseñado comprende dos cadenas ligeras y dos cadenas pesadas en donde cada secuencia de aminoácidos de LC es SEQ ID NO: 29 y cada secuencia de aminoácidos de HC es SEQ ID NO: 34. En una modalidad, el anticuerpo de CGRP humano diseñado comprende dos cadenas ligeras y dos cadenas pesadas en donde cada secuencia de aminoácidos de LC es SEQ ID NO: 30 y cada secuencia de aminoácidos de HC es SEQ I D NO: 35. En una modalidad, el anticuerpo de CG RP humano diseñado comprende dos cadenas ligeras y dos cadenas pesadas en donde cada secuencia de aminoácidos de LC es SEQ I D NO: 31 y cada secuencia de aminoácidos de HC es SEQ I D NO: 36. La presente invención también provee un fragmento de unión a antígeno de los anticuerpos descritos aquí.
La presente invención también provee anticuerpos de CGRP diseñados humanos que tienen una IC50 < 1 .0 nM en un ensayo esencialmente como se describe en el ejemplo 4. En una modalidad, la presente invención provee un anticuerpo de CGRP diseñado humano que comprende una LCVR y una HCVR en donde LCDR1 es SEQ I D NO: 6, LCDR2 es SEQ I D NO: 7, LCDR3 es SEQ ID NO: 5, HCDR 1 es SEQ I D NO: 1 2, HCDR2 es SEQ I D NO: 16, y HCDR3 es SEQ I D NO: 39, y en donde el anticuerpo de CGRP diseñado humano se une a CGRP humano y también tiene una IC50 < 1 .0 nM en un ensayo esencialmente como se describe en el ejemplo 4. En una modalidad, la presente invención provee un anticuerpo de CGRP diseñado humano que comprende una secuencia de aminoácidos de LCVR de SEQ I D NO: 1 9 y una secuencia de aminoácidos HCVR de SEQ I D NO: 24, en donde el anticuerpo de CGRP humano diseñado tiene una I C50 < 1 .0 nM en un ensayo esencialmente como se describe en el ejemplo 4. En una modalidad , la presente invención provee un anticuerpo de CGRP diseñado humano que comprende una secuencia de aminoácidos de LC de SEQ I D NO: 29 y una secuencia de aminoácidos de HC de SEQ I D NO: 34, en donde el anticuerpo CGRP humano diseñado tiene una IC50 < 1 .0 nM en un
ensayo esencialmente como se describe en el ejemplo 4.
La presente invención también provee anticuerpos de CGRP diseñados humanos que tienen una I C50 < 0.5 nM en un ensayo esencialmente como se describe en el ejemplo 4. En una modalidad , la presente invención provee un anticuerpo de CGRP diseñado humano que comprende una LCVR y una HCVR en donde LCDR 1 es SEQ I D NO: 6, LCDR2 es SEQ ID NO: 7, LCDR3 es SEQ ID NO: 5, HCDR1 es SEQ I D NO: 1 2, HCDR2 es SEQ I D NO: 16, y HCDR3 es SEQ I D NO: 39, y en donde el anticuerpo de CGRP diseñado humano se une a CGRP humano y también tiene una I C50 < 0.5 nM en un ensayo esencialmente como se describe en el ejemplo 4. En una modalidad, la presente invención provee un anticuerpo de CGRP diseñado humano que comprende una secuencia de aminoácidos de LCVR de SEQ I D NO: 19 y una secuencia de aminoácidos HCVR de SEQ I D NO: 24, en donde el anticuerpo de CGRP humano diseñado tiene una I C50 < 0.5 nM en un ensayo esencialmente como se describe en el ejemplo 4. En una modalidad , la presente invención provee un anticuerpo de CGRP diseñado humano que comprende una secuencia de aminoácidos de LC de SEQ I D NO: 29 y una secuencia de aminoácidos de HC de SEQ I D NO: 34, en donde el anticuerpo CGRP humano diseñado tiene una IC50 < 0.5 nM en un ensayo esencialmente como se describe en el ejemplo 4.
La presente invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo de CGRP diseñado humano o fragmento de unión a antígeno del mismo de la presente invención y un portador farmacéuticamente aceptable, diluyente o excipiente. La presente invención provee además una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo de CGRP de la presente invención junto con un portador farmacéuticamente aceptable y opcionalmente otros ingredientes terapéuticos.
En un aspecto adicional, la presente invención provee un método para el tratamiento de dolor por osteoartritis que comprende la administración a un paciente que lo necesita de un anticuerpo de CGRP humano diseñado o su fragmento de unión a antigeno de la presente invención. En otro aspecto, la presente invención provee un método para el tratamiento de migrañas que comprende la administración a un paciente que lo necesita de un anticuerpo de CGRP diseñado humano o su fragmento de unión a antígeno de la presente invención.
La presente invención también proporciona un anticuerpo de CGRP diseñado humano o su fragmento de unión a antígeno de la presente invención para uso en la terapia. En otro aspecto, la presente invención provee un anticuerpo de CGRP diseñado humano o su fragmento de unión a antígeno de la presente invención para el tratamiento de dolor por osteoartritis. En un aspecto adicional, la presente invención provee un anticuerpo de CGRP diseñado humano o su fragmento de unión a antígeno de la presente invención para el tratamiento de migrañas.
La presente invención también provee el uso de un anticuerpo de CGRP humano diseñado o su fragmento de unión a antígeno de la presente invención para uso en el tratamiento de dolor por osteoartritis. En otro aspecto, la presente invención también provee el uso de un anticuerpo de CGRP diseñado humano o su fragmento de unión a antígeno de la presente invención para uso en el tratamiento de migrañas. La presente invención también provee el uso de un anticuerpo de CGRP humano diseñado o fragmento de unión a antígeno del mismo en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de osteoartritis. La presente invención también provee el uso de un anticuerpo de CGRP humano diseñado o su fragmento de unión a antígeno en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de migrañas.
Un anticuerpo de longitud completa tal como existe en la naturaleza es una molécula de inmunoglobulina que comprende 2 cadenas pesadas (H) y 2 cadenas ligeras (L) interconectadas por enlaces disulfuro. La porción amino terminal de cada cadena incluye una región variable de aproximadamente 100-110 aminoácidos responsables primariamente del reconocimiento de antígeno vía las regiones determinantes de complementariedad (CDR) contenidas en esta. La porción carboxi-terminal de cada cadena define una región constante responsable primariamente de la función efectora.
Las CDR se esparcen con regiones que son más conservadas, denominadas regiones de marco (FR). La región variable de cadena ligera (LCVR) y la región variable de cadena pesada (HCVR) se compone de 3 CDR y 4 FR, dispuestas de amino-terminales a carboxi-terminales en el siguiente orden: FR1 , CDR 1 , FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Las 3 CDR de la cadena ligera se refieren como "LCDR1 , LCDR2, y LCDR3" y las 3 CDR de la cadena pesada son referidas como "HCDR1, HCDR2, y HCDR3." Las CDR contienen la mayoría de los residuos que forman interacciones específicas con el antígeno. La numeración y posicionamiento de residuos de aminoácidos CDR dentro de las regiones de LCVR y HCVR de acuerdo con la convención de numeración Kabat bien conocida.
Las cadenas ligeras se clasifican como kappa o lambda, y se caracterizan por una región constante particular como se conoce en la técnica. Las cadenas pesadas se clasifican como gamma, mu, alfa, delta o epsilon, y definen el isotipo de un anticuerpo como IgG, IgM, IgA, IgD, o IgE, respectivamente. Anticuerpos de IgG se pueden dividir además en sub-clases, por ejemplo, lgG1, lgG2, lgG3, lgG4. Cada tipo de cadena pesada se caracteriza por una región constante particular con una secuencia bien conocida en la técnica.
Como se usa en este documento, el término "anticuerpo monoclonal" (Mab) se refiere a un anticuerpo que se deriva de una copia sencilla o clon que incluye, por ejemplo, cualquier clon eucariótico, procariótico o fago, y no el método por el cual se produce. Mabs de la presente invención preferiblemente existen en una población homogénea o sustancialmente homogénea. Mabs completos contienen 2 cadenas pesadas y 2 cadenas ligeras. "Fragmentos de unión a antígeno" de dichos anticuerpos monoclonales incluyen, por ejemplo, fragmentos Fab, fragmentos Fab', fragmentos F(ab')2, y fragmentos Fv de cadena sencilla. Anticuerpos monoclonales y sus fragmentos de unión a antígeno de la presente invención se puede producir, por ejemplo, mediante tecnologías recombinantes, tecnologías de presentación de
fago, tecnologías sintéticas, por ejemplo, injerto de CDR, o combinaciones de dichas tecnolog ías, u otras tecnolog ías conocidas en la técnica. Por ejemplo, los ratones se pueden inmunizar con CGRP humano o sus fragmentos, los anticuerpos resultantes se pueden recuperar y purificar, y la determinación de sí posee propiedades de unión y funcionales similares o lo mismo que los compuestos de anticuerpo descritos aquí se pueden valorar por los métodos descritos en los ejemplos de abajo. Los fragmentos de unión a antígeno también se pueden preparar por métodos convencionales. Métodos para producir y purificar anticuerpos y fragmentos de unión a antígeno se conocen bien en la técnica y se pueden encontrar, por ejemplo, en Harlow y Lañe (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, capítulos 5-8 y 1 5, I SBN 0-87969-314-2.
La frase "anticuerpos de CGRP humanos diseñados" se refiere a anticuerpos monoclonales creados y/o manipulados que tienen propiedades de unión y funcionales de acuerdo a la invención, se une a CGRP humano, y que tienen regiones de marco que son sustancialmente humanos o completamente humanos que rodean CDR derivadas de un anticuerpo no humano. "Fragmentos de unión a antígeno" de dichos anticuerpos diseñados humanos incluyen, por ejemplo, fragmentos Fab, fragmentos Fab', fragmentos F(ab')2 , y fragmentos Fv de cadena sencilla "región de marco" o "secuencia de marco" se refiere a cualquier región de marco 1 a 4. Anticuerpos humanos diseñados y fragmentos de unión a antígeno de los mismos incluidos por la presente invención incluyen moléculas en donde cualquiera una o más de regiones de marco 1 a 4 son sustancialmente humanos o completamente humanos, es decir, en donde cualquiera de las combinaciones posibles de regiones de marco sustancialmente humano o completamente humano 1 a 4, está presente. Por ejemplo, esto incluye moléculas en donde la región de marco 1 y región de marco 2, región de marco 1 y región de marco 3, región de marco 1 , 2, y 3, etc. son sustancialmente humanos o completamente humanos. Los marcos sustancialmente humanos son aquellos que tienen al menos aproximadamente 80% de identidad de secuencia a una secuencia de marco de línea germinal humano conocido. Preferiblemente, los marcos sustancialmente humanos tienen al menos aproximadamente 85%, aproximadamente 90%, aproximadamente 95%, o aproximadamente 99% de identidad de secuencia a una secuencia de marco de l ínea germinal humano conocido.
Los marcos humanos completamente son aquellos que son idénticos a una secuencia de marco de línea germinal humano conocido. La secuencia de marco de l ínea germinal humano se puede obtener de I mMunoGeneTics (IMGT) vía su sitio en la red http://imgt.cines.fr, o de The I mmunoglobulin FactsBook por Marie-Paule Lefranc y Gerard Lefranc, Academic Press, 2001 , ISBN 012441 351 . Por ejemplo, los marcos de cadena ligera de línea germinal se pueden seleccionar del grupo que consta de: A1 1 , A1 7, A1 8, A1 9, A20, A27, A30, L 1 , L11 , L 1 2, L2, L5, L15, L6, L8, 01 2, 02, y 08, y las regiones de marco de cadena pesada de línea germinal se pueden seleccionar del grupo que consta
de: VH2-5, VH2-26, VH2-70, VH3-20, VH3-72, VH I-46, VH3-9, VH3-66, VH3-74, VH4-31 , VHI-1 8, VH I-69, VI-1 3-7, VH3-11 , VH3-1 5, VH3-21 , VH3-23, VH3-30, VH3-48, VH4-39, VH4-59, y VH5-51 .
Anticuerpos humanos diseñados además de aquellos descritos aquí que exhiben propiedades similares funcionales de acuerdo a la presente invención se pueden generar usando varios métodos diferentes. Los compuestos de anticuerpo específicos descritos aqu í se pueden usar como plantillas o compuestos de anticuerpo de origen para preparar compuestos de anticuerpo adicionales. En un método, las CDR del compuesto de anticuerpo de origen se injertan en un marco humano que tiene una identidad de secuencia alta con el marco de compuesto de anticuerpo de origen. La identidad de secuencia del nuevo marco generalmente será al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 85%, al menos aproximadamente 90%, al menos aproximadamente 95%, o al menos aproximadamente 99% idéntica a la secuencia del marco correspondiente en el compuesto de anticuerpo de origen. Este injerto puede resultar en una reducción en afinidad de unión en comparación con aquel del anticuerpo de origen. Si este es el caso, el marco se puede retro-mutar al marco de origen en ciertas posiciones basadas en criterios específicos descritos por Queen et al. ( 1991 ) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 88:2869. Referencias adicionales que describen métodos útiles en anticuerpos de ratón humanizantes incluyen Patente de E. U .A. Nos. 4,816,397; 5,225, 539, y 5,693,761 ; programas de computadora ABMOD y ENCAD como se describe en Levitt (1 983) J. Mol. Biol. 168: 595-620; y el método de Winter y colaboradores (Jones et al. ( 1 986) Nature 321 : 522-525; Riechmann et al. ( 1988) Nature 332: 323-327; y Verhoeyen et al. ( 1 988) Science 239: 1 534-1536.
La identificación de residuos para considerar la retro-mutación se puede realizar como sigue:
Cuando un aminoácido se encuentra bajo la siguiente categoría, el aminoácido del marco de la secuencia de línea germinal humana que se usa (el "marco aceptor") se reemplaza por un aminoácido de marco de un marco del compuesto de anticuerpo de origen (el "marco donador"):
(a) el aminoácido en la región de marco humano del marco aceptor es inusual para los marcos humanos en esa posición, mientras que el aminoácido correspondiente en la inmunoglobulina donadora es típica para los marcos humanos en esa posición;
(b) la posición del aminoácido es inmediatamente adyacente a una de las CDR; o
(c) cualquier átomo de cadena lateral de un aminoácido de marco está dentro de aproximadamente 5-6 angstroms (centro a centro) de cualquier átomo de un aminoácido de CDR en un modelo de inmunoglobulina tridimensional.
Cuando cada uno de los aminoácidos en la región de marco humano del marco aceptor y un aminoácido correspondiente en el marco donador es generalmente inusual para marcos humanos en esta posición, dicho aminoácido se puede reemplazar por un aminoácido usual para marcos humanos en esta posición. Este criterio de retro- mutación permite a uno recuperar la actividad del compuesto de anticuerpo de origen .
Otro método para generar anticuerpos diseñados humanos que exhiben propiedades funcionales similares a los compuestos de anticuerpos descritos aquí involucra aminoácidos de mutación aleatoria dentro de CDR injertadas sin cambiar el marco, y clasificando las moléculas resultantes para afinidad de unión y otras propiedades funcionales que son tan buenas o mejores que aquellos de los compuestos de anticuerpo de origen. Mutaciones sencillas también se pueden introducir en cada posición de aminoácido dentro de cada CDR, seguido por la valoración de los efectos de dichas mutaciones en afinidad de unión y otras propiedades funcionales. Mutaciones sencillas que producen propiedades mejoradas se pueden combinar para valorar sus efectos en combinación una con otra .
Además, una combinación de los métodos anteriores es posible. Después del injerto de CDR, unas regiones de marco específicas retro-mutadas además introducen cambios de aminoácido en las CDR. Esta metodología se describe en Wu et al . (1 999) J. Mol . Biol. 294: 1 51 -162.
Al aplicar las enseñanzas de la presente invención, una persona con experiencia en la técnica puede usar técnicas comunes, por ejemplo, mutagénesis dirigida de sitio, para sustituir aminoácidos dentro de las CDR descritas actualmente y secuencias de marco y con lo cual generan secuencias de aminoácido de región variable adicionales derivadas de las secuencias presentes. Todos los aminoácidos de origen natural alternativos se pueden introducir a un sitio de sustitución específico. Los métodos descritos aquí después se pueden usar para clasificar estas secuencias de aminoácido de región variable adicionales para identificar secuencias que tienen funciones in vivo indicadas. En esta manera, secuencias adicionales para preparar anticuerpos diseñados humanos y sus porciones de unión a antígeno de acuerdo con la presente invención se pueden identificar. Preferiblemente, la sustitución de aminoácido dentro de los marcos se restringe a uno, dos o tres posiciones dentro de uno o más de las 4 regiones de marco de cadenas ligeras y/o pesadas descritas aquí. Preferiblemente, sustitución de aminoácido dentro de las CDR se restringe a uno, dos o tres posiciones dentro de cualquiera de uno o más de las 3 CDR de cadena pesada y/o cadena ligera. Combinaciones de varios cambios dentro de estas regiones de marco y CDR se describen anteriormente son también posibles.
El término "que trata" (o "trata" o "tratamiento") se refiere al procedimiento que involucra una disminución, interrupción, detención, control, paro, reducción, o inversión de la progresión o severidad de un síntoma, trastorno, condición o enfermedad, pero no necesariamente involucra una eliminación total de los síntomas, condiciones o trastornos relacionados con la enfermedad asociados con actividad CGRP.
El término "migraña(s)" como se usa aquí se refiere a "migrañas sin aura" (antes conocida como "migraña común") y "migrañas con aura" (antes "migraña clásica") de acuerdo al Comité de Clasificación de Dolor de Cabeza de la Sociedad de Dolor de Cabeza
Internacional (International Headache Society, 2004). Por ejemplo, "migrañas sin aura", normalmente se puede caracterizar por tener una calidad de pulsación, una intensidad moderada o severa, se agravan por actividad física de rutina, se localizan unilateralmente y se asocian con nausea y con fotofobia y fonofobia. "Migrañas con aura" pueden incluir disturbios en la visión, disturbios en otros sentidos, debilidad unilateral, y en algunos casos dificultad al hablar.
Los anticuerpos diseñados humanos de la presente invención se pueden usar como medicamentos en medicina humana, administrados por una variedad de rutas. Más preferiblemente, dichas composiciones son para administración parenteral. Dichas composiciones farmacéuticas se pueden preparar por métodos bien conocidos en la técnica (Véase, por ejemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th ed. (1995), A. Gennaro et al., Mack Publishing Co.) y comprenden un anticuerpo diseñado humano como se describe aquí, y un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.
Los resultados de los siguientes ensayos demuestran que los anticuerpos monoclonales ejemplificados y sus fragmentos de unión a antígeno de la presente invención se pueden usar para tratar dolor de osteoartritis.
Ejemplo 1
Producción de anticuerpos
Anticuerpos l-V se pueden producir y purificar como sigue.
Una célula huésped apropiada, tal como HEK 293 EBNA o CHO, de transfecta de manera transitoria o estable con un sistema de expresión para anticuerpos de secreción usando una relación de vector HC: LC predeterminado óptimo o un sistema de vector sencillo que codifica LC, tal como SEQ I D NO: 27, SEQ I D NO: 28, SEQ I D NO: 29, SEQ I D NO: 30, o SEQ I D NO: 31 , y HC, tal como SEQ I D NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ I D NO: 34, SEQ ID NO: 35 O SEQ ID NO: 36. Medio clarificado, en que el anticuerpo se ha secretado, se purifica usando cualquiera de muchas técnicas usadas comúnmente. Por ejemplo, el medio se puede aplicar convenientemente a una columna FF de sefarosa de proteína A o G que se ha equilibrado con un amortiguador compatible, tal como solución salina regulada de pH de fosfato (pH 7.4). La columna se lava para remover componentes de unión no específica. El anticuerpo unido se eluye, por ejemplo, por gradiente de pH (tal como amortiguador de fosfato de sodio 0.1 M pH 6.8 a amortiguador de citrato de sodio 0.1 M pH 3.0). Se detectan fracciones de anticuerpo, tal como por SDS-PAGE, y después se agrupan . Purificación adicional es opcional, dependiendo del uso destinado. El anticuerpo se puede concentrar y/o filtrar estéril usando técnicas comunes. Agregados solubles y multímeros se pueden remover efectivamente por técnicas comunes, que incluyen exclusión de tamaño, interacción hidrófoba, intercambio iónico, o cromatografía hidroxiapatita. La pureza del anticuerpo después de estas etapas de cromatografía es mayor de 99%: El producto se puede congelar inmediatamente a -70°C o se puede liofilizar. Las secuencias de aminoácido de estos anticuerpos ejemplificados se proveen
posteriormente.
Tabla 1
SEQ I D NOS de anticuerpo
Ejemplo 2
Mediciones de afinidad (Kd) para anticuerpos CGRP diseñados humanos
Afinidad de unión de anticuerpos ejemplificados a CGRP se determina usando un ensayo de resonancia de plasmón superficial en un instrumento T100 Biacore impreso con HBS-EP+ (GE Healthcare, 10 mM de Hepes pH 7.4 + 1 50 mM de NaCI + 3 mM de EDTA + 0.05% de agente surfactante P20) amortiguador de corrida y temperatura de análisis establecida a 37°C. Un chip CM5 que contiene proteína A inmovilizada (generada usando acoplamiento de amina NHS-EDC estándar) en las cuatro células de flujo (Fe) se usa para emplear una metodolog ía de captura. Muestras de anticuerpo se preparan en 2 µg/ml mediante dilución en amortiguador de corrida . Muestras de CGRP humano se preparan en concentraciones finales de 5.0, 2.5, 1 .3, 0.63, 0.31 y 0 (blanco) nM mediante dilución en amortiguador de corrida. Una alícuota de uso sencillo, fresco de CGRP se usa para cada experimento de replica para evitar ciclos de congelación-descongelación múltiples. Cada ciclo de análisis consiste de (1 ) capturar muestras de anticuerpo en células de flujo separado (Fc2, Fc3 y Fc4), (2) inyección de 350 µ? (21 0-seg) de CGRP sobre todo el Fe a 1 00 µ?/min, (3) regresar a un flujo de amortiguador durante 10 minutos para monitorear la fase de disociación, (4) regeneración de superficies del chip con 5 µ? ( 1 5-seg) de inyección de glicina, pH 1 .5, (5) equilibrio de superficies de chip con 5 µ? ( 1 5 seg) de inyección de H BS-EP+. Cada concentración de CGRP se inyecta en duplicado. Los datos se procesan usando referencias dobles estándar en ajuste a un modelo de unión 1 : 1 usando software de evaluación Biacore T1 00, versión 2.0.1 , para determinar la velocidad de asociación (Kon, unidades M" s1 ), velocidad de disociación (unidades Koff, s" 1), y Rmax (unidades RU). La constante de disociación de equilibrio (KD) se calcula como de la relación KD= Koff/Kon y es en unidades molares. Los valores provistos en la tabla 2 son medios de n números de experimentos. La tabla 2 demuestra que los anticuerpos ejemplificados de la presente invención unidos a CGRP con afinidades <200 pM.
Tabla 2
Afinidades de unión de anticuerpo
Ejemplo 3
Reducción de dolor en un modelo MIA
La inyección de ácido monoyodoacético (MIA) en la articulación de rodilla de ratas produce una lesión inflamatoria aguda que después se desarrolla en degeneración crónica de los tejidos de articulación en la articulación inyectada. El dolor que resulta de la lesión de la articulación se puede medir vía peso diferencial que porta las patas traseras usando un analizador de incapacidad . El modelo MIA se ha descrito bien en la literatura y se ha usado para demostrar eficacia contra dolor por una variedad de mecanismos y compuestos. La eficacia se mide de manera rutinaria por la capacidad de un compuesto de normalizar parcialmente la distribución de peso.
Para determinar la capacidad de anticuerpos ejemplificados de la presente invención para reducir el dolor, ratas Lewis macho (Harían, Indianapolis, I N) de aproximadamente ocho semanas de edad en el tiempo de la inyección de MIA se usan. Las ratas se alojan en grupos de dos o tres por jaula y se mantienen en una temperatura constante y en un ciclo de 1 2 horas luz/12 horas oscuridad. Los
animales tienen libre acceso a alimento y agua en todas las veces excepto durante la colección de datos. Todos los experimentos se llevan a cabo de acuerdo con protocolos aprobados por el comité institucional de cuidado y usos de animales de Eli Lilly.
Las rodillas derechas de cada rata se inyectan con 0.3 mg de MIA en 50 µ? de solución salina y las rodillas izquierdas con 50 µ? de solución salina en el día 0. En un día establecido post MIA, control de lgG4 humano o anticuerpo CGRP de prueba se administran subcutáneamente en PBS (n= 6 por grupo. Tres días post dosificación con anticuerpo CGRP de prueba, el dolor se mide usando análisis de incapacidad que mide la diferencia en peso de pata trasera que porta entre las rodillas inyectadas tratadas con MIA y con solución salina. Cada medición es el promedio de tres mediciones separadas cada una medida sobre 1 segundo.
Los datos se presentan como por ciento de inhibición de dolor calculado al dividir la media del grupo tratado con anticuerpo CGRP por la medio del grupo de anticuerpo de control, que sustrae este valor de 1 y multiplica este valor resultante por 100. Grupos tratados con CGRP también se comparan a grupos vehículo por un análisis de manera de medios de la prueba de Dunnett que usa programa de análisis estadísticos JMP (versiones 5.1 y 6) (SAS Institute Inc., Cary, NC). Se consideran diferencias que son significantes si el valor de P es menos de 0.05. Como se muestra en la tabla 3, los datos demuestran que los anticuerpos CGRP ejemplificados de la presente invención reducen significantemente el dolor.
Tabla 3
Por ciento de inhibición de dolor inducido por MIA
Ejemplo 4
Inhibición de formación de cAMP inducido por CGRP en células SK-N-MC
Para comparar la capacidad de un anticuerpo de la presente invención al anticuerpo G1 (LCVR-SEQ I D NO: 40 y HCVR- SEQ I D NO: 41 ), inhibición de formación de cAM P inducido por CGRP en SK-N-MC se determina. La unión de CGRP a su receptor resulta en la estimulación de producción de cAMP. El receptor CGRP es un complejo hetero-trimérico que consiste del receptor tipo el receptor de calcitonina (CLR, un receptor acoplado a G-proteína) y proteína de modificación de actividad del receptor (RAM P)-1 , acoplada citoplásmicamente a la proteína del componente del receptor (RCP) . La línea celular de neuroepitelioma humana SK-N-MC que expresa estas 3 moléculas naturalmente y pueden por lo tanto ser usada para valorar el efecto de CGRP o eventos de traducción de señal. La producción de cAMP es una medida estándar para activación del receptor acoplado de proteína G.
Células SK-N-MC se cultivan en MEM, que contiene 10% de FBS, aminoácidos no esenciales MEM 1X, piruvato de sodio MEM 1 X 100 nM, 1X Pen/Strep, y 2 mM de L-glutamina. Después de la colección, las células se lavan una vez y se resuspenden en amortiguador de ensayo (amortiguador de estimulación (HBSS con Mg y Ca, 5 mM de HEPES, 0.1% de BSA, 100 µ?t? de ácido ascórbico) diluido con 1:2 con PBS de Dulbecco que contiene una concentración final de 0.5 mM de IBMX) y se coloca en placas de 96 pozos a 15,000 células por pozo. Anticuerpo de prueba o un anticuerpo lgG4 humano de control se añade (diluciones 4 veces serial en amortiguador de ensayo), 10 concentraciones) a las células, seguido por una cantidad fija de a-CGRP humano (2 nM; Bachem H1470). Las placas se incuban durante 1 hora a temperatura ambiente. Los niveles de cAMP se miden por sistema de ensayo de fluorescencia resuelto de tiempo heterogéneo (HTRF) (Cisbio).
La cantidad de cAMP inducida por 2nM CGRP humano en la presencia de variación de concentraciones de anticuerpo se calcula como un porcentaje de inhibición comparado con CGRP solo. La concentración de anticuerpo que produce 50% de inhibición de producción de cAMP (IC50) después se calcula de un modelo de ajuste de curva de parámetro 4. Siguiendo los procedimientos como se describen aquí, el anticuerpo III (IC5o de 0.41 nM) inhibe la cantidad de cAMP inducido por CGRP a un grado mucho mayor que el anticuerpo G1 (IC50 de 5.36 nM).
Ejemplo 5
Modelo de extravasación de proteína de plasma de rata dural
El modelo de PPE de rata es un modelo pre-clínico bien establecido que se pueden usar para evaluar la eficacia de anticuerpos anti-CGRP para el tratamiento de migraña.
Una solución 2 mg/ml de un anticuerpo anti-CGRP (Ab) se prepara en solución salina. Todas las diluciones posteriores se hacen con salina. Una solución 2 mg/ml de anticuerpo de control de isotipo monoclonal (IgG) también se prepara en salina.
Ratas Sprague-Dawley de Harían Laboratories (250 a 350 g) se anestesian con Nembutal (60 mg/kg, ip) y se colocan en un marco esterotáxico (David Kopf I nstruments) con la barra incisiva ajustada a -2.5 mm. Siguiendo una incisión en el cuero cabelludo sagital de línea media, dos pares de orificios bilaterales se perforan a través del cráneo (3.2 mm posteriormente, 1 .8 y 3.8 mm lateralmente, todas las coordenadas referenciadas a bregma) . Pares de electrodos de estimulación de acero inoxidable (Rhodes Medical Systems Inc), aislados excepto en las puntas, son bajadas a través de los orificios en ambas hemisferios a una profundidad de 9.2 mm debajo de la dura. Los anticuerpos de prueba o vehículo salino se administran intravenosamente vía la vena femoral ( 1 ml/kg). Ocho minutos después una solución de albúmina de suero bovino marcado con tinta de isotiocianato de fluoresceína (FITC) (BSA) (FITC-BSA, Sigma A9771 ) (20 mg/kg, iv) se inyecta en la vena femoral para funcionar como un marcador para extravasación de proteína. Diez m inutos después de la dosificación con anticuerpos de prueba o vehículo, el ganglio trigeminal izquierdo se estimula durante 5 minutos en una intensidad de corriente de 1.0 mA (5 Hz, 5 ms de duración) con un estimulador Grass Instrument Modelo S48. Cinco minutos después de la estimulación, las ratas se asesinan por desangrado con 40 mi de salina. El desangrado también enjuaga FITC/BSA residual fuera de los vasos sanguíneos. La parte superior del cráneo se retira para colectar las membranas durales. Las muestras de membrana se retiran de ambos hemisferios, se enjuagan con agua, y se dispersan planos en portaobjetos de microscopio. Los portaobjetos se secan durante 15 minutos en un calentador de portaobjetos y cubre-portaobjetos con una solución glicerol/agua 70%
Un microscopio de fluorescencia (Zeiss) equipado con un monocromador de parrilla y un espectrofotómetro se usan para cuantificar la cantidad de tinta FITC-BSA en cada muestra dural. El microscopio se equipa con una interfase de atapa motorizada con una computadora personal. Esto facilita el movimiento controlado por computadora de la etapa, con mediciones de fluorescencia en 25 puntos (500 µ?? extravasación inducida por estimulación eléctrica del ganglio trigeminal es un efecto ipsilateral (es decir, ocurre solo en el lado de la dura en donde el ganglio trigeminal se estimula). Esto permite que la otra mitad (no estimulada) de la dura se pueda usar como un control. La relación e extravasación (es decir, la relación de la cantidad de extravasación en la dura del lado estimulado comparado al lado estimulado) se calcula.
SECUENCIAS
ACDTATCVTHRLAGLLSRSGGVVKNNFVPTNVGSKAF (SEQ ID NO:1) ACNTATCVTHRLAGLLSRSGGMVKSNFVPTNVGSKAF (SEQ ID NO:2)
X2 es D o P;
X3 es D o S;
X4 es N o K; y
X5 es G o E.
X6 es K o D;
X7 es V o R;
X8 es D o G; y
X9 es G o S.
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIDNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYT SEYHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQGPALPPTFGQGT KLEIK (SEQ ID NO:.17)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQD.IDNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYT SEYHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQGDALPPTFGQGT KLEIK (SEQ ID NO: 18)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASKDISKYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTS GYHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGDALPPTFGGGT KVEIK (SEQ ID NO: 19)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASRPIDKYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTS
EYHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQGDALPPTFGQGTK LEIK (SEQ ID NO: 20)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIDKYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTS GYHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGDALPPTFGGGT KVEIK (SEQ ID NO: 21)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFGNYWMQWVRQAPGQGLEWM GAIYEGTGDTRYIQKFAGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARL SDYVSGFSYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 22)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFGNYWMQWVRQAPGQGLEWM GAIYEGTGKTVYIQKFAGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARL SDYVSGFSYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 23)
QVQLVQSGAEVKKPGSSV VSCKASGYTFGNYWMQWVRQAPGQGLEWM GAIYEGTGKTVYIQKFADRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLS DYVSGFGYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 24)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFGNYWMQWVRQAPGQGLEWM GAIYEGTGKTVYIQKFAGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARL SDYVSGFGYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 25)
QVQLVQSGAEVKKPGSSV VSCKASGYTFGNYWMQWVRQAPGQGLEWM GAIYEGTGKTVYIQKFAGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLS DYVSGFGYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 26)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIDNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYT SEYHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQGDALPPTFGQGT KLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNAL QSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSP VTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 27)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIDNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYT SEYHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQGDALPPTFGQGT KLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNAL QSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSP VTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 28)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASKDISKYLNWYQQKPGKAPKLLI YYTS GYHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGDALPPTFGGGT KVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNA LQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSP VTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 29)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASRPIDKYLNWYQQKPGKAPKLLI YYTS EYHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQGDALPPTFGQGTK LEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNAL QSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSP VTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 30)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIDKYLNWYQQKPGKAPKLLI YYTS GYHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGDALPPTFGGGT KVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNA LQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSP VTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 31)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFGNYWMQWVRQAPGQGLEWM GAIYEGTGDTRYIQKFAGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARL SDYVSGFSYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTY TCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTL
MISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYR VVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG SFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG (SEQ ID NO: 32)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFGNYWMQWVRQAPGQGLEWM GAIYEGTGKTVYIQKFAGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARL SDYVSGFSYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTY TCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTL MISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYR VVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKA GQPREPQVYTLP PSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG SFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG (SEQ ID NO: 33)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFGNYWMQWVRQAPGQGLEWM GAIYEGTGKTVYIQKFADRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLS DYVSGFGYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKD YFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYT CNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRV VSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SQEE TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS FFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG (SEQ ID QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFGNYWMQWVRQAPGQGLEWM GAIYEGTGKTVYIQKFAGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARL SDYVSGFGYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTY TCNVDHKPSNTKVDKRVE5KYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTL MISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYR VVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG SFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG (SEQ ID NO: 35)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFGNYWMQWVRQAPGQGLEWM GAIYEGTGKTVYIQKFAGRVTITAD STSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLS DYVSGFGYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKD YFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYT CNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTL I SRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRV VSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS FFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG (SEQ ID NO: 36)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCKASKRVTTYVSWYQQKPGQAPRLLIYGA SNRYLGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCSQSYNYPYTFGQGT KLEIK (SEQ ID NO: 40)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWISWVRQAPGKGLEWVA EIRSESDASATHYAEAVKGRFTISRDNAKNSLYLQM SLRAEDTAVYYCLA
YFDYGLAIQNYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 41)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASX1 X2IX3X4YLNWYQQKPGKAPKLLI YYTSX5YHSGVPSRFSGSGSGTDFTX6TISSLQPEDX7ATYYCQQGDALPP TFGX8GTKX9EIK
X1= Q, K, o R;
X2= D o P;
X3 D o S;
X4= K o N;
X5= E o G;
X6= F o L;
X7= I o F;
X8= Q o G; y
X9= L o V. (SEQ ID NO: 42)
QVQLVQSGAEVKKPGX1 SVKVSCKASGYTFGNYWMQWVRQAPGQGLEW MGAIYEGTGX2TX3YIQKFAX4RVTX5TX6DX7STSTX8YMELSSLRSEDTA VYYCARLSDYVSGFX9YWGQGTX10VTVSS
X1= A o S;
X2= K o D;
X3=V o R;
X4= G o D;
X5= M o l;
X6=R o A;
X7=T o K;
X8=V o A;
X9=G o S; y
X10=L o T. (SEQ ID NO: 43)
Claims (31)
1.- Un anticuerpo de CGRP diseñado humano que comprende una región variable de cadena ligera (LCVR) y una región variable de cadena pesada (HCVR), en donde dicha LCVR comprende secuencias de aminoácido LCDR1, LCDR2, LCDR3 y HCVR comprende secuencias de aminoácido HCDR1, HCDR2, HCDR3, en donde LCDR1 es SEQ ID NO: 10, LCDR2 es SEQ ID NO: 11, LCDR3 es SEQ ID NO: 5 HCDR1 es SEQ ID NO: 12, HCDR2 es SEQ ID NO: 37y HCDR3 es SEQ ID NO: 38, én donde el anticuerpo CGRP humano une a CGRP humano.
2 - El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque LCDR1 es RASQDIDNYLN (SEQ ID NO: 3), LCDR2 es YTSEYHS (SEQ ID NO: 4), LCDR3 es QQGDALPPT (SEQ ID NO: 5), HCDR1 es GYTFGNYWMQ (SEQ ID NO: 12), HCDR2 es AIYEGTGDTRYIQKFAG (SEQ ID NO: 13), y HCDR3 es LSDYVSGFSY (SEQ ID NO: 14).
3. - El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque LCDR1 es RASQDIDNYLN (SEQ ID NO: 3), LCDR2 es YTSEYHS (SEQ ID NO: 4), LCDR3 es QQGDALPPT (SEQ ID NO: 5), HCDR1 es GYTFGNYWMQ (SEQ ID NO: 12), HCDR2 es AIYEGTGKTVYIQKFAG (SEQ ID NO: 15), y HCDR3 es LSDYVSGFSY (SEQ ID NO: 14).
4. - El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque LCDR1 es RASKDISKYLN (SEQ ID NO: 6), LCDR2 es YTSGYHS (SEQ ID NO: 7), LCDR3 es QQGDALPPT (SEQ ID NO: 5), HCDR1 es GYTFGNYWMQ (SEQ ID NO: 12), HCDR2 es AIYEGTGKTVYIQKFAD (SEQ ID NO: 16), y HCDR3 es LSDYVSGFGY (SEQ ID NO: 39).
5.- El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque LCDR1 es RASRPIDKYLN (SEQ ID NO: 8), LCDR2 es YTSEYHS (SEQ ID NO: 4), LCDR3 es QQGDALPPT (SEQ ID NO: 5), HCDR1 es GYTFGNYWMQ (SEQ ID NO: 12), HCDR2 es AIYEGTGKTVYIQKFAG (SEQ ID NO: 15), y HCDR3 es LSDYVSGFGY (SEQ ID NO: 39).
6.- El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque LCDR1 es RASQDIDKYLN (SEQ ID NO: 9), LCDR2 es YTSGYHS (SEQ ID NO: 7), LCDR3 es QQGDALPPT (SEQ ID NO: 5), HCDR1 es GYTFGNYWMQ (SEQ ID NO: 12), HCDR2 es AIYEGTGKTVYIQKFAG (SEQ ID NO: 15), y HCDR3 es LSDYVSGFGY (SEQ ID NO: 39).
7.- El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la secuencia de aminoácido de LCVR es SEQ ID NO: 42 y la secuencia de aminoácido de HCVR es SEQ ID NO: 43.
8.- El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque la secuencia de aminoácido de LCVR es SEQ ID NO: 17 y la secuencia de aminoácido de HCVR es SEQ ID NO: 22.
9.- El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque la secuencia de aminoácido de LCVR es SEQ ID NO: 18 y la secuencia de aminoácido de HCVR es SEQ ID NO: 23.
10. - El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque la secuencia de aminoácido de LCVR es SEQ ID NO: 19 y la secuencia de aminoácido de HCVR es SEQ ID NO: 24.
11. - El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque la secuencia de aminoácido de LCVR es SEQ ID NO: 20 y la secuencia de aminoácido de HCVR es SEQ ID NO: 25.
12. - El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque la secuencia de aminoácido de LCVR es SEQ ID NO: 21 y la secuencia de aminoácido de HCVR es SEQ ID NO: 26.
13.- El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque dicho anticuerpo comprende una cadena ligera y una cadena pesada, en donde la secuencia de aminoácido de cadena ligera es SEQ ID NO: 27 y la secuencia de aminoácido de cadena pesada es SEQ ID NO: 32.
14.- El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque dicho anticuerpo comprende una cadena ligera y una cadena pesada, en donde la secuencia de aminoácido de cadena ligera es SEQ ID NO: 28 y la secuencia de aminoácido de cadena pesada es SEQ ID NO: 33.
15.- El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 1 0, caracterizado porque dicho anticuerpo comprende una cadena ligera y una cadena pesada, en donde la secuencia de aminoácido de cadena ligera es SEQ I D NO: 29 y la secuencia de aminoácido de cadena pesada es SEQ I D NO: 34.
16.- El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 1 1 , caracterizado porque dicho anticuerpo comprende una cadena ligera y una cadena pesada, en donde la secuencia de aminoácido de cadena ligera es SEQ I D NO: 30 y la secuencia de aminoácido de cadena pesada es SEQ ID NO. 35.
17.- El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 1 2, caracterizado porque dicho anticuerpo comprende una cadena ligera y una cadena pesada, en donde la secuencia de aminoácido de cadena ligera es SEQ I D NO: 31 y la secuencia de aminoácido de cadena pesada es SEQ I D NO: 36.
1 8.- El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 1 3, caracterizado porque dicho anticuerpo comprende dos cadenas ligeras y dos cadenas pesadas, en donde cada secuencia de aminoácido de cadena ligera es SEQ I D NO: 27 y cada secuencia de aminoácido de cadena pesada es SEQ I D NO: 32.
1 9.- El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque dicho anticuerpo comprende dos cadenas ligeras y dos cadenas pesadas, en donde cada secuencia de aminoácido de cadena ligera es SEQ I D NO: 28 y cada secuencia de aminoácido de cadena pesada es SEQ I D NO: 33.
20. - El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque dicho anticuerpo comprende dos cadenas ligeras y dos cadenas pesadas, en donde cada secuencia de aminoácido de cadena ligera es SEQ ID NO: 29 y cada secuencia de aminoácido de cadena pesada es SEQ ID NO: 34.
21. - El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque dicho anticuerpo comprende dos cadenas ligeras y dos cadenas pesadas, en donde cada secuencia de aminoácido de cadena ligera es SEQ ID NO: 30 y cada secuencia de aminoácido de cadena pesada es SEQ ID NO: 35.
22. - El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque dicho anticuerpo comprende dos cadenas ligeras y dos cadenas pesadas, en donde cada secuencia de aminoácido de cadena ligera es SEQ ID NO: 31 y cada secuencia de aminoácido de cadena pesada es SEQ ID NO: 36.
23.- Una composición farmacéutica, que comprende el anticuerpo CGRP diseñado humano de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-22 y un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.
24.- Un método para tratar dolor de osteoartritis, que comprende administrar a un paciente humano en necesidad del mismo el anticuerpo CGRP diseñado humano de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 -22.
25.- El anticuerpo CGRP diseñado humano de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 -22, para uso en terapia.
26.- El anticuerpo CGRP diseñado humano de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 -22, para uso en el tratamiento de dolor de osteoartritis.
27. - El uso de un anticuerpo CGRP diseñado humano de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 -22 para uso en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de dolor de osteoartritis.
28. - Un método para el tratamiento de migrañas que comprende la administración a un paciente humano en necesidad del mismo el anticuerpo CGRP diseñado humano de cualquiera de las reivindicaciones 1 -22.
29. - El anticuerpo CGRP diseñado humano de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 -22, para uso en el tratamiento de migrañas.
30. - El uso de un anticuerpo CGRP diseñado humano de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 -22 para uso en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de migrañas.
31 . - Un fragmento de unión a antígeno del anticuerpo CGRP humano diseñado de cualquiera de las reivindicaciones 1 -22 o 25-28. RES U M E N La presente invención provee un anticuerpo de péptido relacionado con gen de calcitonina diseñado humano (CGRP) o su fragmento de unión a antígeno. Además, la presente invención provee el uso de anticuerpos de péptido relacionados con gene de calcitonina diseñado humano (CGRP) o su fragmento de unión a antigeno para el tratamiento de dolor de osteoartritis.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US35332310P | 2010-06-10 | 2010-06-10 | |
PCT/US2011/039381 WO2011156324A1 (en) | 2010-06-10 | 2011-06-07 | Cgrp antibodies |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
MX2012014480A true MX2012014480A (es) | 2013-02-07 |
MX340999B MX340999B (es) | 2016-08-03 |
Family
ID=45096388
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
MX2012014480A MX340999B (es) | 2010-06-10 | 2011-06-07 | Anticuerpos de peptido relacionado con el gen calcitonina. |
MX2016005150A MX363209B (es) | 2010-06-10 | 2011-06-07 | Anticuerpos de peptido relacionado con el gen calcitonina. |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
MX2016005150A MX363209B (es) | 2010-06-10 | 2011-06-07 | Anticuerpos de peptido relacionado con el gen calcitonina. |
Country Status (34)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US9073991B2 (es) |
EP (2) | EP2579894B1 (es) |
JP (2) | JP6021806B2 (es) |
KR (1) | KR101489566B1 (es) |
CN (2) | CN102946905B (es) |
AR (1) | AR081434A1 (es) |
AU (1) | AU2011265050B2 (es) |
BR (1) | BR112012031501B1 (es) |
CA (1) | CA2802102C (es) |
CY (2) | CY1119789T1 (es) |
DK (1) | DK2579894T3 (es) |
EA (1) | EA022931B1 (es) |
ES (2) | ES2656000T3 (es) |
HK (1) | HK1203211A1 (es) |
HR (1) | HRP20171992T1 (es) |
HU (2) | HUE038135T2 (es) |
IL (2) | IL222885B (es) |
JO (1) | JO3330B1 (es) |
LT (2) | LT2579894T (es) |
LU (1) | LUC00112I2 (es) |
ME (1) | ME02862B (es) |
MX (2) | MX340999B (es) |
NL (1) | NL300979I2 (es) |
NO (2) | NO2579894T3 (es) |
NZ (1) | NZ603607A (es) |
PL (1) | PL2579894T3 (es) |
PT (1) | PT2579894T (es) |
RS (1) | RS56638B1 (es) |
SG (1) | SG185648A1 (es) |
SI (1) | SI2579894T1 (es) |
TW (1) | TWI423818B (es) |
UA (1) | UA109658C2 (es) |
WO (1) | WO2011156324A1 (es) |
ZA (1) | ZA201208996B (es) |
Families Citing this family (37)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
PL3045182T3 (pl) | 2005-11-14 | 2018-07-31 | Teva Pharmaceuticals International Gmbh | Przeciwciała antagonistyczne skierowane przeciwko peptydowi związanemu z genem kalcytoniny do leczenie klastrowego bólu głowy |
CN107296957A (zh) | 2008-03-04 | 2017-10-27 | 梯瓦制药国际有限责任公司 | 治疗慢性疼痛的方法 |
CN102740884A (zh) | 2009-08-28 | 2012-10-17 | 瑞纳神经科学公司 | 通过施用针对降钙素基因相关肽的拮抗性抗体来治疗内脏痛的方法 |
AR081434A1 (es) * | 2010-06-10 | 2012-08-29 | Lilly Co Eli | Anticuerpo del peptido relacionado con el gen calcitonina (cgrp), composicion farmaceutica que lo comprende, uso de dicho anticuerpo para preparar un medicamento util para tratar dolor de osteoartritis o migranas y fragmento de union a antigeno de dicho anticuerpo |
ES2715001T3 (es) | 2011-05-20 | 2019-05-31 | Alderbio Holdings Llc | Composiciones anti-CGRP y uso de las mismas |
EP2709663B1 (en) | 2011-05-20 | 2019-03-20 | AlderBio Holdings LLC | Use of anti-cgrp antibodies and antibody fragments to prevent or inhibit photophobia or light aversion in subjects in need thereof, especially migraine sufferers |
MX365813B (es) | 2011-05-20 | 2019-06-14 | Alderbio Holdings Llc | Uso de anticuerpos anti-cgrp o anti-cgrp o fragmentos de anticuerpo para tratar o prevenir formas crónicas y agudas de diarrea. |
CN109369808B (zh) | 2012-08-24 | 2023-11-07 | 加利福尼亚大学董事会 | 用于治疗ror1癌症并抑制转移的抗体和疫苗 |
US20170114122A1 (en) | 2015-10-23 | 2017-04-27 | Alderbio Holdings Llc | Regulation of glucose metabolism using anti-cgrp antibodies |
US10556945B2 (en) | 2014-03-21 | 2020-02-11 | Teva Pharmaceuticals International Gmbh | Antagonist antibodies directed against calcitonin gene-related peptide and methods using same |
DK3119431T3 (da) | 2014-03-21 | 2024-03-18 | Teva Pharmaceuticals Int Gmbh | Antagonistantistoffer rettet mod calcitoningen-relateret peptid og fremgangsmåder til anvendelse deraf |
MX2017005280A (es) | 2014-10-24 | 2017-08-15 | Merck Sharp & Dohme | Coagonistas de los receptores de glucagon y de glp-1. |
TWI595006B (zh) * | 2014-12-09 | 2017-08-11 | 禮納特神經系統科學公司 | 抗pd-1抗體類和使用彼等之方法 |
JOP20200116A1 (ar) | 2015-04-24 | 2017-06-16 | Amgen Inc | طرق لعلاج أو الوقاية من الصداع النصفي |
AR104847A1 (es) * | 2015-06-17 | 2017-08-16 | Lilly Co Eli | Formulación de anticuerpo anti-cgrp |
CA3003243A1 (en) * | 2015-10-30 | 2017-05-04 | Eli Lilly And Company | Anti-cgrp/anti-il-23 bispecific antibodies and uses thereof |
CN105483091A (zh) * | 2015-12-29 | 2016-04-13 | 天津三箭生物技术股份有限公司 | 小鼠抗人Calcitonin单克隆抗体及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株 |
WO2017132062A1 (en) * | 2016-01-28 | 2017-08-03 | Eli Lilly And Company | Cgrp antibodies and uses thereof |
WO2017136195A1 (en) | 2016-02-01 | 2017-08-10 | Eli Lilly And Company | Parathyroid hormone – anti-rankl antibody fusion compounds |
KR20240113990A (ko) | 2016-06-27 | 2024-07-23 | 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 | 암 치료 조합 |
KR20190067181A (ko) | 2016-09-23 | 2019-06-14 | 테바 파마슈티컬스 인터내셔널 게엠베하 | 군발성 두통의 치료 |
CN109952314A (zh) | 2016-09-23 | 2019-06-28 | 泰瓦制药国际有限公司 | 治疗难治性偏头痛 |
US10766952B2 (en) | 2017-03-02 | 2020-09-08 | Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. | Methods for reducing migraine frequency in a subject in need thereof |
AR111845A1 (es) * | 2017-05-03 | 2019-08-28 | Lilly Co Eli | Anticuerpos biespecíficos anti-cgrp / anti-il-23 y usos de los mismos |
US11426706B2 (en) | 2017-06-21 | 2022-08-30 | Cephalon, Inc. | Cation exchange chromatography wash buffer |
TWI754772B (zh) * | 2017-09-06 | 2022-02-11 | 美商美國禮來大藥廠 | 用於治療偏頭痛之拉米迪坦(lasmiditan)與cgrp拮抗劑之組合療法 |
BR112020013621A2 (pt) | 2018-01-12 | 2020-12-01 | Amgen Inc. | anticorpos contra pac1 e usos dos mesmos |
WO2019231800A1 (en) | 2018-05-31 | 2019-12-05 | Eli Lilly And Company | Anti-cgrp antibodies for treating menstrual-related migraines |
EP3840836A1 (en) | 2018-08-22 | 2021-06-30 | Eli Lilly and Company | Anti-cgrp antibodies for treatment-resistant patients |
AU2020206241A1 (en) | 2019-01-08 | 2021-08-26 | H. Lundbeck A/S | Acute treatment and rapid treatment of headache using anti-CGRP antibodies |
EP3744400A1 (en) * | 2019-05-28 | 2020-12-02 | Etablissement Français du Sang | Car-t cells targeting il-1rap and their use in acute myeloid leukemia (aml) |
CN114127110B (zh) * | 2019-05-30 | 2022-07-01 | 山东博安生物技术股份有限公司 | 抗cgrp抗体及其应用 |
WO2021076620A1 (en) | 2019-10-15 | 2021-04-22 | Eli Lilly And Company | Recombinantly engineered, lipase/esterase-deficient mammalian cell lines |
US20240139171A1 (en) | 2021-03-02 | 2024-05-02 | Cgrp Diagnostics Gmbh | Treatment and/or reduction of occurrence of migraine |
MX2024010451A (es) | 2022-02-28 | 2024-09-18 | Tridem Bioscience Gmbh & Co Kg | Conjugado que consiste de o que comprende al menos un beta-glucano o un manano. |
CN117586390A (zh) * | 2022-08-11 | 2024-02-23 | 上海君实生物医药科技股份有限公司 | 抗cgrp抗体及用途 |
CN118271438B (zh) * | 2024-05-27 | 2024-08-30 | 上海宏成药业有限公司 | 抗cgrp抗体或其抗原结合片段及其用途 |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB8308235D0 (en) | 1983-03-25 | 1983-05-05 | Celltech Ltd | Polypeptides |
US5225539A (en) | 1986-03-27 | 1993-07-06 | Medical Research Council | Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies |
US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
HU218140B (hu) * | 1991-04-25 | 2000-06-28 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Humán interleukin-6-receptorral szembeni átalakított humán antitest |
DE69233254T2 (de) * | 1991-06-14 | 2004-09-16 | Genentech, Inc., South San Francisco | Humanisierter Heregulin Antikörper |
WO2005035753A1 (ja) * | 2003-10-10 | 2005-04-21 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | 機能蛋白質を代替する二重特異性抗体 |
EP1885402A4 (en) * | 2005-04-08 | 2010-11-10 | Medimmune Inc | ANTIBODIES AGAINST METAPNEUMOVIRUS FROM MAMMALS |
PL3045182T3 (pl) * | 2005-11-14 | 2018-07-31 | Teva Pharmaceuticals International Gmbh | Przeciwciała antagonistyczne skierowane przeciwko peptydowi związanemu z genem kalcytoniny do leczenie klastrowego bólu głowy |
WO2007076336A1 (en) * | 2005-12-22 | 2007-07-05 | Eli Lilly And Company | Treatment of migraine with anti-cgrp antibodies |
CN106110321A (zh) * | 2008-03-04 | 2016-11-16 | 莱布瑞斯生物公司 | 治疗炎性疼痛的方法 |
CN107296957A (zh) * | 2008-03-04 | 2017-10-27 | 梯瓦制药国际有限责任公司 | 治疗慢性疼痛的方法 |
AR081434A1 (es) * | 2010-06-10 | 2012-08-29 | Lilly Co Eli | Anticuerpo del peptido relacionado con el gen calcitonina (cgrp), composicion farmaceutica que lo comprende, uso de dicho anticuerpo para preparar un medicamento util para tratar dolor de osteoartritis o migranas y fragmento de union a antigeno de dicho anticuerpo |
-
2011
- 2011-05-31 AR ARP110101867A patent/AR081434A1/es active IP Right Grant
- 2011-05-31 JO JOP/2011/0177A patent/JO3330B1/ar active
- 2011-06-03 TW TW100119683A patent/TWI423818B/zh active
- 2011-06-07 NZ NZ603607A patent/NZ603607A/en unknown
- 2011-06-07 SI SI201131359T patent/SI2579894T1/en unknown
- 2011-06-07 CN CN201180028611.1A patent/CN102946905B/zh active Active
- 2011-06-07 KR KR1020127032068A patent/KR101489566B1/ko active IP Right Grant
- 2011-06-07 RS RS20171265A patent/RS56638B1/sr unknown
- 2011-06-07 EP EP11792989.3A patent/EP2579894B1/en active Active
- 2011-06-07 ME MEP-2017-280A patent/ME02862B/me unknown
- 2011-06-07 MX MX2012014480A patent/MX340999B/es active IP Right Grant
- 2011-06-07 ES ES11792989.3T patent/ES2656000T3/es active Active
- 2011-06-07 PT PT117929893T patent/PT2579894T/pt unknown
- 2011-06-07 EA EA201270769A patent/EA022931B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2011-06-07 MX MX2016005150A patent/MX363209B/es unknown
- 2011-06-07 US US13/154,538 patent/US9073991B2/en active Active
- 2011-06-07 ES ES17201603T patent/ES2930321T3/es active Active
- 2011-06-07 WO PCT/US2011/039381 patent/WO2011156324A1/en active Application Filing
- 2011-06-07 LT LTEP11792989.3T patent/LT2579894T/lt unknown
- 2011-06-07 DK DK11792989.3T patent/DK2579894T3/en active
- 2011-06-07 AU AU2011265050A patent/AU2011265050B2/en active Active
- 2011-06-07 SG SG2012084885A patent/SG185648A1/en unknown
- 2011-06-07 CA CA2802102A patent/CA2802102C/en active Active
- 2011-06-07 BR BR112012031501-3A patent/BR112012031501B1/pt active IP Right Grant
- 2011-06-07 CN CN201410474677.9A patent/CN104292332B/zh active Active
- 2011-06-07 PL PL11792989T patent/PL2579894T3/pl unknown
- 2011-06-07 NO NO11792989A patent/NO2579894T3/no unknown
- 2011-06-07 EP EP17201603.2A patent/EP3318272B1/en active Active
- 2011-06-07 HU HUE11792989A patent/HUE038135T2/hu unknown
- 2011-06-07 JP JP2013514281A patent/JP6021806B2/ja active Active
- 2011-07-06 UA UAA201212663A patent/UA109658C2/ru unknown
-
2012
- 2012-11-05 IL IL222885A patent/IL222885B/en active Protection Beyond IP Right Term
- 2012-11-28 ZA ZA2012/08996A patent/ZA201208996B/en unknown
-
2015
- 2015-04-20 HK HK15103793.6A patent/HK1203211A1/xx unknown
- 2015-06-04 US US14/730,270 patent/US9505838B2/en active Active
- 2015-11-02 IL IL242409A patent/IL242409B/en active IP Right Grant
-
2016
- 2016-06-28 JP JP2016127666A patent/JP6466883B2/ja active Active
- 2016-11-02 US US15/341,166 patent/US20170073403A1/en not_active Abandoned
-
2017
- 2017-12-21 HR HRP20171992TT patent/HRP20171992T1/hr unknown
-
2018
- 2018-01-18 CY CY20181100064T patent/CY1119789T1/el unknown
-
2019
- 2019-04-02 CY CY2019017C patent/CY2019017I2/el unknown
- 2019-04-02 HU HUS1900020C patent/HUS1900020I1/hu unknown
- 2019-04-05 NO NO2019017C patent/NO2019017I1/no unknown
- 2019-04-09 LU LU00112C patent/LUC00112I2/fr unknown
- 2019-04-11 NL NL300979C patent/NL300979I2/nl unknown
- 2019-04-12 LT LTPA2019011C patent/LTC2579894I2/lt unknown
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CA2802102C (en) | Cgrp antibodies | |
JP5632744B2 (ja) | ヒト神経成長因子に対する高親和性ヒト抗体 | |
EP3514173B1 (en) | Dkk-1 antibodies |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
FG | Grant or registration |