MX2011006433A - Enzastaurina para el tratamiento de cancer. - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a HDAC2 como un marcador biológico para tratar cáncer en un paciente usando Enzastaurina como un agente único o en combinación con un inhibidor HDAC selectivo Clase I.

Description

ENZASTAURINA PARA EL TRATAMIENTO DE CÁNCER La presente invención se refiere a métodos para usar HDAC2 como un marcador biológico en conjunto con el tratamiento de cáncer usando Enzastaurina . La presente invención también se refiere al uso de Enzastaurina en combinación con un inhibidor HDAC selectivo Clase I para lograr un efecto terapéutico mejorado en el tratamiento de cáncer .

La enzastaurina es un inhibidor selectivo PKC Beta. La enzastaurina tiene el nombre químico 3- ( 1-metil-lH-indol-3-il) -4- [1- [1- (piridin-2-ilmetil)piperidin-4-il] -lH-indol-3-il ] -lH-pirrol-2 , 5-diona y se describe en la Patente Estadounidense No 5,668,152.

Los HDACs pertenecen a la superfamilia histona desacetilasa . Existen al menos 18 enzimas HDAC las cuales se categorizan en 4 clases, con base a su homología a las levaduras de desacetilasas . Los HDACs remueven el grupo acetilo agregado por histona acetiltransferasa . La remoción del grupo acetilo permite a las histonas enlazarse al DNA, restringiendo el acceso al DNA. Consecuentemente, los HDACs previenen que se produzca la transcripción.

Ropero ha reportado que mutaciones que inactivan HDAC2 albergan muestras de tumor endometrial, colon y gástrico. Ropero, S. et al. (2006) Nat Genet, 38(5): 566-569.

QRT-PCR en líneas celulares cancerígenas y tumores (tumores de mama, glioblastomas, ovario, renal, vejiga y colorrectal) han exhibido niveles disminuidos de RNA de HDAC2. Ozdag, H., et al. (2006) BMC Genomics, 7:90. Adicionalmente, el ProteinAtlas (http://www.proteinatlas.org) revela que se observa el teñido inmunohistoquímico (IHC) moderado a negativo de HDAC2 en subseries de tumores gástricos, endometrial, ovario, mama, renal, cervical, hígado, pulmón, carcinoide maligno, linfoma, pancreático, tiroides y próstata.

Los HDACs Clase I son co-represores transcripcionales bien conocidos y algunas veces asociados con factores transcripcionales y cofactores in vivo. Los datos biológicos sugieren que los HDACs Clase I están asociados con el progreso del ciclo celular, metástasis y apoptosis y son objetivos prometedores para terapia cancerígena. Se conocen los "inhibidores HDAC Clase I", tal como, vorinostat, depsipéptido, MS-275, MGCD0103, belinostat, Baceca, panobinostat, PCI-24781, TSA, LAQ834, SBHA, butirato de sodio, ácido valproico, Apicidin, Fenil butirato, CI994, Trapoxin, SB-429201, Bispiridinio dieno, SHI-1:2, R306465, SB-379278A y PCI-34051.

A pesar que se ha realizado muchos progresos hacia el entendimiento de la base biológica de cáncer y en su tratamiento, es aún una de las principales causas de muerte.

Las variaciones en respuesta del paciente a fármacos poseen un desafio significante como resistencia y carencia de respuesta comúnmente encontrados en la clínica. Muchos factores se cree que juegan papeles en las variaciones en respuestas del paciente a fármacos que incluyen genéticos, terapias de fármaco concomitante, ambiente, estilo de vida, estado de salud y estado de enfermedad.

Existe una necesidad médica para identificar pacientes que pueden responder mejor a regímenes de quimioterapia. Se han identificado pocos marcadores biológicos predictivos y se han desarrollado menos en pruebas de diagnóstico para definitivamente guiar decisiones de tratamiento. Un procedimiento de selección del paciente es de valor significante para la medida del uso de Enzastaurina para tratar cáncer. Debería ser de mayor valor tener métodos para determinar a tiempo si un paciente puede igualmente responder al tratamiento con Enzastaurina.

Descripción detallada de la invención La presente invención se refiere a métodos para tratar cáncer con Enzastaurina después de determinar primero el nivel de expresión de HDAC2, el cual se puede usar como marcador biológico de eficacia del Enzastaurina. Cuando el nivel de HDAC2 es bajo o indetectable, la Enzastaurina sola se espera que sea particularmente efectiva. Cuando el nivel de HDAC2 es alto, la invención involucra administrar una cantidad efectiva de Enzastaurina en combinación con un inhibidor HDAC selectivo Clase I.

La presente invención incluye un método para tratar cáncer en un paciente, que comprende administrar una cantidad efectiva de Enzastaurina al paciente, en donde el paciente tiene un nivel bajo o indetectable de HDAC2.

Además, la presente invención proporciona un método para tratar cáncer en un paciente, que comprende: a) obtener una muestra que tenga células cancerígenas del paciente; b) determinar el nivel de HDAC2 en la muestra cancerígena; y c) administrar una cantidad efectiva de Enzastaurina al paciente si la muestra cancerígena tiene un nivel bajo o indetectable de HDAC2.

La presente invención incluye un método para tratar cáncer en un paciente, que comprende administrar una cantidad efectiva de Enzastaurina al paciente, en donde el paciente tiene una mutación sin sentido por cambio de marco de HDAC2.

Adicionalmente, la presente invención proporciona un método para tratar cáncer en un paciente, el cual comprende: a) obtener una muestra que tenga células cancerígenas del paciente; b) determinar si HDAC2 está mutando en la muestra cancerígena; y c) administrar una cantidad efectiva de Enzastaurina al paciente si la muestra del paciente tiene una mutación sin sentido por cambio de marco de HDAC2.

La presente invención incluye un método para tratar cáncer en un paciente, que comprende administrar una cantidad efectiva de Enzastaurina y una cantidad efectiva de un Inhibidor HDAC selectivo Clase I al paciente, en donde el paciente tiene un nivel elevado de HDAC2.

Además, la presente invención proporciona un método para tratar cáncer en un paciente, que comprende: a) obtener una muestra que tenga células cancerígenas del paciente; b) determinar el nivel de HDAC2 en la muestra cancerígena; y c) administrar una cantidad efectiva de Enzastaurina y una cantidad efectiva de un inhibidor HDAC selectivo Clase I al paciente si la muestra cancerígena tiene un nivel elevado de HDAC2.

La presente invención incluye el uso de Enzastaurina en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de cáncer en un paciente, en donde el paciente tiene un nivel bajo o indetectable de HDAC2.

Además, la presente invención proporciona el uso de Enzastaurina en combinación con un inhibidor HDAC selectivo Clase I en la manufactura de un medicamento para tratar cáncer en un paciente, en donde el paciente tiene un nivel elevado de HDAC2, y en donde el medicamento se administra en combinación con un inhibidor HDAC selectivo Clase I.

La presente invención proporciona métodos y usos como se describe en la presente, en la cual el cáncer se selecciona del grupo que consiste de cáncer colorrectal, cáncer gástrico, cáncer endometrial, cáncer de ovario, cáncer de mama, cáncer de hígado, cáncer de pulmón, cáncer renal, linfoma de la célula T cutánea, glioblastoma, linfoma, cáncer pancreático y cáncer de próstata. Además, el inhibidor HDAC selectivo Clase I se puede seleccionar del grupo que consiste de vorinostat, depsipéptido, MS-275, MGCD0103, belinostat, Baceca, panobinostat , PCI-24781, TSA, LAQ834, SBHA, Butirato de sodio, Ácido valproico, Apicidin, Fenil butirato, CI994, Trapoxin, SB-429201, Bispiridinio dieno, SHI-1:2, R306465, SB-379278A y PCI-34051.

La presente invención incluye la identificación de marcadores biológicos para ayudar en el pronóstico de resultados del paciente y la selección informada de terapias actualmente disponibles para el uso de Enzastaurina en tratamiento cancerígeno. La presente invención emplea HDAC2 como el marcador biológico preferido.

Las aberraciones genéticas adquiridas durante el desarrollo de tumores representan tanto los conductores de la enfermedad como las oportunidades para terapéuticos a la medida en cáncer. Los pacientes con genes y trayectorias alteradas en tipos de tumores específicos pueden responder diferente a las terapias objetivo. El entendimiento de estos determinantes genéticos de sensibilidad temprana del fármaco en el proceso de descubrimiento puede ayudar a mejorar y acelerar las decisiones con respecto a indicaciones clínicas, estratificación del paciente y estudios de combinación.

Estas subpoblaciones representan grupos de pacientes con un perfil HDAC2 comprometidos que puede ser dirigido para mejorar el beneficio y respuesta terapéutica a Enzastaurina como un agente único o en combinación con un inhibidor HDAC selectivo Clase I.

La presente invención se refiere al tratamiento de cáncer, que se selecciona del grupo que consiste de cáncer colorrectal, cáncer gástrico, cáncer endometrial, cáncer de ovario, cáncer de mama, cáncer de hígado, cáncer de pulmón, cáncer renal, linfoma de la célula T cutánea, glioblastoma, linfoma, cáncer pancreático y cáncer de próstata.

La presente invención proporciona para el uso de inhibidores HDAC selectivos Clase I que se seleccionan del grupo que consiste de vorinostat, depsipéptido, MS-275, MGCD0103, belinostat, Baceca, panobinostat, PCI-24781, TSA, LAQ834, SBHA, Butirato de sodio, Ácido valproico, Apicidin, Fenil butirato, CI994, Trapoxin, SB-429201, Bispiridinio dieno, SHI-1:2, R306465, SB-379278A y. PCI-34051 en combinación con Enzastaurina.

Se conocen muchos métodos para determinar la expresión del gene o proteína en una célula cancerígena. Inmunohistoquímica , Western blots, microensayos y reacción en cadena de polimerasa (PCR) son unos pocos ejemplos que se han usado para adquirir un entendimiento molecular de tipos, subtipos, pronóstico y efectos de tratamiento de cáncer. El desarrollo de estos métodos para la medición de la expresión del gene y proteína hace posible la búsqueda y sistemáticamente evaluar los marcadores biológicos de clasificación de cáncer y resultados del pronóstico en una variedad de tipos de tumor.

En la presente invención, es preferible someter a ensayo la expresión de la proteína HDAC2 o detectada por Western blot o inmunohistoquímica . Además, en la presente invención, la mutación de HDAC2 se somete a ensayo por reacción en cadena de polimerasa (PCR) seguido por secuenciamiento para determinar si el alelo mutante está presente. El método de detección empleado puede cambiar con base a la disponibilidad de la experiencia, tecnología y reactivos .

Se proporcionan las siguientes definiciones para ayudar a aquellos de experiencia ordinaria en la técnica en el entendimiento de la descripción en la presente. Estas definiciones planean ser representativas por aquellos expertos en la técnica, y son por lo tanto no limitadas a los elementos específicos presentados.

El término "tratar" (o "trata" o "tratamiento") se refiere al proceso que involucra una disminución, interrupción, detención, control, reducción o invertir el progreso o severidad de un síntoma, trastorno, condición o enfermedad.

Un "paciente" es un mamífero, preferiblemente un humano.

El término "cantidad efectiva" se refiere a la cantidad o dosis de Enzastaurina o inhibidor HDAC2 o sal farmacéuticamente aceptable, en la cual la administración de dosis única o múltiple a un paciente, proporciona el tratamiento deseado. En general, dosificaciones óptimas de cada uno de estos agentes terapéuticos pueden variar dependiendo de la potencia relativa de los ingredientes activos en pacientes individuales. Los profesionales médicos pueden determinar la dosis e índices de repetición para dosificación con base a los tiempos y concentraciones de residencia medida de los ingredientes activos en fluidos o tejidos corporales y/o monitorear los biomarcadores relacionados a la enfermedad relevantes para canceres particulares .

El término "nivel detectable" se refiere al gen, transcripto del gene o producto del gene que está presente en un nivel que es detectable en una muestra biológica por un método de diagnóstico o ensayo, tal como Western blot o inmunohistoquímica . En la presente invención, nivel bajo o indetectable de HDAC2 se refiere a <20% de expresión de HDAC2 por Western blot en relación a la expresión HDAC2 en células HCT116. Además, en la presente invención, nivel alto de HDAC2 se refiere a >20% de expresión de HDAC2 por Western blot en relación a la expresión HDAC2 en células HCT116.

La expresión HDAC2 se puede medir en una muestra usando técnicas bien establecidas en la técnica. Esencialmente, se toman biopsias de tumor de un paciente. Los tejidos se homogenizan y los lisados se analizan por Western blot para determinar la cantidad de expresión de proteina HDAC2. En caso de muestras empapadas con parafina fijada con formalina (FFPE) , se seccionan núcleos del tumor y se tiñen para detección HDAC2 por inmunohistoquimica . Un registro histopatológico de estas muestras tan bajas o altas por un método de registro inmunohistoquímico conocido, tal como un registro H.

El término "mutación sin sentido por cambio de marco" se refiere a la mutación truncada o inactivada en el gene HDAC2 como se reporta. Ropero, S., et al. (2006) Nat Genet, 38(5) : 566-9.

La mutación sin sentido por cambio de marco se puede determinar usando métodos bien establecidos. Básicamente, el DNA de una muestra del paciente se analiza por reacción en cadena de polimerasa (PCR) y secuenciamiento directo para determinar la presencia de una mutación del marco. Los cromatogramas de secuencia obtenidos de la muestra de DNA se comparan a la secuencia tipo nativo para observar una mutación truncada. Ropero, S., et al.

Ejemplo 1 HDAC2 como un sensibilizador de respuesta al fármaco Enzastaurina Se obtienen células HCT116 de la American Tissue Culture Collection, ATCC (Rockville, MD, USA) y cultivadas en medio 5A de McCoy suplementado con 2 mM de L-glutamina y suero de bovino fetal al 10% (FBS) , en una incubadora a 37°C humidificado con C02 al 5%. Placas (384 cavidades) se pre-imprimen usando 2 siRNA por objetivo en la Biblioteca Druggable Genome v2 (Quiagen) de forma que cada cavidad contenga 13 nM de un siRNA individual doble. Se realizan las transfecciones inversas de alto rendimiento agregando el agente de transfección Lipofectamina 2000 (Invitrogen) y ~1500 células diluidas en medio 5A de McCoy suplementado con 2 mM de L-glutamina y FBS al 2% en cada cavidad seguido de un protocolo de transfección inversa estándar. Veinticuatro horas después de la transfección, cada placa de ensayo se trata con o sin 5 concentraciones (0-10 µ?) de Enzastaurina en DMSO al 1%. Setenta y dos horas más tarde, se mide la viabilidad celular usando lectura del ensayo CellTiter (Promega) con base a quimioluminiscencia, de conformidad con las recomendaciones del fabricante. siRNA UBB (Quiagen) es el control de eliminación celular positivo y la proteina fluorescente verde (GFP) o sin silenciamiento All Star (NS-AS) es el control negativo.

Se normalizan valores de señal en bruto a cavidades de control no tratadas por comparación a través de las placas. Estos se fijan a un modelo logistico de 4 parámetros para determinar los valores IC50. Un "cambio" en IC50 con respecto al control negativo (descrito anteriormente) se calcula como: (IC50 objetivo - IC50 control) dividido por IC50 control.

Para RT-PCT, se transfectan inversamente células como se describe anteriormente y se incuban con siRNA por 72 horas a 37°C y se lavan con PBS IX usando un lavador de placa antes de lisis. El RNA se extrae usando perlas magnéticas (Kit de aislamiento de RNA total MagMax-96, Ambion, Cat #1830) de conformidad con el protocolo del fabricante. La concentración de RNA total de las muestras se mide usando un espectrómetro NanoDrop-1000. Se usa el kit de Síntesis de cDNA iScript de Bio-Rad (Cat # 170-8891) para síntesis de cDNA y se corren las reacciones en un Variador Térmico de Motor Tetrad Peltier de DNA de MJ Research de conformidad con las recomendaciones del fabricante. Se usan cinco nanogramas (5 ng) de cDNA por 10 µ? de volumen de reacción qPCR. Se conduce la qPCR específica del gene usando la sonda química TaqMan® (ABI, Foster City, CA) y se corre en un Sistema PCR en tiempo Fast Real ABI 7900HT. Las reacciones se llevan a cabo en triplicado por muestra con gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenasa endógena (GAPDH) , amortiguador, controles mezclados (descritos anteriormente) y sin plantilla (un estándar para la sonda) . Se normalizan los valores de expresión del gene a GAPDH y se calcula por el método de cuantificación relativa (método ????) usando el software SDS RQ Manager 1.2 de ABI. El CT es un métrico estándar, el cual se refiere al número de umbral del ciclo. La reducción de un gel de interés por un siRNA particular en relación a la expresión endógena se da por: Prueba (ACT) = [CT del Gen Objetivo Promedio-CT de GAPDH Promedio] prueba Control (ACT) = [CT del Gen Objetivo Promedio-CT de GAPDH Promedio] control ???t = prueba (ñCT) -control (?0?) RQ = 2"???t % de KD = (RQsi-RQamortiguador) * 100/RQamortiguador en donde "prueba" se refiere al control tratado con siRNA (si) o amortiguador (amortiguador) "control" se refiere al control de siRNA revuelto, un control negativo. Se calcula RQsi y RQamortiguador como se muestra anteriormente para determinar los valores de expresión del gene en relación determinada para un objetivo de interés con y sin tratamiento de siRNA (niveles endógenos), respectivamente.

Tres siRNA que se dirigen a HDAC2 causan un cambio en la curva de eliminación de respuesta a la dosis en relación al control negativo como se observa por > cambio 2 veces en valores IC50, sensibilización de HCT116 a los efectos de Enzastaurina . Imágenes de alto contenido también reflejan un grado mayor de eliminación celular en células HCT116 tratadas con Enzastaurina y siRNA de HDAC2 en relación a controles negativos y cualquier condición sola (Datos no mostrados) .

Ejemplo 2 Actividad Mejorada de Enzastaurina en RKO en relación a HCT116 La linea celular de cáncer de colon humano, HCT116 (HDAC 2 peso) y PKO (HDAC 2+/-), una linea que contiene una mutación sin sentido que resulta en expresión de proteina nula HDAC2 en relación a HCT116, se obtienen de la American Tissue Culture Collection, ATCC (Rockville, MD, USA) y se cultiva en el medio de crecimiento recomendado por la ATCC suplementado con 2 mM de L-glutamina y FBS al 10%, en una incubadora a 37°C humidificada con CO2 al 5%. Se realizan experimentos de respuesta al dosis del fármaco sembrando 1000-2000 células diluidas en medio 5A de McCoy que contiene 25 mM de ácido ?-2-hidroxietilpiperazin-N' -2-etansulfónico (HEPES) , 2 mM de L-glutamina y suero de bovino fetal (FBS) al 2% seguido por el tratamiento con o sin diluciones seriales de Enzastaurina (0-100 µ?) en DMSO al 1%. Setenta y dos o noventa y seis horas más tarde, se mide la viabilidad celular usando lectura del ensayo CellTiter Glo (Promega) en base a quimioluminiscencia, de conformidad con las recomendaciones del fabricante. Se normalizan valores de señal en crudo a control no tratado y se analizan por curva no lineal ajustada en GraphPad Prism (La Jolla, CA, USA) .

Curvas de respuesta a la dosis del fármaco muestran diferencias significantes (> 2X) en IC50 y efecto máximo de la inhibición del crecimiento por Enzastaurina en células RKO en relación a HCT116. El IC50 de Enzastaurina en células HCT116 es 8.34 µ? comparado a un IC50 de 3.56 µ? en células RKO. Además, el efecto de eliminación máxima de Enzastaurina en RKO (95-100%) es mayor que de HCT116 (50-60%) . Estos datos proporcionan confirmación genética de la disminución de HDAC2 como un sensibilizador para la respuesta de Enzastaurina.

Ejemplo 3 Inhibición del crecimiento in vitro y estudios de combinación de fármacos Para determinar si un inhibidor HDAC selectivo Clase I y Enzastaurina proporcionan un efecto benéfico, MS-275, un inhibidor HDAC selectivo Clase I, y Enzastaurina se someten a ensayo para inhibición del crecimiento celular cancerígeno .

La línea celular de cáncer de colon humano HCT116 obtenida de la American Tissue Culture Collection, ATCC (Rockville, MD, USA) se mantiene como monocapa en medio 5A de McCoy que contiene 25 mM de HEPES, 2 mM de L-glutamina y FBS al 10%, en una incubadora a 37°C humidificada con C02 al 5%. Las células HCT116 que crecen exponencialmente (2000 células/cavidad) se colocan en placas de 96 cavidades recubiertas de Poli-D-Lisina en medio 5A de McCoy que contiene 25 mM de HEPES, 2 mM de L-glutamina y FBS al 2% por 24 horas para tratamiento del fármaco. Las células se tratan por 72 horas con (i) un intervalo de concentraciones de Enzastaurina (0-10 µ?) y MS-275 (0-4 µ?) solos para determinar valores IC50 de las curvas responsables de la dosis sigmoide, (ii) adición concurrente de Enzastaurina y MS-275 en relaciones IC50 fijados a 3 (2.5, 5, 10), todas a una concentración DMSO final de 0.02% después de un diseño de relación fija (Koizumi, F., et al. (2004) Int J Cáncer, 108 (3) : 64-72; Tallarida, R.J., et al. (1997) Life Sci, 61(26): PL 417-25). Las células después se fijan y tiñen con yoduro de propidio (PI) . Se mide el conteo celular por el sistema Acumen Explorer (Acumen Bioscience Ltd, RU) .

Se realiza en análisis de datos por el principio de efecto de mediana sugerido por Chou y Talalay (Chou, T.C. and P. Talalay, Quantitative analysis of dose-effect relationships : the combined effects of múltiple drugs or enzyme inhibitors, Adv Enzyme Regul, 1984. 22: p. 27-55) usando el software Calcusyn (Biosoft, Cambridge, RU) para calcular un índice de Combinación (CI) . El CI es una medición cuantitativa del grado de interacción entre los diferentes fármacos: CI = 1 para aditividad; CI > 1 para antagonismo; y CI > 1 para sinergismo. En la tabla posterior, FA es la Fracción afectada; CI es el índice de combinación; SD es la desviación estándar; E significa Enzastaurina; M significa MS-275; E/M significa la relación fija de cada uno de los valores IC50 del fármaco.

E/M = 2.5 E/M = 5 E/M = 10 Fa CI + SD CI + SD CI + SD 0.5 0.883 + 0.1288 0.639 + 0.0681 0.566 + 0.0537 0.6 0.838 + 0.1117 0.603 + 0.0602 0.529 j_0.0487 0.7 0.791 + 0.0989 0.567 + 0.0552 0.492 + 0.0462 0.8 0.738 ^O.0914 0.525 _0.0538 0.450 + 0.0462 0.9 0.664 + 0.0932 0.469 + 0.0577 0.393 + 0.0496 0.99 0.487 + 0.1253 0.335 + 0.0758 0.265 + 0.0599 Estudios de combinación simultánea de fármacos de Enzastaurina y MS-275 demuestran interacción sinérgica (CI < 1) a través de todas las relaciones fijas y valores Fa probados. Estos datos proporcionan evidencia farmacológica para reducción de HDAC2 que mejora la acción de Enzastaurina.

Claims (12)

REIVINDICACIONES

1. Un método para tratar cáncer en un paciente, caracterizado porque comprende administrar una cantidad efectiva de Enzastaurina al paciente, en donde el paciente tiene un nivel bajo o indetectable de HDAC2.

2. Un método para tratar cáncer en un paciente, caracterizado porque comprende: a) obtener una muestra que comprende células cancerígenas del paciente; b) determinar el nivel de HDAC2 en la muestra cancerígena; y c) administrar una cantidad efectiva de Enzastaurina al paciente si la muestra del paciente tiene un nivel bajo o indetectable de HDAC2.

3. Un método para tratar cáncer en un paciente, caracterizado porque comprende administrar una cantidad efectiva de Enzastaurina al paciente, en donde el paciente tiene una mutación sin sentido por cambio de marco HDAC2.

4. Un método para tratar cáncer en un paciente, caracterizado porque comprende: a) obtener una muestra que comprende células cancerígenas del paciente; b) determinar sin HDAC2 está mutado en la muestra cancerígena; y c) administrar una cantidad efectiva de Enzastaurina al paciente si la muestra del paciente tiene mutación sin sentido por cambio de marco HDAC2.

5. Un método para tratar cáncer en un paciente, caracterizado porque comprende administrar una cantidad efectiva de Enzastaurina y una cantidad efectiva del inhibidor HDAC selectivo Clase I al paciente, en donde el paciente tiene un nivel elevado de HDAC2.

6. Un método para tratar cáncer en un paciente, caracterizado porque comprende: a) obtener una muestra que comprende células cancerígenas del paciente; b) determinar el nivel de HDAC2 en la muestra cancerígena; y c) administrar una cantidad efectiva de Enzastaurina y una cantidad efectiva del inhibidor HDAC selectivo Clase I al paciente si la muestra del paciente tiene un nivel elevado de HDAC2.

7. El método de conformidad con la reivindicación 5 o 6, caracterizado porque el inhibidor HDAC selectivo Clase I se selecciona del grupo que consiste de vorinostat, depsipéptido, MS-275, MGCD0103, belinostat, Baceca, panobinostat, PCI-24781, TSA, LAQ834, SBHA, Butirato de sodio, Ácido valproico, Apicidin, Fenil butirato, CI994, Trapoxin, SB-429201, Bispiridinio dieno, SHI-1:2, R306465, SB-379278A y PCI-34051.

8. El método de conformidad con una de las Reivindicaciones 1-7, caracterizado porque el cáncer se selecciona del grupo que consiste de cáncer colorrectal, cáncer gástrico, cáncer endometrial, cáncer de ovario, cáncer de mama, cáncer de hígado, cáncer de pulmón, cáncer renal, linfoma de célula T cutánea, glioblastoma, linfoma, cáncer pancreático y cáncer de próstata.

9. Uso de Enzastaurina en la manufactura de un medicamento para tratar cáncer en un paciente, en donde el paciente tiene un nivel bajo o indetectable de HDAC2.

10. Uso de Enzastaurina en combinación con un inhibidor HDAC selectivo Clase I en la manufactura de un medicamento para tratar cáncer en un paciente, en donde el paciente tiene un nivel elevado de HDAC2, y en donde el medicamento se administra en combinación con un inhibidor HDAC selectivo Clase I.

11. Uso de conformidad con la reivindicación 10, en donde el inhibidor HDAC selectivo Clase I se selecciona del grupo que consiste de vorinostat, depsipéptido, MS-275, MGCD0103, belinostat, Baceca, panobinostat, PCI-24781, TSA, LAQ834, SBHA, Butirato de sodio, Ácido valproico, Apicidin, Fenil butirato, CI994, Trapoxin, SB-429201, Bispiridinio dieno, SHI-1:2, R306465, SB-379278A y PCI-34051.

12. Uso de conformidad con una de las Reivindicaciones 9-11, en donde el cáncer se selecciona del grupos que consiste de cáncer colorrectal, cáncer gástrico, cáncer endometrial, cáncer de ovario, cáncer de mama, cáncer de hígado, cáncer de pulmón, cáncer renal, linfoma de célula T cutánea, glioblastoma, linfoma, cáncer pancreático y cáncer de próstata .