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    Méthodes de Séparation 2010-2011 Nathalie Younan

    Correction Série 6: Chromatographie d’exclusion stérique


    Exercice 1 : Indices de Kovats

    IPropane = 300
    IButane = 400
    log (t Rn )  log (t z )
    L’indice de Kovats est donné par RI = 100 z + 100 donc
    log (t z +1 ) log (t z )
    log (5.71)  log (2.23)
    IIsobutane = 300 + 100 = 386
    log (6.67 ) log (2.23)

    Exercice 2 : Perte de charge dans une colonne


    K dp
    1) u ( x) =  avec - u ( x) la vitesse de la phase mobile en m.s-1
     dx
    - K la perméabilité de la colonne
    -  la viscosité en Poise
    - dp la perte de charge en Pa
    - dx la longueur de la colonne

      u  dx
    soit la perte de charge dp =
    K
    2) A débit identique, avec une colonne deux fois plus longue, la perte de charge est doublée.
    A débit divisé par 2, la perte de charge est identique.

    Exercice 3 :

    a) Volume de la colonne: V =  r 2l = 40.2 mL

    b) Ve = Vi + KVp

    Ve  Vi
    K= = 0.52
    Vp

    Exercice 4 :

    Volume de la colonne: V =  r 2l = 14.33 mL

    Vp = 5.73 mL (40%)
    Vi = 5.75 mL (40%)

    a) Molécules totalement exclues: Ve = Vi = 5.73 mL

    b) Petites molecules: Ve = Vp + Vi = 11.4 mL


    Méthodes de Séparation 2010-2011 Nathalie Younan

    c) Les molécules doivent s’adsorber aux particules.

    Exercice 5 :

    a) La plus grosse molecule (34500 Da) est éluée à 4.5 min.


    Débit de la colonne: 1 mL.min-1 Donc, Vi = 4.5 mL

    La plus petite molecule (162 Da) est éluée à 8.25 min.


    Vm = Vi + Vp = 8.25 mL Vp = 3.75 mL

    b) Pour le compose à 3250 Da: Ve = 5.6 mL

    Ve  Vi
    K= = 0.29
    Vp

    c) Si K>1, interactions entre le soluté et la phase stationnaire. Phénomène de partition


    qui se superpose à la diffusion dans les pores.

    Exercice 6 :

    a) Représentation log M en fonction du volume d’élution.

    Composés Vr (mL) Masse moléculaire (Da) Log M


    Blue Dextran 2000 17.7 2.106 6.3
    Aldolase 35.6 158000 5.2
    Catalase 32.3 210000 5.3
    Ferritin 28.6 440000 5.6
    Thyroglobulin 25.1 669000 5.8
    Inconnu 30.3 ? -

    6.2
    y = -0.06x + 7.4
    6.0

    5.8
    log M

    5.6

    5.4

    5.2

    20 25 30 35
    Vr

    b) Soluté inconnu: Vr = 30.3 mL

    log M = (0.06x30.3)+7.4=5.6 M  400 000 Da

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