TIPOS DE MUESTRAS

MICROBIOLOGICAS:
COPROCULTIVO,
UROCULTIVO, CULTIVO DE
ESPUTO
J. Miguel B. Delgado Ruiton
Métodos y Técnicas de Estudio Microbiológico II
Instituto de Educación Superior Privado Cayetano Heredia
COPROCULTI
VO
COPROCULTI
VO
Se reportan 3 cosas:
• Recuento de leucocitos: Para saber si es una diarrea
inflamatoria
• Presencia o ausencia de Campylobacter
• Reporte de Bacteria Enteropatógena causante de la infección:
Salmonella o Shigella
HECES
Indicaciones para el paciente:
• No es en ayunas ni requiere dieta especial.
• No haber tomado antibióticos en las últimas 72 horas (3 días). De
estar tomando antibióticos, indicar en la solicitud de coprocultivo que
antibióticos se está tomando y cuanto tiempo lleva tomando
antibiótico.
Examen Macroscópico

Reportar:
Color
Consistencia
Presencia/ausencia de sangre
Presencia/ausencia de moco
Determinación de diarrea inflamatoria: heces con moco y sangre
Examen Microscópico
El examen microscópico del coprocultivo implica observar una muestra
de heces bajo un microscopio para identificar la presencia de
organismos patógenos como bacterias, parásitos o huevos de
helmintos. Dependiendo de los hallazgos, se pueden reportar
diferentes resultados.

Para el COPROCULTIVO se hacen 2 exámenes microscópicos:

• Tinción con azul de metileno
• Tinción de GRAM modificada
Tinción con azul de metileno
Procedimiento:
1) Colocar una lámina portaobjetos en la
bandeja de tinción y echar una gota de azul
de metileno.
2) Colocar muestra de heces con un hisopo en
la gota de azul de metileno.
3) Dejar que el tinte actúe durante 1 a 2
minutos.
4) Cubrir el portaobjetos con una lamina
cubreobjetos.
5) Mirar lámina a 40x.
Tinción con azul de metileno

• Realizar el recuento en 20 campos y

hacer un promedio de estos.
• Si el promedio es mayor a 5 entonces
es una diarrea inflamatoria.
• Reportar el promedio del recuento.
 Tinción de GRAM modificada
Es una modificación a la tinción de GRAM clásica pero que en lugar de Safranina se usa Fucsina.

Procedimiento:
1) Preparación del Frotis:
• Toma una muestra bacteriana con el asa bacteriológica esterilizada.
• Extiende la muestra sobre un portaobjetos limpio formando una fina
capa.
• Deja que la muestra se seque al aire.
2) Fijación:
• Pasa el portaobjetos con la muestra seca brevemente a través de la
llama del mechero Bunsen 2-3 veces para fijar las bacterias al
portaobjetos. No sobrecalientes.
3) Aplicación de Cristal Violeta:
• Coloca el portaobjetos sobre la bandeja de tinción.
• Cubre el frotis con cristal violeta y deja actuar durante 1 minuto.
• Lava suavemente el exceso de cristal violeta con agua destilada.
 Tinción de GRAM modificada
4) Aplicación de Lugol:
• Cubre el frotis con Lugol y deja actuar durante 1 minuto.
• Lava suavemente con agua destilada.
5) Decoloración:
• Añade alcohol o acetona gota a gota sobre el frotis durante unos
10-20 segundos, hasta que el líquido que escurre salga casi claro.
• No dejes que el alcohol actúe demasiado tiempo para evitar una
decoloración excesiva.
• Lava inmediatamente con agua destilada para detener la
decoloración.
6) Aplicación de Fucsina:
• Cubre el frotis con Fucsina y deja actuar durante 1-2 minutos.
• Lava suavemente el exceso de safranina con agua destilada.
• Poner a secar la lámina.
• Observar el frotis a 100x de aumento.
Tinción de GRAM modificada
Campylobacter son espirilos GRAM
negativos que se ven con forma de
gaviotas.

Reportar su presencia o ausencia

COPROCULTIVO
Primero se hace la siembra del cultivo y después la
observación microscópica.
Se usarán cultivos selectivos y diferenciales:
• Agar SS
• Agar Mcconkey
• Agar Hecktoen
 Agar SS
En el medio de cultivo la pluripeptona y el extracto de carne
aportan los nutrientes para el desarrollo microbiano.
Las sales biliares y el verde brillante inhiben el desarrollo de
una amplia variedad de bacterias Gram positivas, de la
Medio de cultivo selectivo y diferencial utilizado para el mayoría de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus
aislamiento de Salmonella spp. y de algunas especies de spp. La lactosa es el hidrato de carbono fermentable.
Shigella spp. a partir de heces, alimentos y otros materiales en El tiosulfato de sodio permite la formación de SH2 que se
los cuales se sospeche su presencia. evidencia por la formación de sulfuro de hierro.
El rojo neutro es el indicador de pH y el agar es el agente
solidifícate.
Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces
de desarrollar, acidifican el medio haciendo virar al rojo el
indicador de pH, obteniéndose colonias rosadas o rojas sobre
un fondo rojizo.
Salmonella, Shigella y otros microorganismos no
fermentadores de lactosa, crecen adecuadamente en el
medio de cultivo, y producen colonias transparentes.
La producción de ácido sulfhídrico se evidencia como colonias
con centro negro debido a la formación de sulfuro de hierro.
E.coli Shigella sp. Salmonella sp. Para aumentar la selectividad, se recomienda incubar
previamente la muestra en Selenito Caldo
 Agar Mac Conkey
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los
Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram nutrientes necesarios para el desarrollo
negativos de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono
facultativos a partir de muestras clínicas, aguas y alimentos. fermentable, y la mezcla de sales biliares y el
Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae cristal violeta son los agentes selectivos que
inhiben el desarrollo de gran parte de la flora
desarrollan en el mismo. Gram positiva. El agar es el agente solidificante.
Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH
alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del
color del indicador de pH (rojo neutro), la
absorción en las colonias, y la precipitación de las
sales biliares. Los microorganismos no
fermentadores de lactosa producen colonias
incoloras.

E.coli Shigella sp. Salmonella sp.

 Agar Hecktoen
En el medio de cultivo la proteosa peptona y el extracto de
Medio de cultivo selectivo y diferencial utilizado para el levadura aportan los nutrientes para el desarrollo microbiano.
aislamiento de Salmonella spp. y Shigella spp. a partir de heces La lactosa, sacarosa y salicina son los hidratos de carbono
y alimentos. fermentables.
Las sales biliares inhiben el desarrollo de la flora Gram
positiva, de algunos coliformes y de la mayoría de las cepas de
Pseudomonas spp.
El azul de bromotimol y la fucsina ácida son los indicadores de
la fermentación de hidratos de carbono, mientras que el
citrato de hierro actua como indicador de la formación de SH2
a partir del tiosulfato debido a que se forma sulfuro de hierro,
compuesto de color negro.
El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico y el agar es
el agente solidificante.
El desarrollo de Shigella spp. es adecuado debido a que la
inhibición de este microorganismo por las sales biliares está
E.coli Shigella sp. Salmonella sp. disminuida por la adición de cantidades relativamente
elevadas de proteosa peptona y de hidratos de carbono así
como la baja toxicidad de los indicadores presentes en el
medio de cultivo.
TRACTO GENITAL FEMENINO Y
MASCULINO
UROCULTIVO
Es una prueba de laboratorio utilizada para detectar y diagnosticar infecciones del tracto urinario (ITU). Consiste en el
cultivo de una muestra de orina para identificar la presencia de bacterias u otros microorganismos patógenos.

Objetivos del urocultivo:

Confirmar la presencia de una infección urinaria.
Identificar el microorganismo causante de la infección.
Determinar la resistencia del microorganismo a los antibióticos (antibiograma).
El urocultivo es una herramienta esencial para el diagnóstico preciso y el tratamiento adecuado de las infecciones urinarias,
permitiendo una terapia dirigida y efectiva.

Condiciones para realizar urocultivo:

• Higiene personal un día antes
• Recolección a partir del segundo chorro
• No pasar de 20 minutos sin refrigerar
• No haber tomado antibióticos en las últimas 72 horas (3 días). De estar tomando antibióticos, indicar en la solicitud de
coprocultivo que antibióticos se está tomando y cuanto tiempo lleva tomando antibiótico.

Sembrar orina si y solo si tiene Regular Cantidad de bacterias.

UROCULTIVO
Procedimiento del urocultivo:

Recolección de la muestra: La muestra de orina se recolecta en un recipiente estéril. Para evitar la

contaminación, se suele recomendar la recolección de la orina de mitad del chorro después de una limpieza
adecuada del área genital.
Cultivo: La muestra de orina se inocula en medios de cultivo específicos y se incuba a temperatura
controlada para permitir el crecimiento de microorganismos. Este proceso generalmente dura entre 24 y 48
horas.
Identificación de microorganismos: Si hay crecimiento bacteriano, los microorganismos se aíslan y se
identifican mediante pruebas bioquímicas, microscópicas o moleculares.
Antibiograma: Si se identifican bacterias patógenas, se realiza un antibiograma para determinar la
sensibilidad de los microorganismos a diferentes antibióticos. Esto ayuda al médico a elegir el tratamiento
más eficaz.
Agar Sangre y Agar Mac Conkey
Epidemiología de las ITU
Las infecciones del tracto urinario (ITU) son causadas por una
amplia variedad de patógenos, incluyendo bacterias Gram-
negativas y Gram-positivas, así como hongos. Las ITU no
complicadas típicamente afectan a mujeres, niños y pacientes
ancianos que por lo demás están saludables. Las ITU complicadas
suelen estar asociadas con catéteres permanentes, anomalías del
tracto urinario, inmunosupresión o exposición a antibióticos. El
agente causante más común tanto de las ITU no complicadas
como de las complicadas es Escherichia coli uropatógena
(UPEC). Para las ITU no complicadas, otros agentes causales son
(en orden de prevalencia) Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus
saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus del grupo B
(GBS), Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa,
Staphylococcus aureus y especies de Candida. Para las ITU
complicadas, los otros agentes causales son (en orden de
prevalencia) Enterococcus spp., K. pneumoniae, especies de
Candida, S. aureus, P. mirabilis, P. aeruginosa y GBS.
Proceso de una ITU
Infecciones urinarias no complicadas:
Las infecciones urinarias no complicadas (IU) comienzan cuando
los uropatógenos que residen en el intestino contaminan el área
periuretral (paso 1) y son capaces de colonizar la uretra. La
posterior migración a la vejiga (paso 2) y la expresión de fimbrias
y adhesinas resulta en la colonización e invasión de las células
superficiales umbrella (paso 3). Las respuestas inflamatorias del
huésped, incluyendo la infiltración de neutrófilos (paso 4),
comienzan a eliminar las bacterias extracelulares. Algunas
bacterias evaden el sistema inmunológico, ya sea a través de la
invasión de las células del huésped o mediante cambios
morfológicos que resultan en resistencia a los neutrófilos; estas
bacterias se multiplican (paso 5) y forman biopelículas (paso 6).
Estas bacterias producen toxinas y proteasas que inducen daño
en las células del huésped (paso 7), liberando nutrientes
esenciales que promueven la supervivencia bacteriana y la
ascensión a los riñones (paso 8). La colonización de los riñones
(paso 9) resulta en la producción de toxinas bacterianas y daño
en los tejidos del huésped (paso 10). Si no se trata, las IU pueden
progresar a bacteriemia si el patógeno atraviesa la barrera
epitelial tubular en los riñones (paso 11).
Proceso de una ITU
Infecciones urinarias complicadas:
Los uropatógenos que causan infecciones urinarias complicadas
siguen los mismos pasos iniciales que los descritos para las
infecciones no complicadas, incluyendo la colonización
periuretral (paso 1), la progresión a la uretra y la migración a la
vejiga (paso 2). Sin embargo, para que los patógenos causen
infección, la vejiga debe estar comprometida. La causa más
común de una vejiga comprometida es la cateterización. Debido
a la robusta respuesta inmunológica inducida por la
cateterización (paso 3), el fibrinógeno se acumula en el catéter,
proporcionando un ambiente ideal para la adhesión de
uropatógenos que expresan proteínas de unión al fibrinógeno. La
infección induce la infiltración de neutrófilos (paso 4), pero
después de su adhesión inicial a los catéteres recubiertos de
fibrinógeno, las bacterias se multiplican (paso 5), forman
biopelículas (paso 6), promueven el daño epitelial (paso 7) y
pueden sembrar la infección en los riñones (pasos 8 y 9), donde
la producción de toxinas induce daño tisular (paso 10). Si no se
trata, los uropatógenos que causan infecciones urinarias
complicadas también pueden progresar a bacteriemia al
atravesar la barrera de las células epiteliales tubulares (paso 11).
Mecanismo de infección de E.coli
Mecanismo de infección de Enterococcus faecalis
CULTIVO DE ESPUTO
El cultivo de esputo es una prueba de laboratorio utilizada para detectar y diagnosticar
infecciones respiratorias, especialmente aquellas que afectan los pulmones y las vías
respiratorias inferiores.
Objetivos del cultivo de esputo:
• Diagnosticar infecciones respiratorias como neumonía, bronquitis, tuberculosis y otras
enfermedades pulmonares.
• Identificar el microorganismo causante de la infección.
• Determinar la resistencia del microorganismo a los antibióticos para guiar el
tratamiento.
• El cultivo de esputo es una herramienta esencial en la práctica clínica para el diagnóstico
y tratamiento efectivo de infecciones respiratorias, proporcionando información crucial
sobre el tipo de patógeno y su susceptibilidad a los tratamientos antimicrobianos.
CULTIVO DE ESPUTO

Aspectos clave del cultivo de esputo:

Recolección de la muestra: El esputo es una mezcla de saliva y secreciones de los pulmones y las vías respiratorias que se
expulsa mediante la tos. La muestra debe ser recolectada en un recipiente estéril, preferiblemente en la mañana, ya que
es cuando las secreciones son más abundantes y concentradas.
Preparación de la muestra: Antes de proceder con el cultivo, la muestra puede ser tratada para eliminar la saliva y
concentrar los patógenos presentes en las secreciones respiratorias.
Cultivo: La muestra se inocula en diferentes medios de cultivo adecuados para el crecimiento de bacterias, hongos y otros
patógenos respiratorios. Se incuba a temperaturas específicas durante un periodo que puede variar de 24 a 72 horas,
dependiendo del microorganismo sospechoso. Para gérmenes comunes, cultivo de lavado broncoalveolar sembrar en
Agar Macconkey, Agar Sangre y Agar Cetrimide; en el caso de Mycobacterium sembrar en Medio Lowen Stein Jensen,
Medio Middlebrook o Medio Ogawa.
Identificación de microorganismos: Si se observa crecimiento microbiano, los patógenos se aíslan e identifican mediante
técnicas bioquímicas, microscópicas o moleculares.
Antibiograma: Al igual que en el urocultivo, si se identifican bacterias patógenas, se realiza un antibiograma para
determinar la sensibilidad a diversos antibióticos, lo cual es fundamental para la selección del tratamiento adecuado