Medicine">
TAMIZAJE MICROBIOLOGICO EN DONANTES DE SANGRE. Dra. Loretto Vergara M. Directora Centro de Sangre Metropolitano
TAMIZAJE MICROBIOLOGICO EN DONANTES DE SANGRE. Dra. Loretto Vergara M. Directora Centro de Sangre Metropolitano
TAMIZAJE MICROBIOLOGICO EN DONANTES DE SANGRE. Dra. Loretto Vergara M. Directora Centro de Sangre Metropolitano
MICROBIOLOGICO EN
DONANTES DE SANGRE
24/11/2014
SANGRE
• NORMATIVAS EN CHILE
• TÉCNICAS DISPONIBLES/FLUJO DE ESTUDIOS Y
PROCESAMIENTO
• CONSEJERÍA POST CONFIRMACIÓN DE
EXÁMENES
2
Introducció n
• Banco de Sangre/Servicios de Sangre
24/11/2014
• Sistema donde se realizan procesos de alta complejidad,
que van desde la selección de los donantes hasta la
utilización de un componente sanguíneo en el acto
transfusional.
24/11/2014
• Entrevista de selección
• Información pre-donación
• Autoexclusión
• Educación
24/11/2014
Entrevista
confidencial
Recepción Extracción
Examen Médico
5
Trazabilidad de la
documentació n generada
en la donación
24/11/2014
Luego de la extracción:
6
DV Donantes potenciales
Donantes Voluntarios
DR
Donantes de Reposición No Apto
14
20
/
11
/
Apto 24
Distribución
Prevenció n de
contaminació n
microbioló gica
• Capacitación permanente del personal en disminución de contaminación
bacteriana.
24/11/2014
• POEs diseñados para disminuir contaminación microbiana del ambiente y
prevenir contaminación de los componentes
• Desviar los primeros ml de sangre extraída hacia bolsa satélite, para evitar
entrada a bolsa primaria
• Sistema cerrado
• Sellado de la bolsa de extracción: selladores dieléctricos obligatorios
8
(limpios y mantenidos).
24/11/2014
• Incorporación de tecnologías de
ácidos nucleicos
• Inactivación de patógenos de componentes
sanguíneos por diversos métodos
• Limitaciones
9
24/11/2014
• Tamizaje Microbiológico de las donaciones
10
Tamizaje Microbiológico de las donaciones
24/11/2014
evitar la transmisión de enfermedades transmisibles a los
receptores de sangre y componentes sanguíneos.
24/11/2014
• Propensión a causar infecciones asintomáticas (sub
agudas)
• Período de incubación prolongada en el desarrollo de los
síntomas
• Período prolongado de portador ej.: HBsAg en
hepatitis B
• Un período largo de latencia del agente vía de
incorporación del ácido nucleico en las células 12
infectadas del huésped
Infecciones clínicamente
significativas por
transfusión sanguínea
24/11/2014
Virus: Parásitos: Priones
• Virus Hepatitis • Malaria (Plasmodium • Variante de la
A;B;C;D;E. falciparum, P.vivax, P.
malariae, P. ovale ) Enfermedad de
• Virus Herpes (VEB, • Creutzfelt-Jacob
Enf. Chagas
VCM; V8HH) (Tripanosoma cruzi) (vCJD)
• Retrovirus: VIH 1; VIH 2 • Fiebre de Nantucket Hongos
HTLV I; HTLV II (Babesia microti)
• Parvovirus B19 • Toxoplasmosis • No se ha reportado
(eritrovirus humano) (Toxoplasma gondii) infecciones
• Virus de fiebre del Nilo • Leishmaniasis transmitidas por la
occidental. (L.donovani) sangre.
• Virus Fiebre colorado 13
(garrapata)
• Virus Chikungunya
Infecciones clínicamente significativas por
transfusión sanguínea
Bacterias:
• Endógenas (“Infección”)/Exógena (“Contaminación”)
24/11/2014
• Post Transfusión de Plaquetas:
• Staphylococcus epidermidis (25%)
• Salmonella choleraesuis (13.5%)
• Serratia marcenscens (9.6%)
• Post Transfusión de Eritrocitos:
• Yersinia enterocolitica: 51%
• Pseudomonas fluorescens: 26.5%
• Brucelosis:
• Zoonosis producida por cocobacilos del género Brucella.
• Las especies más comunes son B. abortus, B. melitensis, B. ovis 14
• Sífilis
Brucelosis
• En algunos países, entre ellos Argentina, se considera como un
agente con riesgo de transmisión por vía transfusional, pero
24/11/2014
sólo hay un trabajo en la literatura publicado en 1976 que
menciona esta probabilidad
15
Estrategias de prevenció n
de transmisió n:
24/11/2014
¿Cuáles de los agentes mencionados se
deben analizar en las muestras de nuestros
donantes?
16
Sífili
s
• Uno de los riesgos infecciosos conocidos más antiguos de las transfusiones
sanguíneas.
• Durante los últimos 50 la sífilis post-transfusional se ha vuelto
años
extremadamente infrecuente: la transmisión de sífilis por esta vía es
24/11/2014
excepcional, no se publican casos desde 1969.
• Mayor estandarización y mejoría en el proceso de selección del donante,
• Screening serológico universal de las donaciones para sífilis,
• Transfusión de componentes sanguíneos refrigerados
24/11/2014
Quimioluminiscencia,)
24/11/2014
Período ventana:
La mayoría de las personas infectadas presentan síntomas
rápidamente (días).
• INACTIVACION
No sirve el tratamiento solvente / detergente (en el plasma) al no ser
un virus con envoltura.
24/11/2014
Transmisión primaria vía sanguínea
• Directa madre hijo perinatal es una vía importante - 1er
Año de vida.
• Contacto sexual
• Compartir agujas (usuarios de drogas)
• Esta última, se ha transformado en la principal vía, desde que
se efectúa estudio en la sangre a transfundir. (Descubierto
en 1963, estudio obligatorio desde 1971)
• Período de ventana:
ELISA: 21-59 días 21
NAT: 34 días
Virus Hepatitis C
• Catalogado así en 1989, después de clonar su genoma (Choo et al)
• Es el mas importante agente etiológico en provocar Hepatitis Crónica y Daño
Hepático Crónico.
• La prevalencia mundial es entre 2 y 5%.
• Es un virus RNA recubierto .
• Pertenece a la familia Flaviviridae.
24/11/2014
Vías de Infección :
• Contacto con sangre infectada: piercing, tatuajes, otros.
• Uso de agujas compartidas .
• Transfusión sanguínea, hasta antes del tamizaje obligatorio en donantes.
• Perinatal
• La vía sexual es menos eficiente .
• Período de incubación es de 7 a 8 semanas (2 a 26 semanas)
• Período de ventana
• ELISA: 52-192 días
• NAT: 23 días 22
Virus Hepatitis D
• Es un virus RNA
• Descubierto en 1980
• Infecta el hígado sólo en presencia de VHB.
24/11/2014
• Transmitido por vías similares a VHB.
• Ha disminuido su incidencia en forma paralela a la disminución de la
hepatitis B (luego de la vacunación).
Virus Hepatitis E
• Clasificado como Hepavirus.
• Altamente endémico en India, Egipto y China.
• Transmisión Oro fecal.
• Período de ventana se supone meses.
• Muy rara transmisión sanguínea.
23
Herpes virus
24/11/2014
• En general su primoinfección es asintomática, a excepción de virus varicella-zoster
(VZV).
24/11/2014
• Mackinnon en 1988 demostró la eficacia de transfundir sangre CMV
negativa.
Vías de transmisión:
• Vertical madre e hijo
• Horizontal a través de fluidos humanos: contactos sexuales,
transplantes
y transfusión.
• CMV está presente en los granulocitos y macrófagos. Es más infectante a
través de la fracción de granulocitos.
• La viremia es más alta en pacientes inmunodeficientes.
• La presencia del anticuerpo aumenta con la edad. Es más alta en mujeres. 25
• En el mundo la prevalencia alcanza del 40 al 100%. Las cifras mas altas se
observan en el tercer mundo.
CMV
• Riesgo Transfusional: Medidas para su reducción
• A nivel donante, la encuesta es poco útil. Serviría sólo el tamizaje.
• A nivel transfusional: reducción o depleción de granulocitos.
• Transfusión de Glóbulos rojos conservados mas de 3 días.
24/11/2014
• Existen divergencias entre el uso transfusional de sangre CMV
negativa versus sangre leucodepletada.
• Aparentemente es mas seguro el uso de sangre CMV
negativo
24/11/2014
VIH
Vías de transmisión
• Sangre
• Semen y secreción cervical
• Líquido cefalorraquídeo
• Lágrimas
• Saliva
• Orina 27
• Leche materna
HI
VLa infección por vía transfusional llegó a constituir entre el 2 y 5% de los
infectados en el mundo, hasta antes del tamizaje de este agente.
24/11/2014
antígeno
• Test de 2° generación: Los Ag péptidos recombinantes hicieron a los test
más estables y sensibles
• 3° generación: Utilización del principio de Ag en sándwich
• Detección de p24 en USA, fue incorporado para detectar seroconversión
más precoz. Falló en predecir el número. En 5 años sólo encontró 5 casos
en período de ventana.
• 4° generación: es un combo Ag/Ac. Disminuyó en 7 días el período de
ventana.
• NAT: En tres años esta técnica pesquisó sólo doce casos HIV 1
positivos en 37 millones de transfusiones negativas RNA
anteriores. por los 28
test
Período de
ventana (HIV):
1° 56
generació n: días Prevención:
24/11/2014
2° 33
3° días • Educación de la población
4° 22 • Donantes altruistas y
NA días fidelizados
• Selección de
T 16
donantes
días
• Tratamiento del
11
•Uso adecuado de los componentesplasma
sanguíneos.
días
•La transfusión debe ser alternativa al tratamiento médico
medicamentoso. 29
HTLV-I
II• Leucemia/linfoma, Células T en el adulto
• Paraparesia espástica tropical (TSP), también conocida como HTLV I
asociado a mielopatía (HAM)
24/11/2014
• Es un virus endémico en Japón, en el Caribe, en Sudamérica y África,
con prevalencia sobre el 1%.
• HTLV II fue identificado en 1982 en un paciente portador de
leucemia
de células velludas . Se homologa en 65% al HTLV I
• Se encuentra en poblaciones indígenas americanas, en usuarios de
drogas ilícitas y en algunos pacientes con mielopatías.
• Transmisión sanguínea: Principalmente por componentes
celulares.
• La filtración reduce la “carga viral” entre 2 y 6 logaritmos.
• Es más eficiente en la reducción de la transmisión sanguínea el 30
tamizaje que la leucodepleción.
HTLV-I
II• Período de ventana
• De 1 a tres meses
24/11/2014
• En receptores de sangre la seroconversión se ha estimado en 51días
(36 a 72 días)
• Factores de riesgo:
• Vivir en zonas endémicas
• Relación madre e hijo incluyendo amamantamiento
• El riesgo sexual es bajo y lento
31
WNV
• Es un Flavivirus que naturalmente infecta pájaros, ocasionalmente infecta otros
huéspedes como caballos y humanos.
• Descubierto en Uganda en 1937.
24/11/2014
• Endémico en África, el Medio Oriente y Europa.
• Clínica:
• 80% asintomática y 20% síndrome febril y meningoencefalitis.
• Involucrado en transfusión, recién en 1999 (USA).
• Estudio RNA viral, NAT (Canadá) mostró 0.03% reactividad y 0.015% confirmado.
• Prevención: Inactivación del patógeno
Selección de donantes:
A CRITERIO : aceptar
• A todos los donantes después de 6 meses de su regreso de un área endémica.
Este plazo se puede reducir a 4 semanas si no hubo síntomas ni evidencias de
infección.
• Si regresó hace menos de 4 semanas, no tuvo síntomas ni evidencias de
infección y un test validado de NAT para WNV es negativo.
32
Priones
• Las enfermedades por Priones son trastornos raros, de tipo neurológico,
evolutivamente fatales y aún sin tratamiento.
24/11/2014
• Son enfermedades transmisibles, pero no infecciosas en el sentido tradicional
de su definición.
• Transmisión:
• Intervenciones del SNC, córnea y duramadre.
• Vía hipófisis por el uso de Hormona de Crecimiento. Brown et al 1992.
• CJD Familiar
• Se ha detectado transmisión en animales por inoculación/transfusión.
• En el hombre hay 5 casos positivos reportados de un total de 37 posibles, de
transmisión esporádica.
• Hay 3 casos de transfusión sanguínea.
• No hay antecedentes de transmisión de PrPc en trabajadores veterinarios.
33
Priones
Prevención en transfusión:
• Diferir en forma definitiva a familiares de pacientes
24/11/2014
portadores de CJD y la iatrogénica.
• Selección de donantes:
• Diferir en forma definitiva a los donantes que hayan permanecido
en UK en forma acumulada entre 3-6 meses entre los años 1980 y
1996.
• Donantes que hayan recibido componentes sanguíneos en UK
desde 1980. Esto significó una pérdida de entre 5-10% de
donantes.
• En UK no se permite el uso de Plasma ni Crioprecipitados
de sus donantes.
34
• Trypanosoma cruzi:
24/11/2014
• La enfermedad se ha encontrado desde el límite entre EEUU y México hasta
Argentina y Chile.
• No se ha desarrollado vacunas, tampoco quimioprofilaxis.
• Transmisión natural del T. cruzi en humanos: picadura de la vinchuca
(deposiciones contaminadas con los trypamastigotos metacíclicos).
• El riesgo de la transmisión de T. cruzi por transfusión en países donde el
parásito no es endémico, es raro, se da en pacientes inmunocomprometidos
transfundidos con sangre de donantes que desconocían ser portadores.
• Curso clínico de esta enfermedad en estos pacientes es fulminante
24/11/2014
de selección de donantes con riesgo de malaria, utilizando tests in vitro de
screening y un período definido para diferir a los donantes.
24/11/2014
• Mecanismos de transmisión:
• Carnivorismo (quistes)
• Transfusional (trofozoítos)
• Transplacentario (trofozoítos)
Contaminación fecal con heces de gato (ooquistes)
• Parasitemia: duración desconocida (días-meses).
• La transfusión de sangre infectada ocasionaría la transmisión por esta vía, a
través de leucocitos infectados.
• Sobrevida del parásito en ST > 50 días, a 4ºC.
• Debido a que la gran mayoría de los adultos tienen Ac-anti toxoplasma y
los casos severos ocurren sólo en inmunocomprometidos, no se considera
la toxoplasmosis como un problema en la práctica transfusional.
37
ESTUDIOS MICROBIOLÓGICOS
MANDATORIOS EN CHILE
24/11/2014
1. Sífilis
2. Hepatitis B
3. HIV
4. Chagas
5. Hepatitis C
6. HTLV
38
Cronología de la implementación de técnicas de
tamizaje en donantes de sangre en Chile
• Sífilis: 1983
• Hepatitis B: 1983
24/11/2014
• HIV: 14/7/1987
• Chagas: 1º-6ª Región 1995
• Hepatitis C : 1º/1/1996
• Chagas en todo el país 30/5/2008
• HTLV 9/12/2008 HTL
V
Chagas Chile
2008 2008
24/11/2014
Técnicas
automatizadas
• Elisa
• HIV(Ag/Ac) (6/7 técnicas)
Logística
• HBV 2. Altamente
sensibles: uso
• HVC(Ag/Ac) en BS Costo • Quimioluminiscencia
• Chagas 3. No operador
• HTLV dependientes
40
Flujo de procesamiento y estudio
de la sangre donada
24/11/2014
41
Flujos de procesamiento
para la liberació n de las
unidades
24/11/2014
42
Sífilis Pruebas treponémicas (EIA)/No
treponémicas
Elisa
Quimio
24/11/2014
Hepatitis B HBsAg Elisa HBsAg
(sándwich)
NAT
Quimio
24/11/2014
anticuerpos y también los llamados “combo” detectan al
mismo tiempo antígenos y anticuerpos.
• Ventana serológica
• Técnicas: cualitativas
44
Causas de transmisión de infecciones virales
Error en los
8% 5% 5%
procedimientos
Variantes del
1% 5% 1%
genoma
viral
Período de ventana
Periodo de 90% 75% 90%
90% 75% 90%
ventana serológica
Busch MP et al. Transfusion
2000
PERIODOS DE VENTANA TÉ CNICAS
SEROLÓ GICAS
• VIH: (ELISA 4° GENERACION) 14-21 DIAS.
• HBV: ELISA 3-5 SEMANAS
• HCV: ELISA COMBO (AG-AC) 52-192 días (6,4 mes)
• HTLV: ELISA HTLV I-II 36-72 DIAS.
• T.CRUZI: ELISA 35-45 DIAS
• SÍFILIS: 3-6 SEM
Calidad en el laboratorio
de serología
• Control para Asegurar la Calidad
24/11/2014
• ISO, Buenas Prácticas,
Acreditaciones
• Control de Calidad Interno
• Sueros Control Interno (baja
reactividad)
• Evaluaciones de kits
• Antes del Uso
• Lote a lote
• Control de Calidad Externo
• Participación en Programas de
47
Evaluación Externa
Control de Calidad
Interno
• Controles de tercera opinión en serología
• Viroclear: material de control analítico no valorado de resultado
24/11/2014
no reactivo.
• Virotrol I: material de control analítico no valorado para HIV-I,
HTLV, HVC Y HVB de resultado reactivo.
• Virotrol HIV – 2: material de control analítico no valorado para
HIV – 2 de resultado reactivo.
• Uso de sueros de baja reactividad
• Controles Positivos
• Deben presentar índice DO/CO > 1
• Rango recomendado: 2,0 – 4,5
48
Aná lisis del QC interno
en serología
• Comportamiento del ratio o “Índice de Positividad (IP)”
• Comportamiento del cut off
24/11/2014
• Multireglas de Westgard (con utilidad en Serologia)
3,2
Resultados obtenidos
3,02
R4S 2,93
2,84
2,75
• Errores sistemáticos 2,66
2,57
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28
22S 41S
29 30
DIAS
X X+1DE X+2DE X+3DE
24/11/2014
HIV
51
Hepatitis
B
24/11/2014
52
Hepatitis
C
24/11/2014
53
24/11/2014
Y después de los
resultados…consejería y derivación
a especialidad
54
NOTIFICACIÓN DE DONANTES ATENDIDOS POR CMST
E
.
C
L
I
D
S
R
I
NOTIFICACIÓN DE DONANTES ATENDIDOS POR CMST
D
I
C
I
D
I
C
A
24/11/2014
Gracias por su atención
57