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Inmunofluorescencia

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INMUNOFLURESCENCIA

Nicoll Gutiérrez
Valentina Alarcón
Deicy Mora
¿Qué es?

Es una técnica de inmunomarcación que hace uso de anticuerpos unidos químicamente a una
sustancia fluorescente para determinar la presencia de una determinada molécula.
Fluorocromo: Una molécula o parte de una molécula que emite fluorescencia después de ser
excitada con luz a ciertas longitudes de onda.
¿Para qué sirve?

Visualizar partes de la célula: membrana plasmática, núcleo, vacuolas, retículo endoplásmico,


etc.
Estudiar procesos celulares: división celular, muerte celular, cambios en el potencial de
membrana, endocitosis y exocitosis.
Localizar moléculas específicas: proteínas, lípidos.
Diferenciar partículas muy pequeñas que por contraste.
Estudiar la interacción entre moléculas en un tejido vivo
¿Cuándo se necesita y en que consiste?

Se utiliza para el diagnóstico  de enfermedades de tipo autoinmunitario , es decir, aquellas en


las que las propias defensas pierden el control y atacan algún órgano de nuestro organismo
Consiste en la obtención de una biopsia o frotis de piel o mucosas (por ejemplo, de la boca, la
conjuntiva del ojo. Una vez realizada podremos observar si un paciente posee anticuerpos.
Pasos
Fijación: En esta se preserva la localización, composición y estructura del material biológico.
Permeabilización: Produce poros en las membranas celulares lo que permite el ingreso de los
anticuerpos a la célula y detectar estructuras internas.
Bloqueo: Impedir interacciones inespecíficas de los anticuerpos con el material biológico a analizar
y reducir la marcación inespecífica.
inmunodetección: Los anticuerpos tienen la capacidad de reconocer específicamente y unirse con
alta afinidad a otras moléculas(antígenos).
Tipos de muestras
Células en cultivo.
Frotis de células.
Cortes en criostato de tejidos fijados y no fijados.
Cortes de tejidos.
Tipos de inmunofluorescencia.
1. Directa: Esta técnica usa un anticuerpo primeria marcado con un fluorocromo que reacciona
con el antígeno dentro de la muestra, comprende un solo anticuerpo marcado.
2. Indirecta: Esta técnica tiene un mayor sensibilidad que el método directo, ya que el
fluorocromo se conjuga con un anticuerpo secundario dirigido contra el anticuerpo primario.
Resultados.
Ventajas y desventajas.
DESVENTAJAS
VENTAJAS.
Técnica rápida. Posee baja sensibilidad.
Reproducible. Es necesario un microscopio de fluorescencia
para su observación.
Permite marcación doble e incluso triple.
Alto costo.
Es necesario fotografiar las muestras para
documentar resultados.
Aplicación clínica.
Identificación y diagnostico de patologías de la piel.
Identificación y diagnostico de patologías renales.

Depósito lineal en un paciente con penfigoide


ampolloso. Puede observarse una línea más
fluorescente que atraviesa toda la biopsia.
Bibliografía.
http://www.iib.unsam.edu.ar/archivos/docencia/licenciatura/biotecnologia/2017/BioCel/15046
34347.pdf
http://www.iib.unsam.edu.ar/archivos/docencia/licenciatura/biotecnologia/2017/BioCel/15041
24326.pdf
https://es.slideshare.net/jaabarzua/inmunofluorescencia-15465898
https://www.reumatologiaclinica.org/es-tecnicas-inmunologicas-que-apoyan-el-articulo-S16992
58X09002411
https://es.slideshare.net/lamparkie/inmunofluorescencia

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