Practica de Lowry
Practica de Lowry
Practica de Lowry
Semestre: 15/2
Seccin: 3
OBJETIVOS:
a) Elaborar una curva de calibracin para la cuantificacin de protenas
empleando un mtodo fotomtrico.
b) Determinar si hay diferencia estadsticamente significativa en la
precisin y exactitud entre los mtodos de Bradford y Lowry.
c) Conocer el efecto de sustancias no proteicas, en el desarrollo de color.
Cantidad de
protena
A595
Serie a
Serie b
(g)
1
25
0.023
0.029
50
0.080
0.043
75
0.119
0.110
100
0.142
0.130
125
0.186
0.188
0.9815
0.001586
-0.0139
A595
Cantidad de
protena
(x); (g)
0.132
92.0239
0.110
78.1525
0.124
86.9798
0.121
85.0882
0.107
76.2610
0.104
74.3648
0.108
76.8915
0.108
76.8915
0.108
76.8915
10
0.109
77.5215
= XX
S2
%C.V.
5.8051
33.6991
7.2466
75.95-84.25
= 80.10
%C.V. =
t: t tablas (2.262)
ts/ n
S
XX
(2.262 x 5.80)/ 10
x 100
%C.V. =
= 80.10 4.12
5.80
80.10
x 100 = 7.24 %
sustancia
A595
Cantidad de
protena
Tipo de
interferenci
a generada
Tris 1M, pH
7.0
0.156
107.15
Positiva
Glicerol al
1% (v/v)
0.147
101.48
Positiva
Detergente
comercial al
1%
0.161
110.30
Positiva
Dodecil
sulfato de
sodio al 1%
0.134
93.28
Positiva
cido
tricloroacti
co al 5%
0.129
90.13
Positiva
Mtodo de Bradford
Mtodo de absorcin
en uv (280nm)
ventajas
desventaja
s
En un
mtodo
general
Es menos
sensible
Su A
mxima
es a
540nm
Tiene que
ser en medio
alcalino
Es ms
rpido
No
detecta
N2 de
fuentes
no
proteicas
ventajas
Es ms
rpido
desventaj
as
ventajas
desventa
jas
Reacciona
con los
iones
amonio
Es rpido
Los cidos
nucleicos
tambin
absorben
a 280nm
Es ms
sensible
detecta
1g/ml
El color
varia con
diferentes
tipos de
protena
Es ms
sensible
La
solucin
debe ser
lo ms
clara
posible
Necesita
ms
cantidad de
muestra
Reacciona
con los 20
aminocido
s
Los
detergente
s
interfieren
No existe
interferenci
as con los
Buffer
Se
requiere
un
sistema
puro
Presenta
opalescencia
por
presencia de
carbohidrato
s
Su A
mxima es
a 595nm
El color
puede
unirse a las
celdas de
cuarzo
No
destruye
las
protenas
Es solo
para
aminocid
os
aromatico
s
La reaccin
se puede
completar
en 2 min.
Preguntas:
a) Cumple su curva la Ley de Bouguer y Beer?
R: Si
b) Entre qu lmites de cantidad de protena?
R: En las concentraciones ms bajas y ms altas de la protena
determinada (25-125g).
DISCUSIN:
En la prctica me toco realizar la curva de calibracin en la cual se obtuvo un
coeficiente de correlacin de .9815 el cual es aceptable, pero al visualizar la
grafica se observan los puntos alejados de la linealidad y esto puede deberse a
que el da de la realizacin de la practica me encontraba con gripa y esto
BIBLIOGRAFA:
ANEXO
Prueba de la t
tcalculada = D x
n
SD
XX1
SD XX2 tcalculD
prueba estn
ada ( XX1(Bradfo
dar
XX2)
rd)
(Lowr
y)
tcalcul
t
confianza
1.89
diferencia
entre los
79.9896
Fcalculada=
S2 Lowry
209.280
10
8.52
= 1.89
89.5006
78.152 11.348
5 1
83.4298
86.979 -3.55
significativa en la exactitud
8
83.227
4
90.1077
85.088 -1.8608
2
76.261 6.9664
la F
S menor
88.0841
S2
Bradford
86.8699
248.769
80.799
86.8689
existen
precisin
= 5.1 x
83.2274
Prueba de
92.023 ada
9 12.034
3
76.891 11.192
F
5 6
76.891 9.9784
5
DX
5.10
38
8.518
1
1.89