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Informe Final DE Investigación
Informe Final DE Investigación
Informe Final DE Investigación
DE
INVESTIGACIÓN.
Contenido.
1. INTRODUCCION.
1.1 Presentación. 5
1.2 Advertencia de confidencialidad y propiedad del informe. 6
1.3 Objetivos generales del estudio. 6
1.4 Justificación. 6
1.5 Definiciones. 7
1.5.1 Dosis Efectiva Media (De50). 7
1.5.1.1 Términos similares. Diferenciación. 7
1.5.1.2 El modelo biológico. 7
2. MATERIALES Y METODOS.
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3. RESULTADOS Y HALLAZGOS.
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4. CONCLUSIONES. 26
5. BIBLIOGRAFÍA. 28
_________________________________________________
INDICE DE TABLAS.
__________________________________________________
INDICE DE FIGURAS.
_____________________________________________________
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1.
Introducción.
1.1 Presentación.
Los accidentes ofídicos causados por serpientes del género Micrurus constituyen
en nuestro país un riesgo potencial para la población rural y urbana de las zonas
de clima cálido y medio; si bien no son demasiado numerosos desde el punto de
vista estadístico, los accidentes causados por corales tienen la característica de
que revisten especial gravedad y en muchas ocasiones resultan mortales, razón
por la cual se hace indispensable poder contar con un antídoto adecuado, eficaz y
específicamente elaborado para neutralizar el veneno de las especies de
serpientes de coral presentes en nuestro territorio; ese antiveneno para poder
tratar este tipo de accidentes con seguridad y efectividad existe en Colombia
desde hace muchos años, es el Suero Antiofídico Antielapídico Anticoral
elaborado por Laboratorios Probiol Ltda.
Desde el año 1988, Laboratorios Probiol Ltda. ha estado fabricando el único suero
anticoral disponible en Colombia y hecho específicamente para Colombia, fruto de
una paciente, constante y profunda investigación iniciada por el doctor Cesar
Gómez Villegas (q.e.p.d.), fundador del Laboratorio, y continuada cuidadosamente
por sus sucesores.
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Micrurus surinamnesis s.
Micrurus spixii obscurus.
Micrurus mipartitus m.
Micrurus dumerilii t.
Micrurus psyches medemi.
b. Además, determinar la Dosis Efectiva Media (De50) del mismo antiveneno frente
a la mezcla homogénea de todos estos venenos, la que se denominará aquí como
Dosis Efectiva Media (De50) de veneno de Micrurus spp.
1.4 Justificación.
El presente estudio se adelantó con el fin de establecer, sustentar, verificar o
confirmar la condición de dicho producto (Suero Antiofídico Antielapídico Anticoral
de Laboratorios Probiol Ltda.) como antiveneno POLIVALENTE, es decir, que
posee una adecuada capacidad de neutralización contra todos y cada uno de los
venenos de las especies de serpientes antes mencionadas, así como su mezcla.
Todas estas serpientes altamente venenosas forman parte de la herpetofauna
colombiana y de gran parte de Sudamérica; pertenecen a la familia Elapidae
(elápidos), subfamilia Micrurinae (micrurinos) y son comúnmente llamadas “corales
verdaderas”, “corales” o “serpientes de coral”, son conocidas además con los
nombres vulgares de “rabo de ají”, coral “mataganado”, y “coral matagatos”, entre
muchos otros.
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1.5 Definiciónes.
Consideramos muy importante para efectos de la comprensión del presente
informe definir algunos términos de especial relevancia dentro del mismo; estos
son:
Existen varios métodos para determinar la De50 y la elección del mismo depende
del tipo de tóxico a usar y del tipo de antídoto que se quiere probar.
La abreviatura DL50 (dosis letal media) indica la dosis mínima de un tóxico capaz
de causar la muerte del 50% de la población examinada, en un periodo de tiempo
determinado, que usualmente es de 24 horas.
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Así, por ejemplo, en el caso del insecticida DDT, la DL50 es de 87 mg/kg de peso
corporal cuando se administra por vía oral en ratas, pero alcanza 150 mg/kg de
peso corporal en perros. La DL50 correspondiente a la Dioxina es de 0,02 mg/kg de
peso corporal en ratas y de 0,001 mg/kg de peso corporal en perros; es decir, la
rata tolera una dosis veinte veces superior a la que toleran los perros.
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1.5.3.1 Definición.
Se denomina accidente micrúrico al envenenamiento causado por la mordedura
de una serpiente del género Micrurus, que forma parte de la amplia familia de los
elápidos (Elapidae) a la que, como se mencionó ya, pertenecen también las
famosas cobras, mambas, kraits y las serpientes venosas australianas; por esta
razón algunas veces se lo denomina también “accidente elapídico” que es un
término mucho más general.
En toda América las serpientes del género Micrurus (que significa “cola corta”) son
conocidas con el nombre de corales o serpientes coral. En algunas regiones de
Colombia, aparte de ser llamadas corales o coralillos, son denominadas también
con los nombres de “coral mata ganado”, “cabeza de chocho” y “rabo de ají”.
1.5.3.2 Incidencia.
Se ha calculado que tan solo entre el 2 y 3% de todos los accidentes ofídicos en
Colombia son ocasionados por corales. Este tipo de accidentes no suelen ser
comunes pero generalmente sí son graves; la mayoría de los casos se presentan
en niños, que se sienten atraídos por la belleza y los colores de estos animales, o
en adultos que imprudentemente juegan con ellos, confiados en su relativa
mansedumbre.
M. alleni. M. mipartitus.
M. ancoralis. M. multiscutatus.
M. clarki. M. narduccii.
M. dissoleucus. M. nigrocinctus.
M. dumerilii. M. psyches.
M. filiformis. M. putumayensis.
M. hemprichii. M. sangilensis.
M. isozonus. M. spixii.
M. karlschmidti. M. spurrelli.
M. langsdorffi. M. surinamensis.
M. lemniscatus. M. stewarti.
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La cabeza suele ser pequeña, con el cuello no diferenciado y los ojos muy
pequeños y puntiformes. Habitan en zonas de clima medio y cálido, algunas
especies viven en estrecha cercanía con los seres humanos, como las que
prefieren los jardines o cultivos como el café y cacao. Muchas especies llevan vida
semisubterránea y prefieren permanecen ocultas bajo la hojarasca, piedras o
troncos. Se reproducen por medio de huevos y la gran mayoría se alimentan de
manera exclusiva de otras serpientes, es decir, que son ofidiófagas.
Fig. 1
Fig.2
Como todos los miembros de la familia Elapidae, poseen una dentición de tipo
proteroglifo, con dos colmillos delanteros, pequeños y fijos, que en las especies
más grandes no sobrepasan los 3 mm. En términos generales, son serpientes de
carácter manso, pero cuando muerden lo hacen con mucha fuerza y con
frecuencia se quedan firmemente aferradas a la piel por un largo periodo de
tiempo.
Fig. 3
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Fig. 4
Fig. 5
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Fig. 6
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Total 12 6 venenos 76
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2.
Materiales y métodos.
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2.3.4 Jeringas.
Se utilizaron jeringas desechables de plástico de diferentes marcas disponibles en
el comercio (Rimco, Nipro, BD Plastipak, Inject) con capacidades de 10, 5, 3 y 1
ml; se verificó cuidadosamente la vigencia del producto y de las licencias legales.
2.3.5.1 Especie.
Como modelo biológico para la realización de las pruebas se utilizaron ratones
blancos (suizos) de la especie Mus musculus (llamados comúnmente ratones de
laboratorio).
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una de las pruebas); todos ellos procedentes del Bioterio del Centro de
Investigación y Asesoría Ofidiológica “Ophidia”; Dicho bioterio o criadero técnico
de animales para experimentación, se encuentra debidamente autorizado, avalado
y vigilado por las autoridades ambientales y sanitarias del Estado.
Los ratones que resultaron muertos durante las pruebas (306 ejemplares) fueron
debidamente empacados en bolsas rojas para desechos biológicos o biomédicos,
marcadas con etiquetas reglamentarias de riesgo biológico, selladas y
conservadas en refrigerador hasta su recolección por parte del personal
especializado en desechos tóxicos y biológicos de la empresa municipal de aseo,
entidad que se encarga de la incineración técnica y adecuada de todo tipo de
desechos tóxicos, biomédicos y hospitalarios.
a. Que los experimentos que se quieren llevar a cabo con animales vivos se
realizarán con la autorización previa de la autoridad competente y que tales
pruebas son imprescindibles para el estudio y avance de la ciencia.
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d. Que los experimentos no puedan ser sustituidos por cultivo de tejidos, medios y
modelos computarizados de simulación, dibujos, películas, fotografías, videos u
otros procedimientos.
Así mismo, la realización de las pruebas estuvo vigilada por delegados de dicho
Comité y como consta en el acta correspondiente, se verificó que no se utilizaran
más animales de los estrictamente necesarios y de antemano programados para
los experimentos, que no se les causara dolor innecesario ni se incurriera en
crueldad o maltrato hacia los mismos.
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Con el fin de verificar el tiempo requerido para la dilución del producto, se calculó
un tiempo para la aplicación del diluente estéril de 15 segundos, y se permitió
enseguida un periodo de hidratación en reposo que varió entre 1 y 14 minutos;
concluido este periodo de tiempo se agitó suavemente el frasco por un periodo de
10 segundos y se realizó una observación. Los resultados u observaciones se
relacionan en la tabla 2.
2.4.2.1 Comentario.
La presentación final (comercial) del producto Suero Antiofídico Antielapídico
Anticoral, es la de Polvo liofilizado para ser reconstituido con 10 ml de diluente
estéril. La prueba de preparación del suero anteriormente descrita demuestra que
un tiempo de hidratación en reposo entre 5 y 10 minutos facilita mucho la dilución
del producto, el cual no requiere ser agitado fuertemente para quedar listo a ser
utilizado.
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preparó un volumen de 4,5 ml, de manera que se pudiera inocular 0,75 ml a cada
uno de los seis ratones de cada nivel y no quedaran sobrantes.
2.4.7 Inoculación.
Una vez preparada e incubada la fórmula para cada experimento, se procedió a la
inoculación de 0,75 ml de dicha formula a seis ratones por vía intraperitoneal y en
cada experimento o nivel se hizo de la misma manera; como se dijo antes, de
cada formula se preparó un volumen de 4,5 ml, de manera que se inocularan los
seis ratones de cada nivel y no quedaran sobrantes. La inoculación se efectuó con
jeringas tipo insulina de 1 ml, jeringas de aguja fija no removible; se utilizó una
jeringa por cada ratón y tras la inoculación fueron debidamente desechadas.
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3.
Resultados y hallazgos.
Los resultados y hallazgos de cada una de las pruebas se consignaron en las
respectivas tablas o formatos de Protocolo que se relacionan a continuación.
Información general.
Método utilizado:
De50 según Método “Costa Rica”, validado por el Instituto de Investigaciones
biológicas “Clodomiro Picado” de San José de Costa Rica”. Aprobado OMS
(WHO).
25
3.2 Dosis Efectiva Media (De50) del Suero Antiofídico Anticoral de Laboratorios Probiol Ltda.
frente al veneno de la especie: Micrurus mipartitus.
PRUEBA GRUESA
Experimento Veneno sol. Solución Suero Relación Ug de Ratones inoculado Ratones vivos % De50
madre salina normal Anticoral veneno/1 mL Suero intraperitoneal 24 horas
1 0,3 ml 1,2 ml 3 ml 100 6 0,75 ml 4 de 6 66,6 *
2 0,3 ml 2,7 ml 1,5 ml 200 6 0,75 ml 2 de 6 33,3 *
3 0,3 ml 3,2 ml 1 ml 300 6 0,75 ml 1 de 6 16,6
4 0,3 ml 3,45 ml 0,75 ml 400 6 0,75 ml 1 de 6 16,6
5 0,3 ml 3,6 ml 0,60 ml 500 6 0,75 ml 0 de 6 0
6 0,3 ml 4,2 ml 0 Control 6 0,75 ml 0 de 6 0
Resultado: la De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus mipartitus se encuentra entre 100 y 200 Ug de veneno neutralizado
por cada ml de suero; como el rango es muy grande, se hace necesario realizar una prueba fina en este nivel.
PRUEBA FINA.
Experimento Veneno sol. Solución Suero Relación Ug de Ratones inoculado Ratones vivos % De50
madre salina normal Anticoral veneno/1 mL Suero intraperitoneal 24 horas
7 0,3 ml 1,2 ml 3 ml 100 6 0,75 ml 4 de 6 66,6
8 0,3 ml 1,8 ml 2,4 ml 125 6 0,75 ml 3 de 6 50 *
9 0,3 ml 2,2 ml 2 ml 150 6 0,75 ml 3 de 6 50 *
10 0,3 ml 2,5 ml 1,7 175 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
11 0,3 ml 2,7 ml 1,5 ml 200 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
12 0,3 ml 2,9 ml 1,3 225 6 0,75 ml 1 de 6 16,6
Resultado: la De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus mipartitus se encuentra entre 125 y 150 Ug de veneno neutralizado
por cada ml de suero; esto significa que cada vial de 10 ml está en capacidad de neutralizar entre 1,25 y 1,5 mg de veneno (promedio 1,37).
25A
3.3 Dosis Efectiva Media (De50) del Suero Antiofídico Anticoral de Laboratorios Probiol Ltda.
frente al veneno de la especie: Micrurus dumerilii.
PRUEBA GRUESA
Experimento Veneno sol. Solución Suero Relación Ug de Ratones inoculado Ratones vivos % De50
madre salina normal Anticoral veneno/1 mL Suero intraperitoneal 24 horas
1 0,3 ml 1,2 ml 3 ml 100 6 0,75 ml 4 de 6 66,6 *
2 0,3 ml 2,7 ml 1,5 ml 200 6 0,75 ml 2 de 6 33,3 *
3 0,3 ml 3,2 ml 1 ml 300 6 0,75 ml 1 de 6 16,6
4 0,3 ml 3,45 ml 0,75 ml 400 6 0,75 ml 1 de 6 16,6
5 0,3 ml 3,6 ml 0,60 ml 500 6 0,75 ml 0 de 6 0
6 0,3 ml 4,2 ml 0 Control 6 0,75 ml 0 de 6 0
Resultado: La De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus dumerilii se encuentra entre los 100 y 200 Ug de veneno
neutralizados por cada ml de suero; con el fin de establecer una cifra más precisa se realiza la siguiente prueba fina:
PRUEBA FINA.
Experimento Veneno sol. Solución Suero Relación Ug de Ratones inoculado Ratones vivos % De50
madre salina normal Anticoral veneno/1 mL Suero intraperitoneal 24 horas
7 0,3 ml 1,2 ml 3 ml 100 6 0,75 ml 4 de 6 66,6
8 0,3 ml 1,8 ml 2,4 ml 125 6 0,75 ml 3 de 6 50 *
9 0,3 ml 2,2 ml 2 ml 150 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
10 0,3 ml 2,5 ml 1,7 175 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
11 0,3 ml 2,7 ml 1,5 ml 200 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
12 0,3 ml 2,9 ml 1,3 225 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
Resultado: La De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus dumerilii se sitúa en 125 Ug de veneno neutralizados por cada
ml de suero; esto significa que cada vial de 10 ml está en capacidad de neutralizar mínimo 1,25 mg de veneno.
25B
3.4 Dosis Efectiva Media (De50) del Suero Antiofídico Anticoral de Laboratorios Probiol Ltda.
frente al veneno de la especie: Micrurus surinamensis.
PRUEBA GRUESA
Experimento Veneno sol. Solución Suero Relación Ug de Ratones inoculado Ratones vivos % De50
madre salina normal Anticoral veneno/1 mL Suero intraperitoneal 24 horas
1 0,3 ml 1,2 ml 3 ml 100 6 0,75 ml 3 de 6 50 *
2 0,3 ml 2,7 ml 1,5 ml 200 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
3 0,3 ml 3,2 ml 1 ml 300 6 0,75 ml 1 de 6 16,6
4 0,3 ml 3,45 ml 0,75 ml 400 6 0,75 ml 0 de 6 0
5 0,3 ml 3,6 ml 0,60 ml 500 6 0,75 ml 0 de 6 0
6 0,3 ml 4,2 ml 0 Control 6 0,75 ml 0 de 6 0
Resultado: la De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus surinamensis se encuentra alrededor de los 100 Ug de veneno
neutralizados por cada ml de suero; con el fin de establecer una cifra más precisa se realiza la siguiente prueba fina:
PRUEBA FINA.
Experimento Veneno sol. Solución Suero Relación Ug de Ratones inoculado Ratones vivos % De50
madre salina normal Anticoral veneno/1 mL Suero intraperitoneal 24 horas
7 0,3 ml 1,2 ml 3 ml 100 6 0,75 ml 3 de 6 50 *
8 0,3 ml 1,8 ml 2,4 ml 125 6 0,75 ml 3 de 6 50 *
9 0,3 ml 2,2 ml 2 ml 150 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
10 0,3 ml 2,5 ml 1,7 175 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
11 0,3 ml 2,7 ml 1,5 ml 200 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
12 0,3 ml 2,9 ml 1,3 225 6 0,75 ml 1 de 6 16,6
Resultado: la De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus surinamensis se encuentra entre 100 y 125 Ug de veneno neutra-
lizado por cada ml de suero; esto significa que cada vial de 10 ml está en capacidad de neutralizar entre 1 y 1,25 mg de veneno (promedio 1,12).
25C
3.5 Dosis Efectiva Media (De50) del Suero Antiofídico Anticoral de Laboratorios Probiol Ltda.
frente al veneno de la especie: Micrurus spixii obscurus.
PRUEBA GRUESA
Experimento Veneno sol. Solución Suero Relación Ug de Ratones inoculado Ratones vivos % De50
madre salina normal Anticoral veneno/1 mL Suero intraperitoneal 24 horas
1 0,3 ml 1,2 ml 3 ml 100 6 0,75 ml 5 de 6 83,3
2 0,3 ml 2,7 ml 1,5 ml 200 6 0,75 ml 4 de 6 66,6 *
3 0,3 ml 3,2 ml 1 ml 300 6 0,75 ml 2 de 6 33,3 *
4 0,3 ml 3,45 ml 0,75 ml 400 6 0,75 ml 1 de 6 16,6
5 0,3 ml 3,6 ml 0,60 ml 500 6 0,75 ml 0 de 6 0
6 0,3 ml 4,2 ml 0 Control 6 0,75 ml 0 de 6 0
Resultado: La De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus spixii se encuentra entre los 200 y 300 Ug de veneno
neutralizados por cada ml de suero; con el fin de establecer una cifra más precisa se realiza la siguiente prueba fina:
PRUEBA FINA.
Experimento Veneno sol. Solución Suero Relación Ug de Ratones inoculado Ratones vivos % De50
madre salina normal Anticoral veneno/1 mL Suero intraperitoneal 24 horas
7 0,3 ml 2,7 ml 1,5 ml 200 6 0,75 ml 4 de 6 66,6
8 0,3 ml 2,9 ml 1,3 ml 225 6 0,75 ml 3 de 6 50 *
9 0,3 ml 3 ml 1,2 ml 250 6 0,75 ml 3 de 6 50 *
10 0,3 ml 3,1 ml 1,1 ml 275 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
11 0,3 ml 3,2 ml 1 ml 300 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
12 0,3 ml 3,27 ml 0,93 ml 325 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
Resultado: La De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus spixii se sitúa entre 225 y 250 Ug de veneno neutralizados por
cada ml de suero; esto significa que cada vial de 10 ml está en capacidad de neutralizar de 2,25 a 2,5 mg de veneno (promedio 2,37).
25D
3.6 Dosis Efectiva Media (De50) del Suero Antiofídico Anticoral de Laboratorios Probiol Ltda.
frente al veneno de la especie: Micrurus spyches medemi.
PRUEBA GRUESA
Experimento Veneno sol. Solución Suero Relación Ug de Ratones inoculado Ratones vivos % De50
madre salina normal Anticoral veneno/1 mL Suero intraperitoneal 24 horas
1 0,3 ml 1,2 ml 3 ml 100 6 0,75 ml 4 de 6 66,6 *
2 0,3 ml 2,7 ml 1,5 ml 200 6 0,75 ml 2 de 6 33,3 *
3 0,3 ml 3,2 ml 1 ml 300 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
4 0,3 ml 3,45 ml 0,75 ml 400 6 0,75 ml 1 de 6 16,6
5 0,3 ml 3,6 ml 0,60 ml 500 6 0,75 ml 0 de 6 0
6 0,3 ml 4,2 ml 0 Control 6 0,75 ml 0 de 6 0
Resultado: La De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus spyches m. se encuentra entre los 100 y 200 Ug de veneno
neutralizados por cada ml de suero; con el fin de establecer una cifra más precisa se realiza la siguiente prueba fina:
PRUEBA FINA.
Experimento Veneno sol. Solución Suero Relación Ug de Ratones inoculado Ratones vivos % De50
madre salina normal Anticoral veneno/1 mL Suero intraperitoneal 24 horas
7 0,3 ml 1,2 ml 3 ml 100 6 0,75 ml 4 de 6 66,6
8 0,3 ml 1,8 ml 2,4 ml 125 6 0,75 ml 3 de 6 50 *
9 0,3 ml 2,2 ml 2 ml 150 6 0,75 ml 3 de 6 50 *
10 0,3 ml 2,5 ml 1,7 175 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
11 0,3 ml 2,7 ml 1,5 200 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
12 0,3 ml 2,9 ml 1,3 225 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
Resultado: La De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus spyches m. se sitúa entre 125 y 150 Ug de veneno neutralizados por
cada ml de suero; esto significa que cada vial de 10 ml está en capacidad de neutralizar de 1,25 a 1,5 mg de veneno (promedio 1,37).
25E
3.7 Dosis Efectiva Media (De50) del Suero Antiofídico Anticoral de Laboratorios Probiol Ltda.
frente al veneno de la especie: Micrurus sp. (Mezcla de todos los anteriores)
Resultado: La De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus sp. se encuentra entre los 100 y 200 Ug de veneno
neutralizados por cada ml de suero; con el fin de establecer una cifra más precisa se realiza la siguiente prueba fina:
Resultado: La De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus sp se sitúa entre 110 y 130 Ug de veneno neutralizados por
cada ml de suero; esto significa que cada vial de 10 ml está en capacidad de neutralizar de 1,1 a 1,3 mg de veneno (promedio 1,2). Pag. 25F
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Centro de Investigación y Asesoría Ofidiológica “Ophidia”. Informe final de Investigación.
4.
Conclusiones.
Observando las planillas del capítulo 3 de resultados y hallazgos, las conclusiones
de este estudio resultan evidentes; ha quedado claramente demostrado que:
26
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_____________________________________
Héctor Charry Restrepo. C.C. 79’387.066 Btá.
Biólogo – Herpetólogo.
Director científico del Centro de Investigación
Y Asesoría Ofidiológica “Ophidia”.
27
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5.
Bibliografía.
En la realización de las diversas etapas que tuvo la elaboración del presente
trabajo de investigación se consultaron numerosas fuentes bibliográficas,
electrónicas y entrevistas personales con expertos y autoridades en el tema. Las
principales fuentes bibliográficas se relacionan a continuación:
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