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Prueba de La Optoquina

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A ) Streptococcus pneumoniae

Los neumococos son diplococos gram positivos que pueden presentar cpsula o estar desprovistos de ella. Su forma ms caracterstica es lanceolada aunque tambin pueden formar cadenas cortas o estar aislados. En medios lquidos, la mayor parte de las cepas capsuladas presentan un crecimiento difuso, mientras que las no capsuladas muestran un crecimiento granular En agar sangre crecen presentando a hemlisis. Las cpsulas se observan cuando las colonias son tratadas con el anticuerpo especfico de tipo, el cual, al combinarse con el polisacrido capsular, lo vuelven refrctil (reaccin de Quellung). Los neumococos son grmenes exigentes que generalmente requieren un medio enriquecido y una atmsfera de 5 % de CO2 para crecer. Se han diferenciado ms de 75 tipos serolgicos de neumococos, por la existencia de polisacridos inmunolgicamente diferentes en sus cpsulas. Diagnstico de laboratorio: I Prueba de la optoquina: se usa el disco de optoquina para diferenciar entre S. pneumoniae (sensibles) y otras especies de estreptococos a hemolticos (resistentes). La sensibilidad a la optoquina es una medida de la fragilidad de la membrana celular bacteriana. La optoquina, que es el clorhidrato de etilhidrocuprena, se utiliza en una dilucin acuosa de 1 / 4000 para impregnar los discos, quedando en stos 5 g de la droga. Mtodo: se toma una suspensin de colonias puras en caldo Mueller Hinton o tioglicolato y con un hisopo se estra una placa de agar sangre de carnero al 5 %. Sobre la estra se coloca el disco de optoquina. Se incuba con atmsfera de CO2 al 5 % ( jarra con vela ). durante 24 hs. a 35 C. Interpretacin: Sensible, cuando hay inhibicin alrededor del disco. Se considera como punto de corte 16 mm. (discos de 10 mm) o 14 mm (discos de 6 mm). Resistente, cuando el crecimiento no es inhibido alrededor del disco. Los casos de halos intermedios deben resolverse por acumulacin de pruebas a favor o en contra. II Prueba de la solubilidad en bilis: Se utiliza esta prueba para diferenciar entre S. pneumoniae, soluble, en bilis y otras especies de estreptococos alfa hemolticos, insolubles en bilis. Esta prueba controla la capacidad de las clulas bacterianas de producir lisis en presencia de sales biliares, en un tiempo y a una temperatura especfica. Las sales biliares utilizadas son el desoxicolato de sodio o el taurocolato de sodio. Las sales biliares hacen descender la tensin superficial en la interfase medio-membrana, provocan una descomposicin de la membrana celular y aceleran el proceso autoltico natural del neumococo activando las enzimas por combinacin de las sales biliares con el neumococo. Mtodo: Se prepara 1 ml de una suspensin densa en solucin fisiolgica de un cultivo puro. Se divide en dos partes iguales en tubos separados. A uno de ellos se le agregan 0,5 ml de una solucin de desoxicolato de sodio al 10 % y al otro 0,5 ml de solucin fisiolgica. Se incuba hasta 3 hs y se observa cada 15 minutos. Interpretacin: Positiva cuando se observa un aclaramiento del tubo con desoxicolato respecto al de solucin fisiolgica. Negativo, cuando no hay diferencia de turbidez entre ambos tubos.

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