Introducción

Los ácidos nucleicos son las

biomoléculas portadoras de la
información genética. Tienen una
estructura polimérica, lineal, cuyos
monómeros son los nucleótidos. El
grado de polimerización puede llegar a
ser altísimo, con moléculas constituidas
por centenares de millones de
nucleótidos en una sola estructura
covalente. De la misma manera que las
proteínas son polímeros lineales
aperiódicos de aminoácidos, los ácidos
nucleicos lo son de nucleótidos. La
aperiodicidad de la secuencia de
nucleótidos implica la existencia de
información. De hecho, sabemos que
los ácidos nucleicos constituyen el
depósito de información de todas las
secuencias de aminoácidos de todas
las proteínas de la célula. Existe una
correlación entre ambas secuencias, lo
que se expresa diciendo que ácidos
nucleicos y proteínas son colineares;
la descripción de esta correlación es lo
que llamamos Código Genético,
establecido de forma que a una
secuencia de tres nucleótidos en un
ácido nucleico corresponde un
aminoácido en una proteína.
La función de los ácidos nucleicos no
se reduce, por otra parte, a contener la
información necesaria para la síntesis
de las proteínas celulares. Hay
secuencias regulatorias que
controlan la expresión de las diferentes
unidades genéticas, por sí mismas o a
su vez controladas por otras moléculas
(hormonas, factores de crecimiento,
señales químicas en general); hay
asimismo ácidos nucleicos implicados
en la transmisión y procesado de la
información genética; hay también
ácidos nucleicos con funciones
catalíticas (ribosimas).
La estructura química de los ácidos
nucleicos es tan uniforme como la de
las proteínas, o incluso más. Para tener
 una idea aproximada, veamos en
primer lugar un polinucleótido (no se
representan los átomos de hidrógeno).
Podemos apreciar los distintos residuos
(nucleótidos) de la cadena mediante el
siguiente mando:
Vamos ahora a una visión más cercana
de este estructura:    El espinazo de la
misma está constituída por ortofosfatos
esterificados cada uno
simultáneamente a dos pentosas:    se
trata del enlace fosfodiéster,
característico de los ácidos nucleicos
(de la misma manera que el enlace
peptídico lo es de las proteínas). Por lo
tanto, el continuo covalente de un ácido
nucleico es el esqueleto pentosa-
fosfato-pentosa-fosfato-...
Unidas a cada pentosa a través de un
enlace glicosídico aparecen las bases
nitrogenadas:    que como puede
apreciarse, no forman parte del
continuo covalente del polinucleótido.
Sin embargo, su papel es fundamental;
 son las portadoras de la información
genética.
El monómero de los ácidos nucleicos
es, por lo tanto, el nucleótido:   
formado por un fosfato:    esterificado a
una pentosa:    que a su vez está unida
por un enlace beta-glicosídico a una
base nitrogenada

OBTENCIÓN DEL DNA DE BAZO

Cuando se desea purificar una
sustancia se deben seleccionar las
células o tejidos que se van a utilizar
como materia prima. En el caso del
DNA esta selección es en especial
importante porque el contenido de DNA
es pequeño en la mayor parte de las
células. La celula ideal será aquella
que tenga una relación
núcleo/citoplasma alta, como en los
linfocitos y células del tumor
ascítico de Ehrlich. Sin embargo, no
es fácil obtener este tipo de células por
lo que frecuentemente se usan órganos
típicamente linfoides como el timo y el
bazo.
El primer paso en la extracción del
DNA es la homogeneización del
tejido. Este paso puede degradar en
parte la molécula del DNA si no se
toman las precauciones necesarias, la
solución reguladora es de citrato
0.01M y NaCl 0.14M, a pH de 7.2 a
7.4; la fuerza iónica de esta solución
hace insoluble a la
desoxirribONUCLEOPROTEINA. Si se
centrifuga este homogeneizado, en el
residuo quedaran los restos celulares y
las desoxirribonucleoproteinas
insolubles. En el sobrenadante se
encuentran compuestos solubles como
la mayor parte de los ácidos
ribonucleicos.
Al homogeneizar el tejido se liberan las
enzimas de los lisosomas, entre ellas la
DNAasa, la cual hidroliza el DNA. Se
sabe que el Mg es indispensable para
 la actividad de esta enzima; si en la
solución existe citrato, este se une al
Mg e impide la acción de la DNAasa.
Otra forma de evitar la acción hidrolitíca
de la enzima es trabajar a temperaturas
bajas (0°C a 2°C).
El siguiente paso en la purificación está
basado en que las
desoxirribonucleoproteinas y el DNA
son solubles en soluciones salinas
concentradas, mientras que la mayor
parte de las proteínas precipitan en
estas condiciones. Si el residuo se
suspende en solución de NaCl 2.6M y
se centrifuga, el residuo insoluble
estará formado fundamentalmente por
proteínas, mientras que el DNA
permanecerá en solución. Este DNA se
puede precipitar selectivamente por la
adición selectiva de 2 volúmenes de
alcohol etílico al 95% formándose un
precipitado blanco fibroso, el cual se
puede recoger por rotación de un
 agitador de vidrio con pequeños
salientes.
EXPERIMENTO 1
La muestra de bazo se coloca en un
mortero, previamente enfriado y se
secciona lo más finamente posible con
una tijera. Se colocan 450 ml de la
solución reguladora de citrato 0.01 M –
NaCl 0.14M, a pH de 7.2 fría, en una
licuadora cuyo vaso haya sido
previamente enfriado.
Se hace funcionar la licuadora a baja
velocidad y se van añadiendo los
trozos de bazo de todos los equipos.
Esperando a que se homogeneicé
completamente el primero antes de
añadir el segundo y así sucesivamente.
Una vez terminada la adición, continúe
homogeneizando por 30 – 60 segundos
más.
Utilizando la centrifuga automática
refrigerada, se coloca el
homogeneizado en tubos de centrifuga
apropiados teniendo cuidado de tarar
perfectamente los tubos opuestos.
¡PRECAUCION! (CONSULTE A SU
MAESTRO)
Se centrifuga por 15 minutos a 5000
rpm. El sobrenadante se desecha.
El residuo insoluble se lava en el
mismo tubo en 15ml de citrato 0.01M
NaCl 0.14M, pH 7.2 agitando hasta
volver a re suspender con ayuda de
una varilla de vidrio, si es necesario.
Se vuelve a centrifugar a 5000 rpm por
5 minutos y si sobrenadante se
desecha.
La solución salina sobrenadante se
coloca en un vaso de precipitados y se
añaden lentamente dos volúmenes de
alcohol etílico al 95%, procurando que
la fase alcohólica quede en la parte
superior.
Se deberá observar la formación de un
precipitado blanco, denso, en la
interfase. Utilizando un agitador con
pequeños saliente, agite esta mezcla
lentamente procurando enrollar sobre
el agitador las fibras del DNA
precipitadas.
1) Explique por qué se utilizo bazo
como materia prima y no otro
órgano cualquiera
Es un órgano que contiene células
que contienen una relación
núcleo/citoplasma alta, como en los
linfocitos y células del tumor
ascítico de Ehrlich.
2) ¿Seria conveniente utilizar
solución reguladora de fosfatos para
la extracción del DNA? ¿Por qué?
Si, por que el fosfato hace que la
solución se mantenga en un estado
de equilibrio.
 3) ¿Por qué es conveniente
trabajar durante toda la extracción a
baja temperatura?
Para evitar la acción hidrolitíca de la
enzima

Esta imagen nos muestra el DNA

precipitado en el alcohol etílico 95%

Con el agitador enrollamos las

fibras del DNA
 INSTITUTO POLITECNICO
NACIONAL
ESCUELA SUPERIOR DE MEDICINA
INTEGRANTES:
ARETIA PEREZ TREIZY RUBI
BASURTO HERNANDEZ JUAN
CARLOS
GOMEZ MOSQUEDA KARLA
PATRICIA
TORRES PERALTA ALEJANDRA
GRUPO 2CM7
EQUIPO: 1
LABORATORIO DE BIOQUIMICA I
PRACTICA 11
ACIDOS NUCLEICOS