PRACTICA #08 y 09 CITOLOGIA

PRACTICA Nº 08
TINCION Y RECONOCIMIENTO DE LOS RETICULOCITOS

OBJETIVO.- El estudiante realiza la tinción de azul de cresil brillante para el
reconocimiento de los reticulocitos, con eficiencia y responsabilidad.
RECUENTO DE RETICULOCITOS
Los reticulocitos son glóbulos rojos inmaduros formados por ARN y
protoporfirina en el citoplasma. Fundamento Los reticulocitos contienen una
fina red de ARN y protoporfirina que se puede teñir con el azul de cresil
brillante. Este colorante en combinación con una misma cantidad de sangre
anticoagulada se mezcla y con la ayuda de la temperatura (baño maría) se
produce la coloración de estos eritrocitos jóvenes visualizándose en los frotices
sanguíneos por microscopía.
Materiales:
♦Láminas portaobjetos.
♦Tubos de ensayos de 12 x 75 mm.
♦Embudo.
♦Filtro de papel.
♦Pipetas Pasteur con chupones.
♦Contador manual (no imprescindible).
♦Solución saturada de azul de cresil brillante (filtrada).
Procedimiento:
♦En el tubo de ensayo colocar dos gotas de sangre total con anticoagulante.
♦Inmediatamente adicionar con la ayuda de una pipeta Pasteur la misma
cantidad de colorante.
♦Mezclar la solución.
♦Se coloca luego en baño maría por espacio de 10 a 15 minutos.
♦Se realizan frotices sanguíneos.
♦Se lee con objetivo de 100x.
Resultados:
Examine por lo menos 100 eritrocitos con el objetivo de inmersión. Cuente
cuidadosamente:
♦Cantidad total de glóbulos rojos.
♦Número total de reticulocitos que haya entre ellos. El recuento se ha venido
haciendo clásicamente de forma manual mediante la observación en el
microscopio óptico. El resultado se da en porcentaje sobre cada 100 hematíes.
Es más útil calcular el número de reticulocitos por litro, mediante la fórmula:
Reticulocitos/L=% reticulocitos x número hematíes/L 100
Observación:
Valores de referencia:
Adultos: 0,5 - 1,5%
Al nacer 2,5 - 6,0%
Causas de aumento El número de reticulocitos aumenta en todas las
circunstancias en las que existe un incremento de la eritropoyesis, tales como
en la hemólisis, como respuesta a sangrados o tras el inicio de un tratamiento
antianémico que ha resultado eficaz.
Causas de disminución Como la producción de reticulocitos es necesaria para
compensar las pérdidas fisiológicas de glóbulos rojos maduros, una
disminución de su número es la expresión de un estado arregenerativo o
hiporregenerativo de la serie roja. Esta circunstancia es típica de anemias
aplásicas, anemias carenciales y enfermedades inflamatorias y neoplásicas.
Se puede informar el número de reticulocitos o el porcentaje de reticulocitos:
Reticulocitos (%) = [número de reticulocitos / número de glóbulos rojos] X

100
También se puede solicitar un recuento absoluto de reticulocitos (ARC):
ARC = reticulocitos (%) x recuento de glóbulos rojos (x 1.012 / L) / 100
Índice de reticulocitos = recuento de reticulocitos (%) X (hematocrito

medido / hematocrito normal)
Pueden también realizarse otros cálculos como el índice de producción de

reticulocitos (IPR) y la fracción de reticulocitos inmaduros (FRI).
PRACTICA Nº 09
TINCION WRIGTH PARA IDENTIFICACION DE GLOBULOS ROJOS
Objetivo.- El estudiante realiza varias láminas periféricas y la tiñe con la
coloración Wrigth, con eficiencia y responsabilidad.
TINCIÓN WRIGTH FUNDAMENTO:
Esta coloración se caracteriza por la presencia de metanol en su composición,
por lo que nos ahorraremos el paso previo de fijación antes de teñir la muestra.
El colorante está compuesto de azul de metileno (que tiñe de color azul las
partes ácidas de las células) y eosina (que tiñe las partes alcalinas), disueltos
en metanol (que permite la fijación de las células).
 Realizamos un frotis sanguíneo que dejamos secar.
 Colocamos la extensión en el cristalizador, sobre el puente de

tinción y añadimos el colorante de Wright con ayuda de una
pipeta Pasteur.
 Dejamos actuar un minuto, escurrimos y enjuagamos con

solución tampón.
 Lo colocamos en posición vertical hasta que escurra y se seque.
 En un tubo de ensayo preparamos 0,5ml de Wright, con 0,5ml de
solución tampón.
 Mezclamos y aplicamos la dilución sobre la muestra, que
dejaremos actuar sobre 3-5 minutos.
 Escurrimos el exceso de colorante y enjuagamos con agua

destilada.
 Lavamos de nuevo con solución tampón.
 Dejamos escurrir y secar otra vez en posición vertical.
 Una vez seca la muestra, le colocamos un cubre encima y aceite

de inmersión sobre este.
OBSERVACIÓN AL MICROSCOPIO:
 Calificar a los eritrocitos.
 Contar los leucocitos hasta 100
 Contar las plaquetas 10 campos y multiplicar por 1000.
 Interpretación
 Conclusión
 Recomendación.
 Anexos.
 Bibliografía.
 Dejar todo limpio.
 Desinfectar y limpiar los materiales, instrumentos y equipos.

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PRACTICA Nº 08

TINCION Y RECONOCIMIENTO DE LOS RETICULOCITOS

Reticulocitos (%) = [número de reticulocitos / número de glóbulos rojos] X

También se puede solicitar un recuento absoluto de reticulocitos (ARC):

ARC = reticulocitos (%) x recuento de glóbulos rojos (x 1.012 / L) / 100

Índice de reticulocitos = recuento de reticulocitos (%) X (hematocrito

Pueden también realizarse otros cálculos como el índice de producción de

 Realizamos un frotis sanguíneo que dejamos secar.

 Colocamos la extensión en el cristalizador, sobre el puente de

 Dejamos actuar un minuto, escurrimos y enjuagamos con

 Escurrimos el exceso de colorante y enjuagamos con agua

 Dejamos escurrir y secar otra vez en posición vertical.

 Una vez seca la muestra, le colocamos un cubre encima y aceite

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