ESTREPTOCOCOS

Los estreptococos son bacterias esféricas gran

positivas que de manera característica forman pares
o cadenas (estrepto) durante su multiplicación.
Forman parte de la microflora normal de seres
humanos, están relacionados a infecciones. Elaboran
sustancias y enzimas extracelulares.

SON CATALASA NEGATIVOS.

Los criterios de clasificación de los estreptococos son:

1) Morfología de las colonias y reacciones hemolíticas en agar sangre

(Fenotípicas).
2) Especificidad serológica de sustancia específica de grupo de pared
celular y otros antígenos de la pared celular o capsulares. Reacción
inmunitaria que provocan (Antigenicidad). Los estreptococos B-
hemolíticos contienen un carbohidrato llamado “Carbohidrato C”. (Este
fue uno de los criterios que empleó Rebecca Lancefield para clasificar
a los estreptococos/de acuerdo al tipo de carb. C).
3) SIGNOS Y SÍNTOMAS QUE PROVOCA LA INFECCIÓN
(CLÍNICA), PROVOCADA POR ESTREPTOCOCOS.
4) Reacciones bioquímicas y resistencia a factores físicos, químicos y
antimicrobianos.
5) Características ecológicas (hábitat).

Una de las formas más importantes de clasificación bacteriana es la Clínica.

Según el tipo de infección, el conocimiento de la bacteria causante.

“Epidemiológicamente hablando, está establecido qué bacterias son

causantes de infección en tejidos específicos (cuáles en piel, en vías
urinarias, en garganta, en oído, etc.)”
“Cuando una muestra llega al laboratorio, por ejemplo, por neumonía, y se
le realiza un gram y se determina que hay bacterias esféricas en forma de
cocos que se alinean en cadena y forman un halo verdoso, se analizan cuáles
son las bacterias causantes de neumonía y en base a esto se realizan las
pruebas pertinentes. De esta forma se está realizando la mayor ayuda
analítica al procedimiento. Así se determina el medio de cultivo a escoger, y
se marca la continuidad del análisis.”
Especies del Género Streptococcus:

- pyogenes
- agalactiae
- pneumoniae
- grupo viridans
- grupo D

Características:

a. Cocos gran positivos, no son totalmente esféricos sino que tienen una
forma lanceolada, u ovalada, se encuentran siempre en parejas
(diplococos), los cuales en colonias forman cadenas (estreptococos).
b. Son anaerobios facultativos pero crecen mejor en microaerofilia.
c. Son catalasa negativos (no tienen enzima catalasa que transforma el
peróxido de hidrogeno en O2 y H2O)
d. Son inmóviles (motilidad negativa). Sus extremos son puntiformes.
e. Los estreptococos SÓLO CRECEN EN PRESENCIA DE SANGRE
(esto los diferencia de los enterococos, los cuales pueden crecer en
sangre o sin sangre).

CATALASA NEGATIVOS.

INMOVILES. (Motilidad negativa)

EXIGENTES PARA CRECER (anaerobiosis - microaerofilia)

SÓLO CRECEN EN PRESENCIA DE SANGRE.

De acuerdo a la presencia del carbohidrato C, se clasifican en:

BETA HEMOLÍTICOS: Degradan totalmente los eritrocitos con

aclaramiento o halo completamente transparente alrededor de la colonia de
crecimiento bacteriano.
ALFA HEMOLITICOS: Lisan de forma incompleta a los eritrocitos, y
reducen la hemoglobina, formando un pigmento verdoso alrededor de las
colonias.
GAMMA HEMOLÍTICOS: No lisan eritrocitos, o degradan hemoglobina.
No hemolisan.

Streptococcus Beta Hemolíticos:

- pyogenes
- agalactiae
- grupo D
 - Género Enterococos

De acuerdo al Tipo de Carbohidrato C, presente en la pared celular de estos

estreptococos β hemoliticos, se les incluyo a cada uno en un Grupo.
Grupo A: Compuesto de ramnosa N-acetilglucosamina. Streptococcus pyogenes.

Grupo B: Polisacarido de ramnosa-glucosamina. Streptococcus agalactiae.

Grupo C: Es la ramnosa-N-acetilgalactosamina.

Grupo D: Acido teicóico de glicerol, que contiene D-alanina y glucosa.

Grupo F: glucopiranosil-N-acetilgalactosamina.

¿Quiénes tienen carbohidrato C?

- Los estreptococos Beta hemolíticos.

Los estreptococos alfa hemolíticos no tiene Carbohidrato C.

Streptococcus Alfa Hemolíticos:

- pneumoniae
- viridans
- grupo D
- Género Enterococos

Streptococcus Gamma Hemolíticos:

- Streptococcus Grupo D
- Género Enterococos.

Los ENTEROCOCOS entran dentro del grupo de los alfa, beta y gamma
hemolíticos. Anteriormente eran clasificados como una especie de
Estreptococos. HOY SE SABE QUE SON UN GÉNERO APARTE

BETA HEMOLÍTICOS:

GRUPO A:

Streptococcus pyogenes:
Beta hemolítico, posee carbohidrato C del grupo A.

Ejemplo: Se toma una muestra de una celulitis, se realiza el gram y se

observan cocos gram positivos en parejas, en forma de cadena.

En algunos casos, puede confundirse con el género Staphylococcus debido a

que en algunos casos (introduciéndolos en un caldo de cultivo, para
posteriormente realizar un gram) estos, puede apreciarse aisladamente o en
cadenas, y no en racimos de uvas, como es su característica. (Los
estafilococos se aprecian en racimos a partir de una muestra, por ejemplo, de
pus espeso).

Características:

- Encapsulado sólo en infecciones (como mecanismo de defensa ante la

fagocitosis.
- Beta hemolíticos.
- Desarrollo optimo en anaerobiosis (Se corta el agar para introducir el
inoculo sobre las líneas de siembra, y que se desarrolle en la parte o
interna del agar – quedan incluidos - y crecerá en anaerobiosis.)
- Crece mejor en microerofilia.
- Los estreptococos del grupo A, mueren al calentar a 60 grados
centígrados. Es una forma de diferenciar a estreptococos beta
hemolíticos. Se toma un poco de colonias sembradas 24 horas incluidas
en el agar (anaerobiosis) previas en agar que contenga sangre, se
inocula en un caldo soya y se lleva a calentamiento a 60 grados
centígrados por 30 minutos. Luego, se toma un poco de inoculo del
caldo de cultivo, y se siembra en un agar sangre. Si no hay crecimiento
bacteriano, la cepa corresponde con el comportamiento de
Estreptococos. Esto permite diferenciarlos de igual forma, de
Enterococos y Estreptococos Grupo D.
- Sensibles a la bacitracina: No se realiza antibiograma con ella. Se
siembra una colonia en agar sangre, se le coloca el disco de bacitracina,
y si este, al trascurrir de 24 h se muestra sensible (sin crecimiento
bacteriano alrededor del disco), es definitivamente un estreptococo de
grupo A, beta hemolítico o Streptococcus pyogenes.
- Sensible a la penicilina.

Si se determina que el causante de la infección es Streptococcus

pyogenes, mediante sensibilidad a la bacitracina, no es necesario realizar
antibiograma, debido a que esta cepa bacteriana jamás ha adquirido
mecanismos de resistencia contra la penicilina, lo que lo hace el
tratamiento de elección para infecciones causadas por este especie.

No se usa la bacitracina como tratamiento de elección, sino la

penicilina.

Si el paciente es alérgico a la penicilina, se realiza un antibiograma

para determinar qué otros fármacos pueden sugerirse para el tratamiento
infeccioso (Generalmente cefalosporinas).
 Tipo de infecciones que puede producir S. pyogenes:

Vías de entrada:

- Vía nasal.
- Piel.

Causa infecciones a nivel de garganta.

Es el único causante bacteriano de Faringitis.

La Faringitis es casi siempre resultado de un proceso viral. ¿Cómo se

diferencia clínicamente un proceso viral de un proceso bacteriano? El ciclo
febril es constante y en picos. Al administrar tratamiento supresor de
pirógenos, estos provocan el descenso de temperatura, el cual vuelve a niveles
muy elevados prontamente al disminuir el efecto del tratamiento antipirético.
En casos de virus, la fiebre es controlada y suele desaparecer ante el uso de
antipiréticos.
- Meningitis.
- Otitis.
- Sinusitis.
- Neumonía
- Endocarditis.
- Celulitis: Afección profunda de las capas de la piel, del tejido celular
subcutáneo específicamente. No tiene bordes definidos y es plano. En
la zona se presenta dolor y enrojecimiento, acompañado de
tumefacción y calor en la zona.
- Impétigo o pioderma (el cual puede producirlo también Staphylococcus
aureus). Vesículas superficiales que se rompen y de zonas erosionadas
cuya superficie desollada está cubierta de pus y posteriormente se
encostra. Se disemina por continuidad y es muy contagiosa, sobre todo
durante climas húmedos o calientes. Ocurre una infección más
generalizada en la piel eccematosa o herida en quemaduras, y puede
avanzar hasta celulitis. (S. aureus puede producir una infección que es
idéntica desde el punto de vista clínico, y a veces están presentes tanto
S. pyogenes, como S. aureus). ES MÁS FRECUENTE EN NIÑOS. ES
DE AUTOINOCULACIÓN POR LESIONES O RASPONES. En el
campo es conocido como Brasa.
- Erisipela: Inflamación en piel y tejido subcutáneo. Acompañado de
fiebre, edema, eritema, y tendencia a invasión a tejidos vecinos.
- Fascitis necrotizante (Gangrena estreptocócica) Es una infección de los
 tejidos subcutáneos y la fascia. Hay necrosis considerable y de
diseminación muy rápida hacia tenidos subcutáneos.

- Glomerulonefritis y fiebre reumática: Resultado de una infección por

S. pyogenes sin tratamiento antibiótico.

DESPUÉS DE UNA INFECCIÓN POR S. PYOGENES HAY UN

PERIODO DE LATENCIA DE 1-4 SEMANAS, LUEGO DE LAS
CUALES PUEDE PRESENTARSE GLOMERULONEFRITIS O
FIEBRE REUMÁTICA (si la enfermedad no es tratada con penicilina).

La nefritis usualmente va precedida de infecciones de la piel, mientras

que la fiebre reumática va precedida de una infección del sistema respiratorio.

Glomerulonefritis aguda: Se presenta en ocasiones, de una a cuatro semanas

después de una infección cutánea por S pyogenes (pioderma, impétigo). Es
posible que se inicie por complejos de acción antígeno-anticuerpo que se
depositan en la membrana basal glomerular. Los síntomas son: sangre y
proteínas en orina, edema, hipertensión arterial, retención de nitrógeno ureico.
Pocas veces es mortal.

Fiebre reumática: Los signos y síntomas característicos de esta enfermedad

comprenden la fiebre, poliartritis migratoria no purulenta, carditis de todas las
capas de corazón, formación de granulomas perivasculares pequeños o
cuerpos de Aschoff. Esta es la secuela más grave de infección causada por S.
pyogenes. Este tiene antígenos de la membrana celular que tiene reacción
cruzada con el tejido cardiaco humano. Los sueros de pacientes con F.R.
contienen anticuerpos contra estos antígenos (ASTO, para infecciones
respiratorias, y anti-DNAsa y anti-hialuronidasa para infecciones de la piel).

Exotoxinas pirógenas: Elaboradas por S. pyogenes.

Las hay de tres tipos: A, B y C.

Exotoxina pirógena tipo A: causante de choque tóxico estreptocócico y

escarlatina. Sólo un 10% de estas exotoxinas están presentes en cepas de
pyogenes que no presenten esta fiebre.

Fiebre Escarlatina: Está caracterizada por producir un enrojecimiento que va

a permanecer nivel de los pliegues y el tórax, y que va ceder espontáneamente
con una descamación generalizada de la piel y también va a afectarse la
lengua. Al comenzar las manifestaciones en la orofaringe, comienza a
producirse en la lengua una especie de costra blanca que a los pocos días se
cae, dejando a las papilas hipertrofiadas produciendo la “lengua de
frambuesa” característica de la fiebre escarlatina.

TIPOS DE INFECCIÓN:

Faringitis: Enrojecimiento a nivel de las amígdalas, en algunos casos lengua

de frambuesa por toxina pirogénica de tipo A.

- Aumenta el estado de portador. Se trasmite por medio de gotitas de

Plügge.
- Es frecuente en épocas de invierno, y en hacinamiento.

Fascitis necrotizante: Consecuencia de infecciones en garganta o piel por S.

pyogenes.

En 1871 Joseph Jones fue el primero en describir la enfermedad, y en 1918 se

determino que el agente causal es el S. pyogenes, y que el tratamiento es
sencillamente penicilina.
Factores de Virulencia:

- Proteína M: Aparece como proyecciones filiformes de la pared

celular. Cuando está presente esta proteína aumenta la virulencia de
esta bacteria, y si no hay anticuerpos específicos para la proteína M,
puede resistir la fagocitosis de lo polimorfonucleares. Esta proteína se
utiliza para inmunizaciones. El S. pyogenes sin esta proteína no son
virulentos.
- Estreptolisina: El S. pyogenes del Grupo A de los Beta hemolíticos
elaboran hemolisinas que se conocen como estreptolisinas. Hay de dos
tipos:
Estreptolisina O: Proteína que tiene actividad hemolítica en estado reducido
(grupos SH disponibles) pero se inactiva en presencia de oxígeno (Es lábil al
oxigeno). Es responsable de la hemólisis que se aprecia en el agar, cuando
este se corta permitiendo el crecimiento bacteriano en anaerobiosis. Se
evidencia únicamente en ausencia de oxígeno. Es tóxica para leucocitos,
eritrocitos, plaquetas, lisosomas, y tejido cardiaco. PERMITE LA
IDENTIFICACIÓN DE S. pyogenes EN AGAR SANGRE EN AUSENCIA
DE OXÍGENO.

ES ANTIGÉNICA(induce a la formación de anticuerpos): Se combina con los

anticuerpos antiestreptolisina O (ASTO), los cuales aparecen el ser humano
después de una infección causada por cualquier estreptococo que contenga la
estreptolisina O. Este anticuerpo bloquea la hemólisis causada por la Estp. O.

Es resistente al colesterol: Resiste la inactivación del colesterol y ácidos

grasos de la piel.

Estreptolisina S: Tóxica para leucocitos, plaquetas, y órganos subcelulares. Es

la enzima que produce zonas hemolíticas alrededor de las colonias
estreptocócicas que crecen en las superficies de agar sangre. No es antigénica,
por lo que no estimula la formación de anticuerpos. CUANDO LA
INFECCIÓN ESTA EN LA PIEL O TEJIDOS BLANDOS, NO SE
FORMAN ANTICUERPOS ASTO, porque solo está presente la
Estreptolisina S y esta no es antigénica. NO SE DETERMINAN ASTO.

- Hialuronidasa: Degrada el ácido hialurónico. Contribuye a la

diseminación del microorganismo (factor de diseminación). Son
antigénicas y específicas para cada fuente bacteriana.

- Estreptocinasa (equivalente a la fibrinolisina de los Staphylococcus):

Transforma el plasminógeno del plasma en plasmina, una enzima
proteolítica que digiere fibrina y otras proteínas.

- Estreptodornasa: Desoxirribonucleasa estreptocócica, despolimeriza

DNA. Contribuye a la licuefacción de exudados y facilita la
eliminación de pus y tejido necrótico, esto contribuye a que los
fármacos antimicrobianos penetren mejor y las superficies infectadas se
restablezcan con mayor rapidez.

- Exotoxina pirogénica (A, B y C). Antes llamada toxina eritrogénica.

Pirogenicidad, citotoxicidad, y aumento de susceptibilidad a los efectos
letales del la exotoxina (Rahs Escarlatina). NO TODOS LOS
PACIENTES QUE POSEAN INFECCIÓN POR ESTREPTOCOCOS
DESARROLLAN ESCARLATINA. SÓLO EN CASOS QUE LAS
CEPAS POSEE EN GEN QUE CODIFICA ESTA EXOTOXINA.

Todos estos son factores de diseminación.

- Cápsula de Ácido hialurónico. Evita la fagocitosis. Esto permite que el

cuerpo humano no lo reconozca como patógeno. El Ác. Hialurónico
producido por humanos, es similar al de la cápsula del S. pyogenes.
- Pared celular de Peptidoglucano: Contiene el Carbohidrato C. La pared
celular contiene ácido lipoteicóico y proteína F que facilitan la
adherencia a superficies epiteliales de las mucosas por ejemplo, las del
tracto respiratorio.
- Pili: Permite la adherencia.
- Proteína T Y R: Permiten la tipificación bacteriana.
 - Proteína F: Permiten la adherencia de la bacteria y la colonización.

DIAGNÓSTICO DIRECTO:

1) GRAM: Observación de cocos gram positivos en cadena.

2) Siembra en agar sangre: Presencia de B- hemólisis en anaerobiosis
(internas en el agar).
3) Prueba de la Catalasa: NEGATIVA.
4) BACITRACINA: Sensible
Esquema de identificación:

Faringitis:

Tipo de muestra: Exudado Faríngeo

Inoculación: Agar sangre. Incubar 24h en microaerofilia a 35oC.

Luego de 24h de inoculación Tinción de GRAM.

Característicasbacterianas.

Observar características macros. Diagnostico Indirecto:

LCR (Inmunoensayo)
de las colonias (en agar). PCR

(Colonias pequeñas B-hemolíticas). ASTO Técnica de Elisa. Estos anticuerpos

no están presentes en infecciones de la piel,
y no de detectan cuando el paciente tiene
inflamación purulenta de garganta, debido
a que aún la infección no ha penetrado al
torrente sanguíneo, por lo tanto no se han
Se realiza la prueba de la Bacitracina. generado estos anticuerpos.

Incubación 24h luego de inoculación,

y aplicación de discos (39oC anaerobiosis)

Si sensible, es S. pyogenes.

En caso de muestras de exudado faríngeo no se hace Gram de la

muestra de exudado faríngeo. Se realiza el gram a partir de las colonias
que crezcan en agar sangre luego de 24h de inoculadas. ¿Por qué? Se
observarían demasiadas bacterias provenientes de la boca que no son de
nuestra incumbencia. SÓLO EN CASO DE EXUDADO FARÍNGEO.
GRUPO B:

Streptococcus agalactiae
Beta hemolítico. Posee el carbohidrato C del Grupo B.

Producen hemolisis muy pequeña alrededor de las colonias bacterianas. Es

colonizadora normal (microflora) de la región perianal e intestinal.

Son los principales causantes de infecciones puerperales en los periodos neonatal y

perinatal.

Las mujeres se colonizan con el microorganismo en la vagina y el recto, y la

colonización asintomática se encuentra en el 5-35% de las mujeres embarazadas.
La colonización vaginal viene dada por trasferencia ano- vaginal de forma
intermitente.

En caso de mujeres embarazadas, la descarga urinaria no es completa, lo que

permite la colonización de la bacteria en las vías urinarias bajas de las madres.

El recién nacido se coloniza a través del canal del parto, por trasmisión vertical a
partir de la madre colonizada.
La trasmisión se presenta sólo en niños nacidos a través del canal del parto.

FACTORES DE VIRULENCIA:

- Fimbrias y ácido lipoteicóico de la pared celular, median la adherencia

bacteriana a las superficies epiteliales.
- Proteasas y colagenasas: Enzimas que degradan proteínas y colágeno, para
facilitar la diseminación bacteriana.
- Beta Hemolisina: Acción citotóxica.
- Bloqueo de los mecanismos inmunológicos (ácido sialico).
- Inducción al choque séptico (SSST asociado a estreptococos grupo A)
Consiste en fiebre, hipotensión, Rash eritematosos, descamación, y
compromiso multiorgánico. Poseen una exotoxina no descrita que tiene
propiedades asociadas a exotoxinas pirogénicas. Los animales poseen más
susceptibilidad a la misma, aunque fue descrita en humanos
primeramente.
 El recién nacido a través del canal del parto, podría desarrollar:

- Síndrome de dificultad respiratoria.

- Meningitis.
- Sepsis: “S. agalactiae es la principal fuente o agente etiológico de sepsis
neonatal.”
- Otitis.
- Conjuntivitis neonatal.

La infección en el R. N se divide en dos grupos:

a) Enfermedad Precoz: Se presenta la infección entres los primeros 5 días

posteriores al nacimiento (Clínicamente se sospecha, pero se realiza los
cultivos confirmatorios).

Fuente: Madre.

b) Enfermedad Tardía: Se presenta entre 10 días a 3 meses posteriores al

nacimiento.

Fuente: En este caso varía, porque puede ser cualquier individuo en contacto con el
bebé. Madre, padre, personal hospitalario, otros recién nacidos colonizados con
la bacteria y que entraron en contacto con el bebé.

De acuerdo al tiempo en que se desarrolló la infección, se puede

determinar la fuente. También permite determinar si la madre es o no portadora
de la bacteria, para realizar las prevenciones adecuadas e iniciar el tratamiento.
TIPOS DE INFECCIÓN:

- Infecciones urinarias en mujeres, y mujeres embarazadas.

- Infecciones en piel y mucosas en R.N.
- Infecciones respiratorias en el R.N.
- Infecciones sistémicas del R.N.

CARACTERÍSTICAS:

A) Cocos Gram positivos de cadena larga. Beta hemolíticos (Frotis)

B) CAMP positiva
C) Bacitracina resistente.
 IDENTIFICACIÓN: Si se sospecha de Streptococcus agalactiae.

- Prueba de CAMP: Se siembra la muestra en placa de Agar sangre, al cabo

de 24h se desarrollaron colonias Beta hemolíticas (en anaerobiosis). Se
toma una porción de las colonias Beta hemolíticas que se desarrollaron, y
se siembran en otro agar sangre (junto a otras muestras de pacientes en
cuadrantes). En el centro se coloca una asada de una cepa de
Staphylococcus que se tiene almacenada en la nevera para esta prueba, la
cual es productora de una enzima llamada Beta lisina. Luego de que se
realiza esto, se procede a guardarlo en la estufa durante 24h más a 35oC.

A las 24h, en la muestra (entre las sembradas en cuadrantes de varios pacientes)

hacia la cual se forme una cabeza de flecha (se aprecia también la B-hemólisis),
se determina que es CAMP positiva, y que hay presencia de Streptococcus
agalactiae, como causante del proceso infeccioso.

IMPORTANTE: En ocasiones, las infecciones neonatales vienen dadas por Streptococcus

pyogenes, cuando el parto se da en malas condiciones, o atendidas por personal, que
posiblemente sea portador de S. pyogenes en garganta, o tenga faringitis. ¿Cómo se descarta o
confirma que la infección neonatal viene dada por cuál bacteria? NO se diferencia a través
de frotis o agar, debido a que ambos son estreptococos Beta hemolíticos de características
macro y microscópicas similares.
- Adicionalmente a la prueba de CAMP y la utilización del agar sangre, se
hace la prueba de la BACITRACINA. El S. pyogenes es sensible a esta,
sin embargo el S. agalactiae no lo es. Si la prueba de Bacitracina resulta
sensible, estamos en presencia de S. pyogenes, y no de S. agalactiae.
IMPORTANTÍSIMO: ¿Por qué se utilizan estos medios de cultivo (
 AGAR Mc Conckey: Es el medio de cultivo
R.N. desarrolló meningitis temprana) se debe d
selectivo más comúnmente usado para inhibir Enterobacterias
el crecimiento de organismos Gram positivos.
Las sales biliares y el cristal violeta son los
inhibidores activos. Permite el desarrollo de
TODAS las especies de Enterobacterias.
Inhibe el desarrollo de Gram positivos.

 EMB de Levine: Medio de cultivo selectivo:

Sus inhibidores activos (contra los Gram
positivos) son la Eosina Y el azul de metileno.
Tiene altas concentraciones de Lactosa. Es
ideal para la diferenciación de
E. coli.

 CALDO Tioglicolato: Permite el crecimiento

de microorganismos aerobios y anaerobios tales
facultativos y estrictos. Las sustancias comoE. coli, yestos
reductoras como tioglicolato de sodio, el medios permiten diferenciales
sulfito de sodio y cisteína disminuyen el
potencial de oxido reducción y proporcionan el crecimiento
una anaerobiosis suficiente y debido a los selectivo o asilamiento de
grupos -SH- de estos compuestos, se estas cepas en particular. Si crecen en el medio
neutralizan los efectos bacteriostáticos de los
como flora normal).
derivados mercuriales, arsenicales y de otros
metales pesados que pudieran estar presentes
en la muestra en estudio. El bajo contenido de
agar le otorga la propiedad de ser un medio
fluido y retarda la dispersión de CO2 y O2.
Debido a todas estas características
desarrollan microorganismos aerobios,
anaerobios facultativos y estrictos.
 ESQUEMA DE IDENTIFICACIÓN.

Muestra. LCR

(Paciente que desarrolló Meningitis temprana)

Inoculación en Agar sangre, o agar chocolate (Gc), Agar EMB de

Levine, Caldo Thioglycolato. (Permite el crecimiento de distintas cepas
bacterianas para orientarnos en el análisis)

Incubación durante 24h en microaerofilia A 35oC

Se observan las Características Se observan las Características de

las colonias (Agar) las bacterias (Frotis-GRAM).

(B – hemolisis)

S. agalactiae

Pruebas:

- Bacitracina,
- CAMP (incubación 24h 35oC)
Anaerobiosis.

Si CAMP está positiva y Bacitracina resistente: S. agalactiae

Si CAMP está negativa y Bacitracina sensible: S. pyogenes.

Si negativa para ambas, otras especies como Enterococos, Grupo D, Viridans.

“Una misma bacteria puede causar varios tipos de infección, y varias
bacterias pueden causar el mismo tipo de infección.”
 ALFA HEMOLÍTICOS:

Streptococcus pneumoniae:
No se clasifican en grupos porque NO POSEEN CARBOHIDRATO C.

Producen una hemolisis Alfa, es decir, no lisan totalmente a los eritrocitos, ni

degradan completamente la hemoglobina, produciendo un halo verdoso
alrededor de las colonias en las placas de agar sangre.

Se desarrolla mejor en Microaerofilia, en ambientes de 5 – 10% de CO2.

Son de forma lanceolada, u ovalada, no son completamente esféricos, y se

presentan en forma alargada. Comúnmente llamados neumococos.

Se forman en parejas (Diplococos) en placas de agar sangre. Son Gram positivos.

Habitan como flora normal de la mucosa nasal y faringe, de manera

preferente en la nasofaringe posterior.

Poseen una capsula que permite la clasificación y tipificación antigénica

de los misma con antisueros específicos.

Alrededor de cada colonia se observa una zona de aclaramiento. Esa zona

corresponde a la Cápsula. Es decir, la capsula de S. pneumoniae se puede
observar al microscopio óptico común. Este es su principal factor de virulencia.
Hay más de 90 serotipos de este polisacárido.

El material capsular permite que eludan la fagocitosis. La vacuna

antineumocócica disponible contiene polisacáridos capsulares de cada uno de los
23 serotipos asociados con más frecuencia a esta enfermedad.
La vacuna antineumocócica se realiza a partir de antisueros con anticuerpos
generados contra los diferentes serotipos de capsulas de S. pneumoniae.
Además, provee protección importante, sin embargo, esta protección se ve
reducida en personas con enfermedades o cuadros clínicos de base (linfomas,
HIV, transplante renal, esplenectomía.)

Las vacunas son creadas de acuerdo a los serotipos comunes de los lugares
en que son creadas. Lo que quiere decir, que una persona inmunizada contra
 algún serotipo de S. pneumoniae puede ser infectado por otro serotipo de la
misma bacteria.

FERMENTAN LA GLUCOSA, PRODUCIENDO ÁCIDO LÁCTICO

(FERMENTADOR HOMOLÁCTICO).

Son sensibles a la optoquina, lo que los diferencia de S. viridans ya que

estos no son sensibles a la optoquina.

CARACTERÍSTICAS:

- Diplococos lanceolados Gram Positivos.

- Capsulado (polisacárido). Hasta la actualidad hay más de 90 serotipos
basados en el polisacárido de las capsulas.
- El desarrollo bacteriano se facilita con el ambiente.
- Se desarrolla mejor en MICROAEROFILIA (5-10%CO2)

TIPOS DE INFECCIÓN:

Locales (hábitat natural o cerca del mismo):

- Otitis, sinusitis.

Invasivas (cuando la bacteria entra al torrente sanguíneo e infecta otras zonas):

- Neumonía, meningitis, sepsis, artritis, peritonitis.

IMPORTANTE:

Streptococcus pneumoniae es el primer causal de NEUMONÍA TÍPICA EN

PACIENTES DE LA COMUNIDAD.

Refiere a que es el causante de neumonía típica en pacientes no

hospitalizados, es decir, del común.
FACTORES DE VIRULENCIA:

- Adherencia a las células a las que les producirán daño (pilis o fimbrias).
- Cápsula polisacárida. SU PRINCIPAL FACTOR DE VIRULENCIA.
Antifagocitaria, inhibe la activación de complemento.
- Neumolisina: Toxina que destruye la membrana de los glóbulos rojos,
responsable de la hemolisis visible (halo verdoso) apreciable en el agar
sangre, e inhibe la fagocitosis.
- Neuraminidasa: Enzima que hidroliza las glucoproteínas y glucopéptidos
celulares, ayudando a la diseminación y multiplicación.
 - Proteasas IgA: Impide la acción de la inmunoglobulina A. En este caso
IgA1 (presente o predominante en suero). Facilita la adherencia y
colonización inicial.

Los niños son más propensos a infección por S. pneumoniae debido a que
sistema inmune aún no está completamente desarrollado, y justamente el
anticuerpo que hereda el bebé es IgA a través de la leche materna. Esto
implica que la destrucción de este anticuerpo permite la proliferación e
invasión por parte de esta bacteria.

Su virulencia viene dada por la cápsula bacteriana, y su capacidad de

multiplicación en los tejidos.

FACTORES DE RIESGO:

- Virulencia Intrínseca. Algunas cepas de esta bacteria son más virulentas

que otras. Esto implica, que si la cepa es más virulenta, la enfermedad será
más grave.
- Intervalo de colonización y comienzo de enfermedad (Mientras más corto
sea el tiempo entre el cual comenzó la colonización, y el tiempo en que se
manifestó la enfermedad, esta por supuesto, será más severa).
- Entorno: Colegios, guarderías, universidades. El hacinamiento, las altas
temperaturas, crean mayor propensión a la colonización, desarrollo, e
infección por parte de S. pneumoniae.
- Edad: Es más frecuente en niños y en ancianos, ya que tiene en sistema
inmune más debilitado.
- Inmunocomprometimiento e inmunosupresión.

EPIDEMIOLOGÍA:

- Productora de enfermedades a nivel mundial.

- Existen cepas resistentes a la penicilina y antibióticos de uso común.
- ES LA PRINCIPAL CAUSA DE NEUMONÍA EXTRA-
HOSPITALARIA.
- Los tipos 1-8 son causantes de casi el 75% de neumonía neumocócica,
decesos en casos de bacteriemia neumocócica.
- SEGUNDA CAUSA DE MENINGITIS A NIVEL MUNDIAL.
- Es agente causal de Otitis media.
- Agente causal de sinusitis (La sinusitis es principalmente causada por
 bacterias anaerobias, pero puede ser causada también por S. pneumoniae.
EN ESTE CASO, SI EL MEDICO SOSPECHA QUE LA INFECCION
VIENE DADA POR ESTE BACTERIA, SOLICITA UN ANÁLISIS DE
MUESTRA DE HISOPADO NASAL. Si
sospecha que es anaerobia, solicita un hemocultivo.

- Resistencia heterogénea a muchos tipos de antibióticos, incluyendo

betalactámicos, cloranfenicol, etc.
- Resistencia a la penicilina: cepas PEN-I, PEN-R.

DIAGNÓSTICO:

- Colonias redondas, alargadas (a las 24h de la siembra en agar) y mucosas

(la mucosidad depende del tamaño de la cápsula; mientras la capsula es de
mayor tamaño, se nota mayor mucosidad en las colonias crecidas en
agar.).
- Producción de halo verdoso alrededor de las colonias (alfa hemólisis).
- Aspecto umbilicado (centro hundido) a 48h.
- Sensibilidad a la optoquina (clorhidrato de etilhidrocupreína). Mayor a
14mm.
La sensibilidad a la optoquina, permite diferenciar a S. viridans de S.
pneumoniae, debido a que estos tienen un desarrollo bacteriano similar,
pero S. viridans no es sensible a la optoquina (No se realiza antibiograma).

Actualmente, el S pneumoniae ha creado resistencia a la optoquina. Para

confirmación, se realiza la prueba de solubilidad en bilis.

- Solubilidad en bilis: Ocurre lisis bacteriana de S. pneumoniae por

exposición a sales biliares al (10%).
 En un tubo de ensayo con caldo bilis al 10%, se agregan colonias
bacterianas (se observa turbidez). Se guarda en estufa a 35 oC durante
30min.

Si al finalizar el plazo, ya no se observa turbidez, sino transparencia en el

caldo, se confirma el diagnostico de S. pneumoniae. En caso contrario, la
bacteria no es S. pneumoniae.
ESQUEMA DE TRABAJO: Paciente con neumonía.

Tipo de muestra: ESPUTO

Se realiza coloración de Gram,

Se reporta polimorfonucleares,

(mayor a 40% la muestra es ideal),

Mononucleares, (cuantificados)

Inoculación: Agar sangre Cuando se hace Gram de esputo, no nos interesa reportar al

Agar chocolate, Mc. Conckey, EMB Si la muestra es de esputo NO SE LE COLOCA CALDO D

ENRIQUECIMIENTO antes de sembrarlo.
de Levine. Se siembra en agar chocolate, agar sangre (QUE SON LOS

El antibiograma se realiza en AGAR SANGRE, ya que esta

Se incuba 24h, 35oC (Microaerofilia 5 -10% CO2) Si la prueba de optoquina es resistente, se debe investigar o
En la observación macroscópica se observa mucosidad y alf

Ceftriaxona, cefotaxima, eritromicina, tetraciclina y cloranf

Tinción Gram a partir de colonias.

Observación de las características de las colonias que

crecieron en el agar (Macroscópica).

Identificación bioquímica:

- Optoquina
- Solubilidad en bilis.
Si es sensible S. pneumoniae.
Se realiza el ANTIBIOGRAMA.

La tasa de los adultos portadores es de un 29% y la tasa de portadores infantiles

hasta un 60%. En preescolares es más elevada llegando hasta un 97%.

Produce alta morbilidad en adultos mayores de 75 años.

La mayor incidencia de infecciones pulmonares neumocócicas la poseen

pacientes con enfermedades de base, diabéticos y alcohólicos.

Si la cepa es resistente a la penicilina, debe determinarse la C.I.M.

PREVENCIÓN:

Pacientes esplenectomizados deben poseer la vacuna antineumocócica

obligatoriamente.
Vacunación a viajeros.

Vacunación a niños.

Vacuna conjugada antineumocócica (contiene polisacáridos capsulares con la proteína

CRM [197] de la difteria) en recién nacidos.

El personal médico debe estar vacunado.

ESTREPTOCOCOS ALFA HEMOLÍTICOS

GRUPO viridans.

Son resistentes a la optoquina.

Crean un halo verdoso en el agar o alfa hemólisis.

Cocos Gram positivos en cadenas.

Constituyen parte de la flora normal del tracto respiratorio superior y el tracto

urogenital.
- S. mitis.
 - S. mutans
- S. oralis.
- S. sanguis.
- S. salivarius.
- S. milleri o intermedius.

Hábitat: Cavidad oral.

Cuando el sistema inmune está debilitado, por un cepillado busco, estas

bacterias que forman parte de la flora normal de la boca, pueden penetrar al
torrente sanguíneo a través de la lesión provocada por la erosión, y causar una
infección.

- Son causantes de caries, las cuales son una puerta de entrada para la
colonización e infección de estas S. sanguis.
- Producen infecciones por lesiones en la mucosa oral.

TIPOS DE INFECCIÓN:

- Infecciones en boca, absesos periodontales y periapicales.

- Bacteriemias persistentes que requieren hemocultivos seriados.
Endocarditis bacteriana, particularmente en individuos con las válvulas cardíacas dañadas.
Constituyen el agente causal del 30 a 40% de endocarditis bacteriana subaguda.
- Asociado a infecciones en prótesis valvulares.
- Absesos cerebrales.
- Absesos paravalvulares.
- Glomerulonefritis asociada a complejos inmunes circulantes.
- Meningitis (menos frecuente).
- Síndrome de Distrés Respiratorio del Adulto.
- Hipotensión y shock asociado a SDRA.
- Epiglotitis.
- Artritis séptica.
- Osteomielitis vertebral secundaria a bacteriemia.
- Pericarditis y queratitis infecciosa cristalina.

El S. viridans puede aislarse poco frecuentemente en casos de neumonías y

meningitis en pacientes inmunocomprometidos.

SINTOMAS:

- Fiebre
- Cansancio
 - Pérdida de peso
- Soplos cardíacos.

En casos de endocarditis se toma muestra de sangre para hemocultivo.

En casos de hemocultivo se guarda la muestra en su frasco para hemocultivo, se

espera el cumplimiento de las 24h en incubación en estufa, y se obtiene la
muestra. Cuando no se aprecia turbidez visible, se debe realizar el repique a
ciegas, para obtener la carga bacteriana que va a ser sembrada en medio sólido.

En caso del Grupo viridans, puede que se realice una tinción de Gram y se observen
cocos gram positivos en cadenas, sin embargo, estas bacterias no crezcan en
agar. Esto se debe a que en este grupo hay una cepa bacteriana que es
Piridoxaldependientes.

- Los estreptococos piridoxaldependientes necesitan Vitamina B6 para

desarrollarse y crecer.
¿Qué se hace? Antes de tomar la muestra, al frasco de recolección debe agregársele
vitamina B6, luego se procede a incubar el frasco de la muestra en la estufa, y de
ese frasco se toma la porción bacteriana que va a ser sembrada en el agar. Esta es
la única forma de que las bacterias crezcan en el medio sólido (agar sangre) al
ser sembradas.

FACTORES DE VIRULENCIA

- Fimbrias que median la adherencia bacteriana, agregación y conjugación.

- Cápsula bacteriana que resiste a la fagocitosis.
- Glicocálix (también llamado pseudocápsula), interviene en la formación
de sarro dental, forma placas en superficies protésicas o inertes,
también lo proseen los Staphylococcus coagulasa negativos.
- Ácidos lipoteicóico y teicóicos que permiten la adhesión de carácter
antigénico.
- Carbohidratos que permiten la adhesión, agregación y conjugación.
- Proteínas parietales que permiten la colonización tisular y formación de
placa bacteriana en superficies inertes y membranas epiteliales.
- Glucosiltransferasas: Enzimas que hidrolizan la sacarosa de la dieta (un
disacárido de glucosa y fructosa) y une los residuos de glucosa entre sí,
por medio de uniones alfa-1,6 y alfa-1,4, glucosídicas, para formar
glucanos insolubles. Estos confieren la propiedad a la bacteria de
adherirse a las superficies lisas de los dientes y formar la placa dentaria.
 Anteriormente, se trataban todos los casos de infecciones por S. viridans
con penicilina, pero se han visto cepas resistentes a la misma, por lo cual se
realiza antibiogramas con alguna penicilina, cefotaxima, ceftriaxona, imipenem,
vancomicina, eritromicina, y tetraciclina.

Para su detección, se realiza la prueba de la optoquina. Es resistente a la

optoquina.

GRUPO D

ENTEROCOCOS.

Anteriormente, los enterococos pertenecían al grupo D, debido a que

producen las mismas infecciones

- Bacteriemias
- Infecciones urinarias.

Cuando se hacen estudios de alimentos para el consumo humano, uno de los

microorganismos que se evalúan con mayor entereza es el género Enterococos.

Los animales son sus principales portadores.

IMPORTANCIA DE SU ESTUDIO:

Poseen una elevada resistencia a múltiples antimicrobianos, incluyendo a la

Ampicilina y Vancomicina.

El personal asistencial hospitalario, es el principal agente de diseminación de estos

microorganismos, entre el resto del personal y los pacientes, que luego los
transmiten a la comunidad.

GRUPO D:

- S. bovis
- S. equinus
- S. bovis (subespecie) gallitycus. Esta especie fermenta el Manitol
(Manitol positivo), causante de endocarditis bacteriana y carcinoma de
colon.
 Todos los estreptococos del grupo D no son hemolíticos, y son PYR
negativos.
 Se desarrollan en presencia de bilis e hidrolizan esculina
(positivos para bilis y esculina).
  No crecen o se inhiben en presencia de NaCl al 6.5%.
 Son parte de la microflora normal intestinal.

Pyr - A - Enterococos.

Prueba rápida, utilizada fundamentalmente para la identificación de Streptococcus pyogenes y Enterococcus spp.
Es útil para la caracterización preliminar de Streptococcus, Enterococcus y de microorganismos similares a estreptococos.

Fundamento
Los discos contienen el sustrato: pirrolidonil-beta-naftilamida, y la prueba consiste en determinar la presencia de la
enzima l- pirrolidonil arilamidasa .
Los microorganismos que contienen dicha enzima, pueden hidrolizar el sustrato presente en los discos en forma rápida, con
liberación del grupo pirrólico, el cual, reacciona con el reactivo revelador: N-N dimetilamino cinamaldehído.
Esta es una prueba presuntiva específica tanto para los estreptococos b hemolíticos del grupo A, como para los Enterococcus
spp; y permite diferenciar los estreptococos del grupo A de otras especies de Streptococcus.
Es altamente sensible y reemplaza a la bacitracina y a la prueba de tolerancia a la sal (crecimiento en NaCl al
6.5%). A menudo se usa esta prueba junto con la prueba de leucinaaminopeptidasa (LAP).
Debe tenerse en cuenta que algunas especies de Staphylococcus (S. lugdunensis, S. scheleiferi, S. haemolyticus y S.
intermedius) son generalmente PYR positiva, por lo que se puede utilizar para diferenciar Staphylococcus.

Metodología

Siembra
A partir de un cultivo puro, hacer una suspensión densa en 50 µl de solución fisiológica estéril, y agregar un disco de PYR-A-
ENTEROCOCOS.

Incubación
Durante 30 minutos a 35-37 °C, en aerobiosis.
Cuando se utiliza para diferenciar Staphylococcus, la incubación se debe realizar, según algunos investigadores, durante 2
horas a 35–37 ºC, en aerobiosis.
-Agregar una gota de reactivo revelador.
-Dejar a temperatura ambiente, hasta 5 minutos.

Resultados
Positivo: observación de color rosa-rojo en el disco.
Negativo: la suspensión y/o el disco permanecen incoloros o de color amarillo.

VANCOMICINA
Microorganismos Hemólisis PYRasa (30ug) Disposición
Estreptococo grupo A ß + S Pares o cadenas
Estreptococo grupo B ß, g, a - S Pares o cadenas
Estreptococo grupo C ß - S Pares o cadenas
Estreptococo grupo G ß - S Pares o cadenas
S. grupo viridans a, g - S Pares o cadenas
Enterococcus spp. a, ß , g + S Pares o cadenas
Pares, tétradas, cadenas,
Gemella spp. a, g + S acúmulos
Aerococcus viridans a, g + S Pares, tétradas, acúmulos
Pediococcus spp. a, g - R Pares, tétradas, acúmulos
 Lactococcus spp. a, g -(2) S Pares o cadenas
Leuconostoc spp. a,g - R Pares o cadenas

Observaciones: +: Más del 90% de las cepas presentan reacción positiva.

-: Menos del 10% de las cepas presentan reacción positiva.
* (2) Lactococcus garviae es la única especie de Lactococcus que da la prueba del PYR positiva.
* Cualquier zona de inhibición alrededor del disco de vancomicina se considera sensible.

Limitaciones
Siempre se debe correlacionar los resultados positivos con las características de la colonia y la disposición en la coloración de
Gram a partir de medio líquido, debido a que no solo los estreptococos Grupo A y Enterococcus spp. Son los únicos
microorganismos que dan positiva la prueba: algunas bacterias no hemolíticas tales como Aerococcus viridans (100%),
algunas especies de lactobacillus (7%), algunas especies de gemella (73%), los estreptococos con deficiencia nutricional,
algunas cepas de estreptococos Grupo C y G dan positiva la prueba, y Facklan encontró también, que el 4% de las cepas
de S. viridans son positivas para la prueba PYR.

Los Estreptococos grupo D presentan el ácido lipoteicóico del grupo D en sus

pareces celulares.

El S. bovis está presente en las heces de personas infectadas.

Manifestaciones Clínicas:

El S. bovis en circulación sanguínea trae patologías tales como:

- Bacteriemia.
- Endocarditis asociada a enfermedad hepática.
- Endocarditis de válvulas naturales y protésicas.
- Carcinoma de colon.
- Enfermedad inflamatoria intestinal,
- Diverticulitis
- Pólipos colónicos.
- Colitis ulcerosa idiopática
- Enterocolitis crónica por radiación.
- Meningitis
- Abscesos cerebrales

La mayoría de estos patógenos son sensibles a la penicilina, pero se han hallado

algunas cepas con resistencia a la misma, por lo cual debería hacerse
antibiograma.

Antibióticos de recomendación para Antibiograma:

Aminoglucósidos:

- Amikacina
 -
Netilmicina
-
Tobramicina
-
Gentamicina
-
Estreptomicina
 Ampicilina
 Cefalosporinas
 Vancomicina
ENTEROCOCOS:

Cocos gram positivos.

Habitantes normales del tracto gastrointestinal y biliar, y en menor cantidad

la vagina y la uretra masculina.

Son importantes agentes causales de infecciones adquiridas en la comunidad

y nosocomiales, y bacteriemias nosocomiales.
Poseen resistencia a las cefalosporinas y penicilinas de diversas generaciones, aminoglucósidos,
y a la vancomicina.
Tienen acido teicóico del grupo D de Lancefied en su pared celular.

Por lo general no son hemolíticos, pero a veces pueden generar hemolisis

alfa.
Son PYR positivos.

Crecen en presencia de bilis, e hidrolizan la esculina (positividad para

esculina biliar).
Crecen en NaCl al 6.5%

Se desarrollan bien a temperaturas entre 10 a 45oC. Se desarrollan a pH de 9.6

Son más resistentes a la penicilina G que los estreptococos.

Algunas cepas (pocas) contiene plásmido quecodifica la

síntesis de Betalactamasa.
Cepas resistentes a la vancomicina.

LOS FACTORES QUE DETERMINAN SU PATOGENICIDAD NO SE CONOCEN

ESPECÍFICAMENTE.

Algunos que se han encontrado:

- Citolisinas (una forma de hemolisina frente a eritrocitos humanos).

 - Sustancia de agregación: Proteína ligada a la superficie, codificada por un
plásmido que produce la aglutinación de microorganismos para facilitar el
intercambio de plásmidos. Interviene en la adherencia a membranas
epiteliales, colonización y multiplicación bacteriana.
- Feromonas, péptidos pequeños secretados por microorganismos que
producen trasferencia de ADN plasmídico por conjugación entre cepas.
Quimiotaxis para neutrófilos, lo que colabora con el aumento de la
respuesta inflamatoria.

- Ácidos lipoteicóicos también actúan como factores de virulencia,

produciendo factor de necrosis tumoral.
- Bacteriocinas: AS-48 posee actividad lítica para un amplio espectro de
bacterias gram positivas y gram negativas.
- Gelatinasa y hialuronidasa que contribuyen a la diseminación del
microorganismo.

TIPOS DE INFECCIÓN:

- Bacteriemia
- Endocarditis
- Infecciones agudas del tracto urinario
- Infecciones intraabdominales y pelvianas.
- Infecciones en tejidos blandos y heridas,
- Sepsis neonatal.
- Meningitis (raramente) asociado a enfermedades de base.
- Cistitis
- Pielonefritis
- Prostatitis
- Absesos perinéfricos

FACTORES DE RIESGO:

- Inmunosupresión e Inmunocomprometimiento.
- Diabetes.
- Edad (niños y neonatos)
- Tumores malignos Infecciones de base
- Intervenciones quirúrgicas previas infectadas en cavidad abdominal, tracto
gastrointestinal, urinario o respiratorio.
- Uso de antibióticos de amplio espectro.
La sepsis enterocócica neonatal tiene un inicio precoz acompañado de fiebre y
Distrés respiratorio infantil. Siendo más frecuente si tienen algún dispositivo de
acceso perinéfrico o sondas para alimentación.

Producen entre el 5-10% de todos los casos de endocarditis, y son la quinta causa
más frecuente de endocarditis protésica valvular.

ANTIBIOTICOTERAPIA:

Tienen CIM elevada para penicilinas y cefalosporinas.

Resistencia a la vancomicina (E. feacaclis, y E. faecium)

No son sensibles a la sinergia.

Susceptibilidad a trimetropin sulfametoxazol (TMP-SMZ) in vitro, pero

resistencia in vivo debido a que utilizan folatos del medio para inactivar los
antimicrobianos.

Para antibiograma: LOS MISMO ANTIMICROBIANOS DE GRUPO D.

- Aminoglucósidos (estreptomicina)
- Gentamicina
- Penicilinas (meticilina)
- Cefalosporinas.
- Glucopéptidos.

Vancomicina y teicoplanina: Glucopéptidos, inhiben la formación de la pared

celular:

Existen múltiples fenotipos de resistencia:

 Van-A: Se manifiesta por una gran resistencia a la vancomicina y

teicoplanina.
 Van-B: Son resistentes a la vancomicina pero susceptibles a la
teicoplanina.
 Van-C: Moderada resistencia a la vancomicina. Es constitutivo en
especies halladas con menor frecuencia.
 Van-D: Resistencia moderada a la vancomicina y resistencia leve o
susceptibilidad a la teicoplanina.
 Van-E: Moderadamente resistente a la vancomicina y susceptible a la
teicoplanina.
STAPHYLOCOCUS
 Género Staphylococcus:

- Cocos gram positivos

- Tendencia a agruparse en racimos
- Inmóviles (MIO negativo)
- No esporulados.
- Anaerobios facultativos (75% CO2 Y 25% DE O2)
- Nutricionalmente poco exigentes.
- Tolerantes a altas concentraciones de sal.
- Resisten la desecación.
- Crecen en medios de cultivo convencionales.
- Fermenta glucosa y carbohidratos produciendo pigmentos de un color
blanco hasta amarillo intenso.

PRUEBAS DE DETECCIÓN:

 Tinción de Gram (Gram positivos – tiñen violeta)

 Catalasa (Son catalasa positivos)
 Coagulasa (Positivo solo para S. aureus)
 DNAsa: Positivo solo para S. aureus. Halo trasparente alrededor del
crecimiento bacteriano.
 Manitol: Coagulasa positivos hidrolizan el manitol (color amarillo);
coagulasa negativos no hidrolizan el manitol (color rojo o púrpura)
 Ureasa Positivos
 Arginina y lisina: Positivos
 Novobiocina: Diferencia S. saprophyticus (resistente) de S. epidermidis
(sensible).
 Fenilalanina positivos.
 Sacarosa: Positiva.
 Trehalosa: Positiva.

Manitol Salado Agar.

Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciación de estafilococos.

Es recomendado para el aislamiento de estafilococos patogénicos a partir de muestras clínicas,
alimentos, productos cosméticos y otros materiales de importancia sanitaria.
También, este medio puede utilizarse para el cultivo de especies halófilas de Vibrio, si no se dispone de
medios apropiados (TCBS Medio, Medio Marino, etc.), aunque algunas especies pueden no
desarrollar.
Fundamento
Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentración salina. Los estafilococos coagulasa
positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio; las colonias aparecen rodeadas de una zona
amarilla brillante. Los estafilococos coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja
o púrpura. Las colonias sospechosas, se repicarán en un medio sin exceso de cloruro de sodio para
efectuarles, posteriormente, la prueba de la coagulasa.
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de carbono,
nitrógeno, vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio
(que se encuentra en alta concentración) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora
acompañante, y el rojo fenol es el indicador de pH.
Las bacterias que crecen en un medio con alta concentración de sal y fermentan el manitol, producen
ácidos, con lo que se modifica el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo.
Los estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y pueden o no fermentar el manitol.
Los estafilococos coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas
rodeadas de una zona del mismo color.

Los estafilococos que no fermentan el manitol, se visualizan como colonias rojas, rodeadas de una zona del
mismo color o púrpura.

Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones

Extracto de carne 1.0
Pluripeptona 10.0 Suspender 111 g de polvo por litro de agua
d-Manitol 10.0 destilada. Reposar 5 minutos y mezclar
Cloruro de sodio 75.0 calentando a ebullición durante 1 o 2
Agar 15.0
Rojo de fenol 0.025 minutos. Distribuir y esterilizar en
autoclave a 118- 121°C durante 15
minutos.
pH final: 7.4 ± 0.2

Siembra
Sembrar en superficie un inoculo denso de la muestra.

Incubación
De rutina: durante 18-24 horas a 35-37 °C, en aerobiosis.
La American Public Health Association (A.P.H.A) recomienda la incubación durante 3 días a 32 °C, en
aerobiosis.

Resultados

Microorganismos Crecimiento Características de las colonias

Staphylococcus aureus ATCC 25923 Excelente Amarilla
Staphylococcus epidermidis ATCC
14990 Bueno Roja
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido Inhibido
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Inhibido Inhibido

Características del medio

Medio preparado: rojo

El género Estafilococos está constituido por 35 especies distintas, de las cuales,

S. aureus tiene la mayor importancia médica.

Crecen en casi todos los medios bajo condiciones aerófilas o de

 Microaerofilia.

Otras especies (COAGULASA NEGATIVAS):

- S. epidermidis
- S. lugdunensis
- S. haemolyticus
- S. saprophyticus

Staphylococcus aureus:
- Colonias de consistencia cremosa.
- COAGULASA POSITIVA
- Las colonias están rodeadas de un halo amarillo-dorado.
- Halo de Beta hemolisis o hemolisis completa en agar sangre.

EPIDEMIOLOGÍA:

1) Entrada: Nasal (portadores), mucosas, heridas, heridas por continuidad en

la piel sana, ingestión, vía endovenosa.
2) Diseminación rápida y fácil.
3) Enfermedades: Conjuntivitis, ántrax, abscesos, endocarditis, impétigo,
celulitis, neumonías, diarrea, vómitos, endolftalmitis, otitis interna,
infecciones en prótesis articulares, infecciones urinarias, osteomielitis,
síndrome de shock tóxico, y síndrome estafilocócico de piel escaldada.

Infecciones endógenas: Ocasionadas por colonización.

- Contacto directo con objetos contaminados.

- Factores individuales.
Factores de colonización de portador (enfermo o sano) a otro individuo:

En caso de que la enfermedad sea trasmitida de un individuo a otro deben existir

ciertos factores predisponentes.

- Defensas del paciente (inmunosupresión, o Inmunocomprometimiento)

- Presencias de alteración en piel y mucosas.
- Ser sometido a algún proceso quirúrgico o invasivo.

Factores de colonización dependientes de microorganismo:

Son los mecanismos que posee el microorganismo que le permiten el

 colonizar un tejido, multiplicarse e invadir tejidos profundos, causando daño, y
diseminándose por el torrente sanguíneo.

Estadísticamente:

- El 20-30% de la población puede estar colonizada por S. aureus.

- En el 20% de la población esta colonización es prolongada, ya que son
portadores de S. aureus.

- En el 50% de los casos los pacientes pueden tener una colonización

intermitente, es decir, pueden pasar periodos de vida colonizados y
periodos de su vida no colonizados.

Colonización más frecuente en:

- Personal sanitario
- Diabéticos insulinodeficientes.
- Nefrópatas en hemodiálisis.
- Pacientes con enfermedades dermatológicas
- Usuarios de drogas parenterales.
S. aureus es un microorganismo muy importante en el ámbito hospitalario
(infecciones asociadas a los cuidados de la salud), porque es uno de los
principales agentes causales de infecciones, no sólo de piel, sino de heridas
quirúrgicas, prótesis, catéteres, llegando a producir sepsis, shock y muerte.

RESISTENCIA:

Es frecuente hallar cepas de S. aureus de origen nosocomial resistentes a Oxacilina

y Vancomicina, que eran los antibióticos de elección para infecciones
estafilocócicas.

En el hospital Ruíz y Páez aproximadamente en el 20% de la infecciones por cepas

de S. aureus, hay resistencia a la Oxacilina. No se han hallado, cepas con
resistencia a la Vancomicina.

En ciudades como Cumaná, San Tomé, El Tigre, y Maturín, sí se han detectado S.

aureus resistentes a la Vancomicina.

FACTORES DE VIRULENCIA:

- Pared celular: Compuesta por Peptidoglucano (polímeros de N-

acetilglucosaminas y N-acetilmuramicos ligados en forma cruzada):
confieren forma y estabilidad (rigidez) al microorganismo. También actúa
 como endotoxina (toxina que se libera al lisarse la bacteria desprendiendo
fragmentos de lipopolisacáridos), la cual actúa como determinantes
antigénicos (TOLL TIPO 6 – Peptidoglucano, TOLL TIPO 4 –
lipopolisacáridos) que desencadenan una respuesta inmunológica severa.

El Peptidoglucano:

 Estimula la producción de IL-1

 Estimula quimiotaxis y agregación linfocitaria.
 Activa el complemento.
 Induce la producción de opsoninas.
Ácido teicóico: Polímeros de ribitol. Está compuesto por polímeros de
fosfatos que son específicos de especie (Está presente en todos los
estafilococos pero existen diferencias en su constitución bioquímica –
posición del grupo fosfato, aminas, etc.) Se encuentran en la porción
externa y median la unión del microorganismo a superficies mucosas en
general. Facilitando la unión al a fibronectina (proteína presente en la
matriz extracelular de la mayoría de los tejidos de los tejidos, o
intravascularmente).

Proteínas externas:

 Proteína fijadora de colágeno

 Proteína fijadora de fibronectina

Ambas están unidas al Peptidoglucano y median la unión o

adhesividad a los epitelios.

- Factor de agregación o coagulasa ligada (Proteína A): Activa el

complemento.

ENZIMAS:

- Catalasa
- Coagulasa: Libre y ligada.
- Hialuronidasa
- Betalactamasas
 Metalobetalactamasas
 Psenilicobetalactamasas
 - Otras enzimas: Estafilocinasa: Actúa como fibrinolisina: Lisa el coagulo.

TOXINAS:

- Alfa, beta y gamma (actúan como hemolisinas) La hemotoxina alfa

interviene en la lesión tisular alterado la permeabilidad del tejido y
ocasionando inflamación. La betatoxina degrada esfingomielina. La
hemotoxina gamma actúa en procesos diarreicos de S. aureus.

- Leucocidina de Phanton Valentine: Destruye eritrocitos humanos y de

conejo (hemolisina). Es un factor de virulencia importante en infecciones
extra hospitalarias ocasionadas por S. aureus resistentes a la meticilina.
- Toxinas Exfoliativas: A y B. Son epidemolíticas (lisan las células
epiteliales). Producen descamación generalizada de la epidermis
(epidermólisis estafilocócica). Son superantígenos.
 La toxina A es producto de un gen cromosómico y es
termoestable (resiste ebullición por 20 minutos).
 La toxina B es producto de un plásmido y es termolábil.
- Enterotoxinas: Son superatígenos. Termoestables y resistentes a la acción
de las enzimas intestinales.
- TSST-1 Toxina del síndrome de Shock tóxico: Superantígeno, produce
síndromes como fiebre y afectación multiorgánica, exantema descamativo.
Se detecta en el 20% de las cepas de S. aureus.

INFECCIONES POR S. aureus:

Características clínicas: Localizado con tendencia a diseminación /

Supurativas con tendencias a absesos / Diseminadas orgánicamente.

- Puede aparecer como un grano (infección del folículo piloso o absceso).

Inflamación circunscrita y dolorosa que supura del centro y cicatriza con
rapidez cuando se drena el pus. La pared de fibrina evita la diseminación
en piel sana.
- En contaminación directa de una herida. Se disemina rápidamente.
- Luego de la diseminación sobreviene la bacteriemia, endocarditis,
osteomielitis hematógena aguda, meningitis o infección pulmonar.
- La localización orgánica conlleva a la disfunción orgánica y supuración
focal intensa.
- En intoxicación alimentaria no hay fiebre, hay diarrea autoregulada y
fiebre. Rápida convalecencia.
 - Síndrome de shock tóxico, fiebre alta de ascenso brusco, vómitos, diarrea,
mialgias, exantema escarlatiniforme e hipotensión con insuficiencia
cardíaca y renal en casos más graves. Puede experimentar recidiva.

INFECCIONES DE LA PIEL:

- Foliculítis
- Ántrax
- Celulitis
- Mastitis
- Impétigo
- Forúnculos
- Hidradenitis supurativa

SÍNDROMES CAUSADOS POR TOXINAS:

- Síndrome estafilocócico de piel escaldada

- Síndrome de Shock Tóxico.
- Toxinfección sanitaria o gastroenteritis.

INFECCIONES INTERNAS:

- Bacteriemia
- Septicemia
- Endocarditis
- Infecciones de las vías respiratorias
- Artritis séptica
- Osteomielitis

CULTIVO:

Crecen fácilmente en medios en cultivo convencionales.

Colonias de S. aureus crecen en agar a 37oC.

En agar sangre la producción de betahemolisis puede darse hasta varios días después.

Colonias de consistencia cremosa.

S. aureus
- Fermenta el manitol (único entre los estafilococos)

- Se cultiva en medios que contienen NaCl a 7.5%. Este es un mecanismo de

diferenciación en una microflora mixta. Las demás bacterias se inhiben ante la
 concentración de sal, sin embargo esta no.

Para detectar portadores nasales de S. aureus se utiliza agar manitol salado.

TIPO DE MUESTRA:

- Pus superficial
- Aspirado traqueal
- Sangre
- Liquido cefalorraquídeo dependiendo del lugar del proceso infeccioso.

TRATAMIENTO:

- Penicilinas resistentes a las Betalactamasas (Isoxazolilpenilicinas -

Nafcilina, cloxacilina, meticilina)
- Cefalosporinas de primera generación (Resistentes a las
Betalactamasas / Cefalotina, cefadroxilo, cefazolina).
- Fluoroquinolonas.
- Lincosaminas
- Aminoglucosidos
- Glucopéptidos (Vancomicina y Teicoplanina).

90% de las cepas son resistentes a la penicilina debido al mal uso de

antibióticos de amplio espectro.

65% de las cepas son resistentes a la Nafcilina.

ESTAFILOCOCOS COAGULASA NEGATIVO DE INTERÉS MÉDICO:

S. epidermidis:
Asociado a infecciones de los cuidados de la salud. Sus infecciones ocurren en
dispositivos protésicos (catéteres, válvulas auriculares, etc.) donde las bacterias
se aíslan a sí mismas formando una biopelícula y esto las hace más resistentes al
tratamiento. Es más resistente a los antimicrobianos que S. aureus.

El 75% de las cepas son resistentes a la Nafcilina.

UREASA POSITIVA

OXIDASA NEGATIVA

FERMENTA GLUCOSA, FRUCTOSA Y LACTOSA.

MANITOL NEGATIVA SENSIBLE A
 LA NOVOBIOCINA DNASA

NEGATIVA

S. saprophyticus: Está relacionado a infecciones urinarias.

TRATAMIENTO DE ELECCIÓN PARA COAGULASA NEGATIVOS:

- VANCOMICINA.

RESISTENTE A LA NOVOBIOCINA.
GÉNERO Neisseria:

Diplococos gram negativos (se tiñen de

rosa pálido).

Bacterias de interés médico:

- N. gonorrhoeae (su único reservorio es el ser humano)

- N. meningitidis. (coloniza las vías aéreas superiores en portadores, que
luego diseminan el microorganismo y causan los brotes epidémicos.)

No habitan como flora normal al humano, sin embargo N. meningitidis puede

colonizar la faringe en portadores que luego diseminaran la bacteria
causando infección.

Son exigentes para su crecimiento: NECESITAN SANGRE PARA CRECER.

Tienen una parte aplanada, a través de la cual se adhieren o unen al otro coco,
adoptando la forma de un grano de café, redondeadas, y con aplastamiento
central.

EL GRAM SE REALIZA A TRAVÉS DE:

- Pus
- LCR
- Colonias que se obtengan en agar sangre o agar chocolate.

Inmóviles (MIO NEGATIVO)

Aerobios (crecen mejor en microaerofilia) No

esporulados

CATALASA (tiene la enzima catalasa que transforma el peróxido de hidrogeno en

 H2O y O2) Y OXIDASA (fermenta la glucosa hasta CO2 gaseoso en aerobiosis)
POSITIVOS

PRESENTAN FIMBRIAS (permiten la adherencia epitelial).

Capsulados

Exigentes para desarrollo (sólo crecen en medios que contengan sangre y cierta
humedad)

Temperatura óptima de crecimiento es de 35oC Sensibles a la

desecación, cambios de pH y temperatura.

ESPECIES NO PATÓGENAS PERO OPORTUNISTAS:

- N. sicca
- N. lactamica
- N. subflava
- N. flava
- N. perflava
- N. mucosa.
- N. flavescens
- N. cinérea
- N. polysaccharea

Forman parte de la flora normal del tracto respiratorio superior. Patógenas únicamente
oportunistas.

N. meningitidis:

1. El antígeno CAPSULAR ha permitido diferenciar a los meningococos en

13 serogrupos:
- A, B, C, D,
- E29,
- H, I, J, K, L,
- X, Y, Z,
- W135

De estos serogrupos; A, B, C, y W135 son los serotipos presentes en las vacunas

más comúnmente porque son los que más frecuentemente producen
infecciones, las cuales siempre vienen en brotes epidémicos.
Importancia de la presencia de la capsula: Permite clasificarlos, y la creación de
vacunas antimeningocócicas.

OTROS ANTÍGENOS:

1. Proteínas de membrana externa

2. Antígeno lipopolisacárido (endotoxina)
3. Pilis o fimbrias.

FACTORES DE VIRULENCIA:

Los antígenos capsulares y lipoproteínas son los responsables de la virulencia

del microorganismo.

Los pilis y la cápsula facilitan la fijación al tejido en donde van a producir el daño, e
invasión a las células de las mucosas.

Cuando un paciente tiene meningitis, puede también desarrollar una sepsis, y uno de
los síntomas de la sepsis es la formación de petequias (o púrpuras), las cuales
pueden tornarse oscuras. Estas son únicas del género y especie Neisseria
meningitidis.

A partir de las petequias también se puede cultivar al microorganismo.

Las endotoxinas son las responsables de la formación de las petequias.

La capacidad invasiva de la bacteria

Porinas o Proteínas Por (que permiten la entrada de nutrientes hacia la bacteria,

y la expulsión de antimicrobianos.

Lipooligosacárido (LOS): Actúa también como endotoxina. Está relacionado en

gran parte con la toxicidad de las infecciones. Relacionado con hipotensión,
fiebre elevada, shock y muerte.

Endotoxina: Resistencia a la propiedad bactericida del suero.

La cápsula impide la fagocitosis.

Proteínas OPA: Interviene en la adhesión a los receptores de las células

hospedadoras.
CUADROS CLÍNICOS:
 1) Rinofaringitis: Goteo nasal trasparente. Muy contagiosa. Entre el 60- 80%
de la población adulta presenta anticuerpos contras las cepas productoras
de rinofaringitis en suero, por lo tanto hay menos propensión a la
adquisición de la misma en estos adultos.
2) Meningitis: Se puede presentar en dos formas.
a. Sin podromos: Sin signos y síntomas previos a la enfermedad
(inicio brusco).
b. Meningitis precedida de rinofaringitis, fiebre, etc.

MENINGITIS:

Incubación: El periodo de colonización tarda entre 3-10 días.

Antes de las 48h de iniciado el tratamiento antimicrobiano, el paciente aún puede,

mediante tos, estornudos (…) diseminar cepas patógenos en el medio.
SIGNOS Y SÍNTOMAS:

- Comienzo repentino con hipertermia

- Fiebre
- Cefalea intensa
- Fotofobia
- Náuseas
- Vómitos en escupitajo (vomito que se expulsa de forma violenta).
- Rigidez en la nuca.
- Mal estado general.
- Petequias en sepsis.

Evoluciona a estado de coma en pocas horas.

 Sepsis meningocócica o menigococemia: Síndrome febril con dolores

articulares, exantema y petequias (desde purpúreas hasta negruzcas).
 Sepsis o meningococemia sobreaguda/fuminante : Con purpúrea, exantema
hemorrágico, y shock llamado “Síndrome de Waterhouse – Friedrichsen”,
el cual consisten en coagulación extravascular diseminada y colapso
circulatorio.

Menos frecuentes:

- Artritis
- Conjuntivitis purulenta.
- Neumonía
N. meningitidis es un patógeno exclusivo del humano.

La enfermedad incrementa en frecuencias en dos periodos del año (invierno y primavera)

Afecta con más frecuencia a niños de corta edad, pero no todos son afectados por
esta infección, y pueden estar exentos a esta enfermedad.

El hacinamiento incrementa la posibilidad de sufrir esta enfermedad, y se

contagia por gotitas de Plügge.

La enfermedad se presenta en brotes epidémicos.

La trasmisión viene dada por:

- Enfermos
- Portadores sanos (a nivel nasofaríngeo).
El humano es el único reservorio.

SEROGRUPO B: Afecta a niños menores de 4 años. Ha desarrollado

resistencia a antibióticos de uso común.

SEROGRUPO C: Afecta a niños mayores de 4 años.

En el cinturón del Sahara en África es endémico el SEROGRUPO A.

El recién nacido está protegido por IgG materno, si nace por el canal del parto.

ES NECESARIO REALIZAR ANTIBIOGRAMA debido a que ha creado

resistencia a la penicilina: En agar sangre (porque la bacteria no crece en un
medio que no contenga sangre).
ESQUEMA DE PROCESAMIENTO:

Tipo de muestra: LCR, Sangre (en caso de sepsis)

Inoculación en agar sangre o chocolate

Incubación a 35oC Microaerofilia

A las 24h: Se realiza GRAM (-)

Se observan las características (colonias) A partir de las colonias.

- Transparentes (en ambas especies) Diplococos en cadenas.

 - En agar chocolate se observan
grisáceas.

Con un palillo de madera se toma una porción para:

- Oxidasa (positiva)
- Fermentan la glucosa y maltosa.
- No fermentan latosa ni sacarosa. (Sacarosa negativa).
Kligler(taco amarillo, bisel rojo)

Neisseria meningitidis.

El diagnostico definitivo lo ofrece el cultivo y las pruebas de

identificación.

OTRAS PRUEBAS (DIAGNÓSTICO INDIRECTO):

Observación del frotis con inmunofluorescencia. Test

serológico con muestra LCR.

Aglutinación en LCR.

(Estas son pruebas de determinación o diagnóstico indirecto, el diagnostico final lo

tiene el cultivo y las pruebas de identificación bioquímica).
FARMACOS PARA ANTIBIOGRAMA:

- Penicilina
- Ampicilina o amoxicilina
- Cloranfenicol
- Cefalosporinas de tercera generación: Cefotaxima, ceftriaxona (Menor
actividad contra gram positivos, mayor actividad contra gram negativos.
Permiten identificar BLEE y mecanismos de resistencia).

Se realiza en agar sangre.

Es importante hallar la concentración mínima inhibitoria (CIM)

IMNUNOPROFILAXIS (VACUNACIÓN):

Se previene mediante el uso de vacunas (niños, ancianos, personal de

salud en especial).
 La enfermedad meningocócica invasiva se previene mediante la
vacunación. La eficacia está comprobada para vacunas de los serogrupos A Y C,
aún o ha sido comprobada para el serogrupo B.

QUIMIOPROFILAXIS (ELIMINAR SU PRESENCIA (N. meningitidis) EN

PORTADORES SANOS):

Se toman muestras de exudado faríngeo para detectar al portador.

Esto se realiza sólo en personas más cercanas al contacto con el tracto

nasofaríngeo del paciente.

El antibiótico recomendado para tratar al portador es penicilina,

eritromicina o rifampicina, o una quinolona (ciprofloxacina, levofloxacina),
para eliminar su estado de portador.

Al médico tratante y enfermeras se les somete a tratamiento con

rifampicina para evitar el contagio y la diseminación a la comunidad.
N.gonorrhoeae:
Agente causal de la gonorrea.

La gonorrea es causante de una secreción purulenta matinal a través de la uretra

peneana.

En mujeres no se observa secreción, se necesita la prueba del Papanicolaou.

En recién nacidos (que nacen a través del canal del parto), pueden existir infecciones
oculares llamadas Oftalmías gonocócicas u oftalmia neonatorum.

La bacteria:

- Exigente para el desarrollo

- Sensible a factores ambientales.
- Su trasmisión se realiza a través del contacto mucosa-mucosa.

Medio de cultivo para su crecimiento: Debe tener sangre.

Cuando la muestra es tomada de un medio que contiene una amplia flora

bacteriana, se debe sembrar la muestra en un medio selectivo, que impida el
crecimiento bacteriano en la mayoría de las bacterias colonizadoras, excepto en
las posibles sospechosas que son las de interés clínico.
MUESTRAS: Secreción matinal, muestra de secreción endocervical.

 AGAR THAYER MARTIN: Permite la muestre de los cocos gram

positivos, bacilos gram negativos, y hongos (VCN):
 V – Vancomicina: Cocos gram positivos
 C – Colistín: Bacilos gram negativos
 N – Nistatina: Hongos.
 Para cultivos de zonas estériles se utiliza agar sangre o chocolate.

Encaso de una secreción uretral masculina se puede informar

GONORREA, al ver el frotis a partir de la muestra y observar:

1) Diplococos gram negativos en gran cantidad

2) Abundantes polimorfonucleares.
Solo en caso de secreción uretral del hombre.

En caso de un gram de secreción endocervical no se informa gonorrea,

debido a que la mujer en la vagina tiene una bacteria como colonizadora normal,
de características muy similares a N. gonorrhoeae, llamada Acinetobacter
baumanii, la cual puede ser causante de confusión al momento de la observación
del GRAM.

De esta manera, en la mujer siempre debe esperarse el cultivo para dar un

informe.

TIPOS DE INFECCIÓN:

1) Infección localizada: Lesiones localizadas en la mucosa del aparato

genital. Suscritas al aparato genital.

En mujeres a veces no se observa el flujo, o en otras oportunidades se aprecia un

flujo verdoso. Esto se debe a los intrincados pliegues cervico-uterinos de la
mujer, que no permiten la salida de este flujo hacia el exterior.

En hombres, la secreción es visible y matinal.

2) Infección diseminada: Se propaga con contigüidad a los órganos vecinos o

por vía sanguínea a órganos distantes. Más frecuente en mujeres.

OTRAS SINTOMATOLOGÍAS:

En hombres: Ardor al miccionar, uretritis (inflamación de la uretra), secreción

 purulenta matinal, disuria.
En mujeres: Localización primaria en endocervix. Muchas veces se presenta de
forma asintomática.

Las cepas necesitan de hierro para crecer. Las mujeres tenemos una enzima que
impide la captación de hierro por parte de la bacteria e impide que la carga
bacteriana infectante aumente, evitando así la hiperproducción de flujo.

La bacteria se aísla más fácilmente en mujeres mestruantes.

A veces presenta leucorrea o prurito.

COMPLICACIONES EN AUSENCIA DE TRATAMIENTO:

Enfermedad gonocócica aguda o blenorragia/gonococcia:

Hombre: Prostatitis, epididimitis, absesos periuretrales.

Mujeres: Enfermedad inflamatoria pélvica (EIP), salpingitis gonocócica

(Diseminación a las trompas de Falopio ocasionando fibrosis y obliteración de
las mismas), endometritis, e infertilidad en 20% de los casos de salpingitis.

LA INFECCION DISEMINADA ES MÁS FRECUENTE EN MUJERES:

- Artritis séptica (En caso de muestras de líquido sinovial o articular, la

bacteria se aprecia en el GRAM pero no crece en ningún medio de cultivo.
Se desconoce de forma precisa el por qué, se presume que el medio es
hostil – Tóxico - para la bacteria, y esta sólo se observa pero en su forma
NO VIABLE.)
- Dermatitis
- Endocarditis posterior a Gonococemia.

LOCALIZACIONESEXTRAGENITALES DE LA GONOCOCIA:

- Gonococia Anorectal
- Gonococia faríngea
- Infecciones en recién nacidos (Oftalmia neonatorum)

OTROS MEDIOS DE CULTIVO:

 - Agar Thayer Martin (Agar Chocolate suplementado con VCN).
- Agar Thayer Martin modificado (Agregando STX)
- Agar NYC / New York City (Agar base peptona, almidón
suplementado con eritrocitos de caballo).

ESQUEMA DE IDENTIFICACIÓN:

Tipo de muestra:

Secreción cervicouterina

Secreción uretral matinal (GRAM DIRECTO MUESTRA) Exudado

faríngeo, secreción anorectal

Liquido articular (sólo se realiza GRAM)

Inoculación M.C. selectivo 35oC

en Microaerofilia.
24h Se observan c. colonias: Se realiza el GRAM

- Transparentes o grisáceas. Directo de la muestra(SUM)

Pruebas bioquímicas: De la colonia (SCUF)

- Oxidasa positiva Diplococos GRAM negativos.

- Oxida carbohidratos
- Fermentan la glucosa y maltosa.
- No fermentan latosa ni sacarosa. (Sacarosa negativa).
Kligler(taco amarillo, bisel rojo)

N. gonorrhoeae.

Otras pruebas:

- Coaglutinación
- Inmunofluorescencia (observación de frotis)

- ELISA (ocurre reacciones cruzadas).

SUM: Secreción uretral masculina SCUF:

Secreción cervicouterina femenina

DIAGNOSTICO: Se basa en:

1) Observación directa del gram (Diplococos gram negativos)

2) Cultivo e identificación macroscópica de las colonias.
3) Cultivo / identificación fenotípica: Luego de las 24h de cultivo, se
introduce a la bacteria en caldo de glucosa, caldo maltosa, caldo lactosa,
sacarosa (sacarosa y lactosa negativo). IDENTIFICACIÓN
FENOTÍPICA: Cómo se expresa la bacteria en diferentes sustratos.
4) Antibiograma.

PREVENCIÓN:

- Diagnóstico y tratamiento precoz de los casos.

 - Investigación y tratamiento de contactos.
- Exámenes periódicos a la población de alto riesgo.
- Educación sanitaria de la población.

Gonorrea y Meningitis son enfermedades de denuncia sanitaria obligatoria.

- Uso de preservativos
- Evitar promiscuidad
- Tratamiento en pareja
- Denuncia de casos y pesquisa.
- Aplicación de eritromicina en ojos de recién nacidos para que no
desarrollen la enfermedad.

TRATAMIENTO:

- Penicilinas
- Tetraciclinas
- Fluoroquinolonas
- Ceftriaxona intramuscular.
- Azitromicina.

Medio selectivo de Thayer-Martin para el aislamiento de Neisserias patógenas.

Fundamento
Las dificultades que presenta la recuperació n de N. gonorrhoeae y N. meningitidis de los materiales
clínicos, se deben a las exigencias nutricionales de estos microorganismos, y en los materiales
de origen genital, oral o anal, al desarrollo invasor de la abundante flora sapró fita. El medio de
Thayer-Martin permite el correcto aislamiento y recuperació n de las Neisserias pató genas
dentro de las 24 h, con una ausencia casi total de contaminantes. El medio de cultivo se prepara
a partir del Agar Base GC, con el agregado de hemoglobina, un suplemento de enriquecimiento
(Britalex) y una mezcla antimicrobiana (VCNT: Vancomicina, colistina, nistatina y
trimetoprima).

Composición

1. Agar Base GC:

Este medio de cultivo se emplea como medio basal para la preparació n del medio Thayer Martin
original o modificado y agar chocolate con o sin enriquecimiento.

Fórmula (en gramos por litro)

 Pluripeptona 15.0
Almidón soluble 1.0
Fosfato dipotásico 4.0
Fosfato monopotásico 1.0
Cloruro de sodio 5.0
Agar 15.0
pH final: 7.2 ± 0.2

4. Mezcla antimicrobiana VCNT:

Se la utiliza en la preparació n del medio T.M. como inhibidora de los organismos contaminantes.
Cada ml de la solució n, agregado a 100 ml de medio de cultivo da una concentració n final de:

Vancomicina 3.0 µg/ml

Colistina 7.5 µg/ml
Nistatina 12.5 U/ml
Trimetoprima 5.0 µg/ml
Incubación
Incubar las placas a 35-36°C en recipientes con cierre hermético, en cá mara hú meda y atmó sfera
de CO2, durante 18 a 72 h. En la mayoría de los casos se obtiene un crecimiento precoz y
abundante entre las 18 y las 24 h.

Identificación
Las colonias de gonococos y meningococos obtenidas en este medio selectivo son usualmente
opacas, grisá ceas, convexas, de 1-4 mm de diá metro. Luego de 48 h de incubació n pueden
transformarse en colonias mucoides.

Coloració n de Gram: diplococos Gram negativos. Se sugiere proseguir con este esquema de identificació n.

Microorganismos T.M. T.M. A.N C22°C OXI GLU MAL

N. gonorrhoeae + + - - + + -
N. meningitidis + + - - + + +
Acinetobacter spp. - + + + - -* -
Neisseria spp. - + + + + V V
Moraxella spp - + V V + - -
Moraxella
(Branhamella) catarrhalis - + + + + - -

ENTEROBACTERIAS:

Son colonizadoras habituales de diferentes mucosas, en especial el tracto

gastrointestinal y genitourinario produciendo infecciones a nivel de esas
localizaciones.

En enfermos hospitalizados (Nivel intrahospitalario):

Causa más frecuente de infecciones asociadas a los cuidados de la salud,

 produciendo amplia variedad de cuadros clínicos.

Son responsables de in tercio de las bacteriemias, más de la mitad de las

infecciones entéricas y la mayoría de las infecciones urinarias.

TAXONOMÍA:

- Escherichia coli
- Klebsiella pneumoniae (infecciones intrahospitalarias)
- Enterobacter cloacae, Enterobacter aerogenes
- Pantoea agglomerans
- Serratia marcescens
- Hafnia alvei
- Proteus mirabilis, P. vulgaris, P. penneri.
- Providencia spp.
- Morganella morganii
- Citrobacter freundii
- Salmonella spp, Shigella spp, Yersinia spp.

SE NECESITA LA EPIDEMIOLOGÍA de un paciente para dar un diagnostico

(Criterios de Kass – Anexos)

- Pacientes embarazadas – infecciones asintomáticas

- Muestra de orina por punción suprapúbica debería ser estéril.

GENERALIDADES:

- Bacilos gram negativos.

- No esporulados.
- Móviles e inmóviles (Klebsiella y Shigella son atricos o aflagelados).
- Catalasa positivos
- Oxidasa negativos
- Hábitat: Tubo intestinal del hombre y animales, suelo, vegetación.

LAS PRUEBAS DE CATALASA Y OXIDASA permiten la

diferenciación de los bacilos GRAM NEGATIVOS no fermentadores de la
glucosa.

Una oxidasa es una enzima que cataliza una reacción de oxidación/reducción empleando
oxígeno molecular (O2) como aceptor de electrones. En estas reacciones el oxígeno se reduce a
agua (H2O) o a peróxido de hidrógeno (H2O2). Las oxidasas son una subclase de las
oxidorreductasas.
- Fermentan la glucosa y en su mayoría la lactosa (Excepto Hafnia spp,
Proteus spp, Salmonella spp, Shigella spp, Yersina spp.)
- Son aerobios o anaerobios facultativos.
- Reducen nitratos a nitritos.

EN COPROCULTIVO (DIARREA) IMPORTAN MÁS LAS

BACTERIAS LACTOSA NEGATIVO. EXCEPTO:

En el caso de Proteus spp. Es colonizadora normal del intestino, es lactosa positiva

para no está asociada a procesos diarreicos.

- Pared celular: Mureina, lipopolisacárido (Endotoxina), lipoproteínas,

fosfolípidos y proteínas como porinas.

- Muchos forman cápsulas, y muchos de ellos poseen pilis o fimbrias.

FACTORES DE VIRULENCIA:
- Cápsula: Antígeno K (Vi): Inhibición de la fagocitosis, Shigella spp,
Escherichia spp, Salmonella spp.
- Endotoxina Antígeno O
- Flagelo Antígeno H (Peritricos en su mayoría / flagelo polar).
- Antígeno factor de colonización de las fimbrias: CFA I y II.
- Fimbrias S y P.
- Resistencia a la acción bactericida del suero.
- Resistencia a los antimicrobianos.
- Exotoxinas.
ENTEROBACTERIAS.
Las enterobacterias se dividen en dos grupos:

1) Patógenos primarios
2) Patógenos oportunistas

(Klebsiella spp. y Escherichia spp. se ubican entre ambas clases de

patógenos.)

Patógenos primarios:
 - E. coli enteropatógena
- Salmonella entérica
- Shigella: boydi, dysenteriae, flexneri, sonnei.
- Yersinia enterocolítica, pestis, pseudotuberculosis.

Oportunistas: El resto de los patógenos.

- Ampliamente distribuidos en la naturaleza y son de flora normal.

- Significancia clínica: Son causantes de infecciones intestinales y
extraintestinales/ infecciones nosocomiales/ adquiridas en la comunidad/
exógeno y endógeno.
- Resistencia microbiana (BLEE, Carbapenemasas)

FACTORES PREDISPONENTES:

Locales:

- Intubación de la tráquea
- Litiasis renal.
- Sondas urinarias.
- Dispositivos intrauterinos.
- Litiasis vesicular.
- Perforación intestinal.
- Catéteres vasculares.
ENFERMEDADES QUE FACILITAN INFECCIONES
OPORTUNISTAS:

1) Diabetes
2) Cirrosis hepática
3) Hemopatías malignas
4) Insuficiencia renal.
5) Pacientes que reciben tratamientos prolongados con corticoides.
6) Pacientes con SIDA
7) Neonatos.
Escherichia coli:
Fue descrita en 1885 por Theodor Von Escherich.

Producen colonias con brillo metálico (no todas).

E. coli ENTEROPATÓGENA:
 Escherichia coli enteropatogenas

Serotipo Lugar de Acción Infección Patogenia

E. coli ID Diarrea del viajero Enterotoxina TL y

enterotoxigenica o infantil TE CFA I y II

E. coli IG Cuadro disentérico Adherencia

enteroinvasiva Destrucción de
células epiteliales

E. coli ID Diarrea infantil Destrucción de

enteropatogena células epiteliales

E. coli IG Colitis verotoxina

enterohemorragica hemorragica

E. coli ID Diarrea infantil Adherencia

enteroagregativa persistente agregativa

Escherichia coli productora de diarrea

No Invasiva Invasiva

Enteropatogena Enterotoxigenica No toxigenica Toxigenica

Citotoxina similar a
EHEC EPEC LT ST shiga inhibe la
Termolábil Termoestable
AMPc AMPc síntesis proteica
VT

SINTOMAS

- Vómito
- Diarrea
- Dolor Abdominal
- Fiebre
 - Pérdida de electrolitos que conduce a la deshidratación.

PUERTA DE ENTRADA: Boca.

PUERTA DE SALIDA: Recto.

INFECCIONES DEL APARATO URINARIO:

E. coli, causa más común de infección del aparato urinario (90% de

infecciones primarias en jóvenes sexualmente activas).

E. coli nefropatogénica produce hemolisina.

SEPTICEMIA:

Cuando las defensas normales del hospedero sin inadecuadas. E coli puede
producir septicemia.

Los recién nacidos son más susceptibles a septicemia por E. coli.

La septicemia puede ser consecuencia de infección en el aparato urinario.

MENINGITIS:

E. coli, causa principal de meningitis en lactantes.

Cepas de E. coli poseen el Antígeno K1.

INFECCIONES RESPIRATORIAS:

Oportunista en pacientes debilitados o inmunodeprimido (adquisición

nosocomial)

INFECCIONES INTRAABDOMINALES:

Se asila de pacientes con apendicitis perforadas (peritonitis), abscesos

secundarios a Diverticulitis.

DIAGNÓSTICO:

1) Clínica y epidemiología
2) Toma correcta de la muestra clínica
3) Medios de transporte adecuados: Stuart Modificado o Cary Blair, para
heces.
EXAMEN DIRECTO:
Gram excepto a las heces.
 Azul de metileno para leucocitos fecales.
Cultivo en medios selectivos y no selectivos Pruebas bioquímicas.
Pruebas de susceptibilidad.
Producción de INDOL +
ROJO DE METILO +
CITRATO DE SIMMONS -
PRODUCCIÓN DE H2S -
Presencia de UREASA -
FENILALANINA -
DESAMINASA
LISINA DESCARBOXILASA +/- (Tardío)
ARGININA DIHIDROLASA -
ORNITINA +/-
DESCARBOXILASA
MOTILIDAD -
Fermentación de LACTOSA +/-
Fermentación de SACAROSA -
Fermentación de MANITOL +
Fermentación de TREHALOSA +
Presencia de OXIDASA -
Producción de DNAsa -
NITRATO - NITRITO +
VOGES PROSKAUER +
TREHALOSA +

CRITERIOS:
Colonias brillo metálico.
Fermentadoras tardías de la lactosa o no fermentadoras.
No produce H2S (Kligler: Taco amarillo/Bisel rojo)
Pruebas fundamentales:

- Rojo de Metilo
- Indol
- Trehalosa
- Lactosa
- Citrato (Lo diferencia de Citrobacter spp.)
- Ureasa
- Voges Proskauer

ESQUEMA DE TRABAJO: E. COLI.

Tipo de muestra: Diarrea tipo secretora o invasiva (Se enriquece en caldo

tetrationato), LCR (recién nacidos), SANGRE/hemocultivo (recién
 nacidos), ORINA (se siembra directamente en agar).
1) Sembrar en agar: Sangre, EMB de Levine, Mc Conckey, SS.
2) Incubar durante 24h (35ºC).

Características Macroscópicas Características microscópicas:

- Colonias Brillo metálico - Bacilos gram negativo.

(Lactosa negativo)
Pruebas bioquímicas

Antibiograma.

1) Diferenciar Microorganismos Típicos:

- Bacilos gram negativos pequeños cortos
- Capsulas grandes e irregulares de Klebsiella, menos en Enterobacter, y
poco común en otras especies.
- Cultivo: Análisis macroscópico: Forman colonias lisas, circulares,
convexas, con bordes bien diferenciados.
- Características de crecimiento/Diferenciación bioquímica:
• Patrones de fermentación de los CHO
• Actividad de los aminoácidos descarboxilasas y otras enzimas.
- Características de Crecimiento:
• Cultivo en medios diferenciales con colorantes y CHO. Distinguen
colonias fermentadoras de lactosa (PIGMENTADAS) de las no
fermentadoras (NO PIGMENTADAS).
• Medio de Agar Triple Hierro (TSI): Permite diferenciar a los
bacilos gram negativos entéricos.
- Medios de cultivo de elección para aislamiento de bacilos
entéricos:
• Medios diferenciales: Permiten el desarrollo de la mayor parte de
las especies.
• Agar Mc. Conckey.
• Agar Eosina Azul de Metileno
• Agar Xilosa, lisina, desoxicolato (XLD).
TRATAMIENTO:

No se dispone de una terapia especifica / Sulfonamidas, ampicilinas,

 Cefalosporinas, Fluoroquinolonas, y aminoglucósidos. Indispensable realizar
pruebas de susceptibilidad.
PREVENCIÓN:

Lavado de manos

Asepsia rigurosa, sobre todo en personal de salud.

Esterilización de equipos

Desinfección

Cuidados del aparato genitourinario.

ENTEROBACTERIAS OPORTUNISTAS:

Enpacientes hospitalizados: Son causantes de brotes epidémicos.

Transmisión a través del personal sanitario.

En pacientes de la comunidad: Están relacionados con infecciones del tracto

urinario, entre otras.

En pacientes hospitalizados inmunocomprometidos en hospitales

provocan:

- Neumonías
- Sepsis
- Meningitis
- Absesos abdominales
- Infecciones urinarias.
- Infecciones en heridas expuestas.
- Lesiones del tracto digestivo inferior y rotura de apéndice: Materia fecal
se disemina y provoca infecciones (peritonitis).

Factores relacionados con auge hospitalario:

- Uso de técnicas de diagnóstico y terapias agresivas

- Estancia hospitalaria prolongada
- Desarrollo de resistencia
- Enfermedades predisponentes: Hematológicas, neoplasias, cirrosis
hepáticas, leucemias, hematopatías malignas, diabetes.

Klebsiella spp.
Actúa como patógeno primario y como oportunista.

- Produce colonias mucosas a las 24h de la siembra en medio de cultivo.

Productora de mucopolisacárido/ Cápsula prominente.

En Agar EMB de Levine fermenta la lactosa, y presenta un color púrpura

alrededor de las colonias en el agar.

- 100% inmóviles (MIO negativo)

- Encapsulados
- Fermentador rápido de la lactosa (Kligler taco amarillo)
- Ureasa positivo
- Citrato positivo.

FACTORES RELACIONADOS VIRULENCIA KLEBSIELLA:

- Sobrevivencia en ambientes hospitalarios (Resistencia a

antimicrobianos de uso común).
- Capsula C
- Fimbrias que median la adherencia.
- Adhesinas no fimbriales.
- Lipopolisacáridos
- Exotoxinas.

CAPSULA (Atgo K): Está relacionada directamente con su virulencia. Es gruesa y

de aspecto mucoide, impide la fagocitosis, y retrasa la migración de leucocitos
hacia el área de infección/ interviene con citoquinas.
TIPOS DE INFECCIÓN: Origina especialmente:

- Bacteriemias
- Infecciones urinarias
- Neumonías.

Es responsable del 14% de las infecciones intrahospitalarias.

En casos de DIARREA:

Propiedades enteroagregativas similares a las de E. coli; es decir:

- Se produce en intestino delgado

- Es responsable de diarrea infantil persistente
- Adherencia agregativa.

CRITERIOS PARA IDENTIFICAR A KLEBSIELLA COMO AGENTE CAUSAL

 DE DIARREA:

- La muestra proviene de niños menores de 2 años.

- Cuando la muestra es sembrada en agar, el crecimiento bacteriano de las
colonias de Klebsiella superan el 50%.
- Estudios virales y parasitarios negativos.
- No se encontraron bacterias productoras de diarrea propiamente.

Se hace la aclaración: Se aisló Klebsiella ocupando más del 50% de las

colonias bacterianas de la muestra.

Por su propiedad enteroagregativa similar a la de E. coli ha sido considerada como

causante atípica de diarrea.

ESPECIES DE Klebsiella:

- K. pneumoniae
- K. oxitoca (diarreas en niños)
- K. Ozaneae (infecciones en cara)
- K. rhinoescleromatis (infecciones en cara).
En caso de NEUMONÍA: Los infectados por K. pneumoniae poseen una
enfermedad de base o preexistente (inmunocomprometidos):

- Población susceptible
- Pacientes con fibrosis quística
- Alcohólicos (Broncoaspiración de saliva, que fluya hacia el pulmón y las
bacterias presentes en la saliva causan la infección).
- Esplenectomizados (al igual que en el caso de S. pneumoniae, también son
presa fácil de adquirir infección por K. pneumoniae.)

ANTIBIOGRAMA:

Fármacos para antibiograma:

- AMC: Amoxicilina/ácido clavulánico (Centro del agar Müller-Hinton)

- IMP: Imipenem
- CRO: Cefoperazona
- CAZ: Ceftazidima
- PIP: Piperacilina
- AMX: Amoxicilina
- TIC: Ticarcilina
Sinergia entre AMC e IMP indica la presencia de BLEE.

K. pneumoniae COMO PRODUCTORA DE INFECCIONES URINARIAS:

- Pacientes con obstrucción de las vías urinarias (Litiasis renal)

- Diabetes
- Pacientes tratados con antibioticoterapia.

NEUMONÍA:

- Más frecuente en pacientes hospitalizados (A diferencia de S. pneumoniae

que es el principal agente causal de neumonía de la comunidad, K.
pneumoniae es el principal agente causal a nivel intrahospitalario)
- Pacientes con enfermedades pulmonares preexistentes (EPOC)
- Alcohólicos
- Inmunocomprometimiento.
- Diabéticos

Cuando una muestra de esputo en caso de neumonía por K. pneumoniae llega

al laboratorio, posee una consistencia gelatinosa e incluso restos de sangre.

OTRAS ENFERMEDADES QUE PUEDE PRODUCIR:

- Peritonitis
- Otitis media crónica
- Cistitis
- Mastoiditis crónica Produce colonias grandes de consistencia mucoide con excesiva filancia.
Fermentadoras de la lactosa:
- Meningitis.
-Se aprecian con pigmentación rosada alrededor de las colonias en agar M
UREASA POSITIVA.

Pruebas Bioquímicas K. oxytoca K. pneumoniae

Producción de INDOL + -
ROJO DE METILO - -
CITRATO DE SIMMONS + +
Producción de H2S - -
UREASA + +
FENILALANINA DESAMINASA - -
 LISINA DESCARBOXILASA + -
ARGININA DIHIDROLASA - -
ORNITINA DESCARBOXILASA - -
MOTILIDAD - -
Fermentación de LACTOSA + +
Fermentación de SACAROSA + +
Fermentación de MANITOL + +
Fermentación de TREHALOSA + +
NITRATO – NITRITO + +
OXIDASA DE KOVAC - -
DNAsa - -
VOGES PROSKAUER + +

ESQUEMA DE TRABAJO Klebsiella spp.

Muestra: Esputo (con sangre/característica clásica de neumonía por

Klebsiella), Sangre (hemocultivo), Orina (paciente inmunocomprometido
/obstrucción de las vías renales/ orina se siembra directamente en agar).

Sembrar en agar: Sangre, EMB de Levine, Mc. Conckey (Aerobiosis o

anaerobiosis/ 35ºC /24h).

Características Macroscópicas Características Microscópicas.

- Colonias grandes redondas - Bacilos Gram negativos

 - Mucosas con mucha filancia
- Lactosa positiva:
o Rojo/Mc.Conckey.
o Púrpura/EMB de Levine

Pruebas Bioquímicas:

- Kligler (Taco y Bisel Amarillos)

- Ureasa (Positiva/Fucsia)
- MIO (Motilidad/Indol/Orinitina):
o Motilidad: 100%Negativa
o Indol: Negativo
o Ornitina: Negativa (Lo diferencia de Enterobacter spp.)
- Citrato: Positivo
- Lisina: Positiva
- Arginina: Negativa
- Fenilalanina: Positiva.
Antibiograma:

- Amoxicilina / Ac. Clavulanico

- Imipenem
- Cefoperaxona
- Ceftazidima
- Piperacilina
- Amoxicilina
- Ticarcilina.
NOTAS:

- Klebsiella oxytoca se aisla en casos de diarrea en niños menores de 2 años

cuando no se encuentra ningún otro agente bacteriano causante de forma
típica de diarrea. (Indol + a diferencia de K. pneumoniae).
- Se sospecha de neumonía en pacientes hospitalizados, alcoholicos,
inmunosuprimidos o con enfermedades de base, esplenectomizados.
ENTEROBACTER:

TODOS BACILOS GRAM NEGATIVOS.

Se diferencian en las colonias.

SON SIMILARES A LAS COLONIAS DE Klebsiella. Se diferencian en que las
colonias de Klebsiella son muy gelatinosas y mucoides.

El género Enterobacter incluye 14 especies o biogrupos, entre los cuales:

- E. cloacae
- E. aerogenes

Son los más frecuentes en casos de infecciones intrahospitalarias (son más

fáciles de aislar en ese medio).

TIPOS DE INFECCIÓN:

Infecciones en cualquier localización del cuerpo.

- En pacientes tratados con antibióticos de amplio espectro, más

especialmente cefalosporinas.
- Presentan múltiples mecanismos de resistencia a Betalactámicos.
- Son móviles a diferencia de Klebsiella.
- Prueba de Motilidad en medio MIO O ZING POSITIVA.

Son causantes de brotes epidémicos asociados a los procesos de la salud.

Produciendo patologías tales como:

 Bacteriemias.
 Neumonía,
 Infecciones urinarias
 Infecciones de heridas quirúrgicas

Se propagan a través de las manos del personal sanitario.

EN AGAR MC. CONCKEY, SI LA COLONIA BACTERIANA
FERMENTA LA LACTOSA, ALREDEDOR DE LA COLONIA SE
FORMA UN HALO ROSADO. En caso de que no fermente la lactosa, el halo
será trasparente.

EN AGAR EMB DE LEVINE FORMAN UN HALO MORADO

(Alrededor de las colonias si fermentan la lactosa).

Pruebas Bioquímicas E. cloacae E. aerogenes

INDOL - -
ROJO DE METILO - -
CITRATO DE SIMMONS + +
VOGES PROSKAUER + +
PRODUCCIÓN DE H2S - -
 UREASA +/- -
LISINA DESCARBOXILASA - +
ARGININA DIHIDROLASA + -
ORNITINA DESCARBOXILASA + +
MOTILIDAD + +
FERMENTACIÓN DE LACTOSA + +
FERMENTACIÓN DE SACAROSA + +
OXIDASA - -

ESQUEMA DE TRABAJO DE Enterobacter spp.

Muestra: Sangre/ LCR/ Orina / Esputo (neumonía intrahospitalaria) /

muestras de heridas.

Se siembra en agar: Sangre, EMB de Levine, Mc. Conckey, SS

(Aerobiosis/anaerobiosis/ 24hrs /35ºC)

Características Macroscópicas Características Microscópicas

- Colonias muy mucosas - Bacilos gram negativos

- Lactosa positivo (M.C./EMB)

Pruebas Bioquímicas (Más relevantes):

- Kligler (Fondo amarillo y bisel amarillo)

- Rojo de metilo: Negativo
- Indol: Negativo
- Motilidad: Negativa
- Voges Proskauer: Positiva
- Ureasa: Negativa (tardíamente positiva).
- Citrato: Positivo
- Ornitina: Positiva
- Arginina / Lisina (Ver cuadro de pruebas bioquímicas/Diferenciación de
especies).

Realizar antibiograma: Resistencia a Penicilinas y Cefalosporinas.

 Productores de Betalactamasas.
Serratia spp:

Genero bacteriano oportunista.

Bacilos gram negativos.

Desarrolla colonias pigmentadas (productoras de pigmento).

Pigmento rojo: Prodigiosina.

Forma colonias rojas, naranja o rubí en Agar Mc. Conckey.

CITRATO POSITIVO

FERMENTADORA LENTA DE LA LACTOSA (+24H)

ESPECIES:

- S. marcescens
- S. rubidea

Se desarrollan mejor en ANAEROBIOSIS

FACTORES DE VIRULENCIA:

- DNAsa
- Gelatinasa
- Lipasa.

ASOCIADO A INFECCIONES INTRAHOSPITALARIAS EN FORMA DE

BROTES EPIDÉMICOS.

Posee múltiples mecanismos de resistencia.

LA MAYORIA DE LAS INFECCIONES PRODUCIDAS POR

SERRATIA:

Pacientes hospitalizados:

- Infecciones urinarias, meningitis, peritonitis.

- Infecciones como osteomielitis, artritis séptica, endocarditis.

Infecciones como linfadenitis, e infecciones cutáneas.

TIENE RESISTENCIA NATURAL A LA POLIMIXINA B, lo que
constituye una forma de identificación, ya que actualmente no todas las cepas de
 Serratia tienen la capacidad de producir pigmento.
Posee resistencia primaria a numerosas penicilinas y cefalosporinas.

+/- el 10% de cepas de Serratia marcescens son resistentes a la:

- Cefotaxima,
- Ceftriaxona,
- Piperacilina/Tazobactam o sulbactam,
- Aminoglucósidos (Hepatotóxicos, hematotóxicos, nefrotóxicos, etc.)
- Fluoroquinolonas,
- Cotrimoxazol.

PREDISPOSICIÓN A LA INFECCIÓN:

- Enfermedades de base (TBC)

- Inmunosupresión
- Edad
- Uso de dispositivos intravasculares
- Soluciones parenterales contaminadas
- Drogadicción.

Pruebas Bioquímicas S. marcescens S. rubidea

INDOL - -
ROJO DE METILO + -
CITRATO DE SIMMONS + +
PRODUCCIÓN DE H2S - -
UREASA - -
FENILALANINA DESCARBOXILASA - -
LISINA DESCARBOXILASA + +
ARGININA HIDROLASA - -
ORNITINA DESCABOXILASA + -
MOTILIDAD + +
DNASA + +
LIPASA + +
GELATINASA + +
 OXIDASA - -
VOGES PROKAUER + +
FERMENTACIÓN DE TREHALOSA + +
FERMENTACIÓN DE LACTOSA +/- (tardío) + tardío
FERMENTACIÓN DE GLUCOSA - +
ESQUEMA DE TRABAJO: Serratia spp.

Muestra: Sangre / Orina y LCR (Se siembran directamente en agar) / Pus (se
realiza gram directo con ssf para diluir).

Se siembra en agar: Sangre, EMB de Levine, Mc. Conckey, SS (24hrs/35ºC

/ Anaerobiosis – se corta el agar).

Características macroscópicas: Características microscópicas:

- Colonias pigmentadas (Prodigiosina) - Bacilos gram negativos

Pruebas Bioquímicas:

- Kligler (Fondo rojo / Bisel amarillo)

- No producen H2S Se toman las colonias de Agar EMB de Levine para
- Indol: Negativo
- Rojo de metilo: Positivo
- Citrato: Positivo
- Ureasa: Negativo
- Fenilalanina/Arginina: Negativas Se sospecha de Serratia spp. en
- Lisina/Ornitina: Positivas casos de:
- Motilidad: Positiva
- Inmunocomprometidos
- Polimixina B: Resistente - Tuberculosis Drogadicción
-
- Soluciones parenterales
contaminadas.
Antibiograma: -Pacientes hospitalizados.

- Cefotaxima
- Ceftriaxona
- Piperacilina/Tazobactam/Sulbactam
- Aminoglucósidos
 - Fluoroquinolonas
- Cotrimoxazol
Citrobacter spp.
Mismo esquema de trabajo de E. coli. Se diferencia en Citrato de Simmons par

ESPECIES: Citrobacter freundii es productora de H2S y son lactosa positivo a diferencia de

Producen colonias brillo metálico.
- C. freundii
- C. diversus
- C. amalonticus.

COLONIAS CON BRILLO METALICO EN AGAR EMB DE LEVINE y HALO

PÚRPURA PORQUE FERMENTA LA LACTOSA.

En AGAR MC CONCKEY PRODUCE HALO ROSADO fuerte, cepas con brillo

metálico.

LACTOSA POSITIVO (A veces de forma tardía).

CITRATO POSITIVO, A DIFERENCIA DE E. coli. Esta es la prueba que

diferencia a ambas cepas bacterianas, que macroscópicamente son muy
parecidas.

Se parece en colonias a la Escherichia coli en que sus colonias producen

o lucen con brillo metálico.

Produce H2S (Sólo y ESPECÍFACAMENTE Citrobacter freundii). Taco negro

en Kligler.

En AGAR SS (Salmonella-Shigella) se forman colonias negras por acción

del H2S de Citrobacter freundii.

TIPOS DE INFECCIÓN:

- Infecciones urinarias
- Infecciones en heridas.
- Infecciones en neonatos (sólo Citrobacter diversus) meningitis y
absesos cerebrales.

En niños, si se presentan infecciones urinarias, lo primero que se plantea es deformación de

las vías urinarias.
 Proteae:
Los principales patógenos humanos son:

- P. vulgaris
- P. mirabilis

Antes éstos pertenecían a este género:

- Morganella morgani
- Providencia stuarti; P. rettigeri; P. alalifaciens

FERMENTADOR TARDÍA O DE LA LACTOSA

PRODUCE H2S (Taco negro en Kligler)

UREASA POSITIVO. Tienen la enzima ureasa en gran cantidad, tanto que cuando
están como agente causales de infecciones urinarias alcalinizan la orina por la
liberación de aminas por descarboxilación).

MUY MOVIL (MIO POSITIVO)

CITRATO POSITIVO

Proteus en agar sangre produce un oleaje o efecto Swarmi:

Se debe a que las bacterias del género Proteus son móviles y buscan
unirse o adherirse entre ellas y forman este efecto.
Provoca la precipitación de sales amoniacales por alcalinización,
induciendo la formación de cálculos urinarios.

Proteus: Causante de PIE DIABETICO (la más frecuente).

- Providencia Producen mismo tipo de infección que
- Morganella Proteus.

Pruebas Bioquímicas P. mirabilis P. vulgaris

INDOL - +
ROJO DE METILO + +
CITRATO DE SIMMONS + -
PRODUCCIÓN DE H2S + +
OXIDACIÓN DE LA GLUCOSA + +
FERMENTACIÓN DE LACTOSA - -
VOGES PROSKAUER +/- -
 UREASA + +
FENILALANINA DESAMINASA + +
LISINA DESCARBOXILASA - -
ARGININA HIDROLASA - -
ORNITINA DESCARBOXILASA + -
MOTILIDAD + +
TREHALOSA + -
DNASA +/- +
OXIDASA - -
LIPASA + +/-

- Proteus mirabilis: Causante de infecciones urinarias y heridas. Más

frecuentemente aislada en seres humanos. Sensible a ampicilina y
cefalosporinas.

- Proteus vulgaris: Resistente a ampicilina y cefalosporinas. Causante de

infección en pacientes inmunosuprimidos e inmunocomprometidos.

ESQUEMA DE TRABAJO Proteus spp.

Tipo de muestra: Orina /Muestras de heridas.

Se siembra en agar: Sangre/chocolate, Mc. Conckey, EMB de Levine, SS. (24hrs /

Aerobiosis o anaerobiosis).

Características macroscópicas Características Microscópicas

- Colonias pequeñas redondas - Bacilos gram negativos

- Efecto Swarmi
- Colonias agrupadas
- Mucoides/filancia.
- Olor característico
- Rojo: Mc.C. /Púrpuras: EMB

Pruebas bioquímicas (se toman colonias de EMB de Levine).

- Kligler
- Indol
- Fenilalanina/ureasa (alcalinizan fuertemente el medio).
- Motilidad
 - Citrato
- Ornitina.
Plesiomonas shigeloide
Hábitat:

Intestino de animales acuáticos (agua salada):

- Invertebrados acuáticos
- Anfibios

Anteriormente pertenecía a la familia Vibrionaceae.

UNICA ENTEROBACTERIA OXIDASA POSITIVA.

- Aerobios y anaerobios facultativa

- Nitrato positivo
- Catalasa positivo.
- Presenta algunos flagelos polares (anfitrico)

LAS ENTEROBACTERIAS EN GENERAL SON CATALSA POSITIVAS.

Presentan reacción cruzada con algunos tipos de Shigella, de ahí deriva su

nombre.

- No halófila (No habita en lugares con concentraciones de sal)

- Sensible al compuesto O/129 (Se utiliza para identificación).
- DESCARBOXILA :
 Arginina
 Lisina
 Ornitina.
- Sus mecanismos de enteropatogenicidad aún no se han determinado.

FACTORES DE VIRULENCIA:

- Enterotoxina parecida a la de Vibrio cholerae.

- ÚNICA ENTEROBACTERIA DE INTERES CLÍNICO, JUNTO CON E.
coli, QUE ES PRODUCTORA DE DIARREA, por ambos
mecanismos (toxigénico/secretor e invasivo)

Diarrea Toxigénica o Secretora: Acuosa.

Diarrea Invasiva: Moco o sangre.

FACTORES DE VIRULENCIA:
 - Enterotoxina
- Citolisina
- Hemolisina
- Elastina
- Plásmido >120MD.

PRODUCE DIARREA 4-6 DÍAS.

Produce Colitis pseudomembranosa si la diarrea es benigna.

Diarrea relacionada con el:

- Consumo de aguas contaminadas

- Natación en agua contaminadas
- Consumo de alimentos acuáticos contaminados.
- Cortadas y heridas en manipulación de animales acuáticos.
- Heridas, úlceras y quemaduras en contacto con agua o animales
contaminados.
- Países de clima tropical o cálido.

PUEDE PRODUCIR:

- Septicemia en pacientes con sistema inmune debilitado.

- Colitis
- Osteomielitis
- Síntomas parecidos a la apendicitis.
- Meningitis.

DIAGNÓSTICO:

MUESTRA: Cualquier tipo en cualquier parte del cuerpo Relacionado

con el proceso infeccioso del paciente.

Inoculación en: TINCIÓN DE GRAM

Agar Sangre, Chocolate. A partir de la muestra:

Agar EMB de Levine o - Polimorfonucleares,

Agar Mc. Conckey. - Bacilos Gram (-)

Caldo Thioglycolato.

Incubación: 24h/ 35oC

Observar Características de colonias. Tinción GRAM (colonias)

Bacilos Gram (-)

Identificación Bioquímica.

- Catalasa positivos
- Ureasa positivos
- MIO positivos
- Arginina, lisina, ornitina positivos.
- CITRATO POSITIVA (UNICA)
- Sensible a O/129

P. shigeloide.

ANTIBIOGRAMA (CIM)

EXTRA: ¿UNA MUESTRA DE ORINA SE SIEMBRA EN UN CALDO?

NO. Necesitamos trabajar directamente con la muestra de orina. Conocer

carga bacteriana (cuantas colonias crecieron), y porcentaje de
polimorfonucleares.
Salmonella, Shigella, Yersinia
Patógenos primarios.
Están relacionados con procesos diarreicos.
Salmonella spp:
Sus infecciones se asocian al consumo de alimentos mal cocidos o mal procesados,
aguas contaminadas, y consumo de detritos humanos o animales.

TAXONOMÍA: Con el tiempo, sólo habrá S. entérica y el resto serán

subespecies.

- S. bongoni
- S. entérica
- S. typhi.

CARÁCTER´SITICAS:

- Bacilos Gram negativos.

- En su mayoría son móviles (Mio positivo)
- Producen ácidos y gas a partir de Glucosa (fermentación acido mixta)
 OF- glucosa
 Of – Xilosa
 Of – Maltosa POSITIVOS
 Rojo de metilo
 Voges Proskauer
- MANITOL Y RIBITOL POSITIVAS.
- Agar XLD: Colonias negra por producción de H2S
- UREASA NEGATIVO
- Fenilalanina negativo ( no contiene enzima desaminasa).
- Producen H2S (Kligler taco negro) EXCEPTO Salmonella typhi
UNICA QUE produce ácido sin fermentar.
- Presentan antígenos somáticos y flagelares (Clasificación bacteriana).
- Desarrollo similar al del Género Proteus.

ANTÍGENOS SOMÁTICOS: Grupos:

- Antígeno O ubicación en grupos sobre la base de la bacteria (A, B, C1,C1,

D, E)

ANTÍGENOS FLAGELAR: Serotipos:

 - H (A1, A1, B1, B2)

ANTIGENOS CAPSULARES (VI)

ANTÍGENO DE FIMBRIAS.

RESERVORIO:

Cualquier animal.

FACTORES DE VIRULENCIA

- Capsula (Antígeno Vi)

- Respuesta a estímulos ambientales
 Resiste ácidos (resiste pH ácido estomacal)
 Resiste frío.
- Plásmidos: Crecimiento y vida intracelular, resistencia a factores
bactericidas del suero, y adherencia.
- Factores cromosómicos: Invasinas: Permiten a la bacteria invadir el lugar
en donde van a causar el daño.
- Enterotoxina: Aumenta la producción de AMPc (Enterotoxina
similar a la toxina Termolábil (LT) de E. coli.).
- Citotoxinas: Afecta síntesis proteica, produciendo ruptura del epitelio
gastrointestinal permitiendo la penetración y propagación.
- LPS: Supervivencia de la bacteria, permite la filtración a través de la
mucosa gástrica. Resistencia a las propiedades bactericidas del suero.
Impide la fagocitosis.
- Sideróforos: Captación de Fe.
- Flagelos polares (> invasividad).
- Proteína de Shock Térmico: Permite la supervivencia a los
macrófagos).
- Tres tipos de Adhesinas.
TIPOS DE INFECCIÓN:

Periodo de incubación: 12-72h

Puede presentarse en dos formas:

- Especies diferentes a S. typhi pueden producir enterocolitis y diarrea.

- S. typhi produce la fiebre tifoidea.
En ambas presentaciones el género produce septicemia.

FIEBRE TIFOIDEA:

Infección producida por Salmonella Typhi.

Único reservorio de S. typhi es el hombre.

Se observa más en edad escolar y poco frecuente en preescolar.

Tamaño del inoculo: 105 y 109 bacterias. (Muy Grande)

PRIMERA SEMANA:

- Elevación lenta y progresiva de la temperatura (aparece y reaparece/ fiebre

ondulante).
- Bradicardia.
- Malestar general.
- Dolor de cabeza en área frontal.
- Tos.
- Leucopenia y leucocitosis.

Al principio el paciente no nota la infección porque puede manifestarse con un

ligero estreñimiento, antes de la llegada de la diarrea.

SEGUNDA SEMANA:

- Hay postración.
- La fiebre en 40oC.
- Bradicardia.
- Se observan puntos rojos diseminados tórax y abdomen (Característico de la
fiebre tifoidea).
- Abdomen distendido y dolorido en cuadrante derecho inferior.
- Hay esplenomegalia
- Hepatomegalia (hígado inflamado).

Esta bacteria puede albergarse en bazo o vesícula biliar, incluso en

portadores (se recomienda extracción de vesícula en portadores):

En la segunda semana se toma sangre, se separa el suero para serología:

- Se separa el suero para serología: Determinar si tiene anticuerpos para

Salmonella.
- Sangre para hemocultivo.
TERCERA SEMANA:

- Fiebre elevada (continúa)/Hospitalización.

- Si no se trata al paciente pueden ocurrir complicaciones tales como:
 Hemorragias intestinales por congestión de las Placas de
Peyer.
 Perforación intestinal (a nivel del íleon).
 Puede dar lugar a la peritonitis.
 Abscesos que pueden (entrar al torrente sanguíneo) tonarse a:
encefalitis, colecistitis y endocarditis.
o Si el paciente se cura, puede quedar en estado de portador.
- Al final de la tercera semana, inicios de la cuarta, se vuelve a tomar
suero de la muestra de sangre para determinar Anticuerpos contra
Salmonella.

PARA SEROLOGÍAS SE DEBE:

- Muestra basal: Al inicio de la primera semana.

- Muestra avanzada: Quince días luego del inicio de la enfermedad.

MUESTRA SEGÚN LA CURVA DE ENFERMEDAD TIFOIDEA:

- Hemocultivo: Positivo durante la primera semana en el 80% de los casos.

- Mielocultivo (Médula ósea) Positivo en el 90% de los casos.
- Coprocultivo: Positivo al final de la primera semana (porque al
principio el paciente puede debutar con estreñimiento).
- Urocultivo: Positividad en la primera semana.
- Cultivo de aspirado duodenal: Sospecha de portadores.
- También se pueden hacer cultivos de las rosetas propias de la Salmonella
en la segunda semana de manifestación de la enfermedad.

SALMONELOSIS:

Es una enterocolitis: Diarrea común, nauseas, vómitos, dolor abdominal.

Diarrea mucosa (mecanismo invasivo). No se ofrece antibioticoterapia, ya que las

diarreas bacterianas son autoreguladas.
 Pruebas Bioquímicas S. typhi S. bongori
CITRATO DE SIMMONS - +
PRODUCCIÓN DE H2S + (leve) -
ORNITINA DESCARBOXILASA - +
PRODUCCIÓN DE GAS/GLUCOSA - +
LACTOSA - -
GLUCOSA - +
SACAROSA - +
UREASA - -
MOTILIDAD + +
OF – GLUCOSA + +
OF – XILOSA + +
OF – MALTOSA + +
ROJO DE METILO + +
VOGES PROSKAUER + +
MANITOL + +
RIBITOL + +
FENILALANINA DESAMINASA - -
INDOL - -
ARGININA DIHIDROLASA - +
CRECIMIENTO EN KCN - +
ESQUEMA DE TRABAJO DE Salmonella spp.

Muestra: Heces (Enriquecimiento en caldo tetrationato) / Sangre

(hemocultivo) / LCR (Mielocultivo) /Rocetas (segunda semana F. tifoidea).

Sembrar en agar: Mc. Conckey, EMB de Levine, Verde Brillante,

Salmonella – Shigella, XLD (35ºC/24hrs).

Características Microscópicas: Bacilos Gram negativos.

Características Macroscópicas:

- Agar Mc. Conckey (Colonias transparentes: No fermentan la lactosa).

- Agar EMB de Levine: Colonias transparentes, pequeñas, lisas.
- Agar SS: Traslúcidas, opacas, negruzcas alrededor de S. typhi por
producción de H2S.
- Agar XLD: Pigmentación ROSA/ROJA con centro negruzco.
- Agar Verde Brillante: Inhibe S. typhi. Las colonias se observan blancas, o
 transparentes sobre fondo rojo (contiene rojo fenol que vira de color cuando
hay fermentación de carbohidratos).

Pruebas Bioquímicas (Diferenciación entre especies):

- Producción de H2S
- Sacarosa
- Citrato
- Arginina
- Ornitina

Antibiograma:

- Penicilinas
- Cloranfenicol
- Tetraciclinas
- TMZ
- Nitrofuranos
- Quinolonas
- Cefalosporinas

Pruebas Serológicas (Fiebre tifoidea / Antisueros)

- Basal
- Avanzada
- Tercera semana
NOTAS:

Salmonella Typhi: Único reservorio es el humano. Causante de Fiebre Tifoidea.

Salmonella entérica y Salmonella bongori: Productoras de enterocolitis. No se

necesita terapia antibiótica.

TIPOS DE INFECCIÓN:

1) Fiebre tifoidea: Muestras serológicas para reacciones de aglutinación con

antisueros para Salmonella typhi.
a. Muestra basal: Al inicio de los síntomas
b. Muestra avanzada: A los 15 días de manifestar la enfermedad.
c. Tercera semana del transcurso de la enfermedad.
2) Enterocolitis: Diarrea común, nauseas, vómitos, dolor abdominal, diarrea
mucosa (mecanismo invasivo).
 a. Enterotoxina termolábil similar a ETEC/LT. Producción de
anticuerpos. Activa AMPc.
b. Citotoxinas: Ruptura del epitelio intestinal.
c. Invasivas: Invasión del epitelio gastrointestinal.
3) Septicemia por S. typhi, S. entérica, S. bongori ()hemocultivo).
4) Meningitis: Mielocultivo.

Tamaño del inoculo: 105 y 109 bacterias.

MEDIOS DE CULTIVOS:

- Medios selectivos: Seleccionan e inhiben.

o EMB de Levine: Eosina, azul de metileno/ Inhibe gram +.
o Mc. Conckey: Rojo neutro y sales biliares / Inhibe gram +
o Desoxicolato: Inhibe gram +

- Medios diferenciales: Diferencia a bacterias por su metabolismo.

o XLD: Xilosa, lisina Desoxicolato / aislamiento e identificación de
enterobacterias; diferencia principalmente entre Salmonella y
Shigella.
o Salmonella – Shigella: Sales biliares y verde brillante. Inhibe gram
+ y Proteus spp.
 Salmonella: Colonias traslucidas, ocasionalmente opacas, con
centro negruzco por producción de H2S (únicamente
S. typhi.
 Shigella: Colonias trasparentes, traslucidas, opacas, lisas.
o Verde brillante: Diferencia entre especies de Salmonella. Inhibe el
crecimiento de S. typhi.

E.coliproductoradetoxina SHIGA/STEC. Toxina Shiga causante de:

Shigella spp:
Colitis hemorrágica
Insuficiencia renal.
Anemia hemolítica.
Bacilo Gram negativo Síndrome hemolítico urémico.

Productora de diarrea.
 Inmóvil.

Aerobio y anaerobio facultativo.

No posee enzima descarboxilasa (lisina, ornitina y arginina negativos)

Lactosa negativo (Kligler bisel rojo, taco amarillo)

Fermenta glucosa sin producción de gas.

ESTA MUY RELACIONADO CON E. coli ENTEROINVASIVA.

- Intestino Grueso
- Produce cuadro disentérico
- Sus toxinas destruyen a las células epiteliales invadiendo los tejidos.

Son sensibles a condiciones adversas:

 Es lábil a los ácidos, sales biliares, desecación.

 Sensible al frio.

LA MUESTRA DE HECES PARA DETERMINACIÓN DE SHIGELLA DEBE

PROCESARSE DE INMEDIATO PARA EVITAR SU LISIS POR
LAS CONDICIONES ADVERSAS DEL MEDIO, los ácidos producidos por otras
bacterias pueden lisar a Shigella.

Se mantiene a temperatura ambiente durante meses.

ESPECIES:

- S. dysenteriae Producen diarrea invasiva, y lo que se conoce como

- S. flexneri. DISENTERÍA.
- S. boydi.
- S. sonnei.

(Están en orden de patogenicidad desde mayor a menor).

GASTROENTERITIS:

La Shigella no atraviesa la lamina propia, quedándose así en el intestino. No pasa a la

sangre y NO PRODUCE SEPSIS.

Se encuentra más que todo en agua.

SIGNOS Y SINTOMAS:
 - Incubación de 1-7 días.
- En algunas personas sólo se presentan deposiciones blandas.
- Disentería bacilar (diarrea con moco y sangre)
LA DISENTERÍA BACILAR ES CONSECUENCIA DE FACTORES DE VIRULENCIA:

1) Adherencia e invasión de las células de la mucosa intestinal.

2) Citotoxinas que producen: Inflamación y ulceración (moco y sangre).
3) Toxinas: Shiga (Neurotoxina – produce convulsiones). Relacionado con
Síndrome Urémico Hemolítico (SUH).
4) Toxinas Shiga ET-1, Shiga ET-2
5) Lipopolisacárido.

HUMANO ES EL ÚNICO RESERVORIO DE Shigella.

TRANSMISIÓN:

Persona – Persona

Vehículos: Ingestión de fómites, aguas contaminadas, alimentos

contaminados.

TAMAÑO DEL INOCULO:

Inoculo pequeño: 100 a 200 células.

EPIDEMIOLOGÍA:

- Más frecuente en niños de 2 a 3 años.

- Diarreas autolimitadas o autoreguladas que duran entre 7-10 días (Sólo
hidratación del paciente).
AGARES:

- Agar SP ASS
- Agar Shigella SP XLD
- Agar Mc. Conckey.
IDENTIFICACIÓN DE Shigella spp.

TIPOS DE INFECCIÓN:

1) Disentería: S. flexneri y S. dysenteria / Diarrea invasiva con moco y

sangre. Enterotoxina similar a la de E. coli (STEC enteroinvasiva).
2) Gastroenteritis: S. boydi, S. sonnei.
3) Infecciones urinarias (Excepciones: inmunocomprometidos):
 4) Vulvovaginitis: S. flexneri /Secreción sanguinolenta que se confunde con
gonorrea.

Pruebas Bioquímicas S. S. flexneri S. boydi S. sonnei

dysenteria
INDOL - - - -
ROJO DE METILO + + + +
CITRATO - - - -
VOGES PROSKAUER - - - -
PRODUCCIÓN DE H2S - - - -
UREASA - - - -
SACAROSA - - - -
TREHALOSA + + + +
MANOSA + + + +
ORNITINA - - - +
MANITOL - + + +
MALTOSA - - - +
MOTILIDAD - - - -

Diferenciación entre especies:

- Ornitina (S. sonnei)

- Manitol (S. sonnei)
- Maltosa (S. dysenteria)

ESQUEMA DE TRABAJO DE Shigella spp.

Muestras: Heces, orina, secreción vaginal, secreción cutánea.

Sembrar en: Agar Mc. Conckey, EMB de Levine, SS, XLD.

 Características macroscópicas Características microscópicas

- Colonias lactosa positivo - Bacilos gram –

- Transparentes o traslúcidas, lisas
- Sin producción de H2S
- En agar XLD con fondo rojo por utilización y fermentación de
carbohidratos del medio.

Pruebas bioquímicas:

- Indol (+) (Para diferenciar de E. coli, y Salmonella spp. (-))

- Citrato (-)
- Rojo de Metilo (+)
- Ureasa (-)
- Motilidad (-)
- Producción de H2S (-)
- Lactosa (-)

NOTAS:

No es causante de sepsis o bacteriemia. No

atraviesa la lámina basal epitelial. Rompe

las capas mucosas.

Yersinia spp:
Coco bacilo Gram (-)

Inmóvil a los 37oC, pero móvil a los 30oC (movimiento tipo sombrilla)

Psicrófila.

Oxidasa negativo

Catalasa positiva

ESPECIES:

- Y. pestis
 - Y. enterocolítica.
Crecen en agar Mc. Conckey a temperatura ambiente. (Se

incuba dejándola 24h en el mesón)

- Sus colonias son transparentes.

No productoras de Betahemólisis.

Ureasa positivo.

Móviles: Tienen flagelos Peritricos.

EN VENEZUELA NO TENEMOS YERSINIOSIS.

FACTORES DE VIRULENCIA:

- Enterotoxinas: Proteína V y W
- Sideróforos.

RESERVORIO:
- Agua, alimentos contaminados, suelo.
- Puede afectar a los cerdos, perros, gatos y humanos.

INFECIÓN:

- Productora de diarrea
- Infamación de los ganglios mesentéricos (Adenitis mesentérica).
- Linfadenitis.
- Gastritis.

MUESTRA:

- Heces
- Linfa (Ganglios linfáticos)

Las muestras deben enriquecerse al frio en la nevera – Es Psicrófila).

INCUBACIÓN EN AGAR Mc. Conckey o agar Sangre a 22oC.

Produce colonias pequeñas y transparentes.

LACTOSA POSITIVO

UREASA POSITIVO

MIO POSITIVO (sólo a 30oC) (Movimiento en la parte superior en forma de

 sombrilla).

IDENTIFICACIÓN DE Yersinia spp.

Muestras: Heces (Las muestras deben enriquecerse al frio en la nevera/

Yersinia spp es PSICRÓFILA), linfa.

Inocular en agar: Mc. Conckey (sólo crece en este agar), a temperatura

ambiente (22ºC) Durante 24hrs.

Características Macroscópicas Características Microscópicas

- Colonias transparentes rodeadas

- Rodeadas de rosa fuerte (Lactosa +)
- Sin hemólisis.

Pruebas Bioquímicas:

- Ureasa + - Rojo de metilo (+)

- Oxidasa – - Citrato (-)
- Catalasa + - Gas a partir de glucosa (+)
- Motilidad 30ºC (+) / 37ºC (-)
- Lactosa (-)
- Lisina, Arginina, Fenilalanina (-)
- H2S (-)

Yersinia pestis y enterocolítica son los principales patógenos a diferenciar.

Prueba bioquímicas Y. pestis Y. enterocolitica

Ornitina - +
Oxidación de Ramnosa - +