Agar Salmonella Shigella / Agar Verde Brillante

USO
Agar Salmonella Shigella es un medio selectivo y diferencial principalmente para Enterobacterias lactosa
negativas.
Agar Verde Brillante es un medio selectivo para el aislamiento de enterobacterias patógenas principalmente
Salmonella enterica diferente al serotipo Thypi a partir de muestras clínicas y de alimentos.

EXPLICACIÓN
Agar Salmonella Shigella, también conocido como Agar SS, es un medio diferencial y selectivo que inhibe el
crecimiento de la mayoría de los coliformes y permite el crecimiento de especies de Salmonella y Shigella a partir
de muestras de heces, orina, alimentos conservados y frescos. Este agar tiene la ventaja de inhibir microorganismos
coliformes Gram-positivos y el swarming de Proteus spp., esto por el contenido de sales biliares, citratos y el verde
brillante. Sin embargo, permite el crecimiento de Salmonella spp. y Shigella spp.
En el medio de tiosulfato de sodio y el citrato férrico permiten la detección de bacterias productoras de H2S tales
como Proteus spp. y algunas cepas de Salmonella, las cuales producen colonias con centro negro y halo claro. La
diferenciación de las Enterobacterias se logra por la incorporación de lactosa al medio, la cual proporciona la fuente
de carbohidratos. Los microorganismos que fermentan la lactosa producen ácido, el cual en presencia del rojo
neutro que es el indicador de pH, resultan en la formación de colonias rosas o rojas. Los microorganismos no
fermentadores de la lactosa forman colonias incoloras. El agar bacteriológico se usa como agente solidificante.

Agar Verde Brillante, es utilizado cuando se quiere investigar la presencia de especies de Salmonella diferentes a
Salmonella enterica serotipo Typhi y S. enterica serotipo Paratyphi, se recomienda el uso en paralelo de medios
con selectividad moderada, tales como Agar EMB, agar Mac Conkey, Agar Salmonella Shigella, Agar XLD o Agar
Entérico Hektoen. La mezcla de peptonas y el extracto de levadura proporcionan la fuente de nitrógeno, vitaminas,
minerales y aminoácidos. La lactosa y la sacarosa son los carbohidratos fermentables. El rojo de fenol es un
indicador de las variaciones de pH, que permite el cambio de color del medio a amarillo en presencia del ácido
derivado de la fermentación de los carbohidratos. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. El verde
brillante actúa como inhibidor de bacterias Gram-positivas y de la mayoría de bacterias Gram-negativas
diferentes a Salmonella spp. El agar es adicionado como agente gelificante.
FÓRMULA POR LITRO
Agar Salmonella Shigella

Extracto de carne 5.0 g Citrato de sodio 8.5 g

Mezcla de peptonas 5.0 g Tiosulfato de sodio 8.5 g
Lactosa 10.0 g Citrato férrico 1.0 g
Mezcla de sales biliares 8.5 g Rojo neutro 0.025 g
Verde brillante 0.0003 g Agar bacteriológico 13.5 g

pH 7.0 ± 0.2 a 25°C

Agar Verde Brillante

Extracto de levadura 3.0 g Verde brillante 0.0125 g

Mezcla de peptonas 10.0 g Cloruro de sodio 5.0 g
Lactosa 10.0 g Rojo de fenol 0.08 g
Sacarosa 10.0 g Agar bacteriológico 20.0 g

pH 6.9 ± 0.2 a 25°C

PREPARACIÓN
Método para la preparación de Agar Salmonella y Shigella
Suspender 60 gramos del medio en un litro de agua purificada. Mezclar bien y calentar con agitación suave hasta
su completa disolución y hervir durante un minuto. No esterilizar en autoclave. Dejar enfriar a una temperatura
entre 45-50°C y vaciar en uno de los compartimentos de las placas dobles de Petri estériles.
Procedimiento

1. Sembrar las muestras de acuerdo a los procedimientos internos de laboratorio o normas aplicables.
2. Incubar en condiciones aeróbicas las placas a 35 + 2°C de 24 a 48 horas.

Método para la preparación Agar Verde Brillante

Suspender 58 gramos del medio en un litro de agua purificada. Mezclar bien y calentar con agitación suave hasta
su completa disolución y hervir durante un minuto. Esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos. Dejar
enfriar a una temperatura entre 45-50°C y vaciar en uno de los compartimentos de las placas dobles de Petri
estériles.
Procedimiento
1. Sembrar las muestras de acuerdo a los procedimientos internos de laboratorio o normas aplicables.
2. Incubar en condiciones aeróbicas las placas a 35 ± 2°C de 24 a 48 horas. En caso de no obtener crecimiento,
incubar por 24 horas más.

CARACTERÍSTICAS
El crecimiento y la recuperación del Agar Salmonella Shigella se describe en la siguiente tabla:

CARACTERÍSTICA DE LA INOCULO % DE
MICROORGANISMOS ATCC CRECIMIENTO
COLONIA cfu/mL RECUPERACIÓN
Shigella flexneri 12022 Bueno Incolora, transparente ≤ 100 ≥ 80%
Salmonella entérica serotipo Incolora, transparente
14028 Bueno ≤ 100 ≥ 80%
Typhimurium con centro negro
Salmonella entérica serotipo Incolora, transparente
19430 Bueno ≤ 100 ≥ 80%
Typhi con o sin centro negro
Inhibición Rosa, con zona de
Escherichia coli 25922 104-106 ≤ 25%
parcial precipitado rosa
Enterococcus faecalis 29212 Inhibido - 104-106 -
4 6
Staphylococcus aureus 25923 Inhibido - 10 -10 -

El crecimiento, color de la colonia y recuperación del Agar Verde Brillante se describe en la siguiente tabla:

COLOR DE LA INOCULO % DE
MICROORGANISMOS ATCC CRECIMIENTO
COLONIA ufc/ml RECUPERACIÓN
Salmonella enterica
14028 Bueno Rosa a rojo 103-104 ≥80%
serotipo Typhimurium
Rosa a rojo,
Inhibición
Proteus mirabilis 12453 pueden presentar 103-104 ≤25%
parcial
swarming
Inhibición
Escherichia coli 25922 Amarillas a verdes 103-104 ≤25%
parcial
Enterococcus faecalis 29212 Inhibición total - 103-104 -
Staphylococcus aureus 25923 Inhibición total - 103-104 -

PRESENTACIÓN Y ALMACENAMIENTO
CAT. No
PRESENTACIÓN ALMACENAMIENTO
7784 Medio preparado en Placa (Pqte/10 Placas con dos divisiones) 2-8°C
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