UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA AMAZONIA PERUANA

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

MORFOLOGÍA MACROSCÓPICA Y MICROSCÓPICA DE LOS HONGOS

Laboratorio de Biología Molecular e Inmunología, LIPNAA LAB –SL01LA01-LIPNAA-CIRNA-UNAP
Versión: 2.0
001- pág. 1-8 PT- 008-2023
Elaborado por: Blga. Viviana Vanessa Pinedo Cancino, Dra., Blga. Katty Madeleine Arista Flores, Mgr. S.P. (c)
Aprobado por: Lic. Wilma S. Casanova, Mg.SP

PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO (POE)

CODIGO: FMH-CBS- SL01LA01-LIPNAA-CIRNA-UNAP-PT-008-2023

NOMBRE DE LA ASIGNATURA MICROBIOLOGÍA

POE-T PLAN DE CÓDIGO DE LA ASIGNATURA DURACIÓN

ESTUDIOS
008 2016 10023 4 horas

Versión Nro. Fecha de Revisión Descripción Modificación

Aprobado por:
Versión 1.0 12-Oct-18 0.0
REVISIÓN Blga. Estela Traverso
HISTÓRICA
Versión 2.0 22-Feb-23 Dra. Wilma Casanova 4.0, 5.0

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Versión: 2.0
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Elaborado por: Blga. Viviana Vanessa Pinedo Cancino, Dra., Blga. Katty Madeleine Arista Flores, Mgr. S.P. (c)
Aprobado por: Lic. Wilma S. Casanova, Mg.SP

1 ANTECEDENTES

La micología es el estudio de los hongos, son organismos eucarióticos que evolucionaron de manera
sucesiva (en tándem) con el reino animal. Sin embargo, a diferencia de estos últimos, la mayoría de los
hongos no son móviles y poseen una pared no rígida. A diferencia de las plantas, los hongos no son
fotosintéticos. Se Han descrito unas 80 000 especies de ellos, pero menos de 400 poseen importancia
médica, y menos de 50 especies ocasionan más de 90% de las micosis de humanos y otros animales.
Por el lado contrario, muchas especies de hongos son beneficiosas para el hombre. Están en la
naturaleza y son esenciales para la degradación y el reciclado de materia orgánica. Algunos mejoran la
calidad de vida de los humanos al contribuir la producción de alimentos y bebidas, como quesos, pan y
cerveza.

Otros hongos han aportado metabolitos bioactivos secundarios y útiles en la medicina, como los
antibióticos (penicilina), y los inmunodepresores (como las ciclosporinas). Los hongos han sido
aprovechados por los genetistas y biólogos moleculares como sistemas modelo para investigar diversos
procesos eucarióticos que incluyen biología y desarrollo molecular y celular: en forma global, ejercen su
máximo impacto económico como fitopatógenos; la industria agrícola resiste grandes pérdidas de
cosechas cada año como consecuencia de enfermedades causadas de cosechas cada año como
consecuencia de enfermedades causadas por ellos en el arroz, maíz y granos de otras plantas.

Los hongos son organismos eucarióticos, unicelulares y/o pluricelulares, a semejanza de todos los
eucariotas, cada hongo tiene como mínimo un núcleo con una membrana nuclear, retículo
endoplasmático, mitocondria y aparato secretor. Casi todos los hongos son aerobios obligados o
facultativos. Son quimiotróficos, secretan enzimas que degradan diversos sustratos orgánicos para hacer
de nutrientes e incorporarlos en la célula por transporte activo.

2 OBJETIVOS

 Conocer e identificar las características macro y microscópicas más sobresalientes de algunos

hongos, y comprobar su alta distribución en el ambiente.
 Realizar cultivo y pruebas de identificación de levaduras y mohos.
 Realizar el método directo por KOH 20% para la observación microscópica de hongos causantes
de micosis superficiales.

3 RESPONSABILIDADES

 Es responsabilidad del DOCENTE entregar el POE al inicio de cada semestre, con la finalidad que
todos los estudiantes tengan acceso al mismo.
 Al inicio de cada practica el docente socializará cada POE según corresponda, para la cual el
estudiante debe haber leído e investigado referente al tema de práctica.
 Será responsabilidad del ESTUDIANTE, leer con anterioridad el POE que corresponde, para que
se informe sobre el manejo del equipo, reactivos y procedimientos que se utilizarán, con el fin de
realizar correctamente la práctica y evitar accidentes.
 La Universidad, Facultad y Docente no se responsabilizan de posibles accidentes, porque los
estudiantes fueron debidamente informados de los procedimientos de la práctica y de las medidas
de seguridad.

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4 FUNDAMENTO TEÓRICO

Los hongos son organismos eucariontes (del griego, «núcleo verdadero») que representan un grupo ubicuo
y diverso de microorganismos que se dedica principalmente a la degradación de materia orgánica. Así
mismo, llevan una vida heterotrófica como saprofitos (microorganismos que subsisten en materia muerta o
en descomposición), simbiontes (microorganismos que viven conjuntamente y obtienen ventajas de su
asociación), comensales (microorganismos que se desarrollan en estrecha relación, en la que uno de los
participantes obtiene beneficios mientras que el otro ni se beneficia ni resulta perjudicado) o parásitos
(microorganismos que se establecen sobre o en el interior de un anfitrión del que obtienen beneficios sin
corresponder con ninguna ventaja; en el caso de los patógenos, la relación es perjudicial para el
anfitrión).La pared celular de los hongos está formada por quitina, glucanas, mananas y derivados
celuloides,compuestos que en general le dan gran rigidez a la misma, así como algunos
glucopéptidos y manoproteínas; le proporcionan cierto grado de flexibilidad y son de gran importancia para
su taxonomía y propiedades antigénicas.

Los hongos pueden existir en una forma unicelular (levadura) capaz de replicarse de manera asexual, o en
una forma filamentosa (moho), capaz de replicarse de forma tanto asexual como sexual. La mayor parte de
los hongos existen en forma de levadura o bien en forma de moho. Sin embargo, algunos de ellos pueden
adoptar ambas morfologías; se trata de los llamados hongos dimórficos, como Histoplasma, Blastomyces
y Coccidioides.

Es de suma importancia estudiar los hongos, ya que desempeñan un papel cada vez más importante en
las enfermedades infecciosas, en especial en los pacientes inmunodeprimidos (Aspergillus sp., Candida
sp.). Existen, además, infecciones causadas por hongos denominadas micosis superficiales
(Dermatofitosis, Ptiriasis versicolor y Tiña negra) en la capa queratinizada de la piel y el cabello, no son
destructivas y tan sólo revisten importancia desde el punto de vista estético.

Los hongos presentan diferentes estructuras fundamentales para su clasificación e identificación tales
como:

 Hifa: estructura filamentosa, unidad funcional del hongo.

 Levadura: hongo unicelular redondeado u ovoide que se reproduce sexual o asexualmente.
 Micelo o talo: Conjunto de hifas.
 Colonia: conjunto de micelo y estructuras de reproducción.

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Figura 1. Estructura de un hongo filamentoso.

Figura 2. Morfología de una levadura.

En la Morfología macroscópica de los hongos se observará:

 Color: puedes ser variado.
 Aspecto: liso o rugoso.
 Consistencia: blanda, dura o mucoide.
 Relieve: plano o elevado.
 Tamaño, limitado o ilimitado.
 Forma: granula, polvorienta, vellosa.
 Producción de pigmento: negro

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 Velocidad de crecimiento de 48 a 72 horas.

Figura 3. Morfologías macroscópicas de los hongos.

Medios de Cultivo
La mayoría de los hongos son nutricionalmente poco exigentes y desarrollan en medios sencillos que
contengan medios sencillos que contengan hidratos de carbono como fuente de carbono (glucosa,
maltosa, sacarosa, almidón, celulosa), sales de nitrógeno inorgánico o peptonas, como fuente de
nitrógeno y pequeñas cantidades de oligoelementos (Fe, Mg, P, K Zn,Cu, Mn y Mo).

Hay tres tipos generales de medios de cultivo para hongos:

1. Medios Naturales: Trozos o infusiones de frutas, vegetales, granos de cereales o tejidos animales.
Varían mucho en su composición y no son reproducibles. Tampoco son de amplio uso.

2. Medios Semisintéticos: Extractos de plantas, peptonas, agar y otros compuestos son de amplio
uso.

3. Medios Sintéticos: Composición química definida. Tal vez el más conocido y utilizado de estos
medios es el Agar Sabouraud cuya descripción se realiza a continuación.

 Agar Saboroud Glucosado

Este medio puede ser utilizado para el aislamiento, identificación y conservación de hongos saprófitos
y patógenos.

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Es un medio nutritivo cuya alta concentración de glucosa y el pH ácido actúan inhibiendo el desarrollo
bacteriano. El agregado de antibióticos aumenta la selectividad del medio y permite eliminar bacterias
y hongos saprófitos indeseables a partir de muestras contaminadas. Los antibióticos que
frecuentemente son utilizados son estreptomicina (100 ug/l), cloranfenicol (500 mg/l) y cicloheximida
(0.5 mg/l) los cuales son agregados al medio de cultivo ya estéril y fundido a 45-50 ºC. Algunos cultivos
no esporulan ni producen pigmento en agar de Sabouraud.

5 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

a. Materiales Reactivos Equipos Material

de apoyo
- Equipo de protección - Alcohol al 70% -Microscopio binocular Proyector
personal (mandil manga larga) - Agar Sabouraud -Incubadora
- Lámina portaobjetos - Aceite de inmersión
- Cinta adhesiva - Azul lactofenol
- Levadura de pan o cerveza
- Bolsas plásticas
- Naranja
- Pan
- Muestra
- Porta y cubre objetos
- Asa de siembra
- Mechero
- Papel toalla

b. Desarrollo de la Práctica
5.1. Aislamiento de hongos del ambiente

 Abrir una placa de agar Sabouraud en un área fuera del laboratorio (jardín), o en cualquier otro
ambiente, durante 30 min. Después de este tiempo tapar e incubar a 28 ºC por una semana, hasta
observar el desarrollo de colonias de hongos.
 Hacer observaciones diarias durante 3 a 15 días
 En otra placa espolvoree unas cuantas partículas de polvo del jardín e incube igual por una
semana.
 Guardar en una bolsa la naranja (y/o pan), durante una semana, a temperatura ambiente. Revisar
periódicamente, hasta observar el desarrollo de colonias de hongos. Realizar observaciones diarias
durante 3 a 15 días.

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5.2. Observación Macroscópica de la colonia

 El examen macroscópico se realiza a partir de una “macrocolonia” obtenida por sembrado de la

especie fúngica en estudio en la parte central de una placa con medio de cultivo (Agar Glucosado
Sabouraud).
 Comparar las colonias desarrolladas entre sí, tanto en los medios de cultivo como en la naranja y/o
pan, notando las diferencias de color al frente y al reverso.
 De las colonias de hongos se describirá
 Velocidad de crecimiento: es el tiempo que tarda la colonia en ocupar las 2/3 partes de la placa 
Rápido: entre 1 y 2 semanas.
 Moderado: entre 2 y 3 semanas.
 Lento: entre 3 y 4 semanas.

 Topografía de la colonia:
 Forma: circular, irregular, filamentosa
 Elevación: plana y extendida, elevada y limitada, umbilicada
 Margen: entero, lobulado, desflecado, rizoide
 Superficie: plegada, con surcos radiados, cerebriforme

 Pigmentación en anverso y reverso de la colonia o pigmento difusible en el medio.

 Textura: granulosa, pulverulenta, vellosa, aterciopelada, algodonosa.

 Tamaño: crecimiento limitado o crecimiento invasivo.

5.3 Observación Microscópica

5.3.1. Preparación en fresco mediante la técnica de cinta adhesiva y observación microscópica

Procedimiento:
 Colocar una pequeña gota de azul de lactofenol en el centro de un portaobjetos limpio.
 Cortar un fragmento de cinta scotch y tocar con el lado adhesivo un área de la colonia, en la
periferia si la colonia está bien desarrollada, o bien, en el centro si se trata de una colonia joven.
 Coloque la cinta con el lado adhesivo hacia abajo sobre la laminilla ya preparada, coloque una
gota adicional de colorante sobre la cinta, coloque un cubreobjetos y presione suavemente para
eliminar burbujas de aire.
 Examinar al microscopio con los objetivos 10x y 40x. Anotar las siguientes características:
aspecto del micelio (septado o cenocítico), uninucleado o multinucleado, el origen del micelio
(verdadero o pseudomicelio), la función del micelio (vegetativo o de nutrición, o bien aéreo o
reproductivo), el pigmento delmicelio: hialino (no pigmentado) o pigmentado (melánico o
carotenoide), color y forma de las esporas, etc.
 Si se quiere sellar la preparación, se coloca alrededor del cubreobjetos barniz de uñas.

5.3.2. Método directo de KOH al 20% y observación microscópica para identificación de hongos
causantes de miscósis superficial

Procedimiento:
 Para montaje, colocaremos las escamas de piel sobre la lámina portaobjeto, agregaremos una
gota de KOH al 20 %, y colocaremos una lámina cubreobjeto.

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 En el caso de uña, cortaremos en trozos más pequeños luego colocaremos los trozos sobre
una lámina portaobjeto, y agregaremos una gota de KOH al 20 % y cubriremos con una laminilla
cubreobjeto.
 En el caso de Cabellos y cuero cabelludo, estos serán colocados sobre la lámina portaobjeto,
se agregará el KOH al 20 % y cubriremos con la laminilla cubreobjeto.
 Luego encenderemos el mechero, y pasaremos la lámina montada sobre la llama de fuego por
un minuto. Evitar desecar la muestra, el objetivo es ablandar las estructuras y facilitar la
observación.
 Una vez montadas las láminas leer inmediatamente llevando a aumento de 10 x para enfocar
la zona de interés como trozos de escama, el cabello, zona del folículo piloso del cabello o zona
sospechosa; luego enfocar a 40 x e identificarlas estructuras micóticas; en el subtítulo reporte
de resultados, describimos brevemente las estructuras micóticas.

Interpretación de resultados:

 Para Piel y Uñas

- En la pitiriasis versicolor o tiña versicolor, la observación del material demuestra los
microorganismos en una disposición característica: una combinación de formas redondeadas
(2-8 μm de diámetro) con gemación e hifas cortas (de 2-5 μm de ancho por 25 μm de largo).
Su visualización se facilita con el Colorante de Azul de Lactofenol ya que las formas fúngicas
del género Malassezia se tiñen inmediatamente de azul, mientras que Candida spp. y los
dermatofitos, se tiñen pasadas unas horas.

- En la tiña negra (Hortaea werneckii), el examen directo cutáneo revela hifas septadas,
ramificadas, de 5 μm de diámetro, con un característico color oscuro, marrón u oliváceo, junto
con células levaduriformes enlongadas.

- En las candidiasis superficiales, la visualización de levaduras, blastosporas, pseudohifas o

verdaderas hifas septadas, evidencia la existencia de levaduras, aunque la identificación de la
especie requiera el cultivo.

 Para Cuero Cabelludo y Cabello

- En las piedras, el examen directo de cabellos parasitados permite establecer el diagnóstico.
Los nódulos de piedra negra están formados por una masa de células romboidales (parecidos
a artroconidios) e hifas ramificadas unidas por una sustancia cimentadora. Las hifas y células
tienen un diámetro de 4 a 8 μm con pigmentación regular. La sección del nódulo pone de
manifiesto la existencia de ascas en cuyo interior existen ocho elementos fusiformes, curvados
(30 x 10 μm) con un filamento espiral terminal. En la piedra blanca, Trichosporon.

- Tiña capitis, pueden ser de dos tipos: Endotrix (cuando el dermatofito se encuentra situado en
el interior del pelo formando artroconidias con diámetro superior a 8 μm). Son debidas a otras
especies de Trichophyton: T. verrucosum, T. mentagrophytes, T. tonsurans, T. soudanense, T.
violaceum, T. yaoundei, T. gourvilii o T. rubrum (rara vez). Ectotrix (el pelo está envuelto por
una vaina externa de esporas): Pueden visualizarse pequeñas artroconidas de 2-3 μm de
diámetro (Microsporum audouinii, M. audouinii var rivalieri, M. canis, M. canis var. distortum, M.
equinum o M. ferrugineum) o esporas de 5-8 μm de diámetro (M. gypseum, M. fulvum, M.
nanum y M. vangreuseghemii).

5.3.3. Observación microscópica de levaduras

 A partir de levaduras de pan o de cerveza, o una placa con cultivo de agar Saboroud con
crecimiento de Candida albicans, haga observaciones entre porta y cubre objetos.
 Observar al microscopio a 10 X y a 40 X.

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c. Cálculos y Resultados

Informe lo observado en la práctica (frotices).

d. Limitaciones del procedimiento

Es probable que no se llegue observar bien algunas de las características de los hongos porque se
rompieron al momento de fijar en el porta objetos.

6 INTERPRETACIÓN Y CONCLUSIONES

Concluya sobre la importancia de diferenciar las características macro y microscópicas de los hongos.
7 ANEXOS

CUESTIONARIO

1. Hacer los esquemas de lo observado al microscopio.

Observación de: ______________________________

Aumento: ___________
Características:
_____________________________________________
_____________________________________________
_____________________________________________

2. Desarrolladas las colonias de hongos, haga una descripción de las colonias y compárelas entre
sí. Esquematice lo observado al microscopio, y escriba el nombre del género si llegó a
identificado.

3. ¿Qué diferencia hay entre la tinción de Gram y la tinción azul de lactofenol?

4. ¿Qué medidas de bioseguridad utilizarías para manipular y procesar muestras de

enfermedades micóticas?

5. Elabora tablas comparativas

Descripción Macroscópica

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Color Presencia
Género Forma Consistencia Aspecto
frente reverso Micelio

Descripción Microscópica

Tipo Micelio Conidios

Características Aparatos
Género forma y
de las hifas conidiales
septado aceptado tamaño

6.

8 MECANISMOS DE EVALUACIÓN

Puntualidad y asistencia
Prueba práctica
Informe

9 MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL

Equipo de protección personal: mandil de laboratorio manga larga, zapatos cerrados, pantalón largo.

10 DISPOSICIÓN DE DESECHOS QUÍMICOS

Los desechos generados en esta práctica serán tratados de acuerdo a sus características y como se indica
en los protocolos del laboratorio.

11 REFERENCIAS

1. Jawetz, Melnick y Adelberg. 2014. Microbiología Médica. 26va edición. Mc Graw Hill Educación.
México DF.
2. Madigan, M. et al. 2012. BROCK Biología de los Microorganismos. 12va edición. Pearson Educación
S.A. Madrid, España.
3. Madison BM. Application of stains in clinical microbiology. Biotech Histochem. 2001; 76: 119-125
4. Mandell, Douglas y Bennett. 2013. Enfermedades Infecciosas: Principios y Práctica. 7ma edición.
Elsevier, Bacerlona, España.

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5. Olivas E., Alarcon Morales L. 2012. Manual de Prácticas Laboratorio de Microbiología Médica.
Universidad Autónoma de Cuidad de Juárez, México.
6. Universidad Nacional de la Patagonia San Juan de Bosco. 2017. Microbiología ambiental. Disponible
en: http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/microambiental/wp-content/uploads/2016/08/TP-8-
Micolog%C3%ADa.pdf

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