Manual de Bacteriología y Diagnóstico Microbiológico

PRÁCTICA 2
MANEJO DE ESPECÍMENES: RECOLECCIÓN, TRANSPORTE Y
CONSERVACIÓN

Q.F.B. Héctor Manuel Aguilar López

INTRODUCCIÓN

Es de trascendental importancia recolectar • Procedimientos especiales usados

apropiadamente un espécimen clínico para para colectar el espécimen.
poder ofrecer estudios microbiológicos • En caso de que el paciente este
completos, confiables y en fase temprana recibiendo antibiótico, nombre o
de la enfermedad infecciosa. nombres de los mismos.
• Resumen de los informes
La formación de equipos de vigilancia epidemiológicos y clínicos
epidemiológica nosocomiales debe incluir a (expediente).
Médicos Infectólogos, Enfermeras, 5. Colocar el espécimen en un sistema de
Epidemiólogos, Químicos Microbiólogos y transporte adecuado, que promueva el
todo el personal involucrado en el manejo desarrollo del agente etiológico de la
de especímenes biológicos, los cuales enfermedad y suprima los
deben tener comunicación constante para microorganismos contaminantes.
que no existan errores que puedan llevar a 6. Transportar la muestra al laboratorio y
un mal diagnóstico en el paciente. mantenerla en condiciones de
temperatura y humedad que no dañen a
Generalidades en la recolección de los microorganismos responsables de la
especímenes enfermedad.
7. Establecer periodos óptimos para la
1. Seleccionar el sitio anatómico correcto. recolección de muestras, a fin de tener la
2. Recolectar un espécimen representativo mejor oportunidad para aislar los
empleando una técnica apropiada. microorganismos causantes de la
3. Rotular adecuadamente los patología.
especímenes. 8. Cuando sea posible, obtener la muestra
4. Recolectar y anotar la siguiente antes de la administración de
información: antibióticos.
• Nombre del paciente, edad, número
de sala o dirección de paciente. Tipos de especímenes
• Nombre del médico tratante.
• Fecha y hora de colección de la Tipo 1. Son especímenes que se obtienen
muestra o espécimen. de sitios con biota normal, como la piel y las
• Sitio anatómico del cual fue membranas mucosas.
colectado el espécimen (tipo I, II o III).

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Tipo 2. Son muestras que provienen de Tipo 3. El espécimen proviene de sitios

sitios estériles pero que para recolectarse estériles y se emplean técnicas invasivas
pasan por sitios con biota normal. para su recolección.

OBJETIVO

Conocer los procedimientos para la recolección, transporte y conservación de los

especímenes clínicos utilizados en el diagnóstico microbiológico de las enfermedades
infecciosas.

MATERIALES • Portaobjetos
• Especímenes clínicos de origen diverso • Cubreobjetos
(orina, exudado vaginal o vulvar, exudado • Frasco para hemocultivo
faríngeo, esputo y sangre) • Jeringas con aguja estériles de 10 mL
• Cajas de Petri con agar Thayer-Martin, • Ligadura
agar chocolate, agar sangre de carnero, • Guantes estériles (dos pares)
agar MacConkey y agar Biggy-Nickerson • Torundas con etanol al 70%
• Jarra con vela • Torundas con yodopovidona al 10%
• Colorantes para tinción de Gram: • 2 campos estériles de tela
- Cristal violeta • 1 campo hendido de tela estéril
- Lugol • Bata quirúrgica desechable estéril
- Alcohol-acetona
- Safranina EQUIPOS
• Asa bacteriológica calibrada de 0.001 mL • Centrifuga
• Asa bacteriológica calibrada de 0.01 mL • Microscopio
• Tubos de vidrio de 13x100 mL

PROCEDIMIENTO

SESIÓN 1 estría simple (o cola de rata) con asa

1. Entrega y revisión del diagrama de calibrada de 0.001 mL en los medios
trabajo. destinados para este fin (agar sangre
2. Recolección de la orina por técnica de de carnero y agar MacConkey).
chorro medio c) Incubar las cajas a 35 +/- 2°C por 18
a) Recolectar la primera orina de la a 24 horas. El agar sangre de carnero
mañana por técnica de chorro medio deberá incubarse en sistema de
y transportarla al laboratorio el día microaerofilia (jarra con vela). El agar
de la práctica. MacConkey se incubará en sistema
b) Realizar la inoculación y siembra de de aerobiosis.
la muestra de orina por técnica de d) Centrifugar la muestra de orina

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durante 5 minutos a 1500 RPM. SESIÓN 2

e) Decantar la muestra de orina en la Recolección de exudado faríngeo y
tarja. exudado nasal
f) Colocar una pequeña gota del
sedimento urinario en un 1. Interpretar y discutir resultados del
portaobjetos y colocar cubreobjetos urocultivo y del cultivo de exudado
sobre la muestra. uretral, vulvar o vaginal sembrados en la
g) Evaluar el sedimento urinario al sesión anterior. En caso de no haber
microscopio (40x), anotar y discutir desarrollo, incubar 24 horas más en las
observaciones. mismas condiciones.
CONTESTAR ACTIVIDAD 1 2. Recolectar muestra de exudado faríngeo
y de exudado nasal en el laboratorio de
3. Recolección de exudado uretral, vulvar Microbiología.
o vaginal 3. Realizar la inoculación y siembra de la
a) Recolectar la muestra de exudado muestra del exudado faríngeo en agar
uretral, vulvar o vaginal en medio de sangre de carnero por técnica de
transporte, solución salina y agotamiento o dilución con asa calibrada
portaobjetos y transportar las de 0.01 mL. Incubar la caja de Petri a 35
muestras al laboratorio el día de la +/- 2°C en sistema de microaerofilia.
práctica. 4. Realizar la inoculación y siembra de la
b) Realizar la inoculación y siembra de muestra de exudado nasal en agar
la muestra de exudado uretral, vulvar manitol-sal por técnica de agotamiento o
o vaginal por técnica de agotamiento dilución con asa calibrada de 0.01 mL.
o dilución con asa calibrada de 0.01 Incubar la caja de Petri a 35 +/- 2°C en
mL en los diferentes agares sistema de aerobiosis.
destinados para este propósito. La CONTESTAR ACTIVIDAD 2
siembra debe realizarse del medio
más enriquecido al más selectivo. SESIÓN 3
c) Incubar las cajas a 35 +/- 2°C durante Recolección de esputo por expectoración
24 horas. Los medios de agar 1. Interpretar y discutir resultados del
Thayer-Martin, agar chocolate y agar cultivo de exudado faríngeo y exudado
sangre de carnero deberán incubarse nasal sembrados en la sesión anterior.
en sistema de microaerofilia. Los En caso de no haber desarrollo, incubar
demás medios se incubarán en 24 horas más en las mismas condiciones.
sistema de aerobiosis. 2. Recolectar la muestra de esputo por
d) Realizar la tinción de Gram de las expectoración.
laminillas. 3. Realizar la inoculación y siembra de
e) Colocar una gota de la muestra en esputo en los diferentes agares
solución salina en un portaobjetos. destinados para este propósito. La
Colocar cubreobjetos. siembra debe realizarse del medio más
f) Observar laminillas al microscopio, enriquecido al más selectivo.
anotar y discutir observaciones. 4. Incubar las cajas a 35 +/- 2°C durante 24
CONTESTAR ACTIVIDAD 1 horas. Los medios de agar chocolate y
agar sangre de carnero deberán

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incubarse en sistema de microaerofilia. base a los procedimientos establecidos

Los demás medios se incubarán en en el laboratorio.
sistema de aerobiosis. CONTESTAR ACTIVIDAD 4
5. Realizar la tinción de Gram de la
muestra. SESIÓN 6
6. Observar laminillas al microscopio y Recolección de especímenes de tracto
realizar valoración de la muestra gastrointestinal
mediante los criterios de Murray y Revisar las técnicas de recolección de las
Washington. muestras de tracto gastrointestinal
CONTESTAR ACTIVIDAD 3 (consultar el material colocado en la
plataforma didacTIC).
SESIÓN 4 CONTESTAR ACTIVIDAD 5
Discusión de resultados y
retroalimentación SESIÓN 7
1. Interpretar y discutir resultados del Recolección de especímenes de piel,
cultivo de esputo por expectoración tejidos blandos, heridas y punta de catéter
sembrado en la sesión anterior, así como 1. Revisar las técnicas de recolección de las
de la valoración de la muestra con los muestras de piel, tejidos blandos y
criterios de Murray y Washington. heridas (consultar el material colocado
2. Revisar nuevamente los cultivos en la plataforma didacTIC).
sembrados en sesiones anteriores y 2. Revisar la técnica de recolección de la
realizar retroalimentación de lo visto en muestra de punta de catéter (consultar el
las sesiones anteriores. material colocado en la plataforma
3. Una vez interpretados los resultados, dar didacTIC).
la disposición adecuada a los cultivos y/o CONTESTAR ACTIVIDAD 6
materiales contaminados (RPBI), con
base a los procedimientos establecidos SESIÓN 8
en el laboratorio. Recolección de los líquidos corporales
estériles. Discusión y retroalimentación
SESIÓN 5 1. Revisar la técnica de recolección de los
Recolección de sangre completa para líquidos corporales estériles.
hemocultivo 2. Realizar retroalimentación de lo visto en
1. Recolectar muestra de sangre con las sesiones anteriores.
técnica aséptica para hemocultivo. CONTESTAR ACTIVIDAD 7
2. Realizar la inoculación del frasco para
hemocultivo con técnica aséptica. NOTA IMPORTANTE: Para más
3. Incubar el frasco para hemocultivo a 35 información, consultar el anexo al final de
+/- 2°C en sistema de aerobiosis durante este manual.
7 días.
4. Una vez interpretados los resultados, dar
la disposición adecuada a los cultivos y/o
materiales contaminados (RPBI), con

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