Universidad de Sonora

División de Ciencias Biológicas y de la Salud

Departamento de Agricultura y Ganadería
Licenciatura en Medicina Veterinaria y Zootecnia

Materia
Laboratorio de patología clínica

Práctica
Cuenta de eritrocitos, reticulocitos e índices
eritrocitarios (bitácora)

Alumno:
Kariana Janeth Nóperi Córdova

Maestro:
Dra. Paola del Carmen Gastelum

Fecha de entrega:
01 de octubre de 2023
l. Introducción

El conteo eritrocitario es un examen de sangre que tiene la finalidad de medir la

cantidad de eritrocitos que tiene el animal. Los eritrocitos son las células encargadas
del transporte de oxígeno a través de una proteína llamada hemoglobina y en esto
radica la importancia de su estudio. Los conteos eritrocitarios nos sirven para la
prevención e intervención de anomalías en los índices, de manera que se pretende
mantenerlos dentro de los rangos normales. Este conteo puede servir de apoyo para
diagnosticar e identificar indicadores de diversas enfermedades, entre ellas
anemias, sangrados, leucemia, desnutrición, hemólisis, enfermedades renales, etc.

Por otra parte, los reticulocitos son glóbulos rojos (eritrocitos) que se encuentran
en desarrollo o inmaduros formados por ARN y protoporfirina en su citoplasma. Al
igual que los eritrocitos, no poseen núcleo, sin embargo, poseen organelos y un
sistema ribosómico extenso para poder sintetizar hemoglobina. Son producidos en
la médula ósea, donde son retenidos de dos a tres días y después permanecen en
circulación periférica para que, en alrededor de un día, maduren y se conviertan en
eritrocitos y procedan al transporte de oxígeno, indicando de esta manera la eficacia
de la médula ósea para la producción eritrocitaria, midiendo esto, se podrá medir,
además, la cantidad de sangre, y al igual que en el conteo eritrocitario, sirve para
diagnosticar problemas de salud en los animales.

Se le denomina índices eritrocitarios a las relaciones que se establecen para

determinar el tamaño de los eritrocitos y su contenido hemoglobínico. Estos índices
sirven para establecer diagnósticos diferenciales entre diversos tipos de anemias y
son obtenidos a raíz del recuento de hematíes, del hematocrito y de la concentración
de hemoglobina en la sangre.
ll. Objetivo

El alumno evaluará la importancia de la determinación de los siguientes

parámetros: conteo de eritrocitos y reticulocitos, velocidad de sedimentación
globular, hematocrito (macro y micro) e índices eritrocitarios, todo esto en el
diagnóstico de las anemias. Además, conocerá el uso de la cámara de Neubauer
para el conteo de células y aprenderá a realizar la cuenta de reticulocitos, así como
su importancia en la valoración de la eritropoyesis en la médula ósea.

lll. Fundamento

El recuento eritrocitario, de hematíes o de glóbulos rojos evalúa la cantidad

total de eritrocitos en la muestra de sangre obtenida, es una de las pruebas incluidas
en el hemograma. Es una prueba que mide ciertos componentes y características
sanguíneas para diagnosticar, detectar, o monitorizar diferentes trastornos que
afecten a estas células (uno de los más frecuentes es la anemia).

La sangre contiene un conjunto de células suspendidas en su porción líquida

(plasma) y, además de los hematíes, existen los leucocitos y las plaquetas. Los
hematíes representan un aproximado del 40% del volumen total de la sangre y
tienen un tiempo de vida promedio de 120 días, por lo que es importante que la
médula ósea las produzca continuamente para sustituir a las células viejas. El
recuento entonces indicará si existe un aumento (policitemia) o disminución
(anemia) en estos, para que con base a estos resultados (junto el examen físico
general, antecedentes, signos y sintomatología presente) se llegue a un posible
diagnóstico.

Con el uso de la cámara de Neubauer, se realizará el conteo de los eritrocitos

con un objetivo de 40x, se deberán contar los eritrocitos en 5 de los 25 cuadros
pequeños del área central, iniciando a la izquierda de la fila superior de los cuatro
cuadros pequeños, luego de derecha a izquierda en la siguiente fila y así
sucesivamente. Posteriormente, con el uso de la siguiente formula, se obtendrá el
número total de células por mm3:

No. de células/mm3 (uL) = No. de células contadas/mm2 x FD x FV

 FD: Factor Dilución (1:20 leucocitos y 1:200 eritrocitos y plaquetas)

FV: Factor Volumen Eritrocitos= No. de eritrocitos contados x 200 x 50

en 5 cuadros de 0.2 x 0.2 mm

Un recuento con niveles bajos de hematíes podrá indicar traumatismos,

distintos tipos de anemias, enfermedades autoinmunes, sangrados, déficits
nutricionales, alteraciones en médula ósea, enfermedades inflamatorias crónicas,
insuficiencia renal, etc. Mientras que niveles altos en hematíes indicaran la
posibilidad de deshidratación, enfermedades pulmonares o cardíacas, tumores,
trastornos genéticos, etc.

A su vez, el recuento de reticulocitos mide la velocidad en la que los hematíes

inmaduros son producidos por la médula ósea y liberados en la sangre. Este
recuento aumenta cuando hay mucha pérdida de sangre o en ciertas enfermedades
que destruyen glóbulos rojos.

Se contabilizará el porcentaje de reticulocitos de la siguiente manera:

Porcentaje de reticulocitos =
Número de reticulocitos contabilizados / Número de células
contabilizadas x 100
Mientras que el número absoluto de reticulocitos se obtendrá de la siguiente
forma:

Número absoluto de retículocitos =

Porcentaje de reticulocitos / 100 X número de eritrocitos / mm3

Los valores altos arrojaran una producción elevada de glóbulos rojos, lo que
puede referir sangrado o presencia de distintos tipos de anemia. Valores bajos
indicaran una menor producción de eritrocitos, causado posiblemente también por
varios tipos de anemia, exposición a radiación, infecciones crónicas o
medicamentos que afecten la médula ósea.
 La velocidad de sedimentación globular (VSG) es un análisis de sangre que
puede revelar actividad inflamatoria en el organismo del animal y se utilizar para el
diagnóstico o la monitorización de la enfermedad. El fundamento de la prueba
consiste en que, al momento de colocar la sangre en el tubo, los eritrocitos se
asientan en el fondo de este en un estado natural, sin embargo, la inflamación
provocará que las células se aglomeren y se vean de una forma más densa que las
células individuales, asentándose en el fondo del tubo de una manera más rápida.
El análisis de velocidad de sedimentación medirá la distancia que avanzan los
eritrocitos en un lapso de una hora mientras que descienden en el tubo de ensayo,
por lo que entre más eritrocitos desciendan, mayor respuesta inflamatoria existe en
el sistema inmunitario.

La prueba del hematocrito es un análisis de sangre que se encarga de medir

la cantidad de sangre que se compone por glóbulos rojos (excluyendo leucocitos,
trombocitos y plasma) en porcentajes.

Los eritrocitos componen aproximadamente el 40% del volumen total de la

sangre, por lo que valores de hematocrito superiores al 60% o inferiores al 30%
deben considerarse inicialmente como patológicos. Niveles altos de hematocrito
podrán indicar una producción acelerada o excesiva de glóbulos rojos posiblemente
causada por enfermedades pulmonares, cardíacas o policitemia vera. Mientras que
niveles altos podrán significar distintos tipos de anemias o una producción elevada
de glóbulos blancos, lo cual podrá ser causado por enfermedades de la médula
ósea, cáncer, deshidratación, shocks, etc.

Una duración y velocidad de centrifugación adecuada es esencial para un

resultado del hematocrito correcto. Los eritrocitos deberán encontrarse
concentrados, ya que una centrifugación adicional no reduce valores del
hematocrito. En general, cuanto más alto es el hematocrito, mayor fuerza de
centrifugación será requerida. Debido a que es menor la cantidad de tiempo que se
necesita para la centrifugación con el micro método, este es considerado óptimo o
más viable que el macro método, debido además a que cuenta con un menor
margen de error causado por el atrapamiento del plasma al momento de la
centrifugación.

Para una correcta práctica, la muestra sanguínea debe de ser fresca y tener
los conocimientos adecuados respecto al uso del microscopio, cámara de Neubauer
y los fundamentos generales de las distintas técnicas. El manejo correcto de todas
las técnicas y herramientas será óptimo para obtener resultados confiables y si bien,
los resultados podrán indicar si existen anomalías o problemas relacionados con la
producción y la vida media de los eritrocitos, no se podrá determinar la causa
subyacente únicamente con una sola de las pruebas de laboratorio, y para esto, se
deberán de considerar distintos parámetros y formar un conjunto de pruebas para
con esto, llegar a un diagnóstico más certero.

Vl. Metodología

Vl.l. Conteo eritrocitario

_________________________________________________________Materiales

✓ Hematocitómetro/cámara de Neubauer
✓ Pipeta de Thomas
✓ Tubo de hule y boquilla
✓ Sangre con anticoagulante EDTA
✓ Diluyente de Harem o solución salina
✓ Solución de Gower's o Isoton (12.5 gr de sulfato de sodio anhidro, 33.3 ml de
ácido acético glacial y 200 ml de agua destilada)
✓ Papel filtro
✓ Microscopio

______________________________________________________Procedimiento

1. Se ensambla la pipeta, de manera que se une la boquilla al tubo de hule

y posteriormente este a la pipeta Thomas.
2. Se homogeniza la muestra sanguínea.
3. Se aspira la sangre con la pipeta hasta llegar a la marca de 0.5,
succionando de manera suave.
4. Se limpia la sangre del exterior de la pipeta con un trozo de papel filtro. Si
la marca fuese rebasada, se debe ajustar eliminando el exceso de sangre
con un papel filtro o algodón, aun así, pueden quedar adheridas células a
la pipeta y la cuenta podría resultar más alta.
5. Se aspira diluyente de Harem o solución salina con una succión uniforme
hasta llegar a la línea de 101 (por encima del bulbo) y se debe girar
suavemente mientras se llena.
6. La pipeta se retira del diluyente de forma horizontal y se tapan los orificios
con los dedos. Toda la sangre deberá estar acumulada en el bulbo.
7. La pipeta debe agitarse por 2 o 3 veces en un agitador mecánico o, si se
realiza de manera manual, debe ser formando "ochos" con la muñeca.
8. Para el conteo de eritrocitos, la cámara y cubreobjetos deberán limpiarse
quitando pelusa y grasa.
9. Se coloca el cubreobjetos especial con los extremos más largos paralelos
y sobre los bordes de apoyo de la cámara, manejándolo solo de los
extremos más largos paralelos y sobre los bordes de apoyo de la cámara,
manejándola solo de los extremos largos.
10. Inmediatamente después de agitada la pipeta, se desechan 3 gotas y se
limpia la punta de la pipeta con un algodón.
11. Con la punta de la pipeta, se toca el espacio entre el cubreobjetos y la
cámara, dejando fluir el líquido por capilaridad, sin que se derrame por los
bordes (de lo contrario, se repite el proceso una vez se limpie la cámara)
y se retira la pipeta.
12. Se esperan tres minutos para que las células sedimenten y se inicia la
evaporación.
13. Con el objetivo de 10x se localiza el cuadro central de los 9 cuadros
grandes del hematocitómetro y se busca una distribución homogénea de
las células.
14. Con el objetivo de 40x se deben contar los eritrocitos en 5 de los 25
cuadros pequeños del área central, iniciando a la izquierda de la fila
 superior de los cuatro cuadros pequeños, luego de derecha a izquierda
en la siguiente fila y así sucesivamente.

Vl.ll. Conteo de reticulocitos

_________________________________________________________Materiales

✓ Tubo de ensaye 13x100

✓ Cronómetro
✓ 2 pipetas transfer
✓ Portaobjetos
✓ Microscopio
✓ Baño maría o incubadora (37°C)
✓ Azul de metileno
✓ Aceite de inmersión

______________________________________________________Procedimiento

1. Realizar una mezcla de cantidades iguales de sangre y azul de metileno.

2. Incubar durante 30 minutos a 37°C.
3. Preparar extendidos de manera longitudinal
4. Localizar en el microscopio con un objetivo de 10x y 40x un área adecuada
para el conteo.
5. Observar utilizando el microscopio a 100x con aceite de inmersión. Los
reticulocitos se observarán de color azul, con material reticular citoplasmático
de color azul más intenso.
6. Contabilizar 1000 eritrocitos, incluyendo y diferenciando a los reticulocitos.

Vl.lll Velocidad de sedimentación globular (VSG)

_________________________________________________________Materiales

✓ Pipeta Pasteur
✓ Tubo de Wintrobe
✓ Soporte para tubos de Wintrobe

______________________________________________________Procedimiento
 1. Homogenizar el tubo que contiene la muestra sanguínea.
2. Llenar la pipeta Pasteur con sangre, después, introducir la punta de esta
hasta el fondo del tubo de Wintrobe e ir vistiendo lentamente evitando la
formación de burbujas hasta llegar a la marca de 0.
3. Colocar el tubo en la gradilla bien nivelada y de forma totalmente vertical
durante una hora, evitando cualquier tipo de vibración en el reposo.
4. Leer la altura de la columna de plasma que aparece en la parte superior, en
la escala que va del 0 al 10, cada raya equivale a 1 mm y se reporta en
mm/hora.

Vl.lV Hematocrito: Macrohematocrito y microhematocrito

_________________________________________________________Materiales

✓ Centrífuga de hematocrito
✓ Capilares heparinizados de 1.8 mm de diámetro máximo y longitud no
superior a 75 mm
✓ Tubos de Wintrobe limpios y secos
✓ Pipetas Pasteur de vidrio
✓ Perillas de succión para pipetas Pasteur
✓ Plastilina

______________________________________________________Procedimiento

___________________________________________Macrohematocrito

1. Aspirar sangre total con EDTA con la pipeta Pasteur, evitando aspirar aire y
la formación de burbujas.
2. Introducir la punta de la pipeta en el fondo del tubo Wintrobe
3. Llenar el tubo de Wintrobe con la sangre, cuidando de ir retirando la pipeta
conforme el tubo se va llenando.
4. Llenar el tubo hasta la marca de 100.
5. Centrifugar a 2000-3000 RPM durante un tiempo de 30 minutos.
6. Registrar el porcentaje que forma el paquete celular.
7. Identificar las distintas capas que se forman en el tubo.
 8. Realizar una inspección del plasma.

______________________________________________________Procedimiento

___________________________________________Microhematocrito

1. Introducir una gota de sangre en el tubo capilar (por capilaridad) en uno de

los extremos. No llenar el capilar menos de 40 mm ni más de 70 mm
2. Tapar el extremo superior del tubo capilar utilizando plastilina o cera, mientras
el otro extremo permanece abierto.
3. Situar el capilar en una hendidura del rotor de la centrifuga de hematocrito,
con el extremo tapado con plastilina hacía la parte exterior.
4. Centrifugar durante tres minutos y leer el volumen de hematocrito mediante
el empleo de la plantilla excéntrica correspondiente, ajustando el cero en el
inicio de la sangre y el 100 en el menisco superior del plasma.

Vl.V Índices eritrocitarios

• Concentración media de hemoglobina globular/corpuscular) (CMHG o

CMHG)

La concentración de hemoglobina corpuscular define el valor medio de

hemoglobina que se contiene por mililitro de hematíes, en perro es de 32 a 36g/dl y
en gato de 31-35 g/dl. Valores anormales en estos rangos, se relacionan
normalmente con anemia hipercrómica (niveles altos) o hipocrómica (niveles bajos).
Para llegar a los resultados de CMHC, se utiliza la siguiente ecuación:

CMHC = Nivel de hemoglobina X 100 / Valor del hematocrito

• Volumen globular/corpuscular medio (VGM o VCM)

El volumen corpuscular medio es un parámetro que indica el tamaño medio de

los eritrocitos. La media es de 60-75 femtolitros en perros y más chica en gatos, de
40 a 55 fl. En este estudio, se trata de diferenciar entre normocitos, macrocitosis
(aumento del tamaño de los eritrocitos) y microcitosis (disminución en el tamaño de
los eritrocitos), lo que podría indicar alguna enfermedad. Por ejemplo, la
macrocitosis podría ser un indicador por algun déficit vitamínico, anemias
regenerativas; mientras que la microcitosis puede estar relacionada con déficits de
hierro o enfermedades inflamatorias crónicas. Para llegar a los resultados de VCM,
se utiliza la siguiente ecuación:

VCM = Hematocrito / Recuento total de eritrocitos

• Hemoglobina globular/corpuscular media (HGM o HCM)

La hemoglobina corpuscular es la cantidad de hemoglobina que contiene cada

eritrocito. Para un perro, los valores medios se encuentran entre 22 a 27 pg,
mientras que en un gato son de entre 13 a 18 pg. Valores anormales en este análisis,
al igual que en el CHCM, se relacionan normalmente con anemia hipercrómica (en
niveles altos) o hipocrómica (en niveles bajos). Para llegar a los resultados de HCM,
se utiliza la siguiente ecuación:

HCM = Masa total de hemoglobina / Recuento total de eritrocitos

Vll. Referencias

1. Ambuludí, D. (2013) Hematocrito, hemoglobina, índices eritrocitarios y hierro

sérico como parámetros en la ayuda diagnóstica y preventiva de anemia
ferropénica en los niños del barrio Pasallal-Cantón Calvas. Universidad
Nacional de Loja, Ecuador.
2. Clínica Universidad de Navarra (s.f.) Índices eritrocitarios. Diccionario
Médico. Extraído de https://www.cun.es/diccionario-medico/terminos/indices-
eritrocitarios el día 30 de septiembre de 2023
3. Márquez, M. y Chacón-Cardona, J. (2015) Determinación de VSG:
comparación de los métodos de Wintrobe y microhematocrito. Revista de
Salud Pública, vol 18, pp 946.
4. National Institutes of Health, Medline Plus (2023) Conteo de glóbulos rojos.
Enciclopedia médica Medline. Extraído de
https://medlineplus.gov/spanish/ency/article/003644.htm el día 30 de
septiembre de 2023.
5. Rivadeneyra, E., Galán, R. y Zamora, I. (s.f.) Guía de laboratorio de
hematología. Universidad Veracruzana, facultad de química farmacéutica
biológica.
6. UC San Diego Health (s.f.). Conteo de células sanguíneas. Health Library.
Extraído de
https://myhealth.ucsd.edu/Spanish/RelatedItems/167,red_blood_cell_Count
_ES el día 30 de septiembre de 2023.