BIOQUIMICA

TRABAJO COLABORATIVO 2: BIOQUMICA
MARIO FERNANDO BUITRAGO CIRO
UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA ESCUELAS DE CIENCIAS BSICAS TECNOLOGA E INFORMTICA OCTUBRE DE 2011
INTRODUCCIN Los carbohidratos estn distribuidos ampliamente en vegetales y animales en los cuales tiene participacin estructural, funcional y metablica. Los carbohidratos se clasifican dependiendo del nmero de tomos de carbono que posee y la funcin aldehdica o cetonia, estas a su vez le confiere la base para la mayora de las reacciones usadas para su identificacin y cuantificacin. Cuando el carbohidrato esta formado por una sola molcula de carbohidrato, se denomina monosacridos, por dos, disacrido y por ms de dos, polisacrido. Los disacridos son azucares formados por la unin de dos monosacridos mediante el enlace glucosdico. Si este enlace se efecta entre dos carbonos anomricos, el disacrido no tendr el potencial aldehdo o cetona libre, por lo tanto no dan positivas aquellas pruebas que involucren la participacin de estos grupos, recibiendo el nombre de azcar no reductor, la sacarosa y la trealosa son ejemplos de los disacridos no reductores. Todos los disacridos que posean un carbono anomrico libre, darn positivas estas reacciones, llamndose azucares reductores, debido a que promueven la reduccin del reactivo usado y ellos mismos se oxidan. Aunque la mayora de los disacridos carecen de importancia para el hombre, con algunas excepciones como la sacarosa, su estudio se debe a que disacridos como la maltosa y la celubiosa, se originan como producto de la hidrlisis de polisacridos, la maltosa, por ejemplo, es el producto de la hidrlisis del glucgeno y el almidn. Los polisacridos, si son abundantes y representan para el hombre la principal fuente de energa metablica de fcil aprovechamiento, el almidn, constituido por solo molculas de glucosa es sin lugar a dudas la base alimenticia del globo terrestre, especialmente en la poblacin de bajos recursos
OBJETIVOS Identificar las reacciones que suceden para la hidrlisis de los carbohidratos Reconocer qumicamente la composicin de los reactivos usados en el laboratorio para la identificacin de carbohidratos.
DESARROLLO DE ACTIVIDADES 1. PRUEBAS PARA LA DETERMINACIN DE CARBOHIDRATOS
1. PRUEBA: Molish
COMPOSICIN QUMICA DEL REACTIVO: -naftol al 10% en etanol. H2SO4 concentrado Dejar caer lentamente de por las paredes del tubo. La aparicin de un anillo violeta-rojizo en el sitio de contacto de los dos lquidos, indica que la muestra contiene carbohidratos ILUSTRACIN Y MECANISMO DE REACCIN: Es una reaccin general para carbohidratos que contienen ms de 5 tomos de carbono. Esta prueba sirve para detectar la presencia de grupos reductores presentes en la muestra. Todos los glcidos por accin del cido sulfrico concentrado se deshidratan formando compuestos furfricos (las pentosas dan furfural y las hexosas dan hidroximetilfurfural). Estos compuestos furfricos reaccionan positivamente con el reactivo de Molish (solucin alcohlica de alfa-naftol).
2. PRUEBA: Benedict
COMPOSICIN QUMICA DEL REACTIVO: Sulfato cprico + Citrato de sodio + Carbonato de sodio. Llevar a bao de Mara hirviente por 5 min. La aparicin de un precipitado verde, amarillo o rojo indica la presencia de un azcar reductor. ILUSTRACIN Y MECANISMO DE REACCIN: Es una prueba especfica para las sustancias reductoras con grupos carboxilos libres.
3. PRUEBA: Barfoed
COMPOSICIN QUMICA DEL REACTIVO: Acetato de cobre cristalizado 13,3 g en 200 ml de H2O destilada. Filtrar si es necesario. Aadir 1.8 ml de cido actico glacial (CH3COOH). ILUSTRACIN Y MECANISMO DE REACCIN: Es una reaccin para identificar monosacridos, aunque algunos disacridos (los reductores) dan positiva la reaccin, pero con mas tiempo de calentamiento, ya que as se hidroliza el disacrido. El fundamento radica en la reduccin del acetato cprico a oxido cuproso, el cual forma un precipitado color rojo ladrillo
4. PRUEBA: Fehling
COMPOSICIN QUMICA DEL REACTIVO: Mezclar volmenes iguales de los dos reactivos: Fehling A: disolver 7 g de sulfato cprico monohidrato en 100 ml de agua destilada. Fehling B: disolver 35 g de tartrato de sodio y 10 g de hidrxido de sodio en 100 ml de agua destilada. Agitar y calentar a ebullicin durante 1 minuto. ILUSTRACIN Y MECANISMO DE REACCIN: Es aprovechada la propiedad de los carbohidratos es el poder reductor para la identificacin de azcares. El grupo carbonilo de los glcidos es oxidado a carboxilo por agentes oxidantes suaves, el ms empleado es el catin Cu2+, cuyas sales son de color azul, ste in se reduce a Cu+, que forma un precipitado rojizo de Cu2O. ste es el fundamento de la reaccin de Fehling, que se hace en medio bsico fuerte (NaOH), lo que requiere la presencia del tartrato como estabilizador del Cu2+, al formar un complejo, de lo contrario se formara Cu(OH)2 que es insoluble.
5. PRUEBA: Bial
COMPOSICIN QUMICA DEL REACTIVO: 300 ml de HCl concentrado en 250 ml de H2O destilada, aadir 1,5 g de orcinol y 8 gotas de cloruro frrico al 1% (Cl3Fe.6H2O). Llevar a bao de mara hirviente durante 3 min. La aparicin de un color verde botella, brillante y totalmente transparente, indica la presencia de una
pentosa. Algunos azucares dan con el Bial una coloracin verde, pero est es opaca. ILUSTRACIN Y MECANISMO DE REACCIN: La prueba Bial o de Orcinol HCl, es una prueba especfica para pentosa. La positividad se reconoce por la formacin de una coloracin verde botella brillante.
6. PRUEBA: Seliwanoff
COMPOSICIN QUMICA DEL REACTIVO: Resorcinol al 0.5 % en H2O, tomar 3 ml aadir 12 ml HCl concentrado, aadir H2O c.s.p. 35ml. Llevar a bao de Mara hirviente durante 10min. La formacin de un color rojo cereza, indica la presencia de fructosa. ILUSTRACIN Y MECANISMO DE REACCIN: Es especfica para cetosas que contengan 5 o ms tomos de carbono, pero se usa casi exclusivamente para identificar fructosa
7. PRUEBA: Tollens
COMPOSICIN QUMICA DEL REACTIVO: El reactivo de Tollens es un complejo acuoso de diamina-plata, presentado usualmente bajo la forma de nitrato. A nitrato de plata acuoso, agregar una gota de hidrxido de sodio diluido. Se formar un precipitado marrn de xido de plata. Agregar amonaco hasta que el precipitado se disuelva totalmente. Esto es nitrato de plata amoniacal [Ag(NH 3)2]NO3 (acuoso), la forma ms comn del reactivo de Tollens. ILUSTRACIN Y MECANISMO DE REACCIN: Esta prueba es anloga a la de Seliwanoff, pero para el reconocimiento de galactosa y sus derivados. La galactosa, algunas pentosas y el cido glucurnico dan un color rojo con el HCl y floroglucina. La glucosa da tambin un color rojo con la floroglucina, pero muy opaco, en contraste con el color rojo transparente de la galactosa.
2. AISLAMIENTO DE ADN
Aislamiento de ADN humano mediante Prueba gentica, identificacin corporal, anlisis de evidencia forense
Se purifica de todo material contaminante proveniente de los cromosomas del blanco de inters (se eliminan protenas y otros contaminantes)
Se obtienen mediante un hisopo frotando internamente la mejilla para obtener las clulas epiteliales
Se aisla el ADN purificado
BIBLIOGRAFIA
1. http://webdelprofesor.ula.ve/farmacia/gmendez/manuales
%20PDF/EXPERIMENTO%204%20IDENT%20CARB%2006-05.pdf
2. www.doschivos.com/trabajos/biologia/88.htm 3. http://learn.genetics.utah.edu/content/labs/extraction/

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