Chemistry">
Lab Microbiología Reporte 1
Lab Microbiología Reporte 1
Lab Microbiología Reporte 1
FACULTAD DE CIENCIAS
Licenciatura en Biología
MICROBIOLOGÍA
Reporte No. 1 de Laboratorio
"USO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO Y
MEDICIÓN DE CÉLULAS "
García Paredes D.
Reynoso Rios I.
Grupo 621
Prof: Portillo López
Ensenada B. C. a 23 de agosto 2022.
1
INTRODUCCIÓN.
La última década ha sido testigo de un enorme crecimiento en la aplicación de la
microscopía óptica para investigaciones a nivel de micras y submicras en una
amplia variedad de disciplinas (B. Herman et al., 1993, S. Bradbury et al., 1998).
El rápido desarrollo de nuevos marcadores fluorescentes ha acelerado la expansión
de la microscopía de fluorescencia en aplicaciones e investigación de laboratorio
(B. Herman, 1988, F. W. D. Rost, 1992). Los avances en imágenes y análisis
digitales también han permitido a los microscopistas adquirir mediciones
cuantitativas de manera rápida y eficiente en muestras que van desde compuestos
enjaulados fotosensibles y superconductores cerámicos sintéticos hasta
microscopía de fluorescencia en tiempo real de células vivas en su entorno natural
(G. Sluder et al., 1998). La microscopía óptica, con la ayuda del vídeo digital,
también se puede usar para obtener imágenes de secciones ópticas muy delgadas, y
los sistemas ópticos confocales ahora están en funcionamiento en la mayoría de las
principales instituciones de investigación (C. J. R. Sheppard et al., 1997, J. B.
Pawley, 1995). Los primeros microscopistas se vieron obstaculizados por la
aberración óptica, las imágenes borrosas y el mal diseño de las lentes, que
fracasaron hasta el siglo XIX. Las aberraciones se corrigieron parcialmente a
mediados del siglo XIX con la introducción de los objetivos acromáticos Lister y
Amici que redujeron la aberración cromática y elevaron las aperturas numéricas a
alrededor de 0,65 para objetivos secos y hasta 1,25 para objetivos de inmersión
homogéneos ( S. Bradbury, 1967). En 1886, el trabajo de Ernst Abbe con Carl
Zeiss condujo a la producción de objetivos apocromáticos basados por primera vez
en principios ópticos de sonido y diseño de lentes. Estos objetivos avanzados
proporcionaron imágenes con aberración esférica reducida y sin distorsiones de
color (aberración cromática) en aperturas numéricas altas. Varios años más tarde,
en 1893, el profesor August Köhler informó sobre un método de iluminación que
desarrolló para optimizar la fotomicrografía, lo que permitió a los microscopistas
aprovechar al máximo el poder de resolución de los objetivos de Abbe. La última
década del siglo XIX vio innovaciones en la microscopía óptica, incluidos los
microscopios metalográficos, las fotolentes anastigmáticas, microscopios
binoculares con prismas formadores de imágenes y el primer estereomicroscopio.
2
En el microscopio compuesto, cada lente del objetivo forma una imagen
intermedia ampliada de la muestra iluminada en el tubo óptico. Luego, esta imagen
se amplía nuevamente y se ve a través del ocular como una imagen virtual
ampliada que parece estar ubicada a unas 10 pulgadas del ojo. Los microscopistas
deben enfocar sus ojos en ese plano más distante, en lugar de intentar enfocar a la
distancia de la platina del microscopio. Un ejemplo de un microscopio simple es
una lente de aumento que aumenta los objetos que son difíciles de ver a simple
vista. Las unidades de proyección de salas de cine incorporan este sistema de
manera eficiente. El microscopio compuesto emplea dos sistemas de lentes
separados, objetivo y ocular, cuyo producto produce el aumento final. Los
microscopios estándar usan iluminación de campo claro en la que la luz pasa a
través de la muestra delgada.
Interpupillary control
Optical
tube
Eyepieces
Neck/arm
Nosepiece
Objectives
Power
Condenser
switch
Field
diaphragm
Rheostat
Coarse and
fine focus
Light source
Stage X-Y Base
adjustment knobs
7. Por lo general, hay tres o cuatro lentes objetivo (Figura 2), cada uno con un
poder de aumento específico. Grabado en el cilindro de cada lente del objetivo está
el poder de aumento y la apertura numérica (NA). La NA está relacionada con el
ángulo de la luz captada por el objetivo; en esencia, indica la capacidad de
captación de luz de la lente del objetivo. Funcionalmente, cuanto mayor sea el NA,
mayor será la resolución o la capacidad de distinguir entre los detalles finos de dos
objetos situados muy cerca. Las cuatro potencias estándar de aumento y NA
utilizadas en el laboratorio de hematología son 103/0,25 (baja potencia), 403/0,65
4
453/0,66 (alta potencia, seco), 503/0,90 (inmersión en aceite) y 1003/1,25
(inmersión en aceite). Cuanto menor sea el aumento, mayor será el campo de
visión; cuanto mayor sea el aumento, menor será el campo de visión. El aumento
total se calcula multiplicando el aumento del ocular por el aumento de la lente del
objetivo; por ejemplo, 103 (ocular) multiplicado por 1003 (inmersión en aceite) es
un aumento total de 10003. Los microscopios empleados en el laboratorio clínico
se utilizan con lentes objetivo acromáticas o planas acromáticas, cuyo campo está
enfocado, mientras que la periferia no lo está (Rodak, B. F., 2015).
Figura 2 Lente del objetivo del microscopio. La apertura numérica (NA) indica la
capacidad de captación de luz de la lente del objetivo y refleja su capacidad para
distinguir entre detalles finos de dos objetos situados muy cerca. La distancia de
trabajo (WD) es la distancia en milímetros entre la lente del objetivo y el
cubreobjetos cuando la muestra está enfocada. (Cortesía Nikon Instruments, Inc.,
Melville, NY.)
Vertical
Swingout
adjustment of
condenser lens
Aperture
diaphragm
Centering adjustment
of condenser
Field Diaphragm
Control
COMPETENCIA.
8
MATERIALES.
METODOLOGÍA.
10
RESULTADOS.
Como medidas tenemos que la regla del ocular del microscopio mide 10 unidades
pero no son exactas y comparándola con la regla que nos fue proporcionada en el
portaobjetos está mide 0 a 2000 micras y sacamos a unidad de referencia tanto para
5X, 10X y 40X.
Para la de 5X las separaciones miden 200 micras cada uno, para 10X mide 100
micras cada uno y para 40X miden 25 micras.
Medimos 6 ejemplares para probar nuestra medida de calibración y las medidas
fueron: 35 ,25, 25, 35, 37.5 y 52.5 micras. El promedio oficial son 40 micras.
Imagen 1
Foto de la regla ya calibrada midiendo a un Dinoflagelado ¨Lingulodinium
polyedra¨.
Imagen 2
Foto de Dinoflagelado ¨Lingulodinium polyedra¨.
11
Imagen 3
Foto de el proceso de de como se calibra la regla para tener una medida más real.
DISCUSIÓN.
Se tuvo algunos problemas para enfocar la muestra porque girabamos con mucha
velocidad el macroscopio, con la ayuda de la profesora logramos enfocar en todos
los objetivos, así como medir dinoflagelados en el objetivo 40x. Medimos más de
cinco ejemplares y logramos capturar con la cámara de nuestro celular algunos.
Concluimos en que los procesos de calibración para medidas de muestras son de
gran importancia para la investigación y el tener un buen sistema para la medición
de los organismos.
CONCLUSIÓN.
Según la literatura los dinoflagelados varían en tamaño desde alrededor de 5 a
2000 micrómetros (0,0002 a 0,08 pulgadas). Nuestros resultados concuerdan con la
literatura pues el promedio del tamaño de los dinoflagelados medidos es de 40
micras.
12
REFERENCIAS / BIBLIOGRAFÍA
G. Sluder and D. E. Wolf (eds.), Methods in Cell Biology, Vol. 56: Video
Microscopy. Academic Press, New York, 1998, 327 pp.
13
Hallett, R.I., 1999. Consequences of environmental change on the growth and
morphology of Lingulodinium polyedrum (Dinophyceae) in culture. Ph.D. thesis.
University of Westminster, 109 pp.
S. Bradbury, The Evolution of the Microscope. Pergamon Press, New York, 1967,
357 pp.
Zernike, F. (1942). Phase contrast, a new method for the microscopic observation
of transparent objects part II. Physica, 9(10), 974-986.
14
CUESTIONARIO
16
4. Describir cuáles tipos de microscopios electrónicos existen actualmente:
- Microscopio electrónico de transmisión (TEM)
- Microscopio electrónico de barrido (SEM)
- -Microscopio electrónico de reflexión (REM)
8. Investigar cuál bacteria es la más pequeña y cuál la más grande, diga sus
medidas y características:
- Pelagibacter ubique es la bacteria no parasitaria más pequeña. Tiene una
longitud de 0.37-0.89 μm.
- Thiomargarita namibiensis es la bacteria más grande del mundo. Esta
bacteria se encuentra entre los sedimentos de la plataforma continental de
Namibia, África . Con 0,75 milímetros de ancho.