UNIVERSIDAD ARTURO MICHELENA

FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA DE PATOLOGÍA MÉDICA
HISTOTECNOLOGÍA I

MICROSCOPIO ELECTRÓNICO
DE

BARRIDO
ESTUDIANTES:
ACOSTA YANDRA C.I.: 28.465.584.
HERNÁNDEZ DORA C.I.: 29.626.433.
PROFESORA:
MOLINA NAHOMY C.I.: 30.387.209.
YSLEIDID CORONA.
SAN DIEGO, MARZO 2023.
 MICROSCOPIO
ELECTRÓNICO DE BARRIDO
El Microscopio electrónico de barrido, mejor conocido por sus siglas en
inglés como SEM (scanning electron microscope).
Es un tipo de microscopio electrónico, diseñado para estudiar
directamente las superficies de objetos sólidos, que utiliza un haz de
electrones enfocados con energía relativamente baja como una
sonda de electrones que se escanea de manera regular sobre la
muestra. La acción del haz de electrones estimula la emisión de
electrones dispersados de alta energía y electrones secundarios de
baja energía de la superficie de la muestra.

Tiene capacidades
únicas para analizar
superficies y produce
imágenes de alta
resolución de las
mismas.
 ¿POR QUÉ SE CREÓ?
Los microscopios ópticos presentaban una ineficiencia de la longitud
de onda, lo cual no les permitía lograr una mejor potencia en
resolución; debido a este limitado poder de resolución, se probaron
varias fuentes de iluminación como: rayos X de muy pequeña longitud
de onda, sin embargo no tuvo el éxito esperado. No obstante, las
investigaciones que iniciaron en el año 1923 acerca de difracción
electrónica, sentaron las bases para la fabricación del primer
microscopio electrónico.

Los microscopios electrónicos tienen longitudes de onda muy

cortas en comparación con el microscopio óptico, lo que
permite una mejor potencia de resolución; por lo tanto,
aumentar la resolución de los microscopios electrónicos fue
una de las principales fuerzas impulsoras durante el
desarrollo del instrumento.
 MICROSCOPIO
ELECTRÓNICO DE BARRIDO

Manfred von
1928 Ardenne
Estableció su laboratorio de
investigación privada en Berlin, para
llevar a cabo su propia investigación
en tecnología de radio, televisión y
microscopía electrónica. Inventó el
microscopio electrónico de barrido.
 FUNCIONAMIENTO

-El microscopio electrónico de barrido (MEB) utiliza electrones

en lugar de fotones para formar una imagen.
-Los electrones se originan al calentarse un filamento, en este
caso de tungsteno, ubicado en un cilindro en la parte superior
de la columna del MEB.
 FUNCIONAMIENTO
Electrones
secundarios Retrodispersados
Electrón arrancado de -El microscopio electrónico de barrido Se producen cuando un
la superficie de un electrón del haz choca
utiliza electrones emitidos y funciona
sólido en un proceso de frontalmente con el núcleo
según el principio de la aplicación de de un átomo de la muestra,
ionización.
energía cinética para producir siendo repelido en sentido
señales sobre la interacción de los contrario fuera de la
muestra.
electrones.
-Estos electrones son:

-Estos electrones viajan a través de -Es decir, que los electrones secundarios
una columna y mediante la acción de y retrodispersados ​se utilizan para
lentes o bobinas electromagnéticas producir una imagen y a su vez
son orientados formando un haz, que desempeñan el papel principal de
mediante la acción de otras bobinas detectar la morfología y la topografía de
“barre” la superficie de la muestra la muestra, mientras que los electrones
originando señales de distintos tipos, retrodispersados difractados ​muestran
algunas de ellas visibles o traducidas contraste en la composición de los
como una imagen. elementos de la muestra.
 PARTES DEL EQUIPO
Cañón de electrones.

Ánodo acelerador de electrones

Lentes magnéticos
Portaobejtos.
Generador de barrido.
Detector de electrones.
Sistema de vacio.
Sistema de adquisicion y procesamiento de
imagenes.
 PARTES DEL EQUIPO
Cañón de electrones: emisor de efecto de campo.
Ánodo acelerador de electrones: Conectado a una fuente de alta tensión.

Lentes magnéticos: Dirigen el haz de electrones.

Portaobjetos: Donde se coloca la muestra con su preparación.

Generador de barrido: Dirigen el haz de electrones en su recorrido sobre la

superficie de la muestra.
Detector de electrones: Recogen los electrones de la muestra.
Sistema de vacio: Es imprescindible que todos los elementos funcionen en baja
presión o vacío para evitar que las moléculas de aire desvíen los electrones.
Sistema de adquisición y procesamiento de imágenes: Los datos recogidos en el
detector son enviados a un ordenador para su procesamiento que permitirá
reconstituir la imagen del objeto de la muestra.
 PARTES DEL EQUIPO

Diagrama esquemático de la columna de electrones de un microscopio electrónico de barrido

 MÉTODO DE USO DEL EQUIPO
Un haz de electrones se mueve en un patrón x-y a través de una muestra conductora, que
libera varias señales de datos que contienen información estructural y de composición.
Debido a que se utilizan electrones como fuente de radiación en lugar de fotones de luz, se
mejora la resolución.
Simultáneamente, debido a que la muestra se irradia en un modo de secuencia temporal, se
logra una gran profundidad de campo y las imágenes aparecen en tres dimensiones.
Además, una amplia gama de aumentos (10 a 30 000×) facilita la correlación de imágenes
macro y microscópicas.
APLICACIÓN DEL MICROSCOPIO
ELECTRÓNICO DE BARRIDO
Odontología Geología

Arqueología
Paleontología
ÁREAS:
Medicina
Zoología

Petrografia Biología
APLICACIONES
Odontología: Caracterizaciones morfológicas; Una aplicación específica de este
microscopio se obtiene al estudiar la direccionalidad de las varillas del esmalte dental.
Geología : Estudio morfológico, estructural y análisis químico de las muestras.
Arqueología: estudio morfológico e identificación analítica.
Petrografía: Estudio morfológico, estructural y análisis químico de las muestras.
Paleontología: estudio morfológico e identificación analítica.
Restauraciones: estudio de pigmentos pictóricos, textiles, obras de arte, pinturas, etc.
Botánica, Biomedicina, Medicina: estudio morfológico y químico.
Zoología: estudio morfológico.
 MEB EN EL CAMPO DE LA
ANATOMÍA PATOLÓGICA.
Se requieren dos condiciones para analizar muestras:

Muestras libres de Muestras

humedad. conductivas.
 MEB EN EL CAMPO DE LA
ANATOMÍA PATOLÓGICA.
MUESTRAS NO MUESTRAS
CONDUCTORAS CONDUCTORAS
-En estos microscopios las muestras no -Las muestras conductoras pueden ser revisadas sin
conductoras (orgánicas, biológicas, vidrios, ningún tipo de cubierta.
polímeros) necesitan una cubierta metálica para -En el caso de las muestras biológicas se procesan
lograr su observación, generalmente una deshidratando con alcohol o acetona, posteriormente
cubierta de oro, o con carbono. son secadas por el método de punto crítico (CPD,
Critical Point Drying) y finalmente son metalizadas.

El CPD es un método de secado que permite conservar la forma y estructura celular de

la muestra. Se basa en el reemplazo de los líquidos utilizados en la fijación, y
deshidratación, por CO2, que es evaporado bajo ciertas condiciones de temperatura y
presión sin dañar los tejidos de la muestra.
 MEB EN EL CAMPO DE LA
ANATOMÍA PATOLÓGICA.
ASPECTOS A CONSIDERAR:
Las muestras que se observan no son Son porciones de órganos con
secciones. superficies de interés.

Se pueden observar superficies de Pero no aquellas que han sido

secciones hechas con un vibratomo o incluidas en resina o parafina.
con un microtomo de congelación.
 MICROSCOPIO
ELECTRÓNICO DE BARRIDO
De
sh
ón id
ci r
a

at
Fij

ac
En la microscopia
electrónica de barrido

ión
el haz de
electrones no atraviesa
la muestra sino que
explora (“barre”) su

a
superficie
Mo

nt

rt
aje i e
Cu b
 PROCESO:
SECADO POR PUNTO
Obtención de la muestra: Pociones de
tejido con superficies de interes.
CRITICO

Fijación: Con sustancias químicas o

utilizando el método de criofijación.

Deshidratación: Con sustancias químicas

(alcoholes o acetona).

Secado por punto critico: método para

eliminar el líquido contenido en un
espécimen preservando su estructura de
superficie.
 PROCESO:
Montaje: Discos metálicos
conductores de
electricidad.

La muestra se coloca en soportes

adecuados "STUB".

Se le debe colocar un adhesivo de Permite que la

carbono de doble cara al Stub para muestra no se
hacerlo conductor. mueva.

La muestra se coloca sobre el adhesivo.

 PROCESO: METALIZADOR

Recubrimiento:
Luego se procede a cubrir el material
con materiales conductores (reduce el
daño térmico).

Por electrostática se deposita un polvo

uniforme y fino de carbono, recubriendo
totalmente la muestra.

O con platino y cromo.

 ¿EL MEB PUEDE OBSERVAR
MUESTRAS LIQUIDAS?

¡SI! Liquido.
Geles.
Espumas.

¿Como lo hace?
Es posible congelando las
muestras con nitrógeno liquido.
CUIDADOS PARA EL ALMACENAMIENTO
MICROSCOPIO PARA EL MICROSCOPIO
ELECTRÓNICO DE ELECTRÓNICO DE
BARRIDO BARRIDO
Ubicar el MEB en una zona donde El equipo debe ser correctamente
no transite el personal, puesto cubierto de la humedad, polvo y
que, es un equipo grande. otros agentes dañinos y
Cerciorarse de la corriente contaminantes.
eléctrica antes y después de
utilizar el equipo.
Buen empleo y conocimiento del
equipo.
Al concluir con el trabajo verificar
que todo se encuentre limpio y en
su lugar.
 DIFERENCIAS
MICROSCOPIO
ELECTRÓNICO DE MICROSCOPIO ÓPTICO
BARRIDO
No atraviesa la Atraviesa la muestra.
muestra. Permite observar
Permite observar interioridad.
superficies. Utiliza un haz de luz.
Utiliza un haz de
electrones.
 VENTAJAS Y DESVENTAJAS
DEL MEB .

VENTAJAS DESVENTAJAS
Permite la observación y Permite una menor capacidad de
caracterización superficial de aumento que el microscopio
materiales inorgánicos y orgánicos. electrónico de transmisión.
Permite apreciar con mayor facilidad Solamente pueden observarse
en tres dimensiones, texturas y objetos organismos muertos.
que se hayan pulverizado con un metal Solo pueden ofrecer imágenes en
antes de su observación. blanco y negro puesto que no utilizan la
No es necesario cortar el objeto en luz visible.
capas para observarlo. Alto costo y tamaño.
 MICROSCOPIO
ELECTRÓNICO DE BARRIDO

Piel humana en corte, 600X. Glomérulo renal humano 1200X.

Gentileza Dra. Gorodner, Fac. Gentileza Dra. Gorodner, Fac.
Medicina, UNNE Medicina, UNNE
 MICROSCOPIO
ELECTRÓNICO DE BARRIDO

Glóbulo rojo. Glóbulo blanco.

 ARTÍCULO CIENTÍFICO
SERVICIO DE MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA
DE BARRIDO Y MICROANÁLISIS DEL LIMF
El microscopio electrónico de barrido (SEM, Scanning Electron Microscope) es uno de los instrumentos más versátiles
para el examen y análisis de características microestructurales de objetos sólidos. Una de las razones para ello es su
alta resolución (de 20 a 50 Å) y otra característica importante es la apariencia tridimensional de las imágenes,
producto de su gran profundidad de foco (aproximadamente entre 100 y 1000 veces mayor que la de un microscopio
óptico a la misma magnificación). En general los SEM cuentan con capacidad analítica mediante el agregado de un
detector de rayos X dispersivo en energías (EDS, Energy Dispersive Spectrometer), que permite obtener información
composicional de manera rápida y eficiente.
Los microscopios electrónicos de barrido (SEM), trabajan a un vacío aproximado de 10 -6 torr. En estos microscopios
las muestras no conductoras (orgánicas, biológicas, vidrios, polímeros, etc.) necesitan una cubierta conductora
metálica, para evitar carga eléctrica y daño por radiación, y lograr su observación. En estos casos se utiliza
generalmente una cubierta de oro por ser buen conductor del calor y la electricidad, o se recubren con carbono
cuando se quiere realizar análisis químico por EDS. Por otro lado, las muestras conductoras pueden ser examinadas
sin ningún tipo de cubierta

Autores: Juan M, Llorente, Carlos L (2013)

 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Metalinspec. ¿Qué es un microscopio electrónico de barrido? Mexico, 2022. Disponible en: https://www.blog.metalinspec.com.mx/que-
es-y-como-funciona-un-microscopio-electronico-de-barrido
2. Microscopía Electrónica de Barrido (MEB). (2020). Universidad de Burgos. Disponible en: https://www.ubu.es/parque-cientifico-
tecnologico/servicios-cientifico-tecnicos/microscopia/microscopia-electronica-de-barrido-meb
3. M. Alejandra Cangiano. Docplayer. A través del microscopio electrónico de barrido. 2014. Disponible en: https://docplayer.es/46318416-
A-traves-del-microscopio-electronico-de-barrido-version-escrita-del-video-a-traves-del-microscopio-electronico-de-barrido.html
4. Principios básicos del Microscopio Electrónico de Barrido. Autores: Jaime Renau-Piqueras & Magdalena Faura. Sección de Microscopía
Electrónica. Disponible en: https://ruc.udc.es/dspace/bitstream/handle/2183/9313/CC-011_art_5.pdf
5. Atlas de histología vegetal y animal. Técnicas histológicas, microscopio electrónico. España, 2022. Disponible en:
https://mmegias.webs.uvigo.es/6-tecnicas/6-electronico.php
6. necol. Microscopía electrónica de barrido. Mexico, 2021. Disponible en: https://www.inecol.mx/inecol/index.php/es/ct-menu-item-
25/ct-menu-item-27/17-ciencia-hoy/723-microscopia-electronica-de-barrido-y-microanalisis-de-elementos-del-cluster-cientifico-y-
tecnologico-biomimic
7. Microscopia electrónica de barrido. 2022. Disponible en: https://www.scai.uma.es/areas/micr/sem/sem.html
8. Laboratorio de Microscopía Electrónica de Barrido, Emisión de Campo y Nanolitografía. Autor: Esperanza Salvador Rueda. Disponible en:
https://www.uam.es/uam/sidi/unidades-de-analisis/unidad-microscopia/microscopia-barrido-emisioncampo-nanolitografia
9. Técnica histológica y microscopia. Editorial Médica Panamericana, 2012. Disponible en:
https://www.berri.es/pdf/HISTOLOGIA%E2%80%9A%20Texto%20y%20Atlas%20Color%20con%20Biolog%C3%ADa%20Celular%20y%2
0Molecular/9789500603225
10. Hipertextos del área de la biología. Microscopia electrónica: barrido. Argentina, 2013. Disponible en:
http://www.biologia.edu.ar/microscopia/meb.htm
11. Mantenimiento adecuado de un microscopio electrónico. Autor: Gómez, J. Gómez M. Disponible en:
12. https://es.slideshare.net/gomezajj/mantenimiento-adecuado-de-un-microscopio-electronico