Medios de Cultivo
Medios de Cultivo
Medios de Cultivo
Fundamento
La recuperación y enumeración
de Escherichia coli y coliformes son
indicadores importantes de la higiene
ambiental y alimentaria. La detección de la
actividad de la ß-glucuronidasa se usa
ampliamente para diferenciar
las bacterias Escherichia coli , ya que la
enzima, que está codificada por el gen uidA,
está presente en Escherichia coli, pero no en
otros miembros del grupo coliforme. Como
los coliformes son positivos a la lactosa, la
Fotografia tomada por actividad de la ß-galactosidasa, codificada
Alejandra Mendoza por el gen lacZ , se usa para diferenciar este
grupo de otros organismos capaces de crecer
en el medio selectivo. Esto resulta en E.
coli púrpura, ya que son capaces de escindir
ambos cromógenos, con otros coliformes que dan colonias de color rosado, ya que
escinden solo el cromógeno galactosido.
Brilliance E. coli / coliform Agar selectivo contiene dos agentes cromogénicos:
Rose-Gal: detecta la actividad de la ß-galactosidasa
X-Glu: detecta la actividad de la ß-glucuronidasa.
El medio también contiene laurilsulfato de sodio que actúa como un agente
selectivo, inhibiendo el crecimiento de organismos Gram-positivos.
La mayoría de los organismos en el grupo de coliformes son capaces de fermentar
la lactosa, por lo que escinden el cromógeno rosa-gal rosa, produciendo colonias
rosadas. Las cepas de Escherichia coli se pueden diferenciar de los otros
coliformes, ya que también poseen la enzima ß-glucuronidasa (que se ha
demostrado que es altamente específica de Escherichia coli ). El cromógeno X-Glu
es el objetivo de esta enzima.
Interpretación de resultados
Fundamento
Interpretación de resultado
Después de una incubación suficiente, debe presentarse crecimiento de colonias
aisladas en áreas extendidas y crecimientos confluentes en áreas de inoculación
densa
AGAR BISMUTO-SULFITO
Fundamento
Agar selectivo para aislamiento y
diferenciación de Salmonella typhi y
otras Salmonellas a partir de material
clínico, alimentos y agua según
WILSON y BLAIR (1927).
El Verde brillante y el bismuto-sulfito
inhiben considerablemente los
gérmenes de acompañamiento.
El sulfato de hierro (III) es un indicador
del sulfuro de hidrógeno que producen
las colonias de Salmonella H2S-
positivas. Habitualmente, esta reacción
produce una precipitación marrón o
fotografia tomada por negra en el medio de cultivo así como
Alejandra Mendoza colonias de color negro o verde con
brillo metálico.
Interpretación de resultados
Colonias Microorganismo
Colonias negras con brillo Salmonella typhi
metálico, rodeadas de zonas
parduzcas-negras
Colonias negras o verdosasgrises, Salmonella spp.
algunas veces con brillo
metálico, con o sin
ennegrecimiento del medio de
cultivo rodeante
Fundamento
Interpretación de resultados
Las colonias de Listeria son de color verde grisáceo con un halo negro. La
confirmación de la presencia de Listeria se realiza mediante subcultivo en medios
apropiados e identificación bioquímica/serológica Las colonias de organismos
fermentadores de manitol tales como los estafilococos, que pueden crecer en este
medio, presentan un color amarillo con un halo amarillo.
BD XLD Agar (Xylose-Lysine-Desoxycholate Agar)
Fundamento
XLD Agar es un medio selectivo y de
diferenciación. Contiene extracto de
levadura como fuente de nutrientes y
vitaminas. Utiliza el desoxicolato de sodio
como agente selectivo y, por consiguiente,
inhibe los microorganismos gram positivos.
La xilosase incorpora en el medio dado que
la fermentan prácticamente todos los
entéricos, excepto Shigella, y esta
propiedad hace posible la diferenciación
de dicha especie. La lisina se incluye para
permitir la diferenciación del grupo
Salmonella de los organismos no
patógenos, dado que, sin lisina,Salmonella
fermentaría rápidamente la xilosa y no se
Fotografia tomada por
distinguiría de las especies no patógenas.
Alejandra Mendoza
Cuando la Salmonella agota el suministro
de xilosa, la lisina es atacada por la enzima
lisina descarboxilasa, lo que genera un cambio a un pH alcalino que imita la reacción
de Shigella. Para evitar el cambio similar en los organismos coliformes positivos a
la lisina, se añaden lactosa y sacarosa para producir ácido en exceso.
Para aumentar la capacidad de diferenciación de la fórmula, se incluye un sistema
indicador de H2S, formado por tiosulfato sódico y citrato férrico amónico, para la
visualización del ácido sulfhídrico producido, lo que origina la formación de colonias
con centros de color negro. Los organismos no patógenos no productores de H2S
no descarboxilan la lisina; por tanto, la reacción ácida producida por dichos
organismos evita el oscurecimiento de las colonias, lo quesucede sólo con pH
alcalino o neutro.
Interpretación de resultado
Colonias Microorganismo
Fundamento
Interpretación de resultados
Después de una incubación suficiente, las placas pueden mostrar colonias aisladas
en las áreas extendidas y crecimiento confluente en áreas de inoculación densa.
Examinar la posible presencia de colonias fúngicas con color y morfología
habituales en las placas. Realizar pruebas bioquímicas y procedimientos
microscópicos y serológicos para confirmar los resultados.
AGAR PLATE COUNT-LECHE DESNATADA
Fundamento
Interpretación de resultados
Seleccione las placas que contienen 10 - 300
colonias. Los resultados se expresan como
colonias por ml de producto ensayado. Las
Fotografia tomada por Alejandra colonias proteolíticas psicrotróficas pueden
Mendoza potenciarse inundando las placas con una
solución de clorhidrato al 1%. ácido o ácido
acético al 10%. Retire el exceso de solución ácida y cuente las colonias rodeadas
de zonas claras
AGAR CZAPEK DOX
Fundamento
Es un medio utilizado para el cultivo de hongos y
bacterias capaces de utilizar nitrógeno inorgánicos.
La sacarosa es la única fuente de carbono y el nitrato de
sodio es la única fuente de nitrógeno. Fosfato de
dipotasio es el agente amortiguador. El sulfato de
magnesio, el cloruro de potasio y el sulfato ferroso
proporcionan iones esenciales. El agar es El agente
solidificante.
Fotografia tomada por Interpretación de resultados
Alejandra Mendoza
Examinar para el crecimiento microbiano y la producción
de clamidiosporas.
Fundamento
Interpretación de resultados
Microorganismos fermentadores de lactosa: colonias rosadas o rojizas.
Microorganismos no fermentadores de lactosa: colonias del color del medio,
incoloras.
Microorganismos productores de sH2: colonias con centro ne- gro.
La producción de ácido sulfhídrico se evidencia como colonias con centro
negro debido a la formación de sulfuro de hierro.
Para aumentar la selectividad, se recomienda incubar previamente
AGAR ENTEROCOCCOSEL
Fundamento
Fundamento
Interpretación de resultados
Observar el color del medio de cultivo y la producción de gas.
Superficie alcalina/profundidad ácida (pico rojo/fondo amarillo): el
microorganismo solamente fermenta la glucosa.
Superficie ácida/Profundidad ácida (pico amarillo/fondo amarillo): el
microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa.
Superficie alcalina/Profundidad alcalina (pico rojo/fondo rojo): el
microorganismo es no fermentador de azúcares.
La presencia de burbujas o la ruptura del medio de cultivo indican que el
microorganismo produce gas.
VIOLETA ROJO Y BILIS GLUCOSA AGAR
Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona de gelatina
y el extracto de levadura aportan los nutrientes
necesarios para el crecimiento bacteriano, las
sales biliares y el cristal violeta inhiben el
desarrollo de la flora acompañante Gram
positiva, la glucosa es el hidrato de carbono
fermentable, y el rojo neutro es el indicador de
pH. El agar es el agente solidificante.
Todas las enterobacterias fermentan la
Fotografia tomada por glucosa, esto produce la acidificación del
Alejandra Mendoza
medio y el viraje del indicador de pH al color
rojo intenso. Debido a esto, se observan como
colonias de color rojo púrpura, de 1 a 2 mm de
diámetro, rodeadas generalmente de una zona rojiza de bilis precipitada.
T.C.B.S. MEDIO
Fundamento
El extracto de levadura, la peptona de carne y
la tripteína aportan los nutrientes para el
desarrollo microbiano. La bilis de buey, el
citrato de sodio y el pH alcalino inhiben el
desarrollo de flora acompañante, favoreciendo
el crecimiento de Vibrio spp. El cloruro de sodio
mantiene el balance osmótico y debido a su alta
concentración también contribuye a la
Fotografia tomada por selectividad del medio.
Alejandra Mendoza La sacarosa es el hidrato de carbono
fermentable y el azul de bromotimol y azul de
timol son los indicadores de pH que en un
ambiente alcalino le otorgan al medio de cultivo el color verde- azulado y viran al
color amarillo en medio ácido (por utilización de la sacarosa). El tiosulfato de sodio
es la fuente de azufre y junto con el citrato ferrico permiten la detección de la
producción de ácido sulfhídrico por formación de un compuesto color negro. El agar
es el agente solidificante.
NUTRITIVO AGAR
Fundamento
Medio de cultivo nutritivo no selectivo, en el
cual la pluripeptona y el extracto de carne
constituyen la fuente de carbono, nitrógeno y
aportan nutrientes para el desarrollo
bacteriano. El agregado de cloruro de sodio
mantiene el balance osmótico y el agar es el
agente solidificante.
Puede ser suplementado con sangre ovina
desfibrinada estéril para favorecer el
crecimiento de microorganismos exigentes en
Fotografia tomada por sus requerimientos nutricionales y permite una
Alejandra Mendoza clara visualización de las reacciones de
hemólisis.