Universidad Autónoma

de Coahuila

Practica 1
Aprendiendo a utilizar el microscopio óptico

Microbiología

Paola Cruz Martínez

Objetivos
- El estudiante conocerá los principales componentes del microscopio.
- El estudiante manipulará los distintos sistemas del microscopio para lograr enfoques correctos.
- A través de observaciones de diversas preparaciones, identificará las diferencias de células
procariotas y eucariotas.

Introducción

Algunos seres vivos pueden observarse a simple vista. Sin embargo, existen organismos tan pequeños
(alrededor de 0.1 mm) que a simple vista no los percibimos, por lo que se recurre a instrumentos ópticos
como la lupa o el microscopio ya sea para organismos pequeños de menos de 0.1 mm o partes de
organismos; y además, ayuda a superar esta limitación. El microscopio compuesto escolar es un aparato
de observación de cuerpos transparentes. El ojo humano tiene una capacidad de resolución relativamente
alta, pero objetos y organismos pequeños no son visibles a simple vista. Los microscopios tienen un poder
de resolución mucho más alto que el ojo humano, y el poder de resolución es: la propiedad que se tiene
para poder ver dos puntos muy juntos con toda claridad. El microscopio es una de las herramientas más
valiosas que nos permite descifrar parte de los misterios de la vida en general. Es un instrumento delicado.
Mediante la práctica de montaje, enfoque y observación, es posible determinar las características
cualitativas y cuantitativas de estructuras muy pequeñas y transparentes con el fin de penetrar al micro
mundo que era casi inexistente hasta antes de su invención. Como los microscopios son instrumentos
ópticos, es necesario obtener el aumento total de la combinación del aumento del ocular y el aumento del
objetivo, y se obtiene de la siguiente manera: el ocular tiene un determinado aumento, que generalmente
es de 10 aumentos o de 10X, los objetivos tienen diferente poder de resolución que puede ser: 4X, 10X,
40X y 100X, el resultado final de número de aumentos se da multiplicando el aumento del ocular por el
aumento del objetivo que se está utilizando; ejemplo: ocular 10X y el objetivo es de 40X, el resultado será
400 aumentos o 400X.
Microscopio de campo claro

El microscopio ordinario es llamado de campo claro debido a que se genera una imagen oscura
sobre un fondo brillante. El microscopio consiste en un cuerpo robusto de metal compuesto de una base y
un brazo en el cual se fijan el resto de las partes. Una fuente de luz, que puede ser un espejo o un
iluminador electrónico, se localiza en la base. Dos botones, el de ajuste grueso y el de ajuste fino
(llamados tornillos macro y micrométrico, respectivamente) están localizados sobre el brazo y pueden
moverse para enfocar la imagen.
 La platina está localizada en la parte media del brazo y en ella se colocan las laminillas de
observación, sujetas por un clip simple o por un clip mecánico. El clip mecánico permite al operador
mover una laminilla en cuatro direcciones (atrás, adelante, derecha e izquierda) durante la observación. El
condensador de la platina está montado dentro o por debajo de la platina y su función es transmitir un
cono de luz sobre la muestra. A menudo su posición es fija en los microscopios simples, pero puede
ajustarse verticalmente en los modelos más avanzados.

La curvada parte superior del brazo sostiene el revólver y uno o más oculares. Los microscopios
más avanzados tienen oculares para ambos ojos y son llamados microscopios binoculares. El cuerpo del
ocular contiene en sí mismo una serie de espejos y prismas y el tubo que los sostiene puede estar inclinado
para facilitar la observación. El revólver sostiene de tres a cinco objetivos con lentes de diferente poder de
amplificación y pueden ser rotados para posicionar cualquiera de ello debajo del cuerpo del ocular.
Idealmente un microscopio deber ser parfocal, esto es, que la imagen debe permanecer enfocada cuando
los objetivos son cambiados.

Las lentes de los objetivos forman una imagen real amplificada dentro del microscopio, y las
lentes del ocular amplifican aún más esta imagen primaria. El aumento total es calculado multiplicando el
aumento del objetivo por el aumento del ocular. Por ejemplo, si se utiliza el objetivo 45x con un ocular
10x, el aumento total de la muestra será de 450x.

La parte más importante del microscopio es el objetivo, el cual debe producir una imagen clara y
no sólo amplificarla. Por ello, la resolución es extremadamente importante. La resolución es la capacidad
de una lente para separar o distinguir entre dos objetos pequeños que están demasiado cerca uno del otro.
Mucho de la teoría óptica respecto al diseño de microscopios fue desarrollada por el físico Alemán Ernst
Abbé en los 1870’s. La distancia mínima (d) entre dos objeto que los revela como entidades separadas
está dada por la ecuación de Abbé en la cual lambda (λ) es la longitud de onda de la luz utilizada para
iluminar la muestra y (nsenθ) es la apertura numérica (AN).

0 .5 λ
d=
nsen θ

Conforme d se vuelve más pequeña, la resolución se incrementa y pueden discernirse detalles más
finos de la muestra. La ecuación anterior indica que el principal factor en la resoluciones la longitud de
onda de la luz empleada. La longitud de onda debe ser más corta que la distancia entre dos objetos o éstos
no serán vistos claramente. Así, la mayor resolución se obtiene con luz de longitud de onda más corta, la
del extremo azul del espectro visible (en el rango de 450 a 500 nm).

Normalmente, un microscopio está equipado con tres o cuatro objetivos en el rango de 4x a 100x.
La distancia de trabajo de un objetivo es la distancia entre la superficie frontal de la lente y la superficie
del cubreobjetos (si es utilizado) o de la muestra cuando está enfocada. Los objetivos con apertura
numérica grande y gran poder de resolución tienen distancias de trabajo pequeñas.

La mayoría de los microscopios estándar vienen con ocular de 10x y tiene un límite superior de
amplificación de 1000x con aceite de inmersión. Un ocular de 15x puede usarse con objetivos adecuados y
obtener una amplificación de 1500x. Cualquier aumento superior no capacita a la persona para observar
más detalles. Puede construirse un microscopio de luz capaz de amplificar hasta 10,000x, pero se estaría
amplificando simplemente una imagen borrosa. Sólo el microscopio electrónico proporciona suficiente
resolución para hacer útil tan alta capacidad de amplificación.

La siguiente tabla muestra las propiedades de los objetivos más comunes del microscopio de luz.

Objetivo
Propiedades De escaneo Seco débil Seco fuerte De inmersión
Amplificación 4x 10x 40-45x 90-100x
Apertura numérica 0.10 0.25 0.55-0.65 1.25-1.4
Longitud focal aproximada (f) 40 mm 16 mm 4 mm 1.8-2.0 mm
Distancia de trabajo 17-20 mm 4-8 mm 0.5-0.7 mm 0.1 mm
Poder de resolución aproximado 2.3 μ 0.9 μ 0.35 μ 0.18 μ
con luz de 450 nm (azul)

Metodología

Para llevar acabo esta práctica, se utilizará el microscopio virtual. Por favor ingresa en la siguiente liga:

https://www1.udel.edu/biology/ketcham/microscope/scope.html
NOTA: es importante que tengas habilitado Flash Player para que pueda ejecutarse la página. Si no lo
tienes habilitado, asegúrate de otorgarle los permisos a la página.

En esta liga encontrarás el tutorial para aprender el uso del microscopio, manipulando el sistema de
ilumunación, mecánico y de lentes. Sigue las instrucciones y asegúrate de que cumplas con la Checklist al
realizar las observaciones.

En la plataforma se muestran cuantro preparaciones:

a. Letra “e”
b. Punta de una raíz de cebolla
c. Bacteria con cápsula
d. Un raspado del interior de la mejilla

Realiza las observaciones con cada uno de los objetivos (4X, 10X, 40X y 100X) y registra tus resultados
mediante fotografías. No olvides colocar el pie de figura para cada observación.

Resultados
imagen 1.- letra ¨e¨ objetivo 4x

Imagen 2.- ¨Punta de una raíz de cebolla¨ objetivo 4x

Imagen 3.- ¨bacteria con capsula¨ objetivo 4x

Imagen 4.- ¨ raspado del interior de la mejilla¨ objetivo 4x

Imagen 5.- letra ¨e¨ objetivo 10x

Imagen 6.- ¨punta de una raíz de cebolla¨ objetivo 10x

Imagen 7.- ¨bacteria con capsula¨ objetivo 10x

Imagen 8.- ¨raspado del interior de una mejilla¨ objetivo 10x

Imagen 9.- ¨letra e¨ objetivo 40x

Imagen 10.- ¨Punta de la raíz de una cebolla¨ objetivo 40x

Imagen 11.- ¨bacteria con capsula¨ objetivo 40x

Imagen 12.- ¨raspado del interior de una mejilla¨ objetivo 40x

Imagen 13.- ¨letra e¨ objetivo 100x

Imagen 14.- ¨punta de la raíz de una cebolla¨ objetivo 100x

Imagen 15.-¨bacteria con capsula¨ objetivo 100x

Imagen 16.- ¨raspado del interior de la mejilla¨ objetivo 100x

Discusión
Con el fin de aprender a usar por primera vez un microscopio de campo óptico se usó
virtualmente el microscopio con los distintos enfoques los cuales fueron 4X, 10X, 40X y 100X ,
el 4X ofrece el aumento más pequeño, para que pueda observar un área grande de la muestra.
Los lentes 10x muestran un objeto en 100 veces, un 40x a 400 veces, y un 100x en 1.000
aumentos. Y se realizó cada uno de ellos y se notó bastante la diferencia de cada uno, en la
Imagen 3.- ¨bacteria con capsula¨ objetivo 4x Se veía casi una textura uniforme a comparación
del 100x, si cambio bastante y se observaban con mucha más calidad. Es impresionante como a
simple vista no se ve nada de esto como por ejemplo en Imagen 14.- ¨punta de la raíz de una
cebolla¨ objetivo 100x

Conclusión
Se logró conocer los principales y básicos componentes del microscopio de campo óptico, manipulamos
los distintos sistemas del microscopio para obtener los enfoques correctos y a través de observaciones de
algunas preparaciones identificamos las diferencias de células procariotas y eucariotas.

Referencias
Uso y manejo del microscopio. (2015, 22 abril). Itescam.
https://itescam.edu.mx/principal/docentes/formatos/
Techlandia. (2016, 9 noviembre). Techlandia. https://techlandia.com/