Extraccion de Adn Platano

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS
ESCUELA DE ESTUDIOS GENERALES – INGENIERÍA

BIOLOGÍA PARA CIENCIAS E INGENIERÍAS
Informe de Laboratorio VII – ADN: Molécula de la Vida
INTEGRANTES
Dalis Sonaly Gonzales Rojas – EAP Ingeniería Agroindustrial
Diego Carlos Iriarte Chancafe – EAP Ingeniería Geológica
Adriana Aguirre Díaz – EAP Ingeniería Química
Luis Ángel Rojas Huamán – EAP Ingeniería de Minas
Frank Óscar Quiroz Ramirez – EAP Ingeniería Mecánica de Fluidos
DOCENTE
André Arturo Ampuero León
ÍNDICE
INTRODUCCIÓN ……………………………………………………………… 3
CAPÍTULO I: MATERIALES ……………………………………………………………… 4
CAPÍTULO II: METODOLOGÍA ……………………………………………………………… 5
CAPÍTULO III: RESULTADOS ……………………………………………………………… 9
CAPÍTULO IV: DISCUSIONES ……………………………………………………………… 10
CAPÍTULO V: CONCLUSIONES ……………………………………………………………… 11
CAPÍTULO VI: CUESTIONARIO ……………………………………………………………… 12
BIBLIOGRAFÍA ……………………………………………………………… 15
INTRODUCCIÓN
El centro de la ingeniería genética es la biología molecular (es decir, el estudio de

moléculas de la vida). Los biólogos moleculares en las últimas décadas han concentrado
sus esfuerzos en manipular "moléculas de información" como el ADN y las proteínas
porque todas las características externas de los organismos tienen su base en las proteínas
de los genes hechos de ADN. El ácido desoxirribonucleico consiste en dos cadenas de
polinucleótidos, compuesta de 4 subunidades de nucleótidos. El aislamiento de ADN es un
procedimiento rutinario e importante para los biólogos moleculares. Una vez aislado, el
ADN y la secuencia de sus subunidades se pueden determinar, manipular o alterar.
Cuando el ADN u otras moléculas se aíslan de las células, la solución circundante se
vuelve viscosa. Esto se debe a que las moléculas de ADN son largas y tienden a adherirse
entre sí debido a la cohesión entre ellas y el enlace de hidrógeno (el enlace de hidrógeno
también mantiene juntas las dos cadenas de la doble hélice del ADN).
CAPÍTULO I: MATERIALES
Los materiales que fueron utilizados en el siguiente experimento fueron:
Agua Alcohol Lavavajillas Plátano
Sal Tela cubrebocas Cuchara Vaso

CAPÍTULO II: METODOLOGÍA
La metodología empleada para los siguientes experimentos fue la siguiente:
Procedimiento del experimento: Extracción de ADN- plátanos
1. Primero se cortan y desecha la casaca de los plátanos
2. A continuación, vertimos el plátano a una bolsa, y la molemos suavemente hasta

que no quede grumos.
3. Después, en un vaso colocamos ½ taza de agua, el lavavajillas y una cucharada
de sal, luego mezclamos.
4. Luego vertemos 4 cucharadas del menjunje en el vaso 1 a la bolsa del plátano

molido, dejamos por 2 minutos.
5. Procediendo tomamos una tela, en este caso se utilizó la capa un cubrebocas

esterilizado, y filtramos el contenido de la bolsa con plátano en un nuevo vaso.
6. Finalizando, al filtrado le agregamos una cantidad de alcohol (previamente
refrigerado una noche anterior) desde un lado del vaso y dejamos reposar. Al
finalizar se podrán observar grumos trasparentes lo cual contiene parte del ADN
del plátano.
CAPÍTULO III: RESULTADOS
Resultados del experimento: Extracción de ADN- plátanos
Luego de culminar los pasos del experimento observamos como en segundos

aparece grumos semi transparentes, estos representan el ADN del plátano.
CAPÍTULO IV: DISCUSIONES
En este trabajo lo que se busca en observar el ADN de el plátano, como

observarnos en la imagen anteriores. Durante el procedimiento, el plátano se
muele para que el área superficial se incremente y vuelva más fácil disolver las
membranas con el lavavajillas, que ayuda a disolver la bicapa lipídica de la
membrana plasmática.
La sal se utiliza para romper las cadenas de proteínas que unen a los ácidos
nucleicos liberando las cadenas de ADN. Finalmente, el ADN, al ser insoluble en
etanol a bajas temperaturas, se hace visible ya que sus cadenas se aglutinan por
la fuerza de empuje que genera el etanol al verterlo desde un lado del vaso.
CAPÍTULO V: CONCLUSIONES
Gracias a este experimento logramos comprobar la presencia de ADN en las

células de un plátano, comprobando que pueden ser aisladas del resto de las
sustancia. Y que para lógralo podemos utilizar simples utensilios de uso
domestico. Además aprendimos que para poder aislar el ADN de una célula
vegetal primero debemos disolver la bicapa lipídica, obteniendo el ADN disperso
en los restos de la célula original.
CAPÍTULO VI: CUESTIONARIO
1. ¿Por qué se usó alcohol a baja temperatura y no a temperatura ambiente?
El ADN es una molécula polar, pero la reacción con el etanol a muy baja
temperatura hace que se vuelva apolar e insoluble en el etanol, formándose un
precipitado justo entre la capa con etanol líquido y la capa con el extracto. El ADN
es el único componente que no es soluble en etanol, y se hace visible por que las
diferentes cadenas se van aglutinando entre si al precipitar debido a la acción de
fuerzas físicas. El alcohol es menos denso que el agua del extracto y por eso se
precipita.
2. ¿Porque fue necesario moler las fresas?
Se tienen que moler bien las fresas para romper las paredes celulares de la célula
vegetal y también se destruirán algunas membranas citoplasmáticas por estrés
físico. Las demás se destruirán con el Ayudín y la sal, como se sabe la membrana
citoplasmática está formada por fosfolípidos (bicapa lipídica); veremos como el
lavavajilla destruye dichas capas y la sal nos ayudara a separar las proteínas y a
que se precipiten a la superficie; siendo visibles al ojo humano.
3. El ADN se extrae de la boca ¿solo es extraído de las células de las mucosas

bucales?
Si, este examen se utiliza para obtener células de la mucosa bucal mediante el
raspado de mejilla con el fin de realizar análisis de ADN para pruebas genéticas.
Este examen también puede ayudar a establecer la identidad sexual. Cuando el
examen se utiliza para este fin, se denomina prueba de cromatina sexual.
4. Investigue sobre otros procedimientos que se usan para extraer ADN
La extracción de ADN se realiza para obtener las moléculas aisladas con alto
grado de pureza y poderlas utilizar en investigación científica, en medicina o para
la ciencia forense. La mayor parte de los métodos que existen para extraer el ADN
consisten en lograr primero la lisis o ruptura de la célula, para luego separar las
moléculas de ADN del resto de los constituyentes de la célula.
A la hora de escoger que método de extracción de ADN utilizar se tienen en

cuenta varios factores:
 La cantidad de muestra de la que se dispone para extraer el ADN.
 El tipo de muestra o fuente de la que se quiere obtener el ADN.
 La pureza con la que se quiere obtener el ADN extraído.
 El tiempo que consume cada método, su costo y el rendimiento esperado.
 Uso que se le va a dar al ADN extraído.
Con la diversidad de métodos conocidos actualmente se puede extraer ADN de

muchos sustratos como son la sangre, la saliva, la orina y otros fluidos corporales,
tejidos vivos, cultivos celulares, líquido amniótico, entre otros. En este trabajo se
analizan las diferencias, ventajas y desventajas de algunos de los métodos
existentes para la extracción del ADN.
 Incubación del lisado para su uso
Una posible forma de aislar el ADN genómico es incubar el lisado crudo a

temperaturas entre 90 – 100 ºC y luego usarlo directamente. Es evidente que
mediante este método el ADN obtenido es de muy baja pureza y con aplicaciones
muy reducidas. Otra desventaja de este método son las pérdidas de ADN por
acción de las nucleasas y otros componentes de los orgánulos que están en
contacto con el ADN y pueden destruirlo, por lo que no es útil para almacenar el
ADN pues los contaminantes pueden degradar las moléculas de ADN.
 Lisis por ruptura mecánica y extracción con disolventes orgánicos
Si se opta por realizar el lisado de las células mediante un proceso mecánico hay
que tener en cuenta la posibilidad de ruptura de las moléculas de ADN que se
intentan separar, por lo que este debe bastar para lograr la lisis de las células,
pero no ser muy agresivo para proteger el ADN. Este método puede ser usado
para extraer ADN de material crudo, liofilizado o congelado, que puede romperse
con un mortero, por congelación-descongelación o usando ultrasonidos. El lisado
de células se puede extraer con cloroformo, alcohol isoamílico o fenol, siendo las
proteínas y otros componentes de la célula solubles en el disolvente orgánico, por
lo que de esta forma se logra la separación de los ácidos nucleicos. Este método
se puede usar para moléculas de ADN de alto peso molecular, obteniendo buenos
rendimientos de moléculas relativamente puras, siempre teniendo en cuenta que
hay que controlar el pH de la fase acuosa y la concentración de sales, que son los
factores que aseguran una buena separación. Las desventajas de este método
son el uso de disolventes orgánicos dañinos para la salud humana y que pueden
quedar como trazas en la muestra de ADN y luego actuar como interferentes en
técnicas como el PCR, que es largo, en ocasiones puede dar rendimientos poco
reproducibles y requiere de varios trasvases que aumentan la posibilidad de
contaminación de la muestra.
 Lisado y purificación con un detergente iónico. Método del CTAB
Este es un procedimiento básico para extraer ADN de vegetales, donde un

detergente aniónico puede romper la pared celular y así se produce la lisis de las
células. El uso de detergentes aniónicos no solo se restringe a la extracción de
ADN vegetal, puede ser usado para ADN genómico de bacterias y otros tipos de
organismos. Un ejemplo de este método, quizás el más conocido, es el uso de
CTAB (bromuro de cetil trimetil amonio) como detergente para lograr la lisis. El
CTAB además, en presencia de EDTA como agente quelatante y TRIS-HCl como
tampón, forma complejos insolubles con el ADN. Luego se extraen los residuos
orgánicos con cloroformo, para separar posteriormente el ADN por precipitación
con etanol. Si se quiere evitar el uso de disolventes orgánicos se puede llevar a
cabo el método del CTAB separando directamente los complejos insolubles
formados con el ADN del sobrenadante donde han quedado disueltos el resto de
componentes celulares. Estos complejos se suspenden en disolución salina y se
adiciona posteriormente alcohol y RNAsa, logrando que precipite el ADN con un
grado de pureza aceptable para muchas aplicaciones.
 Método de salting-out
A partir de un lisado celular se pueden separar las moléculas de proteínas y otros

contaminantes del ADN mediante la adición de altas concentraciones de sal que
hacen que disminuya la solubilidad de las moléculas orgánicas en la fase acuosa.
En este método se utiliza frecuentemente la proteinasa K, el TRIS-HCl para
regular el pH y otros reactivos químicos que aseguren la total inactivación de las
enzimas que pueden actuar sobre las moléculas de ADN. Para la extracción se
utilizan sales inorgánicas como el perclorato de sodio y el cloruro de sodio en
concentraciones muy altas que hacen precipitar a las moléculas orgánicas. El
precipitado formado se separa por centrifugación y luego se puede extraer el ADN
de la disolución acuosa mediante la adición de alcohol, por precipitación.
Este método es sencillo, pero no siempre es eficaz, por lo que el ADN obtenido en
muchas ocasiones debe ser purificado antes de ser usado en posteriores
aplicaciones. La ventaja es que se elimina el uso de disolventes orgánicos.
 Uso de la proteinasa K y el dodecilsulfato de sodio
El procedimiento conocido como PK-SDS por sus siglas en inglés proteína se K -

sodium dodecyl sulfate, es uno de los más usados para la extracción de ADN ya
que la digestión de la muestra se puede realizar con proteinasa K que es activada
por el dodecil sulfato de sodio. La proteinasa K inactiva las DNAsas presentes en
el lisado celular usando detergente aniónico el SDS. La proteinasa K también es
usada en otros de los métodos descritos en este artículo para la digestión de las
proteínas y otros contaminantes del lisado celular.
CAPÍTULO VII: BIBLIOGRAFÍA
Darrel S, Vodopich Randy Moore. 2017. Biology laboratory manual.

Eleventh edition. McGraw-Hill Education, New York –
Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Morgan, D., Raff, M., Roberts, K. & Walter,
P. (2015) Molecular Biology of the Cell. Garland Science, Taylor & Francis Group,
1464 pp.
Hirakawa, H., Shirasawa, K., Kosugi, S., Tashiro, K., Nakayama, S., Yamada, M.,
Kohara, M., Watanabe, A., Kishida, Y., Fujishiro, T., Tsuruoka, H., Minami, C.,
Sasamoto, S., Kato, M., Nanri, K., Komaki, A., Yanagi, T., Guoxin, Q., Maeda, F.,
Ishikawa, M., Kuhara, S., Sato, S., Tabata, S. & Isobe S.N. (2013) Dissection of
the Octoploid Strawberry Genome by Deep Sequencing of the Genomes of
Fragaria Species. DNA Research, 21, 169-181.
Mercado, J.A., El Mansouri, I., Jiménez-Bermúdez, S., Pliego-Alfaro, F.

& Quesada, M.A. (1999) A convenient protocol for extraction and purification of
DNA from Fragaria. In Vitro Cellular & Developmental Biology - Plant, 35, 152-
153.

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CAPÍTULO II: METODOLOGÍA ……………………………………………………………… 5

CAPÍTULO III: RESULTADOS ……………………………………………………………… 9

CAPÍTULO IV: DISCUSIONES ……………………………………………………………… 10

CAPÍTULO V: CONCLUSIONES ……………………………………………………………… 11

CAPÍTULO VI: CUESTIONARIO ……………………………………………………………… 12

El centro de la ingeniería genética es la biología molecular (es decir, el estudio de

Los materiales que fueron utilizados en el siguiente experimento fueron:

Agua Alcohol Lavavajillas Plátano

Sal Tela cubrebocas Cuchara Vaso

La metodología empleada para los siguientes experimentos fue la siguiente:

Procedimiento del experimento: Extracción de ADN- plátanos

1. Primero se cortan y desecha la casaca de los plátanos

2. A continuación, vertimos el plátano a una bolsa, y la molemos suavemente hasta

4. Luego vertemos 4 cucharadas del menjunje en el vaso 1 a la bolsa del plátano

5. Procediendo tomamos una tela, en este caso se utilizó la capa un cubrebocas

Resultados del experimento: Extracción de ADN- plátanos

Luego de culminar los pasos del experimento observamos como en segundos

En este trabajo lo que se busca en observar el ADN de el plátano, como

Gracias a este experimento logramos comprobar la presencia de ADN en las

1. ¿Por qué se usó alcohol a baja temperatura y no a temperatura ambiente?

2. ¿Porque fue necesario moler las fresas?

3. El ADN se extrae de la boca ¿solo es extraído de las células de las mucosas

4. Investigue sobre otros procedimientos que se usan para extraer ADN

A la hora de escoger que método de extracción de ADN utilizar se tienen en

 La cantidad de muestra de la que se dispone para extraer el ADN.

 El tipo de muestra o fuente de la que se quiere obtener el ADN.

 La pureza con la que se quiere obtener el ADN extraído.

 El tiempo que consume cada método, su costo y el rendimiento esperado.

 Uso que se le va a dar al ADN extraído.

Con la diversidad de métodos conocidos actualmente se puede extraer ADN de

Una posible forma de aislar el ADN genómico es incubar el lisado crudo a

 Lisis por ruptura mecánica y extracción con disolventes orgánicos

 Lisado y purificación con un detergente iónico. Método del CTAB

Este es un procedimiento básico para extraer ADN de vegetales, donde un

A partir de un lisado celular se pueden separar las moléculas de proteínas y otros

 Uso de la proteinasa K y el dodecilsulfato de sodio

El procedimiento conocido como PK-SDS por sus siglas en inglés proteína se K -

Darrel S, Vodopich Randy Moore. 2017. Biology laboratory manual.

Mercado, J.A., El Mansouri, I., Jiménez-Bermúdez, S., Pliego-Alfaro, F.

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