RESULTADOS:

Siembra de microorganismos

En Microbiología se entiende como siembra el proceso mediante el cual se lleva

una porción de una población de microorganismos, denominada entonces inóculo,
de un cultivo crecido a un medio nutritivo para su crecimiento. Todo este proceso
hay que llevarlo a cabo con instrumentos y medios previamente esterilizados y
siguiendo las instrucciones de los monitores de prácticas.

Fotografía 1. Pesaje y dilución de la muestra de suelo.

Se observa el procedimiento en donde se toma una muestra de 10 gramos de

suelo, y después se realiza una disolución.
 Fotografía 2. Tubos de ensayo con disoluciones.

Disoluciones a realizar durante el laboratorio con el fin de realizar la siembra en

cultivos de agar.
 Fotografía 3. Método de disolución en tubos.

Como instrumento porta inóculos más frecuente se utiliza el asa de siembra,

con el que se puede tomar inóculo a partir de colonias o de medio líquido,
debido a que mantiene un pequeño volumen de agua por tensión superficial.
Para depositar el inóculo en líquido basta con introducir el extremo en el medio
y agitar ligeramente. Sobre sólido hay que hacer un recorrido largo sobre la
superficie salvo en el caso del medio AN y PDA,
 Fotografía 4. Cultivo de microorganismo en caja Petri.

Es este caso se utiliza la pipeta la realizar la siembra de microorganismos en los

medios nutritivos ya establecidos.

Fotografías 5. Resultado de las siembras después de la incubación.

Uno de los resultados de la siembra de realizada fue el evidenciado en las

imágenes, en donde se puede evidenciar el crecimiento microbiano en ambos
cultivos PDA el cual es utilizado para evidenciar el crecimiento de hongos o
levaduras y AN usado normalmente como rutina para todo tipo de bacteria.
A partir de este resultado se realiza la identificación de los microorganismos a
nivel macroscópico en donde se puede observar el crecimiento exponencial de
hongos y bacterias
En agar nutritivo se observan colonias color blanco entrelazadas por filamentos
estructurales de colonias. Por conteo se identifican aproximadamente 216
colonias. Y en el agar PDA se identifican aproximadamente 76 colonias de
hongos.

Fotografías 6. Identificación microscópica con tinción de gram y lactofenol.

Mediante la tinción de gram se pueden identificar las variedades de bacterias

presentes en la muestra a identificar microscópicamente.
La tinción de Gram es un tipo de tinción que se realiza sobre las bacterias para
observarlas mejor bajo el microscopio. Según la distribución del peptidoglicano de
la pared celular que las envuelve, se tiñen de una forma u otra. Así, las bacterias
que no se tiñen mediante esta técnica se denominan Gram negativas. Están
formadas por una pared más fina formada por menos capas de peptidoglicano y
una segunda membrana rica en lípidos (que repele la tinción Gram), al
microscopio aparecen sin color
Las Gram positivas tienen una pared celular mucho más gruesa, formada por un
gran número de capas de peptidoglicanos entre las que se inserta la tinción Gram,
dando un color violeta intenso al microscopio y se clasifican como Gram +.

La gran aportación práctica de la tinción de Gram es que permite determinar el tipo

de antibiótico así como su eficacia. El antibiótico de elección ha de ser capaz de
atravesar la pared bacteriana, en función de si la bacteriana es Gram positiva o
negativa se seleccionará el antibiótico más eficaz.

En la muestra se observa gran cantidad de microorganismos Gram positivos. A

continuación se en listan varios ejemplos de microorganismo Gram positivas y
Gram negativas:

Ejemplos de bacterias Gram positivas

1. Staphylococcus aureus. Responsable de abscesos, dermatitis,

infecciones localizadas y posibles gastroenteritis.
2. Streptococcus pyrogenes. Causante de infecciones supurativas en el
trayecto respiratorio, así como de fiebre reumática.
3. Streptococcus aglactiae. Frecuente en casos de meningitis neonatal,
endometritis y neumonía.
4. Streptococcus faecalis. Usual en infecciones en vías biliares y urinarias,
habita en el colon humano.
5. Streptococcus pneumoniae. Responsable de neumonías e infecciones en
las vías respiratorias, así como otitis, meningitis y peritonitis.
6. Streptococcus sanguis. Causante de endocarditis, cuando ingresa al
torrente sanguíneo a través de lesiones en su hábitat, la boca y la mucosa
dental.
7. Clostridium tetani. Bacterias responsables de los tétanos, entran al cuerpo
desde el suelo por traumatismos en las extremidades.
8. Bacillus antracis. Se trata de la conocida bacteria del ántrax, tanto en su
versión cutánea como en la pulmonar.
9. Clostridium botullinum. Causante del botulismo clásico y el infantil, habita
en el suelo y en los alimentos mal conservados.
10. Clostridium perfringes. Esta bacteria segrega toxinas que destruyen la
pared celular, y es responsable de las gangrenas gaseosas, la enteritis
necrosante y la endometritis.

Ejemplos de bacterias gramnegativas

1. Neisseria meningitidis. Peligrosa bacteria causante de meningitis y

meningocococemias, coloniza las vías respiratorias humanas y asciende a
las meninges por vía sanguínea.
2. Neisseria gonorrhoeae. Conocidísima por ser la causante de la gonorrea,
común enfermedad de transmisión sexual.
 3. Escherichia coli. Habitante usual del colon humano, está involucrada en
las llamadas “diarreas del viajero”, así como en meningitis neonatal, sepsis
e infecciones urinarias.
4. Salmonella typhi. Bacteria responsable de la enfermedad conocida como
fiebre tifoidea, suele transmitirse por vía fecal-oral: contaminación de aguas,
mala disposición de excretas o higiene defectuosa.
5. Salmonella enteritidis. Suele ocasionar enterocoitis y septicemia con
abscesos si llega a pasar del intestino a la sangre.
6. Haemophilus influenzae. Bacilo usualmente aerobio, es responsable de
numerosas meningitis, otitis, sinusitis, bronconeumonías, celulitis y artritis
séptica.
7. Bordetella pertussis. Causante de la enfermedad conocida como Tos
ferina, de alta mortalidad infantil.
8. Brucella abortus. Ocasiona la brucelosis, una enfermedad del ganado que
se transmite al hombre por contacto con los animales o por ingesta de
lácteos sin pasteurizar.
9. Francisella tularensis. Responsable de la llamada “fiebre del conejo” o
tularemia, se transmite al hombre mediante vectores (ácaros u otro tipo de
exoparásitos) de los conejos, ciervos y animales semejantes.
10. Pasteurella multocida. Bacilo anaeróbico, transmitido por la mordedura de
animales domésticos infectados, tales como perros y gatos. Se disemina a
través de la piel e infecta el sistema respiratorio, causando también celulitis.

Tinción hongos.

La tinción de Azul de lactofenol se emplea para observar hongos.Es una tinción

simple (un sólo colorante) y como tal está basada en la afinidad del colorante por
componentes de las células, en este caso por las estructuras fúngicas.

El azul de lactofenol tiene tres características que lo hacen especial para observar
dichas estructuras en los hongos del tipo moho obtenidos en los cultivos por
aislamiento.

 El fenol destruye la flora acompañante (algunas veces en los cultivos,

juntos a los hongos pueden crecer colonias de bacterias)
 El ácido láctico conserva las estructuras fúngicas al crear, por decirlo de
algún modo, una película que las protege  provocado por un cambio de gradiente
osmótico entre el interior y el exterior de dicha estructura.
 El azul de algodón tiene la capacidad de adherirse a las hifas y conidios de
los hongos microscópicos.
Para la caracterización de microorganismos mediante factores ambientales.

Fotografía 7. Determinación por pruebas bioquímicas.

 Fotografías 8. Resultados pruebas bioquímicas.

Pasada las 48 horas de que se realizó la caracterización de los tubos de ensayo

y agar nutritivo, se procede a verificar los cambio ocurridos en cada uno de estos
Se evidencia en los primeros tubos de ensayo en la caja de Ph 10,
presencia de microorganismos al igual que en el de PH 7, aunque en
menos cantidad, por otra parte el tubo de Ph 4 se observa poco crecimiento
Ph 7 a 35 ° C, se evidencia presencia de biomasa.
PH 7 a 45 ° C crecimiento y mayor turbiedad a estas temperaturas.
pH 7 a 4 °C menor crecimiento.
Crecimiento microbiano en solución salina Na CL % .
Glucosa al 5% se evidencia crecimiento y turbiedad presente en el medio.
Se puede determinar mediante la observación y el análisis que los
microorganismos tienen mayor crecimiento en las soluciones con glucosa y
NaCl junto con los tubos de pH 7 a 45 °C donde se determinan que estos
medios favorecen el crecimiento de los microorganismos.
Caracterizaciones bioquímicas

Fotografía 9. Resultados finales tubos pruebas bioquímicas.

Las pruebas bioquímicas se realizan con la finalidad de determinar la actividad
metabólica de los microorganismos a partir de un cultivo puro obtenido, las
pruebas bioquímicas son un análisis clínico utilizado en la medicina para
determinar diagnosticar infecciones por bacterias.
 Fotografía 10. Resultados finales tubos pruebas bioquímicas.

Para la determinación de nuestros resultados a partir del cultivo inicial se realizan

varias pruebas con bioquímicos para determinar el metabolismo de los organismos
presentes.
En nuestro caso se realizaron con:
Pruebas Medios Color Color Resulta
bioquími de inicial final do
cas cultivos
Citrato Simm Verde Azul(pico +
ons citrato de flauta) y
verde(profundi
dad)
Indol Caldo Incoloro Rosado -
peptona sin anillo
 tripticasa
Rojo de Caldo Anaranja Amar -
metilo RM- do illo
VP
Voges Caldo Amarillo Rojo +
proskau RM- (superficie) y
er VP amarillo(fondo
)
Ureasa Urea Piel de fucsia +
Christens ante
en
Nitrato Nitrato transpare Amar -
nte illo
Tabla 1: resultados pruebas bioquímicas.

Las pruebas bioquímicas realizadas en el laboratorio arrojaron los siguientes

resultados:
En la prueba citrato, el medio simmons citrato con la Pseudomona se notó un
cambio de color de verde a azul en el pico de flauta y verde en la profundidad,
por lo tanto hubo proliferación de microorganismos, estos utilizaron el citrato
presente en el medio como fuente de carbono para la realización de sus
reacciones metabólicas, por lo tanto el resultado fue positivo.
La prueba de Indol realizada con la E. Coli fue negativa, después de habérsele
adicionado el reactivo de kovacs, no presentó ningún anillo, lo que indica que el
microorganismo no desdobló el triptófano presente en el caldo peptona tripticasa
para convertirlo en Indol.
La prueba rojo de metilo realizada al microorganismo E. Coli se observó un color
amarillo, lo que indica la incapacidad del organismo de producir ácidos a partir de
la fermentación de la glucosa, siendo la prueba negativa.
En la prueba Voges-Proskauer, se observó un anillo rojo en la superficie lo que
indica la presencia de diacetilo, producto de oxidación de la acetoína y por lo tanto
es una prueba VP positiva.
En la prueba ureasa, el resultado fue positivo. la degradación de la urea
produce amoniaco e hizo variar el color del indicador de piel de ante a fucsia,
poniéndose así de manifiesto la actividad ureasa.(ver anexo 10)
En la prueba del nitrato, la reacción fue negativa lo que indica que no se ha
producido degradación alguna del nitrito o que este se ha reducido hasta
nitrógeno o hasta amoniaco.
En la prueba de baird-parker, las colonias se observaron café oscuro con halos
claros, por lo tanto se considera una prueba positiva.

Interacciones microbianas:
En la caja de petri con agar PDA se cultivó hongos y trichoderma. En esta se
observa, que al costado donde creció el hongo, este último de color rojizo, se
formó una materia oscura alrededor de dónde fue inoculado este hongo, aunque
se esperaba crecimiento de un hongo color verde.

Por otro lado la caja de petri la cuál contenía una siembra masiva se puede
observar poco crecimiento en los discos de
 Fotografía 11. Cultivos interacciones bacterianas.

En cuanto a la determinación de grupos funcionales en muetras ambientales los

resultados mediante el desarrollo del laboratorio fueron los siguientes:

El medio presente en el que se realizaron las priebas era amonio, para lograr la
reacción en cada una de las disoluciones 10-1, 10-2 y 10 -3 se utiliza el reactivo
Griesse. Se utilizaron dos gotas de cada reactivo en cada uno de los tubos con la
disolución correspondiente.

Para la disoslucion de 10-1 , los resu+ltados fueronconcluyentes ya que de esta

disolución 3 de los tubos presentaron cambiosn en la coloración dando positivo y
dos no presentaron cambios dando negativo
Para la disolución 10-2., arrojo coloración rosa cuatro de los 5 tubos (positivo) y
una negativa.
Para la disolución 10-3 las pruebas en los 5 tubos fueron negativos.

Para determinar la presencia de nitratos con la última muestra de suelo. Traída del
mismo cultivo, re realiza la prueba de grupos funcionales de muestras ambientales
de grupos asociados a los ciclos de Nitrógeno y carbono
 Fotografía 12: Resultados Grupos funcionales muestran de suelo.
Al momento de que los medios reaccionan con el reactivo de griess, se confirma
que estos contienen nitritos, es decir que los microorganismos presentes en estos
medios realizan la reducción de amonio a nitritos.