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Hbsag Elisa
Hbsag Elisa
Hbsag Elisa
ELISA
SIGNIFICACION CLINICA
La hepatitis B es una enfermedad viral del hgado causada
por el virus de la hepatitis B (HBV). Puede cursar en forma
asintomtica, o como un proceso agudo o crnico. En los
casos ms graves puede derivar en cirrosis heptica y carcinoma hepatocelular primario. Se transmite principalmente
por contacto parenteral, percutneo, o sexual. Tambin se
ha observado transmisin perinatal y horizontal.
El HBV est constituido por una nucleocpside que contiene
el ADN asociado a protenas core y una envoltura cuyo principal componente es una protena conocida como antgeno
de superficie (HBsAg). El HBsAg generalmente aparece 6
semanas despus de la exposicin al HBV y persiste durante 4-14 semanas. Est presente durante el periodo de
incubacin, antes de la aparicin de la enfermedad clnica
y puede ser detectado en sangre 2 a 8 semanas antes de
la aparicin de ictericia o de evidencias bioqumicas de disfuncin heptica. As, el HBsAg es un primer indicador de
infeccin por el HBV. La hepatitis B crnica se define como
la presencia del HBsAg en sangre durante ms de 6 meses.
La deteccin del HBsAg es importante para el diagnstico de
las hepatitis agudas y crnicas, el control de portadores en
bancos de sangre y unidades de dilisis, de transplantados
y gestantes y para el control de preparados de sangre y
derivados destinados a transfusiones.
FUNDAMENTOS DEL METODO
HBsAg ELISA es un mtodo inmunoenzimtico directo tipo
sandwich. Los pocillos de la policubeta estn recubiertos
con anticuerpo de cobayo anti-HBs (anti-HBsAg) que acta
como anticuerpo de captura. La muestra se incuba en uno
de los pocillos. Si la misma contiene HBsAg, ste formar un
complejo con el anticuerpo unido a la placa. El material no
unido se elimina por lavado. En el siguiente paso se agrega
el anticuerpo de cabra anti-HBs conjugado con peroxidasa,
que se unir con los complejos anticuerpo-antgeno formados previamente. El conjugado no unido se remueve por
lavado. Posteriormente se agrega una solucin conteniendo
tetrametilbencidina y perxido de hidrgeno. En los casos en
que el HBsAg est presente en la muestra, se desarrolla color
celeste que vira al amarillo cuando se detiene la reaccin
con cido sulfrico.
REACTIVOS PROVISTOS
Policubeta sensibilizada: policubeta de tiras removibles con
96 pocillos recubiertos con anticuerpo de cobayo anti-HBs.
Conjugado Concentrado: anticuerpo de cabra anti-HBs
conjugado con peroxidasa (51x). Color rojo.
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N de pocillos
Conjugado
Concentrado
Diluyente
de Conjugado
8
16
24
32
96
20 ul
40 ul
60 ul
80 ul
240 ul
1 ml
2 ml
3 ml
4 ml
12 ml
N de pocillos
TMB
Diluyente de TMB
8
16
24
32
96
10 ul
20 ul
30 ul
40 ul
120 ul
1 ml
2 ml
3 ml
4 ml
12 ml
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Stopper
CP
Control Positivo
100 ul
Control Negativo
100 ul
100 ul
Muestra
Conjugado
100 ul
100 ul
100 ul
100 ul
100 ul
100 ul
100 ul
100 ul
CN
100 ul
ETAPA
PROCEDIMIENTO
PRECAUCIONES/OBSERVACIONES
Dilucin
Muestras
Agregar 100 ul de M, CP y CN
Incubacin
Lavado
Lavar cada pocillo con 350 ul de buffer de lava- Tiempo de contacto de la solucin de lavado entre
do (5 veces)
30 y 60 segundos. Eliminar completamente el lquido
residual de los pocillos
Dilucin
Conjugado
Incubacin
Lavado
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Dilucin
Revelado
Incubacin
Detencin
Lectura
Leer en espectrofotmetro
Panel
PHA105
PHA106M
PHA204
PHA205
PHA206
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Muestras
reactivas
Muestras
detectadas
14
12
23
23
23
13
11
22
23
20
Panel
N de
muestras
HBsAg
ELISA*
Subtipo
PHM917
PHM920
PHM927
PHM928
PHM930
PHM933M
PHM934
3
6
6
7
5
5
6
1 (43)
4 (26)
4 (7)
3 (14)
4 (3)
4 (7)
5 (3)
indet.
ad
indet.
ad
ad
ad
ad
Media
de abs.
D.S.
Intra-ensayo
C.V.
D.S.
Total
C.V.
0,277
0,930
1,171
1,880
0,026
0,012
0,031
0,050
0,068
0,002
4,44%
3,32%
4,30%
3,62%
8,53%
0,032
0,113
0,117
0,146
0,004
11,44%
12,11%
10,02%
7,79%
16,83%
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Sensib.
Policubeta sensibilizada
Conjugado
Conc.
Conjugado Concentrado
TMB
Diluy.
Conjugado Diluy.
Diluyente de Conjugado
Buf. Lavado Conc.
TMB
Control
TMB
Diluyente de TMB
Control Positivo
Control
Control Negativo
Stopper
Stopper
Fecha de caducidad
No congelar
Riesgo biolgico
Volumen despus de la reconstitucin
Cont.
Contenido
Nmero de lote
Elaborado por:
Xn
Nocivo
Corrosivo / Castico
Xi
i
Calibr.
b
b
c
h
Irritante
Consultar instrucciones de uso
Calibrador
Control
Control Positivo
Control Negativo
Nmero de catlogo
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Wiener lab.
2000 Rosario - Argentina
UR130321