Enzimas Laboratorio Ucv
Enzimas Laboratorio Ucv
Enzimas Laboratorio Ucv
INTRODUCCIÓN
• Holoenzimas: Poseen una parte proteica llamada apoenzima y otra no proteica denominada cofactor
El cofactor puede ser una molécula inorgánica, (iones metálicos como Fe, Cu, Zn, Mn, Mg,…) o puede
ser una molécula orgánica. En este caso, si la unión al apoenzima es covalente se denomina grupo
prostético y si no es covalente coenzima.
Propiedades de las enzimas
• Especificidad: Como consecuencia de la estructura del sitio activo las enzimas presentan un alto
grado de especificidad por el sustrato, puesto de manifiesto por su habilidad para discriminar entre
moléculas muy similares.
• Reversibilidad: Reversibilidad: Una enzima actúa igual sobre una reacción química sea cual sea el
sentido de la reacción. No modifican el sentido de la reacción.
• Eficacia: Se necesitan en muy poca cantidad. Una sola molécula de enzima puede catalizar la
reacción de miles de moléculas de sustrato ya que la enzima no se consume en el proceso sino que
se recupera al final.
• Gran poder catalítico: Multiplican la velocidad de las reacciones por un millón de veces o más.
• No se consumen en las reacciones.
E+S [E + S] E+P
Sitio activo:
Inhibidores:
Son moléculas que impiden el normal funcionamiento de las enzimas o las inutilizan, ya que
disminuyen o anulan la actividad enzimática. Constituyen un mecanismo de control de las reacciones
metabólicas. La inhibición puede ser:
a) Inhibición irreversible: Envenenamiento del enzima. El inhibidor se une al centro activo de la enzima
de forma permanente mediante un enlace covalente, con lo que la enzima queda inutilizada. Ej:
fármacos y tóxicos. El ión cianuro se une a la citocromo-oxidasa que es clave en la respiración.
b) Inhibición reversible: No se inutiliza el centro activo sino que impide temporalmente su normal
funcionamiento. No se une mediante enlaces covalentes. Puede ser de dos tipos:
MATERIALES
Solución de amilasa salival, tubos de ensayo, vaso de precipitado, pipetas, baño María, mechero de
alcohol almidón al 1%, sacarosa al 20 %, reactivo de Fehling, soluciones amortiguadoras con pH 3, 6.8
y 9.8, lugol. Muestra biológica: saliva
PROCEDIMIENTO
Primero se tiene que recolectar la muestra de saliva para obtener una solución de enzima. Para
ello el alumno debe enjuagarse la boca varias veces con agua corriente y proceda a recoger en un vaso
de precipitado limpio aproximadamente 2 ml de saliva. Luego adiciónele a la muestra recogida 10 ml
de agua destilada y mezclar.
1. Especificidad enzimática
Los enzimas, además de ser unos catalizadores muy eficaces, presentan un alto grado de
especificidad química, es decir, son capaces de inducir la transformación de un sólo tipo de moléculas
y no de otros que también se encuentran presentes en el medio de reacción. Un enzima es capaz de
discriminar entre dos sustancias que potencialmente podrían actuar como sustratos.
1 2 3
Solución de almidón 3 ml 3 ml -
Solución de sacarosa - - 3 ml
Solución de enzima 2 ml 2 ml 2 ml
Cloruro de sodio 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml
Mezclar e incubar durante 20 min. En baño maría (37° C)
Lugol 5 gotas - -
Reactivo de Fehling - 2 ml 2 ml
Calentar Calentar
Fundamento: Cada enzima tiene una temperatura óptima en la cual la velocidad de reacción es
máxima. Las enzimas en el cuerpo humano tienen una temperatura óptima de 37°C. Si aumenta
mucho, la enzima se desnaturaliza. El calor aumenta la energía cinética con lo que aumenta la
movilidad de las moléculas facilitando su encuentro.
1 2 3
Buffer 6.8 2 ml 2 ml 2 ml
Cloruro de sodio 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml
Solución de enzima 1 ml 1 ml 1 ml
Colocar c/ tubo durante 10 min. en sus diferentes baños: 1. Baño de hielo
2. Baño María 37°C
3. Llevar a ebullición
Solución de almidón 3 ml 3 ml 3 ml
Incubar 20 min. mas en sus respectivos baños
Lugol 3 gotas 3 gotas 3 gotas
Los tubos deben estar en sus respectivos baños por un laxo de 30 minutos en total
3. Sensibilidad al pH
Fundamento: Cada enzima presenta unos valores de pH entre los que son efectivos. Entre ambos
existe un pH óptimo en el que la velocidad de la reacción es máxima. Fuera de los límites la enzima se
desnaturaliza. Este efecto se debe a que, al ser los enzimas de naturaleza proteica, al igual que otras
proteínas, se desnaturalizan y pierden su actividad si el pH varía más allá de unos límites estrechos.
1 2 3
Buffer pH 3.8 2 ml - -
Buffer pH 6.8 - 2ml -
Buffer pH 8.9 - - 2 ml
Cloruro de sodio 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml
Solución de almidón 3 ml 3 ml 3 ml
Solución de enzima 1 ml 1 ml 1 ml
Mezclar e incubar durante 20´ en baño María a 37° C
Lugol 3 gotas 3 gotas 3 gotas
1 2 3
Cloruro de sodio 2 ml - -
Sulfato de cobre - 2 ml -
Nitrato de plata - - 2 ml
Buffer pH 6.8 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml
Solución de almidón 3 ml 3ml 3ml
Solución de enzima 1 ml 1 ml 1 ml
Mezclar e incubar durante 20 minutos en baño María (37°C)
Lugol 3 gotas 3 gotas 3 gotas
1 2 3 4
Solución de almidón 3 ml - 3 ml -
Solución de almidón diluido - 3 ml - 3 ml
Solución de enzima 1 ml 1 ml - -
Solución de enzima diluida - - 1 ml 1 ml
Buffer pH 6.8 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml
Mezclar e incubar durante 10 minutos en baño María (37°C)
Lugol 3 gotas 3 gotas 3 gotas 3 gotas
Cuestionario
2. La síntesis de ADN necesita ácido fólico. El metotrexato es un análogo del ácido fólico utilizado en
el tratamiento de algunos cánceres.
Tejido donde se
Enzima Reacción que cataliza Aplicación clínica
localiza
Amilasa
Creatina quinasa
Alanina aminotransferasa
Lactato deshidrogenasa
4. Complete el cuadro sobre aplicaciones terapéuticas de inhibidores enzimáticos.
Captopril
Lovastatin
Paracetamol
Ciprofloxacina
Cafalosporina