Guia de Practicas - Unj 2018 - Ii
Guia de Practicas - Unj 2018 - Ii
Guia de Practicas - Unj 2018 - Ii
GUIA DE PRÁCTICAS
2018
INTRODUCCION
Con la promulgación de la Ley Nº 26454, en mayo de 1995, que declara de orden público
y de interés nacional la obtención, donación, conservación, procesamiento, transfusión y
suministro de sangre humana, sus componentes y derivados, se inicia una necesaria
regulación de estas actividades asistenciales en nuestro país.
Por lo anterior, la presente guía de prácticas constituye una valiosa fuente de consulta de
procedimientos y técnicas para la formación de los alumnos de la Universidad de Jaén,
pudiendo desarrollar en el laboratorio y hospitales lo aprendido en aulas de clases durante
todo el curso lectivo, al mismo tiempo, poder brindar las pautas necesarias para optimizar
el uso de éste valioso y escaso recurso terapéutico.
REGLAMENTO GENERAL DE PRACTICAS DEL LABORATORIO DE
HEMOTERAPIA Y BANCO DE SANGRE
ASPECTOS A EVALUAR
Sedeberábuscarinformaciónrelacionadaaltemade la
práctica, elcualservirá tambiénpara
Marco Teórico reforzarelconocimiento adquirido durantela misma. 10
Deberá de tenerporlo menosdos páginas yno
excederdediez.
OBSERVACIONES IMPORTANTES:
– Elreportedelaboratoriodebeserentregadoenelperiododelaboratoriode la
siguientepráctica.
– No secalificaránreportes sin nombre.
– No serecibirán reportesparcial ototalmenteescritosAMANO.
– No se recibirán reportes tardíos ni en formatos electrónicos (correo electrónico o
traslado porUSB).
– El reporte debeentregarse engrapado(noclips).
– Toda aquella personaque se haya ausentado o haya sido retirada por cualquier motivo
de una práctica, NO TIENE DERECHO a entregar el informe
respectivo,sinimportarsila faltahayasidojustificada. Sinembargo, estonoquieredecir que
elalumnoseliberedelaevaluacióndeltemadela prácticadurante laspruebas parciales yfinal
dellaboratorio.
Losreportessecorregirán y devolveránen lasemanasiguientealaentregadel mismo.
Sialgúnalumnotienecualquierdudaoreclamosobrelaformaenquesehacalificado su reporte,
debe hablar con su instructor DENTRO DE LA PRIMERA SEMANA después de haberlo
recibido corregido NO AL FINAL DEL SEMESTRE. No se aceptaránreclamos
posteriores.
IMPORTANTE:
Se tomarácomofaltagrave (nota 0)cualquier indicio de plagio:
- Reproducción no autorizada de una publicación, palabra porpalabra, incluyendo
internet),
- Copiatotaloparcialdelcontenidodelreporteporpartededosomás alumnos(la
sanciónaplicaatodoslosestudiantesinvolucrados). Todo caso quedarádocumentado,y
unareincidenciapuedesignificarel retirodefinitivo del laboratorio.
PRACTICA Nº 01
a.Deberáestardisponibleunmanualdeprocedimientosespecíficos(deseguridad) en el
laboratorio para todo el personal que trabaje en él. Todos sus
requerimientosdeberán serseguidos,elmismoestarádocumentadoyserá revisadoy
actualizadoconregularidad. Deberáestarcolocadoenunlugar accesible
paratodosyseráfirmadopor todoel personal.
b.El personal debe recibir entrenamiento sobre todos los potenciales peligros
asociados con el trabajo, así como sobre las precauciones necesarias para
prevenirlaexposiciónaagentesinfecciosos y la disposicióny descartede materiales. El
personal debe mostrarevidencia de que ha entendido las instrucciones dadas en el
entrenamiento, el cual deberá ser documentado y firmadoporelpersonaly
porelsupervisor; deberántambiénimplementarse programascontinuos
deentrenamiento.
c.No está permitido comer, beber, fumar, guardar cualquier tipo de alimentos,
pertenenciaspersonalesoutensilios. Estáprohibidomaquillarse,colocarseo removerse
lentes de contacto. El uso de lentes de contacto está permitido
solamentecuandonohayotraopción. Elusodejoyas yaccesorios no es
recomendadoen ellaboratorio.
e.Elcabellolargodebeestaratadoatrásoarregladodemanera quenoentreen
contactoconlasmanos,con lasmuestras,conlos contenedoresni conelequipo.
k.Para todos los procedimientos que involucren contacto directo con la piel y material
biológicooanimalesinfectados, debenusarse guantes(delátex,vinilou otroco-polímero).
Estosdeberánserremovidos antes deabandonar el laboratorio ydescartados.
l. La ropa protectora (bata) no debe ser usada en las áreas que no son de
laboratorio(pasillos,biblioteca, etc.).
q.Si algún material o equipo debe salir del laboratorio para servicio de
mantenimientoopara descarte,debeserapropiadamentedescontaminadoy
etiquetadocomotal. Esresponsabilidaddeloperadorautoclavearydescartar todo
desecho potencialmentepeligroso.
r.Deberealizarseregularmenteunmonitoreo delasautoclavesusadaspara
descontaminar,usando indicadoresbiológicosy todoslos resultadosdebenser
archivados.
v.Lassalpicaduras,accidentesoexposicionesamaterialesinfecciosos, debenser
reportadosinmediatamentealsupervisordellaboratorio. Deben mantenerse
registrosescritosde talesincidentesdentrodel Departamento,y losresultadosde las
investigaciones detales incidentesdeben ser usados paraeducación continua.
3. Objetivos Específicos:
Que el estudiante:
- Apliquesusconocimientosenlaresolucióndecasosdeaccidenteocupacional con
material infeccioso
4. Procedimiento:
Reviseliteraturasobrebioseguridadenellaboratorioyresuelvalossiguientescasosde
accidenteocupacional:
CASONo.1
Edad:34años
Sexo: femenino
¿Cuáleselriesgoparaeltécnicodelaboratorioalentrarencontactoconlasangredel
paciente?
¿Quémedidas deintervención se le debenderealizársele al técnicode laboratorio?
¿Quémedidasdeprotecciónyprevenciónquedebióutilizareltécnicoparadisminuirel
riesgodecontactocon elmaterial infeccioso?
CASONo.2
Edad 27 años
Sexo:Femenino
Profesión: Médico
Evento:colocacióndesondanasogástricaacontuberculosispulmonar,confranca
hemoptisis yhematemesis.
Situación:hemoptisisyhematemesisactivaduranteelprocedimientodecolocaciónde la
sondaquecontamina la conjuntiva del médico.
¿Quémedidasdeprotecciónyprevenciónquedebióutilizarelmédicoparadisminuirel
riesgodecontactocon elmaterial infeccioso?
PRACTICA Nº 02
2. Objetivo:
4. Muestra: No aplica.
5. Materiales:
6. Procedimiento:
- Pasar los datos de las fichas al software bbcore y generar las etiquetas de
identificación ara las fichas tubos.
7. Interpretación:
8. Cuestionario:
a. Describa brevemente elproceso de Selección del postulante.
b. Mencione el tiempo que pueden diferirse temporalmente a los donantes por vacunas.
PRACTICA N° 03
1.
Introducción:Lasvenasdeunpacienteconstituyenlaprincipalfuentedeespecímenesparaa
nálisis delaboratorio,comopuntodeentradade medicamentos,así comoel sitioidealpara
transfusionessanguíneasy/oprocedimientosintravenosos. Elproceso medianteelcual la
sangre esremovida de la vena esconocido como venipunturaoflebotomía.
Latomademuestradesangreparaanálisisdelaboratoriosepuederealizarmediante
lassiguientes técnicas: venosaoperiféricay capilar. Paralamayoría delosexámenes
clínicos,incluyendohemogramasy dosificación dehemoglobina,se recomiendautilizar
sangrevenosa,mientras queparalas fórmulasleucocitariaso frotesperiféricospuede
extraerse sangre en el lóbulo de laoreja o de la yema de un dedo. En los casos de
niños,serecomienda utilizarla yema del dedogordo del pie odeltalón.
2. Objetivos:
Que el estudiante:
3. Alcance:Enestaprácticaelestudianteaprenderáelprocedimientocorrectode extracciónde
sangre venosa.
4.1Ordenmédica:
- Equipo Vacutainero
Tubosdevacío:Estosdispositivosestándiseñadosparallenarseconun volumen
predeterminadode sangre pormedio de vacío,esto garantiza una
adecuadarelaciónentresangreyanticoagulante. Lostaponesdegoma estáncodificados
porcolorde acuerdo con eladitivo que contienen así por ejemplo, lostubos
morados(EDTA)sonlos más utilizadosparahematología rutinaria y
lostuboscelestes(citrato)para pruebas de
coagulación.
- Adaptadorparatubosde vacío.
- Jeringuillas de 3,5y10cc.
Agujas:Estánnumeradasdependiendodesucalibre. Paracoleccióndesangre
parahemogramas,serecomiendaunaaguja de diámetro de 0.8mm (21G)para evitar
dañoalascélulas. Las agujas de 0.9-1.1mm de diámetro(20G-19G) se utilizan
normalmentepara punción venosa enadultos.
- Algodón
- Dispensadorde agujas
4.3Etiquetadodelostubos:
5. PUNCIÓN VENOSA:
5.1. Fundamentoteórico:
5. 2. Preparacióndel paciente:
- Instruyaalpacientesobrelatécnicaparatomarlamuestra. Valorelaexistenciade
problemashemorrágicoso decirculación, o alergias en látex.
- Evitepuncionarenunáreaconhematoma,fístulas,quemaduras,escoriacionesde la
piel,cicatrices odel costado enquese harealizado mastectomía reciente.
- Evitepuncionarenelbrazodondehayvenoclisis,inyecciónintramuscularpreviao
administración demedicamentos vía intravenosa.
5.3. Metodología
Practiquelasprecaucionesuniversalesmínimascontodopacienteaseratendido.
Todamuestradebeserconsideradapotencialmenteinfecciosaysedebentomarlas
precaucionesquegaranticen laseguridad delflebotomistayde los pacientes.
- Unavezrealizadalatomademuestra,descartarinmediatamentelosmateriales usados
enrecipientespara esefin.
- Losrecipientes quecontienenalgodóny
losdedesechodebenestarperfectamente
cerradostodoeltiempoyse abriránsolamente al
momentode usar.
5.3.2. Procedimiento:
- Unavezquepenetraenlavena,lasangrellenalos
tubosaspiradoresautomáticamenteporlapresiónnegativadentrodel tubo enelcaso
deVacutainer, mientras quecon jeringassedebejalarelémbolo con movimiento
continuo para extraer la sangre hasta el volumen requerido. Evite presionar
fuertemente laagujadurante la extracción.
- Descartarlasagujasy/ojeringuillas en uncontenedorapropiado.
6. Materiales yEquipo:
- Algodón
- Etanol al 70%
- Ligadura
- Jeringasde3 cc
- Descartadordepunzocortantes
- Bolsas rojas.
1. Definición: es un proceso por el cual se toma de sangre del donante a nivel de una vena
para poder recolectar una unidad de sangre total, la cual después de ser extraída se
realiza el tamizaje con los siete marcadores serológicos.
5. Materiales:
- Hemobasculas.
6. Procedimiento:
- Colocar la ligadura sin mucha presión, porque afecta la obtención de las plaquetas y
el factor VIII
- Idealmente no extraer más del 10% del volumen sanguíneo total y en ningún caso
más del 13%.
7. Interpretación:
8. Cuestionario:
a. Describa brevemente elproceso de extracción sanguínea.
b. ¿Cuáles son los niveles mínimos y máximos para una colecta de sangre?.
PRACTICA Nº 05
PREPARACION DE PAQUETE GLOBULAR
1. Definición:Son todas las células rojas que están presentes en la sangre (eritrocitos o
hematíes), son los elementos más numerosos (cuantitativamente) presentes, uno de
sus componentes principales es la hemoglobina y su función principal es la de
transportar el oxigeno hacia los diferentes tejidos en un ser.
5. Materiales:
- Bolsas de extracción.
- Centrífuga refrigerada.
- Balanza de platillos.
- Extractor de plasma.
- Sellador de bolsa
6. Procedimiento:
- Dejar la bolsa de sangre extraída en reposo por 30 min., luego centrifugar la san re
entera a 2000 rpm por 4 min. a 200 C
- Pinzar las tubuladuras de las bolsas de transferencia y dejar libre la más cercana a la
bolsa primaria.
7. Interpretación:
8. Cuestionario:
a. Describa brevemente elproceso de fraccionamiento y obtención del paquete globular.
PRACTICA 06
PREPARACION DE PLASMA FRECO CONGELADO
5. Materiales:
- Congeladora a -70 0 C
- Centrífuga refrigerada.
- Balanza de platillos.
- Extractor de plasma.
- Sellador de bolsa.
6. Procedimiento:
- Centrifugar la sangre entera colectada, dentro de las primeras seis horas de extraída
la san re a 2600 rpm por 15 min. a 200 C
- Pinzar las tubuladuras de las bolsas de transferencia y dejar libre la más cercana a la
bolsa primaria.
7. Interpretación:
8. Cuestionario:
a. Describa brevemente elproceso de fraccionamiento y obtención del plasma fresco
congelado.
PRACTICA 07
PREPARACION DE PLAQUETAS
5. Materiales:
- Centrifuga refrigerada.
- Rotador de plaquetas.
- Balanza de platillos.
- Extractor de plasma.
- Sellador de bolsa
6. Procedimiento:
7. Interpretación:
8. Cuestionario:
a. Describa brevemente elproceso de fraccionamiento y obtención de plaquetas.
PRACTICA 08
PREPARACION DE CRIOPRECIPITADOS
2. Objetivo:
5. Materiales:
- Centrifuga refrigerada.
- Congeladora a -70 0 C
- Balanza
- Extractor de plasma.
- Pinzas, tijeras y guantes.
- Sellador de bolsa
6. Procedimiento:
8. Cuestionario:
a. Describa brevemente elproceso de fraccionamiento y obtención de crioprecipitados.
PRACTICA Nº 09
ENSAYO INMUNOENZIMÁTICOS(ELISA)
1. Introducción:LatécnicaELISA
(ensayosdeinmunoabsorbencialigadaaenzimas)sebasaenla
deteccióndeunantígenoinmovilizadosobreunafasesólida medianteanticuerpos que
directaoindirectamenteproducenuna reacción marcada enzimáticamentecuyo
producto,puedeser medidoespectrofotométricamente. Lacantidaddeantígenose
determinacomparando lacurvaestándargeneradaconcantidadesconocidasdel antígeno.
Ventajas:versátil, robusto,simple en su realización,emplea reactivos económicos y
consigue,medianteelusodela fasesólida,de unaseparación fácilentrela fracción
retenidaylafracciónlibre, esfácildeadaptara analizadoresautomáticos. Estese
caracteriza porserun método cuantitativamente exactoporla medición de lavelocidad
dela reacciónyla duracióndela reacciónenuninstantefijo único
Desventajas:paraadaptarloaanalizadoresautomáticossenecesitande reactivosmuy
purificas, loqueaumenta elcosto de las pruebas.
2. Alcance:
En estapráctica el estudiante comprenderá y observará la aplicación y la
elaboracióndel ensayo de inmunoabsorbencia ligadaa enzima(ELISA).
3. Objetivos:
Queel estudiante:
- Conozca losprincipios enlosquese basala prueba deELISA
- Sefamiliarice conel equipoutilizado para laelaboracióndella pruebadeELISA.
- Conozcalaimportanciadeestetipodepruebasysuaplicaciónenelámbitode la medicina.
4. Antecedentes:
Dispositivos Empleados
EnElisa:
Se hanensayado numerosas fases sólidas, desde los tubos de cristal de los
orígenesalasactualesmicroplacasde 96 pocillosde plástico tratadoparaaumentarsu
capacidaddeabsorcióndemoléculasy confondosdepocilloópticamenteclarospara poder
realizarlas medidas de densidad óptica en instrumentos específicos,
espectrofotómetrosdelecturadeplacas quehanrecibidoelnombredelectoresELISA.
Actualmenteseestándesarrollandodispositivosdemayorcapacidad,porejemplocon
384 y1536 pocillos, adecuados para los sistemas de “screening” masivo de los
sistemasrobotizados (HTS, Highthroughputsystem).
LoslectoresELISAsonespectrofotómetroscapacesderealizarlecturasseriadasde
cadaunode lospocillosdelaplacaELISA.Adiferenciade unespectrofotómetro
convencional,concapacidaddeleertodaslas longitudesdeondadel ultravioletayel
visibledemaneracontinua,loslectoresde ELISAdisponendesistemas de filtrosque sólo
permitenla lecturadeuna opocaslongitudes deonda.Sonlaque se corresponden con las
necesarias para determinarla densidad óptica de los cromógenos más
comúnmenteutilizados.
Fases deunensayo
ELISA:
Las4fasesdeunensayo ELISA sonlas siguientes:
1. Unión del antígeno(odelanticuerpo)alos pocillos:
Launióndeanticuerposoantígenosserealizaconfacilidadalasuperficiede
plásticostratadosquetienengranafinidad porproteínas.
Generalmenteestepasoyanoserealizadebidoaqueloskitscomercialesyalo traen.
3. Conjugado:
Seagregaunanti-anticuerpoligadoaunaenzima(fosfatasaoperoxidasa)que se une al
inmunocomplejoqueya sehaformado.
4. Reveladode lareacciónenzimática.
Despuésdeunlavadoparaeliminartodaslas moléculasmarcadasno
fijadasen
formadeinmunocomplejosseañadeelsustratoenzimáticoensolución(cromógeno). Se
dejareaccionaryseleela densidad óptica(D.O.) medianteespectrofotometría.
Tipos deensayosELISA:
SehandesarrolladomúltiplesvariantesdeensayosELISA que permitendesdela
cuantificacióndeunantígeno ensolución,la deteccióndeunanticuerpoen una solución
por ejemploen el clonaje de anticuerpos monoclonales, o la determinación de la
subclase (idiotipo)de unanticuerpo.A continuación sedescribenlos máscomunes. La
versión máscomúndeELISA esel ensayo sandwich.
- Ensayodirecto:(EnsayoELISAsimplededoscapas).LasplacasELISAse preparan
recubriendolospocillosconlassolucionesenlas quesesospechase
encuentraelantígeno. Seincubanconanticuerposmarcados. Indicanla
presenciadeantígeno enlasoluciónanalizada.Esnecesarioincluircontroles
negativosqueserán muestrasdel mismo tipodelasanalizadas(sangre,orina,
etc.)peroenlas quese tengalacertezadelaausenciadelantígenobuscado.
Asimismose incluyencontrolespositivos(solucionesdondeseencuentrael antígeno
buscado,obiense lehaañadido).
- Ensayoindirecto:LasplacasELISAsepreparandeunaformaidénticaala
anterior.Loscontroles positivosy negativos sonlosmismos.Elsistemade
detecciónempleados anticuerpos:unoprimariocontraelantígeno,yuno
secundariomarcadocontraelprimario.Ladeteccióntienemayorsensibilidad
porpresentarunaamplificacióndeseñal debidaalaunióndedosomás
anticuerposecundarios porcadaprimario.Esel ensayomáspopular,comoloes la
inmunofluorescenciaindirecta, pues un mismo secundario marcado y un
mismosistema enzimático permitecuantificarunagrancantidaddeantígenos.
- Ensayo sandwich: (Ensayo de captura de antígeno y detección mediante
inmunocomplejos).Se tratadeunensayo muyempleadoenel quese recubreel
pocilloconunprimeranticuerpoanti-antígeno. Despuésdelavarelexcesode
anticuerposeaplicalamuestraproblemaenlaqueseencuentraelantígeno, que
seráretenido en el pocilloalserreconocido porel primeranticuerpo.
Despuésdeunsegundo lavadoqueeliminaelmaterialnoretenidoseaplicauna
soluciónconunsegundoanticuerpoanti-antígenomarcado.Así puescada molécula
deantígeno estaráunidaa unanticuerpo enla base quelo retiene y un
segundoanticuerpo,almenos, quelomarca.Esteensayotieneunagran
especificidadysensibilidaddebidoalaamplificacióndeseñal quepermiteel
segundoanticuerpo.
Aplicaciones:
Estemétodohatenidounaenormeaplicaciónentodosaquelloscampos enlos que
seprecisabalacuantificación de productos medianteanticuerpos:diagnóstico clínico,
detección viral, clasificación de anticuerpos en isotipos, búsqueda de
anticuerposmonoclonales,etc.
EnzimaSustrato Tampón:
Estas enzimas son utilizadas enla etapa de detección,las cuales unen de manera
covalenteamAbs(anticuerposmonoclonales),sinafectarlacapacidaddeunióna
antígenosdelanticuerpo,obien,sininhibirlaactividaddelaenzima. Una gran variedad
de sustratosse puede incubarcon estas enzimas para generarproductos de
colorsusceptiblesde cuantificación medianteespectrofotómetrosconplacasde
microtitulación. Las enzimas más comunes empleadas en la etapa dedetección son:
peroxidasadesuero de caballoy la fosfatasaalcalina. Acontinuaciónsedescribe la
preparacióndelas enzimasmás comunes:
HRP(peroxidasaderábano)OPD10mg/25mL detampón citratosódico0.15M
pH 5;añadir microLde30%peróxidodehidrógeno 30%
AP (Fosfatasaalcalina)PNPP 5 mg/5 mL de tampón dietanolamina-HCl0.1MpH
9.8+1mMcloruro demagnesio
TMB (tetrametilbenzidina)2.5mg/250 microLdeDMSO;hasta 25 ml con tampón
citratosódico 0.1MpH 6; añadir5microLdeperóxidodehidrógeno30%
5. Materiales:
- Alcohol al 70%
- Algodón
- Beakerconcloroal 5%
- Cloroal 5%
- Kitdereactivos paraELISA
- Pipetas automáticas de100 uL
- Pipetasautomáticas de1000uL
- Puntas azules parapipetas de200-1000uL
- Puntas amarillas parapipetas de200-1000uL
6. Procedimiento:
- Permitir que los reactivos alcancen la temperatura ambiente.Organizar y etiqueta
conel númeronecesario detiras.
- Añadir 100 uL control positivo, control negativo y suero de paciente por duplicado
enlos pocillos.
oPozos B1,C1 y D1: C-
oPozos E1 yF1: C+
oPozos G1 y H1: Mx1
- Añadir 50 ulde conjugado en los pozos B1 al H2. Cubrir con cinta
adhesiva.Mezcle suavemente.Incubar durante90 minutosa37°C.
- Lavar llenandocada pozo con 350 uLde solución de lavado. Repetir el
procedimiento5 veces
- Añadir 100uldecromógeno (sustrato) a los pozos A1 a H1. Mezcle
suavemente.Cubrirconcintaadhesivaeincubar30minutosprotegidosdela luz.
9Cuestionario:
a. Describa brevemente elproceso del ELISA de los marcadores serológicos en el
banco de sangre.
PRACTICA Nº 10
DETERMINACIÓN DE HEMATOCRITO
5. Materiales:
- Cera o plastilina
- Algodón al 70%
- Centrifuga de microhematocrito
6. Procedimiento:
- Lavado de manos
- Llenar hasta un máximo de 3/4 de la capacidad del tubo capilar con sangre total y
sellar un extremo del mismo con plastilina y cera.
8. Cuestionario:
a. Describa brevemente elproceso dela práctica.
b. ¿Cuáles son los niveles de hematocrito aceptables para poder donar en hombres y
mujeres?
.
PRACTICA Nº 11
(GrupoABOyRh)
1.
Introducción:Lahemaglutinaciónesunareaccióndeaglutinación,específicamenteinvoluc
rando al eritrocitocomoel portadordelantígenoodelanticuerpo. Ladeterminacióndegrupo
sanguíneosebasaenlareacciónantígeno-anticuerpo,lacualsepuedellevaracabo deforma
directa(determinando losantígenos presentes enla superficie del eritrocito del
pacientealcontactodelreactivoantiA,B,ABoD)oindirecta (determinandolos
anticuerpospresentesenelsuerodelpacienteyenfrentándoloaeritrocitosconocidos (A,Bo
AB).
2. Objetivos:
- Comprender las bases teóricas de la reaccióndeaglutinaciónparala
eterminacióndegruposanguíneo
- Conocerlos diferentesfactoresquecontribuyena la reacción.
3. Alcance:Alfinaldelaprácticasepretende queelestudiantetengaunavisiónclaradel
fenómeno de aglutinación Jdel complejoantígeno-anticuerpo paraladeterminación de
gruposanguíneoABOy RHy queadquieralasdestrezasparaaplicardiferentes
metodologías basadas en dicha reacción.
4. Antecedentes:
El gruposanguíneosonlostiposen queseha clasificadolasangredelaspersonas
enrelaciónconlacompatibilidaddeloshematíesysuerodeotroindividuoquela recibe.
Segúnla clasificacióndeLandsteiner(clasificaciónhoy universal)y sedenominan:
O,A,B,AB.Se caracterizanporlasdiferentescombinaciones dedosaglutinógenos
existentes enlosglóbulos rojosydedosaglutininascontenidasenelsuero.
Loseritrocitos poseen antígenosensu membrana que sondistintos paracada
individuo;laspruebasutilizadasparaestablecerlahemoclasificación sanguínea
relacionadaalosdiversos grupossanguíneos,aprovechanlascaracterísticas
inmunológicasque expresacadaindividuodeacuerdoasuparticularcodificación
genética.Endichaspruebasseevidencianlosantígenosy/oanticuerposdel grupo
sanguíneo,deacuerdoasu comportamientoinvitro.
EnelsistemaABOseinvestigantantoantígenos oaglutinógenos comolos anticuerposo
isoaglutininasnaturales.
ElfactorRhesunaglutinógenoencontradoen1940porLandsteineryWeiner,en los
glóbulos rojos deprimates(Macacusrhesus) yque tambiénexiste normalmente
enel85%deloshumanos,queporestacausasedenominaRhpositivos.EnelsistemaRh,
existenvariosantígenos:D,C,c,E,e;sinembargo,derutina,solosedeterminalapresenciade
lantígenoDenloseritrocitosydeacuerdoasupresenciaoausenciase dice queunindividuo
es Rh D positivo o RhD negativo.
5. Materiales:
- Alcohol al 70%
- Algodón
- Beakerconcloroal 5%
- Cloroal 5%
- Descartadores depunzo cortantes
- Glóbulos rojosA,ByO
- Láminasescavadas.
- Palillos
- Suero Anti A,Anti B, AntiA,B yanti D(anti–Rh)
- Laminasportaobjetos
- Tubosdeensayo
- Suero degruposA, B, AB yO
6. Procedimiento:
6.1. Hemoclasificacióndirecta:
6.1.1. Método enlámina:
- Marcartresláminasportaobjetocomo A,B, AB yD.
-Adicionarunagotadeanti A, anti B,anti AB yantiD ensu lugar correspondiente.
- Agregarunagota deeritrócitos del paciente acada antisuero.
- Mezclarcada preparaciónconun palillo de madera.
- Rotar manualmentecada laminaconcuidadodequenosemezclen.
- Observar aglutinaciónyregistrar losresultados:
6.2. HemoclasificaciónInversa:
6.2.1. Método entubo:
- Marcartrestubos comoA,B yO.
- Adicionardosgotas desuero del paciente acada tubo.
- Agregarunagota desuspensióndeeritrocitosdelgrupoA altuborotuladocomo
A,unagotadeeritrocitosdelgrupoB altuborotulado comoB yunagotade
eritrocitosdelgrupoO al tuborotulado comoO.
- Incubar de5–15minutosatemperaturaambiente
- Centrifugarpor15–30 segundosa 3400rpm o 1minuto a1000rpm.
- Resuspenderlosbotonescelularesyobservaraglutinación.
- Interpretar los resultados.
8.Cuestionario:
a.Cuálessonlos carbohidratospresentesenlosgrupos A, B, AB yO?
b.Completeelsiguientecuadro de Tipificación ABO:
PRUEBA CELULAR PRUEBA SERICA
AB
c. ¿Quéinmunoglobulinasonlos anticuerpospresentesenelgrupoABO?
d. ¿Quéinmunoglobulinasonlos anticuerpospresentesenel Rh?
e. ¿PorquélareaccióndeaglutinaciónesmásevidenteenladeterminacióndeABOqueenRh?,
expliquesurespuesta
PRACTICA Nº 12
1. Definición:No todos los glóbulos rojos pueden ser clasificados como Rh positivo o Rh
negativo, mediante las pruebas de aglutinación directa con los sueros anti-Rh. Otras, no
muestran aglutinación directa; no pueden ser clasificadas como Rh negativo porque el
antígeno D puede estar presente en tales células pero débilmente expresado, por lo que
se requiere de pruebas adicionales como la antiglobulina para poderlo mostrar. Estos
tipos de reactividad son debidos a variantes del antígeno D. Y los individuos cuyos
glóbulos rojos exhiben tal comportamiento son clasificados como Du variantes.
5. Materiales y equipos:
- Guantes.
- Albúmina al 22%.
- AntiglobulinaPoliespecífica IgGC3d.
- Centrífuga de inmunohematologia.
- Aglutinoscopio
6. Procedimiento:
- Colocar 1 gota de suero control RH o albúmina bovina 22% en tubo limpio y rotulado
“control”.
- Agregar una gota de la suspensión al 5% de glóbulos rojos en estudio, a cada uno de los
tubos.
- Mesclar consuavidad y centrifugar a 3400 RPM por 15 seg. o por 1 min. a 1000 RPM.
- Incubar en baño María ambos tubos a 37°C durante 30 minutos. Luego repetir paso 5 y
6 si es negativo continuar.
- Lavar los glóbulos rojos 4 veces con suero salino decantando totalmente el último
lavado.
- A cada tubo agregar 2 gotas de reactivo de antiglobulina humana poli específica. Repetir
paso 5 y 6.
8. Interpretación:
D ctrl. RH Interpretación
D ctrl. RH Interpretación
D ctrl. RH Interpretación
Control de Coombs
Nota:
9. Cuestionario:
a. Describa brevemente elproceso dela práctica.
PRACTICA Nº 13
PRUEBA DE COOMBS DIRECTO CUALITATIVO
(POLIESPECIFICO - MONOESPECIFICO).
1. Definición: es la prueba para detectar la sensibilización in vivo de los glóbulos rojos por
anticuerpos tipo Ig G o fracciones de complemento fijados a la membrana de eritrocito.
5. Materiales y equipos:
- Guantes.
- Pipeta Pasteur.
- Centrífuga de inmunohematologia
6. Procedimiento:
- Preparar una suspensión al 5% de glóbulos rojos en estudio con solución salina al 0.9% y
lavados 4 veces.
- Mezclar con suavidad y centrifugar a 3,400 rpm. x 15 segundos o por 1 min. A 1,000 rpm.
- Leer, interpretar y registrar los resultados. De salir positivos realizar la misma operación
con los sueros monoespecíficos.
7. Interpretación:
PRACTICA Nº 14
(POLIESPECIFICO-MONOESPECIFICO).
1. Definición: es la prueba para detectar la sensibilización in vivo de los glóbulos rojos por
anticuerpos tipo Ig G o fracciones de complemento fijados a la membrana de eritrocito.
5. Materiales y equipos:
- Guantes.
- Pipeta Pasteur.
- Centrífuga de inmunohematologia
6. Procedimiento:
- Lavado de manos.
- Uso de mandil.
- Preparar una suspensión al 5% de glóbulos rojos en estudio con solución salina al 9º/oo y
lavados 4 veces en cada tubo rotulado.
- Realizar la dilución del Suero de Coombs al ½, ¼, 1/8, 1/16, 1/32, 1/164, 1/128, 1/256,
1/512, 1/1024
- Mezclar con suavidad y centrifugar a 3,400 rpm. x 15 segundos o por 1 min. A 1,000 rpm.
- Los resultados negativos deben ser comprobados con las células control coombs. Si el
resultado es negativo la prueba es “no valida” y deberá repetirse.
- La sumatoria del contaje de los puntos según la aglutinación será el score asignado.
Tabla de score:
4+ 10 puntos
3+ 8 puntos
2+ 6 puntos
1+ 4 puntos
0 0 puntos
Ejemplo:
Lectura 3+ 3+ 2+ 1+ ½+ 0
Score 8 8 6 4 3 0 = 29
Ig G Dils = 1/32
Score= 29
Nota: Las muestras para Coombs Directo deben ser trabajadas dentro de los 30 min de
extraídas para evitar la elusión de anticuerpos (glóbulos rojos que se rompen y liberan
anticuerpos).
PRACTICO Nº 15
5. Materiales y equipos:
- Guantes.
- Pipeta pasteur.
- Centrífuga de inmunohematologia
6. Procedimiento:
- Lavado de manos.
- Enumerar los tubos como 1, 2, 3, 4 hasta 11 según sea el caso de 11 o más células.
- Dispensar 1 gota de glóbulos rojos en cada uno de los tubos debidamente rotulados.
- Mezclar, centrifugar a 3,400 RPM.x15 seg. O por 1 min. A 1000 rpm Leer y anotar los
resultados.
- Leer aglutinación y/o hemólisis, resuspender completamente el boton celular y anotar
resultado.
- Lavar lo GR con solución salina por 4 veces decantando totalmente en el último lavado.
- Agregar dos gotas de reactivo de antiglobulina humana poliespecífica. Repetir los pasos 4
y 5.
- Repetir pasos 4 y 5.
7. Interpretación:
8. Cuestionario:
a. Describa brevemente elproceso del Coombs Directo e Indirecto.
b. Establescame un cuadro comparativo de del Coombs Directo e Indirecto.
PRACTICA 16
AFERERESIS (PLAQUETOFERESIS)
4. Muestra:Sangre venosa.
5. Materiales:
6. Procedimiento:
7. Interpretación:
1. http://web.mit.edu/esgbio/www/7001mainhtml
2. http://www.ibiblio.org/virtualcell/textbook/contents.htm
3. http://freemedicaljournals.com
4. http://freebooks4doctors.com/
5. http://laguna.fmedic.unam.mx/
6. http://www2.uah.es/biomodel/
7. http://laguna.fmedic.unam.mx/
8. http://www2.uah.es/biomodel/
9. http://uah.es/biomodel/c_enlaces/libros-virtu.htm
10. http://biopsicologia.net/inicio.php4