BIO-FLASH

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BIO-FLASH Chagas
3000-8599
100 tests
BIO-FLASH Chagas es un inmunoensayo quimioluminiscente de dos pasos totalmente automatizado para
la determinacin cualitativa de anticuerpos IgG e IgM frente a Trypanosoma cruzi en suero o plasma
humano con el instrumento BIO-FLASH.
1-4

Sumario
La enfermedad de Chagas es una enfermedad crnica parasitaria causada por un protozoo flagelado, el
Trypanosoma cruzi. El parsito es transmitido a humanos o a otros mamferos va insecto vector, de la familia
Reduviidae. La transmisin del T. cruzi tambin puede ser congnita o por transfusin de sangre contaminada o
trasplante de rganos. La transmisin por ingestin de alimentos contaminados tambin est descrita en la
literatura. El ciclo de vida del parsito es largo y complejo, con varias etapas de desarrollo en el insecto vector y en
el husped vertebrado. Se reconocen tres etapas de la enfermedad: una etapa aguda corta y una etapa crnica de
larga duracin, separadas por una larga fase asintomtica, llamada fase indeterminada. En la primera y tercera
etapa diversos rganos pueden estar afectados y producirse un desenlace fatal. Se estima que hasta un 30% de
personas con la forma indeterminada de la infeccin sufrirn dao cardaco, digestivo o neurolgico transcurridos
entre 10 y 20 aos. Los anticuerpos aparecen poco despus de la infeccin y aumentan a niveles elevados,
pudiendo persistir junto con la infeccin durante muchos aos. BIO-FLASH Chagas permite una deteccin
especfica y de alta sensibilidad de los anticuerpos anti-T. cruzi en las fases aguda y crnica de la enfermedad
gracias al uso de antgenos recombinantes.
La deteccin de la infeccin por T. cruzi es importante para el diagnstico de la enfermedad de Chagas, su
prevencin y tratamiento y el pronstico de los individuos.
Principio
Cuando las micropartculas paramagnticas de BIO-FLASH Chagas se mezclan e incuban con la muestra, si sta
presenta anticuerpos especficos frente a T. cruzi, stos se combinan con los antgenos especficos de T. cruzi
que recubren las micropartculas. Despus de una separacin magntica y lavado para eliminar la muestra
residual, se aade un trazador que consiste en anticuerpos anti-IgG y anti-IgM humanas marcados con isoluminol
que puede unirse a los anticuerpos especficos anti-T. cruzi capturados por las micropartculas. Tras una segunda
incubacin, separacin magntica y otro lavado, se aaden los reactivos que activan la reaccin
quimioluminiscente. El luminmetro del BIO-FLASH mide la luz emitida como unidades relativas de luz (URL), que
son directamente proporcionales a la concentracin de anticuerpos especficos frente a T. cruzi en la muestra.
El BIO-FLASH utiliza un mtodo de reduccin de datos con ajuste a una curva logstica de 4 parmetros (4PLC)
para generar una Curva de Calibracin Maestra (CCM). Esta curva viene predefinida, depende del lote y se
almacena en el instrumento a travs del cdigo de barras del cartucho. Con la medicin de los calibradores (que
se suministran en un kit aparte), la CCM predefinida se transforma en una Curva de Calibracin de Trabajo (CCT)
nueva y especfica para el instrumento. Las concentraciones de los calibradores estn incluidas en los cdigos de
barras de los tubos de calibradores.
Esquema de la reaccin:

Activadores
(Triggers)

URL

Partcula magntica

Muestra

Trazador

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Emisin de luz

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Componentes
Cartucho de reactivos
El kit BIO-FLASH Chagas contiene un cartucho de reactivos para 100 determinaciones (REF 3000-8599).
NOTA: El diseo del cartucho est protegido por patente (US D565,741 / Diseo CE 000762992-0001)
Composicin del cartucho de reactivos:
El cartucho se compone de 3 viales que contienen:
A.

1 vial cilndrico de suspensin de micropartculas

recubiertas con antgenos recombinantes de T. cruzi
purificados. Contiene < 0,1% de azida sdica y 0,15% de
ProClin 950.

B.

1 vial de tampn de ensayo. Contiene < 0,1% de azida

sdica y 0,05% de Triton X-100.

C.

1 vial opaco de trazador que consiste en anticuerpo

monoclonal murino anti-IgG humana y anti-IgM humana
marcado con isoluminol. Contiene < 0,1% de azida sdica
y 8,0% de etilenglicol.

D.

1 vial vaco.

Preparacin
Vase la figura siguiente.
Cartucho: las micropartculas sedimentan durante su transporte y almacenamiento, por lo que se tienen que
mezclar para volverlas a resuspender.

La primera vez que vaya a utilizar el cartucho, invirtalo suavemente 30 veces sin que se forme espuma
(las burbujas pueden hacer que los sensores de lquido del instrumento den lecturas errneas).

Compruebe que las micropartculas se hayan resuspendido totalmente. Si no es as, siga invirtiendo el
cartucho hasta que se resuspendan en su totalidad.

Si las micropartculas no se resuspenden o detecta que el precinto de los reactivos est roto, NO UTILICE EL
CARTUCHO.

Una vez resuspendidas las micropartculas, site el cartucho sobre una superficie slida y retire con cuidado
la lengeta roja de seguridad para el transporte.

Manteniendo el cartucho en la superficie slida, apriete las dos pestaas situadas a los lados del tapn
perforador (parte gris) y presione la parte superior del cartucho hasta que quede en posicin de bloqueo. Una
vez en posicin de bloqueo, las pestaas tienen que quedar ocultas. No invierta el cartucho abierto.

Deje reposar el cartucho durante 5 minutos antes de cargarlo en el instrumento.

Una vez cargado el cartucho, el instrumento mezcla su contenido de forma automtica a intervalos peridicos.

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Precauciones
Los reactivos BIO-FLASH son para diagnstico IN VITRO.
Uso exclusivo para profesionales.
Los componentes contienen azida sdica < 0,1%, Triton X-100 (el tampn de ensayo), 8,0% de etilenglicol
(el trazador) y Proclin 950 (las micropartculas). Nocivo por ingestin (R22). En caso de ingestin, acdase
inmediatamente al mdico y mustresele la etiqueta o el envase (S46). Nocivo para los organismos acuticos,
puede provocar a largo plazo efectos negativos en el medio ambiente acutico (R52/53).
La azida sdica puede reaccionar con tuberas y desages de plomo o cobre dando lugar a azidas metlicas
altamente explosivas. Al desechar los restos de reactivos, deje correr agua abundante.
ATENCIN: MATERIAL DE RIESGO BIOLGICO.
Deseche todos los materiales usados en recipientes adecuados para material biocontaminante.
Por favor, no reutilice ni reintroduzca reactivos en los cartuchos o viales.
Recoleccin y conservacin de las muestras
Usar suero fresco (tambin se pueden utilizar tubos con gel separador de suero) o plasma (Li-heparina,
Na-heparina, Na-citrato, EDTA y ACD). Otros anticoagulantes deben ser comprobados antes de utilizarse. Los
anticoagulantes lquidos como el Na-citrato ejercen un efecto de dilucin y pueden reducir la concentracin de
muestras de pacientes. Las muestras no deben ser inactivadas por calor. Las partculas en suspensin deben
eliminarse por centrifugacin. En las directrices CLSI H18-A3 y H21-A5 encontrar ms informacin sobre la
manipulacin, el transporte, el procesamiento y la conservacin de las muestras.
Suero
Las muestras de suero pueden ser conservadas entre 2-8C durante 8 das. Si es por un perodo de tiempo ms
largo, deben ser congeladas a una temperatura igual o inferior a -20C. Las muestras pueden
congelarse/descongelarse un mximo de 3 veces. Mezclar bien despus de descongelarlas. Compruebe que no
haya burbujas en las muestras y, en caso contrario, elimnelas en su totalidad antes del anlisis.
Plasma
Las muestras de plasma pueden ser conservadas entre 2-8C durante 8 das. Si es por un perodo de tiempo ms
largo, deben ser congeladas a una temperatura igual o inferior a -20C. Descongelar el plasma a 37C.
Descongelar las muestras slo una vez. Mezclar bien despus de descongelarlas. Compruebe que no haya
burbujas en las muestras y, en caso contrario, elimnelas en su totalidad antes del anlisis.
Volumen de muestra
El volumen de muestra necesario para realizar una nica prueba con BIO-FLASH Chagas vara en funcin del
tipo de recipiente que se utilice. Una prueba requiere al menos 10 L ms el volumen muerto, que es de 200 L si
se utiliza la copa de muestra recomendada (REF 3000-8209).
Otros materiales
Los siguientes materiales no se suministran con el cartucho de reactivos y se tienen que comprar aparte.
REF 3000-8600

BIO-FLASH Chagas Calibrators (Calibradores)

REF 3000-8601

BIO-FLASH Chagas Controls (Controles)

Lea detenidamente las instrucciones correspondientes si desea ms informacin.

No utilice otros calibradores. La informacin que necesita el instrumento BIO-FLASH para calibrar el ensayo
BIO-FLASH Chagas est incluida en los cdigos de barras de los viales.
Utilizar controles de otros fabricantes puede dar lugar a resultados imprevistos.
Asegrese de que en el instrumento BIO-FLASH haya una cantidad suficiente de los siguientes consumibles
antes de procesar muestras, calibradores o controles:
REF 3000-8206
BIO-FLASH Cuvettes (Cubetas)
Nota: El diseo de las cubetas est protegido por patente (US D560,816 / Diseo CE 000762984-0001)
REF 3000-8204

BIO-FLASH Triggers (Activadores)

REF 3000-8205

BIO-FLASH System Rinse (Solucin del sistema)

Instrumento / realizacin del ensayo

En el Manual del Usuario del BIO-FLASH encontrar las instrucciones completas para realizar el ensayo.

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Calibracin
El cdigo de barras del cartucho contiene una Curva de Calibracin Maestra (CCM) que es vlida para el lote de
reactivos. Sin embargo, para todos los reactivos se necesita una Curva de Calibracin de Trabajo (CCT), que es
especfica para cada lote y vlida hasta la fecha de caducidad de ste. Se debe obtener una nueva CCT cuando
los resultados de los controles salgan fuera del rango de aceptacin o cuando se hayan realizado ajustes en el
instrumento.
Lea detenidamente el Manual del Usuario del BIO-FLASH para configurar una CCT.
Control de calidad
Para realizar un programa completo de control de calidad se recomiendan dos controles. Los controles
BIO-FLASH Chagas negativo y positivo se han diseado para dicho programa. Los controles se deben analizar al
menos cada 24 horas por da de utilizacin. Asegrese de que los resultados de los controles se encuentran
dentro del rango de aceptacin ya que, si no es as, puede ser indicativo de resultados no vlidos, ante los que el
usuario deber tomar medidas correctivas. En este caso, verifique todos los resultados obtenidos desde la ltima
comprobacin de control de calidad aceptable del analito en cuestin. Puede resultar necesario recalibrar el
instrumento. En el Manual del Usuario del instrumento encontrar ms informacin. Para la identificacin y
5
resolucin de situaciones anormales de control de calidad, consulte Westgard et al.
Conservacin y estabilidad
Los reactivos que no se hayan abierto se mantienen estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta
del cartucho si se conservan entre 2-8C en posicin vertical.
Una vez abierto, la estabilidad del cartucho cargado en el instrumento BIO-FLASH o guardado a 2-8C es de
14 semanas.
Interpretacin de resultados
La cantidad de analito en cada muestra se determina a partir de la luz emitida (URL), mediante interpolacin en la
Curva de Calibracin de Trabajo almacenada. Los resultados de BIO-FLASH Chagas se expresan como S/CO
(Seal de la muestra/Valor de corte). Como el ensayo es cualitativo, el valor numrico del resultado slo es
indicativo de la cantidad de anticuerpo presente. La determinacin de anticuerpos anti-Trypanosoma cruzi con el
ensayo BIO-FLASH Chagas se interpreta de la siguiente manera:

Las muestras con un resultado < 0,90 S/CO se consideran no reactivas (negativas).
Las muestras con un resultado 0,90 y < 1,00 S/CO se consideran indeterminadas (zona gris).
Las muestras con un resultado 1,00 S/CO se consideran reactivas (positivas).

Las muestras con resultado inicialmente reactivo o indeterminado deben ser reanalizadas por duplicado. Si en la
repeticin ambos valores son inferiores a 0,90, el resultado final de la prueba se interpreta como negativo para
anti-T. cruzi. Si el resultado es positivo o indeterminado, la muestra debe ser investigada con una prueba adicional
para confirmar el resultado. Un resultado repetidamente positivo es indicativo de infeccin por T. cruzi. Las
muestras con una concentracin de anti-T. cruzi superior a 400,00 S/CO se expresan como > 400,00 S/CO.
Limitaciones
El resultado de una nica muestra no es suficiente para diagnosticar la enfermedad de Chagas. Por tanto, adems
de los resultados de BIO-FLASH Chagas deben tenerse en cuenta otros datos como, por ejemplo, la
sintomatologa, la historia clnica, los resultados de otras pruebas y dems informacin relevante.
Un resultado negativo no excluye la posibilidad de exposicin a o infeccin por T. cruzi. Como en todos los
inmunoensayos sensibles, existe la posibilidad de obtener resultados positivos que no se repitan.
Resultados esperados
La enfermedad de Chagas, causada por el parsito Trypanosoma cruzi, es endmica en Amrica Latina. Segn la
Organizacin Mundial de la Salud (OMS) se calcula que actualmente unos 10 millones de personas estn
infectadas por T. cruzi, ms de 25 millones estn en riesgo de ser infectadas y ms de 15.000 mueren cada ao.
Las tasas de prevalencia de anticuerpos contra Trypanosoma cruzi varan mucho en las diferentes reas
endmicas. En 2005, las cifras oscilaron entre 0,01% en Ecuador y 0,09% en Costa Rica, dos pases que informan
los resultados obtenidos utilizando pruebas de confirmacin, y 8,61% en Bolivia.
Las tasas de prevalencia estn disminuyendo a lo largo del tiempo en todos los pases endmicos. Sin embargo,
como consecuencia de la intensa movilidad de la poblacin y la migracin de personas a Europa (principalmente
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Espaa y Portugal) y Amrica del Norte, la enfermedad de Chagas se ha extendido y ahora es global.

Caractersticas funcionales
NOTA: Los datos siguientes son representativos; los resultados en experimentos aislados pueden variar respecto
a estos datos.
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Especificidad

La evaluacin de especificidad se realiz probndose un total de 6576 muestras de donantes de sangre,

incluyendo suero y plasma-EDTA de dos bancos de sangre.
-

2799 muestras del Banc de Sang i Teixits de Catalunya (Espaa), de las cuales 1000 eran de donantes
procedentes de pases endmicos y 1799 eran no seleccionadas por pas de origen.
3478 muestras de donantes habituales fueron evaluadas en el Hemocentro Colsan de So Paulo (Brasil).

Adems, se evaluaron tambin 300 muestras de suero no seleccionadas, de la rutina de un laboratorio hospitalario
de Barcelona (Espaa).
Las muestras repetidamente reactivas fueron re-analizadas utilizando dos ensayos comerciales. La especificidad
entonces se calcul, obtenindose los resultados mostrados en la siguiente tabla:

Inicialmente
reactivas
(IR)
n

Repetidamente
reactivas
(RR)
n

RR
confirmadas
positivas
n

1000

99,7

Donantes de sangre no seleccionados (Banc

de Sang i Teixits de Catalunya, Espaa)

1799

99,7

Donantes de sangre del Hemocentro Colsan

de So Paulo (Brasil)

3478

99,8

Muestras de rutina de laboratorio hospitalario

(Barcelona, Espaa)

300

100,0

Muestras
analizadas

Donantes de sangre de pases

endmicos (Banc de Sang i Teixits de

Especificidad
%

Catalunya, Espaa)

Sensibilidad

La sensibilidad se comprob en dos evaluaciones distintas:

-

669 muestras positivas para Chagas de diferentes Centros de Salud de Barcelona, de pacientes procedentes
de pases endmicos (Guatemala, Honduras, Mxico, Nicaragua, Argentina, Bolivia y Brasil).
Un panel de 300 muestras de las cuales 191 eran positivas y 109 eran negativas para anticuerpos de Chagas
se evalu en el PNCQ (Programa Nacional de Controle de Qualidade, Rio de Janeiro, Brasil). Las muestras
eran originarias de Brasil y Bolivia.

Los resultados de sensibilidad se presentan en la tabla siguiente:

Muestras
analizadas
n

Positivas

Indeterminadas

Negativas

Sensibilidad

Primera evaluacin

669

660

99,0

Segunda evaluacin

191

191

100,0

Precisin

Se evalu, conforme a las directrices CLSI EP05-A2, la precisin intra-ensayo y total (ensayo a ensayo y da a da)
en mltiples ensayos. Los resultados se resumen en la tabla siguiente:
Control negativo
Control positivo
Muestra negativa
Muestra cerca del valor
de corte
Muestra positiva

Media (S/CO)
0,30
2,86
0,48
0,85

Intra-ensayo
0,01 SD
2,5% CV
0,02 SD
5,7% CV

Total
0,01 SD
3,1% CV
0,04 SD
7,4% CV

3,99

3,7% CV

3,9% CV

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Reproducibilidad

Se evalu la repetibilidad entre lotes y entre instrumentos usando 50 muestras. Los resultados se muestran en la
tabla siguiente:

Lote 2 vs. Lote 1

Instrumento 2 vs. Instrumento 1

Pendiente
Valor
IC del 95%

Interseccin
Valor
IC del 95%

Valor

R
IC del 95%

50
50

0,943
1,041

-0,242
0,012

0,998
0,999

0,997 a 0,999
0,998 a 0,999

0,927 a 0,959
1,027 a 1,053

-0,658 a -0,075
-0,010 a -0,604

Interferencias

Estudios conforme a las directrices CLSI EP7-A han demostrado que las siguientes sustancias potencialmente
interferentes no alteran los resultados de BIO-FLASH Chagas:
Sustancia potencialmente interferente
Hemoglobina
Bilirrubina indirecta
Bilirrubina directa
Triglicridos
Factor reumatoide

Concentracin
500 mg/dL
18 mg/dL
18 mg/dL
1300 mg/dL
800 UI/mL

% Interferencia
10
10
10
10
10

Reactividad cruzada

Fueron analizadas con el ensayo BIO-FLASH Chagas un total de 150 muestras positivas para condiciones que
potencialmente podran producir reaccin cruzada. Se considera que ocurre una reaccin cruzada cuando el
diagnstico cambia de positivo a negativo o viceversa. Las muestras reactivas se compararon con un ensayo de
referencia para el que no se observ reactividad cruzada con sustancias potencialmente interferentes. Los
resultados se resumen en la siguiente tabla:
Reaccin cruzada potencial
ANA (anticuerpos antinucleares)
anti-HCV (virus de la Hepatitis C)
anti-E. coli
anti-HTLV (virus linfotrpico T humano)
anti-HBc (anticuerpos frente al antgeno core de la hepatitis B)
anti-HIV-1 (virus de la inmunodeficiencia humana)
Malaria
Leishmania
Sfilis
Crithidia lucilliae

Concordancia
15/15
15/15
10/10
15/15
14/15
15/15
24/24
10/11
15/15
14/15

Sensibilidad analtica

La sensibilidad analtica obtenida ha sido < 0,20 UI/mL. La misma se determin por interpolacin del valor de corte
er
del ensayo en la lnea de regresin obtenida al probar diluciones seriadas del 1. patrn internacional de la OMS
er
para anticuerpos de Chagas (TcII) en plasma humano (NIBSC referencia: 09/186) y del 1. patrn internacional de
la OMS para anticuerpos de Chagas (TcI) en plasma humano (NIBSC referencia: 09/188). Los resultados
obtenidos, utilizando dos lotes diferentes de reactivos, fueron 0,13 y 0,14 UI/mL, respectivamente.

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