Interferencias Analíticas

Interferencias analticas:
Hemlisis
Esther Fernndez Grande

R1 A.Clnicos
Hemlisis: es el proceso de destruccin de los hemates,

que conlleva la liberacin del contenido intraeritrocitario
en el plasma alterando su composicin.
Algunos componentes se hallan en los eritrocitos a

concentraciones superiores (10 veces): K, LDH, FE,
FAC, AST, ALT.
Su presencia da lugar a errores en las determinaciones

de ciertos parmetros. El tipo de magnitud que se ve
afectada depende de la metodologa empleada para
medirla.
COMPONENTES DE LA HEMOGLOBINA
1. GLOBINA: protena conjugada oligomrica constituida
por 4 subunidades, cada subunidad contiene un grupo
HEMO unida a la cadena polipeptdica.
2. GRUPO HEMO: es un derivado porfirnico que contiene

un tomo de Fe (elemento clave en el transporte de O2).
Este grupo constituye el ncleo prosttico.
Tipos de Hemlisis
In vivo: debido a un proceso patolgico en el

paciente. La hemlisis puede ser:
* Extravascular: se produce en las reas

especializadas en la recuperacin de los
componentes intraeritrocitarios. En el interior de
macrfagos del bazo, hgado o mdula sea.
Intravascular: se produce dentro del sistema vascular y la

hemoglobina es liberada directamente a la sangre. Ocurre en
enfermedades que producen un destruccin masiva sobrepasando la
capacidad de los sistemas de recuperacin dando lugar a
hemoglobina libre en el plasma.
En estos casos, la mayor parte de la hemoglobina libre forma un

complejo con la haptoglobina, el cual es degradado en el hgado. Una
pequea porcin se une a la albmina o hemopexina formando
complejos que tambin se degradan en el hgado.
Causas de hemlisis intravascular
Hemoglobinuria paroxstica familiar
Enfermedades asociadas a fragmentacin eritrocitaria:

anormalidades cardiacas/vasculares o microangiopatias.
Anemia hemoltica inmunolgica: transfusiones, anemia hemoltica

autoinmunitaria
Infecciones: Clostridium, plasmodium
Agentes qumicos: venenos, choque osmticos
Agentes fsicos: quemados.
In vitro: es un efecto preanaltico debido a
una mala extraccin o a las condiciones

de transporte y preparacin de las
muestras. Es la causa mas frecuente de
hemlisis en las muestras (>95%).
Causas de hemlisis in vitro
Flebotoma
Dispositivo de acceso vascular: el uso del catter, frente al de

la aguja, se ha relacionado con una mayor aparicin de
muestras hemolizadas.
Calibre del dispositivo de extraccin: el grado de hemlisis es

inversamente proporcional al dimetro del catter o aguja ya
que se produce un aumento el flujo y la friccin causante de la
hemlisis.
Lugar de puncin: la fosa antecubital disminuye la hemlisis.
Antisptico: el alcohol utilizado en la desinfeccin de la zona

antes de la puncin puede provocar hemlisis.
Transporte
Tubo neumtico: se asocia a cierto grado de

hemlisis pero no da lugar a una alteracin
significativa de los resultados analticos. La
muestra mas susceptible es el suero.
Transporte por carretera: evitar agitacin y

cambios bruscos de temperatura.
Tiempo de torniquete: aumenta la presin venosa y la

hemoconcentracin.
La puncin capilar.
Tipo de tubo: mayor incidencia en los tubos de mayor

volumen.
Tubos de vaco incompletos.
Mezclado.
Experiencia.
Procesamiento
Tiempo entre recogida y centrifugacin: en este periodo

se produce el consumo de metabolitos por parte de las
clulas, difusin de lquido intracelular por fallo de los
sistemas de membrana y hemlisis.
Temperatura de centrifugacin: el fro aumenta la

hemlisis.
Fuerza centrifuga: debe establecerse el tiempo y la

fuerza adecuados para conseguir una correcta
separacin sin producir hemlisis
Fallos en la barrera de separacin: debido a

hiperproteinemia o a la presencia de contrastes
yodados.
Centrifugacin de muestras parcialmente coaguladas.
Recentrifugacin da lugar al ascenso del suero retenido

en el conjunto celular. Da lugar a un aumento del
potasio.
Distincin entre in vivo o in vitro

In vivo: podemos usar como indicadores el
descenso de la haptoglobina srica, el
incremento de la bilirrubina indirecta o el
aumento de los reticulocitos que se produce
para compensar esa destruccin eritrocitaria.
In vitro: el contenido intraeritrocitario integro se
diluye en el plasma de la muestra. Tambin
podemos diferenciarla si en la extraccin alguna
de las muestras no est hemolizada.
Efecto
* La hemlisis tiene diferentes efectos segn las
magnitudes sobre las que acte:
Las que se diluyen, como el sodio. Se infraestiman.
Los que aumentan significativamente su concentracin

en el plasma:
Potasio: concentracin intracelular (140mEq/L)

concentracin extracelular (4 mEq/L)
AST: 7-15 veces mayor en eritrocitos
LDH:
Se sobreestiman.
Interferencia espectral: Incremento del coeficiente de extincin en la

medicin de 300 a 700 nm, esta condicionado por la alta extincin
propia de la hemoglobina entre 400 y 600 nm: BT, AMI, FAL, GGT,
AU, FOS, PT, ALB.
Interferencia
qumica:
DD (proteasas eritrocitarias disminuyen factores

coagulacin y fibrina).
* BT y BD (actividad pseudoperoxidasa de la Hb).
CK (adenilatocinasa de los eritrocitos).
Determinacin de CK
2 ADP
ATP
La adenilato quinasa intraeritrocitaria, a partir de 2 molculas ADP,

sintetiza nuevas molculas de ATP, que actan como sustrato de la
Hexokinasa para producir Glu-6P que se oxidar dando lugar a
NADH, sobreestimando as la actividad CK.
Interferencia de la Hg en Lx 20
Hemlisis en Advia 2400
Deteccin de la hemlisis
Visual: poco fiable. Hay magnitudes que se sobreestiman en

muestras ligeramente hemolizadas dificiles de detectar de forma
visual.
Mtodo de referencia: Cianometahemoglobina (HiCN)

Consiste en diluir la sangre en una solucin de ferrocianuro potsico y
cianuro potsico.
El ferrocianuro potsico oxida las hemoglobinas a metahemoglobinas (Hi) y
el cianuro potsico proporciona los iones cianuro (CN-) para formar el
hemiglobincianuro o cianmetahemoglobina que tiene una absorcin mxima
a una longitud de onda de 540 nm. La capacidad de absorcin de la
solucin se mide en un espectrofotmetro a 540nm.
Los resultados se llevan a una curva estndar realizada con soluciones de
cianometahemoglobina comercial, de donde se extrapolan las
concentraciones de hemoglobina de las muestras problema. Nos relaciona
la absorcin de la muestra con su concentracin de hemoglobina.
* ndice srico
Los ndices sricos son una gua cualitativa de la
apariencia de las muestras.
Clculo del ndice
El analizador aspira una parte alcuota de la muestra del

paciente, la diluye con una solucin de ClNa al 0.9% y
realiza una medicin bicrmatica (600/570 nm).
A partir de este valor de absorbancia (mAbs), el

instrumento calcula el valor del ndice H del paciente
mediante una relacin matemtica.
Correccin de la hemlisis mediante frmulas

matemticas: No se recomienda
Si Hb> 100mg/dL (IH 70): el potasio
aumenta en 0.4 mmol/L

Potasio corregido = K medido-(IH*0.004)
Actuacin frente a muestras hemolizadas

(OMS).
No informar muestras deterioradas sin comentario especfico. En

caso de no poder eliminar la interferencia sustituir el valor de la
magnitud por el comentario.
Cuando exista efecto significativo por la hemlisis deben indicarse

los lmites a partir de los cuales no debe realizarse el anlisis.
Hemlisis en Advia 2400
Actuacin frente a muestras hemolizadas

(OMS).
No informar muestras deterioradas sin comentario especfico. En caso de no poder

eliminar la interferencia sustituir el valor de la magnitud por el comentario.
Cuando exista efecto significativo por la hemlisis deben indicarse los limites a partir
de los cuales no debe realizarse el anlisis.
Utilizar mtodos alternativos no influidos por la hemlisis en magnitudes cuya

determinacion se vea afectada.
Considerar la interferencia como significativa cuando exceda el valor de referencia

o error sistemtico deseable.
Distincin entre hemlisis in vivo o in vitro.
Identificar la causa de la hemlisis, y utilizar material de calidad y personal

adecuadamente formado.
Datos urgencias
Enero - Octubre 2012
Hemlisis
63542
50000
11
3
0
Nm ero de m uestras
Resto
MUY
63542
1977
LIGERAMEN HEMOLIZAD
11
1977
Nmero de muestras
Muestras de Urgencias
0,00%
0,02%
3,02%
96,90%
Conclusiones
> 95% efecto preanaltico
No realizar las determinaciones, sustituirlas por un comentario y

pedir nueva muestra.
Utilizar sistemas automatizados de cuantificacin de hemoglobina

srica.
El laboratorio debe establecer la significacin del efecto de la

hemlisis para cada magnitud.
Rechazar sueros que presenten concentraciones de hemoglobina

iguales o superiores a 0,5 g/dL
GRACIAS POR SU
ATENCIN

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Esther Fernndez Grande

Hemlisis: es el proceso de destruccin de los hemates,

Algunos componentes se hallan en los eritrocitos a

Su presencia da lugar a errores en las determinaciones

2. GRUPO HEMO: es un derivado porfirnico que contiene

In vivo: debido a un proceso patolgico en el

* Extravascular: se produce en las reas

Intravascular: se produce dentro del sistema vascular y la

En estos casos, la mayor parte de la hemoglobina libre forma un

Causas de hemlisis intravascular

Hemoglobinuria paroxstica familiar

Enfermedades asociadas a fragmentacin eritrocitaria:

Anemia hemoltica inmunolgica: transfusiones, anemia hemoltica

Infecciones: Clostridium, plasmodium

Agentes qumicos: venenos, choque osmticos

Agentes fsicos: quemados.

In vitro: es un efecto preanaltico debido a

una mala extraccin o a las condiciones

Causas de hemlisis in vitro

Dispositivo de acceso vascular: el uso del catter, frente al de

Calibre del dispositivo de extraccin: el grado de hemlisis es

Lugar de puncin: la fosa antecubital disminuye la hemlisis.

Antisptico: el alcohol utilizado en la desinfeccin de la zona

Tubo neumtico: se asocia a cierto grado de

Transporte por carretera: evitar agitacin y

Tiempo de torniquete: aumenta la presin venosa y la

Tipo de tubo: mayor incidencia en los tubos de mayor

Tubos de vaco incompletos.

Tiempo entre recogida y centrifugacin: en este periodo

Temperatura de centrifugacin: el fro aumenta la

Fuerza centrifuga: debe establecerse el tiempo y la

Fallos en la barrera de separacin: debido a

Centrifugacin de muestras parcialmente coaguladas.

Recentrifugacin da lugar al ascenso del suero retenido

Distincin entre in vivo o in vitro

Las que se diluyen, como el sodio. Se infraestiman.

Los que aumentan significativamente su concentracin

Potasio: concentracin intracelular (140mEq/L)

AST: 7-15 veces mayor en eritrocitos

Interferencia espectral: Incremento del coeficiente de extincin en la

DD (proteasas eritrocitarias disminuyen factores

La adenilato quinasa intraeritrocitaria, a partir de 2 molculas ADP,

Hemlisis en Advia 2400

Visual: poco fiable. Hay magnitudes que se sobreestiman en

Mtodo de referencia: Cianometahemoglobina (HiCN)

Clculo del ndice

El analizador aspira una parte alcuota de la muestra del

A partir de este valor de absorbancia (mAbs), el

Correccin de la hemlisis mediante frmulas

Si Hb> 100mg/dL (IH 70): el potasio

aumenta en 0.4 mmol/L

Actuacin frente a muestras hemolizadas

No informar muestras deterioradas sin comentario especfico. En

Cuando exista efecto significativo por la hemlisis deben indicarse

Hemlisis en Advia 2400

Actuacin frente a muestras hemolizadas

No informar muestras deterioradas sin comentario especfico. En caso de no poder