INSTITUTO TECNOLOGICO DE MATAMOROS DEPARTAMENTO DE INGENIERIA QUIMICA Y BIOQUIMICA

TRAZABILIDAD DE LA CLOROFILA EN EL PROCESO DE TRANSFORMACIN DE LA SOJA.

Que para acreditar su residencia presenta: JUAN ALBERTO ZARAZUA GARCIA

No. Control: 08260563

Semestre: 10

Alumno de la carrera: Ingeniera Qumica.

H. Matamoros Tamaulipas.

Agosto del 2013.

INSTITUTO TECNOLOGICO DE MATAMOROS DEPARTAMENTO DE INGENIERIA QUIMICA Y BIOQUIMICA

TRAZABILIDAD DE LA CLOROFILA EN EL PROCESO DE TRANSFORMACIN DE LA SOJA.

Que para acreditar su residencia presenta: JUAN ALBERTO ZARAZUA GARCIA

No. Control: 08260563

Semestre: 10

Alumno de la carrera: Ingeniera Qumica.

Asesor Tcnico Interno: Biol. Guillermo Villasana Velzquez Asesor Tcnico Externo: Ing. Miguel ngel Ocegueda Flix

H. Matamoros Tamaulipas.

Agosto del 2013

RESUMEN Para la elaboracin de este proyecto, conocer la cantidad de clorofila en las diferentes etapas del proceso es esencial, solo entonces podremos reducir la produccin de aceite genrico, para llevar esto acabo se determin espectrofotomtricamente la cantidad de clorofila en el aceite de las muestras que provienen de cada etapa del proceso ms sin embargo es importante recalcar y como se ver ms adelante que la clorofila es muy variable en el aceite extractado de estas muestras, inclusive dentro de una sola de ellas, a diferencia de lo observado sobre la cantidad de clorofila en el aceite desgomado homogenizado.

INDICE INTRODUCCION......1 I. GENERALIDADES DEL PROYECTO...2 1.1. Problema....2

1.2. Objetivos.....2 1.3. Justificacin....2 II. FUNDAMENTOS TERICOS.. 3 2.1. Definiciones....3 2.1.1. Clorofila...3 2.1.2. Feofitina..3 2.1.3. Espectrofotometra...3 2.1.4. Transmitancia...3 2.1.5. Absorbancia..3 2.2. El fenmeno de la degradacin de la clorofila.3,4 2.3. Condiciones en las que se produce la destruccin de la clorofila....4 2.3.1. Destruccin en etapas significativas en el ciclo de vida.5 2.3.2. Destruccin en el ciclo de vida5 2.3.3. Destruccin por muerte prematura.5 2.4. Clorofilas: nomenclatura y caractersticas qumicas...5 2.4.1. Estructura qumica y existencia de la clorofila.5,6,7 2.4.2. Estructura qumica de los derivados de la clorofila...7 2.4.3. Espectros de clorofilas y sus derivados.8,9 2.4.4. Propiedades qumicas generales..9 2.4.4.1. Solubilidad...9 2.4.4.2. Labilidad al cido y lcali..9 2.4.4.3. Reactividad fotoqumica10 2.5. Metabolismo de la clorofila....10 2.5.1. Biosntesis de la clorofila10 2.5.2. Biodegradacin de clorofilas...10,11 a) Las enzimas implicadas en reacciones de tipo I. b) Las enzimas implicadas en reacciones de tipo II 2.6. Degradacin de la clorofila durante la senescencia..11 2.6.1. Cambios en la pigmentacin asociados con la senescencia..12 2.7. Otras condiciones degradantes..12 2.7.1. Riesgos fsicos..12 2.7.1.1. Generales.12 2.7.1.2.Temperatura..12 2.7.1.3 Contaminantes.12,13 2.7.1.4 Luz...13 2.8. Espectrofotmetro.13,14 2.8.1. Espectrofotmetros de haz sencillo computarizados14 2.8.2. Espectrofotmetros doble haz.15 III. CARACTERIZACIN DEL REA DE TRABAJO..16 3.1. Informacin de la empresa16 3.1.1. Datos generales. Nombre y ubicacin16 3.1.2. Descripcin de la empresa16 3.1.3. Poltica de calidad...16 3.2. Descripcin general del proceso de produccin de aceite.17,18 3.3. Diagrama de flujo general.18 3.4. Organigrama de la empresa..18 3.5. Informacin del departamento..18 3.5.1. Organigrama del departamento...18

3.5.2. Puesto y Funciones19 IV. DESCRIPCIN DE LAS ACTIVIDADES DESARROLLADAS...20 4.1. Investigacin20 4.2. Procedimiento actual de anlisis que se utiliza para la determinacin de clorofila..20 4.3. Anlisis de prctica21 4.4. Determinacin de clorofila en todas las etapas de produccin de aceite...22 4.5. Anlisis de la informacin..22 V.- RESULTADOS OBTENIDOS.23 5.1. Variabilidad de la clorofila en aceite desgomado y grano de soja23,24 5.2. Variabilidad de la clorofila a travs del proceso de transformacin de la soja.25 5.3. Variabilidad de clorofila y sus productos degradados en aceite desgomado a diferentes temperaturas.26 5.4. Variabilidad de clorofila y sus productos degradados en aceite desgomado a tiempo y temperatura constante..27 VI. ALCANCES Y LIMITACIONES..28 6.1. Alcances...28 6.2. Limitaciones.28 VII. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES..29 7.1. Conclusiones29 7.2. Recomendaciones..29 BIBLIOGRAFA...30 ANEXOS..31 Listado de anexos

INTRODUCCIN En el desarrollo del presente trabajo veremos como la cantidad de clorofila contenida en el aceite va cambiando a travs del proceso de transformacin de la soja. Comprender como la clorofila es degradada principalmente en feofitina y que esta tiene propiedades espectrales muy similares a la clorofila es fundamental para el correcto uso y puesta en prctica de los conocimientos generados por este proyecto. El objetivo de este trabajo es hacer posible que la produccin de aceite cumpla con las caractersticas necesarias para ser procesado como aceite premium, para poder lograr esto es necesario conocer la cantidad de clorofila contenida en el grano que entra a proceso y como esta se va degradando en las diferentes etapas del proceso de produccin.

I. GENERALIDADES DEL PROYECTO. 1.1. Problema. Se necesita conocer la cantidad de clorofila a travs de todo el proceso para poder controlar as el producto terminado, ya que uno de los requerimientos para que el aceite se puede procesar como premium es que la cantidad de clorofila sea relativamente baja.

1.2. Objetivos. Establecer la trazabilidad de la clorofila en el proceso de transformacin de la soja. 1.2.1. Objetivo especfico. Disminuir la produccin de aceite genrico en planta. 1.3. Justificacin. Al poder establecer la trazabilidad de la clorofila en el proceso de transformacin de la soja se conocer mejor el comportamiento real de la clorofila con esto podremos manipular la alimentacin al proceso y tambin establecer un control de calidad del producto terminado (aceite desgomado).

II. FUNDAMENTOS TERICOS. 2.1 Definiciones. 2.1.1 Clorofila. Es el pigmento fotosinttico verde de las plantas. Del griego chloros = verde y phyllon = hoja. La clorofila absorbe la mayor parte del espectro azul y segmentos rojos del espectro electromagntico del sol, y por esta razn prevalece el verde intenso. Las plantas producen oxigeno gracias a la presencia de clorofila: energa base para sustentar el proceso de vida en las plantas (1).

2.1.2 Feofitina. Las feofitina-a es un producto de degradacin de la clorofila-a cuya regin de absorcin mxima coincide con la del pigmento parental (2). 2.1.3 Espectrofotometra. La espectrofotometra UV-visible es una tcnica analtica que permite determinar la concentracin de un compuesto en solucin. Se basa en que las molculas absorben las radiaciones electromagnticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida depende de forma lineal de la concentracin. Para hacer este tipo de medidas se emplea un espectrofotmetro, en el que se puede seleccionar la longitud de onda de la luz que pasa por una solucin y medir la cantidad de luz absorbida por la misma (3). 2.1.4 Transmitancia. La transmitancia (T) de una sustancia en solucin es la relacin entre la cantidad de luz transmitida que llega al detector una vez que ha atravesado la muestra, It, y la cantidad de luz que incidi sobre ella, Io, y se representa normalmente en tanto por ciento: % T = It/Io x 100 La transmitancia nos da una medida fsica de la relacin de intensidad incidente y transmitida al pasar por la muestra. La relacin entre %T y la concentracin no es lineal, pero asume una relacin logartmica inversa (3). 2.1.5 Absorbancia. La absorbancia (A) es un concepto ms relacionado con la muestra puesto que nos indica la cantidad de luz absorbida por la misma, y se define como el logaritmo de 1/T, en consecuencia: A = log 1/T = -log T = -log It /Io cuando la intensidad incidente y transmitida son iguales (Io = It), la transmitancia es del 100% e indica que la muestra no absorbe a una determinada longitud de onda, y entonces A vale log 1 = 0(3). 2.2 El fenmeno de la degradacin de la clorofila. El metabolismo de la clorofila abarca probablemente el proceso bioqumico ms obvio de todos. Su biosntesis determina la caracterstica de enverdecimiento de las plantas en primavera y su degradacin se manifiesta como la prdida del pigmento color verde de las hojas y de la maduracin de los frutos en otoo(2). La va de biosntesis ahora es razonablemente bien comprendida (Jones, 1979; Castelfranco y Beale, 1983) Sin embargo, el conocimiento de la degradacin de la clorofila es mucho ms limitado y difuso (2). De hecho, es lamentable que muchos cientficos, tengan la creencia errnea de que los pigmentos de color rojo y naranja, caracterstico de la senescencia foliar y la maduracin de los cultivos, son productos de la degradacin de clorofila. Esta falta del conocimiento de la ruptura de clorofila es tanto ms sorprendente en vista de la obvia importancia del proceso en trminos econmicos y ambientales (2). El conocimiento de los mecanismos por los que se degrada la clorofila es importante tanto para nuestra comprensin bsica de la fisiologa y la bioqumica de las plantas, y en la evaluacin de formas de explotar el fenmeno (2). 2.3 Condiciones en las que se produce la destruccin de la clorofila. La destruccin de la clorofila se produce en las clulas vivas y muertas como resultado de las influencias externas en el tejido muerto. Como se aclarar, la cantidad de clorofila no sujeta a la destruccin y que se mantiene intacta por largos periodos. Es probablemente pequea y

relativamente insignificante. En ese sentido, la clorofila es altamente inestable en contraste con otros pigmentos biolgicos tales como los carotenoides, taninos y melaninas (2). Las condiciones que conducen a la destruccin de clorofila son: La destruccin que se produce en asociacin con cambios significativos en el ciclo de vida del organismo (2). Destruccin que puede continuar en todas las etapas del ciclo de vida (2). La destruccin derivada de presiones ambientales hostiles. Los ejemplos de cada categora (Tabla 1) (2).

Ta Condiciones en las que la destruccin de la clorofila ocurre en sistemas naturales.

bla 1.-

2.3.1 Destruccin en etapas significativas en el ciclo de vida. Las etapas clave en el ciclo de vida de las plantas vasculares durante el cual se producen prdidas de clorofila son germinacin de la semilla, floracin, maduracin y la separacin de los frutos y semillas de la planta madre y al final la muerte de la planta madre. La presencia de clorofilas y sus precursores en las semillas ha sido durante mucho tiempo conocida (2). 2.3.2 Destruccin en el ciclo de vida. La degradacin de la clorofila durante la maduracin de los tejidos vegetales se ha registrado (Shylk y Semenovich, 1972), aunque bastante mejor descritos en material de joven enverdecimiento (Virgin, 1955. Argyroudi-Akoyunoglou et al, 1982). Sin embargo, hay evidencia positiva de la destruccin de clorofila durante las ltimas etapas de la maduracin han sido descritas y cuantificadas para el trigo (Stobart y Hendry, 1984) y la cebada (Hendry y Stobart, 1986) (2). 2.3.3 Destruccin por muerte prematura. Los herbvoros representan un elemento significativo de la destruccin de la vida de las plantas antes de su madurez. La contribucin a la destruccin de clorofila por patgenos virales, bacterianos y fngicos por mucho tiempo se ha documentado, especialmente en cultivos de importancia econmica (referencias citadas por Shaw, 1963 y Esa, 1968), pero menos bien cuantificado entre las especies no agrcolas, que constituyen ms del 90% de los la biomasa mundial (Whittaker, 1975) (2).

En general, la dificultad de cuantificar el efecto destructivo de los agentes patgenos, se va agravando por los problemas de separacin de los efectos fsicos y biticos (Lyons, 1973; Ayres, 1984). Otras influencias climticas reconocidas como directa o indirectamente involucradas en la destruccin de la clorofila incluye el calor excesivo o prolongado (Adelusi y Lawanson, 1978), fro (Taylor y Craig, 1971), radiacin y U.V. (Krebs, 1965; Sisson y Caldwell, 1976; Murai, 1980), la alta irradiacin con luz visible combinada con bajas temperaturas o incluso oscuridad (2). 2.4 Clorofilas: nomenclatura y caractersticas qumicas. 2.4.1 Estructura qumica y existencia de la clorofila. Un conocimiento prctico de las principales caractersticas estructurales y propiedades qumicas fundamentales de la clorofila, es esencial para una apreciacin de las posibles formas de degradacin y la naturaleza de los productos de degradacin (2). Al hablar de los nombres de las clorofilas y sus derivados, cuyo objetivo es proporcionar informacin prctica y de fcil comprensin, siempre que sea posible usar la nomenclatura de tetrapirroles seguir las recomendaciones de la IUPAC (2). El trmino, clorofila, abarca una familia de compuestos que son complejos de magnesio derivados de tetrapirrol. Todas las clorofilas y sus derivados son porfirinas esterificadas con fitol. (Tabla 2) (2).

Tabla 2.- Estructuras de algunas clorofilas, bacterioclorofilas y porfirinas. La clorofila a (Figura 1), que es el tipo ms abundante de clorofila, y que se encuentra en todos los organismos que realizan la fotosntesis (2).

Figura 1.-Formacion de derivados de clorofila por desmetalacion y desfitolacion La clorofila a coexiste con la clorofila b, de la que difiere slo en el sustituyente en el tomo de carbono C7, los primera tiene un - CH3 y la segunda un - grupo CHO. La clorofila b siempre se produce en cantidades ms pequeas que la clorofila a, y la relacin vara entre 1:2 y 1:4-5, dependiendo la especie (2). Las clorofilas c y d no se encuentran en plantas vasculares y se producen slo en diatomeas, dinoflagelados y algas cafs. En las cianobacterias y algas rojas la clorofila a es la nica clorofila presente (2). 2.4.2 Estructura qumica de los derivados de la clorofila. Las clorofilas pueden convertirse fcilmente tanto in vivo como en condiciones de laboratorio a una serie de derivados caractersticos, que retienen sistema de anillos macrocclico. Tal vez la ms simple alteracin es la prdida del tomo central de magnesio para producir compuestos conocidos como feofitinas. Por lo tanto, la clorofila a se convierte en feofitina a (Figura 2) y los compuestos correspondientes son conocidos para otras clorofilas. La hidrlisis del enlace ster que une el alcohol de cadena larga al sistema de anillo macrocclico de las clorofilas tambin se puede llevar a cabo fcilmente. En la Clorofila a, la eliminacin del grupo fitol produce clorofilida a (Figura 2 ), mientras la eliminacin de magnesio y el grupo fitol, feoforbido a (Figura 2 ) (2).

Figura 2.- Formacin de derivados de clorofila por desmetalacion y desfitolacion

2.4.3 Espectros de clorofilas y sus derivados. Todas las clorofilas interactan con la luz y por lo tanto tienen caractersticas U.V. y espectros electrnicos visibles. Esta propiedad es til en la identificacin de clorofilas y sus productos de degradacin, y una breve descripcin de lo importante que son esas caractersticas espectrales es dada ms adelante.(Tabla 3 ) (2). A pesar de la reduccin de uno de los anillos de pirrol, las clorofilas an poseen un sistema de electrones deslocalizados y, como con todas las porfirinas, por lo tanto, presentan una banda de Soret fuerte en torno a los 400 nm. Sin embargo, con las clorofilas hay una fuerte absorcin de luz en la regin de 650 nm que es responsable de su pigmentacin verde. El rango de absorbancia de rojo a azul (Tabla 3) se puede utilizar como diagnstico para identificar el pigmento (2).

Tabla 3.-Absorcion mxima y coeficientes de absorcin milimolar para clorofilas y sus derivados. En la figura 3 muestra el espectro de la clorofila-a en ter junto con el de feofitina-a, el compuesto resultante libre de magnesio. Aunque hay diferencias definitivas, que se pueden usar para distinguirlos, las caractersticas principales de los dos espectros son similares. La eliminacin del grupo fitol y del magnesio nos da como resultado clorofilida a y feoforbido a, respectivamente, y estos no tiene ningn efecto significativo en el espectro. Registros de datos espectrales que podran ser tiles en la identificacin de las clorofilas y sus derivados pueden ser vistos en la Tabla 3. Las clorofilas tienen distintos espectros de fluorescencia que son caractersticos de los ambientes en los que se encuentran. Los espectros de fluorescencia pueden revelar una vasta cantidad de informacin sobre las propiedades fsicas de las clorofilas y su papel en la fotosntesis, pero, en comparacin con la espectroscopia de absorcin, la fluorescencia no se ha utilizado ampliamente en su identificacin o estimacin (2).

Figura 3.-Espectros de clorofila-a (_____) y feofitina a (- - - -) en ter

2.4.4 Propiedades qumicas generales. Un breve estudio de las reacciones qumicas conocidas de clorofila que tienen relevancia para la estabilidad y la degradacin se da aqu. El problema fundamental a considerar de la descomposicin de la clorofila es que la degradacin se produce bioqumicamente por reacciones especficas catalizadas por enzimas y qumicamente sin influencia enzimtica (2). Este ltimo incluye tanto las reacciones de degradacin accidentales que no juegan ningn papel biolgico as como las reacciones que, aunque no son enzimticas, pueden desempear un papel til en los ciclos biolgicos en general. Dentro de esta categora vendra la foto-degradacin de la clorofila que producirse durante la senescencia foliar (2). 2.4.4.1 Solubilidad. En la clorofila-a, no hay ningn grupo polar o hidrfilo y, por lo tanto se puede predecir, que es soluble en lpidos, pero casi totalmente insoluble en sistemas acuosos en el intervalo de pH fisiolgico. Esta propiedad se puede utilizar como ventaja en la extraccin y purificacin de clorofilas pero esta falta de solubilidad en medios fisiolgicos ha sido un problema importante en muchas situaciones experimentales, incluyendo el diseo de experimentos para estudiar la degradacin de la clorofila (2). 2.4.4.2 Labilidad al cido y lcali. Un cido diluido provoca fcilmente la prdida del tomo de magnesio de las clorofilas o clorofilidas para dar las feofitinas o feoforbidos correspondientes. cidos fuertes y condiciones oxidantes inducen reacciones ms complejas, incluyendo la prdida del fitol. La cadena lateral fitilo tambin puede ser eliminada mediante un lcali. La facilidad con la que estas reacciones se producen en solucin acuosa diluida es tal que los artefactos de degradacin de la clorofila son muy fcilmente producidos en soluciones que no sean adecuadamente amortiguadas (2). 2.4.4.3 Reactividad fotoqumica. La fotodegradacin es posiblemente uno de los principales mecanismos clorofila, la potencialmente muy compleja fotoqumica de la clorofila es experiencia comn que preparaciones de clorofila in vitro son blanqueadas estn expuestas a luz fuerte. En general se supone que este fenmeno se influencia protectora de los carotenoides y un sistema de tilacoide intacto (2). 2.5 Metabolismo de la clorofila. 2.5.1 Biosntesis de la clorofila. Es muy poco probable que la degradacin de la clorofila implique la reversin de cualquier porcin extensa de su ruta biosinttica. Sin embargo, una breve referencia a la biosntesis es relevante para una consideracin de la degradacin para dos razones. Primeramente, es importante estar al tanto de los compuestos intermedios que intervienen en la sntesis de modo que, si tales compuestos se aslan de plantas particulares (por ejemplo, mutantes), que puedan ser reconocidos inmediatamente como tales y no confundirse con posibles productos de degradacin. En segundo lugar, mientras que amplia inversin de la biosntesis es poco probable, es posible que la inversin del ltimo paso o dos en la sntesis pudiera ocurrir durante la degradacin (2).

de degradacin de importante. Es una rpidamente cuando evita in vivo por la

La clorofila se forma por la protoporfirina IX. Esta porfirina es producida por una serie de reacciones ahora bien entendidas, a partir de un compuesto de 5-carbonos, 5-aminolaevulinato (Castelfranco y Beale, 1983) (2). La bioqumica fundamental de este proceso parece para ser idntica para las plantas, hongos, animales y bacterias (Granick y Beale, 1978).Sin embargo, existe una diferencia en la formacin de 5-aminolaevulinato, que es sintetizada a partir de glicina y succinil-CoA en animales, bacterias noazufrosas y hongos, pero a partir del glutamato en las plantas y las bacterias prpuras del azufre (Castelfranco y Beale, 1983) (2). 2.5.2 Biodegradacin de clorofilas. Es til tener en cuenta la degradacin de la clorofila puede ser de dos tipos. El primero (la degradacin de tipo I) incluye la prdida de magnesio, prdida de fitol y posible modificacin de las cadenas laterales del ncleo de clorofila para producir feofitinas y feoforbidos. El segundo (la degradacin de tipo II) implica la escisin del sistema de anillos macrocclicos y la consiguiente degradacin a menores fragmentos de carbono/ nitrgeno. Ambos tipos de degradacin claramente ocurren (2). Aunque no hay ninguna reaccin enzimtica conocida referente, as que es posible decir con certeza de que su funcin especfica es la degradacin de la clorofila in vivo, una serie de enzimas han sido descritas con tales funciones posibles. Estos son aqu se resumen bajo los dos tipos de degradacin propuestos (2). (a) Las enzimas implicadas en reacciones de tipo I. La clorofilasa cataliza tanto la formacin del enlace ster fitol, as como su hidrlisis y ha sido, en el pasado, implicada muchas veces en el mecanismo de degradacin (Ziegler y Schanderl, 1969), aunque su funcin in vivo se cree mayormente que sea biosinttica en lugar de degradativa (Jones, 1979) (2). Las enzimas responsables de la eliminacin de los iones de magnesio quelado central, los llamados sistemas Mg de-quelatasa, tambin se han reportado en varias ocasiones. Los sistemas descritos hasta ahora han sido capaces de eliminar de magnesio de la clorofila (Schoch y Vielwerth, 1983) o clorofilida (Ziegler et al.1982) o de ambos (Owens & Falkowski, 1982).Ninguno de estos sistemas se ha caracterizado completamente (2). La caracterstica comn de estas reacciones del tipo I. Es que los productos tienden a ser encontrados en la naturaleza, en tejidos mantenido en menos que las concentraciones atmosfricas de oxgeno, como en los sistemas acuticos. Aunque las reacciones de tipo I pueden estar involucrados en las etapas iniciales de toda destruccin de clorofila, la mayor parte de la distribucin, al menos en los sistemas terrestres, implica al mismo tiempo reacciones de tipo II, la destruccin bruta del anillo macrocclico (2). (b) Las enzimas implicadas en reacciones de tipo II. Desde hace algunos aos, ha habido debate sobre si la escisin y la fragmentacin del anillo macrocclico a productos desconocidos son reacciones enzimticas o no. Dupont y Siegenthaler (1986) argumentan firmemente que el anillo macrocclico es degradado no enzimticamente seguido del ataque de las especies de oxgeno activado (2). Enzimtica o no, hay un cuerpo de evidencia que demuestra que las reacciones de tipo II requieren tanto la luz y el oxgeno. Ziegler y Schanderl (1969) mostraron que en el ausencia de ambos, feopigmentos se acumulan en una Chlorella mutante (2). Esta observacin importante, y a menudo descuidada podra explicar por qu los feopigmentos son reportados consistentemente en ambientes con oxigeno agotado y deficientes de luz estas son caractersticas de muchos hbitats acuticos o encharcados. Tiene que ser claramente que, en los sistemas naturales, bajo presiones de oxgeno atmosfrico y en la luz del sol, feopigmentos no aparecen en concentraciones significativas (2).

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2.6 Degradacin de la clorofila durante la senescencia. La destruccin de la clorofila como fenmeno esta generalmente bien arraigado y, a veces camuflado por las extensas obras publicadas sobre senescencia, el envejecimiento, de los cultivos y la maduracin del fruto y la abscisin. Un intento se hace aqu para aislar la comprensin de la degradacin de la clorofila de de los muchos otros aspectos moleculares y celulares de la degeneracin. Los aspectos ms amplios de la senescencia estn ms completamente cubiertos en crticas de Thimann (1980), Addicott (1982), de Thomas y Stoddart (1980) y Thompson, Legge y Barber (1987) (2).

2.6.1 Cambios en la pigmentacin asociados con la senescencia. La degradacin de las clorofilas en las plantas en envejecimiento est ligada a los cambios tanto entre las propias clorofilas y entre otros pigmentos vegetales. Wolf (1956), en un estudio de 25 rboles de hoja caduca de Amrica del Norte, mostr que la destruccin de la clorofila a en todos los casos precedi a la descomposicin de la clorofila b. Sanger (1971) traz la disminucin en la proporcin de clorofila a: b en roble de 3:1 el 30 Septiembre a 1:1 casi 15 das ms tarde. A pesar de estos registros detallados, la tasa real de degradacin de la clorofila en las hojas senescentes est sorprendentemente, poco descrito (2). 2.7 Otras condiciones degradantes. 2.7.1 Riesgos fsicos. 2.7.1.1 Generales. Una serie de riesgos fsicos, retos y estrs dan lugar a la descomposicin de la clorofila. Estos peligros pueden ser convenientemente considerados en dos grupos - presiones del entorno natural, como las temperaturas extremas y la irradiacin y los que se asocia cada vez ms con las actividades del hombre y que incluyen los contaminantes gaseosos, lquidos y slidos, que van desde emisiones de la industria hasta la llamada lluvia cida. Sin embargo, antes de considerar cada tipo en detalle, es importante reconocer que causa y efecto rara vez se han distinguido considerando la degradacin de la clorofila y muerte de la planta por el estrs fsico. Por lo tanto, no hay certeza de que la secuencia de eventos es la siguiente: Estrs fsico> degradacin de la clorofila >muerte, En lugar de la alternativa Estrs fsico > muerte>degradacin de la clorofila. Una situacin similar ha sido discutida por Halliwell y Gutteridge (1984) en relacin a la peroxidacin lipdica y dao celular (2). 2.7.1.2 Temperatura. Dentro del entorno natural, bajas y altas temperaturas han sido implicadas en la destruccin de la clorofila. Las altas temperaturas resultan en la formacin de pirofeofitina en un nmero de tejidos (Schwartz & von Elba, 1983). Las temperaturas bajas se asocian con el acortamiento del da y cambios otoales en el pigmento de las hojas, Creasy (1974) (2). La prdida de clorofila seguida de dao por fro puede ser debido no a bajas temperaturas como tal, sino a los efectos de los agentes patgenos que invaden el tejido previamente lesionado por el fro (2).

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2.7.1.3 Contaminantes. Los contaminantes gaseosos han sido conocidos mucho tiempo por tener efectos de deterioro sobre las plantas. En un contexto de aumento global de CO 2 atmosfrico, Chang (1975) mostr que las concentraciones elevadas CO2 inducen senescencia y degradacin del pigmento en la hoja de algodn. Satler y Thimann (1983) encontraron que el O 2 puro aceler la senescencia en las hojas. Informes de disminucin de las concentraciones de clorofila en las plantas fumigadas con SO2 a menudo registran la degradacin de la clorofila a en lugar de la clorofila b (Katz y Shore, 1955; Ricks & Williams, 1975; Lauenroth y Dodd, 1981), a pesar de los casos de destruccin simultnea de clorofila a y b en tejidos expuestos a SO 2 son conocidos (vase Darrall y Jager, 1984). Este efecto de degradacin de SO 2 es, sin embargo, confundido por los informes sobre la promocin de la sntesis de la clorofila por NO2 (por ejemplo Horsman y Wellburn, 1976) (2). Este contaminante se presenta con frecuencia junto con SO 2 y O3 (Fowler y Cape, 1982). Aunque tanto las concentraciones de clorofila y las tasas de fotosntesis se ven afectadas negativamente por SO2, los mecanismos que causan la destruccin de pigmentos no se conocen (2). 2.7.1.4 Luz. La oscuridad, o irradiacin extremadamente baja durante mucho tiempo han sido utilizadas para promover la degradacin de clorofila artificialmente mediante la induccin de la senescencia prematura en hojas sanas. Si las plantas de cebada 7 das de edad, totalmente verdes se colocan en la oscuridad, dentro de 65 horas alrededor del 13% de la clorofila original aparece como feofitina. Esta cifra se eleva al 58% despus de 135 h (G. Hendry, la observacin no publicada). Incluso las hojas intactas de tales plantas se ven grises despus de 5 a 6 d en la oscuridad. La formacin de feofitina por oscuridad inducida no se ha detectado en hojas de trigo, avena o cebada en menos de 24 h de privacin de luz (G. Hendry, la observacin no publicada) (2). Un aspecto adicional de la radiacin electromagntica en clorofila es la destruccin del pigmento por radiacin y U.V. La exposicin de las plantas a radiacin U.V. (288-315 nm), simulando el agotamiento del ozono en el medio ambiente natural, resulta en la prdida de la clorofila (Sisson y Caldwell, 1976), 1984) (2). 2.8 Espectrofotmetro. Son numerosos los espectrofotmetros comercialmente disponibles. Algunos se han diseado slo para la regin visible; otros se pueden utilizar en las regiones ultravioleta y visible. Otros, son capaces de medir desde la regin ultravioleta hasta la del infrarrojo cercano (de 185 a 3.000 nm).Instrumentos para la regin visible. Existen en el mercado varios espectrofotmetros diseados para trabajar en el intervalo de longitudes de onda de aproximadamente 380 a 800 nm. Estos instrumentos son, con frecuencia, sencillos, de un solo haz, relativamente, robustos y fcilmente transportables. Al menos uno funciona con batera y es lo suficientemente ligero y pequeo para ser porttil. La aplicacin ms comn de estos instrumentos es el anlisis cuantitativo, aunque algunos de ellos proporcionan tambin, sorprendentemente, buenos espectros de absorcin (4). La Figura 4 se muestra el funcionamiento de un espectrofotmetro sencillo y barato, el Spectronic 20. La versin original de este instrumento apareci en el mercado a mediados de los aos cincuenta, y la versin modificada, que se muestra en la figura, todava se fabrica y se vende mucho. Sin duda, en la actualidad hay ms instrumentos de stos por todas partes del mundo que de cualquier otro modelo de espectrofotmetro. La popularidad de este instrumento se debe, particularmente como herramienta para la enseanza, a su relativo bajo precio, su robustez y sus satisfactorias caractersticas de funcionamiento. El Spectronic 20 consta de una fuente luminosa de filamento de wolframio, que trabaja mediante una fuente de alimentacin estabilizada y que proporciona radiacin de intensidad constante. Despus de la difraccin en una red de reflexin

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sencilla, la radiacin atraviesa la cubeta de la muestra o de la referencia y llega al fototubo. La seal elctrica amplificada en el detector acciona un dispositivo de medida con una escala de 14 cm graduada en unidades de transmitancia y absorbancia. El instrumento est equipado con un obturador que consiste en un aspa que se interpone automticamente entre el haz y el detector siempre que se retira la cubeta del porta cubetas; en estas condiciones se puede hacer el ajuste del O por 100 T. Otras caractersticas tcnicas del instrumento incluyen una anchura de banda de 20 nm y una exactitud en la longitud de onda de 2,5 nm (4).

Figura 4.- Diagrama del sistema ptico de un espectrofotmetro Spectronic 20. 2.8.1 Espectrofotmetros de haz sencillo computarizados. Con estos instrumentos se realiza primero un barrido de longitudes de onda con la disolucin de referencia en la trayectoria del haz. La seal de salida del detector se digitaliza en tiempo real y se almacena en la memoria del ordenador. Despus se realiza el barrido con la muestra y se calcula la absorbancia con la ayuda de los datos de la disolucin de referencia almacenados. El espectro completo se visualiza sobre un tubo de rayos catdicos en 2 s despus de la adquisicin de datos. Son factibles velocidades de barrido tan altas como 1.200 nm/min. El ordenador asociado al instrumento est provisto de varias opciones relacionadas con el procesamiento de los datos y la presentacin de los mismos como logaritmo de la absorbancia, transmitancia, derivadas, espectros superpuestos, barridos repetitivos, clculo de concentraciones, localizacin de picos, determinacin de alturas y medidas cinticas (4).

2.8.2 Espectrofotmetros doble haz. Actualmente se puede disponer de numerosos espectrofotmetros de doble haz para la regin ultravioleta/visible. En este instrumento la radiacin se dispersa en una red cncava que enfoca al haz sobre un espejo en sectores rotatorio. El instrumento presenta un intervalo de longitudes de onda de 195 a 850 nm, una anchura de banda de 4 nm, una exactitud fotomtrica del 0,5por 100 T y una reproducibilidad del 0,2 por 100 A; la radiacin parsita es menor del 0,1 por 100 de Po a 240 y 340 nm (4).

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III. CARACTERIZACIN DEL REA DE TRABAJO. 3.1. Informacin de la empresa. 3.1.1. Datos generales. Nombre y ubicacin. El nombre oficial de la empresa es Protenas Bsicas, S.A de C.V. Se encuentra ubicada en ave. Industrial km 0.5 colonia zona industrial cp. 87325 telfono (868) 8-11-12-00 3.1.2. Descripcin de la empresa. Protenas bsicas naturales es una empresa muy importante en Mxico ya que es la mayor productora de aceite comestible y harina de soya para consumo. Visin. Ser una organizacin ms integrada en productos terminados, tanto industriales como de consumo, lderes en el mercado nacional y con un crecimiento importante en el mercado internacional.

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Misin. Transformar y comercializar oleaginosas en productos industriales y de consumo de alta calidad, satisfaciendo confiablemente las necesidades de nuestros clientes, mediante la administracin con calidad total y trabajo en equipo en todas y cada una de las reas del grupo, buscando siempre la ms alta rentabilidad de operacin. Valores. Orientacin al cliente Creatividad e Innovacin Integridad Trabajo en equipo 3.1.3 Poltica de calidad. En el grupo Ragasa, nos comprometemos a consolidar e incrementar el liderazgo a travs de superar consistentemente las expectativas de nuestros clientes, suministrando productos servicios de alta calidad que sean su mejor opcin mediante: El conocimiento sistemtico de las necesidades de los clientes Traduccin de esas necesidades en requerimientos de operacin El control y mejora continua de los procesos productivos y administrativos El desarrollo de proveedores La utilizacin de tecnologa adecuada El desarrollo integral de nuestro personal Un liderazgo basado en principios Medicin de la satisfaccin de las necesidades de nuestros cliente

3.2 Descripcin general del proceso de produccin de aceite. A continuacin se presenta una breve descripcin de las etapas involucradas en el proceso de produccin de aceite. Recepcin de materia prima y almacn. La soja llega a la empresa mayoritariamente por medio de trenes aunque tambin pero en menor escala por medio de camiones, una vez que es descargada pasa a los tres silos de almacenaje de materia prima. Prelimpia. En esta rea la soja sufre remocin parcial de la basura de mayor contener (hojas, ramas y otros contaminantes).

tamao que pueda

Secado y atemperado. En esta etapa del proceso se realiza principalmente para ofrecer la harina de soya conocida como "Hi-Pro", cuyo contenido mnimo de protena es de 48%. Limpieza. Antes de que las semillas sean procesadas, pasan por la etapa de limpieza, la cual consiste principalmente en separar y retirar de las semillas, toda materia extraa como palos, piedras, tierra,

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partculas metlicas, papeles y en algunos casos, otro tipo de semilla. En la etapa de limpieza, se utilizan imanes para retirar cualquier material ferroso. Quebrado y Separacin (Descascarado). El proceso contina con un quebrado de las semillas con el propsito de partirla y poder separar la cscara de la almendra. Cocimiento y laminado. Consiste en que la almendra libre de cascarilla se cose y acondiciona para despus pasarla por los laminadores de tal forma que sta queda en forma de hojuela dejndola preparada para la extraccin. Extraccin por solvente. El producto de la preparacin es puesto en contacto con hexano a contracorriente. El sobrante slido que sale de la extraccin, es enviado a un proceso de desolventizacin y secado en donde adems de retirar el solvente se le da un tratamiento trmico en donde se modula y controlan las especificaciones y caractersticas propias de calidad de las harinas. Destilacin. Una vez que la mezcla de hexano y aceite sale de la cama de extraccin entra a la a columna de destilacin donde es separados el hexano y el aceite crudo.

Desgomado. Al aceite crudo se le adiciona agua para hidratar los fosfolipidos despus se centrifuga y se obtienen las gomas y aceite desgomado.

Secado y Almacenaje. Una vez desgomado el aceite pasa a ser secado y almacenado.

3.3 Diagrama de flujo general. Ver anexo 1 3.4 Organigrama de la empresa.

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3.5 Informacin del departamento. El departamento de laboratorio tiene como funcin principal analizar muestras para liberacin de productos, dar soporte al proceso de produccin, a proyectos de seis sigma y desarrollo de nuevos productos. 3.5.1. Organigrama del departamento.

3.5.2 Puesto y Funciones. El puesto asignado fue de Residente en el rea de Laboratorio de Anlisis. A continuacin se menciona la principal actividad desarrollada durante la realizacin del proyecto: Se realiz la determinacin de la clorofila en muestras de proceso

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IV. DESCRIPCIN DE LAS ACTIVIDADES DESARROLLADAS. Aunque existen varias maneras de cuantificar la clorofila y sus formas degradadas intente desarrollar 2 mtodos para poder determinar la cantidad de clorofila contenida en la soja atreves de todo el proceso de produccin de aceite. Basndome en la literatura consultada comprend que clorofila tiende a degradarse con mayor facilidad con el calor, ms que con otros agentes degradantes y lo que intente hacer en uno de estos mtodos fue evitar esto al mximo , ms sin embargo debido a que solo se contaba con espectrofotmetro como nico equipo capaz de realizar la determinacin de clorofila en el laboratorio de la empresa, al espectro electromagntico que posee la clorofila y sus formas degradadas y a ciertas cuestiones tcnicas de los otros mtodos opte por desarrollar solo un mtodo oficial de la American Oil Chemists' Society que lleva por nombre Determination of Chlorophyll Pigments in Crude Vegetable Oils y el numero del mtodo es Cc 13i-96. 4.1 Investigacin. Se realizo una investigacin con respecto a las vas de degradacin de la clorofila y los mtodos de como sus formas degradadas pueden ser cuantificadas. 4.2 Procedimiento actual de anlisis que se utiliza para la determinacin de clorofila. Material, herramientas y equipo. Espectrofotmetro

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metil-isobutil-cetona Tubo thermo Scientific de de dimetro Molino Stein mill Vaso de precipitado 150 ml Embudo y torunda de algodn Papel filtro Whatman N1 Pipeta 5 ml

Polticas de calidad del procedimiento de determinacin de clorofila. Mantener las cubetas o recipientes limpios para asegurar una buena lectura. El factor es un dato obtenido de la verificacin interna del equipo. Es importante que en el filtrado se evite el paso de partculas finas, ya que esto altera el resultado. Se requiere trabajar dentro de una campana de extraccin para que los vapores no entren en contacto con resistencias elctricas. Desarrollo: 1. Tomar un vaso de precipitado de 150 ml y llenarlo (al ras) con aproximadamente 100 gr de muestra. 2. Secar en la estufa a 130 + 3 C, enfri para moler en molino Stein mill. 3. Colocar la muestra molida en una bolsa de plstico con cierre hermtico. 4. Preparar un con papel filtro Whatman N 1 y colocar dentro de un embudo de filtracin y en la terminacin de este coloque una torunda de algodn y colocar todo esto sobre un vaso de precipitado de 150 ml. 5. Verter la muestra sobre el cono hecho con el papel filtro. 6. Adicione 80 ml de hexano (se observara que el hexano es absorbido por la muestra) , posteriormente seguir agregando porciones de 30 ml de hexano ,dejando que pasen a travs de la muestra gota a gota hasta obtener una micela de 100 ml. 7. Evaporar todo el hexano de la mezcla, sin exceder la temperatura de 70C en la parrilla. 8. Filtrar el aceite obtenido en un cono preparado con papel filtro Whatman N1 (con la nica finalidad de eliminar la humedad al mnimo). 9. Encender el espectrofotmetro (dejar calentar el foco por 10 minutos). 10. Oprimir el botn A/T/C del espectrofotmetro y elija la opcin de absorbancia. 11. Ajustar a 630 nm de longitud de onda mediante las flechas del espectrofotmetro. 12. Con una pipeta recoja 5 ml de metil-isobutil-cetona y colquelos dentro de un tubo de este tubo servir como blanco y se utilizara para en las 3 lecturas a 630 nm, 670 nm y 710 nm. 13. Coloque el blanco dentro del espectrofotmetro y cierre la tapa del equipo 14. Oprima la tecla 0 ABS / 100 % T, con esto se ajustara el equipo a cero, se retira el blanco. 15. Colocar en un tubo 5 ml de muestra aproximadamente. 16. Colocar el tubo con la muestra dentro del espectrofotmetro y cerrar la tapa. 17. registrar el valor obtenido a 630 nm (A630). 18. retirar el tubo con la muestra y colocarlo en una gradilla. 19. Ajustar el espectrofotmetro a 670 nm. 20. Colocar el blanco dentro del espectrofotmetro. 21. Oprima la tecla 0 ABS / 100 % T y retirar el blanco.

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22. Colocar el tubo con la muestra en el espectrofotmetro. 23. Registrar la lectura a 670 nm (A670). 24. Repetir los pasos del 18 al 23 pero con la nica diferencia que el ajuste se en la longitud de onda ser de 710 nm. Frmula para la determinacin de clorofila contenida en aceite de soja mg/kg (clorofila)= [A670 (A630 + A710)/2]/F A= absorbancia F= factor NOTA: Los pasos del 1 al 8 son la preparacin de la muestra para poder proceder a la determinacin con una lectura real en el espectrofotmetro estos primeros 8 pasos son aplicados a las muestras que provienen de las etapas previas a extraccin mas no es as con las etapas posteriores a extraccin ya que las muestras ya vienen como aceite as que no es necesario realizar los primeros 8 pasos. Los pasos posteriores se basan en el procedimiento establecido por la American Oil Chemists Society y Society. Adems es importante comentar que el equipo se somete mensualmente a una calibracin que consta en comparar la cantidad de clorofila de unas muestras estndar en el espectrofotmetro que son enviadas por nuestro cliente (planta hermana) Protenas Naturales S. A. de C. V. y as se obtiene el valor de el Factor (F). 4.3 Anlisis de prctica. Se realizaron anlisis de prctica con el objetivo de desarrollar la habilidad, rapidez y correcta ejecucin del mtodo para la determinacin de la clorofila. 4.4 Determinacin de clorofila en todas las etapas de produccin de aceite. Se cuantifico la cantidad de clorofila en diferentes muestras soja proveniente de todo el proceso de produccin de aceite 4.5 Anlisis de la informacin. Se observa que segn los datos obtenidos el contenido de clorofila no es constante en las etapas previas a extraccin, mas sin embargo despus de haber realizado el anlisis de clorofila tanto al aceite crudo y desgomado se concluye que estos son los nicos que no muestran una variabilidad significativa del contenido de clorofila.

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V.- RESULTADOS OBTENIDOS. 5.1 Variabilidad de la clorofila en aceite desgomado y grano de soja. A continuacin se muestran los resultados de la determinacin de clorofila en el grano de soja y en el aceite desgomado.

Tabla 4.- Muestra los resultados determinacin de clorofila para una misma muestra de aceite desgomado.

obtenidos

de

la

Grafica 1.- Comportamiento de la clorofila una misma muestra de aceite desgomado.

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En la grafica 1 se observa como la variacin de la clorofila contenida en la misma muestra de aceite desgomado no vara significativamente y tiende a formar una lnea recta, su rango de variacin es de 2059.52 mg/Kg a 2142.85 mg/Kg.

Tabla 5.Muesta los existente de clorofila en una

resultados de la variabilidad misma muestra de grano.

Grafica 2.-Se puede observar que el contenido de clorofila es muy irregular en cada una de las 9 repeticiones.

La grafica 2 muestra claramente que el contenido de clorofila es muy variable en el grano, recalcando que esta determinacin se hizo con la misma muestra de grano las 9 repeticiones, aqu es importante mencionar que se termino la muestra por esa razn solo se realizaron 9 determinaciones en lugar de 10 como ocurri en el caso del aceite desgomado mostrado anteriormente.

5.2 Variabilidad de la clorofila a travs del proceso de transformacin de la soja.

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Tabla 6.- Contiene el nmero de identificacin asignado clorofila contenida dentro de la misma en mg/Kg.

a cada muestra y la cantidad de

Grafica 3.- Contiene los resultados de la determinacin de clorofila en mg/Kg a travs de todo el proceso de transformacin de la soja. Estas determinaciones se realizaron como confirmacin de los resultados de la variabilidad de la clorofila en la grafica 2. Los resultados tanto de la granza y la cascara fueron indeterminados ya que en el primer caso el aceite obtenido resulto ser demasiado obscuro como para poder fiarse de el resultado y en el segundo caso se obtuvo muy poco aceite y resulto poco prctico intentar extractar mas ya que tomaba demasiado tiempo, esto es debido a que el contenido de aceite residual en la cascara es muy bajo generalmente ronda el valor de 1%. 5.3 Variabilidad de clorofila diferentes temperaturas. y sus productos degradados en aceite desgomado a

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Tabla 7.- Muestra la cantidad de clorofila contenida en aceite desgomado que fue sometido a diferentes temperaturas.

Grafica 4.- Estos resultados confirman que la clorofila y sus productos degradados poseen un espectro de absorcin similar y confirman que la cantidad de de clorofila y sus productos degradados no varia significativamente. En la grafica 4, se muestran los resultados de la determinacin de clorofila para una misma muestra de aceite desgomado a las temperaturas indicadas en la tabla, y a simple vista se observa que no hay variacin significativa del contenido de clorofila a dichas temperaturas. En este experimento se busco promover una degradacin exponiendo al aceite desgomado a Diferentes temperaturas una vez alcanzadas se procedi a realizar la determinacin de clorofila.

5.4 Variabilidad de clorofila y sus productos degradados en aceite desgomado a tiempo y temperatura constante.

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Tabla 8.-Muestra las determinaciones de clorofila y sus productos degradados a los que fue sometido un aceite desgomado manteniendo la temperatura constante.

Grafica 5.- Se aprecia una variabilidad muy pequea del contenido de clorofila y sus productos degradados.

En la grafica 5 se muestra una vez ms la poca variacin en el contenido de clorofila del aceite desgomado, esta vez la determinacin se realizo manteniendo la temperatura constante a 60 grados Celsius y la nica variable fue el tiempo de calentamiento estas determinaciones se realizaron con el fin de promover una mayor degradacin de la clorofila y confirmar una vez ms que el espectro absorcin de los productos de degradacin de la clorofila son similares , el tiempo de anlisis se determino basndonos en la literatura consultada. .

VI. ALCANCES Y LIMITACIONES. 6.1. Alcances Basndome en los resultados obtenidos puedo decir que gracias a la realizacin de mi proyecto se conoce mejor el comportamiento real de la clorofila a travs de todo el proceso de produccin de aceite y podemos aconsejar con seguridad que una buena homogenizacin del aceite crudo o desgomado se puede aplicar como medida de control de calidad del aceite. 6.2. Limitaciones Para el desarrollo de este proyecto una limitante fue el tiempo debido a que no se tena previsto que el espectrofotmetro estuviera fuera de servicio por ms de 1 mes ya que sufri 3 averas y se opto por comprar un equipo nuevo que tardo aproximadamente 3 semanas en llegar a la planta.

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VII. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES. 7.1. Conclusiones. Se observ que el contenido de clorofila a travs de las etapas previas a la extraccin de aceite es muy variable debido a esto no es posible tener un control muy preciso sobre esta parte del proceso, por lo tanto no es posible establecer la trazabilidad de clorofila a travs del proceso completo de transformacin de la soja, sin embargo es diferente en el caso del aceite desgomado y aceite crudo, aqu se observ que dichos aceites se pueden homogenizar y se puede observar que el contenido de clorofila no vara significativamente y es aqu donde podemos establecer algunas medidas de control. 7.2. Recomendaciones. Es importante realizar las determinaciones siempre siguiendo el orden del mtodo para evitar confusiones, tambin hay que trabajar siempre con material limpio esto es de suma importancia ya que e material contaminado ocasiona una lectura errnea del contenido de clorofila y se tiene que repetir todo el procedimiento.

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VIII. BIBLIOGRAFA

1. - Sorumlu, Y. Y. (2010). Chlorophyll: Structural Properties, Health Benefits and Its Occurrence in Virgin Olive Oils. Akademik Gda, 26, 32, 1304-7582. 2. -Hendry G. A., Houghton J. D. Y Brown S. B., (1987), The Degradation of Chlorophyll a Biological Enigma, New Phytol, 107, 255-302.
3.- No supe como citar esta referencia 4.- Douglas A. S., Holler F. J., Timothy A. N., (2001).Principios de Anlisis Instrumental, Mc GrawHill.

Esta es la referencia 3, tengo duda documento es de una universidad

en como citarla

tambin

tengo el enlace del

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DIAGRAMA DE FLUJO GENERAL PROTEINAS BASICAS S.A. DE C.V.

ALMACENA
SEMILLA DE SOYA

PRELIMPIA

SECADO

JE ANEXOS. Anexo 1.- Diagrama de flujo general de Protenas Bsicas S. A. de C. V.

LIMPIEZA

QUEBRADO

DESCASCARADO
ALMEND RA DE SOYA

ACONDICIONAMIENTO

HOJUELADO

HOJUEL A

EXPANDER
COLLET

COLLET /HOJUELA CONHEXANO

EXTRACCION
HEXANO MISCELA (ACEITE Y HEXANO)

DESOLVENTIZADO Y TOSTADO LIQUIDO

SALVAD O ENTERO

HEXANO

DESTILACION

CONDENSACION

SECADO HARINA

DECANTACION DE HEXANO
AC. CRUDO HUMEDO

MOLIENDA SALVADO
AC. DESG. HUMEDO SALVADO MOLIDO

DESGOMADO
GOMAS

MOLIENDA HARINA

ALMACENAJE DE HARINA SECADO SECADO SECADO

ALMACEN SALVADO

ALMACENAJE DE ACEITE

CRUDO

ALMACENAJE DE ACEITE DESGOMADO

ALMACENAJE DE LECITINA

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EMBARQUE DE PRODUCTOS SALVADO, ACEITE CRUDO Y