Orchid Propagation From Laboratories

to Greenhouses Methods and Protocols

Yung-I Lee
Visit to download the full and correct content document:
https://textbookfull.com/product/orchid-propagation-from-laboratories-to-greenhouses-
methods-and-protocols-yung-i-lee/
More products digital (pdf, epub, mobi) instant
download maybe you interests ...

Zygotic Genome Activation Methods and Protocols 1st

Edition Kiho Lee (Eds.)

https://textbookfull.com/product/zygotic-genome-activation-
methods-and-protocols-1st-edition-kiho-lee-eds/

Zebrafish Methods and Protocols Koichi Kawakami

https://textbookfull.com/product/zebrafish-methods-and-protocols-
koichi-kawakami/

SNAREs: Methods and Protocols Rutilio Fratti

https://textbookfull.com/product/snares-methods-and-protocols-
rutilio-fratti/

Epitranscriptomics: Methods and Protocols Narendra

Wajapeyee

https://textbookfull.com/product/epitranscriptomics-methods-and-
protocols-narendra-wajapeyee/
Phytoplasmas: Methods and Protocols Rita Musetti

https://textbookfull.com/product/phytoplasmas-methods-and-
protocols-rita-musetti/

Metalloproteins: Methods and Protocols Yilin Hu

https://textbookfull.com/product/metalloproteins-methods-and-
protocols-yilin-hu/

Nanotoxicity: Methods and Protocols Qunwei Zhang

https://textbookfull.com/product/nanotoxicity-methods-and-
protocols-qunwei-zhang/

Autoantibodies: Methods and Protocols Gunnar Houen

https://textbookfull.com/product/autoantibodies-methods-and-
protocols-gunnar-houen/

Oligodendrocytes: Methods and Protocols David Lyons

https://textbookfull.com/product/oligodendrocytes-methods-and-
protocols-david-lyons/
Yung-I Lee
Edward Chee-Tak Yeung Editors

Orchid Propagation:
From Laboratories
to Greenhouses—
Methods and Protocols
Springer Protocols Handbooks

For further volumes:

http://www.springer.com/series/8623
 Orchid Propagation:
From Laboratories to
Greenhouses—Methods and
Protocols

Edited by

Yung-I Lee
Biology Department, National Museum of Natural Science, Taichung, Taiwan, Republic of China

Edward Chee-Tak Yeung

Department of Biological Sciences, University of Calgary, Calgary, Alberta, Canada
Editors
Yung-I Lee Edward Chee-Tak Yeung
Biology Department Department of Biological Sciences
National Museum of Natural Science University of Calgary
Taichung, Taiwan, Republic of China Calgary, Alberta, Canada

ISSN 1949-2448     ISSN 1949-2456 (electronic)

Springer Protocols Handbooks
ISBN 978-1-4939-7770-3    ISBN 978-1-4939-7771-0 (eBook)
https://doi.org/10.1007/978-1-4939-7771-0

Library of Congress Control Number: 2018936747

© Springer Science+Business Media, LLC, part of Springer Nature 2018

This work is subject to copyright. All rights are reserved by the Publisher, whether the whole or part of the material is
concerned, specifically the rights of translation, reprinting, reuse of illustrations, recitation, broadcasting, reproduction
on microfilms or in any other physical way, and transmission or information storage and retrieval, electronic adaptation,
computer software, or by similar or dissimilar methodology now known or hereafter developed.
The use of general descriptive names, registered names, trademarks, service marks, etc. in this publication does not
imply, even in the absence of a specific statement, that such names are exempt from the relevant protective laws and
regulations and therefore free for general use.
The publisher, the authors and the editors are safe to assume that the advice and information in this book are believed
to be true and accurate at the date of publication. Neither the publisher nor the authors or the editors give a warranty,
express or implied, with respect to the material contained herein or for any errors or omissions that may have been
made. The publisher remains neutral with regard to jurisdictional claims in published maps and institutional affiliations.

Printed on acid-free paper

This Humana press imprint is published by the registered company Springer Science+Business Media, LLC
part of Springer Nature.
The registered company address is: 233 Spring Street, New York, NY 10013, U.S.A.
Preface

The orchid family is one of the largest families of flowering plants known for their beauty
and economic importance. Orchids are especially vital to the horticulture and florist indus-
tries. In addition, the potential of using orchids as a source for the pharmaceutical and
fragrance industries is currently being explored, resulting in a steady increase in scholarly
publications related to orchid biology research. When looking at the literature available, it
is surprising to find that there is no comprehensive integration of key areas of research that
are important to both scientists and commercial growers alike.
The main purpose of this publication is (1) to provide key practical areas of research (i.e.
germination, micropropagation, traditional and current techniques related to plant improve-
ment) and (2) to document methods that ensure survival of plants from laboratories to green-
houses. The topics highlighted in this work is by no means complete but is meant to draw
attention to the many techniques available that can be beneficial to one’s work on orchid research
and development. We hope that this publication can promote cross-talks between scientists and
growers. Both groups have different knowledge bases and when combined will ensure successful
growth of orchids in their natural habitats or commercial greenhouses. Laymen that are inter-
ested in orchid growing will also benefit from having this handy scientific reference.
In this work, we emphasize both the theoretical understanding of methods and practi-
cal details. A proper theoretical understanding is essential to the success of a protocol.
Hence several overview chapters have been included amongst the protocol chapters. We
first emphasize propagation methods using seeds and related techniques that are important
to plant conservation and improvement (Part I). Successes in asymbiotic and symbiotic
seed germination are keys to orchid conservation and their propagation. Part II summa-
rizes micropropagation methods, common media, and newer methods of micropropaga-
tion such as the bioreactor culture procedures. This is followed by a special technique
section (Part III) focusing on techniques related to the manipulation of explants in an
in vitro environment. Some cell biological methods and transformation techniques are
included in Part IV. Plant improvements through transformation are now common and can
also be applied to orchid species with some successes; however, transformation protocols
can apply only to a limited number of orchid species. The methods and protocols detailed
serve to encourage further improvements in this area of research. Successes in a laboratory
setting do not guarantee plant survival and propagation in greenhouses and in the natural
environment. Hence, in Part V, we focus on greenhouse propagation techniques that are
essential to the survival of plants generated from a laboratory setting. A final part is to
showcase recent successes on orchid propagation by documenting sample publications and
how to present orchids in an artistic fashion for one’s enjoyment.
We would like to thank Mr. Colin Chan for his help in editing the figures and graphics
and to Professor C.C. Chinnappa for proofreading manuscripts. Finally, we are grateful to
all authors for their contributions to this book and their patience and cooperation during
the course of preparation and editing.

Taichung, Taiwan, Republic of China Yung-I Lee

Calgary, Alberta, Canada  Edward Chee-Tak Yeung

v
Contents

Preface. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .    v
Contributors . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ix

Part I Orchid Seeds in Plant Propagation and Conservation

1 Understanding Seed and Protocorm Development in Orchids���������������������������    3

Edward C. Yeung, Yuan-Yuan Li, and Yung-I Lee
2 Orchid Mycorrhizal Fungi: Isolation and Identification Techniques�������������������  27
Lawrence W. Zettler and Laura L. Corey
3 Protocols for Establishing Fungi-Protocorm Culture�����������������������������������������  61
Yuan-Yuan Li, Hui Wang, and Shun-Xing Guo
4 Orchid Seed and Pollen: A Toolkit for Long-Term Storage, Viability
Assessment and Conservation ���������������������������������������������������������������������������  71
Philip T. Seaton, Silvério T. Hosomi, Ceci C. Custódio, Timothy R. Marks,
Nelson B. Machado-Neto, and Hugh W. Pritchard

Part II Orchid Micropropagation

5 Orchid Seed Germination and Micropropagation I:

Background Information and Related Protocols������������������������������������������������� 101
Edward C. Yeung, Jungmin Park, and Indra S. Harry
6 Orchid Seed Germination and Micropropagation II:
Media Information and Composition����������������������������������������������������������������� 127
Jungmin Park and Edward C. Yeung
7 Orchid Micropropagation: An Overview of Approaches and Methodologies������� 151
Tim W. Yam and J. Arditti
8 Common Protocols in Orchid Micropropagation����������������������������������������������� 179
So-Young Park, Yoon-Sun Huh, and Kee-Yoeup Paek
9 Micropropagation of Orchids by Using Bioreactor Technology ������������������������� 195
Hosakatte Niranjana Murthy, Kee-Yoeup Paek, and So-Young Park
10 Enhanced Growth and Development of Cymbidium and Phalaenopsis
Plantlets Cultured In Vitro Under Light-Emitting Diodes��������������������������������� 209
Duong Tan Nhut, Hoang Thanh Tung, and Michio Tanaka

Part III Special Techniques

11 Tracking Pollen Fates in Orchid Populations����������������������������������������������������� 227

Steven D. Johnson and Lawrence D. Harder
12 Cut-Column Pollination Method to Overcome Pollination Barrier
in Phalaenopsis��������������������������������������������������������������������������������������������������� 241
Hua-Ting Chuang, Kuang-Liang Huang, and Shan-Te Hsu

vii
viii Contents

13 In Vitro Flowering and Breeding of Erycina pusilla������������������������������������������� 257

Yi-Tien Chiu and Chen Chang
14 Virus Elimination Through Meristem Culture and Rapid Clonal
Propagation Using a Temporary Immersion System������������������������������������������� 267
Rong-Show Shen and Shan-Te Hsu
15 Cryopreservation����������������������������������������������������������������������������������������������� 283
Wagner A. Vendrame
16 Haploid Seed Formation via Parthenogenesis in Bletilla������������������������������������� 303
Juntaro Kato and Syoichi Ichihashi
17 A Protocol for the Induction of Polyploids in Phalaenopsis Orchids
by In Vitro Method Without Using Anti-microtubule Agents ��������������������������� 317
Wen-Huei Chen and Ching-Yan Tang
18 Virus Detection������������������������������������������������������������������������������������������������� 331
Chin-An Chang

Part IV Cell and Molecular Biology and Transformation

19 Genetic Transformation on Orchid Species: An Overview of Approaches

and Methodologies������������������������������������������������������������������������������������������� 347
Masahiro Mii and Dong Poh Chin
20 Recent Protocols on Genetic Transformation of Orchid Species������������������������� 367
Chia-Wen Li and Ming-Tsair Chan
21 The Use of Laser Microdissection to Investigate Cell-Specific
Gene Expression in Orchid Tissues ������������������������������������������������������������������� 385
Raffaella Balestrini, Valeria Fochi, Alessandro Lopa, and Silvia Perotto

Part V  Orchid Propagation and Maintenance

22 Vegetative Propagation of Orchids��������������������������������������������������������������������� 403

Yung-I Lee
23 Orchid Cultivation in Taiwan: Conventional and Innovative Methods��������������� 427
Rong-Show Shen, Yu-Hsin Liao, and Kuang-Liang Huang
24 Strategies in Orchid Health Maintenance����������������������������������������������������������� 447
Jiunn-Feng Su, Shu-Pei Chen, and Ting-Fang Hsieh

Part VI Showcasing Orchids

25 Macro Flower Photography: An Introduction to Photographic

Principles and Techniques��������������������������������������������������������������������������������� 463
Mendel Perkins
26 An Introduction to Chinese Orchid Paintings ��������������������������������������������������� 477
Patrick I. Siu
27 Recent Advances in Orchid Seed Germination and Micropropagation ��������������� 497
Yuan-Yuan Li, Colin Chan, Corrine Stahl, and Edward C. Yeung

Index��������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������� 521
Contributors

J. Arditti · University of California, Irvine, CA, USA

Raffaella Balestrini · Istituto per la Protezione Sostenibile delle Piante, Consiglio
Nazionale delle Ricerche (CNR), Turin, Italy
Ming-Tsair Chan · Agricultural Biotechnology Research Center, Academia Sinica,
Tainan, Taiwan, Republic of China
Colin Chan · Department of Biological Sciences, University of Calgary, Calgary, Alberta,
Canada
Chen Chang · Department of Horticulture, National Chung Hsing University, Taichung
City, Taiwan, Republic of China
Chin-An Chang · Chaoyang University of Technology, Taichung, Taiwan, Republic of
China
Wen-Huei Chen · Orchid Research and Development Center, National Cheng Kung
University, Tainan, Taiwan, Republic of China
Shu-Pei Chen · Applied Zoology Division, Taiwan Agricultural Research Institute,
Taichung, Taiwan, Republic of China
Dong Poh Chin · Center for Environment, Health and Field Sciences, Chiba University,
Kashiwa, Chiba, Japan
Yi-Tien Chiu · Department of Horticulture, National Chung Hsing University, Taichung
City, Taiwan, Republic of China
Hua-Ting Chuang · Department of Horticultural Science, National Chiayi University,
Chiayi City, Taiwan, Republic of China
Laura L. Corey · Department of Biology, Illinois College, Jacksonville, IL, USA
Ceci C. Custódio · Agronomy College, Universidade do Oeste Paulista (UNOESTE),
Rodovia Raposa Tavares, Presidente Prudente, SP, Brazil
Valeria Fochi · Dipartimento di Scienze della Vita e Biologia dei Sistemi, Università
degli Studi di Torino, Turin, Italy
Shun-Xing Guo · Institute of Medicinal Plant Development, Chinese Academy of Medical
Sciences and Peking Union Medical College, Beijing, People’s Republic of China
Lawrence D. Harder · Department of Biological Sciences, University of Calgary,
Calgary, Alberta, Canada
Indra S. Harry · Department of Biological Sciences, University of Calgary, Calgary,
Alberta, Canada
Silvério T. Hosomi · College of Biological Sciences, Universidade do Oeste Paulista
(UNOESTE), Presidente Prudente, SP, Brazil
Ting-Fang Hsieh · Floriculture Research Center, Taiwan Agricultural Research
Institute, GuKeng, Yunlin, Taiwan, Republic of China
Shan-Te Hsu · Department of Horticultural Science, National Chiayi University,
Chiayi City, Taiwan, Republic of China
Kuang-Liang Huang · Department of Horticultural Science, National Chiayi
University, Chiayi City, Taiwan, Republic of China

ix
x Contributors

Yoon-Sun Huh · Chungbuk Agricultural Research and Extension Services, Cheongju-si,

Chungbuk, Republic of Korea
Syoichi Ichihashi · Department of Biology, Aichi University of Education, Kariya, Aichi,
Japan
Steven D. Johnson · School of Life Sciences, University of KwaZulu-Natal, Scottsville,
Pietermaritzburg, South Africa
Juntaro Kato · Department of Biology, Aichi University of Education, Kariya, Aichi,
Japan
Yung-I Lee · Biology Department, National Museum of Natural Science, Taichung,
Taiwan, Republic of China
Yuan-Yuan Li · Institute of Medicinal Plant Development, Chinese Academy of Medical
Sciences and Peking Union Medical College, Beijing, People’s Republic of China
Chia-Wen Li · Department of Life Science, Fu-Jen Catholic University, New Taipei City,
Taiwan, Republic of China
Yu-Hsin Liao · Department of Horticultural Science, National Chiayi University, Chiayi
City, Taiwan, Republic of China
Alessandro Lopa · Dipartimento di Scienze della Vita e Biologia dei Sistemi,
Università degli Studi di Torino, Turin, Italy
Nelson B. Machado-Neto · Agronomy College, Universidade do Oeste Paulista
(UNOESTE), Presidente Prudente, SP, Brazil
Timothy R. Marks · Comparative Seed Biology, Comparative Plant and Fungal Biology,
Royal Botanic Gardens Kew, Ardingly, West Sussex, UK
Masahiro Mii · Center for Environment, Health and Field Sciences, Chiba University,
Kashiwa, Chiba, Japan
Hosakatte Niranjana Murthy · Department of Botany, Karnatak University,
Dharwad, India
Duong Tan Nhut · Tay Nguyen Institute for Scientific Research, Vietnam Academy of
Science and Technology, Dalat City, Vietnam
Kee-Yoeup Paek · Department of Horticultural Science, Chungbuk National University,
Cheongju-si, Chungbuk, Republic of Korea; Research Center for the Development of
Advanced Horticultural Technology, Chungbuk National University, Cheongju-si,
Chungbuk, Republic of Korea
Jungmin Park · Department of Biological Sciences, University of Calgary, Calgary,
Alberta, Canada
So-Young Park · Department of Horticultural Science, Chungbuk National University,
Cheongju-si, Chungbuk, Republic of Korea; Research Center for the Development of
Advanced Horticultural Technology, Chungbuk National University, Cheongju-si,
Chungbuk, Republic of Korea
Mendel Perkins · Department of Botany, The University of British Columbia, Vancouver,
BC, Canada
Silvia Perotto · Dipartimento di Scienze della Vita e Biologia dei Sistemi, Università
degli Studi di Torino, Turin, Italy; Istituto per la Protezione Sostenibile delle Piante,
Consiglio Nazionale delle Ricerche (CNR), Turin, Italy
Hugh W. Pritchard · Comparative Seed Biology, Comparative Plant and Fungal
Biology, Royal Botanic Gardens Kew, Ardingly, West Sussex, UK
Philip T. Seaton · Comparative Seed Biology, Comparative Plant and Fungal Biology,
Royal Botanic Gardens Kew, Ardingly, West Sussex, UK
 Contributors xi

Rong-Show Shen · Department of Horticultural Science, National Chiayi University,

Chiayi City, Taiwan, Republic of China
Patrick I. Siu · Willoughby, NSW, Australia
Corrine Stahl · Department of Biological Sciences, University of Calgary, Calgary,
Alberta, Canada
Jiunn-Feng Su · Plant Pathology Division, Taiwan Agricultural Research Institute,
Taichung, Taiwan, Republic of China
Michio Tanaka · Department of Horticultural Science, Kagawa University, Takamatsu,
Kagawa, Japan
Ching-Yan Tang · Department of Life Sciences, National University of Kaohsiung,
Kaohsiung, Taiwan, Republic of China
Hoang Thanh Tung · Tay Nguyen Institute for Scientific Research, Vietnam Academy of
Science and Technology, Dalat City, Vietnam
Wagner A. Vendrame · Department of Environmental Horticulture, University of
Florida, Tropical Research and Education Center, Homestead, FL, USA
Hui Wang · Institute of Medicinal Plant Development, Chinese Academy of Medical
Sciences and Peking Union Medical College, Beijing, People’s Republic of China
Tim W. Yam · Singapore Botanic Gardens, National Parks Board, Singapore, Singapore
Edward C. Yeung · Department of Biological Sciences, University of Calgary, Calgary,
Alberta, Canada
Lawrence W. Zettler · Department of Biology, Illinois College, Jacksonville, IL, USA
 Part I

Orchid Seeds in Plant Propagation and Conservation

 Chapter 1

Understanding Seed and Protocorm Development

in Orchids
Edward C. Yeung, Yuan-Yuan Li, and Yung-I Lee

Abstract
In this overview, the development of orchid seed and protocorm is summarized. Although the structural
organization of seed and protocorm appears simple, information is presented indicating that they have
developmental programs similar to and as complex as other flowering plants. The varied suspensor
morphologies, the presence of cuticular material covering the surface of the embryo, and the delicate seed
coat structure ensure embryo survival, albeit unusual. The embryo is programmed to form a protocorm.
The protocorm cells are destined to form a shoot apical meristem at the apical (chalazal) end and to house
the symbiont at the basal (micropylar) end of a protocorm. Changes in protocorms during asymbiotic and
symbiotic seed germination are discussed.

Key words Embryo, Suspensor, Symbiotic seed germination, Asymbiotic seed germination,
Endosperm, Seed storage proteins and lipids, Phytohormones, Mycorrhizal fungi, Seed coat,
Carapace, Protocorm, Shoot apical meristem

1 Introduction

The small size and specialized structural features of orchid

embryos and seeds and the need to form protocorms prior to
plantlets formation have captured the imagination of plant biolo-
gists. As a result, many publications including monographs and
reviews [e.g., 1–15] have been published, discussing different
aspects of orchid embryology, seed germination, and protocorm
development. Moreover, when studying orchid seed biology, it is
important that we have a broad appreciation of seed development
in flowering plants. Recent studies on plant reproduction provide
a vast amount of information detailing the molecular and genetic
regulations in embryo and seed development [e.g., 16, 17]. All
this information can provide insights and methodologies to further
our studies on orchids.
In addition to theoretical interests, the applied aspect of asymbi-
otic and symbiotic seed germination is a key approach used in orchid

Yung-I Lee and Edward Chee-Tak Yeung (eds.), Orchid Propagation: From Laboratories to Greenhouses—Methods
and Protocols, Springer Protocols Handbooks, https://doi.org/10.1007/978-1-4939-7771-0_1,
© Springer Science+Business Media, LLC, part of Springer Nature 2018

3
4 Edward C. Yeung et al.

propagation and conservation. Furthermore, ­micropropagation of

protocorms from asymbiotically germinated seeds and manipulation
of protocorms in transformation studies are additional techniques
that are important to plant improvements and commercial applica-
tions. Successes on orchid seed germination, micropropagation, and
transformation studies are summarized in recent reviews [18–21].
In order to further our goals in orchid propagation and con-
servation and improving current methods, it is essential that we
have a good understanding on orchid seed development and
changes in protocorm during germination. A detailed perspective
on orchid seed and protocorm development has been published
recently, emphasizing that although orchid embryos are small, they
have complex developmental programs similar to other flowering
plants and the protocorms are designed to house their symbiont
with the primary goal to form a functional shoot apical meristem
[22]. Hence, in this chapter, an abridged account on orchid seed
biology is presented and emphasis is placed on changes to the pro-
tocorm during asymbiotic and symbiotic seed germination. Other
chapters in this book provide current information and protocols on
selected topics of seed germination and propagation. Readers are
urged to consult these and other publications for references.

2 The Orchid Seeds

2.1 The Embryo In orchids, after a successful pollination and fertilization event,
numerous seeds develop within a single capsule. Seeds are very
small and embryos have no obvious histodifferentiation into distinct
tissues, such as the root and shoot apical meristem, primary meri-
stems, and organ, i.e., cotyledon. An extensive review by Yam et al.
[12] documents embryo features from various groups of orchids
and this information will not be repeated here; instead, essential
developmental characteristics are featured below.

2.1.1 Suspensor In flowering plants, the zygote usually divides unequally, giving rise
to a larger basal cell and a smaller terminal cell. The basal cell gives
rise to a short-lived embryonic organ, known as the suspensor, and
the smaller terminal cell divides and gives rise to the embryo proper
[23]. One of the most notable features in orchid embryos is the
varied morphologies of the suspensor found in different groups of
orchids [1]. The number of suspensor cells when present tends to be
limited, ranging from 1 to over 30 [10]. Depending on the species,
the suspensor can appear as a single enlarged cell or as a multicellular
structure with varied forms [1] (Fig. 1). However, it is important to
note that not all orchid species have a distinct suspensor. For exam-
ple, many species in the genus Spiranthes are considered to be sus-
pensorless, as the basal cell fails to enlarge and divide further and
resembles an embryo proper cell [1, 10, 12] (Fig. 1a). Although the
structure of the suspensor appears simple, such as the single suspen-
sor cell of the nun orchid, Phaius tankervilleae, dramatic changes in
Fig. 1 Varied suspensor morphologies. (a) Spiranthes sinensis embryos without a suspensor. Scale bar = 60 μm.
(b) A Phaius tankervilleae embryo showing a single, enlarged suspensor cell. Scale bar = 80 μm. (c) A Cypripedium
debile embryo with a single, small suspensor cell. Scale bar = 60 μm. (d) A Bletilla formosana embryo showing
filamentous extensions originating from an enlarged basal suspensor cell. Scale bar = 120 μm. (e) The suspensor
of Calypso bulbosa embryo consists of an enlarged cell and a 4-celled filamentous region. The basal suspensor
cell extends toward the embryo proper resulting in the formation of a U-shaped embryo. Scale bar = 60 μm. (f)
Cymbidium sinense embryo showing multidirectional growth of suspensor cells. Scale bar = 200 μm. (g) An
Epidendrum ibaguense embryo showing the long multicellular suspensor. Scale bar = 120 μm
6 Edward C. Yeung et al.

size and shape can occur during its course of development (Fig. 1b).
The morphogenetic changes involve coordinated rearrangement in
cell cytoskeleton [24]. Changes in the microtubules have also been
found during the course of suspensor and proembryo formation in
Cymbidium sinense [25]. At present, few detailed cellular and ultra-
structural studies of orchid embryos are available in the literature.
Additional studies are needed in order to obtain insight into how the
varied suspensor forms are generated. It is likely that the cytoskeletal
elements, i.e., microtubules and actin filaments, are involved in the
morphogenesis of suspensors.
The varied morphologies of the suspensor and the haustoria-­
like behavior indicate that they can play a role in nutrient uptake.
In Paphiopedilum delenatii, when the suspensor cells are examined
using an electron microscope, the cells have a transfer cell mor-
phology with wall ingrowths present [26]. The increase in surface
area through the formation of convoluted wall ingrowths enables
an increased capacity for nutrient uptake. It is generally accepted
that cells with wall ingrowths are highly specialized [27] and func-
tion in short distance transport [28, 29].
Based on histochemical staining using toluidine blue O [30],
lipidic polymers, i.e., cutin and suberin, and phenolic substances,
such as lignin, are absent from the suspensor cell wall. In the
absence of these deposits, the primary wall of the suspensor cells
remains “porous” and permits the transfer of nutrients from the
maternal seed coat to the suspensor. For species without any obvi-
ous structural specialization in the suspensor, such as the nun
orchid, the plasmolysis and tracer uptake studies by Lee and Yeung
[31] clearly demonstrated that the suspensor has unique physio-
logical properties. It was determined that the osmotic potential of
the suspensor cell in nun orchid is more negative than surrounding
cells. The differences in osmotic potentials can direct a preferential
flow of water into the suspensor. When introducing a fluorescent
tracer 6-carboxyfluorescein diacetate (CFD) to developing seeds,
the fluorescence signal carboxyfluorescein, a hydrolyzed product
of CFD, is first detected in the suspensor cytoplasm prior to its
appearance in the embryo proper [31]. These results clearly indi-
cate that the suspensor is the uptake site for the developing embryo.
Not all orchid species have a distinct suspensor [3, 10].
Although the nutrient uptake pathway by the suspensorless embryo
is not known, it is logical to speculate that the entire surface of the
embryo proper must be able to absorb nutrients from surrounding
maternal tissues. In Cyrtosia javanica, the seed coat is multilayered
and remains intact until seed maturation [32]. Dense cytoplasmic
accessory and antipodal cells are present, locating at the chalazal
end of developing seeds [32]. It is interesting to note that although
a cuticle is present, it has a patchy appearance and it is initially
absent from the wall of the embryo at the chalazal end [32]. The
pattern of cuticle deposition suggests that the entire surface of the
 Understanding Seed and Protocorm Development in Orchids 7

embryo proper can function in nutrient absorption, especially at

the chalazal end. In order to determine how nutrient enters into
the embryo in the absence of a suspensor, it is necessary to study
the microenvironment surrounding the developing embryo.

2.1.2 Embryo Proper In a majority of flowering plants, the embryo proper undergoes
distinct phases of development. After establishing the apical-basal
polar axis, histodifferentiation of major tissues takes place, fol-
lowed by storage product deposition, preparation of germination
programs, and final changes leading to developmental arrest [33,
34]. The histodifferentiation phase in flowering plants is responsi-
ble for laying down the future body plan of the sporophyte, ready
for germination. Distinct primary meristems, i.e., protoderm,
ground meristem, and procambium, and the root and shoot apical
meristems are clearly delineated at the end of the histodifferentia-
tion phase. Upon germination, a seedling forms quickly due to the
activities of the “pre-formed” apical meristems. Orchid embryo is
minute in size, with no obvious tissues and organ. Casual examina-
tion would lead to the conclusion that a histodifferentiation phase
does not exist in orchid embryos.
Not having an easily recognizable tissue pattern an orchid
embryo does not necessarily suggest that it is less specialized when
compared to other flowering plants. The following observation
indicates that histodifferentiation has indeed occurred during early
embryogenesis in orchid. In examining the structural organization
of the embryo proper, a gradient of cell size is often present with
smaller cells located at the future shoot pole (Fig. 2a). The gradi-
ent indicates that physiological differences exist among embryo
cells in an apical-basal manner. This is demonstrated by the fact
that upon germination, the smaller cells at the apical (chalazal) end
are destined to form the meristematic zone and the large cells at
the basal (micropylar) end will enlarge and destined to house the
symbiont. In orchids, the surface layer of the embryo is specialized,
taking on an epidermal cell characteristic. A surface cuticle layer
has been reported in other flowering plant embryos [35, 36] and
similar cuticular depositions can also be found in orchids (Fig. 2b).
In Phalaenopsis amabilis [37] and Cyrtosia javanica [32], a cuticle
is present but it takes on a patchy appearance. In Cymbidium
sinense, the surface cuticle layer is very distinct covering the entire
surface of the embryo proper [38]. The ability to synthesize cutic-
ular materials is an epidermal cell characteristic, a specialized fea-
ture of a protoderm. Finally, the structural organization of an
orchid embryo mirrors the structure of a protocorm at the time of
germination. In orchid, immature seeds can germinate asymbioti-
cally to form protocorms, once they reach approximately half way
into seed maturation prior to storage product synthesis. The ability
to germinate precociously indicates that the protocorm body plan
8 Edward C. Yeung et al.

Fig. 2 Some structural characteristics of embryo proper. (a) Embryo proper of Epidendrum ibaguense showing
a gradient of cell size with small cells occupying the future shoot pole (*). Scale bar = 100 μm. (b) The embryo
proper of Cyrtosia javanica showing the presence of a distinct cuticle (arrowhead) on its surface. Scale
bar = 100 μm. (c) The nun orchid, Phaius tankervilleae, at the time of maturation. The embryo cells have an
abundant lipid deposits (arrowhead). Scale bar = 40 μm. (d) A section of Vanilla planifolia seed, showing the
unusual thick seed coat (*). Scale bar = 0.3 mm. (e) A Cypripedium plectrochilum seed showing a thick layer
of carapace (arrowhead) that wraps around the embryo. Scale bar = 100 μm. (f) Phenolic deposits can be
present in the carapace and these deposits are readily detected using a fluorescence microscope. Scale
bar = 100 μm
20 Edward C. Yeung et al.

shoot. Subsequent adventitious root formation will result in a

functional plant.
A SAM is initiated from the meristematic layer at the apical
end of a protocorm [22]. Figure 4 depicts a sequence of events in
SAM formation in Epidendrum ibaguense during asymbiotic seed
germination. At the time of placing seeds on germination medium
(1/2 MS medium with 2% sucrose), the embryo cells have a
dense deposition of food reserves (Fig. 4a). Soon after, the
reserve products are utilized and the protocorm cells become
vacuolated and chloroplasts with starch granules are abundant
within the cell cytoplasm (Fig. 4b). The first indication of a SAM
formation is that cells at the future shoot pole become more
tightly packed together and starch granules become less abun-
dant when compared to neighboring cells (Fig. 4c). Distinct
SAM initials appear within the meristematic zone (Fig. 4d). The
appearance delineates a small depression clearly indicating the
position of a SAM [21]. A leaf primordium initiates from the
peripheral region of the SAM (Fig. 4e). A mature SAM eventually
takes on a dome-shape initiating leaf primordium at a regular
interval (Fig. 4f). Although information on shoot development is
available [see 14, 22, 106], the molecular events in SAM initial
specification and subsequent elaboration into a mature SAM are
not known. Future studies, especially molecular genetics studies
similar to the study of SAM in Arabidopsis, will provide new
insight into meristem formation in orchid protocorm. In orchid,
during the histodifferentiation phase, the SAM initiation pro-
gram is suppressed or negatively regulated and is only turned on
during protocorm formation. Future genome-wide transcrip-
tome and expression profile analysis will provide much needed
information on genes involved in SAM formation.

4 Future Perspectives

Orchid embryos are small and they have developmental programs

similar to and as complex as other flowering plants. The primary
goal of embryogeny is to form a protocorm. The protocorm is a
unique structure responsible for the formation of a SAM at the api-
cal end and to house the symbiont at the basal end. Successful
establishment with an appropriate symbiont will lead to plantlet
formation.
With the information at hand, we have a good general under-
standing of the asymbiotic and symbiotic germination process. The
use of seed pretreatment protocols allows for a higher percentage
in asymbiotic seed germination [see Chap. 5]. The concurrent
studies in the biology of mycorrhizal fungi have allowed better suc-
cesses in symbiotic seed germination. Many chapters in this current
volume contain updated information and serve to demonstrate
Another random document with
no related content on Scribd:
 JASKA. Hölmölän kylä.

MAAILMAN-MATTI. Olen kuullut siitä paljon puhuttavan. — Siat

raitilla ja kuhilaat vielä pellolla.

EPRA. Joutaahan ne… siinähän ne ovat törröttäneet jo pari

aastaikaa.

MESAKKI. Ei meillä kiirettä.

JASKA. Niin, ja taivaan linnutkin saavat osansa.

MESAKKI. Mikä hurskas ajatus.

MAAILMAN-MATTI. Sopiva maa-ala minunlaiselle matkamiehelle.

JASKA. Kuules, hän puhuu jo siitä maa-alasta.

EPRA. Mesakki, kysy siltä noin kautta rantain.

MESAKKI. Saisimmeko luvan kysyä…?

MAAILMAN-MATTI. Ei kysyvä tieltä eksy!

MESAKKI. Oletteko te se mittaaja… se maanmittaaja?

MAAILMAN-MATTI. Kyllä on virka vaikkei ole empeetiä. Maita ja

maanteitä olen koko ilmotun ikäni mitannut.

EPRA. Se on hän, ihan varmasti se on hän.

JASKA. Mutta hän ei tullut vaunuissa… (Tunnustelee takaa

Maailman-Matin takkia.)

MAAILMAN-MATTI. Ha, mitä sinä siellä minun takkiani nuuskit?

 JASKA. Minä vaan hiukan tunnustelen, pyyhin sormeni oikein
puhtaaksi.
(Sylkee sormiinsa.)

EPRA. Katsos kuinka se maklakoittee.

MAAILMAN-MATTI. Se takki on nähnyt parempiakin päiviä, usko

poist Mutta ei koiraa ole karvoihin katsomista.

JASKA. Ei, ei! Minä vaan, että onko se oikein ulkomaaa verkaa?

MAAILMAN-MATTI. Vieraissa maissa olen ollut ja taidan

usevammaallaisia kieliä.

MESAKKI. Menikö vaunut rikki?

MAAILMAN-MATTI. Niin, vaunut menivät rikki ja vaatteet

riekaleiksi, täytyi lainata nämät vanhat rievut.

JASKA. Entä se aasi?

MAAILMAN-MATTI. Se kuoli nälästä kahden heinäkucrman väliin,

ei tiennyt kummastako ottaa, siitä se kuoli se aasi.

EPRA (Näyttää kuvakaappia). Tiesinhän minä, että jalkaisin se

tulee.
Onkos tämä se mittauskone?

JASKA. Katsos kuinka se makeilee.

MAAILMAN-MATTI. Kone se on? Horoskooppi, rahakone,

taikakone.

EPRA. Ha, vai horroskaappi!

 JASKA. Ettäkö vallan taikakone?

MAAILMAN-MATTI. Niin, rakkaat hölmöläiset, siitä saatte nähdä

kaikki maailman yhdeksän ihmettä, arkut ja aarteet, Egyptin
pimeyden ja…

JASKA. Kysy, josko se tietäisi, missä se kentraalin kultasapeli on.

MESAKKI. Näyttäkääs meillekin niitä ihmeitä, ehkä se olisi opiksi

meille hölmöläisillekin, me olemme piskuinen lauma, kovin
riidanhaluisia olemme, ratki raadollisia ja henkellisesti vaivaisia,
totisesti, minä havaitsen sen selkeästi.

JASKA. Mutta Mesakki, kultasapeli!

EPRA. Ja rahakirstu!

MESAKKI. Asia on sitä laatua, että tämä Justiinan Jaska ja Ylä-

Hölmän
Epra - eivät tiedä kenelle oikeastaan tämä maapilkku kuuluu.

JASKA (Innostuen). Mun isonisäni isä oli sanonut että…

EPRA. Ha, oli sanonut, oli sanonut… Kyllä minä sen asian
paremmin tiedän. Hölmölän vanhat ihmiset tietävät kertoa, että
minun taatani taata sen omisti.

MESAKKI. Viisikymmentä aastaikaa sitten kasvoi tällä samalla

paikalla sankka tupakkatarha.

EPRA. Kerran minun isäni aikana krapsutti kukko eräänä aamuna

tästä samasta paikasta esille vanhan ruostuneen hevosenkengän.
Se oli sen saman kukon isonisä, jonka ehkä näitte tunkiolla
tullessanne.

MESAKKI. Ja siitä hevoskengästä käräjöittiin kaksikymmentä

aastaikaa kunnes kenkä lopulta jaettiin tasan.

EPRA. Justiinsa niin. Minun isäni kuoli silloin kiukusta.

JASKA. Ja minun isääni harmitti se, että sinun isäsi kuoli ennen,
siitä harmista otti ja kuoli.

MESAKKI. Mutta nyt kulkee semmoinen tarina, että tähän

paikkaan olisi haudattu joku iso sotakentraali ja…

JASKA. Kultasapeli.

EPRA. Ja rahakirstu.

MAAILMAN-MATTI (Viheltää). Ai, veikkoset! Nyt minä alan

ymmärtää! Kyllä minä siitä selvän otan, kunhan maksatte hyvin. Kas
nyt minä panen vatupassin, tärpästikkelin ja munalukon reilaan. —
Katsokaa nyt tuosta reijästä! (Maailman-Matti asettaa kaksi kynttilää
kaappiin ja vääntää veiviä.)

JASKA. Munalukonko reijästä?

MAAILMAN-MATTI. Ei kun tästä?

JASKA (Katsoo reijästä). Hihii! Voi jeekuna vyrrää!

MAAILMAN-MATTI. Tässä on se Pommerin paukutus.

EPRA. Voi ihme ja kumma! Onkos tämä se sotakentraali?

 MAAILMAN-MATTI. Se on sen suuren sotakentraali
Napaljoonivainaan sotahaamu.

EPRA. Voi tokiinsa, silläkin on kultasapeli. Mikäs tämä nummi

sitten on?

MAAILMAN-MATTI. Se on Pariisin hedelmällinen maa Aahrikassa.

EPRA. Tehdäänkö sielläkin makkaratikkuja?

MAAILMAN-MATTI. Ei siellä ole mustia ihmisiä eikä ihmissyöjiä.

JASKA. Mikäs tuo korea mies on, jolla on kukon pyrstö päässä.

MAAILMAN-MATTI. Turkin keisari ja hänen seitsemänsataa

kaunista rouvaansa.

JASKA. Ja nyt tuli pimeys. Mesakki, Mesakki!

MAAILMAN-MATTI. Se on Egyptin pimeys.

JASKA. Missäs heinäsirkat on?

MESAKKI (Katsoo reijästä). Voi, pyhä Mikaeli, onko tämä Egyptin

pimeys. (Saarnaavalla äänellä.) Niin rakkaat hölmöläiset, tekin
vaellatte pimeydessä, peratkaat sentähden se vanha hapatus, että te
tulisitte uudeksi taikinaksi.

AMALIA (Tulee). Mitäs lintuja noi on?

ANSU. Kuuluu olevan paratiisilintuja.

JASKA. Mitähän se linnuilla?

 EPRA. Taitaa vaan olla silmän lumeiksi, ikäänkuin emme me
tietäisi, että maanjakaja se on.

JASKA. Ei se meitä jutkuta.

MAAILMAN-MATTI. Niin, osta nuori neitonen onnen lehti. Joka

ostaa kiertotähden armaalleen, maksaa kaksinkertaisesti.

JASKA. Mitäs se Amalia kiertotähdellä. Ansuako se Amalia tai

ehkä
Akianteria?

AMALIA. Mitäs se Justiinan Jaska nyt… Akianteria? Minä en

kuljekaan kuin Akianteri lakkarissa kukonkoipi, josta on kolme
varvasta leikattu.

MESAKKI. Niin, totisesti, minä näin Akianterilla kukonkoiven, se

antaa naimaonnen.

EPRA. Kyllä Akianteri on yhtä hyvä kuin joku muukin, pysy sinä
Amalia säädyssäsi.

JASKA. Ansua se…

ANSU. Mitäs se Jaska nyt tohisee?

AMALIA. Että viitsiikin, hyi! (Menee tupaan.)

ANSU. Mikäs sille nyt tuli? (Menee portista.)

JASKA. Jahka minäkin otan. Mesakki lue sinä, joka olet

kirjanoppinut.

EPRA. Minä en osta Jaskan kiusallakaan.

 MESAKKI. Jahka haen nokkalasini. (Lukee syrjässä Jaskalle.)
"Kiertotähti tietää, ettet sinä elä naapurisi kanssa oikein hyvissä
väleissä."

JASKA. Mistäs se sen tietää!

MESAKKI. Lukee. "Sinä tapaat erään henkilön, joka tuottaa sinulle

paljon harmia."

JASKA. Epran tietysti.

MESAKKI. "Sinä saat eräästä maa-asiasta paljon hyötyä."

EPRA. Maa-asiasta?

MESAKKI. Jaska, onni hymyilee sinulle niinkuin täysikuu?

EPRA. Lähestyen. Ha, vai niinkuin täysikuu!

JASKA. Niinkuin täysikuu Hölmölän lantapatterin takaa. Kuulkaas

armollinen munalukkoherra, ettekö voisi nyt heti kääntää
kärpästikkeliänne ja tutkia kenelle tämä maanpilkku kuuluu.

MAAILMAN-MATTI. Missä ne viiskivet ovat? Sydänkivi on vaan

paikallaan, siitä ei saa mitään tolkkua. Mutta pois aita, en minä tässä
muuten pääse selville! (Potkaisee aidan kumoon.)

JASKA. Vest ja varjele!

EPRA. Minun aitani! Olisi sen tehnyt joku muu, niin…!

JASKA. Mitä arvelette, eikös tämä maa ole minun?

 EPRA. Älkää kuunnelko häntä, hän on aina hanakkana kuin
kuhmolainen vasikan hännässä.

JASKA. Ja sinulla on puheet mahtavat kuin lehmänostajalla.

MESAKKI. Molemmilla on puheet mahtavat, mutta työt menevät

rasiaan.

MAAILMAN-MATTI. Kyllä minä keinon keksin.

EPRA. Onkohan tässä aarre?

JASKA (Mesakille kahden). Sopisikohan hiukan niinkuin

tunnustella sen ajatuksen meininkiä, ottaisikohan se kaivaakseen
sitä aarretta. (Tunnustelee maata.)

EPRA. Mitäs sinä siellä kronit ja krahnustat?

JASKA. Ai, ai, enhän minä, kysyn vaan, että tahtoiskohan se

horroskaappimestari niinkuin että kaivaa tätä paikkaa.

EPRA. Kaivakoon hän, mutta sinä et siihen näppiäsi pistä.

MAAILMAN-MATTI. En minä ole juuri sellaista työtä tehnyt, mutta

voisihan sitä koettaa hyvää maksua vastaan… hyvää maksua
vastaan.

JASKA. Kuinkas niin isoinen herra, arvaahan sen, mutta kun te

olette niin sukkela, niin alhainen ja niin armollinen, niin…

EPRA. Niin, kun minä sitä asiaa tuumailen, niin suostun minäkin
siihen.
 JASKA. Sanokaahan minulle kahden kesken, onkos tässä
aarretta?

MAAILMAN-MATTI (Mesakille). Antakaa minulle nokkalasinne, niin

minä tarkastan paikkaa.

MESAKKI. Tässä ovat vaskisankaset nokkalasini, minä sain ne

kerran jalolta piispaltani ja esimieheltäni, näillä nokkalaseilla voi
lukea kaiken maailman aikakirjoja.

JASKA. Me käytämme niitä vuoron perään täällä Hölmölässä. Kun

niillä katselee, niin koko maailma suurenee kuin saippuarakko.

MAAILMAN-MATTI (Tekee temppujaan). Katsokaas! Ei tämä

tärpästikkeli mitään tee, sormet ne maneitin antaa. Nyt se näyttää
maan keskipisteeseen! Katselkaa te sillä aikaa taivaan napaa
kohden. (Hölmöläiset töllistelevät ilmaan.) Kuuletteko kuinka
maanakseli pyörii? (Maailman-Matti pistää lasisilmät taskuunsa ja
kopeloi hölmöläisten taskuja, ravistaa päätään ikäänkuin, olisi
pettynyt.)

JASKA. Totisesti, minä kuulen jotakin, se ratisee ihan kuin se ei

olisi saanut tervaa sitten maailman luomisen.

EPRA. Mies kuussa on varastanut koko tervaleilin. Siitä se niin

pahasti niksahtaa.

JASKA. Ja me niksahdamme sen mukana.

MESAKKI. Viisaasti haasteltu. Tämä on liikuttava hetki, minun

vanha syntinen sydämmeni vapisee mielenliikutuksesta.

JASKA. Vai raappiiko Justiina makkarapataa?

 MAAILMAN-MATTI. Salaperäisellä äänellä. Johorimuikkus!

EPRA (Säpsähtäen). Häst!

JASKA (Säpsähtäen). Häst! Mitä hän sanoi!

EPRA. Johorimuikkus!

JASKA. Johorimuikkus!

EPRA. Mitäs se on?

MAAILMAN-MATTI. Se on hepreiskaa!

EPRA. Hää!

MAAILMAN-MATTI. Tässä minun jalkojeni alla on jotakin!

JASKA. Heijuvei! Siellä on aarre, siellä on aarre!

EPRA. Vai että aarre, no sitte siellä on jotakin.

MAAILMAN-MATTI. Nyt minä olen väsynyt kuin rättiukon hevonen,

mutta huomena minä alan sitä kaivaa.

MESAKKI. Ja aarteet tasataan kristillisesti.

JASKA. Minä tahdon sen kultasapelin.

EPRA. Mutta minä tahdon rahakirstun.

JASKA. Ei, ei, kaikki pannaan tasan, niinhän oli määrä.

Tikka ja Akianteri tulevat, jälessä tulee Koputus-Liisa y.m.

hölmöläisiä.
 MESAKKI (Rientää heitä vastaan). Herra herrastuomari! Täällä on
se ihmeellinen maanjakaja.

TIKKA. Me tervehdämme sinua, sinä suuri Salomoni.

AKIANTERI (Määkii hiukan, sitten hän alkaa rummuttaa sormillaan

otsaansa ikäänkuin hän laskisi säkeitä). Me tervehdämme! — Minun
pääpajassani syntyy ja kasvaa nyt jotakin. Paluppii, paluppii,
krasnajeli saminaa, nairuma nitsaa, nieruma natsaa, sijooni nokkii
aapramia!

TIKKA. Kuulkaas vaan, lukee niinkuin lakia!

MESAKKI. Maailman-Matille. Se on Aaretti Akianteri, meidän

rekilaulumestarirnme, hänen päänsä on täynnä neropatteja.

AKIANTERI. Olettekos kuulleet ikiliikkujasta, minä olen sen

vuntieraaja.

MAAILMAN-MATTI. Onko se jo valmis?

AKIANTERI. Ei vielä, mutta minun ajatukseni liikkuu aina.

MAAILMAN-MATTI. Ja minä liikun aina.

JASKA. Me heilumme kaikki niinkuin maito elämän kirnussa.

KOPUTUS-LIISA. Ja minä olen Hölmölän Koputus-Liisa, olette kai

kuullut puhuttavan. Jos teilläkin on neropatteja ja ne syhyvät, niin
minä hieron niitä. Minä olen hieronut esille paljon salattuja asioita. —
Mutta nyt minä menen katsomaan, mitä se Jaskan rakas Justiina
tekee. (Menee tupaan.)
 AKIANTERI. Katsokaa minun päätäni, eikös minussa ole jotain
merkillistä! — Minä näin yöllä unta pässistä…

MAAILMAN-MATTI. Kovin on mörköllinen.

TIKKA. Mitäs siitä sanotaan Sipillan ennuskirjassa..

AKIANTERI. Pässi tietää varallisuutta. Kun minä keksin sen

ikipyörän… jaa, jaa! Te, herra aarremestari, voitte olla minulle apuna.

JASKA. Tämä muukalainen on oikea ihmeiden tekijä ja hän liikkuu

aina.

MESAKKI (Osottaen Mattia). Kallistakaa korvanne tämän miehen

puoleen, sillä hänellä on viisauden merkit.

AKIANTERI (Paatoksella). Nimi sen oli rohvetissa Sipillä, ihana,

kaunis, lahjoitettu avuilla, kaikille kuninkaille tuttu oli, ruhtinailta,
herroilt' ylös otetuks tuli, taivaan merkist nähdä taisi.

MAAILMAN-MATTI (Hullunkurisen salaperäisesti). Jahorimuikkus!

AKIANTERI (Asettaa sormen otsalleen). Jahorimuikkus! Mikä

ihmeellinen sana, mikä oli ensin, muna vai kana?

TIKKA. Johorimuikkus! Kuinka älyllisesti Akianteri pukee sanansa!

MAAILMAN-MATTI. Peijakas, te hölmöläiset olette kaukaa viisaita

ja varovaisia.

HÖLMÖLÄISET (Asettavat etusormen otsalleen). Johorimuikkus.

Mitäs se on?
 MESAKKI. Eivätkä he tienneet, mitä se oli? Hän on sen suuren
Sipillan jälkeläinen.

AKIANTERI. Hän eikä kukaan muu. Sillä hän puhuu

ennusmerkkien kautta.

HÖLMÖLÄISET. Totisesti, Akianteri on sen sanonut!

JASKA. Hän tuo taloon onnen ja varallisuuden. Nyt ei minun

enään tartte laittaa tynnyrintappia, ei voita kirnuta, eikä porsasta
paimentaa. Ehei!

EPRA. Niin, nyt tuli talooni makian leivän päivät. En minä enään
viitsi makkaratikkuja veistellä.

MAAILMAN-MATTI. Hei, nyt tuli minullekin makian leivän päivät!

TIKKA. Iloitkaamme ja riemuitkaamme! Ja nyt minä arvoni mukaan

julistan käräjärauhan ja kotirauhan. Olkoon tämä ylösrakennukseksi
meille huoneenhallituksessa.

AKIANTERI (Rummuttaa sormilla otsaansa). Minun pääni kiehuu

kuin. ampiaispesä. — Nyt, nyt se tulee!

MESAKKI. Hyss! Henki on hänen päällänsä.

AKIANTERI.

Nyt ompi ratki tapahtunn meill ihme yksi suur, kun

hölmöläisten riita loppui aivan alkuuns juur! Natikuti vii ja
natikuti naa.

JASKA (Puoleksi tanssien). Natikuti, vitikuti.

 MAAILMAN-MATTI (Puoleksi tanssien). Nat, nat, naa! Nyt alkaa,
sano, suutari nälkää!

TIKKA. Mikä ylösrakentava ja virkistävä veisu!

MESAKKI. Niin, niin, laulun lahja tulee ylhäältä.

MAAILMAN-MATTI. Hyvät hölmöläiset, tämä kaikki on kuin

pumpulia minun sydämmelleni, mutta minä olen halkinainen mies ja
sanon suoraan, että minulla on nälkä kuin sudella, söisinpä vaikka
tynnörintappia ja makkaratikkuja.

JASKA (Kiskoo häntä käsivarresta). Tulkaa minun tupaani!

MAAILMAN-MATTI. Se on hyviksi. — Niin, ei se työ mitään

herkkua ole.

EPRA. Meillä on hyvää puolukkapuuroa ja talkkunaa.

MAAILMAN-MATTI. Nythän minä elän kuin pellossa.

JASKA. Puolukkapuuroa! Mutta meillä on makkaroita.

EPRA. Ette saa mennä sinne.

JASKA. Ei, ei!

MAAILMAN-MATTI. Kyllä, kyllä. Jollei syö iltasta, niin surma hioo

kirvestä.

EPRA (Toisesta käsivarresta). Ei, tulkaa minun tyköni!

MAAILMAN-MATTI. Kyllä, kyllä, mutta näin minä kuolen kuin

aasinikin kahden heinäkuorman väliin.
 EPRA (Kiskoen omalle puolelleen). Tulkaa vaan meille yöksi, ette
te ole heinäkuormana kahden aasin välissä.

MAAILMAN-MATTI. Niin, kahden aasin. — Johan te teette minusta

nuuskaa.

JASKA. Epra, älä luule, että tämä poika on pottuvoista ja

linnunluista.

EPRA. Tiedäthän sen jo vanhastaan, etten riitaa rakenna, rauhaa

en rukoile, vaan mörkö elämän ei pidä puuttuman. - Kyllä minun
talossani ruokitaan yhtä hyvin kuin sinunkin talossasi.

JASKA. Mutta meillä syödään niinkuin rikkaat oikein lusikalla.

EPRA. Niinhän tuota luulisi kun outo kuulisi.

JASKA. Älä luule rakas sielu, että kissa lentää!

EPRA. Katso itseäsi!

MAAILMAN-MATTI. Älkää repikö, päästäkää irti!

JASKA. Kyllä minä näytän, mitä kummipoika taitaa! Hii!

Epra ja Jaska retuuttavat Maailman-Mattia, toinen toisesta, toinen

toisesta hiasta, hölmöläiset rientävät apuun, toiset kiskovat Epraa
toiset Jaskaa, mutta siten Maailman-Matti kieppuu kuin pallo heidän
välillään ja takinhiat repeävät.

MAAILMAN-MATTI. Kyllä minä nyt jouduin hullujen hoijakkaan. Ai,

auttakaa, paitani repee, paitani repee, auttakaa, auttakaa, ai!

Esirippu.
TOINEN NÄYTÖS.

Sama paikka kuin ensimmäisessä näytöksessä.

MAAILMAN-MATTI (On puettuna uusiin vaatteisiin, hän on

polviaan myöden kuopassa, heittää kuokan ja nousee kuopan
reunalle istumaan). Hohoo! Hullu työtä tekee, elää viisas
vähemmälläkin.

JASKA (Tulee hiipien nurkan takaa toisessa kädessä hattu,

toisessa nassakka, joka on selän takana). Eihän vain akkani lie
täällä?

MAAILMAN-MATTI. Tunnen käryn hajun kodasta.

JASKA. Taitaa olla saunaa lämmittämässä. (Katsoo kuoppaan.)

No, joko siellä alkaa näkyä mitään.

MAAILMAN-MATTI. Ei vielä, hiljaa hyvä tulee.

JASKA. Kas tässä tuon minä vielä isävainaani kirkkohatun.

MAAILMAN-MATTI. Ei nyt ole hätäpäiviä. (Koettelee hattua.) Ihan

kuin minua varten tehty! Ja entäs tämä takki sitten.
 JASKA. Minun häätakkini, jolla minä astuin vihkipallille rakkaan
vaimoni Justiinan kanssa.

MAAILMAN-MATTI. Säämiskähousut, kengät, paidat, ja nyt vielä

kirkkohattu, kyllä nyt kelpaa, kun on hyvä nimi ja uudet vaatteet.

JASKA. Kuulkaasta, taisin raastella hiukan kovakouraisesti

nuttujanne siinä eilisessä käsirysyssä. Minä olen perin siivo ja
säyseä mies, mutta annas kun minä suutun, niin minä olen kauhea
kuin krokotiili, silloin ei minua kymmenenkään miestä pitele. Vest ja
varjele, eihän vain Justiina kuuntele.

MAAILMAN-MATTI. Nythän minä elän oikein herroiksi.

JASKA (Ottaa esille nassakan). Pitäkää vaan hyvänänne,

armollinen herra johorimuikkus!

MAAILMAN-MATTI. Suoraan sanoen, en minä ole juuri koskaan

työtä tehnyt.

JASKA. Niin, arvaahan sen, mitäs noilla pehmeillä naisen käsillä!

Kyllähän minä sen heti käsitin, vaikka Epra sanoi, että te olette
kostjumalan kauppias, mutta kylläpäs te olette koitelleet meitä ja
taitavasti olette te pimittäneet meitä. Me hölmöläiset olemme
yksoikoisia ja me pongerramme aina eteenpäin kuin sontiaiset
piimäleilissä, mutta me olemme hyvin laulavaista kansaa, hyvin
laulavaista kansaa, esimerkiksi, joka mies meillä osaa Akianterin
rekilauluja… niin, niin, se laulun lahja tulee ylhäältä kuten Mesakki
sanoo.

MAAILMAN-MATTI. Meinaatteko, ettei se viisaus ole kaikille suotu.

Minusta te hölmöläiset olette viisaita kuin muurahaiset.
 JASKA. Jeekuna vyrrää! Vai viisaita, sanoitte, niin, niin, emmehän
me sentään niin kovin tokkeloja ollakaan, kun meitä lähemmin
katselee. Kuulkaas, hihi, otetaan pieni kulaus iltatuimaan tästä
kaljanassakasta, piiloitin sen perunakuoppaan, se meidän äiti
haistaa aina… On siinä joukossa hiukan miestä väkevämpääkin.

MAAILMAN-MATTI (Juo). Tätä rataa on mennyt monta sataa!

JASKA. Vest ja varjele! Eikös maarin Epra katsele tuolta

ikkunarievun takaa kuin vanha ukuli. (Sieppaa nassakan ja vie sen
porstuan alle piiloon.)

MAAILMAN-MATTI. Se Epra taitaa olla sellainen vanha kitsuri,

joka piilottaa rahojaan lattian alle ja seinänrakoihin.

JASKA. Taitaa tehdä niin. Minä sanon sen teille kaksisteen, se

Epra on sellainen pomo ja pölkkypää; jo vuosikausia on se aina
vastaan harannut, me olemme käräjillä kiljuneet, me olemme
muljotelleet toisiamme kuin mullikat, ja jollette te olisi tähän meidän
hyvään kyläämme tulleet, niin pahuus tietää, koska tämä riita-asia
olisi päättynyt. Mutta mitenkäs siellä teidän kylässä eletään?

MAAILMAN-MATTI. Siellä on minulla kartano komea Pohattala

nimeltään.

JASKA. Vai oikein kartano?

MAAILMAN-MATTI. Kyllä se onkin nimensä arvoinen. Kun

markkinamiehet vaihtavat hevosia ovensuussa, ei talonväki perällä
siitä mitään tiedä.

JASKA. Voi, jeekuna vyrrää!

 MAAILMAN-MATTI. Ja on siinä tuvassa hirretkin. Kun koira kairan
reikää päivän juoksee, tuskin iltaan ehtii hirren läpi.

JASKA. Ja navetta se on vissiin niinkuin kirkko.

MAAILMAN-MATTI. Ei, veikkoseni! Kun lehmä navetan perällä tuli

härille, vietiin se oven suuhun härän luokse, mutta ennenkuin se
sieltä parteensa takaisin ehti, niin se välillä poiki.

JASKA. Vest ja varjele! Entä vilja, kuinka se kasvaa, meidän ohra

ei ota oikein poutiakseen.

MAAILMAN-MATTI. Talon sikolätissä on kullattu salpa, se kun

heijastaa, niin kaikki vilja tuleentuu.

JASKA. Mutta sepäs oli sukkela temppu, minä teen heti saman
tempun, minulla on vielä pönttöössä kultamaalia, jolla minä maalasin
"keisarin saunapiippuni". — En minä viitsi maalata taloani mutta
posliinipiippuni pitää aina olla kullattu, se on paras piippu koko
Hölmölässä, ja Epran käy sitä niin kateeksi, ai, niin kateeksi — Mutta
sanokaas, minkästähden te niin komiasta kodosta läksitten?

MAAILMAN MATTI. Minä heitin isääni virsikirjalla päähän ja

karkasin maailmanrannan kouluun.

JASKA. Vai maailmanrannan koulussa teistä tuli näin iso herra.

MAAILMAN-MATTI. Niin, se on kaikkein paras koulu, ja siellä

opetettiin minulle, että jollei maailmassa olisi typeriä tomppeleita, niin
ei kannattaisi olla viisas.

JASKA. Niin, monen järki onkin tylsä kuin vanha pellavaloukku.

 MAAILMAN-MATTI. Minä sain sieltä hyvät paperit, ja minua
sanottiin mestari Maailman-Matiksi.

JASKA. Vai että vallan maailman mestarismiehiä, sen minä jo heti

huomasin vaikkei se Epra uskonut. Mutta hullu ei huomaa eikä viisas
ymmärrä.

MAAILMAN-MATTI. Mutta kesken kaikkea, onko horoskooppini

hyvässä tallessa?

JASKA. Se on meidän porstuan peräkamarissa.

MAAILMAN-MATTI. Niin, olkaa varovainen, jos vieteriin koskee,

niin se voi räjähtää.

JASKA. Vest ja varjele!

MAAILMAN-MATTI. Mut kas kun ei kuriirini jo tule rahojen kanssa.

JASKA (Makeasti). Kuulkaas mestari Maailman-Matti. Sanokaa

minulle kaksisteen ja hiukkasten ennemmin kuin löydätte ne sapelit
ja raha-arkut.

MAAILMAN-MATTI. Niin, jos minä vaan löydän ne ennenkuin minä

huomaan ne.

JASKA. Kas se kävi jetsulleen, tässä olisi hiukan

seuranpitämispalkkiota — kolme kaisantaalaria. (Kaivaa rahat
nenäliinastaan.) Mutta älkää puhuko tästä mitään Epralle.

MAAILMAN-MATTI. En, en. Kyllä minun kuriirini sen kuittaa. Kyllä

se aarre löydetään ja silloin hölmöläisistä tulee visuja ja varakkaita.
Laitatte kai oikein ison maailmanrannan koulutalon.