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WO2020190072A1 - (r)-진세노사이드 rg3를 유효성분으로 포함하는 피부상처 치유 또는 피부재생 촉진용 조성물 - Google Patents

(r)-진세노사이드 rg3를 유효성분으로 포함하는 피부상처 치유 또는 피부재생 촉진용 조성물 Download PDF

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Publication number
WO2020190072A1
WO2020190072A1 PCT/KR2020/003824 KR2020003824W WO2020190072A1 WO 2020190072 A1 WO2020190072 A1 WO 2020190072A1 KR 2020003824 W KR2020003824 W KR 2020003824W WO 2020190072 A1 WO2020190072 A1 WO 2020190072A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
ginsenoside
skin
wound healing
cells
composition
Prior art date
Application number
PCT/KR2020/003824
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
김항건
이미진
김상원
노영찬
박소연
Original Assignee
순천대학교 산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 순천대학교 산학협력단 filed Critical 순천대학교 산학협력단
Publication of WO2020190072A1 publication Critical patent/WO2020190072A1/ko

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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like

Definitions

  • the present invention relates to a composition for promoting skin wound healing or skin regeneration comprising (R)-ginsenoside Rg3 as an active ingredient, and more specifically, R-form ginsenoside Rg3 (ginsenoside Rg3 ( 20R)) or a pharmaceutically/cosmetically acceptable salt thereof as an active ingredient, to a pharmaceutical or cosmetic composition for promoting skin wound healing or skin regeneration.
  • a composition for promoting skin wound healing or skin regeneration comprising (R)-ginsenoside Rg3 as an active ingredient, and more specifically, R-form ginsenoside Rg3 (ginsenoside Rg3 ( 20R)) or a pharmaceutically/cosmetically acceptable salt thereof as an active ingredient, to a pharmaceutical or cosmetic composition for promoting skin wound healing or skin regeneration.
  • the skin acts as a barrier to protect the body and is the body's primary line of defense against diseases, and the epidermis, which is present on the outermost wall of the skin, provides a barrier against microbial invasion.
  • Wound healing is the tissue's response to injury and is a process of tissue repair that consists of a combination of several cell types, including keratinocytes, fibroblasts, endothelial cells, macrophages, and platelets. This process includes cell proliferation and migration rates, collagen deposition and remodeling, wound contraction, and angiogenesis.
  • Skin wound healing is a complex process in which the skin or other organs or tissues repair themselves after the wound.
  • the epidermis the outermost layer
  • the dermis the inner or deep layer
  • the protective barrier is broken, the normal physiological process of wound healing begins immediately.
  • the injured person's health, age, diseases such as diabetes, the presence of foreign bodies or necrotic tissues can affect the speed of skin wound healing. If the speed of healing of skin wounds is slow, there is a risk of secondary infection through the wound site.
  • incomplete control of wound dissipation leads to excessive scar formation, which leaves scar tissue functionally and cosmetically inferior. Therefore, if a wound occurs, it is important to heal the wound quickly and without side effects.
  • Korean Patent Registration No. 10-1899818 discloses a wound healing composition containing trakeloside as an active ingredient
  • Korean Patent No. 10-1838156 discloses a round leaf Ipomoea Quamoclit extract.
  • a wound healing composition containing as an active ingredient has been reported.
  • ginseng is a well-known herbal medicine in Asia, and various pharmacological and therapeutic effects have been reported on the central nervous system, endocrine system, immune system, cardiovascular system, and aging through a number of experimental and clinical studies (Kitts et al., 2000; Nam, 2002; Liu and Xiao, 1992).
  • the main active ingredient of ginseng is triterpene glycoside, called ginsenoside (G).
  • Ginsenosides have been reported to have various effects, including anti-fatigue and anti-stress effects, immunomodulation, antioxidant, anti-inflammatory, neuronal protection, and anti-tumor effects (Attele et al., 1999; Park et al., 2003; Shibata, 2001; Leung and Wong, 2010).
  • ginsenoside Rg3 (G-Rg3) is the most studied component after G-Rg1 and G-Rb1. It suppresses tumors (Shinkai et al., 1996), inhibits angiogenesis and anti-tumor metastasis (Mochizuki).
  • G-Rg3 has a molecular formula of C 42 H 72 O 13 and a molecular weight of 784, and there is a pair of stereoisomers, according to the position of the hydroxyl group attached to the C-20 position of the non-sugar of the formula 1 below. It is classified into an epimer of 20(R)-Rg3 and 20(S)-Rg3 of Formula 2 (Shoji, 1990; Lee BH and Nah SY, 2007). This 20(S)/20(R)-Rg3 is produced by selective attack of hydroxyl groups after removal of sugar residues attached to C-20 (Kang et al., 2006).
  • the isomers have the same molecular weight, but exhibit different physical and biological properties due to structural properties from each other (Lee and Nah, 2007; Ni et al., 2005; Bae et al., 2002).
  • the 20(S)-Rg3 isomer is more water-soluble and has a higher bioavailability than the 20(R)-Rg3 isomer (Chang et al., 2009), and the 20(S)-Rg3 isomer has a melting point of 248-250. °C (dec.), and 20(R)-Rg3 differs from 299-302 °C (dec.) (Bae et al., 2002).
  • 20(S)-Rg3 which is generally more water-soluble, is strong.
  • 20(S)-Rg3 has stronger antioxidant activity than 20(R)-Rg3 (Kang et al., 2007; Lee et al., 2008c), and is a more efficient regulator of potential-dependent Ca 2+ , K + or Na + pathways. (Kang et al., 2005), and acted as an antagonist of the stronger serotonin type 3 receptor F (5-HT(3A) receptor) (Lee et al., 2007).
  • 20(S)-Rg3 showed stronger cytotoxicity than 20(R)-Rg3, and was reported to have anti-cancer effects (Popovich and Kitts, 2002; Qi et al., 2010b). In promoting immune response, 20(R)-Rg3 was stronger than that of 20(S)-Rg3 (Wei et al., 2012).
  • the inventors of the present invention were conducting a more in-depth study on the activity of ginsenoside Rg3, whereas the S-form of ginsenoside Rg3 did not show any effect on skin wound healing or skin regeneration, whereas the R-form of ginsenoside Rg3
  • the fact that it exhibits an effect of (R)-ginsenoside Rg3 a new use of skin wound healing and skin regeneration promotion was discovered, and the present invention was completed.
  • a technical problem to be solved in the present invention is to provide a material having a skin wound healing and skin regeneration effect, and a skin wound healing and skin regeneration method using the material.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for healing skin wounds or promoting skin regeneration comprising (R)-ginsenoside Rg3 of Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient. to provide:
  • the present invention provides a cosmetic composition for healing skin wounds or promoting skin regeneration comprising (R)-ginsenoside Rg3 of Formula 1 or a cosmetically acceptable salt thereof as an active ingredient:
  • the (R)-ginsenoside Rg3 (ginsenoside Rg3(20R) or 20(R)-ginsenoside Rg3) is extracted and separated from ginseng or red ginseng using a method known in the art for extraction and separation. It can be obtained or chemically synthesized and used.
  • (R)-ginsenoside Rg3 represented by Chemical Formula 1 of the present invention can be used in the form of a pharmaceutically/cosmetically acceptable salt, and as a salt, a pharmaceutically/cosmetically acceptable free acid Acid addition salts formed by are useful.
  • Acid addition salts include inorganic acids such as hydrochloric acid, nitric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, nitrous or phosphorous acid, and aliphatic mono and dicarboxylates, phenyl-substituted alkanoates, hydroxy alkanoates and alkanes. It is obtained from non-toxic organic acids such as dioates, aromatic acids, aliphatic and aromatic sulfonic acids.
  • Such pharmaceutically non-toxic salts include sulfate, pyrosulfate, bisulfate, sulfite, bisulfite, nitrate, phosphate, monohydrogen phosphate, dihydrogen phosphate, metaphosphate, pyrophosphate chloride, bromide, ioda Id, fluoride, acetate, propionate, decanoate, caprylate, acrylate, formate, isobutyrate, caprate, heptanoate, propiolate, oxalate, malonate, succinate, suberate , Sebacate, fumarate, maleate, butin-1,4-dioate, hexane-1,6-dioate, benzoate, chlorobenzoate, methylbenzoate, dinitrobenzoate, hydroxybenzoate, me Oxybenzoate, phthalate, terephthalate, benzenesulfonate, toluenesulfonate
  • the acid addition salt according to the present invention is prepared in a conventional manner, for example, (R)-ginsenoside Rg3 is dissolved in an excess acid aqueous solution, and the salt is dissolved in a water-miscible organic solvent such as methanol, ethanol, acetone or It can be prepared by precipitation using acetonitrile. Further, the mixture may be dried by evaporating a solvent or an excess of acid, or may be prepared by suction filtration of the precipitated salt.
  • a water-miscible organic solvent such as methanol, ethanol, acetone or It can be prepared by precipitation using acetonitrile.
  • the mixture may be dried by evaporating a solvent or an excess of acid, or may be prepared by suction filtration of the precipitated salt.
  • bases can be used to make pharmaceutically/chemically acceptable metal salts.
  • the alkali metal or alkaline earth metal salt is obtained, for example, by dissolving the compound in an excess alkali metal hydroxide or alkaline earth metal hydroxide solution, filtering the undissolved compound salt, and evaporating and drying the filtrate. At this time, it is pharmaceutically suitable to prepare sodium, potassium or calcium salt as the metal salt.
  • the corresponding silver salt is obtained by reacting an alkali metal or alkaline earth metal salt with a suitable silver salt (eg, silver nitrate).
  • the (R)-ginsenoside Rg3 increases cell mobility and invasive ability of colon cancer cell lines (Caco2) and keratinocytes (HaCaT), does not exhibit cytotoxicity, and It is very effective for skin wound healing and skin regeneration by forming new tissues in the area and reducing scars.
  • (S)-ginsenoside Rg3 an isomer of (R)-ginsenoside Rg3, has little or no effect on cell mobility and invasiveness of colon cancer cell lines (Caco2) and keratinocytes (HaCaT). have.
  • wound refers to damage to humans resulting from a disorder or disease in which tissue is cut, torn, broken, burned, or traumatized, or causing such damage.
  • heating is the acceleration or acceleration of the time from the occurrence of the wound to the time the wound is closed (complete wound contraction).
  • skin regeneration is a process of tissue recovery from damage, chemotaxis, cell differentiation and replication, synthesis of matrix proteins, blood vessel neovascularization and reconstruction of wounds. It is a complex biological process involving the back.
  • growth factor One of the representative substances that are generated early in the skin regeneration process and regulate the subsequent processes is growth factor, which has a strong influence over the entire skin regeneration process while controlling the growth, differentiation, and metabolism of cells.
  • the “cell infiltration” generally refers to a phenomenon in which cells migrating in a tissue gather at one site. According to a specific embodiment of the present invention, cell infiltration by treatment with (R)-ginsenoside Rg3 on the wound site This occurs and the skin wound can be healed by proliferation of cells along with the formation of neovascularization.
  • Types of wounds to which the composition for skin wound healing or skin regeneration of the present invention can be applied are, but are not limited to, cuts and lacerations, surgical incisions or wounds, punctures, abrasions (graze), scratches, pressure wounds , Abrasion, friction wounds (e.g. diaper rash, friction blisters), pressure sore ulcers (e.g.
  • bedsores or bulges bedsores or bulges
  • thermal wounds directly or through conduction, convection or radiation
  • chemical wounds such as acid or alkali burns
  • pathogenic infections such as viral, bacterial or fungal infections
  • open or intact boils skin rashes, blemishes, and acne, ulcers, chronic wounds (diabetes) -Related injuries, such as lower leg and foot ulcers, venous leg ulcers and bedsores).
  • the "active ingredient” refers to a component that exhibits a desired activity by itself or can exhibit activity together with a carrier that is not active by itself.
  • composition of the present invention can be used to stimulate epithelial cell proliferation and bottom layer keratinocytes for wound healing, especially skin wound healing purposes. These wounds can be shallow or deep and include damage to the dermis and epidermis of the skin.
  • the (R)-ginsenoside Rg3 of the present invention heals wounds at a normal rate or promotes the healing of anastomosis and other wounds caused by surgery in humans with poor healing.
  • (R)-ginsenoside Rg3 of the present invention is a condition that induces normal individuals and abnormal wound healing, such as uremia, malnutrition, vitamin deficiency, obesity, infection, immunosuppression and systemic treatment using steroids, radiation therapy, and Surgical wounds, resection wounds, severe wounds associated with damage to the dermis and epidermis, soft tissue damage such as muscle rupture, ocular tissue wounds, tooth tissue wounds, oral wounds, in individuals with complications related to anti-neoplastic drugs and antimetabolites, For wound healing of wounds, including wounds and ulcers of the gastrointestinal mucosa, diabetic ulcers, skin ulcers, elbow ulcers, arterial ulcers, venous congestive ulcers, and heat-induced burns, exposure to extremely high or cryogenic temperatures, or exposure to chemicals.
  • wounds including wounds and ulcers of the gastrointestinal mucosa, diabetic ulcers, skin ulcers, elbow ulcers, arterial ulcers, venous congestive ulcers, and heat-induced burns
  • the composition may also promote healing of wounds associated with ischemic and ischemic injuries, such as chronic venous inferior ulcers, caused by impairment and/or insufficiency of venous circulatory system reflux; Promoting skin repair following skin loss; Increase in epidermal tension and epidermal thickness; And for increasing adhesion of skin grafts to the wound layer and promoting re-epithelialization from the wound layer.
  • wounds associated with ischemic and ischemic injuries such as chronic venous inferior ulcers, caused by impairment and/or insufficiency of venous circulatory system reflux
  • Promoting skin repair following skin loss Increase in epidermal tension and epidermal thickness
  • (R)-ginsenoside Rg3 or a pharmaceutically/cosmetically acceptable salt thereof contained in the composition for promoting skin wound healing or skin regeneration of the present invention is 0.001 to 10% by weight, preferably based on the total weight of the composition. It may be included in an amount of 0.001 to 5% by weight. If the content is less than 0.001% by weight, the effect of promoting skin wound healing and skin regeneration, which is the target effect of the present invention, cannot be obtained, and when it exceeds 10% by weight, the increase in the effect according to the increase in the content is not proportional. It may be inefficient and there is a problem in that the stability of the formulation is not secured.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising (R)-ginsenoside Rg3 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • composition of the present invention when used as a pharmaceutical composition, it may further contain a pharmaceutically acceptable carrier in addition to (R)-ginsenoside Rg3 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • Pharmaceutically acceptable carriers included in the pharmaceutical composition of the present invention are commonly used in formulation, and carbohydrate compounds (eg, lactose, amylose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, starch, cellulose, etc.) , Gum acacia, calcium phosphate, alginate, gelatin, calcium silicate, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, cellulose, water, syrup, salt solution, alcohol, gum arabic, vegetable oil (e.g.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may further include a lubricant, a wetting agent, a sweetening agent, a flavoring agent, an emulsifying agent, a suspending agent, a preservative, and the like in addition to the above components.
  • a lubricant e.g., a lubricant, a wetting agent, a sweetening agent, a flavoring agent, an emulsifying agent, a suspending agent, a preservative, and the like in addition to the above components.
  • Suitable pharmaceutically acceptable carriers and formulations are described in detail in Remington's Pharmaceutical Sciences (latest edition), Mach Publishing Company, Easton, PA.
  • a preferred dosage of the pharmaceutical composition of the present invention is in the range of 0.001 to 100 mg/kg on an adult basis.
  • it is recommended to apply once to 5 times a day in an amount of 1.0 to 3.0 ml based on an adult and continue for more than 1 month.
  • the above dosage does not limit the scope of the present invention.
  • Formulations of the pharmaceutical composition of the present invention include oral dosage forms such as powders, granules, tablets, capsules, emulsions, syrups, aerosols, external preparations such as ointments and creams, and sterile injectable solutions according to conventional methods. It can be formulated and used in any form suitable for the formulation.
  • the pharmaceutical composition for skin wound healing or skin regeneration of the present invention may be a formulation such as an ointment, patch, gel, cream or spray, but is not limited thereto.
  • (R)-ginsenoside Rg3 is used as a pharmaceutically acceptable carrier, i.e., in unit dose injectable form (solution, suspension, or emulsion) at the desired degree of purity. It is non-toxic to the subject at the dosage and concentration and is generally formulated by mixing with ones compatible with the other ingredients of the formulation.
  • formulations such as ointments, creams, and gels can be used at the dosages described above for the composition.
  • Suitable formulations known in the art can be found from Remington's Pharmaceutical Sciences (latest edition), Mach Publishing Company, Easton, PA.
  • Ointments are generally (1) oily bases, i.e. those consisting of fixed oils or hydrocarbons, such as white petrolatum or mineral oils, or (2) absorbent bases, i.e. any anhydrous substances or substances capable of absorbing water, such as anhydrous. It is prepared using lanolin. Typically, after preparation of the substrate, whether oily or absorbent, the active ingredient ((R)-ginsenoside Rg3) is added in an amount that provides the desired concentration.
  • oily bases i.e. those consisting of fixed oils or hydrocarbons, such as white petrolatum or mineral oils
  • absorbent bases i.e. any anhydrous substances or substances capable of absorbing water, such as anhydrous. It is prepared using lanolin.
  • the active ingredient ((R)-ginsenoside Rg3) is added in an amount that provides the desired concentration.
  • the cream is an oil/water emulsion.
  • They typically consist of an oil phase (internal phase) comprising fixed oils, hydrocarbons and the like, such as wax, petrolatum, mineral oil, and the like, and an aqueous phase (continuous phase) comprising water and optional water-soluble substances such as additional salts.
  • the two phases are emulsifiers such as surface active agents such as sodium lauryl sulfate; It is stabilized by the use of hydrophilic colloids such as acacia colloidal clay, vegetables and the like.
  • the active ingredient ((R)-ginsenoside Rg3) is usually added in an amount to achieve the desired concentration.
  • Gels include oily substrates, water, or emulsion-suspension substrates, such as substrates selected from those described above.
  • a gelling agent that forms a matrix in the substrate and increases its viscosity.
  • the gelling agent include hydroxypropyl cellulose, acrylic acid polymer, and the like.
  • the active ingredient ((R)-ginsenoside Rg3) is added to the formulation at the desired concentration at the time prior to addition of the gelling agent.
  • compositions of the present invention also contemplate wound care dressings or bandages comprising a therapeutically effective amount of (R)-ginsenoside Rg3 or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • Wound care bandages or dressings may include an outer fabric support, preferably an elastomeric fabric support; And an inner pad, wherein the inner pad preferably comprises an outer membrane surface made from a film-forming material, and a therapeutically effective amount of R)-ginsenoside Rg3, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, is added to the composition. It is introduced into the matrix at the dosages described above.
  • the pad may be integral with the outer fabric support or may be separate.
  • the present invention provides a cosmetic composition
  • a cosmetic composition comprising (R)-ginsenoside Rg3 or a cosmetically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • the cosmetic composition according to one embodiment of the present invention includes ingredients commonly added to the cosmetic composition, such as antioxidants, stabilizers, solubilizers. , Conventional auxiliaries such as vitamins, pigments and flavors, and carriers may be further added.
  • the cosmetic composition of the present invention may be prepared in any formulation commonly prepared in the art, for example, solution, suspension, emulsion, paste, gel, cream, lotion, powder, soap, surfactant-containing cleansing , Oil, powder foundation, emulsion foundation, wax foundation, spray, etc. may be formulated, but is not limited thereto. In more detail, it may be prepared in the form of a nourishing cream, astringent lotion, a soft lotion, lotion, essence, a nourishing gel or a massage cream.
  • the formulation of the present invention is a paste, cream or gel, animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tracanth gum, cellulose derivatives, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc, or zinc oxide are used as carrier components.
  • animal oil vegetable oil, wax, paraffin, starch, tracanth gum, cellulose derivatives, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc, or zinc oxide are used as carrier components.
  • cellulose derivatives polyethylene glycol
  • silicone bentonite
  • silica silica
  • talc talc
  • zinc oxide zinc oxide
  • toss When the formulation of the present invention is a powder or a spray, toss, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used as a carrier component.
  • chlorofluorohydrocarbon propane / May contain propellants such as butane or dimethyl ether.
  • a solvent, a solubilizing agent or an emulsifying agent is used as a carrier component, such as water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1 ,3-butylglycol oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol or fatty acid ester of sorbitan.
  • liquid diluents such as water, ethanol or propylene glycol as carrier components, ethoxylated isostearyl alcohol, suspending agents such as polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, crystallites Sex cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tracanth gum, and the like can be used.
  • the formulation of the present invention is a surfactant containing cleansing, as a carrier component, aliphatic alcohol sulfate, aliphatic alcohol ether sulfate, sulfosuccinic acid monoester, isethionate, imidazolinium derivative, methyltaurate, sarcosinate, fatty acid amide Ether sulfates, alkylamidobetaines, fatty alcohols, fatty acid glycerides, fatty acid diethanolamides, vegetable oils, lanolin derivatives, or ethoxylated glycerol fatty acid esters may be used.
  • the pharmaceutical or cosmetic composition containing (R)-ginsenoside Rg3 or a pharmaceutically acceptable salt thereof of the present invention as an active ingredient is administered to the wound site of the individual, subcutaneous administration or topical administration by application, etc.
  • the present invention administers a composition comprising (R)-ginsenoside Rg3 or a pharmaceutically/cosmetically acceptable salt thereof as an active ingredient to an individual to heal skin wounds and regenerate the skin. It provides a method of making and its use.
  • the term "subject” refers to monkeys, cattle, horses, pigs, sheep, dogs, cats, rats, mice, including humans with conditions or diseases in which symptoms can be improved by administering the composition of the present invention, It means a mammal such as a chimpanzee.
  • the administration is oral or parenteral administration, preferably parenteral administration, more preferably topical administration by application, and the dosage thereof is the formulation method, the mode of administration, the patient's age, weight, sex, pathological condition, etc. It can be easily changed and used by those of ordinary skill in the art depending on the factors of.
  • (R)-ginsenoside Rg3 of the present invention or its pharmacologically/cosmetically acceptable salt has no skin irritation and cytotoxicity, and is excellent in human stability, so there are almost no side effects to the human body, so it is safe even when used for a long time. Because it can be used, it can be safely used in medicines or cosmetics.
  • (R)-ginsenoside Rg3 increases the cell mobility and invasive ability of Caco2 cells (Colon Epithelial Colorectal adenocarcin noma cells, colon adenocarcinoma cells) and HaCaT (Human keratinocyte, keratinocyte line), and increases cytotoxicity. It does not appear, and it is very effective for skin wound healing and skin regeneration by forming new tissue at the wound site and reducing scarring. Accordingly, (R)-ginsenoside Rg3 or a pharmaceutically acceptable salt thereof may be usefully used as a pharmaceutical or cosmetic composition for healing skin wounds and promoting skin regeneration.
  • Caco2 cells Cold Epithelial Colorectal adenocarcin noma cells, colon adenocarcinoma cells
  • HaCaT Human keratinocyte, keratinocyte line
  • FIG. 3 is a graph showing the results of observing the invasion of HaCaT cells treated with (R)-ginsenoside Rg3 and (S)-ginsenoside Rg3 under a microscope and quantifying them.
  • FIG. 4 is a graph showing the results of observing the invasion of Caco2 cells treated with (R)-ginsenoside Rg3 and (S)-ginsenoside Rg3 under a microscope and quantifying them.
  • FIG. 5 is a photograph of visual observation of a reduction in incision area as an incision healing effect through animal experiments of (R)-ginsenoside Rg3 and (S)-ginsenoside Rg3, and a graph quantifying it.
  • MTT (3-(4,5-dimetylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) is a pale yellow substrate that produces dark blue formazan in living cells and does not react in dead cells. The amount of cup produced is used to measure the number of living cells.
  • Caco2 cells and HaCaT cells were prepared in DMEM (Dulbecco's Modification of Eagle's Medium) medium containing 10% FBS (fetal bovine serum) and 1% penicillin-streptomycin under conditions of 37° C. and 5% CO 2. Cultured in.
  • DMEM Dulbecco's Modification of Eagle's Medium
  • FBS fetal bovine serum
  • penicillin-streptomycin under conditions of 37° C. and 5% CO 2. Cultured in.
  • MTT (3-(4,5-dimetylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) reagent was dissolved in PBS (phosphate buffered saline, pH 7.4) at a concentration of 1 mg/ml and then 0.2 ⁇ m syringe filter ) was used after filtration, and (R)-ginsenoside Rg3 and (S)-ginsenoside Rg3 were each diluted with PBS and used.
  • the cultured cells were dispensed in a 24 well-plate at a concentration of 2 ⁇ 10 4 cells/well, cultured for 24 hours in a cell incubator at 37° C. in the presence of 5% CO 2 , and cell adhesion was confirmed.
  • Each of the wells was treated with (R)-ginsenoside Rg3 and (S)-ginsenoside Rg3 at different concentrations (12.5, 25, 50 and 100 ⁇ M), and then cultured again for 48 hours.
  • MTT solution (1 mg/ml in PBS) was added in an amount equal to 1/10 of the total volume of the medium, and 37°C In the CO 2 incubator was reacted for 3 hours.
  • 100 ⁇ l of DMSO dimethyl sulfoxide
  • the degree of proliferation activity of cells was calculated according to Equation 1 below based on the absorbance intensity of the control group using pure water and expressed as a percentage. As a control, cells treated with DMSO were used instead of the sample. The results are shown in Table 1 and Fig. 1 below.
  • Table 1 shows the IC 50 values of (R)-ginsenoside Rg3 and (S)-ginsenoside Rg3 for Caco2 and HaCaT cells
  • FIG. 1 shows (R)-ginsenoside Rg3 and and (S) -This is the result of measuring the relative cell viability of Ginsenoside Rg3 against Caco2 and HaCaT cells.
  • (S)-ginsenoside Rg3 has IC 50 values for Caco2 and HaCaT cells, respectively, 59.1uM and 83.1uM
  • (R)-ginsenoside Rg3 has IC 50 values for Caco2 and HaCaT cells. These were 262.5 uM and 172.4 uM, respectively, confirming that (R)-ginsenoside Rg3 had a higher cell viability at the same concentration and no cytotoxicity compared to (S)-ginsenoside Rg3.
  • the degree of cell migration was measured using a transwell chamber (Corning Costerm Corning, NY, USA) with a polycarbonate having a pore size of 8 ⁇ m.
  • HaCaT cells were dispensed to the upper part of the chamber so that it became 2.4 ⁇ 10 6 cells/well.
  • a culture medium containing 10% FBS was dispensed into the lower layer of the chamber.
  • the HaCaT cells were each treated with (R)-ginsenoside Rg3 and (S)-ginsenoside Rg3 at concentrations that do not show cytotoxicity, and then cultured for 24 hours.
  • FIG. 2 is a graph illustrating microscopic observation and quantification of cell mobility of keratinocytes (HaCaT) treated with (R)-ginsenoside Rg3 and (S)-ginsenoside Rg3, respectively.
  • HaCaT keratinocytes
  • Rg3 keratinocytes
  • S keratinocytes
  • the degree of invasion of cells was measured using a transwell chamber (Corning Costerm Corning, NY, USA) with a filter coated with polycarbonate and 1% gelatin having a pore size of 8 ⁇ m.
  • Caco2 and HaCaT cells were dispensed into the upper part of the chamber so that it became 2.4 ⁇ 10 6 cells/well.
  • a culture medium containing 0.2% BSA and 1 ⁇ g/mL fibronectin for Caco2 cells, and a culture medium containing 10% FBS for HaCaT cells was dispensed.
  • the Caco2 and HaCaT cells were each treated with (R)-ginsenoside Rg3 and (S)-ginsenoside Rg3 at concentrations that do not show cytotoxicity, and then cultured for 24 hours. After the cultured cells were fixed and stained using a Diff Quick kit (sysmex, Kobe, Japan), the number of infiltrated cells was counted using an optical microscope. As a control, DMSO-treated Caco2 and HaCaT were used. The experiment was repeated three times, and the values were expressed as mean ⁇ standard deviation. In addition, significance was verified by one-way analysis of variance (One-way ANOVA, Tukey's HSD) at p ⁇ 0.05 significance level, and SPSS 17.0 (Chicago, USA) statistical program was used. The results are shown in FIGS. 3 and 4.
  • FIG. 3 and 4 show microscopic observation and quantification of the invasion of colon adenocarcinoma cell lines (Caco2) and keratinocytes (HaCaT) treated with (R)-ginsenoside Rg3 and (S)-ginsenoside Rg3 at each concentration. It is a graph. As shown here, the number of infiltrated cells in Caco2 and HaCaT cells treated with (R)-ginsenoside Rg3 increased compared to the control.In particular, (R)-ginsenoside Rg3 infiltrated with increasing concentration. It was confirmed that the number of cells was increased proportionally.
  • the skin wound healing ability of (R)-ginsenoside Rg3 and (S)-ginsenoside Rg3 was measured by the following method.
  • the incision site was photographed at a certain distance for each group using a digital camera every day after incision induction, and the changes in the wound were visually observed.
  • FIG. 5 is a photograph of visual observation of reduction in incision area as an incision healing effect of (R)-ginsenoside Rg3 and (S)-ginsenoside Rg3 through animal experiments, and a graph quantifying the degree of reduction in skin wounds.
  • the wound area of the (R)-ginsenoside Rg3 treatment group showed a tendency to be significantly reduced during the treatment period compared to the (S)-ginsenoside Rg3 treatment group.
  • the wound size began to decrease compared to the control and (S)-ginsenoside Rg3, and on the 7th day, the wound size was significantly smaller than that of the control group and (S)-ginsenoside Rg3. I could confirm that it was healing.

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Abstract

본 발명은 (R)-진세노사이드 Rg3 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부상처 치유 또는 피부재생 촉진용 조성물에 관한 것으로, (R)-진세노사이드 Rg3은 세포의 이동성 및 침윤능을 증가시키고, 세포독성을 나타내지 않으며, 창상 부위에서 신생조직을 형성시키고 반흔을 감소시켜 피부상처 치유 및 피부재생에 매우 효과적이다. 따라서, (R)-진세노사이드 Rg3 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 피부상처 치유 및 피부재생 촉진을 위한 약학적 또는 화장료 조성물로서 유용하게 사용될 수 있다.

Description

(R)-진세노사이드 RG3를 유효성분으로 포함하는 피부상처 치유 또는 피부재생 촉진용 조성물
본 발명은 (R)-진세노사이드(Ginsenoside) Rg3을 유효성분으로 포함하는 피부 상처 치유 또는 피부 재생 촉진용 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 R-form 진세노사이드 Rg3 (진세노사이드 Rg3(20R)) 또는 이의 약학적/ 화장학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부 상처 치유 또는 피부 재생 촉진용 약학적 또는 화장료 조성물에 관한 것이다.
피부는 신체를 보호하는 방어막 역할을 수행하고 질환에 대한 신체의 일차 방어선이며, 피부의 가장 외벽에 존재하는 표피(epidermis)가 미생물 침입에 대한 장벽을 제공한다.
피부의 손상은 심각한 정도에 따라 화상, 창상, 찰과상, 궤양의 결과로 발생할 수 있다. 만약 피부 손상이 회복되지 않는다면 피부장벽 기능을 손실하여 미생물감염에 피부조직이 노출되어 피부를 더 심각하게 손상시킬 수 있다. 최근 창상 치유에 관한 연구는 세포생물학적, 분자생물학적 분야로 더욱 세분화되고 있고, 창상 치유 촉진에 관한 임상적 적용 또한 더욱 광범위해지고 있음에도 불구하고, 피부 창상 치유에 대한 세포생물학, 분자생물학적 기전에는 의문점들이 많다. 창상 치유는 손상에 대한 조직의 반응이며 조직 회복의 과정으로 몇몇 세포유형들의 합동으로 이루어지는데 이 중에는 각질세포, 섬유아세포, 내피세포, 대식세포, 혈소판을 포함한다. 이 과정은 세포의 증식률과 이동률, 콜라겐 침적과 리모델링, 창상수축, 혈관형성을 포함한다.
피부상처 치유는 피부 또는 다른 기관 또는 조직이 상처 후 자신을 수복하는 복잡한 공정이다. 정상 피부에서 표피(최외각 층) 및 진피(내부 또는 심부 층)는 외부 환경에 대하여 보호 장벽을 형성한다. 일단 보호 장벽이 깨지면 피부상처 치유의 정상적인 생리적 공정이 즉시 가동된다. 다만, 부상자의 건강, 연령 당뇨와 같은 질환, 이물체 또는 괴사 조직의 존재가 피부상처 치유의 속도에 영향을 미칠 수 있다. 피부상처 치유의 속도가 느릴 경우, 상처 부위를 통해 2차 감염의 위험성이 존재한다. 또한, 일부 상처들에서 상처 소산의 불완전한 조절은 과도한 흉터 생성을 초래하여 기능적 및 미용적으로 열등한 흉터 조직을 남기는 문제점이 있다. 따라서 상처가 발생할 경우, 신속하고 부작용 없이 상처를 치유하는 것이 중요하다.
현재 피부상처 치유를 위해 사용되는 상용화된 제품에는 대표적으로 주식회사 동화약품의 후시딘과 주식회사 동국제약의 마데카솔 등이 있다. 다만 후시딘의 주성분인 푸시딘산(fucidic acid)에 대해 내성을 갖는 황색포도상구균(Staphylococcus aureus)이 늘고 있다는 연구가 보고되고 있다(Arch Dis Child 2004;89:74-44). 또한, 후시딘과 마데카솔의 사용시 알레르기 반응, 발진 등의 부작용이 꾸준히 보고되고 있어 새로운 약학에 대한 연구의 필요성이 대두되고 있다.
상처 치유에 관한 특허문헌으로는 대한민국 등록특허 제10-1899818호는 트라켈로사이드를 유효성분으로 함유하는 상처 치유용 조성물을 개시한 바 있으며, 대한민국 등록특허 제10-1838156호는 둥근잎유홍초 추출물을 유효성분으로 함유하는 상처치유용 조성물을 보고한 바 있다.
한편, 인삼은 아시아에서 잘 알려진 한약재로서 많은 실험적, 임상적 연구를 통해 중추신경계, 내분비계, 면역계, 심혈관계, 그리고 노화 등에 대한 다양한 약리적, 치료적 효과가 보고되었다 (Kitts et al., 2000; Nam, 2002; Liu and Xiao, 1992). 인삼의 주요 유효성분은 진세노사이드(ginsenoside)(G)로 불리어지는 트리테르펜 글리코사이드(triterpene glycoside)이다. 진세노사이드는 항피로 및 항스트레스 효과를 비롯한 면역조절, 항산화, 항염증, 신경세포 보호, 그리고 항종양 효과 등 다양한 효과를 가지고 있는 것으로 보고되었다 (Attele et al., 1999; Park et al., 2003; Shibata, 2001; Leung and Wong, 2010).
특히 진세노사이드 가운데 진세노사이드 Rg3 (G-Rg3)는 G-Rg1과 G-Rb1에 이어 가장 많이 연구된 성분으로서 종양억제(Shinkai et al., 1996), 혈관신생억제 및 항종양전이 (Mochizuki et al., 1995; Liu et al., 2009), 항암 (Yun et al., 2001; Li et al., 2005), 간 보호 (Lee et al., 2005), 신경보호 (Tian et al., 2005), 면역조절 (Wang and Meng, 1999), 혈관이완 (Kim et al., 2003), 항당뇨 및 인슐린 분비 촉진 (Kang et al., 2010; Park et al, 2008), 항산화 활성 (Lee et al., 2008a) 등 다양한 약리효과가 보고되고 있다 (Cheng et al., 2008).
G-Rg3는 C42H72O13의 분자식과 784의 분자량을 가지며, 한 쌍의 입체이성체(stereoisomer)가 존재하는데 비당부의 C-20번 위치에 붙어 있는 수산기의 위치에 따라 하기 화학식 1의 20(R)-Rg3와 화학식 2의 20(S)-Rg3의 에피머 (epimer)로 구분된다 (Shoji, 1990; Lee BH and Nah SY, 2007). 이러한 20(S)/20(R)-Rg3은 C-20에 부착된 당 잔기의 제거 후 수산기의 선택적 공격에 의해 생성된다 (Kang et al., 2006).
Figure PCTKR2020003824-appb-C000001
Figure PCTKR2020003824-appb-C000002
상기 이성체들은 분자량은 같지만 서로 구조적 특성으로 인해 다른 물리적, 생물학적 특성을 나타낸다 (Lee and Nah, 2007; Ni et al., 2005; Bae et al., 2002). 20(S)-Rg3 이성체는 20(R)-Rg3 이성체보다 더욱 수용성이고 생체이용율도 높다(Chang et al., 2009), 또한 녹는점 (melting point)이 20(S)-Rg3는 248-250℃ (dec.)이고, 20(R)-Rg3는 299-302℃ (dec.)로 다르다 (Bae et al., 2002). 이들은 약리활성에 차이가 있어 활용성도 다르며, 일반적으로 보다 수용성인 20(S)-Rg3의 약리활성이 강한 것으로 보고되었다. 20(S)-Rg3가 20(R)-Rg3보다 항산화 활성 (Kang et al., 2007; Lee et al., 2008c)이 강하고, 전위 의존적 Ca2+, K+ or Na+ 통로의 더욱 효율적 조절제로서 작용하였고 (Kang et al., 2005), 보다 강한 세로토닌 제3형 수용체 F(5-HT(3A) receptor)의 길항제로 작용하였다 (Lee et al., 2007). 또한 20(S)-Rg3가 20(R)-Rg3보다 강한 세포독성을 보였으며, 항암 효과를 가지고 있는 것으로 보고되었다(Popovich and Kitts, 2002; Qi et al., 2010b). 면역반응 촉진에 있어 면역 보강 효과는 20(R)-Rg3가 20(S)-Rg3 보다 더욱 강하였다 (Wei et al., 2012).
이러한 연구결과 보고는 C-20의 수산기의 입체 구조가 진세노사이드의 생물학적 및 약리적 효과에 영향을 미친다는 것을 암시한다 (Yue et al., 2006; Qi et al., 2010b).
이에 본 발명자들은 진세노사이드 Rg3의 활성에 대하여 보다 면밀한 연구를 진행하던 중 피부상처 치유 또는 피부재생에 있어서 진세노사이드 Rg3의 S-form은 효과를 나타내지 않는 반면, 진세노사이드 Rg3의 R-form은 효과를 나타낸다는 사실을 발견함으로써 (R)-진세노사이드 Rg3의 피부상처 치유 및 피부재생 촉진이라는 새로운 용도를 밝혀내어 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명에서 해결하고자 하는 기술적 과제는 피부상처 치유 및 피부재생 효과를 가지는 물질 및 상기 물질을 이용하여 피부 상처 치유 및 피부 재생 방법을 제공하기 위한 것이다.
상기한 기술적 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 하기 화학식 1의 (R)-진세노사이드 Rg3 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부상처 치유 또는 피부재생 촉진용 약학적 조성물을 제공한다:
화학식 1
Figure PCTKR2020003824-appb-I000001
또한, 본 발명은 화학식 1의 (R)-진세노사이드 Rg3 또는 이의 화장학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부상처 치유 또는 피부재생 촉진용 화장료 조성물을 제공한다:
상기 (R)-진세노사이드 Rg3 (진세노사이드 Rg3(20R) 또는 20(R)-진세노사이드 Rg3)은 당업계에 공지된 추출 및 분리하는 방법을 사용하여 인삼 또는 홍삼으로부터 추출 및 분리하여 수득하거나 또는 화학적으로 합성하여 사용될 수 있다.
본 발명의 화학식 1로 표시되는 (R)-진세노사이드 Rg3은 약학적/화장학적으로 허용가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적/화장학적으로 허용가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산 또는 아인산과 같은 무기산류와 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류와 같은 무독성 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, 하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트 또는 만델레이트를 포함한다.
본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법, 예를 들면, (R)-진세노사이드 Rg3을 과량의 산 수용액 중에 용해시키고, 이 염을 수혼화성 유기 용매, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조할 수 있다. 또한, 이 혼합물에서 용매나 과량의 산을 증발시켜서 건조하거나 또는 석출된 염을 흡입 여과시켜 제조할 수도 있다.
또한, 염기를 사용하여 약학적/화장학적으로 허용가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은, 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물 염을 여과하고, 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속염으로는 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한, 이에 대응하는 은염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 은염(예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.
본 발명의 하나의 구현예에 따르면, 상기 (R)-진세노사이드 Rg3은 대장암세포주(Caco2) 및 각질형성세포주(HaCaT)의 세포 이동성 및 침윤능을 증가시키고, 세포독성을 나타내지 않으며, 상처 부위에서 신생조직을 형성시키고 반흔을 감소시켜 피부상처 치유 및 피부재생에 매우 효과적이다. 반면, (R)-진세노사이드 Rg3의 이성체인 (S)-진세노사이드 Rg3은 대장암세포주(Caco2) 및 각질형성세포주(HaCaT)의 세포 이동성과 침윤능이 감소하거나 영향이 거의 없는 것을 확인할 수 있다.
본 발명에서 "상처"는 조직이 절단되거나, 찢어지거나, 부서지거나, 타거나, 또는 외상을 입거나, 또는 이러한 손상을 유발하는 장애 또는 질환으로부터 발생된 인간에 대한 손상을 의미한다.
본 발명에서 "치유"는 상처가 발생한 때부터 상처가 봉합될 때 (완전한 상처 수축)까지의 시간의 촉진 또는 가속이다.
본 발명에서 “피부재생”은 손상에 대한 조직의 회복 과정으로, 주화성 (chemotaxis), 세포의 분화 및 복제 (differentiation and replication), 기질 단백질 (matrix protein)의 합성, 혈관의 신생 및 창상의 재구성 등을 포함하는 복잡한 생물학적 과정이다. 피부재생 과정의 초기에 생성되어 이후의 과정을 조절하는 대표적인 물질 중 하나로 성장인자를 들 수 있는데, 이는 피부재생 과정 전반에 걸쳐 강력한 영향을 미치면서도 세포의 성장, 분화 및 대사 등을 조절한다.
상기 “세포 침윤”은 일반적으로 조직내에서 유주하던 세포가 한 부위에 모이는 현상을 의미하는 것으로, 본 발명의 구체적인 실시태양에 따르면, 상처 부위에 (R)-진세노사이드 Rg3를 처리함으로써 세포 침윤이 일어나고 신생혈관 형성과 함께 세포의 증식에 의해 피부 상처가 치유될 수 있다.
본 발명의 피부상처 치유 또는 피부재생용 조성물이 적용될 수 있는 상처의 종류로는, 이에 제한되지는 않으나, 베인 상처 및 열상, 외과적 절개 또는 상처, 천자, 찰과상(graze), 긁힌 상처, 압박 상처, 찰과상(abrasion), 마찰 상처(예: 기저귀 발진, 마찰 수포), 욕창 궤양(예: 욕창 또는 와창), 열 작용에 의한 상처(직접, 또는 전도, 대류 또는 복사선을 통한 냉원 및 열원 및 전기 공급원으로부터의 화상), 화학적 상처(예: 산 또는 알칼리 화상) 또는 개방 또는 무손상 종기, 피부 발진, 흠집 및 여드름을 비롯한 병원성 감염(예: 바이러스, 박테리아 또는 진균 감염), 궤양, 만성적인 상처(당뇨병-관련 상처, 예컨대 하퇴 및 족부 궤양, 정맥성 다리 궤양 및 욕창 포함)를 포함할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 “유효성분”이란 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.
본 발명의 (R)-진세노사이드 Rg3는 치유의 신경성 활성화, 및 세포 성장 및 증식과 관련된 차후 염증성 활성을 자극한다. 따라서, 본 발명의 조성물은 상처 치유, 특히 피부 상처 치유 목적을 위해 상피 세포 증식 및 바닥층 각질세포를 자극하기 위해 사용될 수 있다. 이들 상처는 얕을 수 있거나 깊을 수 있고, 피부의 진피 및 표피의 손상을 포함한다.
본 발명의 (R)-진세노사이드 Rg3은 정상 속도로 상처를 치유하거나 또는 치유 부전 인간에서 외과수술에 의해 유발된 문합성 및 다른 상처의 치유를 촉진한다.
본 발명의 (R)-진세노사이드 Rg3는 정상 개체 및 비정상 상처 치유를 유도하는 상태, 예컨대 요독증, 영양실조, 비타민 결핍증, 비만증, 감염, 면역저해 및 스테로이드를 사용하는 전신 치료, 방사선 요법, 및 항신생물성 약물 및 항대사물질과 관련된 합병증을 앓는 개체에서 외과수술 상처, 절제술 상처, 진피 및 표피의 손상과 관련된 심한 상처, 연조직 손상, 예컨대 근육 파열, 눈 조직 상처, 치아 조직 상처, 구강 상처, 위장관점막의 상처 및 궤양, 당뇨병성 궤양, 피부 궤양, 팔꿈치 궤양, 동맥 궤양, 정맥 울혈 궤양, 및 열 유발 화상, 극고온 또는 극저온에 대한 노출, 또는 화학물에 대한 노출을 비롯한 상처의 상처 치유를 자극하기에 임상적으로 유용하다. 상기 조성물은 또한 정맥 순환계 환류의 손상 및/또는 기능부족에 의해 유발된 허혈 및 허혈성 손상, 예컨대 만성 정맥성 하퇴 궤양과 관련된 상처의 치유의 촉진; 피부 손실에 이은 피부 복구의 촉진; 표피의 장력 및 표피 두께의 증가; 및 상처층에 대한 피부 그라프트의 부착의 증가 및 상처층으로부터 재-상피화의 촉진에 유용하다.
본 발명의 피부상처 치유 또는 피부재생 촉진용 조성물에 포함되는 (R)-진세노사이드 Rg3 또는 이의 약학적/화장학적으로 허용가능한 염은 조성물의 총 중량에 대하여 0.001 내지 10 중량%, 바람직하게는 0.001 내지 5 중량%의 함량으로 포함될 수 있다. 상기 함량인 0.001 중량% 미만인 경우에는 본 발명의 목적효과인 피부상처 치유 및 피부재생 촉진효과를 수득할 수 없으며, 10 중량%를 초과하는 경우에는 함량의 증가에 따른 효과의 증가가 비례적이지 않아 비효율적일 수 있으며 제형상의 안정성이 확보되지 않는 문제점이 있다.
본 발명의 하나의 실시양태에 따르면, 본 발명은 (R)-진세노사이드 Rg3 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 조성물이 약학적 조성물로 사용되는 경우, 유효성분으로서 (R)-진세노사이드 Rg3 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 이외에 약학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물에 포함되는 약학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 탄수화물류 화합물(예: 락토스, 아밀로스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 셀룰로스 등), 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 염 용액, 알코올, 아라비아 고무, 식물성 기름(예: 옥수수 기름, 목화 종자유, 두유, 올리브유, 코코넛유), 폴리에틸렌 글리콜, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시 벤조에이트, 프로필히드록시 벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약학적으로 허용되는 담체 및 제제는 [Remington's Pharmaceutical Sciences (latest edition), Mach Publishing Company, Easton, PA]에 상세히 기재되어 있다.
본 발명의 약학적 조성물의 바람직한 투여량은 성인 기준으로 0.001 내지 100 ㎎/kg 범위 내이다. 또한 외용제인 경우에는 성인 기준으로 1.0 내지 3.0 ml의 양으로 1일 1회 내지 5회 도포하여 1개월 이상 계속하는 것이 좋다. 상기 투여량은 본 발명의 범위를 한정하는 것이 아니다.
본 발명의 약학적 조성물의 제형으로는 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 연고, 크림 등의 외용제 및 멸균 주사용액 등을 비롯하여 약학적 제제에 적합한 어떠한 형태로든 제형화하여 사용할 수 있다.
본 발명의 피부상처 치유 또는 피부재생용 약학적 조성물이 피부 외용제로 제공될 경우, 이에 제한되는 것은 아니나, 연고, 패취, 겔, 크림 또는 분무제 등의 제형일 수 있다.
비경구 투여의 경우에, 한 실시양태로, (R)-진세노사이드 Rg3은 목적하는 정도의 순도에서 단위 투여 주사가능 형태(용액, 현탁액, 또는 에멀젼)으로 제약상 허용되는 담체, 즉 사용되는 투여량 및 농도에서 피투여자에게 비-독성이고, 제제의 다른 성분과 상용가능한 것과 함께 혼합함으로써 일반적으로 제제화된다.
국소적 투여의 경우에, 제제, 예컨대 연고, 크림, 및 겔은 조성물에 대해 상기 기재한 투여량으로 사용될 수 있다. 당업계에 공지된 적합한 제제는 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences (latest edition), Mach Publishing Company, Easton, PA]으로부터 알 수 있다.
연고는 일반적으로 (1) 유질 기재, 즉 고정유 또는 탄화수소로 이루어진 것, 예컨대 백색 바셀린 또는 광유, 또는 (2) 흡수제 기재, 즉 임의의 무수 물질 또는 물을 흡수할 수 있는 물질, 예를 들어 무수 라놀린으로 이루어진 것을 사용하여 제조한다. 통상적으로, 유질 또는 흡수제이든지 간에 기재의 제조 후에, 활성 성분 ((R)-진세노사이드 Rg3)은 목적하는 농도를 제공하는 양으로 첨가된다.
크림은 유/수 에멀젼이다. 이들은 전형적 고정유, 탄화수소 등, 예컨대 왁스, 바셀린, 광유 등을 포함하는 유상(내부 상), 및 물 및 임의의 수용성 물질, 예컨대 추가 염을 포함하는 수상(연속 상)으로 이루어진다. 2상은 에멀젼제, 예를 들어 표면 활성제, 예컨대 소듐 라우릴 술페이트; 친수성 콜로이드, 예컨대 아카시아 콜로이드성 점토, 비검 등의 사용에 의해 안정화된다. 에멀젼의 형성시에, 활성 성분 ((R)-진세노사이드 Rg3)은 목적하는 농도를 달성하는 양으로 통상적으로 첨가된다.
겔은 유질 기재, 물, 또는 에멀젼-현탁액 기재, 예컨대 상술한 것로부터 선택된 기재를 포함한다. 기재에 기재 중에 매트릭스를 형성하며 그의 점도를 증가시키는 겔화제를 첨가한다. 겔화제의 예에는 히드록시프로필 셀룰로스, 아크릴산 중합체 등이 있다. 통상적으로, 활성 성분 ((R)-진세노사이드 Rg3)은 겔화제 첨가 전 시점에 목적하는 농도로 제제에 첨가된다.
본 발명의 조성물은 치료 유효량의 (R)-진세노사이드 Rg3 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함한 상처 관리 드레싱 또는 붕대도 고려한다. 상처 관리용 붕대 또는 드레싱은 외부 직물 지지체, 바람직하게는 엘라스토머성 직물 지지체; 및 내부 패드를 포함하며, 상기 내부 패드는 바람직하게는 필름-형성 물질로부터 제조된 외부 막 표면을 포함하며 치료 유효량의 R)-진세노사이드 Rg3, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 조성물에 대해 상기 기재한 투여량으로 매트릭스에 도입한다. 상기 패드는 외부 직물 지지체와 완전체를 이룰 수 있거나 또는 분리될 수 있다.
본 발명의 하나의 실시양태에 따르면, 본 발명은 (R)-진세노사이드 Rg3 또는 이의 화장학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 하나의 실시양태에 따른 화장료 조성물에는 유효성분으로서의 (R)-진세노사이드 Rg3 또는 이의 화장학적으로 허용가능한 염 이외에 화장품 조성물에 통상적으로 첨가되는 성분, 예컨대 항산화제, 안정화제, 가용화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 및 담체를 추가로 첨가할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 영양 크림, 수렴 화장수, 유연 화장수, 로션, 에센스, 영양젤 또는 마사지 크림의 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트 검, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 가용화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 검등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 (R)-진세노사이드 Rg3 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 약학적 또는 화장료 조성물은 개체의 상처 부위 내 투여, 피하 투여 또는 도포에 의한 국부 투여 등에 의하여 절개 부위에서 신생조직을 형성시키고 반흔을 감소시켜 피부상처 치유 및 피부재생 등의 목적을 달성할 수 있는 이점이 있다.
하나의 구체적 양태로, 본 발명은 (R)-진세노사이드 Rg3 또는 이의 약학적/화장학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 조성물을 개체에 투여하여 개체의 피부상처를 치유하고 피부를 재생시키는 방법 및 그 용도를 제공한다.
본 발명에 있어서, 용어 "개체"는 본 발명의 상기 조성물을 투여하여 증상이 개선될 수 있는 상태 또는 질환을 가진 인간을 포함한 원숭이, 소, 말, 돼지, 양, 개, 고양이, 랫트, 마우스, 침팬지 등의 포유동물을 의미한다.
상기 투여는 경구 또는 비경구 투여이며, 바람직하게는 비경구 투여, 보다 바람직하게는 도포에 의한 국부 투여이며, 이의 투여량 등은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성별, 병적 상태 등의 요인에 따라 당업계의 통상의 지식을 가진 자에 의하여 용이하게 변경하여 사용할 수 있다.
한편, 본 발명의 (R)-진세노사이드 Rg3 또는 이의 약학적/화장학적으로 허용가능한 염은 피부자극 및 세포독성이 없고 인체 안정성이 우수하여 인체에 대한 부작용이 거의 없어 장기간 사용 시에도 안심하고 사용할 수 있으므로, 약품 또는 화장품에 안전하게 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 (R)-진세노사이드 Rg3은 Caco2 세포(Colon Epithelial Colorectal adenocarcin noma cells, 대장선암세포주) 및 HaCaT(Human keratinocyte, 각질형성세포주)의 세포 이동성 및 침윤능을 증가시키고, 세포독성을 나타내지 않으며, 창상 부위에서 신생조직을 형성시키고 반흔을 감소시켜 피부상처 치유 및 피부재생에 매우 효과적이다. 따라서, (R)-진세노사이드 Rg3 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 피부상처 치유 및 피부재생 촉진을 위한 약학적 또는 화장료 조성물로서 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 (R)-진세노사이드 Rg3 및 (S)-진세노사이드 Rg3의 Caco2 세포에 대한 세포 독성을 측정한 결과이다.
도 2는 (R)-진세노사이드 Rg3 및 (S)-진세노사이드 Rg3를 처리한 HaCaT 세포의 이동성을 측정한 결과이다.
도 3은 (R)-진세노사이드 Rg3 및 (S)-진세노사이드 Rg3를 처리한 HaCaT 세포의 침윤을 현미경으로 관찰한 결과 및 이를 정량화한 그래프이다.
도 4는 (R)-진세노사이드 Rg3 및 (S)-진세노사이드 Rg3를 처리한 Caco2 세포의 침윤을 현미경으로 관찰한 결과 및 이를 정량화한 그래프이다.
도 5는 (R)-진세노사이드 Rg3 및 (S)-진세노사이드 Rg3의 동물 실험을 통한 절개 치유 효과로서 절개 면적 감소를 육안으로 관찰한 사진 및 이를 정량화한 그래프이다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
<실시예 1> (R)-진세노사이드 Rg3의 세포독성 확인
(R)-진세노사이드 Rg3 및 (S)-진세노사이드 Rg3의 Caco2 세포(Colon Epithelial Colorectal adenocarcin noma cells, 대장선암세포주) 및 HaCaT 세포에서의 세포독성을 MTT 어세이를 통해 확인하였다.
MTT(3-(4,5-dimetylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)는 담황색의 기질로서 살아있는 세포에서 암청색의 포마잔(formazan)을 생성하고, 죽은 세포에서는 반응이 일어나지 않으므로 포마잔의 생성량은 살아있는 세포수의 측정에 이용된다.
구체적으로, Caco2 세포 및 HaCaT 세포를 37℃, 5% CO2 조건의 10% FBS(fetal bovine serum), 1% 페니실린-스트렙토마이신(penicillin-streptomycin)이 첨가된 DMEM(Dulbecco's Modification of Eagle's Medium) 배지에서 배양하였다.
MTT(3-(4,5-dimetylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 시약은 PBS(phosphate buffered saline, pH 7.4)에 1㎎/㎖ 농도로 녹인 후 0.2㎛ 주사기 필터(syringer filter)로 여과하여 사용하였고, (R)-진세노사이드 Rg3 및 (S)-진세노사이드 Rg3 각각은 PBS로 희석하여 사용하였다. 상기 배양된 세포는 24웰(well)-플레이트에 2×104 cells/well 농도로 분주한 후 5% CO2가 존재하는 37℃ 세포 배양기에서 24시간 동안 배양하고 세포부착을 확인한 후, 각각의 웰에 (R)-진세노사이드 Rg3 및 (S)-진세노사이드 Rg3 각각을 농도별(12.5, 25, 50 및 100μM)로 처리한 후 48시간 동안 다시 배양하였다. (R)-진세노사이드 Rg3 및 (S)-진세노사이드 Rg3 처리를 마친 후에는, 전체 배지 부피의 1/10이 되는 양으로 MTT 용액(1㎎/㎖ in PBS)을 넣어주고, 37℃에서 CO2 배양기에서 3시간 동안 반응시켰다. 이후 배양액을 모두 제거하고 각 웰에 DMSO(dimethyl sulfoxide)를 100㎕씩 넣고 세포 내에 형성된 포마잔을 용해시킨 후, 540nm에서 ELISA 측정기로 흡광도를 측정하였다. 세포의 증식 활성 정도는 순수한 물을 사용한 대조군의 흡광 강도를 기준으로 하기 수학식 1에 따라 계산하여 백분율로 표시하였다. 대조군은 시료 대신에 DMSO를 처리한 세포를 사용하였다. 그에 대한 결과를 하기 표 1 및 도 1에 나타내었다.
Figure PCTKR2020003824-appb-M000001
표 1은 (R)-진세노사이드 Rg3 및 및 (S)-진세노사이드 Rg3의 Caco2 및 HaCaT 세포에 대한 IC50 값을 나타내며, 도 1은 (R)-진세노사이드 Rg3 및 및 (S)-진세노사이드 Rg3의 Caco2 및 HaCaT 세포에 대한 상대적 세포 생존율을 측정한 결과이다. 여기에서 보듯이, (S)-진세노사이드 Rg3는 Caco2 및 HaCaT 세포에 대하여 IC50 값이 각각 59.1uM 및 83.1uM 인데 반하여 (R)-진세노사이드 Rg3는 Caco2 및 HaCaT 세포에 대하여 IC50 값이 각각 262.5 uM 및 172.4 uM로 (R)-진세노사이드 Rg3가 (S)-진세노사이드 Rg3에 비하여 동일 농도에서의 세포 생존율이 더 높고 세포 독성이 없음을 확인하였다.
Compounds IC50 (uM)
Caco2 HaCaT
20(R)-Rg3 262.5 172.4
20(S)-Rg3 59.1 83.1
<실시예 2> (R)-진세노사이드 Rg3 및 (S)-진세노사이드 Rg3의 세포 이동성 측정
(R)-진세노사이드 Rg3 및 (S)-진세노사이드 Rg3에 의한 HaCaT 세포의 세포 이동성을 측정하였다.
구체적으로, 8㎛ 공극크기를 가지는 폴리카보네이트가 있는 트랜스웰 챔버(transwell chamber, Corning Costerm Corning, NY, USA)를 이용하여 세포의 이동 정도를 측정하였다. 먼저, HaCaT 세포를 2.4 × 106 세포/웰이 되도록 챔버의 윗 부분에 각각 분주하였다. 챔버의 하층에는 10% FBS를 포함하는 배양배지를 분주하였다. 그 다음 상기 HaCaT 세포에 각각 (R)-진세노사이드 Rg3 및 (S)-진세노사이드 Rg3을 세포 독성을 나타내지 않는 농도에서 농도별로 처리한 후 24시간 동안 배양하였다. 상기 배양이 끝난 세포는 Diff Quick 키트(sysmex, Kobe, Japan)을 이용하여 고정 및 염색시킨 후 광학현미경을 이용하여 침윤된 세포의 수를 계수하였다. 대조군으로는 DMSO를 처리한 HaCaT를 사용하였다. 상기 실험은 3회 반복 실시하였으며, 그 값은 평균±표준편차로 나타내었다. 또한, 유의성 검증은 일원분산분석(One-way ANOVA, Tukey's HSD)으로 p<0.05 유의수준에서 분석하였고, SPSS 17.0(Chicago, USA) 통계 프로그램을 사용하였다. 그 결과를 도 2에 나타내었다.
도 2는 (R)-진세노사이드 Rg3 및 (S)-진세노사이드 Rg3를 각각 처리한 각질형성세포주(HaCaT)의 세포 이동성을 현미경으로 관찰하고 정량화한 그래프이다. 여기에서 보듯이, (R)-진세노사이드 Rg3 및 (S)-진세노사이드 Rg3을 처리한 HaCaT 세포에서 세포의 이동성이 대조군에 비하여 증가하였으나, (R)-진세노사이드 Rg3만이 농도가 증가함에 따라 세포의 이동성을 증가시켜 (R)-진세노사이드 Rg3는 특이적으로 세포 이동이 증가함을 알 수 있었다.
<실시예 3> (R)-진세노사이드 Rg3 및 (S)-진세노사이드 Rg3의 세포 침윤능 측정
(R)-진세노사이드 Rg3 및 (S)-진세노사이드 Rg3에 의한 Caco2 및 HaCaT의 세포 침윤능을 측정하였다.
구체적으로, 8㎛ 공극크기를 가지는 폴리카보네이트 및 1% 젤라틴이 코팅된 필터가 있는 트랜스웰 챔버(transwell chamber, Corning Costerm Corning, NY, USA)를 이용하여 세포의 침윤 정도를 측정하였다. 먼저, Caco2 및 HaCaT 세포를 2.4 × 106 세포/웰이 되도록 챔버의 윗 부분에 각각 분주하였다. 챔버의 하층에는 Caco2 세포의 경우에는 0.2% BSA와 1 ㎍/mL 피브로넥틴(fibronectin)을 포함하는 배양배지를, 그리고 HaCaT 세포의 경우에는 10% FBS를 포함하는 배양배지를 분주하였다. 그 다음 상기 Caco2 및 HaCaT 세포에 각각 (R)-진세노사이드 Rg3 및 (S)-진세노사이드 Rg3을 세포 독성을 나타내지 않는 농도에서 농도별로 처리한 후 24시간 동안 배양하였다. 상기 배양이 끝난 세포는 Diff Quick 키트(sysmex, Kobe, Japan)을 이용하여 고정 및 염색시킨 후 광학현미경을 이용하여 침윤된 세포의 수를 계수하였다. 대조군으로는 DMSO를 처리한 Caco2 및 HaCaT를 사용하였다. 상기 실험은 3회 반복 실시하였으며, 그 값은 평균±표준편차로 나타내었다. 또한, 유의성 검증은 일원분산분석(One-way ANOVA, Tukey's HSD)으로 p<0.05 유의수준에서 분석하였고, SPSS 17.0(Chicago, USA) 통계 프로그램을 사용하였다. 그 결과를 도 3 및 4에 나타내었다.
도 3 및 도 4는 (R)-진세노사이드 Rg3 및 (S)-진세노사이드 Rg3 각각을 농도별로 처리한 대장선암세포주 (Caco2) 및 각질형성세포주(HaCaT)의 침윤을 현미경으로 관찰하고 정량화한 그래프이다. 여기에서 보듯이, (R)-진세노사이드 Rg3를 처리한 Caco2 및 HaCaT 세포에서 침윤된 세포의 수는 대조군에 비하여 증가하였으며, 특히 (R)-진세노사이드 Rg3는 농도가 증가함에 따라 침윤된 세포 수가 비례적으로 증가되는 것을 확인할 수 있었다. 한편, (S)-진세노사이드 Rg3을 처리한 Caco2 세포에서는 침윤된 세포의 수가 대조군에 비하여 감소하여 (S)-진세노사이드 Rg3는 세포의 침윤에 영향을 미치지 않거나 다소 감소하는 경향임을 확인할 수 있었다.
<실시예 4> (R)-진세노사이드 Rg3 및 (S)-진세노사이드 Rg3의 창상 유도 동물모델에서 육안으로 피부상처 치유효과 관찰
(R)-진세노사이드 Rg3 및 (S)-진세노사이드 Rg3의 피부 상처치유능을 하기와 같은 방법으로 측정하였다.
6주령 Balb/C 마우스를 마취시킨 후 털을 제거하고 5 mm punch를 이용해 피부에 네 군데의 창상을 만들었다. (R)-진세노사이드 Rg3 및 (S)-진세노사이드 Rg3를 처리군으로, DMSO를 대조군으로 하여 마리 당 각각 두 개의 창상을 무작위로 배정하였다.
100% glycerol과 PBS 용액을 1:1로 배합하여 만든 점성을 가진 glycerol/PBS 용액에 10 mM의 (R)-진세노사이드 Rg3 및 (S)-진세노사이드 Rg3 각각을 1/100로 희석하여 최종 농도를 0.1 mM이 되도록 제조하였다. 이를 글처리군 동물의 절개 부위에 생쥐 총 중량 당 약 0.02 mg/kg의 양으로 15일 동안 매일 1회 도포하였다. 대조군에는 DMSO만을 처리하였다.
생쥐의 절개치유 진행과정을 관찰하기 위해 절개유발 후 매일 디지털 카메라를 이용하여 각 군별로 일정한 거리에서 절개 부위를 촬영하여 상처의 변화를 육안으로 관찰하였다.
도 5는 (R)-진세노사이드 Rg3 및 (S)-진세노사이드 Rg3의 동물 실험을 통한 절개 치유 효과로서 절개 면적 감소를 육안으로 관찰한 사진 및 피부 상처 부위의 감소 정도를 정량화한 그래프이다. 여기에서 보듯이, (R)-진세노사이드 Rg3 처리군의 상처의 면적은 (S)-진세노사이드 Rg3 처리군에 비하여 치료 기간 동안 현저히 감소되는 경향을 나타내었다. 구체적으로, 상처 1일째부터 대조군 및 (S)-진세노사이드 Rg3에 비하여 상처 크기가 감소하기 시작하여 7일째는 대조군 및 (S)-진세노사이드 Rg3에 비하여 상처 크기가 현저하게 작아져 더 빨리 아물고 있는 것을 확인할 수 있었다.

Claims (4)

  1. 하기 화학식 1의 (R)-진세노사이드 Rg3 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부상처 치유 또는 피부재생 촉진용 약학적 조성물.
    화학식 1
    Figure PCTKR2020003824-appb-I000002
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 조성물이 연고, 패취, 겔, 크림 또는 분무제인 것을 특징으로 하는 피부상처 치유 또는 피부재생 촉진용 약학적 조성물.
  3. 하기 화학식 1의 (R)-진세노사이드 Rg3 또는 이의 화장학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부상처 치유 또는 피부재생 촉진용 화장료 조성물.
    화학식 1
    Figure PCTKR2020003824-appb-I000003
  4. 하기 화학식 1의 (R)-진세노사이드 Rg3 또는 이의 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 개체의 피부상처를 치유하고 피부재생을 촉진하는 방법.
    화학식 1
    Figure PCTKR2020003824-appb-I000004
PCT/KR2020/003824 2019-03-20 2020-03-20 (r)-진세노사이드 rg3를 유효성분으로 포함하는 피부상처 치유 또는 피부재생 촉진용 조성물 WO2020190072A1 (ko)

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CN113197705A (zh) * 2021-04-02 2021-08-03 苏州大学 一种倒刺蚕丝缝合线及其制备方法

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