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WO2018186480A1 - 線維性疾患の治療薬 - Google Patents

線維性疾患の治療薬 Download PDF

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WO2018186480A1
WO2018186480A1 PCT/JP2018/014662 JP2018014662W WO2018186480A1 WO 2018186480 A1 WO2018186480 A1 WO 2018186480A1 JP 2018014662 W JP2018014662 W JP 2018014662W WO 2018186480 A1 WO2018186480 A1 WO 2018186480A1
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WO
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fibrosis
amino acid
acid sequence
peptide
seq
Prior art date
Application number
PCT/JP2018/014662
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English (en)
French (fr)
Inventor
克人 玉井
隆博 青戸
翔 山崎
尊彦 山崎
Original Assignee
株式会社ステムリム
国立大学法人大阪大学
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Publication date
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Priority to RU2019134382A priority patent/RU2019134382A/ru
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Priority to KR1020197032759A priority patent/KR20190135519A/ko
Priority to US16/499,604 priority patent/US20200038486A1/en
Priority to BR112019020294-3A priority patent/BR112019020294A2/pt
Priority to JP2019511313A priority patent/JPWO2018186480A1/ja
Priority to EP18781748.1A priority patent/EP3607963A4/en
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Priority to CN201880023662.7A priority patent/CN110621331A/zh
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Definitions

  • the present application relates to a pharmaceutical composition for treating a fibrotic disease comprising a fragment peptide of HMGB1 (High mobility group group 1 box) 1 protein.
  • Fibrotic diseases typified by fibrosis of various organs / tissues cause excessive production and deposition of extracellular matrix proteins in various organs, organs, tissues, etc. such as lungs and liver, resulting in tissue hardening and dysfunction. It is a disease that occurs.
  • the progression of tissue fibrosis in fibrotic disease is often irreversible, and it is currently effective despite the fact that fibrotic disease is a serious disease that leads to death if progressed like pulmonary fibrosis or cirrhosis There is no cure.
  • the adhesion function between the epidermis and dermis breaks down due to a genetic abnormality of the adhesion structure control protein in the skin basement membrane region, and the epidermis peels off at the basement membrane level with a slight external force in daily life. It is a hereditary blistering skin disease that forms blisters and ulcers.
  • the deletion or mutation of type VII collagen ⁇ 1 (COL7A1) gene disrupts the adhesion function between the basement membrane and the dermis, resulting in repeated epidermal detachment and blister formation and healing. Fibrosis increases in the dermis and scars are formed.
  • there is no definitive treatment for hereditary diseases such as epidermolysis bullosa, since a safe and reliable methodology for normalizing genetic abnormalities has not been established.
  • the present application aims to provide a novel pharmaceutical effective for treating fibrotic diseases including fibrosis of various organs.
  • an HMGB1 fragment peptide having a specific amino acid sequence is a dystrophic epidermolysis bullosa model
  • the present inventors have found that mouse adhesion and gastrointestinal scarring are suppressed and survival is prolonged in mice.
  • the present inventors have also succeeded in administration of the specific HMGB1 fragment peptide in a skin ulcer model in which a physical skin defect is created in a mouse not having a genetic abnormality, but not a hereditary disease such as epidermolysis bullosa. They found that skin fibrosis was suppressed during the healing process of ulcers.
  • the present application provides a pharmaceutical composition for the treatment of fibrotic diseases containing the specific HMGB1 fragment peptide.
  • a pharmaceutical composition for treating a fibrotic disease comprising the substance according to any one of the following (a) to (c) (hereinafter referred to as substance A): (A) an HMGB1 fragment peptide comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 1; (B) a peptide comprising an amino acid sequence in which one or a plurality of amino acids are substituted, deleted, inserted or added in the amino acid sequence described in SEQ ID NO: 1; and (c) the amino acid sequence described in SEQ ID NO: 1.
  • Fibrous diseases are systemic scleroderma, localized scleroderma, keloid, hypertrophic scar, scar after skin wound or skin ulcer, dermal fibrosis, myocardial fibrosis, liver fibrosis, cirrhosis, renal fibrosis Pancreatic fibrosis, pulmonary fibrosis, myelofibrosis, retroperitoneal fibrosis, mesenteric fibrosis, mammary fibrosis, cystic fibrosis, gastrointestinal fibrosis, adipose tissue fibrosis, glaucoma, age-related macular degeneration, Selected from the group consisting of dry eye, chronic GVHD, gastrointestinal scars, adipose tissue scars, scarring in dystrophic epidermolysis bullosa or kindler syndrome, and postoperative scars of skin, gastrointestinal tract, peritoneum, muscle, tendon or joint
  • a pharmaceutical composition for suppressing tissue fibrosis comprising substance A.
  • a method for treating a fibrotic disease comprising administering an effective amount of substance A to a subject.
  • Fibrous diseases are systemic scleroderma, localized scleroderma, keloid, hypertrophic scar, scar after skin wound or skin ulcer, dermal fibrosis, myocardial fibrosis, liver fibrosis, cirrhosis, renal fibrosis Pancreatic fibrosis, pulmonary fibrosis, myelofibrosis, retroperitoneal fibrosis, mesenteric fibrosis, mammary fibrosis, cystic fibrosis, gastrointestinal fibrosis, adipose tissue fibrosis, glaucoma, age-related macular degeneration, Selected from the group consisting of dry eye, chronic GVHD, gastrointestinal scars, adipose tissue scars, scarring in dystrophic epidermolysis bullosa or kindler syndrome, and postoperative scars of skin, gastrointestinal tract, peritoneum, muscle, tendon or joint
  • [A3] A method for suppressing tissue fibrosis, comprising a step of administering an effective amount of substance A to a subject.
  • Fibrous diseases are systemic scleroderma, localized scleroderma, keloid, hypertrophic scar, scar after skin wound or skin ulcer, dermal fibrosis, myocardial fibrosis, liver fibrosis, cirrhosis, renal fibrosis Pancreatic fibrosis, pulmonary fibrosis, myelofibrosis, retroperitoneal fibrosis, mesenteric fibrosis, mammary fibrosis, cystic fibrosis, gastrointestinal fibrosis, adipose tissue fibrosis, glaucoma, age-related macular degeneration, Selected from the group consisting of dry eye, chronic GVHD, gastrointestinal scars, adipose tissue scars, scarring in dystrophic
  • Fibrous diseases are systemic scleroderma, localized scleroderma, keloid, hypertrophic scar, scar after skin wound or skin ulcer, dermal fibrosis, myocardial fibrosis, liver fibrosis, cirrhosis, renal fibrosis Pancreatic fibrosis, pulmonary fibrosis, myelofibrosis, retroperitoneal fibrosis, mesenteric fibrosis, mammary fibrosis, cystic fibrosis, gastrointestinal fibrosis, adipose tissue fibrosis, glaucoma, age-related macular degeneration, Selected from the group consisting of dry eye, chronic GVHD, gastrointestinal scars, adipose tissue scars, scarring in dystrophic epidermolysis bullosa or
  • Log-rank test shows significant difference between groups (p ⁇ 0.001). It is an image which shows the typical example of the Masson trichrome dyeing
  • the blue-stained area is collagen fibers, and the red-stained area is mainly blood cells, epithelial tissues, and subcutaneous fascia.
  • the ulcer site (regenerated / healed) is the area within the dotted line.
  • Center region ulcer area in section.
  • Margin region non-ulcer area of ulcer margin (used as a reference for quantitative analysis). It is a graph which shows the analysis result of the collagen positive area area rate in the mouse
  • mouth skin of the 28th day after skin ulcer creation. Data are shown as mean ⁇ standard error (N 9) (* p ⁇ 0.05, Mann Whitney ’s test).
  • the present application provides a pharmaceutical composition for treating a fibrotic disease, comprising an HMGB1 fragment peptide comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 1.
  • fibrotic disease means a disease in which excessive production or deposition of extracellular matrix protein occurs in organs, organs, tissues, etc., resulting in tissue sclerosis or dysfunction.
  • Extracellular matrix proteins associated with fibrosis include collagen (eg, type I, type III, type IV, type V, and type VI collagen).
  • Fibrous disease in the present application includes systemic scleroderma, localized scleroderma, keloid, myocardial fibrosis, liver fibrosis, cirrhosis, renal fibrosis, pancreatic fibrosis, pulmonary fibrosis, myelofibrosis, Retroperitoneal fibrosis, mesenteric fibrosis, mammary fibrosis, cystic fibrosis (eg, pancreatic cystic fibrosis), gastrointestinal scar, adipose tissue scar, scar in dystrophic epidermolysis bullosa, and skin , Post-operative scars of the digestive tract, peritoneum, muscles, tendons or joints, but are not limited to these. Further, the “fibrotic disease” in the present application includes idiopathic and secondary diseases.
  • Lung fibrosis is a disease in which collagen fibers are mainly deposited in the interstitium of the lung, the entire lung is cured, and the gas exchange function is impaired.
  • Pulmonary fibrosis includes idiopathic pulmonary fibrosis and secondary pulmonary fibrosis.
  • Renal fibrosis is a disease in which collagen fibers are mainly deposited in the interstitium of the kidney, resulting in impaired renal function.
  • Liver fibrosis is a disease in which collagen fibers are mainly deposited in the liver, the liver is cured, and the liver function is impaired. Liver fibrosis further causes collagen deposition and liver sclerosis, resulting in destruction of liver lobule structure and formation of regenerative nodules.
  • fibrosis refers to deposition of extracellular matrix protein (mainly collagen) in a living tissue.
  • fibrosis refers to a state in which fibrosis in a living tissue reaches a level that causes hardening or dysfunction of the tissue.
  • scar formation also referred to as scar formation
  • scarring means that a damaged site of a living tissue is replaced by an extracellular matrix (mainly collagen fibers).
  • scar refers to a state in which a damaged site of a living tissue is replaced by an extracellular matrix (mainly collagen fibers) or a site in damaged tissue that is replaced by an extracellular matrix (mainly collagen fibers).
  • pharmaceutical composition is used interchangeably with “medicine”, “drug” or “pharmaceutical composition”.
  • the fibrotic disease that can be treated using the pharmaceutical composition of the present application is: i) systemic scleroderma, localized scleroderma, keloid, hypertrophic scar, scar after skin wound or skin ulcer, dermal fibrosis, liver fibrosis, cirrhosis, renal fibrosis, pancreatic fibrosis, lung fiber Disease, myelofibrosis, retroperitoneal fibrosis, mesenteric fibrosis, mammary fibrosis, cystic fibrosis, gastrointestinal fibrosis, adipose tissue fibrosis, glaucoma, age-related macular degeneration, dry eye, chronic GVHD, digestion A disease selected from the group consisting of ductal scars, adipose tissue scars, scars in dystrophic epidermolysis bullosa or kinder syndrome, and postoperative scars of the skin, gastrointestinal tract, peritoneum, muscle, tendon or joint; ii)
  • the present application also provides a pharmaceutical composition for inhibiting tissue fibrosis, comprising an HMGB1 fragment peptide comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 1.
  • tissue fibrosis inhibitor comprising an HMGB1 fragment peptide comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 1.
  • tissue fibrosis inhibitor can be used as a reagent in, for example, basic research and clinical research for developing therapeutic agents for fibrotic diseases.
  • the tissue fibrosis inhibitor of the present application can be used as a control substance.
  • the tissue fibrosis inhibitor used for non-pharmaceutical applications is also expressed as a “reagent composition” or “reagent” for inhibiting tissue fibrosis.
  • tissue fibrosis in this application refers to fibers of all tissues such as skin, heart muscle, skeletal muscle, tendon, liver, kidney, pancreas, lung, digestive tract, bladder, bone marrow, peritoneum, mesentery, mammary gland, adipose tissue, etc. Means fibrosis (fibrosis).
  • the tissue that can suppress fibrosis by the pharmaceutical composition of the present application or the tissue fibrosis inhibitor i) Tissue selected from the group consisting of skin, skeletal muscle, tendon, liver, kidney, pancreas, lung, gastrointestinal tract, bladder, bone marrow, peritoneum, mesentery, mammary gland and adipose tissue; ii) tissue selected from the group consisting of skin, heart muscle, skeletal muscle, tendon, kidney, pancreas, lung, gastrointestinal tract, bladder, bone marrow, peritoneum, mesentery, mammary gland and adipose tissue; iii) tissue selected from the group consisting of skin, skeletal muscle, tendon, kidney, pancreas, lung, gastrointestinal tract, bladder, bone marrow, peritoneum, mesentery, mammary gland and adipose tissue; or iv) Skin or digestive tract.
  • the present application also provides a pharmaceutical composition for treating dystrophic epidermolysis bullosa, comprising an HMGB1 fragment peptide comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 1.
  • the present application also provides a pharmaceutical composition containing the HMGB1 fragment peptide for prolonging the survival period of a dystrophic epidermolysis bullosa patient.
  • “nutrition-type epidermolysis bullosa” means that the type VII collagen fiber linking the basement membrane and the dermis is defective or functions normally due to deletion or mutation of the type VII collagen ⁇ 1 (COL7A1) gene.
  • the adhesive function between the basement membrane and the dermis is broken, causing blisters and intractable skin ulcers.
  • dystrophic epidermolysis bullosa epidermal exfoliation and blister formation and healing are repeated, and fibrosis in the dermis is increased to form scarring, resulting in adhesion of the fingers as well as in the gastrointestinal tract.
  • digestion of the gastrointestinal tract is narrowed due to repeated peeling of the gastrointestinal tract, resulting in difficulty in food intake.
  • the HMGB1 fragment peptide containing the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1 means a peptide comprising a part of the HMGB1 protein and containing the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1.
  • Such a peptide can be obtained as a recombinant by incorporating DNA encoding the peptide into an appropriate expression system, or can be artificially synthesized.
  • examples of the HMGB1 protein include, but are not limited to, a protein containing the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2 and a protein encoded by DNA containing the base sequence shown in SEQ ID NO: 3. It is not a thing.
  • one or more amino acid sequences described in SEQ ID NO: 1 may be used instead of or together with the HMGB1 fragment peptide containing the amino acid sequence described in SEQ ID NO: 1.
  • a peptide comprising an amino acid sequence in which the amino acid residues of the amino acid sequence are modified (substitution, deletion, insertion or addition), and a peptide functionally equivalent to the HMGB1 fragment peptide comprising the amino acid sequence described in SEQ ID NO: 1 is used You can also Examples of such peptides include the peptides described as i) to iv) below and the peptides described as i) to iv) below and having an action of suppressing tissue fibrosis.
  • Exemplify but are not limited to: i) One or more (for example, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8, 1 to 7, 1 to 6, 1 in the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1 A peptide comprising an amino acid sequence in which 5 to 1, 1 to 4, 1 to 3, or 1 or 2 amino acids are substituted, deleted, inserted or added; ii) One or more (for example, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8, 1 to 7, 1 to 6, or 1 in the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1.
  • a peptide or the like An effective amount of the peptide of the present application and a pharmaceutical composition containing the peptide (hereinafter referred to as a peptide or the like) is administered to a subject for the treatment or prevention of the diseases and symptoms described herein.
  • an effective amount refers to an amount sufficient for the treatment of the diseases and symptoms described herein.
  • Treatment in the present application includes, but is not limited to, reduction, delay, prevention, improvement, remission, cure, complete cure and the like.
  • the target in the present application is not particularly limited, and examples include mammals, birds and fish.
  • mammals include humans or non-human animals, and examples include, but are not limited to, humans, mice, rats, monkeys, pigs, dogs, rabbits, hamsters, guinea pigs, horses, sheep, and whales. is not.
  • the term “subject” is used interchangeably with “patient”, “individual” and “animal”.
  • the administration site of the peptide or the like of the present application for example, a site where the production and / or deposition of more collagen fibers is observed than in a normal site, or a site different therefrom (for example, from a normal site)
  • a site that is separated from a site that is far from a site where more collagen fibers are produced and / or deposited, or that is different from a tissue that has more collagen fibers produced and / or deposited than normal sites And the like, the peptide of the present application can exert a fibrosis-inhibiting action.
  • Examples of the administration method of the peptide of the present application include oral administration and parenteral administration.
  • Examples of the parenteral administration method include intravascular administration (intraarterial administration, intravenous administration, etc.), intramuscular administration, subcutaneous administration, and intradermal administration. Administration, intraperitoneal administration, nasal administration, pulmonary administration, transdermal administration, and the like, but are not limited thereto.
  • the peptide of the present application can be administered systemically or locally (for example, subcutaneously, intradermally, skin surface, eyeball or eyelid conjunctiva, nasal cavity) by injection administration such as intravenous injection, intramuscular injection, intraperitoneal injection, subcutaneous injection, etc. Mucosa, oral cavity and gastrointestinal mucosa, vaginal / intrauterine mucosa, or damaged site).
  • the administration method can be appropriately selected depending on the age and symptoms of the patient.
  • the dose can be selected in the range of 0.0000001 mg to 1000 mg per kg of body weight per administration.
  • the dose can be selected within the range of 0.00001 to 100,000 mg / body per patient.
  • the peptide can be administered so that the amount falls within the above range.
  • the pharmaceutical composition in the present application is not limited to these doses.
  • the pharmaceutical composition of the present application can be formulated according to a conventional method (for example, Remington's Pharmaceutical, Science, Latest Edition, Mark, Publishing Company, Easton, USA) and includes a pharmaceutically acceptable carrier or additive.
  • a pharmaceutically acceptable carrier or additive There may be.
  • surfactants, excipients, coloring agents, flavoring agents, preservatives, stabilizers, buffering agents, suspending agents, tonicity agents, binders, disintegrating agents, lubricants, fluidity promoters, flavoring agents can be used as appropriate.
  • Example 1 Inhibitory action of HMGB1 peptide (1-44) on adhesion of forelimb of epidermolysis bullosa model mouse
  • Material and method i) Animal epidermolysis bullosa model mouse having homozygous allele of type VII collagen ⁇ 1 (Col7a1) gene (Fritsch, et al., J Clin Invest. 2008 May; 118 (5): 1669-79 described in Col7a1 flNeo / flNeo mouse (hereinafter referred to as “129SV / colVII homo mouse”) was obtained from Professor Leena Bruckner-Tuderman of the University of Freiburg (Germany).
  • mice Male were acclimated in the breeding room for 2 weeks, divided into 2 groups so that the adhesion score described below would be comparable, and administration of the test substance was started from the next day (week of administration start week) Age: 5-6 weeks old).
  • One week in the HMGB1 peptide (1-44) administration group died due to a mistake in anesthesia operation when evaluating the adhesion score one week after the start of test substance administration, and was excluded from the study. Therefore, the group structure is as follows.
  • HMGB1 peptide (1-44).
  • test substance Approximately 50 ⁇ L of the solvent (physiological saline, “Otsuka raw food injection” manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) or HMGB1 peptide (1-44) (concentration 0.2 mg / mL) from the tail vein It was administered intravenously using a Myjector (Terumo) over 2 to 3 seconds. The test substance was administered twice a week from the day after grouping, a total of 8 times over a period of 4 weeks with a dosing interval of at least one day.
  • solvent physiological saline, “Otsuka raw food injection” manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.
  • HMGB1 peptide 1-44
  • the degree of increase in the adhesion score was suppressed compared to the solvent group, and the adhesion score at 4 to 8 weeks (10 to 14 weeks of age) after the start of administration was half that of the solvent group.
  • the level was statistically significantly lower (FIG. 1).
  • the body weight of the mice similarly changed from the start of administration to 8 weeks after administration in both the solvent group and the HMGB1 peptide (1-44) group, and no significant difference was observed between the groups.
  • 129SV / colVII homo mice adhesion between fingers is observed with age as in patients with epidermolysis bullosa.
  • Epidermolysis bullosa in 129SV / colVII homo mice is classified as a malnutrition type that develops due to a mutation in the Col7a1 gene.
  • type VII collagen is not normally produced and is due to a malfunction in the adhesion between the basement membrane and the dermis. It is thought that blistering occurs and the adhesion between fingers progresses due to repeated scarring of blisters formed on the limbs (Fritsch, et al., Supra).
  • intravenous administration of HMGB1 peptide (1-44) suppresses adhesion between forelimb fingers of 129SV / colVII homo mice. This result indicates that the HMGB1 peptide has an action of suppressing fibrosis of the skin tissue.
  • Example 2 HMGB1 peptide (1-44) inhibits fibrosis and scarring of the intestine of epidermolysis bullosa model mice
  • Materials and methods i) Animals The 129SV / colVII homo mice described in Example 1 (6 males) were acclimated for 2 weeks in the breeding room, and the solvent group (3 animals) and the HMGB1 peptide (1-44) administration group (3 animals) were used. Administration of the test substance was started separately (week of administration: 5-6 weeks of age).
  • test substance A volume of 50 ⁇ L of the vehicle (saline solution, “Otsuka raw food injection” manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) or HMGB1 peptide (1-44) (concentration 0.2 mg / mL) is administered from the tail vein. did.
  • the test substance was administered twice a week from the day after grouping, a total of 8 times over a period of 4 weeks with a dosing interval of at least one day.
  • mice continue to be bred, the small intestine is sampled when the abdominal swelling is observed in mice in the solvent group, and the HMGB1 peptide is collected at the same timing. (1-44) The small intestine was also collected from the mice in the administration group. Thereafter, tissue sections were prepared from the collected small intestine samples and stained with hematoxylin and eosin (HE) and Masson trichrome (MT).
  • HE hematoxylin and eosin
  • MT Masson trichrome
  • mice in the solvent group 3 individuals
  • the abdominal swelling was observed at the 7th week (13 weeks old), 10th week (16 weeks old) and 11th week (17 weeks old) after the start of administration for each individual. Therefore, at that time, the small intestine was sampled and subjected to HE staining and MT staining.
  • Mice in the HMGB1 peptide (1-44) administration group were also in line with this, starting at 1 week each at 7 weeks (13 weeks old), 10 weeks (16 weeks old), and 11 weeks (17 weeks old). The small intestine was sampled and subjected to HE staining and MT staining.
  • FIG. 1 A representative image of HE staining results of the small intestine of the solvent group and the HMGB1 peptide (1-44) group is shown in FIG.
  • the solvent group intestinal stenosis, gas filling and villous shedding were observed in all three individuals, but none of these symptoms were observed in any of the HMGB1 peptide (1-44) administration groups.
  • the small intestine of the solvent group thickening of the intestinal tract due to scarring was observed in the vicinity of the site where stenosis and swelling occurred, but in the HMGB1 peptide (1-44) administration group, thickening of the intestinal tract was not observed. .
  • Example 3 Prolonging the survival period of epidermolysis bullosa model mice with HMGB1 peptide (1-44)
  • Materials and methods i) Animal The 129SV / colVII homo mouse (male) described in Example 1 was acclimated for 2 weeks in the breeding room, and administration of the test substance was started by dividing into the solvent group and the HMGB1 peptide (1-44) administration group ( Age at start of administration: 5 to 6 weeks of age (body weight 5 to 8 g).
  • test substance 50 ⁇ L each of the solvent (saline solution, “Otsuka raw food injection” manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) or HMGB1 peptide (1-44) (concentration 0.2 mg / mL) from the tail vein was administered.
  • the test substance was administered twice a week from the day after grouping, a total of 8 times over a period of 4 weeks with a dosing interval of at least one day.
  • the survival time of each individual in the solvent group (10 animals) and the HMGB1 peptide (1-44) administration group (10 animals) is determined. Recorded. In both groups, some individuals who had difficulty in continuing stable breeding and feeding due to long-term closure of the animal breeding facility were censored during survival. Specifically, in the solvent group, 1 individual was censored at 13.14 weeks, in the HMGB1 peptide (1-44) administration group 1 individual at 13.14 weeks, 1 individual at 18.57 weeks, 2 individuals at 21.57 weeks, One individual was censored at 36.57 weeks.
  • FIG. 5 shows a survival curve drawn based on the survival period of each individual in the solvent group and the HMGB1 peptide (1-44) administration group (the start of test substance administration was defined as 0 week). It was shown that administration of HMGB1 peptide (1-44) markedly prolongs the survival time of epidermolysis bullosa model mice.
  • Example 4 Effect of HMGB1 peptide (1-44) administration on mouse full-thickness skin ulcer model
  • Materials and methods i) Animals C57BL / 6 male mice (C57BL / 6JJcl; microbial grade SPF) were purchased from CLEA Japan at 7-8 weeks of age and used after acclimatization in the animal breeding room for 5 days or more.
  • the ulcer part is wrapped around the covering material, and for hygiene management and confirmation of the post-operative state, the sheet, covering material, every 72-96 hours until about 2 weeks after the wound is naturally closed, The bandage was changed. In addition, the risk of infection was minimized by maintaining the sterilized state of the damaged part during the experiment.
  • mice with the following skin ulcer evaluation criteria of 2 points or more were employed as a microenvironment in which the shrinkage of the epithelial sheet from the surrounding area and granulation were uniformly formed.
  • the adopted mice were divided into a solvent (saline) administration group and an HMGB1 peptide (1-44) administration group, and each group had 9 mice.
  • Test substance administration started 3 hours after the creation of the ulcer and then repeated on days 4, 8, 11, 15, 18, 22, and 25 for a total of 8 times.
  • the dose of HMGB1 peptide (1-44) was 1.5 mg / kg / day, and a solution containing a diluted solvent was filled in a 1 mL syringe and administered from the tail vein using a 30G injection needle.
  • the skin was thoroughly washed with PBS, and the specimen was trimmed and then paraffin-blocked by an automatic embedding device (Thermo Scientific) while paying attention to the polarity of the tissue on the cranio-caudal / lateral axis. Thereafter, the slice was sliced (5 ⁇ m) with a rotary microtome (Thermo Sceintific), fixed on a slide glass (Matsunami glass), and subjected to Masson trichrome (MT) staining.
  • a rotary microtome Thermo Sceintific
  • the collagen fibers are irregularly oriented and have abundant collagen fiber components, so a strong wavy signal is detected, whereas in the Center region, which is the center of the ulcer, muscles Because it is newly synthesized by a cell population with high ability to synthesize collagen fibers, represented by the fibroblast population, the directionality of the fibers is detected as a linear and weak signal rather than regularly and quantitatively.
  • FIG. 6 When compared with the solvent-administered group, the signal in the center region of collagen fibers tended to be weaker in the HMGB1 peptide (1-44) -administered group (Fig. 6), which is a quantitative signal intensity calculation and area ratio. When calculated, significant inhibition was observed (* p ⁇ 0.05, Mann Whitney's test) (FIG. 7). This result indicates that the HMGB1 peptide has an action of suppressing fibrosis of the skin tissue.
  • dystrophic epidermolysis bullosa is a disease caused by a genetic abnormality
  • treatment methods include transplanting normal pluripotent stem cells to another family, or creating iPS cells derived from the patient, and COL7A1
  • a method of transplanting to a patient after repairing the gene mutation by genome editing or the like is conceivable.
  • the former has a problem of rejection
  • the latter has a problem that the risk of canceration due to off-target action of genome editing cannot be excluded.
  • the present inventors have surprisingly found for the first time that administration of HMGB1 fragment peptide improves the symptoms of dystrophic epidermolysis bullosa, not by cell transplantation or gene therapy.
  • the HMGB1 fragment peptide suppresses tissue fibrosis.
  • the HMGB1 fragment peptide suppressed the deposition of collagen in the intestinal tract tissue in a model mouse with a hereditary disorder, dystrophic epidermolysis bullosa.
  • the HMGB1 fragment peptide suppressed the deposition of collagen in the skin tissue.
  • the HMGB1 fragment peptide was found to suppress the deposition of collagen, which is an extracellular matrix protein, and suppress tissue fibrosis in different models and different tissues. Therefore, the pharmaceutical composition containing the HMGB1 fragment peptide of the present application is considered to be effective for the treatment of fibrosis and scars in all organs and tissues in which collagen deposition is observed.

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Abstract

本発明者らは、特定のアミノ酸配列を有するHMGB1断片ペプチドが栄養障害型表皮水疱症モデルマウスにおいて手指の癒着と消化管の瘢痕化を抑制する効果および生存期間を延長する効果を示すことを見出した。また、皮膚潰瘍モデルにおいても、当該特定のHMGB1断片ペプチドの投与により、潰瘍の治癒過程における皮膚の線維化が抑制されることを見出した。これら知見に基づき、本願は、当該特定のHMGB1断片ペプチドを含有する、線維性疾患の治療のための医薬組成物を提供する。

Description

線維性疾患の治療薬
　本願は、HMGB1（High mobility group box 1）タンパク質の断片ペプチドを含む、線維性疾患の治療のための医薬組成物に関する。
　種々の臓器・組織の線維症に代表される線維性疾患は、肺や肝臓等、各種の臓器、器官、組織等において細胞外マトリックスタンパク質の過剰産生や沈着が起こり、組織の硬化や機能障害を生じる疾患である。線維性疾患における組織線維化の進行は多くの場合非可逆的であり、線維性疾患は肺線維症や肝硬変等のように進行すると死につながる重大な疾患であるにもかかわらず、現在のところ有効な治療法は無い。
　表皮水疱症は、皮膚基底膜領域における接着構造制御タンパク質の遺伝子異常により表皮と真皮の間の接着機能が破綻し、日常生活の軽微な外力で表皮が基底膜レベルで剥離して全身熱傷様の水疱や潰瘍を形成する遺伝性水疱性皮膚難病である。例えば栄養障害型表皮水疱症においては、VII型コラーゲンα1（COL7A1）遺伝子の欠失または変異により基底膜と真皮の間の接着機能が破綻し、表皮剥離と水疱の形成および治癒が繰り返される結果、真皮において線維化が亢進して瘢痕が形成される。しかし、遺伝子異常を正常化する安全且つ確実な方法論が確立していない現在、表皮水疱症をはじめとする遺伝性疾患の根治的治療法は未だ存在しない。
WO2012/147470 WO2014/065347
Fritsch, et al., J Clin Invest. 2008 May;118(5):1669-79
　本願は、各種臓器の線維症を含む線維性疾患の治療に有効な新規医薬を提供することを目的とする。
　本発明者らは、二次的に組織の線維化を生じる栄養障害型表皮水疱症の治療に有効な物質を探索した結果、特定のアミノ酸配列を有するHMGB1断片ペプチドが栄養障害型表皮水疱症モデルマウスにおいて手指の癒着と消化管の瘢痕化を抑制する効果および生存期間を延長する効果を示すことを見出した。本発明者らはさらに、表皮水疱症のような遺伝性疾患ではなく、遺伝子異常を有しないマウスに物理的な皮膚の欠損を作成した皮膚潰瘍モデルにおいても、当該特定のHMGB1断片ペプチドの投与により、潰瘍の治癒過程における皮膚の線維化が抑制されることを見出した。これら知見に基づき、本願は、当該特定のHMGB1断片ペプチドを含有する、線維性疾患の治療のための医薬組成物を提供する。
　すなわち、本願は、以下を提供する。
〔１〕
　以下の（ａ）から（ｃ）のいずれかに記載の物質（以下、物質Aと称する）を含有する、線維性疾患の治療のための医薬組成物：
　（ａ）配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含むHMGB1断片ペプチド；
　（ｂ）配列番号：１に記載のアミノ酸配列において１若しくは複数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列を含むペプチド； および
　（ｃ）配列番号：１に記載のアミノ酸配列と約８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むペプチド。
〔２〕
　線維性疾患が、全身性強皮症、限局性強皮症、ケロイド、肥厚性瘢痕、皮膚創傷後または皮膚潰瘍後の瘢痕、皮膚線維症、心筋線維症、肝線維症、肝硬変、腎線維症、膵線維症、肺線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、腸間膜線維症、乳腺線維症、嚢胞性線維症、消化管線維症、脂肪組織線維症、緑内障、加齢黄斑変性、ドライアイ、慢性GVHD、消化管の瘢痕、脂肪組織の瘢痕、栄養障害型表皮水疱症またはキンドラー症候群における瘢痕、ならびに皮膚、消化管、腹膜、筋肉、腱または関節の術後瘢痕からなる群より選択される、〔１〕に記載の医薬組成物。
〔３〕
　物質Aを含有する、組織の線維化を抑制するための医薬組成物。
〔４〕
　物質Aを含有する、組織の線維化抑制剤。
〔Ａ１〕
　物質Aの有効量を対象に投与する工程を含む、線維性疾患を治療する方法。
〔Ａ２〕
　線維性疾患が、全身性強皮症、限局性強皮症、ケロイド、肥厚性瘢痕、皮膚創傷後または皮膚潰瘍後の瘢痕、皮膚線維症、心筋線維症、肝線維症、肝硬変、腎線維症、膵線維症、肺線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、腸間膜線維症、乳腺線維症、嚢胞性線維症、消化管線維症、脂肪組織線維症、緑内障、加齢黄斑変性、ドライアイ、慢性GVHD、消化管の瘢痕、脂肪組織の瘢痕、栄養障害型表皮水疱症またはキンドラー症候群における瘢痕、ならびに皮膚、消化管、腹膜、筋肉、腱または関節の術後瘢痕からなる群より選択される、〔Ａ１〕に記載の方法。
〔Ａ３〕
　物質Aの有効量を対象に投与する工程を含む、組織の線維化を抑制する方法。
〔Ｂ１〕
　線維性疾患の治療に用いるための、物質A。
〔Ｂ２〕
　線維性疾患が、全身性強皮症、限局性強皮症、ケロイド、肥厚性瘢痕、皮膚創傷後または皮膚潰瘍後の瘢痕、皮膚線維症、心筋線維症、肝線維症、肝硬変、腎線維症、膵線維症、肺線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、腸間膜線維症、乳腺線維症、嚢胞性線維症、消化管線維症、脂肪組織線維症、緑内障、加齢黄斑変性、ドライアイ、慢性GVHD、消化管の瘢痕、脂肪組織の瘢痕、栄養障害型表皮水疱症またはキンドラー症候群における瘢痕、ならびに皮膚、消化管、腹膜、筋肉、腱または関節の術後瘢痕からなる群より選択される、〔Ｂ１〕に記載の物質A。
〔Ｂ３〕
　組織の線維化の抑制に用いるための、物質A。
〔Ｃ１〕
　線維性疾患の治療のための医薬の製造における、物質Aの使用。
〔Ｃ２〕
　線維性疾患が、全身性強皮症、限局性強皮症、ケロイド、肥厚性瘢痕、皮膚創傷後または皮膚潰瘍後の瘢痕、皮膚線維症、心筋線維症、肝線維症、肝硬変、腎線維症、膵線維症、肺線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、腸間膜線維症、乳腺線維症、嚢胞性線維症、消化管線維症、脂肪組織線維症、緑内障、加齢黄斑変性、ドライアイ、慢性GVHD、消化管の瘢痕、脂肪組織の瘢痕、栄養障害型表皮水疱症またはキンドラー症候群における瘢痕、ならびに皮膚、消化管、腹膜、筋肉、腱または関節の術後瘢痕からなる群より選択される、〔Ｃ１〕に記載の使用。
〔Ｃ３〕
　組織の線維化を抑制するための医薬の製造における、物質Aの使用。
〔Ｃ４〕
　組織の線維化抑制剤の製造における、物質Aの使用。
HMGB1ペプチド(1-44)投与群と溶媒群の癒着スコアを示すグラフである。各群について、中央値、第1四分位点、第3四分位点およびデータ範囲を示す（n=5-7）。* p<0.05、** p<0.01で溶媒群と有意差あり（Mann-Whitney’s U test）。 投与開始後6週におけるマウスの左右前肢の代表例を示す写真である。 投与開始後10週におけるマウス小腸のヘマトキシリン・エオジン（HE）染色結果の代表例を示す画像である。 投与開始後11週におけるマウス小腸のマッソン・トリクローム（MT）染色結果の代表例を示す画像である。溶媒群では陰窩細胞の周囲が青色に強く染色されており、コラーゲン線維の沈着が確認できる。一方、HMGB1ペプチド(1-44)投与群では青色に染色された部位はほとんど見られない。 表皮水疱症モデルマウスの生存率を表すグラフである（Kaplan-Meier曲線）。縦軸は生存率を示し（1.0＝100％）、横軸は時間（週数）を示す（被験物質の投与開始時を0週としている）。Log-rank検定にて、群間に有意差あり（p<0.001）。 皮膚潰瘍作成後28日目のマウス皮膚のマッソン・トリクローム染色結果の代表例を示す画像である。青く染色されている領域が膠原繊維、赤く染色されている領域は主に血液系細胞、上皮系組織および皮下の筋膜等である。潰瘍部位（再生・治癒している）は点線内の領域である。Center region = 切片内の潰瘍領域。Margin region = 潰瘍辺縁の非潰瘍部位（Referenceとして定量解析に使用）。 皮膚潰瘍作成後28日目のマウス皮膚におけるコラーゲン陽性領域面積率の解析結果を示すグラフである。データは平均値±標準誤差（N=9）で示す(*p<0.05, Mann Whitney’s test)。
　本願は、配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含むHMGB1断片ペプチドを含有する、線維性疾患の治療のための医薬組成物を提供する。
　本願において、「線維性疾患」とは、臓器、器官、組織等において細胞外マトリックスタンパク質の過剰産生や沈着が起こり、組織の硬化や機能障害を生じる疾患を意味する。線維化に関連する細胞外マトリックスタンパク質としては、コラーゲン（例えばI型、III型、IV型、V型、およびVI型コラーゲン）が挙げられる。本願における「線維性疾患」には、全身性強皮症、限局性強皮症、ケロイド、心筋線維症、肝線維症、肝硬変、腎線維症、膵線維症、肺線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、腸間膜線維症、乳腺線維症、嚢胞性線維症（例えば、膵嚢胞性線維症）、消化管の瘢痕、脂肪組織の瘢痕、栄養障害型表皮水疱症における瘢痕、および皮膚、消化管、腹膜、筋肉、腱または関節の術後瘢痕等が含まれるが、これらに限定されるものではない。また、本願における「線維性疾患」は特発性のものおよび二次性のものを含む。
　肺線維症は、肺の間質に主としてコラーゲン線維が沈着し、肺全体が硬化してガス交換機能に障害を生じる疾患である。肺線維症には特発性肺線維症と二次性肺線維症が含まれる。
　腎線維症は、腎臓の間質に主としてコラーゲン線維が沈着し、腎機能に障害を生じる疾患である。
　肝線維症は、肝臓に主としてコラーゲン線維が沈着し、肝臓が硬化して肝機能に障害を生じる疾患である。肝線維症からさらにコラーゲンの沈着および肝臓の硬化が進行し、肝小葉構造の破壊および再生結節の形成がみられる状態となったものが肝硬変である。
　本願において、「線維化」とは、生体の組織において細胞外マトリックスタンパク質（主としてコラーゲン）が沈着することをいう。本願において、「線維症」とは、生体の組織における線維化が当該組織の硬化や機能障害をもたらす程度に達した状態をいう。本願において、「瘢痕化」（瘢痕形成とも称する）とは、生体組織の損傷部位が細胞外マトリックス（主としてコラーゲン線維）によって置換されることをいう。本願において、「瘢痕」とは、生体組織の損傷部位が細胞外マトリックス（主としてコラーゲン線維）によって置換された状態、あるいは、細胞外マトリックス（主としてコラーゲン線維）によって置換された損傷組織中の部位をいう。
　本願において、「医薬組成物」という用語は、「医薬」、「薬剤」または「薬学的組成物」と互換的に用いられる。
　一つの態様において、本願の医薬組成物を用いて治療することができる線維性疾患は、
i)全身性強皮症、限局性強皮症、ケロイド、肥厚性瘢痕、皮膚創傷後または皮膚潰瘍後の瘢痕、皮膚線維症、肝線維症、肝硬変、腎線維症、膵線維症、肺線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、腸間膜線維症、乳腺線維症、嚢胞性線維症、消化管線維症、脂肪組織線維症、緑内障、加齢黄斑変性、ドライアイ、慢性GVHD、消化管の瘢痕、脂肪組織の瘢痕、栄養障害型表皮水疱症またはキンドラー症候群における瘢痕、および皮膚、消化管、腹膜、筋肉、腱または関節の術後瘢痕からなる群より選択される疾患；
ii)全身性強皮症、限局性強皮症、ケロイド、肝線維症、肝硬変、腎線維症、膵線維症、肺線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、腸間膜線維症、乳腺線維症、嚢胞性線維症、消化管の瘢痕、脂肪組織の瘢痕、栄養障害型表皮水疱症における瘢痕、および皮膚、消化管、腹膜、筋肉、腱または関節の術後瘢痕からなる群より選択される疾患；
iii)全身性強皮症、限局性強皮症、ケロイド、肥厚性瘢痕、皮膚創傷後または皮膚潰瘍後の瘢痕、皮膚線維症、心筋線維症、腎線維症、膵線維症、肺線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、腸間膜線維症、乳腺線維症、嚢胞性線維症、消化管線維症、脂肪組織線維症、緑内障、加齢黄斑変性、ドライアイ、慢性GVHD、消化管の瘢痕、脂肪組織の瘢痕、栄養障害型表皮水疱症またはキンドラー症候群における瘢痕、および皮膚、消化管、腹膜、筋肉、腱または関節の術後瘢痕からなる群より選択される疾患；
iv)全身性強皮症、限局性強皮症、ケロイド、心筋線維症、腎線維症、膵線維症、肺線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、腸間膜線維症、乳腺線維症、嚢胞性線維症、消化管の瘢痕、脂肪組織の瘢痕、栄養障害型表皮水疱症における瘢痕、および皮膚、消化管、腹膜、筋肉、腱または関節の術後瘢痕からなる群より選択される疾患；
v)全身性強皮症、限局性強皮症、ケロイド、肥厚性瘢痕、皮膚創傷後または皮膚潰瘍後の瘢痕、皮膚線維症、腎線維症、膵線維症、肺線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、腸間膜線維症、乳腺線維症、嚢胞性線維症、消化管線維症、脂肪組織線維症、緑内障、加齢黄斑変性、ドライアイ、慢性GVHD、消化管の瘢痕、脂肪組織の瘢痕、栄養障害型表皮水疱症またはキンドラー症候群における瘢痕、および皮膚、消化管、腹膜、筋肉、腱または関節の術後瘢痕からなる群より選択される疾患；
vi)全身性強皮症、限局性強皮症、ケロイド、腎線維症、膵線維症、肺線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、腸間膜線維症、乳腺線維症、嚢胞性線維症、消化管の瘢痕、脂肪組織の瘢痕、栄養障害型表皮水疱症における瘢痕、および皮膚、消化管、腹膜、筋肉、腱または関節の術後瘢痕からなる群より選択される疾患； 
vii)全身性強皮症、限局性強皮症、ケロイド、肥厚性瘢痕、皮膚創傷後または皮膚潰瘍後の瘢痕、皮膚線維症、消化管線維症、緑内障、加齢黄斑変性、ドライアイ、慢性GVHD、消化管の瘢痕、栄養障害型表皮水疱症またはキンドラー症候群における瘢痕、および皮膚または消化管の術後瘢痕からなる群より選択される疾患；
viii)全身性強皮症、限局性強皮症、ケロイド、消化管の瘢痕、栄養障害型表皮水疱症における瘢痕、および皮膚または消化管の術後瘢痕からなる群より選択される疾患；
ix)ケロイド、肥厚性瘢痕、皮膚創傷後または皮膚潰瘍後の瘢痕、皮膚線維症、消化管線維症、消化管の瘢痕、栄養障害型表皮水疱症またはキンドラー症候群における瘢痕、および皮膚または消化管の術後瘢痕からなる群より選択される疾患；
x)ケロイド、消化管の瘢痕、栄養障害型表皮水疱症における瘢痕、および皮膚または消化管の術後瘢痕からなる群より選択される疾患； 
xi)ケロイド、肥厚性瘢痕、皮膚創傷後または皮膚潰瘍後の瘢痕、皮膚線維症、消化管線維症、消化管の瘢痕、および皮膚または消化管の術後瘢痕からなる群より選択される疾患； または
xii)ケロイド、消化管の瘢痕、および皮膚または消化管の術後瘢痕からなる群より選択される疾患
である。
　また本願は、配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含むHMGB1断片ペプチドを含有する、組織の線維化を抑制するための医薬組成物を提供する。
　さらに本願は、配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含むHMGB1断片ペプチドを含有する、組織の線維化抑制剤を提供する。かかる組織の線維化抑制剤は、例えば線維性疾患の治療薬を開発するための基礎研究および臨床研究等において試薬として用いることができる。例えば、組織線維化モデル動物を用いて被験物質の線維化抑制作用を評価する実験において、本願の組織の線維化抑制剤を対照物質として使用することができる。本明細書において、非医薬用途に用いられる組織の線維化抑制剤は、組織の線維化を抑制するための「試薬組成物」または「試薬」とも表現される。
　本願における「組織の線維化」とは、皮膚、心筋、骨格筋、腱、肝臓、腎臓、膵臓、肺、消化管、膀胱、骨髄、腹膜、腸間膜、乳腺、脂肪組織等あらゆる組織の線維化（線維症）を意味する。
　一つの態様において、本願の医薬組成物または組織の線維化抑制剤によって線維化を抑制することができる組織は、
i)皮膚、骨格筋、腱、肝臓、腎臓、膵臓、肺、消化管、膀胱、骨髄、腹膜、腸間膜、乳腺および脂肪組織からなる群より選択される組織；
ii)皮膚、心筋、骨格筋、腱、腎臓、膵臓、肺、消化管、膀胱、骨髄、腹膜、腸間膜、乳腺および脂肪組織からなる群より選択される組織；
iii)皮膚、骨格筋、腱、腎臓、膵臓、肺、消化管、膀胱、骨髄、腹膜、腸間膜、乳腺および脂肪組織からなる群より選択される組織；または
iv)皮膚もしくは消化管
である。
　また本願は、配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含むHMGB1断片ペプチドを含有する、栄養障害型表皮水疱症の治療のための医薬組成物を提供する。本願は、該HMGB1断片ペプチドを含有する、栄養障害型表皮水疱症患者の生存期間を延長するための医薬組成物もまた提供する。
　本願において、「栄養障害型表皮水疱症」とは、VII型コラーゲンα1（COL7A1）遺伝子の欠失または変異により、基底膜と真皮を連結しているVII型コラーゲン線維が欠損するか又は正常に機能しなくなる結果、基底膜と真皮の間の接着機能が破綻し、水疱や難治性皮膚潰瘍が生じる疾患である。栄養障害型表皮水疱症においては、表皮剥離と水疱の形成および治癒が繰り返され、真皮における線維化が亢進して瘢痕を形成することにより手指の癒着が生じるほか、消化管においても同様に粘膜上皮の剥離が繰り返されて瘢痕が形成されることにより消化管の狭窄が起き、食物摂取が困難となる症例が知られている。
　本願において、配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含むHMGB1断片ペプチドとは、HMGB1タンパク質の一部からなるペプチドであって、配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含むペプチドを意味する。このようなペプチドは、該ペプチドをコードするDNAを適当な発現系に組み込んで遺伝子組換え体（recombinant）として得ることができるし、または、人工的に合成することもできる。
　本願において、HMGB1タンパク質としては、配列番号：２に記載のアミノ酸配列を含むタンパク質、および、配列番号：３に記載の塩基配列を含むDNAによってコードされるタンパク質が例示できるが、これらに限定されるものではない。
　本願における配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含むHMGB1断片ペプチドとしては、配列番号：１に記載のアミノ酸配列からなるHMGB1断片ペプチドを例示できる。
　本願の医薬組成物または組織の線維化抑制剤においては、配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含むHMGB1断片ペプチドに代えて、またはこれと共に、配列番号：１に記載のアミノ酸配列において１つ以上のアミノ酸残基が改変（置換、欠失、挿入若しくは付加）されたアミノ酸配列を含むペプチドであって、配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含むHMGB1断片ペプチドと機能的に同等なペプチドを用いることもできる。かかるペプチドの例としては、以下のi)～iv)として記載するペプチド、ならびに、以下のi)～iv)として記載するペプチドであって、且つ、組織の線維化を抑制する作用を有するペプチドを例示できるが、これらに限定されるものではない：
i) 配列番号：１に記載のアミノ酸配列において１若しくは複数個（例えば１個～１０個、１個～９個、１個～８個、１個～７個、１個～６個、１個～５個、１個～４個、１個～３個、または１個若しくは２個）のアミノ酸が置換、欠失、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列を含むペプチド；
ii) 配列番号：１に記載のアミノ酸配列において１若しくは複数個（例えば１個～１０個、１個～９個、１個～８個、１個～７個、１個～６個、１個～５個、１個～４個、１個～３個、または１個若しくは２個）のアミノ酸が置換、欠失、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列からなるペプチド；
iii) 配列番号：１に記載のアミノ酸配列と約８０％以上、例えば約８５％以上、約９０％以上、約９１％以上、約９２％以上、約９３％以上、約９４％以上、約９５％以上、約９６％以上、約９７％以上、約９８％以上または約９９％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むペプチド；
iv) 配列番号：１に記載のアミノ酸配列と約８０％以上、例えば約８５％以上、約９０％以上、約９１％以上、約９２％以上、約９３％以上、約９４％以上、約９５％以上、約９６％以上、約９７％以上、約９８％以上または約９９％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなるペプチド。
　本願のペプチドやそれを含有する医薬組成物（以下、ペプチド等と称する）の有効量が、本明細書に記載の疾患や症状の治療や予防のために対象に投与される。
　本願における有効量とは、本明細書に記載の疾患や症状の治療に十分な量をいう。本願における治療には、軽減、遅延、阻止、改善、寛解、治癒、完治などが含まれるが、これらに限定されない。
　本願における対象としては、特に制限はなく、哺乳類、鳥類、魚類等が挙げられる。哺乳類としては、ヒト又は非ヒト動物が挙げられ、例えば、ヒト、マウス、ラット、サル、ブタ、イヌ、ウサギ、ハムスター、モルモット、ウマ、ヒツジ、クジラなどが例示できるが、これらに限定されるものではない。本願において、「対象」という用語は、「患者」、「個体」および「動物」と互換的に用いられる。
　本願のペプチド等の投与部位に制限はなく、例えば正常な部位よりも多くのコラーゲン線維の産生および／または沈着が認められる部位もしくはその近傍、または、それらとは異なる部位（例えば、正常な部位よりも多くのコラーゲン線維の産生および／または沈着が認められる部位から離れた部位、あるいは正常な部位よりも多くのコラーゲン線維の産生および／または沈着が認められる部位を有する組織とは異なる組織に属する部位）など、いかなる部位に投与されても、本願のペプチド等は、線維化抑制作用を発揮することができる。
　本願のペプチド等の投与方法としては、経口投与または非経口投与が挙げられ、非経口投与方法としては、血管内投与（動脈内投与、静脈内投与等）、筋肉内投与、皮下投与、皮内投与、腹腔内投与、経鼻投与、経肺投与、経皮投与などが挙げられるが、これらに限定されない。また、本願のペプチド等を、注射投与、例えば、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射などによって全身または局部的（例えば、皮下、皮内、皮膚表面、眼球あるいは眼瞼結膜、鼻腔粘膜、口腔内および消化管粘膜、膣・子宮内粘膜、または損傷部位など）に投与できる。
　また、患者の年齢、症状により適宜投与方法を選択することができる。本願のペプチドを投与する場合、例えば、一回の投与につき、体重1 kgあたり0.0000001mgから1000mgの範囲で投与量が選択できる。あるいは、例えば、患者あたり0.00001から100000mg/bodyの範囲で投与量が選択できる。本願のペプチドを分泌する細胞や該ペプチドをコードするDNAが挿入された遺伝子治療用ベクターを投与する場合も、該ペプチドの量が上記範囲内となるように投与することができる。しかしながら、本願における医薬組成物はこれらの投与量に制限されるものではない。
　本願の医薬組成物は、常法に従って製剤化することができ（例えば、Remington's Pharmaceutical Science, latest edition, Mark Publishing Company, Easton, U.S.A）、医薬的に許容される担体や添加物を共に含むものであってもよい。例えば界面活性剤、賦形剤、着色料、着香料、保存料、安定剤、緩衝剤、懸濁剤、等張化剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤等が挙げられるが、これらに制限されず、その他常用の担体が適宜使用できる。具体的には、軽質無水ケイ酸、乳糖、結晶セルロース、マンニトール、デンプン、カルメロースカルシウム、カルメロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、中鎖脂肪酸トリグリセライド、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油60、白糖、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩類等を挙げることができる。
　なお、本明細書において引用されたすべての先行技術文献は、参照として本明細書に組み入れられる。
　本発明は、下記の実施例によってさらに例示されるが、それらに限定されるものではない。
実施例１
HMGB1ペプチド(1-44)による表皮水疱症モデルマウス前肢の癒着に対する抑制作用
（１）材料および方法
i) 動物
　VII型コラーゲンα1（Col7a1）遺伝子の変異alleleをホモに有する表皮水疱症モデルマウス（Fritsch, et al., J Clin Invest. 2008 May;118(5):1669-79に記載のCol7a1flNeo/flNeoマウス、以下、本明細書において「129SV/colVII homoマウス」と称する）をUniversity of Freiburg（Germany）のLeena Bruckner-Tuderman教授より入手した。当該マウス15匹（雄）を飼育室にて2週間馴化し、後述の癒着スコアが同程度になるように2群に群分けし、その翌日から被験物質の投与を開始した（投与開始時週齢：5～6週齢）。被験物質投与開始から1週後の癒着スコアの評価時に、HMGB1ペプチド（1-44）投与群の1匹が麻酔操作ミスにより死亡したため、試験より除外した。よって、群構成は以下のとおりである。
　群構成：
　　・溶媒群　　　　　　　　　　　7匹
　　・HMGB1ペプチド（1-44）群　　7匹
ii) 被験物質の製造
　ヒト由来のHMGB1タンパク質のアミノ酸残基1-44（配列番号：１）からなるペプチドを固相法により化学合成した。当該ペプチドをHMGB1ペプチド(1-44)と称する。
iii) 被験物質の投与
　溶媒（生理食塩液、株式会社大塚製薬工場製「大塚生食注」）またはHMGB1ペプチド(1-44)（濃度0.2 mg/mL）をそれぞれ尾静脈から50 μLの容量を約2～3秒間かけてマイジェクター（テルモ）を用いて静脈内投与した。被験物質は、群分けの翌日から1週間に2回、投与間隔を少なくとも1日は空けて、4週間にわたり合計8回投与した。
iv) 前肢指間の癒着スコアの評価
　マウス前肢指間の癒着の程度を以下に示すスコアに従い、被験物質投与開始前日および投与開始後1～8週までは1回/週の合計9回、イソフルラン軽麻酔下で肉眼により評価した。癒着スコアは、左右の前肢を別々に下記A～Dの項目について評価し、個々のスコアを合計した値とした。
　
　癒着スコア＝左右の前肢を別々にA～Dの項目を評価した点数の合計
　
　A.　第二指第三指間の癒着
　0点：癒着がない
　1点：遠位指節間（DIP）関節までの部分癒着がある
　2点：DIP関節を越えた癒着がある
　
　B.　第三指第四指間の癒着
　0点：癒着がない
　1点：DIP関節までの部分癒着がある
　2点：DIP関節を越えた癒着がある
　
　C.　第五指の癒着
　0点：癒着がない
　1点：部分癒着がある
　2点：掌と完全に癒着している
　
　D.　第二指、第三指、第四指の爪の有無
　0点：3本とも爪がある
　1点：1または2本の指で爪が欠落している
　2点：3本全ての指で爪がない
　
v) 死亡マウスの取り扱い
　癒着スコアの評価時に麻酔操作ミスで死亡した1例は被験物質投与開始直後であったため除外し、結果には反映しなかった。また、投与開始後7および8週で、それぞれ溶媒群の1例が死亡したが、この死因は病態進行による消化管の癒着であると考えられた。この2匹の癒着スコアは結果に反映し、死亡後の癒着スコアは欠落値とした。
vi) 統計解析
　統計解析はGraphPad Prism7（GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA）を用いて行った。癒着スコアのデータは、欠落値がなかった6週までのデータにおいて反復測定の二元配置分散分析を行ったところ交互作用が認められたため、各評価時点においてMann-Whitney’s U testを行なった。p<0.05の場合に統計学的に有意差があるとみなした。
（２）結果
　本試験における溶媒およびHMGB1ペプチド(1-44)群の投与開始前日および投与開始後1～8週までのマウス前肢の癒着スコアを図１に示し、投与開始後6週の左右前肢写真を図２に示す。前肢の癒着について、投与開始時の6週齢では軽度な癒着が一部に認められただけであったが、加齢とともに病状が進行し、溶媒群では投与開始後6週（12週齢）で2例を除きほぼすべての指に部分的またはDIP関節を越える癒着が認められた。一方、HMGB1ペプチド(1-44)群では、溶媒群に比較して癒着スコアの増加の程度が抑制され、投与開始後4～8週（10～14週齢）の癒着スコアは溶媒群の半分程度で、統計学的に有意に低値であった（図１）。なお、マウスの体重については溶媒群およびHMGB1ペプチド(1-44)群ともに投与開始から8週後まで同様に推移し、群間に有意な差は認められなかった。
　129SV/colVII homoマウスでは、週齢に伴い表皮水疱症患者と同様、指間の癒着が観察される。129SV/colVII homoマウスの表皮水疱症はCol7a1遺伝子の変異により発症する栄養障害型に分類され、この病型では、VII型コラーゲンの産生が正常に行われず、基底膜-真皮間の接着機能不全により水疱が生じ、手足で生じた水疱の瘢痕化の繰り返しによって指間の癒着が進行すると考えられている（前掲のFritsch, et al.）。本試験において、HMGB1ペプチド(1-44)の静脈内投与により129SV/colVII homoマウスの前肢指間の癒着が抑制されることが明らかとなった。かかる結果は、当該HMGB1ペプチドが皮膚組織の線維化を抑制する作用を有することを示すものである。
実施例２
HMGB1ペプチド(1-44)による表皮水疱症モデルマウス腸管の線維化および瘢痕化に対する抑制作用
（１）材料および方法
i) 動物
　実施例１に記載の129SV/colVII homoマウス（雄6匹）を飼育室にて2週間馴化し、溶媒群（3匹）とHMGB1ペプチド(1-44)投与群（3匹）に分けて被験物質の投与を開始した（投与開始時週齢：5～6週齢）。
ii) 被験物質
　実施例１と同様に化学合成したHMGB1ペプチド(1-44)を被験物質として用いた。
iii) 被験物質の投与
　溶媒（生理食塩液、株式会社大塚製薬工場製「大塚生食注」）またはHMGB1ペプチド(1-44)（濃度0.2 mg/mL）をそれぞれ尾静脈から50 μLの容量を投与した。被験物質は、群分けの翌日から1週間に2回、投与間隔を少なくとも1日は空けて、4週間にわたり合計8回投与した。
iv) 小腸組織に対する被験物質の作用の評価
　被験物質の投与終了後もマウスの飼育を継続し、溶媒群のマウスに腹部の膨張が見られた時点で小腸を採材し、同じタイミングでHMGB1ペプチド(1-44)投与群のマウスからも小腸を採材した。その後、採材した小腸サンプルから組織切片を作成してヘマトキシリン・エオジン（HE）染色およびマッソン・トリクローム(MT)染色を行った。
（２）結果
　溶媒群のマウス（3個体）は個体ごとにそれぞれ投与開始後7週目（13週齢）、10週目（16週齢）、11週目（17週齢）で腹部の膨張が認められたため、その時点で小腸を採材してHE染色およびMT染色を行った。HMGB1ペプチド(1-44)投与群のマウスもこれに合わせて投与開始後7週目（13週齢）、10週目（16週齢）、11週目（17週齢）にそれぞれ１個体から小腸を採材してHE染色およびMT染色を行った。
　溶媒群およびHMGB1ペプチド(1-44)群のマウス小腸のHE染色結果の代表像を図３に示す。溶媒群では、3個体全てにおいて腸管の狭窄、ガス充満および絨毛脱落が認められたが、HMGB1ペプチド(1-44)投与群では、いずれの個体にもこれらの症状は認められなかった。また、溶媒群の小腸では、狭窄および膨張が生じた部位の近傍に瘢痕化による腸管壁の肥厚が認められたが、HMGB1ペプチド(1-44)投与群では腸管壁の肥厚は認められなかった。MT染色の結果から、溶媒群の小腸壁において顕著なコラーゲン線維の沈着が認められた一方、HMGB1ペプチド(1-44)投与群ではコラーゲン線維の沈着はほとんど認められなかった（図４）。これらの結果は、当該HMGB1ペプチドが小腸組織の線維化および瘢痕化を抑制する作用を有することを示すものである。
実施例３
HMGB1ペプチド(1-44)による表皮水疱症モデルマウスの生存期間延長
（１）材料および方法
i) 動物
　実施例１に記載の129SV/colVII homoマウス（雄）を飼育室にて2週間馴化し、溶媒群とHMGB1ペプチド(1-44)投与群に分けて被験物質の投与を開始した（投与開始時週齢：5～6週齢（体重5～8g）。
ii) 被験物質
　実施例１と同様に化学合成したHMGB1ペプチド(1-44)を被験物質として用いた。
iii) 被験物質の投与
　溶媒（生理食塩液、株式会社大塚製薬工場製「大塚生食注」）またはHMGB1ペプチド(1-44)（濃度0.2 mg/mL）をそれぞれ尾静脈から1回につき50μLの容量を投与した。被験物質は、群分けの翌日から1週間に2回、投与間隔を少なくとも1日は空けて、4週間にわたり合計8回投与した。
iv) 生存期間の評価
　被験物質の投与終了後もマウスが死亡するまで飼育を継続し、溶媒群（10匹）およびHMGB1ペプチド(1-44)投与群（10匹）の各個体の生存期間を記録した。なお、両群ともに、動物飼育施設の長期休業により安定した飼育・給餌の継続が困難となった一部の個体については生存途中で観察打ち切りとした。具体的には、溶媒群では13.14週時点で1個体を観察打ち切りとし、HMGB1ペプチド(1-44)投与群では13.14週時点で1個体、18.57週時点で1個体、21.57週時点で2個体、36.57週時点で1個体をそれぞれ観察打ち切りとした。
（２）結果
　溶媒群およびHMGB1ペプチド(1-44)投与群の各個体の生存期間に基づいて描いた生存曲線を図５に示す（被験物質投与開始時を0週とした）。HMGB1ペプチド(1-44)の投与により、表皮水疱症モデルマウスの生存期間が著しく延長されることが示された。
実施例４
マウスの皮膚全層欠損型潰瘍モデルに対するHMGB1ペプチド(1-44)投与の効果
（１）材料および方法
i) 動物
　C57BL/6の雄マウス（C57BL/6JJcl；微生物グレードSPF）を7-8週齢で日本クレア株式会社より購入し、5日以上動物飼育室で馴化させた後に使用した。
ii) 皮膚潰瘍の作成
　損傷・潰瘍作製のための全層皮膚欠損手術前日にイソフルラン麻酔下（麻酔器（MK-A110D、室町機械）、麻酔条件: 導入時4.0%、維持2.0%；流速 1.5L/分）で実験動物背部の除毛を行った。潰瘍作製時は、イソフルラン麻酔下で背部の皮膚をイソジンあるいはアルコールで消毒後、生検トレパン(5mm直径)を使用し皮膚をくり貫いて潰瘍を作製し、ケージに戻し飼育した。術後管理として、潰瘍部は被覆材を巻き保護し、衛生管理と術後の状態の確認のために、創傷が自然閉鎖する約2週間経過時まで72-96時間ごとにシート、被覆材、包帯の交換を行った。また、実験中の損傷部は滅菌状態を保つことで、感染リスクを最小限にした。
iii) 群分け
　皮膚潰瘍作成後にシリコンシートで上皮収縮を抑制した状態で、潰瘍部の形状、直径がよくみえるように背部皮膚から20ｃｍほど天井側から写真撮影を行った。当該写真をもとに、周囲部からの上皮シートの収縮抑制と肉芽形成が均一に起きる微小環境を保証しうるものとして下記の皮膚潰瘍評価基準が2点以上のマウスを採用した。採用されたマウスを溶媒（生理食塩水）投与群とHMGB1ペプチド(1-44)投与群に分け、各群9匹とした。
　
＜皮膚潰瘍評価基準＞
　3点： 円の縦直径 (4.5-5.5mm) および横直径 (4.5-5.5mm)でほぼ完全円（シートとの間隙が等間隔）
　2点： 円の縦直径 (4.5-5.5mm) および 横直径 (4.5-5.5mm)を満たすが、完全円ではない。
　1点： 円の縦直径 (4.5-5.5mm) もしくは 横直径 (4.5-5.5mm)のいずれかを満たし、楕円～円
　0点：上記以外および、全層欠損が認められない(筋膜が確認できない)
　
iv) 被験物質
　実施例１と同様に化学合成したHMGB1ペプチド(1-44)を被験物質として用いた。
v) 被験物質の投与
　被験物質の投与は潰瘍作成後3時間から開始し、その後、4, 8, 11, 15, 18, 22, 25日目に反復し、合計8回行った。HMGB1ペプチド(1-44)の投与量は1.5mg/kg/dayとし、希釈された溶媒を含む液を1mLのシリンジに充填し、30Gの注射針を用いて尾静脈より投与した。
vi) 潰瘍部位のサンプリング
　皮膚潰瘍作成後28日目にマウスをイソフルラン麻酔影響下に置き、頸椎脱臼を行って安楽死させ、氷上でサンプルのタンパク変性を防ぎながらすばやく潰瘍部およびその周辺領域の皮膚を切り取り回収した。採取した皮膚は、ピンセットで余分な皮下脂肪を除去後、10% Formalin (Wako) に入れ替えて、shakerを用いて氷上で振盪させながら、4度で一晩固定させた。固定後の皮膚はPBSでよく洗浄してから、検体はトリミング後、皮膚固有の頭尾軸/左右軸の組織の極性に留意しながら自動包埋器(Thermo Scientific)によりパラフィンブロックにした。その後、回転式ミクロトーム(Thermo Sceintific)で薄切(5μm)してから、スライドグラス上(松浪グラス)に固定させ、マッソン・トリクローム(MT)染色に供した。
vii) マッソン・トリクローム(MT)染色による潰瘍部位の組織学的変化の定性/定量的評価
　再生・治癒した潰瘍部位におけるコラーゲン繊維の占める面積を測定するため、パラフィン薄切(5μm)に対してマッソン・トリクローム染色を行い、真皮/瘢痕部位でのコラーゲン量を染色性で判定した。その詳細は、まず潰瘍部位(center)およびmargin(周辺正常領域)を、顕微鏡（Keyence BZ-X710）で1個体につき計6箇所の切片部位を撮影した。次に画像解析ソフト（BZ-X Analyzer）を用いて領域内のコラーゲン量を測定した。この場合、皮膚特有の毛周期での真皮/瘢痕部位でのコラーゲン量の個体間変動を補正するため各々のcenter領域に連続するmargin領域での値を用いて算出を行った。すなわち、[補正された潰瘍部位直下でのコラーゲン陽性領域面積率]= [center領域でのコラーゲン陽性領域面積率/margin領域でのコラーゲン陽性領域面積率]となる。
viii) 統計処理
　上記解析によって得られた測定値または補正後の算出値は、統計解析ソフト(statcel-3)を主に用いて各統計値を計算後、解析/判定を行った。具体的には、事前検定として(1)正規性の検定(Fisherの歪度/尖度係数での検定; P>0.05を正規分布とみなす。)、(2)分散性の検定(Levene検定; P>0.05を等分散とみなす。)、および(3)棄却検定（Grubbs検定；P<0.05である個体値をoutlierとみなし除外する）を行い、(1)および(2)で得られた結果が正規分布を示す場合には群間での平均値によるt検定 (Student(等分散時)もしくはWelch検定)(非等分散時))、正規分布を示さない場合には群間の順位によるノンパラメトリック検定 (Mann Whitney検定) を行い、p<0.05の場合に有意差ありと判定した。
（２）結果
　潰瘍作成28日後に皮膚を回収し、各投与群間でのマウス皮膚潰瘍部位の組織学的変化を評価するためにマッソン・トリクローム染色を行った。染色結果の代表像を図６に示し、上述の通り算出した[補正された潰瘍部位直下でのコラーゲン陽性領域面積率]の解析結果を図７に示す。溶媒投与群のMargin領域では膠原線維が不規則的な配列指向性を持ち豊富な膠原線維成分を有することから、波状の強いシグナルが検出されるのに対し、潰瘍の中心であるCenter領域では筋繊維芽細胞集団に代表される膠原線維合成能の高い細胞集団により新規に合成されていくことから、線維の配列指向性は規則的かつ量的に少ないことより、直線的かつ弱いシグナルとして検出されている（図６）。溶媒投与群と比較したところ、HMGB1ペプチド(1-44)投与群において膠原繊維のCenter領域でのシグナルは弱い傾向があり（図６）、これは定量的なシグナルの強度の計算および面積比を計算したところ有意に抑制が認められた (*p<0.05, Mann Whitney’s test)（図７）。かかる結果は、当該HMGB1ペプチドが皮膚組織の線維化を抑制する作用を有することを示すものである。
　なお、本試験の実施期間中（手術開始(Day 1)～皮膚回収時(Day 28)）におけるマウスの体重変化は、いずれの群においても目立った差はなく、群間において統計的に有意な変化も認められなかった (p>0.05, Repeated one-way ANOVA)。
　栄養障害型表皮水疱症は遺伝子異常に起因する疾患であるため、その治療方法としては、正常人の多能性幹細胞を他家移植する方法、あるいは患者本人由来のiPS細胞を作成し、そのCOL7A1遺伝子の変異をゲノム編集等により修復した上で患者に移植する方法が考えられる。しかし、前者は拒絶反応の問題があり、後者はゲノム編集のオフターゲット作用による癌化のリスクを排除することができない問題がある。
　今回、本発明者らは、驚くべきことに、細胞の他家移植でも遺伝子治療でもなく、HMGB1断片ペプチドの投与によって栄養障害型表皮水疱症の症状が改善することを初めて見出した。そして、当該治療効果のメカニズムを研究した結果、HMGB1断片ペプチドが組織の線維化を抑制していることを見出した。
　HMGB1断片ペプチドは、遺伝性疾患である栄養障害型表皮水疱症のモデルマウスにおいて、腸管組織におけるコラーゲンの沈着を抑制した。さらに、遺伝子異常を有しない正常マウスに物理的な皮膚の欠損を作成した皮膚潰瘍モデルにおいても、HMGB1断片ペプチドは、皮膚組織におけるコラーゲンの沈着を抑制した。このように、HMGB1断片ペプチドは、異なるモデル、且つ、異なる組織において、細胞外マトリッスクタンパク質であるコラーゲンの沈着を抑え、組織の線維化を抑制する効果が認められた。したがって、本願のHMGB1断片ペプチドを含有する医薬組成物は、コラーゲン沈着が認められるあらゆる臓器および組織の線維症や瘢痕の治療に有効であると考えられる。

Claims (4)

  1. 　以下の（ａ）から（ｃ）のいずれかに記載の物質を含有する、線維性疾患の治療のための医薬組成物：
    　（ａ）配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含むHMGB1断片ペプチド；
    　（ｂ）配列番号：１に記載のアミノ酸配列において１若しくは複数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列を含むペプチド； および
    　（ｃ）配列番号：１に記載のアミノ酸配列と約８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むペプチド。
  2. 　線維性疾患が、全身性強皮症、限局性強皮症、ケロイド、肥厚性瘢痕、皮膚創傷後または皮膚潰瘍後の瘢痕、皮膚線維症、心筋線維症、肝線維症、肝硬変、腎線維症、膵線維症、肺線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、腸間膜線維症、乳腺線維症、嚢胞性線維症、消化管線維症、脂肪組織線維症、緑内障、加齢黄斑変性、ドライアイ、慢性GVHD、消化管の瘢痕、脂肪組織の瘢痕、栄養障害型表皮水疱症またはキンドラー症候群における瘢痕、ならびに皮膚、消化管、腹膜、筋肉、腱または関節の術後瘢痕からなる群より選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
  3. 　以下の（ａ）から（ｃ）のいずれかに記載の物質を含有する、組織の線維化を抑制するための医薬組成物：
    　（ａ）配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含むHMGB1断片ペプチド；
    　（ｂ）配列番号：１に記載のアミノ酸配列において１若しくは複数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列を含むペプチド； および
    　（ｃ）配列番号：１に記載のアミノ酸配列と約８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むペプチド。
  4. 　以下の（ａ）から（ｃ）のいずれかに記載の物質を含有する、組織の線維化抑制剤：
    　（ａ）配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含むHMGB1断片ペプチド；
    　（ｂ）配列番号：１に記載のアミノ酸配列において１若しくは複数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列を含むペプチド； および
    　（ｃ）配列番号：１に記載のアミノ酸配列と約８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むペプチド。
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MX2019012014A MX2019012014A (es) 2017-04-07 2018-04-06 Medicina terapeutica para enfermedades fibrosas.
KR1020197032759A KR20190135519A (ko) 2017-04-07 2018-04-06 섬유성 질환의 치료약
AU2018250076A AU2018250076A1 (en) 2017-04-07 2018-04-06 Therapeutic medicine for fibrous disease
BR112019020294-3A BR112019020294A2 (pt) 2017-04-07 2018-04-06 Medicamento terapêutico para doença fibrótica
CN202311550243.8A CN117618534A (zh) 2017-04-07 2018-04-06 Hmgb1蛋白的片段肽的制药用途
EP18781748.1A EP3607963A4 (en) 2017-04-07 2018-04-06 THERAPEUTIC DRUG FOR FIBROUS DISEASES
JP2019511313A JPWO2018186480A1 (ja) 2017-04-07 2018-04-06 線維性疾患の治療薬
CN201880023662.7A CN110621331A (zh) 2017-04-07 2018-04-06 纤维化疾病的治疗药物
JP2022202757A JP2023030070A (ja) 2017-04-07 2022-12-20 線維性疾患の治療薬

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Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020071520A1 (ja) * 2018-10-05 2020-04-09 株式会社ステムリム 間葉系幹細胞の動員活性を有するペプチド
WO2020085506A1 (ja) 2018-10-25 2020-04-30 国立大学法人大阪大学 軟骨疾患の治療薬
WO2020149395A1 (ja) * 2019-01-18 2020-07-23 国立大学法人大阪大学 栄養障害型表皮水疱症治療薬
WO2021201260A1 (ja) * 2020-04-03 2021-10-07 株式会社ステムリム 間葉系幹細胞の動員活性を有するペプチド
US11298403B2 (en) 2017-12-01 2022-04-12 StemRIM Inc. Therapeutic agent for inflammatory bowel disease
WO2023037562A1 (ja) * 2021-09-07 2023-03-16 国立大学法人大阪大学 肺炎の治療薬
WO2023053384A1 (ja) * 2021-09-30 2023-04-06 国立大学法人大阪大学 脂肪肝および非アルコール性脂肪肝炎の治療薬
US11969459B2 (en) 2017-01-27 2024-04-30 StemRIM Inc. Therapeutic agent for cardiomyopathy, old myocardial infarction and chronic heart failure

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011052668A1 (ja) * 2009-10-28 2011-05-05 株式会社ジェノミックス 骨髄間葉系および/または多能性幹細胞の血中動員による組織再生促進剤
WO2012147470A1 (ja) 2011-04-26 2012-11-01 株式会社ジェノミックス 組織再生を誘導するためのペプチドとその利用
WO2014065347A1 (ja) 2012-10-25 2014-05-01 株式会社ジェノミックス Hmgb1断片を利用した新規心筋梗塞の治療法

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7964706B2 (en) * 2004-10-22 2011-06-21 Medimmune, Llc High affinity antibodies against HMGB1 and methods of use thereof
GB201508337D0 (en) * 2015-05-15 2015-06-24 Hmgbiotech S R L Novel peptides
TWI805565B (zh) * 2017-01-27 2023-06-21 日商斯德武利姆股份有限公司 心肌病、陳舊性心肌梗塞及慢性心臟衰竭的治療藥物
KR20200091894A (ko) * 2017-12-01 2020-07-31 가부시키가이샤 스템림 외배엽성 간엽계 줄기 세포 및 그의 제조 방법

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011052668A1 (ja) * 2009-10-28 2011-05-05 株式会社ジェノミックス 骨髄間葉系および/または多能性幹細胞の血中動員による組織再生促進剤
WO2012147470A1 (ja) 2011-04-26 2012-11-01 株式会社ジェノミックス 組織再生を誘導するためのペプチドとその利用
WO2014065347A1 (ja) 2012-10-25 2014-05-01 株式会社ジェノミックス Hmgb1断片を利用した新規心筋梗塞の治療法

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Remington's Pharmaceutical Science", MARK PUBLISHING COMPANY
FRITSCH ET AL., J CLIN INVEST., vol. 118, no. 5, May 2008 (2008-05-01), pages 1669 - 79
GOTO, TAKAZUMI ET AL.: "O-19-1: Review on effectiveness of myocardium regenerative-inducing therapy using HMGB1 with respect to myocardial infarction", REGENERATIVE MEDICINE, vol. 16, 1 February 2017 (2017-02-01), pages 289, XP009519180, ISSN: 1347-7919 *
KANEDA , YASUSHI ET AL.: "Tissue restoration mechanism by bone marrow-derived mesenchymal stem cells", EXPERIMENTAL MEDICINE, vol. 31, no. 5, 2013, pages 655 - 661, XP009517389, ISSN: 0288-5514 *
KATSUHITO TAMAI: "Development on regenerative-inducing medicine using regeneration mechanism of damaged body tissues with respect to peripheral circulation mesenchymal cells", BIO CLINICA,20160910HOKURYUKAN, TOKYO, JP, vol. 31, no. 10, 10 September 2016 (2016-09-10), pages 34 (1042) - 38 (1046), XP009517322, ISSN: 0919-8237 *
KIKUCHI, YASUSHI ET AL.: "P-02-112: Systemic administration of HMGB1 improves bleomycin-induced skin fibrosis by locally concentrating bone marrow mesenchymal stem cells", REGENERATIVE MEDICINE, vol. 16, 1 February 2017 (2017-02-01), pages 422, XP009516430, ISSN: 1347-7919 *
KOSHIBA, YUKI: "Effectiveness of mesenchymal stem cell mobilization by administration of HMGBl with respect to bleomycin-induced skin fibrosis", 48TH ANNUAL MEETING OF THE JAPANESE SOCIETY FOR MATRIX BIOLOGY AND MEDICINE; 24-25/06/2016, vol. 48th, 2016, pages 78, XP009516429 *

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11969459B2 (en) 2017-01-27 2024-04-30 StemRIM Inc. Therapeutic agent for cardiomyopathy, old myocardial infarction and chronic heart failure
US11298403B2 (en) 2017-12-01 2022-04-12 StemRIM Inc. Therapeutic agent for inflammatory bowel disease
WO2020071520A1 (ja) * 2018-10-05 2020-04-09 株式会社ステムリム 間葉系幹細胞の動員活性を有するペプチド
WO2020085506A1 (ja) 2018-10-25 2020-04-30 国立大学法人大阪大学 軟骨疾患の治療薬
KR20210082478A (ko) 2018-10-25 2021-07-05 고꾸리쯔 다이가꾸 호우징 오사까 다이가꾸 연골 질환의 치료약
WO2020149395A1 (ja) * 2019-01-18 2020-07-23 国立大学法人大阪大学 栄養障害型表皮水疱症治療薬
WO2021201260A1 (ja) * 2020-04-03 2021-10-07 株式会社ステムリム 間葉系幹細胞の動員活性を有するペプチド
WO2023037562A1 (ja) * 2021-09-07 2023-03-16 国立大学法人大阪大学 肺炎の治療薬
WO2023053384A1 (ja) * 2021-09-30 2023-04-06 国立大学法人大阪大学 脂肪肝および非アルコール性脂肪肝炎の治療薬
WO2023054666A1 (ja) * 2021-09-30 2023-04-06 国立大学法人大阪大学 脂肪肝および非アルコール性脂肪肝炎の治療薬

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