Nothing Special   »   [go: up one dir, main page]

WO2015185861A1 - Utilisation de micropeptides pour favoriser la croissance des plantes - Google Patents

Utilisation de micropeptides pour favoriser la croissance des plantes Download PDF

Info

Publication number
WO2015185861A1
WO2015185861A1 PCT/FR2015/051472 FR2015051472W WO2015185861A1 WO 2015185861 A1 WO2015185861 A1 WO 2015185861A1 FR 2015051472 W FR2015051472 W FR 2015051472W WO 2015185861 A1 WO2015185861 A1 WO 2015185861A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
plant
mipep
mipep164a
mipep165a
mipep319a
Prior art date
Application number
PCT/FR2015/051472
Other languages
English (en)
Inventor
Jean-Philippe COMBIER
Dominique LAURESSERGUES
Guillaume Becard
Original Assignee
Universite Toulouse Iii-Paul Sabatier
Centre National De La Recherche Scientifique
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from FR1455046A external-priority patent/FR3021503A1/fr
Priority claimed from FR1455045A external-priority patent/FR3021502A1/fr
Application filed by Universite Toulouse Iii-Paul Sabatier, Centre National De La Recherche Scientifique filed Critical Universite Toulouse Iii-Paul Sabatier
Priority to ES15774647T priority Critical patent/ES2834576T3/es
Priority to EP15774647.0A priority patent/EP3152309B1/fr
Priority to CA2950848A priority patent/CA2950848C/fr
Priority to DK15774647.0T priority patent/DK3152309T3/da
Priority to US15/314,519 priority patent/US10563214B2/en
Publication of WO2015185861A1 publication Critical patent/WO2015185861A1/fr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
    • C12N15/8218—Antisense, co-suppression, viral induced gene silencing [VIGS], post-transcriptional induced gene silencing [PTGS]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N37/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids
    • A01N37/44—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and a nitrogen atom attached to the same carbon skeleton by a single or double bond, this nitrogen atom not being a member of a derivative or of a thio analogue of a carboxylic group, e.g. amino-carboxylic acids
    • A01N37/46—N-acyl derivatives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
    • Y02A40/146—Genetically Modified [GMO] plants, e.g. transgenic plants

Definitions

  • the present invention relates to the use of micropeptides (peptides encoded by microRNAs or "miPEPs") to promote plant growth.
  • micropeptides peptides encoded by microRNAs or "miPEPs"
  • MicroRNAs are small non-coding RNAs, approximately 21 nucleotides after processing, that control the expression of target genes at the post-transcriptional level by degrading the target mRNA or inhibiting its translation.
  • MiRs are especially found in plants. Genes targeted by miRs are often key genes in developmental processes. For example, miR164 targets genes of the CUC family (Blein et al., Science, 322 (5909): 1835-9, 2008). The miRl 64 family is thus involved in the development of meristems and especially in
  • miR319s target transcription factors of the TCP family involved in cell growth (Nag et al, Proc Natl Acad Sci USA, 106 (52): 22534-9, 2009). The overexpression of miR319a thus leads to a leaf phenotype (phenotype Jaw, Palatnik et al, Nature,
  • the miRs could thus, by their action of regulation of the expression of certain genes, represent a target of interest to control the growth of the plants, and in particular to favor the growth.
  • RNA polymerase II This enzyme produces a primary transcript called pri-miR ", which is then matured by a protein complex containing in particular the Dicer type enzymes.
  • This maturation leads first to the formation of a miR precursor called "pre-miR", having a secondary stem-loop structure containing the miR and its complementary miR * sequence.
  • pre-miR a miR precursor
  • the precursor is then matured resulting in the formation of a shorter double-stranded RNA containing miR and miR *.
  • the miR is then supported by the RISC complex which cleaves the mRNA of the target gene or inhibits its translation.
  • miRs and by extension their primary transcript, have always been considered, by their particular mode of action, as non-coding regulatory RNAs and producing no peptide.
  • the inventors have recently demonstrated in the patent application FR 13/60727 the existence of micropeptides (or "miPEPs", microRNA encoded PEPtides) capable of modulating the accumulation of miRs.
  • the present invention aims to provide new tools effective and ecological to promote plant growth.
  • One of the aspects of the invention is to propose a new use of miPEPs to promote plant growth.
  • Another aspect of the invention also relates to a new method of growing plants.
  • Another aspect of the invention is to provide a composition of miPEPs for promoting plant growth.
  • One of the other aspects of the invention is also to provide a transgenic plant and transgenic plant parts, and their method of production.
  • One of the other aspects of the invention is also to provide organs, cells and seeds of transgenic plants.
  • Another aspect of the invention is to provide ecologically modified plants.
  • the invention thus relates to the use of a peptide for promoting the growth of a plant, said peptide being introduced into the plant, said peptide having an amino acid sequence comprising or consisting of a sequence identical to that of a miPEP naturally present in said plant,
  • said miPEP naturally present in said plant being a peptide of 3 to 100 amino acids, in particular 4 to 100 amino acids, whose sequence is encoded by an open reading frame located on the primary transcript of a miR, said miPEP being capable of modulating the accumulation of said miR in said plant, which miR regulates the expression of at least one gene involved in the development of vegetative or reproductive parts of the plant, including roots, stems, leaves or flowers.
  • the inventors have found that the use of peptides whose sequence comprises or consists of a sequence identical to that of miPEPs encoded on the primary miRs transcripts, makes it possible to promote the growth of plants.
  • microRNA non-coding microRNA
  • miR miR
  • small RNA molecules of about 21 nucleotides, which are not translated and do not lead to a peptide or a protein.
  • the miRs provide a function of regulation of certain genes via post-transcriptional mechanisms, for example via the RISC complex.
  • the "primary transcript of miR” corresponds to the RNA molecule directly obtained from the transcription of the DNA molecule. Generally, this primary transcript undergoes one or more post-transcriptional modifications, which result, for example, in a particular structure of RNA or cleavage of certain RNA pallies by splicing phenomena, and which lead to the precursor form of miR or (" pre-miR "), then to the mature form of miR.
  • the terms "micropeptides” and “miPEPs” are equivalent and may be used interchangeably. They define a peptide which is encoded by an open reading frame present on the primary transcript of a miR, and which is capable of modulating the accumulation of said miR. MiPEPs within the meaning of the present invention should not be understood as necessarily being small peptides, since "micro” does not correspond to the size of the peptide.
  • the miPEPs are peptides:
  • open reading frame or “ORF” (open reading frame) are equivalent and can be used for each other. They correspond to a nucleotide sequence in a DNA or RNA molecule that can potentially encode a peptide or a protein: said open reading frame starts with a start codon (the start codon generally coding for a methionine), followed by a codon series (each codon encoding an amino acid), and ends with a stop codon (the stop codon is not translated).
  • start codon the start codon generally coding for a methionine
  • codon series each codon encoding an amino acid
  • stop codon the stop codon is not translated
  • the ORFs may be specifically called "miORFs" when these are present on the miR primary transcripts.
  • the miORFs as defined in the invention can have a size of 15 to 303 nucleotides. Since an amino acid is encoded by a codon of 3 nucleotides, the miORFs of 15 to 303 nucleotides encode miPEPS of 4 to 100 amino acids.
  • the miORFs have a size of:
  • a miPEP may also have a size of 3 amino acids.
  • the same miPEP can be encoded by several nucleotide sequences.
  • Such nucleotide sequences different from one another at least one nucleotide but coding the same peptide, are called "degenerate sequences”.
  • the "plant” outfit generally refers to all or part of a plant whatever its stage of development (including the plant in the form of a plant). seed or young shoot), to one or more organs of the plant (such as leaves, roots, stem, flowers), to one or more cells of the plant, or to a cluster of cells of the plant. plant.
  • the term "growth” refers to the development of all or part of a plant over time.
  • the growth of the plant can thus be determined and quantified by monitoring observable evolutionary parameters for certain parts, cells or organs of the plant, such as leaves, roots, stems or flowers.
  • the parameters making it possible to determine and quantify the growth of a plant may notably be:
  • an acceleration of development (such as a larger leaf size for a plant at a given time compared to a reference plant)
  • the invention has the advantage of being ecological, in comparison with the chemical methods conventionally used in the botanical industry or in agriculture, since miPEP is a peptide which is naturally present. in the plant.
  • the invention also relates to the use of a miPEP introduced exogenously into a plant to promote growth,
  • said exogenously introduced miPEP being a peptide comprising, or consisting of, a sequence identical to that of a miPEP naturally present in said plant, which naturally occurring miPEP is a peptide of 3 to 100 amino acids, in particular from 4 to 100 acids amino acids whose sequence is encoded by an open reading frame located 5 'to the primary transcript of a miR,
  • said miPEP being capable of modulating the accumulation of said miR in said plant, which miR regulates the expression of at least one gene involved in the development of the vegetative or reproductive parts of the plant, in particular the roots, the stem, the leaves or flowers,
  • the sum of the amount of said exogenously introduced miPEP and that of said naturally occurring miPEP being strictly greater than the amount of said naturally occurring miPEP.
  • miPEP introduced exogenously refers to a miPEP introduced artificially into the plant, whether or not it exists naturally in the plant.
  • miPEP exists naturally in the plant, it is a "endogenous miPEP".
  • miPEP does not exist naturally in the plant, it is a "miPEP of exogenous origin".
  • miPEP of exogenous origin When a "miPEP of exogenous origin" is introduced into the plant, it is then necessary to also introduce the corresponding miR and its primary transcript.
  • the exogenously introduced miPEP may be either a peptide produced out of the plant (such as for example an isolated and / or purified peptide, a synthetic peptide or a peptide recombinant), a peptide produced in the plant following the unnatural introduction of a nucleic acid encoding said miPEP in said plant.
  • the plant in which the miPEP has not been introduced has a basal amount of said miPEP, which coixespond with that of said naturally occurring miPEP.
  • the use of a miPEP comprising, or consisting of, a sequence identical to that of said miPEP causes an increase in the total amount of miPEP, which modulates the accumulation of miR whose primary transcript contains the sequence encoding said miPEP.
  • the introduced miPEP is found in the plant and its introduction has no impact on its stability.
  • accumulation is meant the production of a molecule, such as a miR or a miPEP, in the cell.
  • the "modulation of accumulation" of a molecule in a cell co-responds to a change in the amount of that molecule in the cell.
  • the invention relates to the use as defined above, wherein the modulation of the accumulation of said miR is a decrease or increase in the accumulation of said miR, in particular an increase.
  • a “decrease in miR accumulation” corresponds to a decrease in the amount of said molecule in the cell.
  • an "increase in miR accumulation” is associated with an increase in the amount of said molecule in the cell.
  • the invention relates to the use as defined above, wherein said gene, involved in the development of vegetative or vegetative parts of the plant, is selected from the group consisting of: NAC1 (Accession No. ° ATlG56010.1), NAC4 (Accession No. AT5G07680.1), NAC5 (Accession No. AT5G61430.1), CUC1 (Accession No. AT3G1517 ⁇ .1) and CUC2 (Accession No. AT5G53950.1) (accession numbers according to the database The ⁇ rabidopsis Information Resource "TAIR").
  • the invention relates to the use as defined above, wherein said miRNA is niiR164a, in particular wherein said miR164a has a nucleotide sequence consisting of SEQ ID NO: 1.
  • the invention relates to the use as defined above, wherein said miRNA is miR164a, in particular, wherein said miR164a has a nucleotide sequence consisting of SEQ ID NO: 1, and said gene, involved in the development of vegetative or reproducing parts of the plant is chosen from the group consisting of: NAC1 (Accession No. ATlG56010.1), NAC4 (Accession No. AT5G07680.1), NAC5 (Accession No. AT5G61430.1), CUC1 (Accession No. AT3G15170.1) and CUC2 (Accession No. AT5G53950.1) (accession numbers according to the database The Arabidopsis Information Resource "TAIR").
  • the invention relates to the use as defined above, wherein said miR164a has a nucleotide sequence having at least 80% identity, preferably at least 90% identity, with the nucleotide sequence SEQ ID NO: 1.
  • the invention relates to the use as defined above, wherein said miPEP is miPEP164a, in particular wherein said miPEP164a has an amino acid sequence consisting of SEQ ID NO: 2.
  • the invention relates to the use as defined above, wherein said miPEP164a has an amino acid sequence having at least 80% identity, preferably at least 90% identity, with the amino acid sequence SEQ ID NO: 2.
  • the invention relates to the use as defined above, wherein said gene, involved in the development of vegetative or vegetative parts of the plant, is selected from the group consisting of: REVOLUTA (Accession No. AT5G60690), PHABULOSA (Accession No. AT2G34710), PHAVOLUTA (Accession No. AT1G30490), ATHB-8 (Accession No. AT4G32880) and ATHB-15 (Accession No. AT1G52150) (accession numbers according to the database The Arabidopsis Information Resource "TAIR").
  • said miRNA is miR165a, in particular wherein said miR165a has a nucleotide sequence consisting of SEQ ID NO: 5.
  • the invention relates to the use as defined above, wherein said miRNA is miR165a, in particular, wherein said miR165a has a nucleotide sequence consisting of SEQ ID NO: 5, and said gene , involved in the development of vegetative or reproductive parts of the plant, is selected from the group consisting of: REVOLUTA (Accession No. AT5G60690), PHABULOSA (Accession No. AT2G34710), PHAVOLUTA (Accession No. AT1G30490), ATHBS (Accession No. AT4G32880) and ATHB-15 (Accession No. AT1G52150) (accession numbers according to the database The Arabidopsis Information Resource "TAIR").
  • REVOLUTA Accession No. AT5G60690
  • PHABULOSA Accession No. AT2G34710
  • PHAVOLUTA Accession No. AT1G30490
  • ATHBS Accession No. AT4G32880
  • the invention relates to the use as defined above, wherein said miR165a has a nucleotide sequence having at least 80% identity, preferably at least 90% identity, with the nucleotide sequence SEQ ID NO: 5.
  • the invention relates to the use as defined above, wherein said miPEP is miPEP165a, in particular wherein said miPEP165a has an amino acid sequence consisting of sequence SEQ ID NO: 6.
  • the invention relates to the use as defined above, wherein said miPEP165a has an amino acid sequence having at least 80% identity, preferably at least 90% identity, with the amino acid sequence SEQ ID NO: 6.
  • the invention relates to the use as defined above, wherein said gene, involved in the development of vegetative or vegetative parts of the plant, is selected from the group consisting of: TCP3 (Accession No. ° ATlG53230.1) and TCP4 (Accession No. AT3Gl 5030.1) (accession numbers according to the database The Arabidopsis Information Resource "TAIR").
  • TCP3 accesion No. ° ATlG53230.1
  • TCP4 accesion No. AT3Gl 5030.1
  • TAIR The Arabidopsis Information Resource
  • the invention relates to the use as defined above, wherein said miRNA is miR319a, in particular, wherein said miR319a has a nucleotide sequence consisting of SEQ ID NO: 9.
  • the invention relates to the use as defined above, wherein said miRNA is miR319a, in particular, wherein said miR319a has a nucleotide sequence consisting of SEQ ID NO: 9, and said gene, involved in the development of vegetative or reproductive parts of the plant, is selected from the group consisting of: TCP 3 (Accession No. ATlG53230.1) and TCP4 (Accession No. AT3Gl 5030.1 (accession numbers according to the database The Ar bidopsis Information Resource "TIRE").
  • the invention relates to the use as defined above, wherein said miR319a has a nucleotide sequence having at least 80% identity, preferably at least 90% identity, with the SEQ ID nucleotide sequence. NO: 9.
  • the invention relates to the use as defined above, wherein said miPEP is miPEP319a, in particular wherein said miPEP319a has an amino acid sequence consisting of SEQ ID NO: 10.
  • the invention relates to the use as defined above, wherein said miPEP319a has an amino acid sequence having at least 80% identity, preferably at least 90% identity, with the sequence of amino acids SEQ ID NO: 10.
  • the invention relates to the use as defined above, wherein said plant is a cruciferous plant such as Arabidopsis thaliana, a leguminous plant such as Glycine max (soybean), Medicago truncatula and Medicago sativa (alfalfa) or a solanaceous plant such as Nicotiana benthamiana (tobacco), Solanum tiiberosicm (potato), Solanum lycopersicum (tomato) or Solanum melongena (eggplant).
  • cruciferous plant such as Arabidopsis thaliana
  • a leguminous plant such as Glycine max (soybean), Medicago truncatula and Medicago sativa (alfalfa) or a solanaceous plant
  • Nicotiana benthamiana tobacco
  • Solanum tiiberosicm potato
  • Solanum lycopersicum
  • the invention relates to the use as defined above, wherein said plant is a cruciferous plant. In one embodiment, the invention relates to the use as defined above, wherein said plant is a cruciferous plant and the miR is miR164a. In one embodiment, the invention relates to the use as defined above, wherein said plant is a cruciferous plant and the miR is miR165a.
  • the invention relates to the use as defined above, wherein said plant is a cruciferous plant and the miR is miR319a.
  • the invention relates to the use as defined above, wherein said plant is Arabidopsis thaliana.
  • the invention relates to the use as defined above, for promoting the growth of an Arabidopsis thaliana plant, in which the miPEP 164a is introduced exogenously into said Arabidopsis thaliana plant, said miPEP164a being also naturally present in said plant Arabidopsis thaliana,
  • said exogenously introduced miPEP164a being a peptide whose sequence comprises or consists of a sequence identical to that of said naturally occurring miPEP164a, said naturally occurring sequence of miPEP164a being encoded by an open reading frame located 5 'to the miR164a primary transcript , which miR164a regulates the expression of at least one gene involved in the development of vegetative or reproductive parts d! Arabidopsis thaliana,
  • the invention relates to the use as defined above, for promoting the growth of an Arabidopsis thaliana plant, in which the miPEP165a is introduced exogenously into said Arabidopsis thaliana plant, said miPEP165a being also naturally present in said plant Arabidopsis thaliana,
  • said exogenously introduced miPEP165a being a peptide whose sequence comprises or consists of a sequence identical to that of said naturally occurring miPEP165a, said naturally occurring sequence of miPEP165a being encoded by an open reading frame located at 5 'on the primary transcript of miR165a, which miR165a regulates the expression of at least one gene involved in the development of the vegetative or reproductive parts of Arabidopsis thaliana,
  • the invention relates to the use as defined above, for promoting the growth of an Arabidopsis thaliana plant, in which the miPEP319a is introduced exogenously into said Arabidopsis thaliana plant, said miPEP319a being also naturally present in said plant Arabidopsis thaliana,
  • said exogenously introduced miPEP319a being a peptide whose sequence comprises or consists of a sequence identical to that of said naturally occurring miPEP319a, said naturally occurring sequence of miPEP319a being encoded by an open reading frame located 5 'to the miR319a primary transcript which miR319a regulates the expression of at least one gene involved in the development of the vegetative or reproductive parts of Arabidopsis thaliana,
  • the invention relates to the use as defined above, wherein said miPEP is introduced externally into the plant, preferably by watering, by spraying or by the addition of a fertilizer, a soil, a growing medium or a support in contact with the plant,
  • the invention relates to the use as defined above, wherein said miPEP is introduced externally into a seed or a seed, preferably by watering, by spraying or by the addition of a fertilizer, potting soil, growing medium or substrate in contact with the seed or seed.
  • the invention relates to the method as defined above, wherein said miPEP is used to treat the plant as a seed or seed. In one embodiment, the invention relates to the use as defined above, wherein said miPEP is introduced by watering and spraying.
  • the invention relates to the use as defined above, wherein said miPEP is introduced by watering and adding a fertilizer.
  • the invention relates to the use as defined above, wherein said miPEP is introduced by spraying and adding a fertilizer. In one embodiment, the invention relates to the use as defined above, wherein said miPEP is introduced by spraying, spraying and adding a fertilizer.
  • the inventors have indeed unexpectedly found that it is possible to directly apply a composition comprising a miPEP on the plant to modulate the accumulation of miR corresponding in the plant, indicating that the miPEP is captured by the plant.
  • the invention relates to the use as defined above, wherein the plant is treated with a composition comprising 10 "9 M to 10" 4 M of said miPEP, including 10 "9 M, 10" 8 M, 10 "7 M, 10" 6 M, 10 "5 M or 10" 4 M of said miPEP.
  • compositions have a concentration of 10 -8 M to 10 -5 M for application by spraying or spraying on the plant.
  • more or less concentrated compositions may be envisaged for treating the plant with the miPEP.
  • more concentrated compositions comprising 10 "1 M to 10 " 3 M, especially 10 "2 M of miPEP, may be used in the case where the exogenously introduced miPEP is administered to the plant. by spreading.
  • the solubility properties of the miPEPs are determined in particular by their amino acid composition.
  • Hydrophilic miPEPs can be solubilized and packaged in aqueous solutions, such as water.
  • the hydrophobic miPEPs can be solubilized and packaged in solvents, such as organic solvents.
  • organic solvents are non-toxic solvents for plants in small amounts, that is to say that they have no deleterious effect on the development of the plant.
  • the organic solvents may be chosen from acetonitrile and acetic acid.
  • the miPEPs can also be solubilized and packaged in mixtures of organic solvents, such as, for example, a mixture of acetonitrile and acetic acid.
  • the miPEPs may be solubilized in a solution comprising 50% acetonitrile, 10% acetic acid and 40% water (volume / volume / volume).
  • miPEP164a is solubilized in water.
  • miPEP164a is at a concentration of 10 -9 M to 10 -4 M in water.
  • miPEP165a is solubilized in water.
  • miPEP165a is at a concentration of 10 -9 M to 10 -4 M in water
  • miPEP319a is solubilized in a solution comprising 50% acetonitrile, 10% acetic acid and 40 % water (volume / volume / volume).
  • the miPEP319a solubilized in a solution comprising 50% acetonitrile, 10% acetic acid and 40% water (volume / volume / volume) is diluted to a concentration of 10 -9 M to 10 -4 M with water.
  • the invention relates to the use as defined above, wherein said miPEP is introduced into the plant through a nucleic acid encoding said miPEP, said nucleic acid being introduced into the plant.
  • the invention relates to the use as defined above, wherein the size of the stem is increased in the plant in which said miPEP has been introduced relative to the size of the stem of a identical plant of the same age in which no miPEP was introduced, or with respect to the size of the stem of an identical plant and the same age in which said miPEP was not introduced.
  • the invention relates to the use as defined above, in which the number of leaves is increased in the plant in which said miPEP has been introduced in relation to the number of leaves of an identical plant and of the same age in which no miPEP was introduced, or in relation to the number of leaves of an identical plant and of the same age in which said miPEP was not introduced.
  • the invention relates to the use as defined above, in which the size of the leaves is increased in the plant in which said miPEP has been introduced in relation to the size of the leaves of an identical plant. and the same age in which no miPEP was introduced, or in relation to the size of the leaves of an identical plant and the same age in which said miPEP was not introduced.
  • the invention relates to the use as defined above, in which the number of roots is increased in the plant in which said miPEP has been introduced with respect to the number of roots of an identical plant and of the same age in which no miPEP has been introduced, or in relation to the number of roots of an identical plant of the same age in which said miPEP has not been introduced.
  • the invention relates to the use as defined above, in which the length of the roots is increased in the plant in which said miPEP has been introduced with respect to the length of the roots of an identical plant. and of the same age in which no miPEP has been introduced, or with respect to the length of the roots of an identical plant of the same age in which said miPEP has not been introduced.
  • the invention relates to the use as defined above, in which the number of flowers is increased in the plant in which said miPEP has been introduced in relation to the number of flowers of an identical plant and of the same age in which no miPEP has been introduced, or in relation to the number of flowers of an identical plant of the same age in which said miPEP has not been introduced.
  • the invention relates to the use as defined above, in which the date of flowering is advanced in the plant in which said miPEP has been introduced with respect to the date of flowering of an identical plant. and of the same age in which no miPEP was introduced, or in relation to the flowering date of an identical plant of the same age in which said miPEP was not introduced.
  • the invention relates to the use as defined above, wherein the size of the flower stalk is increased in the plant into which said miPEP has been introduced in relation to the size of the flower stalk. an identical plant of the same age in which no miPEP has been introduced, or in relation to the size of the flower stalk of an identical plant of the same age in which said miPEP has not been introduced.
  • Increasing parameters to determine and quantify growth in the plant in which the miPEP was introduced is preferably demonstrated by comparison with an identical plant (that is to say a plant of the same species and / or variety), of the same age and cultivated under the same conditions but in which no miPEP was introduced .
  • the invention also relates to the use of a miPEP introduced exogenously into a plant to promote growth,
  • said miPEP being encoded by the primary transcript, artificially introduced into the plant, of a miR
  • said primary transcript, said miR and said miPEP being naturally absent in the plant, said miPEP being capable of modulating the accumulation of said miR in said plant, which miR regulates the expression of at least one gene involved in the development of the vegetative parts or reproducing the plant, including roots, stems, leaves or flowers.
  • said primary transcript of miR, miR and said miPEP are introduced into the plant using a vector.
  • the invention relates to a method for promoting the growth of a plant, comprising a step of introducing a miPEP into a plant exogenously, said miPEP also occurring naturally in said plant,
  • said miPEP introduced exogenously being a peptide of 3 to 100 amino acids, in particular from 4 to 100 amino acids, the sequence of which comprises or consists of a sequence identical to that of said naturally occurring miPEP, which sequence of the naturally occurring miPEP is encoded by a open reading frame located 5 'on the primary transcript of u miR, said miPEP being capable of modulating the accumulation of said miR, which miR regulates the expression of at least one gene involved in the development of vegetative or reproducing parts of the plant, including roots, stems, leaves or flowers,
  • the sum of the amount of said exogenously introduced miPEP and that of said naturally occurring miPEP being strictly greater than the amount of said naturally occurring miPEP.
  • the invention relates to a method as defined above, wherein said gene, involved in the development of vegetative or vegetative parts of the plant, is selected from the group consisting of: NAC1 (Accession No. ATlG56010.1), NAC4 (Accession No. AT5G07680.1), NAC5 (Accession No. AT5G61430.1), CUC1 (Accession No. AT3G15170.1) and CUC2 (Accession No. AT5G53950.1).
  • NAC1 Accession No. ATlG56010.1
  • NAC4 Accession No. AT5G07680.1
  • NAC5 Accession No. AT5G61430.1
  • CUC1 Accession No. AT3G15170.1
  • CUC2 Accession No. AT5G53950.
  • the invention relates to a method as defined above, wherein said miAR is miR164a, in particular wherein said miR164a has a nucleotide sequence consisting of SEQ ID NO: 1.
  • the invention relates to a method as defined above, wherein said miRNA is miR 164a, in particular, wherein said miR164a has a nucleotide sequence consisting of SEQ ID NO: 1, and said gene , involved in the development of vegetative or reproductive parts of the plant, is selected from the group consisting of; NAC1 (Accession ⁇ ° ⁇ 1 ⁇ 56010.1), NAC4 (Accession No. AT5G07680.1), NAC5 (Accession No. AT5G61430.1), CUC1 (Accession No. AT3G15170.1) and CUC2 (Accession No. AT5G53950.1).
  • NAC1 Accession ⁇ ° ⁇ 1 ⁇ 56010.1
  • NAC4 Accession No. AT5G07680.1
  • NAC5 Accession No. AT5G61430.1
  • CUC1 Accession No. AT3G15170.1
  • CUC2 Accession No. AT5G53950.
  • the invention relates to a method as defined above, wherein said miPEP is miPEP164a, in particular wherein said miPEP 164a has an amino acid sequence consisting of SEQ ID NO: 2.
  • said gene involved in the development of vegetative or vegetative parts of the plant, is selected from the group consisting of: REVOLUTA (Accession No. AT5G60690), PHABUWSA (Accession No. AT2G34710), PHAVOLUTA (Accession No. AT1G30490), ATHB-8 (Accession No. AT4G32880) and ATTH-15 (Accession No. AT1G52150).
  • the invention relates to a method as defined above, wherein said miRNA is miR165a, in particular wherein said miR165a has a nucleotide sequence consisting of SEQ ID NO: 5.
  • the invention relates to a method as defined above, wherein said miRNA is miR165a, in particular, wherein said miR165a has a nucleotide sequence consisting of SEQ ID NO: 5, and said gene, involved in the development of vegetative or reproductive parts of the plant, is selected from the group consisting of: REVOLUTA (Accession No. AT5G60690), PHABUWSA (Accession No. AT2G34710), PHAVOLUTA (Accession No. AT1G30490), ATHB-8 (Accession No. AT4G32880) cXATHB-15 (Accession No. ATIG52150).
  • REVOLUTA Accession No. AT5G60690
  • PHABUWSA Accession No. AT2G34710
  • PHAVOLUTA Accession No. AT1G30490
  • ATHB-8 Accession No. AT4G32880
  • cXATHB-15 Accession No. ATIG52150.
  • the invention relates to a method as defined above, wherein said miPEP is miPEP165a, in particular wherein said miPEP165a has an amino acid sequence consisting of SEQ ID NO: 6.
  • the invention relates to a method as defined above, wherein said gene, involved in the development of vegetative or reproductive parts of the plant, is selected from the group consisting of: TCP3 (Accession No. ATlG53230.1) and TCP 4 (Accession No. AT3G15030.1).
  • the invention relates to a method as defined above, wherein said miRNA is miR319a, in particular wherein said miR319a has a nucleotide sequence consisting of SEQ ID NO: 9.
  • the invention relates to a method as defined above, wherein said miRNA is miR319a, in particular, wherein said miR319a has a nucleotide sequence consisting of SEQ ID NO: 9, and said gene, involved in the development vegetative or reproductive parts of the plant, is selected from the group consisting of: TCP3 (Accession No. ATl G53230.1) and TCP4 (Accession No. AT3Gl 5030.1).
  • the invention relates to a method as defined above, wherein said miPEP is miPEP319a, in particular wherein said miPEP319a has an amino acid sequence consisting of SEQ ID NO: 10.
  • the invention relates to a method as defined above, wherein said plant is a cruciferous plant such as Arabidopsis thaliano, a leguminous plant such as Glycine max (soybean), Medicago truncatula and Medicago saliva ( alfalfa) or a solanaceous plant such as Nicotiana benthamiana (tobacco), Solanum tuberosum (potato), Solanum fycopersicum (tomato) or Solanum melongena (eggplant).
  • a cruciferous plant such as Arabidopsis thaliano
  • a leguminous plant such as Glycine max (soybean), Medicago truncatula and Medicago saliva ( alfalfa) or a solanaceous plant
  • Nicotiana benthamiana tobacco
  • Solanum tuberosum potato
  • Solanum fycopersicum tomato
  • the invention relates to a method as defined above, wherein said plant is a cruciferous plant.
  • the invention relates to a method as defined above, wherein said plant is Arabidopsis thaliana.
  • the invention relates to a method as defined above, wherein said plant is a cruciferous plant and the miR is miR164a.
  • the invention relates to a method as defined above, wherein said plant is a cruciferous plant and the miR is miR165a. In one embodiment, the invention relates to a method as defined above, wherein said plant is a cruciferous plant and the miR is miR319a.
  • the invention relates to a method as defined above, for promoting the growth of an Arabidopsis thaliana plant, in which the miPEP164a is introduced exogenously into said Arabidopsis thaliana plant, said miPEP164a being also naturally occurring. present in said plant Arabidopsis thaliana,
  • said miPEP164a introduced exogenously being a peptide comprising or consisting of a sequence identical to that of said miPEP164a naturally present, which miPEP164a naturally present is a peptide of 3 to 100, in particular from 4 to 100 amino acids, whose sequence is coded by a open reading frame located 5 'on the primary transcript of miRl 64a,
  • said miPEP164a being capable of increasing the accumulation of said miRl 64a, which miRl 64a regulates the expression of at least one gene involved in the development of the vegetative or reproductive parts of Arabidopsis thaliana,
  • the invention relates to a method as defined above, for promoting the growth of an Arabidopsis thaliana plant, in which the miPEP165a is introduced exogenously into said Arabidopsis thaliana plant, said miPEP165a being also naturally occurring. present in said plant Arabidopsis thaliana,
  • said exogenously introduced miPEP165a being a peptide comprising or consisting of a sequence identical to that of said naturally occurring miPEP165a, which naturally occurring miPEP165a is a peptide of 3 to 100 amino acids, in particular from 4 to 100 amino acids whose sequence is coded by an open reading frame located 5 'on the primary transcript of miRl 65a,
  • said miPEP165a being capable of increasing the accumulation of said miRl 65a, which miRl 65a regulates the expression of at least one gene involved in the development of the vegetative or reproductive parts of Arabidopsis thaliana,
  • the invention relates to a method as defined above, for promoting the growth of a plant Arabidopsis lha ⁇ ana, wherein the miPEP319a is introduced exogenously into said plant Arabidopsis thaliana, said miPEP319a being also naturally present in said plant Arabidopsis thaliana,
  • said exogenously introduced miPEP319a being a peptide comprising or consisting of a sequence identical to that of said naturally occurring miPEP319a, which naturally occurring miPEP319a is a peptide of 3 to 100 amino acids, in particular from 4 to 100 amino acids whose sequence is coded by an open reading frame located 5 'on the primary transcript of mid 319a,
  • said miPEP319a being capable of increasing the accumulation of said miR31a, which miR319a regulates the expression of at least one gene involved in the development of the vegetative or reproductive parts of Arabidopsis thaliana,
  • the sum of the amount of said exogenously introduced miPEP319a and that of said naturally occurring miPEP319a being strictly greater than the amount of said naturally occurring miPEP319a.
  • the invention relates to a method as defined above, wherein said miPEP is introduced externally into the plant, preferably by watering, by spraying or by the addition of a fertilizer. a soil, a growing medium or a support in contact with the plant.
  • the invention relates to a method as defined above, wherein said miPEP is introduced externally into the seed or seed, preferably by watering, spraying or adding a fertilizer, potting soil, growing medium or substrate in contact with the seed or seed.
  • the invention relates to the method as defined above, wherein said miPEP is used to treat the plant as a seed or seed.
  • the invention relates to a method as defined above wherein said miPEP is administered to the plant in the form of a composition comprising 10 "9 M to 10 -4 M of said miPEP, especially 10 "9 , 10 " 8 , 10 "7 , 10 " 6 , 10 “s or 10 " 4 M of said miPEP.
  • the invention relates to a method as defined above, wherein said miPEP is introduced into the plant via a nucleic acid encoding said miPEP, said nucleic acid being introduced into the plant.
  • the invention relates to a method as defined above, in which the size of the stem is increased in the plant into which said miPEP has been introduced in relation to the size of the stem of a plant. identical and of the same age in which no miPEP was introduced, or in relation to the size of the stem of an identical plant and of the same age in which said miPEP was not introduced.
  • the invention relates to a method as defined above, in which the number of leaves is increased in the plant in which said miPEP has been introduced relative to the number of leaves of an identical plant and of same age in which no miPEP was introduced, or in relation to the number of leaves of an identical plant and of the same age in which said miPEP was not introduced.
  • the invention relates to a method as defined above, wherein the leaf size is increased in the plant in which said miPEP has been introduced relative to the leaf size of an identical plant and the same age in which no miPEP was introduced, or in relation to the size of the leaves of an identical plant and the same age in which said miPEP was not introduced.
  • the invention relates to a method as defined above, in which the number of roots is increased in the plant in which said miPEP has been introduced relative to the number of roots of an identical plant and of same age in which no miPEP was introduced, or in relation to the number of roots of an identical plant of the same age in which said miPEP was not introduced.
  • the invention relates to a method as defined above, in which the length of the roots is increased in the plant in which said miPEP has been introduced with respect to the length of the roots of an identical plant and of the same age in which no miPEP was introduced, or in relation to the length of the roots of an identical plant of the same age in which said miPEP was not introduced.
  • the invention relates to a method as defined above, in which the number of flowers is increased in the plant in which said miPEP has been introduced with respect to the number of flowers of an identical plant and of same age in which no miPEP was introduced, or in relation to the number of flowers of an identical plant and the same age in which said miPEP was not introduced.
  • the invention relates to a method as defined above, in which the date of flowering is advanced in the plant into which said miPEP has been introduced with respect to the date of flowering of an identical plant and the same age in which no miPEP was introduced, or in relation to the date of flowering of an identical plant of the same age in which said miPEP was not introduced.
  • the invention relates to a method as defined above, in which the size of the flower stalk is increased in the plant into which said miPEP has been introduced in relation to the size of the flower stalk. an identical plant of the same age in which no miPEP has been introduced, or in relation to the size of the flower stalk of an identical plant of the same age in which said miPEP has not been introduced.
  • the invention relates to a plant into which a miPEP has been introduced according to the use or method for promoting plant growth described above.
  • the invention relates to a method for producing a transgenic plant comprising:
  • step b) a step of cultivating the plant, or at least one cell of said plant, obtained in step a) under conditions making it possible to obtain a transgenic plant.
  • the invention relates to a method for producing a transgenic plant as defined above, wherein said transgenic plant obtained in step b) has improved growth over an identical plant in which said nucleic acid has not been introduced.
  • the invention relates to a method for producing a transgenic plant as defined above, wherein step a) is carried out using a vector containing said nucleic acid, preferably a plasmid. In one embodiment, the invention relates to a method of producing a transgenic plant as defined above, wherein said nucleic acid does not comprise the complete sequence of said miR.
  • the invention relates to a method for producing a transgenic plant as defined above, wherein the expression of said nucleic acid of step a) is placed under the control of a strong promoter. preferably a strong constitutive promoter such as the 35S promoter.
  • the invention relates to a method of producing a transgenic plant as defined above, wherein said gene, involved in the development of vegetative or reproductive parts of the plant, is selected from the group consisting of in: NAC1 (Accession ⁇ AT1GS010O1), NAC4 (Accession No. AT5G07680.1), NAC5 (Accession No. AT5G61430.1), CUCI (Accession No. AT3G15170.1) and CUC2 (Accession No. AT5G53950.1) .
  • the invention relates to a method of producing a transgenic plant as defined above, wherein said miRNA is miR164a, in particular wherein said miR164a has a nucleotide sequence consisting of SEQ ID NO : 1.
  • the invention relates to a method of producing a transgenic plant as defined above, wherein said miRNA is miR164a, in particular wherein said miR164a has a nucleotide sequence consisting of SEQ ID NO : 1, and said gene, involved in the development of vegetative or reproductive parts of the plant, is selected from the group consisting of: NAC1 (Accession No. ATlG56010.1), NAC4 (Accession No. AT5G07680.1), NAC5 ( Accession No.
  • the invention relates to a method of producing a transgenic plant as defined above, wherein said miPEP is miPEP164a, in particular wherein said miPEP164a has an amino acid sequence consisting of SEQ ID NO: 2.
  • the invention relates to a method for producing a transgenic plant as defined above, wherein said nucleic acid introduced in step a) comprises a nucleotide sequence consisting of SEQ ID NO: 3.
  • the invention relates to a method of producing a transgenic plant as defined above, wherein said gene, involved in the development of vegetative or reproductive parts of the plant, is selected from the group consisting of in: REVOLUTA (Accession No. AT5G60690), PHABULOSA (Accession No. AT2G34710), PHAVOLUTA (Accession No. AT1G30490), ⁇ -8 (Accession No. AT4G32880), ATHB-15 (Accession No. AT1G52150).
  • REVOLUTA Accession No. AT5G60690
  • PHABULOSA Accession No. AT2G34710
  • PHAVOLUTA Accession No. AT1G30490
  • ⁇ -8 Accession No. AT4G32880
  • ATHB-15 Accession No. AT1G52150.
  • the invention relates to a method for producing a transgenic plant as defined above, wherein said miRNA is miR165a, in particular wherein said miR165a has a nucleotide sequence consisting of SEQ ID NO : 5.
  • the invention relates to a method for producing a transgenic plant as defined above, wherein said miRNA is miR165a, in particular wherein said miR165a has a nucleotide sequence consisting of SEQ ID NO : 5, and said gene, involved in the development of vegetative parts or Reproductive plant, is selected from the group consisting of: REVOLUTA (Accession No. AT5G60690), PHABULOSA (Accession No. AT2G34710), PHAVOLUTA (Accession No. AT1G30490), ATHB-8 (Accession No. AT4G32880) and ATHB-15 (Accession No. AT1G52150).
  • REVOLUTA Accession No. AT5G60690
  • PHABULOSA Accession No. AT2G34710
  • PHAVOLUTA Accession No. AT1G30490
  • ATHB-8 Accession No. AT4G32880
  • ATHB-15 Accession No. AT1G52150
  • the invention relates to a method for producing a transgenic plant as defined above, wherein said miPEP is miPEP165a, in particular wherein said miPEP165a has an amino acid sequence consisting of SEQ ID NO: 6.
  • the invention relates to a method for producing a transgenic plant as defined above, wherein said nucleic acid introduced in step a) comprises a nucleotide sequence consisting of SEQ ID NO: 7.
  • the invention relates to a method of producing a transgenic plant as defined above, wherein said gene, involved in the development of vegetative or reproductive parts of the plant, is selected from the group consisting of in: TCP3 (Accession No. ATlG53230.1) and TCP4 (Accession No. AT3Gl 5030.1).
  • the invention relates to a method for producing a transgenic plant as defined above, wherein said miRNA is miR319a, in particular wherein said miR319a has a nucleotide sequence consisting of SEQ ID NO : 9.
  • the invention relates to a method for producing a transgenic plant as defined above, wherein said miRNA is miR319a, in particular wherein said miR319a has a nucleotide sequence consisting of SEQ ID NO : 9, and said gene, involved in the development of vegetative or reproductive parts of the plant, is selected from the group consisting of: TCP 3 (Accession No. ATlG53230.1) and TCP4 (Accession No. AT3Gl 5030.1).
  • the invention relates to a method for producing a transgenic plant as defined above, wherein said miPEP is miPEP319a, in wherein said miPEP319a has an amino acid sequence of SEQ ID NO: 10.
  • the invention relates to a method for producing a transgenic plant as defined above, wherein said nucleic acid introduced in step a) comprises a nucleotide sequence consisting of SEQ ID NO: 11.
  • the invention relates to a process for producing a transgenic plant as defined above, wherein said transgenic plant is a cruciferous plant such as Arabidopsis thaliana, a leguminous plant such as Glycine max (soybean). ), Medicago truncatula and Medicago sativa (alfalfa) or a solanaceous plant such as Nicotiana benthamiana (tobacco), Soianum tuberosum (potato), Solanum lycopersicum (tomato) or Solanum melongena (eggplant).
  • the invention relates to a method for producing a transgenic plant as defined above, wherein said transgenic plant is a cruciferous plant.
  • the invention relates to a method for producing a transgenic plant as defined above, wherein said transgenic plant is Arabidopsis thaliana.
  • the invention relates to a method for producing a transgenic plant as defined above, comprising:
  • the miPEP164a also being naturally present in said Arabidopsis thaliana plant, said naturally occurring miPEP being a peptide whose sequence is encoded by an open reading frame located at 5 'on the primary miR164a transcript, said miPEP164a being able to modulate the accumulation said miR164, which miR164a regulates the expression of at least one gene involved in the development of vegetative or reproductive parts & Arabidopsis thaliana, and b) a step of culturing the plant, or at least one cell of said plant, obtained in step a) under conditions for obtaining a transgenic Arabidopsis thaliana plant.
  • the invention relates to a method for producing a transgenic plant as defined above, comprising:
  • said miPEP165a also being naturally present in said Arabidopsis thaliana plant, said naturally occurring miPEP being a peptide whose sequence is encoded by an open reading frame situated at 5 'on the miR165a primary transcript, said miPEP165a being able to modulate the accumulation said miR165a, which miR165a regulates the expression of at least one gene involved in the development of the vegetative or reproductive parts of Arabidopsis thaliana, and
  • step b) a step of culturing the plant, or at least one cell of said plant, obtained in step a) under conditions for obtaining a transgenic Arabidopsis thaliana plant.
  • the invention relates to a method for producing a transgenic plant as defined above, comprising:
  • said miPEP319a also being naturally present in said Arabidopsis thaliana plant, said naturally occurring miPEP being a peptide whose sequence is encoded by an open reading frame situated at 5 'on the primary miR319a transcript, said miPEP319a being able to modulate the accumulation of said miR319a, which miR319a regulates the expression of at least one gene involved in the development of the vegetative or reproductive parts of Arabidopsis thaliana, and b) a step of culturing the plant, or at least one cell of said plant, obtained in step a) under conditions for obtaining a transgenic Arabidopsis thaliana plant.
  • the invention relates to a production method as defined above, wherein said miPEP is introduced into the plant via a nucleic acid encoding said miPEP, said nucleic acid being introduced into the plant. .
  • the invention relates to a method for producing a transgenic plant as defined above, wherein the size of the stem is increased in the plant into which said miPEP has been introduced in relation to the size. the stem of an identical plant of the same age in which no miPEP has been introduced, or in relation to the size of the stem of an identical plant of the same age in which said miPEP was not introduced.
  • the invention relates to a method for producing a transgenic plant as defined above, wherein the number of leaves is increased in the plant in which said miPEP has been introduced in relation to the number of leaves. an identical plant and the same age in which no miPEP was introduced, or in relation to the number of leaves of an identical plant and the same age in which said miPEP was not introduced.
  • the invention relates to a process for producing a transgenic plant as defined above, wherein leaf size is increased in the plant in which said miPEP has been introduced relative to the size of the plants. leaves of an identical plant of the same age in which no miPEP was introduced, or in relation to the size of the leaves of an identical plant and the same age in which said miPEP was not introduced.
  • the invention relates to a method for producing a transgenic plant as defined above, wherein the number of roots is increased in the plant into which said miPEP has been introduced in relation to the number of roots. of an identical plant of the same age in which no miPEP has been introduced, or ratio to the number of roots of an identical plant and the same age in which said miPEP was not introduced.
  • the invention relates to a method for producing a transgenic plant as defined above, wherein the length of the roots is increased in the plant into which said miPEP has been introduced relative to the length of the plants. roots of an identical plant of the same age in which no miPEP was introduced, or in relation to the length of the roots of an identical plant of the same age in which said miPEP was not introduced.
  • the invention relates to a method for producing a transgenic plant as defined above, wherein the number of flowers is increased in the plant into which said miPEP has been introduced in relation to the number of flowers. an identical plant and the same age in which no miPEP was introduced, or compared to the number of flowers of an identical plant and the same age in which said miPEP was not introduced.
  • the invention relates to a method for producing a transgenic plant as defined above, wherein the flowering date is advanced in the plant into which said miPEP has been introduced with respect to the date of flowering. flowering of an identical plant of the same age in which no miPEP was introduced, or in relation to the flowering date of an identical plant of the same age in which said miPEP was not introduced.
  • the invention relates to a method for producing a transgenic plant as defined above, wherein the size of the flower stalk is increased in the plant in which said miPEP has been introduced relative to the size of the floral stem of an identical plant of the same age in which no miPEP has been introduced, or compared to the size of the flower stalk of an identical plant of the same age in which said miPEP does not has not been introduced.
  • the invention also relates to a transgenic plant as obtained by the production method as defined above.
  • the invention relates to a plant in which a miPEP has been introduced according to the use or the method for promoting the development of vegetative or reproductive parts of the plant.
  • the invention relates to a composition, particularly a phytosanitary composition, comprising miPEP164a as active substance, said miPEP164a preferably consisting of SEQ ID NO: 1.
  • the invention relates to a composition, particularly a phytosanitary composition, comprising miPEP165a as active substance, said miPEP165a preferably consisting of SEQ ID NO: 5.
  • the invention relates to a composition, in particular a phytosanitary composition, comprising miPEP319a as active substance, said miPEP319a preferably consisting of SEQ ID NO: 9.
  • the invention relates to a composition as defined above, wherein said miPEP 164a is at a concentration of 10 "9 M to 10" 4 M, in particular 10 "9, 10" 8, 10 " 7, 10 "6, 10" s or LO 4 M.
  • a composition as defined above has a concentration of 10 -8 M to 10 -5 M for application by spraying or spraying on the plant.
  • more or less concentrated compositions can be envisaged to treat the plant with the miPEP.
  • more concentrated compositions comprising 10 " M to 10 " 3 M, especially 10 " M of miPEP, may be used in the case where the exogenously introduced miPEP is administered to the plant.
  • the invention relates to a composition as defined above, further comprising an excipient, a diluent or a solvent.
  • the invention relates to a composition as defined above formulated so as to form a mix.
  • the invention relates to a composition comprising in combination a seed quantity of a plant and an amount of a peptide whose sequence comprises or consists of a sequence identical to that of a miPEP naturally present in said plant. .
  • the invention relates to a composition
  • a composition comprising in combination a seed quantity of a cruciferous plant, in particular A. thaliana, and an amount of a peptide whose sequence comprises or consists of a sequence identical to that of the miPEP164a.
  • the invention relates to a composition
  • a composition comprising in combination a seed quantity of a cruciferous plant, in particular A. thaliana, and an amount of a peptide whose sequence comprises or consists of a sequence identical to that of the miPEP165a.
  • the invention relates to a composition
  • a composition comprising in combination a seed quantity of a cruciferous plant, in particular A. thaliana, and an amount of a peptide whose sequence comprises or consists of a sequence identical to that of the miPEP319a.
  • the invention relates to a composition as defined above, further comprising an excipient, a diluent or a solvent.
  • the invention relates to a composition as defined above formulated to form a coated seed.
  • the coating can be carried out according to the methods conventionally used in the food industry and can be obtained by using a material capable of breaking down in a solvent or in the earth, such as a binder or clay.
  • the coating may be used for example to confer particular properties on a composition of miPEP, or on a seed composition in combination with a miPEP.
  • the invention relates to a method for producing a recombinant peptide, the sequence of which comprises or consists of a sequence identical to that of a miPEP as defined above, comprising a step of transforming a organism with an expression vector encoding said recombinant peptide.
  • said organism is selected from the group consisting of bacteria, yeasts, fungi (other than yeasts), animal cells, plants and animals. In one embodiment, said organism is Escherichia coli.
  • the invention relates to a protocol for producing a recombinant peptide as defined above, comprising the following steps:
  • nucleic acid encoding said recombinant peptide is linked to a nucleic acid
  • a label such as GST
  • the expression vector containing said nucleic acid encoding said recombinant peptide is introduced into the E. coli bacterium,
  • the E. coli bacterium containing the expression vector is cultured in LB medium preferably up to an OD of between 0.2 and 0.4,
  • the production of the recombinant peptide is induced with IPTG, preferably for 4 to 5 hours,
  • the E. coli bacteria are centrifuged and lysed
  • said recombinant peptide is purified on a glutathione sepharose affinity column
  • the invention relates to an antibody specifically recognizing miPEP164a, particularly said miPEP164a consisting of SEQ ID NO: 2.
  • the invention relates to an antibody specifically recognizing miPEP165a, particularly said miPEP165a consisting of SEQ ID NO: 6.
  • the invention relates to an antibody specifically recognizing miPEP319a, particularly said miPEP319a consisting of SEQ ID NO: 10.
  • Such an antibody can be obtained from a method known to those skilled in the art, such as for example by injecting said miPEP164a to a non-human animal to trigger an immunization reaction and the production of antibodies by said animal.
  • the invention in another aspect, relates to a method for immunolocaising miPEP164a comprising a step of labeling a biological sample of a plant with an antibody specifically recognizing said miPEP 164a.
  • the invention in another aspect, relates to a method for immunolocaising miPEP165a comprising a step of labeling a biological sample of a plant with an antibody specifically recognizing said miPEP165a.
  • the invention in another aspect, relates to a method for immunolocaising miPEP319a comprising a step of labeling a biological sample of a plant with an antibody specifically recognizing said miPEP319a.
  • the sequences of miPEP164a, its open reading frame, miR164a and primary transcripts of miR164a in Arabidopsis thaliana are shown in Table 1.
  • miR164a uggagaagcagggcacgugca SEQ ID NO: 1 miPEP164a MPSWHGMVLLPYVKHTHASTHTHTHNIYGC SEQ ID NO: 2
  • ACELVFH miORF164a ATGCCATCATGGCATGGTATGGTTCTTTTGC SEQ ID NO: 3
  • miPEP16a The sequences of miPEP16a, from its open reading frame, miR164a and miR165 primary transcripts in Arabidopsis thaliana are shown in Table 2.
  • Pages 38 to 54 correspond to excerpts from the French patent application No. FR 13/60727 filed October 31, 2013 for "Micropeptides and their use to modulate gene expression"
  • mlcropeptides peptides encoded by microRNAs or "miPEPs"
  • miPEPs microRNAs
  • MicroRNAs are small non - coding RNAs, approximately 21 nucleotides after processing, that control the expression of target genes at the post - transcriptional level by degrading the target mRNA or inhibiting its translation. MiRs are found in plants and animals.
  • Target genes are often key genes in developmental processes. For example, they code for transcription factors or proteasome proteins.
  • miRs The regulation of the expression of miRs is very little known, but it is known in particular that it involves, like most coding genes, an RNA polymerase II: this enzyme produces a primary transcript, called “pri "miR”, which is then matured with a protein complex containing especially Dicer type enzymes.
  • This maturation leads first to the formation of a miR precursor called “pre-miR”, having a secondary stem-loop structure containing miR and its complementary miR * sequence.
  • pre-miR a miR precursor having a secondary stem-loop structure containing miR and its complementary miR * sequence.
  • the precursor is then matured resulting in the formation of a shorter double-stranded RNA containing miR and miR *.
  • the miR is then supported by the RISC complex which cleaves the mRNA of the target gene or inhibits its translation.
  • uORFs small open reading frames
  • 5 'UTR 5' UnTranslated Region
  • ORFs small open reading frames
  • uORFs can act as a regulator of translation, mainly in cis, by modulating the binding and the speed of ribosomes on the mRNA, but also in trans by a mechanism still unknown, via peptides encoded by said uORFs (Combier et al, Gene Dev, 22: 1549-1559, 2008).
  • uORFS are present upstream of coding genes.
  • One of the aspects of the subject of the application FR 13 60727 is to propose peptides capable of modulating the expression of microRNAs.
  • Another aspect of the subject of the application FR 13 60727 is to propose a means for modulating the expression of one or more target genes of a microRNA.
  • the object of the application FR 13 60727 has the advantage of allowing easier and more efficient control of the expression of genes targeted by microRNAs, using a means other than the microRNA.
  • the subject of the application FR 13 60727 thus relates to a method for the detection and identification of a micropeptide (miPEP) encoded by a nucleotide sequence contained in the sequence of the primary transcript of a microRNA,
  • microRNA The accumulation of said microRNA in a specific eukaryotic cell expressing said microRNA
  • microRNA in the presence of a peptide encoded by an identical or degenerate nucleotide sequence relative to that of said open reading frame, said peptide being present in the cell independently of the transcription of the primary transcript of said microRNA, and The accumulation of said microRNA in a eukaryotic cell of the same type as the aforementioned determined eukaryotic cell expressing said microRNA,
  • modulation of the accumulation of said microRNA in the presence of said peptide with respect to accumulation of said microRNA in the absence of said peptide indicates the existence of a micropeptide encoded by said open reading frame.
  • the method for detecting and identifying a micropeptide thus consists in detecting on the primary transcript of a microRNA the existence of an open reading frame potentially encoding a peptide.
  • the second step makes it possible to characterize said peptide, that is to say to determine if said peptide corresponds to a peptide actually produced in the cell, by seeking an effect of said peptide on the accumulation of said microRNA.
  • a large amount of peptide is introduced into a first cell expressing said microRNA.
  • the accumulation of the microRNA in this first cell is then measured and compared with the accumulation of the microRNA in a second cell identical to the first, but not containing said peptide.
  • Observing a variation in the amounts of microRNA between the cells in the presence and absence of the peptide thus indicates (i) that there is a peptide encoded on the primary transcript of said microRNA, (ii) that the sequence of this peptide is encoded by the open reading frame identified on the primary transcript of said microRNA, and (iii) said peptide acts on the accumulation of said microRNA.
  • microRNA microRNA non-coding
  • miR miRNA non-coding
  • microRNAs function to regulate certain genes via post-transcriptional mechanisms, for example via the RISC complex.
  • the primary transcript of the microRNA or "pri-miR” corresponds to the RNA molecule directly obtained from the transcription of the DNA molecule. Generally, this primary transcript undergoes one or more post-transcriptional modifications, which result, for example, in a particular structure of the RNA or a cleavage of certain portions of ⁇ RNA by splicing phenomena, and which lead to the precursor form of the microRNA. or "pre-miR", then to the mature form of microRNA or "miR".
  • micropeptides and "iPEPs” are equivalent and may be used interchangeably. They define a peptide which is encoded by an open reading frame present on the primary transcript of a microRNA, and which is capable of modulating the accumulation of said microRNA. Micropeptides within the meaning of the application FR 13 60727 should not be understood as necessarily being small peptides, since "micro” does not correspond to the size of the peptide.
  • the same micropeptide can be encoded by several nucleotide sequences.
  • Such nucleotide sequences different from one another at least one nudeotide but coding the same peptide, are called "degenerate sequences”.
  • open reading frame or "ORF” (open reading frame) are equivalent and may be used interchangeably. They correspond to a nucleotide sequence in a DNA or RNA molecule that can potentially encode a peptide or a protein: said open reading frame starts with a start codon, followed by a series of codons, and ends with a stop codon.
  • the ORFs may be specifically called “miORFs” when they are present on the primary microRNA transcripts
  • "accumulation” means the production of a molecule, such as a microRNA or a micropeptide, in the cell.
  • the "modulation" of the accumulation of a molecule in a cell corresponds to a modification of the quantity of this molecule present in the cell.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to a method for detecting and identifying a miPEP as defined above, in which the modulation of the accumulation of said microRNA is a decrease or a decrease. increasing the accumulation of said microRNA, in particular an increase.
  • a “decrease in accumulation” corresponds to a decrease in the amount of said molecule in the cell.
  • an "increase in accumulation” corresponds to an increase in the amount of said molecule in the cell.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to a method for detecting and identifying a miPEP as defined above, in which the modulation of the accumulation of said microRNA is an increase of the accumulation of said microRNA.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to a method for detecting and identifying a miPEP as defined above, in which the presence of said peptide in the cell results:
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to a method for detecting and identifying a miPEP as defined above, in which the said open reading frame of step a) is contained in the 5 'or 3' portion of said primary microRNA transcript, preferably in the 5 'portion.
  • the 5 'or 3' portions of the primary microRNA transcript correspond to the terminal portions of the RNA molecule that are cleaved during microRNA processing.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to a method for detecting and identifying a miPEP as defined above, wherein said microRNA is present in a wild plant cell.
  • a wild plant cell corresponds to a plant cell which has not been genetically modified by man.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to a method for detecting and identifying a miPEP as defined above, in which said determined eukaryotic cell, and said eukaryotic cell of the same type as the above determined eukaryotic cell, used in step b, are plant cells, preferably Medicago truncatula or Arabidopsis thaliana cells.
  • the cellular model in which the miORF has been identified and that in which the effect of the peptide on the miR is demonstrated are different.
  • the cellular model used to observe an effect of the peptide is the same as that in which the primary transcript of said microRNA was isolated.
  • the determined eukaryotic cells naturally contain said microRNA and only the peptide to be tested must be introduced into these cells.
  • said microRNA is called "endogenous origin" because it naturally exists in the cells. Nevertheless, in one cell, other copies of a microRNA of endogenous origin may be added, for example by introducing into the cell a vector encoding said microRNA of endogenous origin.
  • the cellular model used to observe an effect of the peptide is different from that in which the primary transcript of said microRNA was isolated.
  • the determined eukaryotic cells contain neither the microRNA nor the peptide to be tested. These two elements must therefore be introduced into these cells.
  • said microRNA is called "exogenous origin" because it does not exist naturally in cells.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to a method for detecting and identifying a miPEP as defined above, wherein said microRNA is of endogenous origin in said eukaryotic cell and in said eukaryotic cell of the same type as said eukaryotic cell determined, used in step b).
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to a method for detecting and identifying a miPEP as defined above in which said microRNA is of exogenous origin in said eukaryotic cell and in said eukaryotic cell of the same type as the above determined eukaryotic cell, used in step b), said eukaryotic cells containing a vector for the expression of said microRNA.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to a method for detecting and identifying a miPEP as defined above, in which the accumulation of said microRNA is determined by implementing an RT -PCR quantitative or a Northern blot.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to a method for detecting and identifying a miPEP as defined above, in which 5 accumulating said microRNA is determined by implementing a microarray or RNA.
  • the accumulation of said microRNA can be determined using molecular biology techniques for assaying specific nucleic acid molecules.
  • the subject of the application FR 13 60727 also relates to a method for detecting and identifying a microRNA whose sequence of the primary transcript contains a nucleotide sequence encoding a miPEP,
  • modulation of the accumulation of said microRNA in the presence of said peptide with respect to accumulation of said microRNA in the absence of said peptide indicates the existence of a microRNA whose primary transcript contains a nucleotide sequence encoding a micropeptide.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to a method for detecting and identifying a microRNA as defined above, in which the modulation of the accumulation of said microRNA is a decrease or a decrease. increasing the accumulation of said microRNA, in particular an increase.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to a method for the detection and identification of a microRNA as defined above, in which the presence of said peptide in the cell results:
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to a method for detecting and identifying a microRNA as defined above, in which the said open reading frame of step a) is contained in the 5 'or 3' portion of said primary microRNA transcript, preferably in the 5 'portion.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to a method for detecting and identifying a microRNA as defined above, wherein said microRNA is present in a wild plant cell.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to a method for detecting and identifying a microRNA as defined above, in which said eukaryotic cell, and said eukaryotic cell of the same type as the said determined eukaryotic cell, used in step b) are plant cells, preferably Medicago truncatula cells.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to a method for detecting and identifying a microRNA as defined above, wherein said microRNA is of endogenous origin in said eukaryotic cell and in said eukaryotic cell of the same type as the above determined eukaryotic cell, used in step b).
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to a method for the detection and identification of a microRNA as defined above in which said microRNA is of exogenous origin in said eukaryotic cell and in said eukaryotic cell of the same type as the above determined eukaryotic cell, used in step b), said eukaryotic cells containing a vector for the expression of said microRNA.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to a method for detecting and identifying a microRNA as defined above, in which the acceleration of said microRNA is determined by implementing a quantitative RT-PCR or a Northern blot.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to a method for detecting and identifying a microRNA as defined above, in which the accumulation of said microRNA is determined by implementing a chip DNA or RNA.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to a miPEP as obtained by the implementation of the method as defined above.
  • Another aspect of the subject of the application FR 13 60727 also relates to a miPEP of 4 to 100 amino acids, preferably 4 to 40 amino acids, encoded by a nucleotide sequence contained in the primary transcript of a microRNA, said miPEP being able to modulate the accumulation of said microRNA in a eukaryotic cell.
  • miORFS can be identified on the primary transcript of a microRNA, indicating that a primary microRNA transcript can potentially encode several miPEPs.
  • miPEP effect of a miPEP is generally specific to a single microRNA, namely that resulting from the primary transcript encoding said miPEP.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to a miPEP as defined above, said nucleotide sequence being contained in the 5 'or 3' portion of said primary transcript of a microRNA, preferably in the part 5 '.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to a miPEP as defined above, said nucleotide sequence corresponding to the first open reading frame present on said primary transcript of a microRNA. In one embodiment, the subject of the application FR 13 60727 relates to a miPEP as defined above, said miPEP having a basic isoelectric point, preferably greater than 8. In another aspect, the subject of the application FR 13 60727 relates to a nucleic acid molecule encoding a miPEP as defined above.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to a vector comprising at least one nucleic acid molecule as defined above.
  • the subject of the application FR 13 60727 also relates to the use of at least:
  • a determined eukaryotic cell capable of expressing a microRNA, the primary transcript of which contains at least one nucleotide sequence encoding said at least one miPEP and whose accumulation is modulated by said at least one miPEP,
  • the subject of the application FR 13 60727 also relates to the use of at least:
  • miPEP of 4 to 100 amino acids, preferably 4 to 40 amino acids, encoded by a nucleotide sequence contained in the primary transcript of a microRNA, said miPEP being capable of modulating the accumulation of said microRNA in a eukaryotic cell,
  • a determined eukaryotic cell capable of expressing a microRNA, the primary transcript of which contains at least one nucleotide sequence encoding said at least one miPEP and whose accumulation is modulated by said at least one miPEP,
  • the subject of the application FR 13 60727 is based on the surprising observation made by the inventors that it is possible to modulate the expression of one or more target genes of the same microRNA by modulating the accumulation of said microRNA to using a miPEP.
  • the ob and the application FR 13 60727 relates to the use as defined above wherein said determined eukaryotic cell is a plant cell.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to the use as defined above in which said microRNA and said gene are of endogenous origin in said determined eukaryotic cell.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to the use as defined above in which said microRNA and said gene are of exogenous origin in said determined eukaryotic cell, said determined eukaryotic cell containing at least a vector allowing expression of said microRNA and said gene.
  • endogenous origin indicates that the microRNA and / or the gene may be present naturally in the cell in question. Artificially, other copies of the microRNA and / or endogenous gene of origin can nevertheless be added to the cell in question, for example by cloning.
  • exogenous origin indicates that the microRNA and / or the gene are never naturally present in the cell in question. It is a microRNA and / or a gene identified in another cell type or in an organism of another species, this microRNA and / or this gene are therefore necessarily introduced artificially into the cell in question.
  • a genetically transformed cell may therefore contain 2 groups of microRNAs and / or genes potentially similar in terms of sequence, one of endogenous origin and the other of exogenous origin.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to a method for modulating the expression of a gene regulated by a microRNA in a eukaryotic cell,
  • said miPEP having:
  • acclimation of said miPEP in said eukaryotic cell induces a modulation of the expression of said gene with respect to the expression of said gene without accumulation of said miPEP.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to a method of modulating the expression of a gene as defined above, in which the accumulation of said miPEP in the cell results:
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to a method of modulating the expression of a gene as defined above in which said eukaryotic cell is a plant cell.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to a method for modulating the expression of a gene as defined above in which said microRNA and said gene are of endogenous origin in said eukaryotic cell. .
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to a method for modulating the expression of a gene as defined above in which said microRNA and said gene are of exogenous origin in said eukaryotic cell.
  • said eukaryotic cell containing at least one vector allowing expression of said microRNA and said gene.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to a modified eukaryotic cell containing a peptide identical to a miPEP as defined above, which peptide is present in said eukaryotic cell independently of the transcription of the primary transcript of the microRNA. carrying the nucleotide sequence encoding said miPEP.
  • modified eukaryotic cell means that said eukaryotic cell contains a miPEP introduced artificially into the cell, either as a peptide, or via a vector encoding said miPEP.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to a modified eukaryotic cell as defined above, wherein said microRNA is of endogenous origin. In another embodiment, the subject of the application FR 13 60727 relates to a modified eukaryotic cell as defined above in which said microRNA is of exogenous origin, said modified eukaryotic cell containing a vector allowing expression of said microRNA. . In one embodiment, the subject of the application FR 13 60727 relates to a modified eukaryotic cell as defined above, said cell being a plant cell. In another aspect, the subject of the application FR 13 60727 relates to a plant comprising at least one modified eukaryotic cell as defined above. In another aspect, the subject of the application FR 13 60727 relates to a composition comprising at least:
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to a pesticidal composition
  • a pesticidal composition comprising at least:
  • nucleic acid encoding said miPEP, or a vector containing said nucleic acid.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to a phytopharmaceutical composition
  • a phytopharmaceutical composition comprising at least:
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to an eliciting composition
  • an eliciting composition comprising at least:
  • eliciting composition denotes a composition capable of conferring on the plant a better aptitude for symbiosis or better resistance to different stresses, whether of thermal, water or chemical nature.
  • the subject of the application FR 13 60727 also relates to compositions acting on growth (inhibition of growth or on the contrary growth increase) and physiology (better ability to mycorrhizer, nodulate, better tolerance to different stress ) of the plant.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to a herbicidal composition
  • a herbicidal composition comprising at least:
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to an insecticidal composition
  • an insecticidal composition comprising at least:
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to the use of a composition as defined above, as a herbicide for eliminating plants or slowing down their growth, preferably as a herbicide. specific to a species or genus of plants.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to the use of a composition as defined above, as a phytopharmaceutical agent,
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to the use of a composition as defined above, for modulating the physiological parameters of a plant, in particular the biomass, the leaf surface, or the caliber of the fruit.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to the use of a composition as defined above, for the lighting of orchards in order to increase the size of the fruit.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to the use of a composition as defined above, for the production and / or selection of plant seeds, said composition being used to control parthenocarpy or the monoecie of a plant.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to the use of a composition as defined above, said composition being administered to said plant by the foliar pathway or by the root pathway. In one embodiment, the subject of the application FR 13 60727 relates to the use of a composition as defined above, for the production and / or selection of plant seeds. In one embodiment, the subject of the application FR 13 60727 relates to the use of a composition as defined above, in which said composition is used to modify the physiological parameters of said plant seeds, in particular implantation. rooting, germination and resistance to water stress. In one embodiment, the subject of the application FR 13 60727 relates to the use of a composition as defined above, wherein said composition is applied by coating or filming on said plant seeds.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to the use of a composition as defined above, as a pesticide, for eliminating plant pests or likely to be classified as such,
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to the use of a composition as defined above, as an insecticide. In one embodiment, the subject of the application FR 13 60727 relates to the use of a composition as defined above, for eliminating insect pests.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to the use of a composition as defined above, for eliminating animal species classified harmful or likely to be classified as such, in particular muridae. , especially the rat.
  • the subject of the application FR 13 60727 relates to the use of a composition as defined above, to which said composition is applied to a plant to protect it from insect pests.
  • a composition as defined above to which said composition is applied to a plant to protect it from insect pests.
  • FIGURE 1 Effects of miPEP164a treatment on miR164a expression in A. thaliana.
  • the photographs represent the results of a Northern blot analysis of the accumulation of miR164a in roots treated with water (control, left-hand photograph) or with 0.1 ⁇ l of a synthetic peptide, having identical sequence to that of miPEP164a, dissolved in water (0.1 ⁇ miPEP164a).
  • U6 RNA is used as a load control to quantify the amount of miRl 64a.
  • FIGURE 2 Effects of treatment with miPEP164a on Arabidopsis thaliana growth.
  • the photographs show two plants (top views and side views) after 3 weeks of growth: a control plant watered and sprayed with water (A) and a plant aixosed and sprayed with a composition of 0.1 ⁇ of peptide synthetic whose sequence is identical miPEP164a (B). Watering Arabidopsis thaliana plants with miPEP164a significantly increases plant growth.
  • FIGURE 3 Effects of treatment with miPEP164a on flowering date in Arabidopsis thaliana
  • FIGURE 4 Effects of treatment with miPEP164a on flowering date in Arabidopsis thaliana
  • the y-axis indicates the number of days after germination at the flowering date in a plant treated with water (left bar) or with a composition containing 1 ⁇ of miPEP164a (middle bar) and 1 ⁇ from miPEP165a (right bar).
  • FIGURE 5 Effects of a treatment with miPEP164a on the size of flower stalks in Arabidopsis thaliana
  • the y-axis indicates the height of the flower stalk in a plant treated with water (left bar) or with a composition containing 0.1 ⁇ of miPEP164a (right bar).
  • FIGURE 6 Effects of a treatment with miPEP164a on the number of flowers in Arabidopsis thaliana
  • the y-axis indicates the number of flowers after 39 days of culture in a plant treated with water (left bar) or with a composition containing 0.1 ⁇ of miPEP164a (right bar).
  • FIGURE 7 Effects of the overexpression of the Atomic EPP319a on the expression of AtmiR319a in thaliana.
  • the y-axis indicates the relative expression of AtmiR319a in a control plant (left column) or in a plant in which AtmiPEP319a is overexpressed (right column).
  • FIGURE 8 Effects of treatment with miPEP319a on Arabidopsis thaliana growth.
  • the photographs show two plants (top views and side views) after 3 weeks of growth: a control plant watered and sprayed with water (A) and a plant sprayed and sprayed with a composition of 0.1 ⁇ of peptide synthetic whose sequence is identical miPEP319a (B). Watering Arabidopsis thaliana plants with miPEP319a significantly increases plant growth.
  • ORFS were searched in RACE-PCR data (Xie et al., Plant Physio ⁇ , 138: 2145-54, 2005), in which the sequences of the 5 'end of the pri-miR 50 miRs of A. Thaliana is available.
  • ORFs capable of coding peptides of 4 to 59 amino acids have been identified in each of the pri-miRs, and in particular a miORF, identified on the pri-miR of miR164a, capable of encoding a peptide miPEP 164a.
  • A. thaliana Col-0 plants are grown on MS base medium supplemented with 10 g / l of sucrose.
  • Peptides were synthesized by Smartox and dissolved in water. Northern blot
  • RNA was loaded on 15% PAGE gel and transferred to a nylon membrane (HybondNX, Amersham). The RNA was hybridized with a radiolabeled end-labeled oligonucleotide probe to detect U6 RNA or miR164a.
  • Hybridizations were performed at 55 ° C.
  • the hybridization signals were quantified using a phophorimager (Fuji) and normalized with the U6 RNA specific probe signal.
  • Watering was carried out every 2-3 days with water for the control plants and with water containing 0.1 ⁇ or 1 ⁇ l of synthetic peptide (whose sequence is identical to miPEP164a or to miPEP165a) for test plants.
  • ORFS were sought in the RACE-PCR data (Xie et al ⁇ Plant Physiol, 138:. 2145-54, ⁇
  • ORFs capable of encoding peptides of 4 to 59 amino acids have been identified in each of the pri-miRs, and in particular a miORF, identified on the pri-miR of miR319a, capable of encoding a peptide miPEP319a.
  • A. thaliana Col-0 plants are grown on MS base medium supplemented with 10 g / l of sucrose.
  • the peptides were synthesized by Smartox and dissolved in 40% water / 50% acetonitrile / 10% (v / v / v) acetic acid solution.
  • RNA was extracted using the Tri-Reagent Reagent (MRC) according to the manufacturer's instructions, except for the precipitation of RNA which was carried out with 3 volumes of ethanol.
  • Reverse transcription of RNA was performed using the specific RTprimer rod loop primer in combination with hexamers to perform reverse transcription of high molecular weight RNA. Briefly, 1 ⁇ g of RNA was added to the specific loop stem primer (0.2 ⁇ ), the hexamere (500 ng), the RT (IX) buffer, the SuperScript Reverse transcriptase enzyme (SSIII) (a unit), dNTPs (0.2 mM each), DTT (0.8 mM) in a final reaction mixture of 25 ⁇ .
  • MRC Tri-Reagent Reagent
  • a pulsed reverse transcription reaction was performed (40 repetitions of the following cycle: 16 ° C for 2 minutes, 42 ° C for one minute and 50 ° C for one second, followed by a final inactivation of the reverse transcription to 85 ° C for 5 minutes).
  • the DNA fragments of interest were amplified with Pfu polymerase (Promega).
  • the DNA fragments were cloned for overexpression under the control of the strong 35S constitutive promoter according to the method described in Combier et al. (Genes & Dev, 22: 1549-1559, 200%).
  • MiORF319a was cloned into pBB9 according to the method described in Combier et al (Genes & Dev, 22: 1549-1559, 200%).
  • the watering was carried out every 2-3 days and the vaporization was carried out every day with water for the control plants and with water containing 0.1 ⁇ l of synthetic peptide (whose sequence is identical miPEP319a) for test plants.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

La présente invention concerne l'utilisation de micropeptides (peptides codés par des microARNs ou « miPEPs ») pour favoriser la croissance des plantes.

Description

UTILISATION DE MICROPEPTIDES POUR FAVORISER LA CROISSANCE
DES PLANTES
La présente invention concerne l'utilisation de micropeptides (peptides codés par des 5 microARNs ou « miPEPs ») pour favoriser la croissance des plantes.
Les microARNs (miRs) sont des petits ARNs non codants, d'environ 21 nucléotides après maturation, qui contrôlent l'expression de gènes cibles au niveau post-transcriptionnel, en dégradant l'ARNm cible ou en inhibant sa traduction.
10
Les miRs sont notamment rencontrés chez les plantes. Les gènes ciblés par les miRs sont souvent des gènes clés de processus développementaux. Par exemple, les miR164 ciblent des gènes de la famille CUC (Blein et al, Science, 322(5909): 1835-9, 2008). La famille des miRl 64 est ainsi impliquée dans le développement des méristèmes et notamment dans
15 le développement de la feuille (Laufs et al, Development, 131(17):4311-22, 2004;
Nikovics et al, Plant Cell, 18(ll):2929-45, 2006). Dans un autre exemple, les miR319 ciblent des facteurs de transcription de la famille TCP, impliqués dans la croissance cellulaire (Nag et al, Proc Natl Acad Sci USA, 106(52):22534-9, 2009). La surexpression du miR319a conduit ainsi à un phénotype foliaire (phénotype Jaw, Palatnik et al, Nature,
20 425(6955) :257-63, 2003) de même qu'un phénotype floral (Nag et al , 2009).
Les miRs pourraient donc, par leur action de régulation de l'expression de certains gènes, représenter une cible d'intérêt pour contrôler la croissance des plantes, et en particulier pour en favoriser la croissance.
25
La régulation de l'expression des miRs est très peu connue, mais il a été démontré que celle-ci fait intervenir, à l'instar de la plupart des gènes codants, une ARN polymerase II : cette enzyme produit un transcrit primaire, appelé «pri-miR », qui est ensuite maturé par un complexe protéique contenant notamment les enzymes type Dicer. Cette maturation 30 conduit tout d'abord à la formation d'un précurseur' de miR appelé « pre-miR », ayant une structure secondaire en forme tige-boucle contenant le miR et sa séquence miR* complémentaire. Puis le précurseur est maturé, ce qui conduit à la formation d'un ARN double brin plus court contenant le miR et le miR*. Le miR est ensuite pris en charge par le complexe RISC qui clive l'ARNm du gène cible ou bien inhibe sa traduction. Jusqu'à présent, les miRs, et par extension leur transcrit primaire, ont toujours été considérés, de par leur mode d'action particulier, comme des ARNs régulateurs non codants et ne produisant aucun peptide. Or, les Inventeurs ont récemment mis en évidence dans la demande de brevet FR 13/60727 l'existence de micropeptides (ou « miPEPs », microRNA encoded PEPtides) capables de moduler l'accumulation des miRs.
Dans ce contexte, la présente invention a pour but de proposer de nouveaux outils efficaces et écologiques pour favoriser la croissance des plantes. L'un des aspects de l'invention est de proposer une nouvelle utilisation des miPEPs pour favoriser la croissance des plantes.
Un autre aspect de l'invention concerne également un nouveau procédé de culture de plantes.
Un autre aspect de l'invention est de proposer une composition de miPEPs permettant de favoriser la croissance des plantes.
L'un des autres aspects de l'invention est également de proposer une plante transgénique et des parties de plantes transgéniques, et leur procédé de production.
L'un des autres aspects de l'invention est également de proposer des organes, cellules et semences de plantes transgéniques.
L'un des autres aspects de l'invention est de proposer des plantes modifiées écologiquement.
L'invention concerne donc l'utilisation d'un peptide pour favoriser la croissance d'une plante, ledit peptide étant introduit dans la plante, ledit peptide ayant une séquence d'acides aminés comprenant ou consistant en une séquence identique à celle d'un miPEP naturellement présent dans ladite plante,
ledit miPEP naturellement présent dans ladite plante étant un peptide de 3 à 100 acides aminés, notamment 4 à 100 acides aminés, dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé sur le transcrit primaire d'un miR, ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit miR dans ladite plante, lequel miR régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, notamment les racines, la tige, les feuilles ou les fleurs. De manière surprenante et inattendue, les Inventeurs ont constaté que l'utilisation de peptides dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle de miPEPs codés sur les transcrits primaires de miRs, permet de favoriser la croissance des plantes.
Dans l'invention, les termes « microARN », « micro ARN non codant » et « miR » sont équivalents et peuvent être utilisés l'un pour l'autre. Ils définissent des petites molécules d'ARN d'environ 21 nucléotides, qui ne sont pas traduites et ne conduisent pas à un peptide ou une protéine. Cependant, sous cette forme mature, les miRs assurent une fonction de régulation de certains gènes via des mécanismes post-transcriptionnels, comme par exemple par l'intermédiaire du complexe RISC.
Le « transcrit primaire de miR » (ou « pri-miR ») correspond lui à la molécule d'ARN directement obtenue à partir de la transcription de la molécule d'ADN. Généralement, ce transcrit primaire subit une ou plusieurs modifications post-transcriptionnelles, qui entraînent par exemple une structure particulière de TARN ou un clivage de certaines pallies de TARN par des phénomènes d'épissage, et qui conduisent à la forme précurseur du miR ou (« pre-miR »), puis à la forme mature du miR. Les termes « micropeptides » et « miPEPs » (microRNA encoded PEPtides) sont équivalents et peuvent être utilisés l'un pour l'autre. Ils définissent un peptide qui est codé par un cadre ouvert de lecture présent sur le transcrit primaire d'un miR, et qui est capable de moduler l'accumulation dudit miR. Les miPEPs au sens de la présente invention ne doivent pas être entendus comme étant nécessairement des peptides de petite taille, dans la mesure où « micro » ne correspond pas à la taille du peptide.
Comme indiqué dans la demande de brevet FR 13/60727, dont le contenu doit être considéré comme faisant partie de la présente demande, les miPEPs sont des peptides :
- de 4 à 100 acides aminés, de préférence de 4 à 60 acides aminés, notamment de 4 à 59 acides aminés,
- codés par un cadre ouvert de lecture contenu dans le transcrit primaire d'un miR, de préférence dans la partie 5' du transcrit primaire dudit miR, et
- capables de moduler l'accumulation dudit miR dans une cellule eucaryote. Les termes « cadre ouvert de lecture » ou « ORF » (open reading frame) sont équivalents et peuvent être utilisés l'un pour l'autre. Ils correspondent à une séquence de nucléotides dans une molécule d'ADN ou d'ARN pouvant potentiellement coder un peptide ou une protéine: ledit cadre ouvert de lecture débute par un codon start (le codon start codant généralement une méthionine), suivi d'une série de codons (chaque codon codant un acide aminé), et se termine par un codon stop (le codon stop n'étant pas traduit).
Dans l'invention, les ORFs peuvent être dénommés de manière spécifique « miORFs » lorsque ceux-ci sont présents sur les transcrits primaires de miR. Les miORFs tels que définis dans l'invention peuvent avoir une taille de 15 à 303 nucléotides. Un acide aminé étant codé par un codon de 3 nucléotides, les miORFs de 15 à 303 nucléotides codent des miPEPS de 4 à 100 acides aminés.
En particulier, les miORFs ont une taille de :
15, 18, 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39, 42, 45, 47, 51, 54, 57, 60, 63, 66, 69, 72, 75, 78, 81, 84, 87, 90, 93, 96, 99, 102, 105, 108, 111, 114, 117, 120, 123, 126, 129, 132, 135, 138, 141, 144, 147, 150, 153, 156, 159, 162, 165, 168, 171, 174, 177, 180, 183, 186, 189, 192, 195, 198, 201, 204, 207, 210, 213, 216, 219, 222, 225, 228, 231, 234, 237, 240, 243, 246, 249, 252, 255, 258, 261, 264, 267, 270, 273, 276, 279, 282, 285, 288, 291, 294, 297, 300 ou 303 nucléotides, et codent respectivement des miPEPs ayant une taille de :
4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100 acides aminés.
Un miPEP peut également avoir une taille de 3 acides aminés.
Compte tenu de la dégénérescence du code génétique, un même miPEP peut être codé par plusieurs séquences nucléotidiques. De telles séquences nucléotidiques, différentes entre elles d'au moins un nucléotide mais codant un même peptide, sont appelées « séquences dégénérées ».
Dans l'invention, le tenue « plante » fait référence de manière générale à tout ou partie d'une plante quel que soit son stade de développement (y compris la plante sous forme de graine ou de jeune pousse), à un ou plusieurs organes de la plante (comme par exemple les feuilles, les racines, la tige, les fleurs), à une ou plusieurs cellules de la plante, ou encore à un amas de cellules de la plante.
Dans l'invention, le terme « croissance » fait référence au développement de tout ou partie d'une plante au cours du temps. La croissance de la plante peut ainsi être déterminée et quantifiée par le suivi de paramètres évolutifs observables pour certaines parties, cellules ou organes de la plante, tels que les feuilles, les racines, les tiges ou encore les fleurs.
De manière non limitative, les paramètres permettant de déterminer et quantifier la croissance d'une plante peuvent être notamment :
la taille, la surface, le volume, la masse et le nombre de feuilles,
- la forme des feuilles,
la taille et le nombre de fleurs,
- la taille de la tige (ou de la hampe florale),
- la biomasse racinaire
- le nombre, la longueur et le niveau de ramification des racines,
la précocité de la germination,
- la vigueur germinative et la durée de phase juvénile,
la précocité du bourgeonnement,
- la précocité de l'induction florale (ou transition florale),
ou encore le nombre de cellules.
Par ailleurs, dans l'invention, l'expression « favoriser la croissance de la plante », ou « améliorer la croissance de la plante », indique :
- soit une accélération du développement (comme par exemple une taille des feuilles plus importante pour une plante à un instant donné par rapport à une plante de référence),
- soit à un accroissement du développement (comme par exemple une taille de feuilles plus importante pour une plante qui ne peut être atteinte par une plante de référence),
- soit à une accélération et un accroissement du développement de la plante.
Il est important de noter que l'utilisation selon l'invention possède l'avantage d'être écologique, en comparaison des méthodes chimiques classiquement utilisées dans l'industrie botanique ou dans l'agriculture, car le miPEP est un peptide qui est présent naturellement chez la plante. L'invention concerne également l'utilisation d'un miPEP introduit par voie exogène dans une plante pour en favoriser la croissance,
ledit miPEP introduit par voie exogène étant un peptide comprenant, ou consistant en, une séquence identique à celle d'un miPEP naturellement présent dans ladite plante, lequel miPEP naturellement présent est un peptide de 3 à 100 acides aminés, notamment de 4 à 100 acides aminés, dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire d'un miR,
ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit miR dans ladite plante, lequel miR régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, notamment les racines, la tige, les feuilles ou les fleurs,
la somme de la quantité dudit miPEP introduit par voie exogène et de celle dudit miPEP naturellement présent étant strictement supérieure à la quantité dudit miPEP naturellement présent.
Dans l'invention, l'expression « miPEP introduit par voie exogène » fait référence à un miPEP introduit artificiellement dans la plante, que celui-ci existe ou non naturellement dans la plante.
Si le miPEP existe naturellement chez la plante, il s'agit d'un « miPEP d'origine endogène ».
Si le miPEP n'existe pas naturellement chez la plante, il s'agit d'un « miPEP d'origine exogène ».
Lorsqu'il est introduit dans la plante un « miPEP d'origine exogène », il est alors nécessaire d'introduire également le miR correspondant et son transcrit primaire.
L'introduction d'un miPEP par voie exogène dans la plante implique donc une étape technique, laquelle étape n'est pas un phénomène naturel et ne correspond ni à un croisement, ni à une sélection.
Le miPEP introduit par voie exogène peut être soit un peptide produit hors de la plante (comme par exemple un peptide isolé et/ou purifié, un peptide synthétique ou un peptide recombinant), soit un peptide produit dans la plante suite à l'introduction non naturelle d'un acide nucléique codant ledit miPEP dans ladite plante.
La plante dans laquelle le miPEP n'a pas été introduit possède une quantité basale dudit miPEP, qui coixespond à celle dudit miPEP naturellement présent. L'utilisation d'un miPEP comprenant, ou consistant en, une séquence identique à celle dudit miPEP entraîne une augmentation de la quantité totale de miPEP, ce qui module l'accumulation du miR dont le transcrit primaire contient la séquence codant ledit miPEP. Pai- ailleurs, le miPEP introduit se retrouve dans la plante et son introduction n'a pas d'impact sur sa stabilité.
Dans l'invention, par « accumulation », on entend la production d'une molécule, telle qu'un miR ou un miPEP, dans la cellule.
Ainsi, la « modulation de l'accumulation » d'une molécule dans une cellule coixespond à une modification de la quantité de cette molécule dans la cellule.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans lequel la modulation de l'accumulation dudit miR est une diminution ou une augmentation de l'accumulation dudit miR, en particulier une augmentation.
Une « diminution de l 'accumulation du miR» correspond à une baisse de la quantité de ladite molécule dans la cellule.
A l'inverse, une « augmentation de l 'accumulation du miR» coixespond à une hausse de la quantité de ladite molécule dans la cellule.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit gène, impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, est choisi parmi le groupe consistant en : NÀC1 (Accession n°ATlG56010.1), NAC4 (Accession n° AT5G07680.1), NAC5 (Accession n° AT5G61430.1), CUC1 (Accession n° AT3G1517Û.1) et CUC2 (Accession n° AT5G53950.1) (numéros d'accession selon la banque de données The Àrabidopsis Information Resource « TAIR »). Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miARN est le niiR164a, en particulier, dans laquelle ledit miR164a possède une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 1. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miARN est le miR164a, en particulier, dans laquelle ledit miR164a possède une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 1, et ledit gène, impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, est choisi parmi le groupe consistant en : NAC1 (Accession n°ATlG56010.1), NÀC4 (Accession n° AT5G07680.1), NAC5 (Accession n° AT5G61430.1), CUC1 (Accession n° AT3G15170.1) et CUC2 (Accession n° AT5G53950.1) (numéros d'accession selon la banque de données The Arabidopsis Information Resource « TAIR »).
En particulier, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit ledit miR164a possède une séquence nucléotidique présentant au moins 80% d'identité, de préférence au moins 90 % d'identité, avec la séquence nucléotidique SEQ ID NO : 1.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miPEP est le miPEP164a, en particulier, dans laquelle ledit miPEP164a possède une séquence d'acides aminés consistant en la séquence SEQ ID NO : 2.
En particulier, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit ledit miPEP164a possède une séquence d'acides aminés présentant au moins 80% d'identité, de préférence au moins 90 % d'identité, avec la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 2.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit gène, impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, est choisi parmi le groupe consistant en : REVOLUTA (Accession n° AT5G60690), PHABULOSA (Accession n° AT2G34710), PHAVOLUTA (Accession n° AT1G30490), ATHB-8 (Accession n° AT4G32880) et ATHB-15 (Accession n° AT1G52150) (numéros d'accession selon la banque de données The Arabidopsis Information Resource « TAIR »). Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miARN est le miR165a, en particulier, dans laquelle ledit miR165a possède une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 5.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miARN est le miR165a, en particulier, dans laquelle ledit miR165a possède une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 5, et ledit gène, impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, est choisi parmi le groupe consistant en : REVOLUTA (Accession n° AT5G60690), PHABULOSA (Accession n° AT2G34710), PHAVOLUTA (Accession n° AT1G30490), ÂTHBS (Accession n° AT4G32880) et ATHB-15 (Accession n° AT1G52150) (numéros d'accession selon la banque de données The Arabidopsis Information Resource « TAIR »). En particulier, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit ledit miR165a possède une séquence nucléotidique présentant au moins 80% d'identité, de préférence au moins 90 % d'identité, avec la séquence nucléotidique SEQ ID NO : 5. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miPEP est le miPEP165a, en particulier, dans laquelle ledit miPEP165a possède une séquence d'acides aminés consistant en la séquence SEQ ID NO : 6.
En particulier, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit ledit miPEP165a possède une séquence d'acides aminés présentant au moins 80% d'identité, de préférence au moins 90 % d'identité, avec la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 6.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit gène, impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, est choisi parmi le groupe consistant en : TCP3 (Accession n°ATlG53230.1) et TCP4 (Accession n°AT3Gl 5030.1) (numéros d'accession selon la banque de données The Arabidopsis Information Resource « TAIR »). Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miARN est le miR319a, en particulier, dans laquelle ledit miR319a possède une séquence nucléotidique consistant en la séquence SEQ ID NO : 9. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miARN est le miR319a, en particulier, dans laquelle ledit miR319a possède une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 9, et ledit gène, impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, est choisi parmi le groupe consistant en : TCP 3 (Accession n°ATlG53230.1) et TCP4 (Accession n°AT3Gl 5030.1 (numéros d'accession selon la banque de données The Ar bidopsis Information Resource « TÂIR »).
En particulier, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miR319a possède une séquence nucléotidique présentant au moins 80% d'identité, de préférence au moins 90 % d'identité, avec la séquence nucléotidique SEQ ID NO : 9.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miPEP est le miPEP319a, en particulier, dans laquelle ledit miPEP319a possède une séquence d'acides aminés consistant en la séquence SEQ ID NO : 10.
En particulier, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miPEP319a possède une séquence d'acides aminés présentant au moins 80% d'identité, de préférence au moins 90 % d'identité, avec la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 10.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ladite plante est une plante crucifère telle qu'Arabidopsis thaliana, une plante légumineuse telle que Glycine max (soja), Medicago truncatula et Medicago sativa (luzerne) ou une plante solanacée telle que Nicotiana benthamiana (tabac), Solanum tiiberosicm (pomme de terre), Solanum lycopersicum (tomate) ou Solanum melongena (aubergine).
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ladite plante est une plante crucifère. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ladite plante est une plante crucifère et le miR est le miR164a. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ladite plante est une plante crucifère et le miR est le miR165a.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ladite plante est une plante crucifère et le miR est le miR319a.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ladite plante est Arabidopsis thaliana.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, pour favoriser la croissance d'une plante Arabidopsis thaliana, dans laquelle le miPEP 164a est introduit par voie exogène dans ladite plante Arabidopsis thaliana, ledit miPEP164a étant également naturellement présent dans ladite plante Arabidopsis thaliana,
ledit miPEP164a introduit par voie exogène étant un peptide dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle dudit miPEP164a naturellement présent, ladite séquence du miPEP164a naturellement présent étant codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire du miR164a, lequel miR164a régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices d! Arabidopsis thaliana,
la somme de la quantité dudit miPEP164a introduit par voie exogène et de celle dudit miPEP164a naturellement présent étant strictement supérieure à la quantité dudit miPEPl 64a naturellement présent chez ladite plante Arabidopsis thaliana.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, pour favoriser la croissance d'une plante Arabidopsis thaliana, dans laquelle le miPEP165a est introduit par voie exogène dans ladite plante Arabidopsis thaliana, ledit miPEP165a étant également naturellement présent dans ladite plante Arabidopsis thaliana,
ledit miPEP165a introduit par voie exogène étant un peptide dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle dudit miPEP165a naturellement présent, ladite séquence du miPEP165a naturellement présent étant codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire du miR165a, lequel miR165a régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices d'Arabidopsis thaliana,
la somme de la quantité dudit miPEP165a introduit par voie exogène et de celle dudit miPEP165a naturellement présent étant . strictement supérieure à la quantité dudit miPEP165a naturellement présent chez ladite plante Arabidopsis thaliana.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, pour favoriser la croissance d'une plante Arabidopsis thaliana, dans laquelle le miPEP319a est introduit par voie exogène dans ladite plante Arabidopsis thaliana, ledit miPEP319a étant également naturellement présent dans ladite plante Arabidopsis thaliana,
ledit miPEP319a introduit par voie exogène étant un peptide dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle dudit miPEP319a naturellement présent, ladite séquence du miPEP319a naturellement présent étant codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire du miR319a, lequel miR319a régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices d'Arabidopsis thaliana,
la somme de la quantité dudit miPEP319a introduit par voie exogène et de celle dudit miPEP319a naturellement présent étant strictement supérieure à la quantité dudit miPEP319a naturellement présent chez ladite plante Arabidopsis thaliana.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miPEP est introduit par voie externe dans la plante, de préférence par arrosage, par pulvérisation ou par l'ajout d'un engrais, d'un terreau, d'un substrat de culture ou d'un support en contact avec la plante,
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miPEP est introduit par voie externe dans une graine ou une semence, de préférence par arrosage, par pulvérisation ou par l'ajout d'un engrais, d'un terreau, d'un substrat de culture ou d'un support en contact avec la graine ou la semence.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne le procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miPEP est utilisé pour traiter la plante sous forme de graine ou de semence. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miPEP est introduit par arrosage et par pulvérisation.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miPEP est introduit par arrosage et par l'ajout d'un engrais.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miPEP est introduit par pulvérisation et par l'ajout d'un engrais. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miPEP est introduit, par arrosage, par pulvérisation et par l'ajout d'un engrais.
Les Inventeurs ont en effet constaté de manière inattendue qu'il est possible d'appliquer directement une composition comprenant un miPEP sur la plante pour moduler l'accumulation du miR correspondant dans la plante, ce qui indique que le miPEP est capté par la plante.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle la plante est traitée avec une composition comprenant 10"9 M à 10"4 M dudit miPEP, notamment 10"9 M, 10"8 M, 10"7 M, 10"6 M, 10"5 M ou 10"4 M dudit miPEP.
De préférence, les compositions ont une concentration de 10"8 M à 10"5 M pour une application par arrosage ou par pulvérisation sur la plante.
De manière complémentaire, des compositions plus ou moins concentrées peuvent être envisagées pour traiter la plante avec le miPEP. Par exemple, et de manière non limitative, des compositions plus concentrées comprenant 10"1 M à 10"3 M, notamment 10"2 M de miPEP, peuvent être utilisées dans le cas où le miPEP introduit par voie exogène est administré à la plante par épandage.
Les propriétés de solubilité des miPEPs sont déterminées notamment par leur composition en acides aminés. Les miPEPs hydrophiles peuvent être solubilisés et conditionnés dans des solutions aqueuses, telles que l'eau. Les miPEPs hydrophobes peuvent être solubilisés et conditionnés dans des solvants, tels que les solvants organiques.
Pour un traitement des plantes par les miPEPs, les solvants organiques sont des solvants non toxiques pour les plantes en faibles quantités, c'est-à-dire qu'ils n'ont pas d'effet délétères sur le développement de la plante. De manière non limitative, les solvants organiques peuvent être choisis parmi l'acétonitrile et l'acide acétique.
Les miPEPs peuvent également être solubilisés et conditionnés dans des mélanges de solvants organiques, comme par exemple un mélange d'acétonitrile et d'acide acétique. En particulier, les miPEPs peuvent être solubilisés dans une solution comprenant 50 % d'acétonitrile, 10% d'acide acétique et 40% d'eau (volume/volume/volume).
En particulier, le miPEP164a est solubilisé dans l'eau.
En particulier, le miPEP164a est à une concentration de 10"9 M à 10"4 M dans de l'eau.
En particulier, le miPEP165a est solubilisé dans l'eau.
En particulier, le miPEP165a est à une concentration de 10~9 M à 10"4 M dans de l'eau. En particulier, le miPEP319a est solubilisé dans une solution comprenant 50% d'acétonitrile, 10 % d'acide acétique et 40 % d'eau (volume/volume/volume).
En particulier, le miPEP319a solubilisé dans une solution comprenant 50% d'acétonitrile, 10 % d'acide acétique et 40 % d'eau (volume/volume/volume) est dilué à une concentration de 10"9 M à 10"4 M avec de l'eau.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miPEP est introduit dans la plante par le biais d'un acide nucléique codant ledit miPEP, ledit acide nucléique étant introduit dans la plante.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle la taille de la tige est augmentée chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport à la taille de la tige d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport à la taille de la tige d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle le nombre de feuilles est augmenté chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport au nombre de feuilles d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport au nombre de feuilles d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle la taille des feuilles est augmentée chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport à la taille des feuilles d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport à la taille des feuilles d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle le nombre de racines est augmenté chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport au nombre de racines d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport au nombre de racines d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle la longueur des racines est augmentée chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport à la longueur des racines d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport à la longueur des racines d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle le nombre de fleurs est augmenté chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport au nombre de fleurs d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport au nombre de fleurs d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle la date de floraison est avancée chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport à la date de floraison d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport à la date de floraison d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle la taille de la hampe florale est augmentée chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport à la taille de la hampe florale d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport à la taille de la hampe florale d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit.
L'augmentation des paramètres permettant de déterminer et quantifier la croissance chez la plante dans laquelle a été introduit le miPEP (tels que la taille de la tige, le nombre et la taille des feuilles, ou encore le nombre et la longueur des racines) est de préférence mis en évidence par comparaison avec une plante identique (c'est-à-dire une plante de la même espèce et/ou variété), de même âge et cultivée dans les mêmes conditions mais dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit. L'invention concerne également l'utilisation d'un miPEP introduit par voie exogène dans une plante pour en favoriser la croissance,
ledit miPEP étant codé par le transcrit primaire, introduit artificiellement dans la plante, d'un miR,
ledit transcrit primaire, ledit miR et ledit miPEP étant absents naturellement chez la plante, ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit miR dans ladite plante, lequel miR régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, notamment les racines, la tige, les feuilles ou les fleurs. Dans un mode de réalisation particulier, ledit transcrit primaire du miR, le miR et ledit miPEP sont introduits dans la plante à l'aide d'un vecteur. Dans un autre aspect, l'invention concerne un procédé pour favoriser la croissance d'une plante, comprenant une étape d'introduction d'un miPEP dans une plante par voie exogène, ledit miPEP étant également présent naturellement dans ladite plante,
ledit miPEP introduit par voie exogène étant un peptide de 3 à 100 acides aminés, notamment de 4 à 100 acides aminés dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle dudit miPEP naturellement présent, laquelle séquence du miPEP naturellement présent est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire d'u miR, ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit miR, lequel miR régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, notamment les racines, la tige, les feuilles ou les fleurs,
la somme de la quantité dudit miPEP introduit par voie exogène et de celle dudit miPEP naturellement présent étant strictement supérieure à la quantité dudit miPEP naturellement présent.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit gène, impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, est choisi parmi le groupe consistant en : NAC1 (Accession n°ATlG56010.1), NAC4 (Accession n° AT5G07680.1), NAC5 (Accession n° AT5G61430.1), CUC1 (Accession n° AT3G15170.1) et CUC2 (Accession n° AT5G53950.1).
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miAR est le miR164a, en particulier, dans lequel ledit miR164a possède une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 1.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miARN est le miR 164a, en particulier, dans lequel ledit miR164a possède une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 1, et ledit gène, impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, est choisi parmi le groupe consistant en ; NAC1 (Accession η°ΑΤ1Ο56010.1), NAC4 (Accession n° AT5G07680.1), NAC5 (Accession n° AT5G61430.1), CUC1 (Accession n° AT3G15170.1) et CUC2 (Accession n° AT5G53950.1). Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miPEP est le miPEP164a, en particulier, dans lequel ledit miPE 164a possède une séquence d'acides aminés consistant en SEQ ID NO : 2. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit gène, impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, est choisi parmi le groupe consistant en : REVOLUTA (Accession n° AT5G60690), PHABUWSA (Accession n° AT2G34710), PHAVOLUTA (Accession n° AT1G30490), ATHB-8 (Accession n° AT4G32880) et ÀTHB-15 (Accession n° AT1G52150).
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miARN est le miR165a, en particulier, dans lequel ledit miR165a possède une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 5.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miARN est le miR165a, en particulier, dans lequel ledit miR165a possède une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 5, et ledit gène, impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, est choisi parmi le groupe consistant en : REVOLUTA (Accession n° AT5G60690), PHABUWSA (Accession n° AT2G34710), PHAVOLUTA (Accession n° AT1G30490), ATHB-8 (Accession n° AT4G32880) cXATHB-15 (Accession n° ATÏG52150).
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miPEP est le miPEP165a, en particulier, dans lequel ledit miPEP165a possède une séquence d'acides aminés consistant en SEQ ID NO : 6.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit gène, impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductiices de la plante, est choisi parmi le groupe consistant en : TCP3 (Accession n°ATlG53230.1) et TCP 4 (Accession n°AT3G15030.1). Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miARN est le miR319a, en particulier, dans lequel ledit miR319a possède une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 9. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miARN est le miR319a, en particulier, dans lequel ledit miR319a possède une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 9, et ledit gène, impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, est choisi parmi le groupe consistant en : TCP3 (Accession n°ATl G53230.1) et TCP4 (Accession n°AT3Gl 5030.1).
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miPEP est le miPEP3 l9a, en particulier, dans lequel ledit miPEP319a possède une séquence d'acides aminés consistant en SEQ ID NO : 10.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ladite plante est une plante crucifère telle qu'Arabidopsis thaliano, une plante légumineuse telle que Glycine max (soja), Medicago truncatula et Medicago saliva (luzerne) ou une plante solanacée telle que Nicotiana benthamiana (tabac), Solanum tuberosum (pomme de terre), Solanum fycopersicum (tomate) ou Solanum melongena (aubergine).
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ladite plante est une plante crucifère.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ladite plante est Arabidopsis thaliana.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ladite plante est une plante crucifère et le miR est le miR164a.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ladite plante est une plante crucifère et le miR est le miR165a. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ladite plante est une plante crucifère et le miR est le miR319a.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, pour favoriser la croissance d'une plante Arabidopsis thaliana, dans lequel le miPEP164a est introduit par voie exogène dans ladite plante Arabidopsis thaliana, ledit miPEP164a étant également naturellement présent dans ladite plante Arabidopsis thaliana,
ledit miPEP164a introduit par voie exogène étant un peptide comprenant ou consistant en une séquence identique à celle dudit miPEP164a naturellement présent, lequel miPEP164a naturellement présent est un peptide de 3 à 100, notamment de 4 à 100 acides aminés, dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire du miRl 64a,
ledit miPEP164a étant capable d'augmenter l'accumulation dudit miRl 64a, lequel miRl 64a régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices d' Arabidopsis thaliana,
la somme de la quantité dudit miPEP164a introduit par voie exogène et de celle dudit miPEP164a naturellement présent étant strictement supérieure à la quantité dudit miPEP164a naturellement présent. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, pour favoriser la croissance d'une plante Arabidopsis thaliana, dans lequel le miPEP165a est introduit par voie exogène dans ladite plante Arabidopsis thaliana, ledit miPEP165a étant également naturellement présent dans ladite plante Arabidopsis thaliana,
ledit miPEP165a introduit par voie exogène étant un peptide comprenant ou consistant en une séquence identique à celle dudit miPEP165a naturellement présent, lequel miPEP165a naturellement présent est un peptide de 3 à 100 acides aminés, notamment de 4 à 100 acides aminés dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire du miRl 65a,
ledit miPEP165a étant capable d'augmenter l'accumulation dudit miRl 65a, lequel miRl 65a régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices d' 'Arabidopsis thaliana,
la somme de la quantité dudit miPEP165a introduit par voie exogène et de celle dudit miPEP165a naturellement présent étant strictement supérieure à la quantité dudit miPEP 165a naturellement présent. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, pour favoriser la croissance d'une plante Arabidopsis lhaïïana, dans lequel le miPEP319a est introduit par voie exogène dans ladite plante Arabidopsis thaliana, ledit miPEP319a étant également naturellement présent dans ladite plante Arabidopsis thaliana,
ledit miPEP319a introduit par voie exogène étant un peptide comprenant ou consistant en une séquence identique à celle dudit miPEP319a naturellement présent, lequel miPEP319a naturellement présent est un peptide de 3 à 100 acides aminés, notamment de 4 à 100 acides aminés dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire du mi 319a,
ledit miPEP319a étant capable d'augmenter l'accumulation dudit miR31 a, lequel miR319a régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices & Arabidopsis thaliana,
la somme de la quantité dudit miPEP319a introduit par voie exogène et de celle dudit miPEP319a naturellement présent étant strictement supérieure à la quantité dudit miPEP319a naturellement présent.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miPEP est introduit par voie externe dans la plante, de préférence par arrosage, par pulvérisation ou par l'ajout d'un engrais, d'un terreau, d'un substrat de culture ou d'un support en contact avec la plante.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miPEP est introduit par voie externe dans la graine ou la semence, de préférence par arrosage, par pulvérisation ou par l'ajout d'un engrais, d'un terreau, d'un substrat de culture ou d'un support en contact avec la graine ou la semence.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne le procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miPEP est utilisé pour traiter la plante sous forme de graine ou de semence.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miPEP est administré à la plante sous la forme d'une composition comprenant 10"9 M à 10'4 M dudit miPEP, en particulier 10"9, 10"8, 10"7, 10"6, 10"s ou 10"4 M dudit miPEP. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miPEP est introduit dans la plante par le biais d'un acide nucléique codant ledit miPEP, ledit acide nucléique étant introduit dans la plante.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans laquelle la taille de la tige est augmentée chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport à la taille de la tige d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport à la taille de la tige d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans laquelle le nombre de feuilles est augmenté chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport au nombre de feuilles d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport au nombre de feuilles d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans laquelle la taille des feuilles est augmentée chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport à la taille des feuilles d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport à la taille des feuilles d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans laquelle le nombre de racines est augmenté chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport au nombre de racines d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport au nombre de racines d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans laquelle la longueur des racines est augmentée chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport à la longueur des racines d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport à la longueur des racines d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans laquelle le nombre de fleurs est augmenté chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport au nombre de fleurs d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport au nombre de fleurs d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans laquelle la date de floraison est avancée chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport à la date de floraison d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport à la date de floraison d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé tel que défini ci-dessus, dans laquelle la taille de la hampe florale est augmentée chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport à la taille de la hampe florale d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport à la taille de la hampe florale d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit.
Dans un autre aspect, l'invention concerne une plante dans laquelle a été introduit un miPEP selon l'utilisation ou le procédé pour favoriser la croissance d'une plante décrits ci- dessus. Dans un autre aspect, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique comprenant:
a) une étape d'introduction d'un acide nucléique codant un miPEP de 3 à 100 acides aminés, notamment de 4 à 100 acides aminés dans une plante, ou dans au moins une cellule de ladite plante, dans des conditions permettant l'expression dudit miPEP, ledit miPEP étant également naturellement présent dans ladite plante, ledit miPEP naturellement présent étant un peptide dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire d'un miR, ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit miR dans la plante, lequel miR régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, notamment les racines, la tige, les feuilles ou les fleurs, et
b) une étape de culture de la plante, ou d'au moins une cellule de ladite plante, obtenues à l'étape a) dans des conditions permettant l'obtention d'une plante transgénique.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ladite plante transgénique obtenue à l'étape b) a une croissance améliorée par rapport à une plante identique dans laquelle ledit acide nucléique n'a pas été introduit.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel l'étape a) est réalisée à l'aide d'un vecteur contenant ledit acide nucléique, de préférence un plasmide. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit acide nucléique ne comprend pas la séquence complète dudit miR.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel l'expression dudit acide nucléique de l'étape a) est placée sous le contrôle d'un promoteur fort, de préférence un promoteur fort constitutif tel que le promoteur 35S.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit gène, impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, est choisi parmi le groupe consistant en : NÀC1 (Accession ^ATlGSôOlO.l), NÀC4 (Accession n° AT5G07680.1), NAC5 (Accession n° AT5G61430.1), CUCÎ (Accession n° AT3G15170.1) et CUC2 (Accession n° AT5G53950.1).
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miARN est le miR164a, en particulier, dans lequel ledit miR164a possède une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 1. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miARN est le miR164a, en particulier, dans lequel ledit miR164a possède une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 1 , et ledit gène, impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, est choisi parmi le groupe consistant en : NAC1 (Accession n°ATlG56010.1), NAC4 (Accession n° AT5G07680.1), NAC5 (Accession n° AT5G61430.1), CUC1 (Accession n° AT3G15170.1) et CUC2 (Accession n° AT5G53950.1). Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miPEP est le miPEP164a, en particulier, dans lequel ledit miPEP164a possède une séquence d'acides aminés consistant en SEQ ID NO : 2. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit acide nucléique introduit à l'étape a) comprend une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 3.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit gène, impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, est choisi parmi le groupe consistant en : REVOLUTA (Accession n° AT5G60690), PHABULOSA (Accession n° AT2G34710), PHAVOLUTA (Accession n° AT1G30490), ΑΤΉΒ-8 (Accession n° AT4G32880) z\ATHB-15 (Accession n° AT1G52150).
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miARN est le miR165a, en particulier, dans lequel ledit miR165a possède une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 5.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miARN est le miR165a, en particulier, dans lequel ledit miR165a possède une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 5, et ledit gène, impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, est choisi parmi le groupe consistant en : REVOLUTA (Accession n° AT5G60690), PHABULOSA (Accession n° AT2G34710), PHAVOLUTA (Accession n° AT1G30490), ATHB-8 (Accession n° AT4G32880) et ATHB-15 (Accession n° AT1G52150).
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miPEP est le miPEP165a, en particulier, dans lequel ledit miPEP165a possède une séquence d'acides aminés consistant en SEQ ID NO : 6.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit acide nucléique introduit à l'étape a) comprend une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 7. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit gène, impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, est choisi parmi le groupe consistant en : TCP3 (Accession n°ATlG53230.1) et TCP4 (Accession n°AT3Gl 5030.1).
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miARN est le miR319a, en particulier, dans lequel ledit miR319a possède une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 9.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miARN est le miR319a, en particulier, dans lequel ledit miR319a possède une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 9, et ledit gène, impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, est choisi parmi le groupe consistant en : TCP 3 (Accession n°ATlG53230.1) et TCP4 (Accession n°AT3Gl 5030.1).
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miPEP est le miPEP319a, en particulier, dans lequel ledit miPEP319a possède une séquence d'acides aminés consistant en SEQ ID NO : 10.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit acide nucléique introduit à l'étape a) comprend une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 11.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ladite plante transgénique est une plante crucifère telle qu' Arabidopsis thaliana, une plante légumineuse telle que Glycine max (soja), Medicago truncatula et Medicago sativa (luzerne) ou une plante solanacée telle que Nicotiana benthamiana (tabac), Soîanum tuberosum (pomme de terre), Solanum lycopersicum (tomate) ou Solanum melongena (aubergine). Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ladite plante transgénique est une plante crucifère.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans lequel ladite plante transgénique est Arabidopsis thaliana.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, comprenant :
a) une étape d'introduction d'un acide nucléique contenant la séquence nucléotidique SEQ ID NO : 3, codant le miPEP164a consistant en la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 2, dans une plante Arabidopsis lhaliana, ou dans au moins une cellule de ladite plante Arabidopsis thaliana, dans des conditions permettant l'expression du miPEP164a,
ledit miPEP164a étant également naturellement présent dans ladite plante Arabidopsis thaliana, ledit miPEP naturellement présent étant un peptide dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire du miR164a, ledit miPEP164a étant capable de moduler l'accumulation dudit miR164, lequel miR164a régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices & Arabidopsis thaliana, et b) une étape de culture de la plante, ou d'au moins une cellule de ladite plante, obtenues à l'étape a) dans des conditions permettant l'obtention d'une plante Arabidopsis thaliana transgénique. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, comprenant :
a) une étape d'introduction d'un acide nucléique contenant la séquence nucléotidique SEQ 1D NO : 7, codant le miPEP165a consistant en la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 6, dans une plante Arabidopsis thaliana, ou dans au moins une cellule de ladite plante Arabidopsis thaliana, dans des conditions permettant l'expression du miPEP165a,
ledit miPEP165a étant également naturellement présent dans ladite plante Arabidopsis thaliana, ledit miPEP naturellement présent étant un peptide dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire du miR165a, ledit miPEP165a étant capable de moduler l'accumulation dudit miR165a, lequel miR165a régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices à' Arabidopsis thaliana, et
b) une étape de culture de la plante, ou d'au moins une cellule de ladite plante, obtenues à l'étape a) dans des conditions permettant l'obtention d'une plante Arabidopsis thaliana transgénique.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, comprenant :
a) une étape d'introduction d'un acide nucléique contenant la séquence nucléotidique SEQ ID NO : 11, codant le miPEP319a consistant en la séquence d'acides aminés SEQ ID NO : 10, dans une plante Arabidopsis thaliana, ou dans au moins une cellule de ladite plante Arabidopsis thaliana, dans des conditions permettant l'expression du miPEP319a,
ledit miPEP319a étant également naturellement présent dans ladite plante Arabidopsis thaliana, ledit miPEP naturellement présent étant un peptide dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire du miR319a, ledit miPEP319a étant capable de moduler P accumulation dudit miR319a, lequel miR319a régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices à' Arabidopsis thaliana, et b) une étape de culture de la plante, ou d'au moins une cellule de ladite plante, obtenues à l'étape a) dans des conditions permettant l'obtention d'une plante Arabidopsis thaliana transgénique. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit miPEP est introduit dans la plante par le biais d'un acide nucléique codant ledit miPEP, ledit acide nucléique étant introduit dans la plante.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans laquelle la taille de la tige est augmentée chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport à la taille de la tige d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport à la taille de la tige d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans laquelle le nombre de feuilles est augmenté chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport au nombre de feuilles d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport au nombre de feuilles d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans laquelle la taille des feuilles est augmentée chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport à la taille des feuilles d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport à la taille des feuilles d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans laquelle le nombre de racines est augmenté chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport au nombre de racines d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport au nombre de racines d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans laquelle la longueur des racines est augmentée chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport à la longueur des racines d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport à la longueur des racines d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans laquelle le nombre de fleurs est augmenté chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport au nombre de fleurs d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport au nombre de fleurs d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans laquelle la date de floraison est avancée chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport à la date de floraison d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport à la date de floraison d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé de production d'une plante transgénique tel que défini ci-dessus, dans laquelle la taille de la hampe florale est augmentée chez la plante dans laquelle a été introduit ledit miPEP par rapport à la taille de la hampe florale d'une plante identique et de même âge dans laquelle aucun miPEP n'a été introduit, ou bien par rapport à la taille de la hampe florale d'une plante identique et de même âge dans laquelle ledit miPEP n'a pas été introduit.
Dans un aspect, l'invention concerne également une plante transgénique telle qu'obtenue par le procédé de production tel que défini ci-dessus. Dans un autre aspect, l'invention concerne une plante dans laquelle a été introduit un miPEP selon l'utilisation ou le procédé pour favoriser le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante. Dans un autre aspect, l'invention concerne une composition, en particulier une composition phytosanitaire, comprenant le miPEP164a en tant que substance active, ledit miPEP164a consistant de préférence en SEQ ID NO : 1.
Dans un autre aspect, l'invention concerne une composition, en particulier une composition phytosanitaire, comprenant le miPEP165a en tant que substance active, ledit miPEP165a consistant de préférence en SEQ ID NO : 5.
Dans un auto aspect, l'invention concerne une composition, en particulier une composition phytosanitaire, comprenant le miPEP319a en tant que substance active, ledit miPEP319a consistant de préférence en SEQ ID NO : 9.
Dans un autre aspect, l'invention concerne une composition telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit miPEP 164a est à une concentration de 10"9 M à 10"4 M, en particulier 10" 9, 10"8, 10"7, 10"6, 10"s ou lO-4 M.
De préférence, une composition telle que définie ci-dessus a une concentration de 10"8 M à 10"5 M pour une application par arrosage ou par pulvérisation sur la plante.
De manière complémentaire, des compositions plus ou moins concentrées peuvent être envisagées pour- traiter la plante avec le miPEP. Par exemple, et de manière non limitative, des compositions plus concentrées comprenant 10"' M à 10"3 M, notamment 10"z M de miPEP, peuvent être utilisées dans le cas où le miPEP introduit par voie exogène est administré à la plante par épandage. Dans un autre aspect, l'invention concerne une composition telle que définie ci-dessus, comprenant de plus un excipient, un diluant ou un solvant.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition telle que définie ci- dessus formulée de façon à former un enrobé. Dans un autre aspect, l'invention concerne une composition comprenant en combinaison une quantité de semences d'une plante et une quantité d'un peptide dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle d'un miPEP naturellement présent chez ladite plante.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition comprenant en combinaison une quantité de semences d'une plante crucifère, notamment A. thaliana, et une quantité d'un peptide dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle du miPEP164a.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition comprenant en combinaison une quantité de semences d'une plante crucifère, notamment A. thaliana, et une quantité d'un peptide dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle du miPEP165a.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition comprenant en combinaison une quantité de semences d'une plante crucifère, notamment A. thaliana, et une quantité d'un peptide dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle du miPEP319a.
Dans un autre aspect, l'invention concerne une composition telle que définie ci-dessus, comprenant de plus un excipient, un diluant ou un solvant.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition telle que définie ci- dessus formulée de façon à former une semence enrobée.
L'enrobage peut être réalisé selon les procédés classiquement utilisées dans l'industrie agroalimentaire et peut être obtenu en utilisant un matériau apte à se désagréger dans un solvant ou dans la terre, tel qu'un liant ou de l'argile.
Selon l'invention, l'enrobage peut être utilisé pour par exemple conférer des propriétés particulières à une composition de miPEP, ou encore à une composition de semences en combinaison avec un miPEP. Dans un autre aspect, l'invention concerne un protocole de production d'un peptide recombïnant, dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle d'un miPEP tel que défini ci-dessus, comprenant une étape de transformation d'un organisme avec un vecteur d'expression codant ledit peptide recombinant.
Dans un mode de réalisation, ledit organisme est choisi parmi le groupe comprenant les bactéries, les levures, les champignons (autre que levures), les cellules animales, les plantes et les animaux. Dans un mode de réalisation, ledit organisme est Escherichia coli.
En particulier, l'invention concerne un protocole de production d'un peptide recombïnant tel que défini ci-dessus, comprenant les étapes suivantes :
- l'acide nucléique codant ledit peptide recombinant est lié à un acide nucléique
codant une étiquette, telle que la GST,
le vecteur d'expression contenant ledit acide nucléique codant ledit peptide recombinant est introduit dans la bactérie E. coli,
la bactérie E. coli contenant le vecteur d'expression est cultivée dans du milieu LB de préférence jusqu'à une DO comprise entre 0.2 et 0.4,
la production du peptide recombinant est induite avec de l'IPTG, de préférence pendant 4 à 5 heures,
les bactéries E. coli sont centrifugées et lysées,
- le surnageant est filtré,
ledit peptide recombinant est purifié sur une colonne d'affinité glutathion sepharose,
si nécessaire, cliver la GST avec une protéase.
Dans un autre aspect, l'invention concerne un anticorps reconnaissant spécifiquement le miPEP164a, en particulier ledit miPEP164a consistant en SEQ ID NO : 2.
Dans un autre aspect, l'invention concerne un anticorps reconnaissant spécifiquement le miPEP165a, en particulier ledit miPEP165a consistant en SEQ ID NO : 6. Dans un autre aspect, l'invention concerne un anticorps reconnaissant spécifiquement le miPEP319a, en particulier ledit miPEP319a consistant en SEQ ID NO : 10.
Un tel anticorps peut être obtenu à partir d'un procédé connu de l'homme du métier, comme par exemple en injectant ledit miPEP164a à un animal non humain pour déclencher une réaction d'immunisation et la production d'anticorps par ledit animal.
Dans un autre aspect, l'invention concerne un procédé d'immunolocaiisation du miPEP164a comprenant une étape de marquage d'un échantillon biologique d'une plante avec un anticorps reconnaissant spécifiquement ledit miPEP 164a.
Dans un autre aspect, l'invention concerne un procédé d'immunolocaiisation du miPEP165a comprenant une étape de marquage d'un échantillon biologique d'une plante avec un anticorps reconnaissant spécifiquement ledit miPEP165a.
Dans un autre aspect, l'invention concerne un procédé d'immunolocaiisation du miPEP319a comprenant une étape de marquage d'un échantillon biologique d'une plante avec un anticorps reconnaissant spécifiquement ledit miPEP319a. Les séquences du miPEP164a, de son cadre ouvert de lecture, du miR164a et des transcrits primaires du miR164a chez Arabidopsis thaliana sont indiquées dans le tableau 1. miR164a uggagaagcagggcacgugca SEQ ID NO : 1 miPEP164a MPSWHGMVLLPYVKHTHASTHTHTHNIYGC SEQ ID NO : 2
ACELVFH miORF164a ATGCCATCATGGCATGGTATGGTTCTTTTGC SEQ ID NO : 3
CTTACGTAAAACACACTCACGCCAGCACAC ACACACACACACATAACATATACGGATGTG CGTGTGAGCTAGTCTTCCATTAA pri-miR164a AGAÇA AGCCC CC AC ACT AAAAAA AC AGT A A SEQ ID NO : 4
TATGGAATAAAAAAAAGCTTTCAAAACTTA
GCAGTTATTAGACAAGGTATTGTTTGGCCCT
AGCTAGCGATCGTTTAGCTCTCTTCACTCTC
TCACTTTTTTAGTTCAACCCTTCTTTTGCGTG
AGATGCCATCATGGCATGGTATGGTTCTTTT
GCCTTACGTAAAACACACTCACGCCAGCAC ACACACACACACACATAACATATACGGATG
TGCGTGTGAGCTAGTCTTC C ATT A ATGC A AT
CTTTGGGCCTATATATACAAACCTTTCCATA
ACCAAAGTTCTCATACTACAAACGCCCCTC
ATGTGCTTGGAAATGCGGGTGAGAATCTCC
ATGTTGGAGAAGCAGGGCACGTGCAAACCA
ACAAACACGAAATCCGTCTCATTTGCTTATT
TGCACGTACTTAACTTCTCCAACATGAGCTC
TTCACCC
Tableau 1.
Les séquences du miPEP16 a, de son cadre ouvert de lecture, du miR164a et des transcrits primaires du miR165 chez Arabidopsis thaliana sont indiquées dans le tableau 2.
Figure imgf000036_0001
Tableau 2. Les séquences du miPEP31 a, de son cadre ouvert de lecture, du miR319a et des transcrits primaires du miR319a chez Arahidopsis thaliana sont indiquées dans le tableau 3.
Figure imgf000037_0001
Tableau 3.
Les pages 38 à 54 correspondent à des extraits de la demande de brevet français n° FR 13/60727 déposée le 31 octobre 2013 pour « Micropeptides et leur utilisation pour moduler l'expression de gènes »
L 'objet de la demande FR 13 60727 concerne des mlcropeptides (peptides codés par des microARNs ou « miPEPs ») et leur utilisation pour moduler l'expre sion de gènes.
Les microARNs (miRs) sont des petits ARNs non codants, d'environ 21 nucléotides après maturation, qui contrôlent l 'expression de gènes cibles au niveau post-transcriptionnel, en dégradant l 'ARNm cible ou en inhibant sa traduction. Les miRs sont rencontrés chez les plantes et les animaux.
Les gènes cibles sont souvent des gènes clés de processus développementaux. Ils codent par exemple des facteurs de transcription ou des protéines du protéasome.
La régulation de l'expression des miRs est très peu connue, mais on sait notamment que celle-ci fait intervenir, à l 'instar de la plupart des gènes codants, une ARN polymerase II : cette enzyme produit un transcrit primaire, appelé «pri-miR », qui est ensuite maturé par un complexe protéique contenant notamment les enzymes type Dicer. Cette maturation conduit tout d'abord à la formation d'un précurseur de miR appelé « pre-miR », ayant une structure secondaire en forme tige-boucle contenant le miR et sa séquence miR* complémentaire. Puis le précurseur est maturé, ce qui conduit à la formation d'un ARN double brin plus court contenant le miR et le miR*. Le miR est ensuite pris en charge par le complexe RISC qui clive l 'ARNm du gène cible ou bien inhibe sa traduction.
Par ailleurs, il a été montré que la présence d'introns dans le transcrit primaire du microARN augmente l'expression du micro ARN mature (Schwab et al, EMBO Rep., 14(7):615-21, 2013). Cependant, du fait de difficultés expérimentales, les transcrits primaires de microARNs, ou pri-miRs, sont très peu étudiés.
Environ 50% des gènes eucaryotes possèdent, au sein de leur région 5 'UTR (5 ' UnTranslated Région) en amont de la séquence codante, de petits cadres ouverts de lecture. Ces petits cadres ouverts de lecture (ou « uORFs » pour upstream ORFs) peuvent jouer un rôle de régulateur de la traduction, principalement en cis, en modulant la fixation et la vitesse des ribosomes sur l'ARNm, mais également en trans selon un mécanisme encore inconnu, par l'intermédiaire de peptides codés par lesdits uORFs (Combier et al, Gene Dev, 22:1549-1559, 2008). Par définition, les uORFS sont présents en amont de gènes codants.
Récemment, il a également été découvert de petits ORFs dans de longs ARN non codants intergeniques (lincRNAs) dont la fonction putative, si elle existe, n 'est pas connue (Ingolia et al, Cell, 147(4): 789-802, 2011 ; Guttman & Rinn, Nature, 482(7385):339-46, 2012).
Toutefois, aucun exemple n 'a encore été rapporté concernant l'existence d'ORFs codant des peptides au sein de microARNs non codants. Jusqu 'à présent, les microARNs, et par extension leur transcrit primaire, ont toujours été considérés, de par leur mode d'action particulier, comme des ARNs régulateurs non codants ne produisant aucun peptide.
L 'un des aspects de l'objet de la demande FR 13 60727 est de proposer des peptides capables de moduler l 'expression des microARNs.
Un autre aspect de l'objet de la demande FR 13 60727 est de proposer un moyen permettant de moduler l'expression d'un ou plusieurs gènes cibles d'un microARN.
L 'objet de la demande FR 13 60727 présente l'avantage de permettre un contrôle plus facile et plus efficace de l'expression de gènes ciblés par les microARNs, à l'aide d'un moyen autre que le microARN.
L 'objet de la demande FR 13 60727 concerne ainsi un procédé de détection et d'identification d'un micropeptide (miPEP) codé par une séquence nucléotidique contenue dans la séquence du transcrit primaire d'un microARN,
comprenant :
- a) une étape de détection d'un cadre ouvert de lecture de 15 à 303 nucléotides contenu dans la séquence du transcrit primaire dudil microARN, puis
- b) une étape de comparaison entre :
• l'accumulation dudit microARN dans une cellule eucaryote déterminée exprimant ledit microARN,
en présence d'un peptide codé par une séquence nucléotidique identique ou dégénérée par rapport à celle dudit cadre ouvert de lecture, ledit peptide étant présent dans la cellule indépendamment de la transcription du transcrit primaire dudit microARN, et • l'accumulation dudit microARN dans une cellule eucaryote de même type que la susdite cellule eucaryote déterminée exprimant ledit microARN,
en absence dudit peptide,
dans lequel, une modulation de l'accumulation dudit microARN en présence dudit peptide par rapport à l 'accumulation dudit microARN en absence dudit peptide indique l 'existence d'un micropeptide codé par ledit cadre ouvert de lecture.
Dans une première étape, le procédé de détection et d'identification d'un micropeptide consiste donc à détecter sur le transcrit primaire d'un microARN l'existence d'un cadre ouvert de lecture codant potentiellement un peptide.
La deuxième étape permet, quant à elle, de caractériser ledit peptide, c 'est-à-dire de déterminer si ledit peptide correspond a un peptide réellement produit dans la cellule, en recherchant un effet dudit peptide sur l 'accumulation dudit microARN.
Pour mettre en évidence un effet du peptide sur l 'accumulation du microARN, une quantité importante de peptide est introduite dans une première cellule exprimant ledit microARN. L 'accumulation du microARN dans cette première cellule est ensuite mesurée et comparée avec l'accumulation du microARN dans une deuxième cellule identique à la première, mais ne contenant pas ledit peptide.
L 'ob ervation d'une variation des quantités de microARN entre les cellules en présence et en absence du peptide indique ainsi (i) qu 'il existe un peptide codé sur le transcrit primaire dudit microARN, (ii) que la séquence de ce peptide est codée par le cadre ouvert de lecture identifié sur le transcrit primaire dudit microARN, et (iii) ue ledit peptide agit sur l 'accumulation dudit microARN.
L Objet de la demande FR 13 60727 repose donc sur la double observation inattendue faite par les Inventeurs que d'une part, il existe des cadres ouverts de lecture susceptibles de coder des micropeptides présents sur les transcrits primaires de micro ARNs, et d'autre part que lesdits micropeptides sont capables de moduler l'accumulation desdits micro ARNs. Dans la demande FR 13 60727, les termes « microARN », « microÀRN non codant » et « miR » sont équivalents et peuvent être utilisés l'un pour l'autre. Ils définissent des petites molécules d'ÀRN d'environ 21 nucléotides, qui ne sont pas traduites et ne conduisent pas à un peptide ou une protéine.
Cependant, sous cette forme mature, les microARNs assurent une fonction de régulation de certains gènes via des mécanismes post-transcriptionnels, comme par exemple par l 'intermédiaire du complexe RISC.
Le transcrit primaire du microARN ou « pri-miR » correspond lui à la molécule d'ARN directement obtenue à partir de la transcription de la molécule d'ADN. Généralement, ce transcrit primaire subit une ou plusieurs modifications post-transcriptionnelles, qui entraînent par exemple une structure particulière de l 'ARN ou un clivage de certaines parties de Γ ARN par des phénomènes d'épissage, et qui conduisent à la forme précurseur du microARN ou « pre-miR », puis à la forme mature du microARN ou « miR ».
Les termes « micropeptides » et « iPEPs » (microRNA encoded PEPtides) sont équivalents et peuvent être utilisés l'un pour l'autre. Ils définissent un peptide qui est codé par un cadre ouvert de lecture présent sur le transcrit primaire d'un microARN, et qui est capable de moduler l'accumulation dudit microARN. Les micropeptides au sens de la demande FR 13 60727 ne doivent être entendus comme étant nécessairement des peptides de petite taille, dans la mesure où « micro » ne correspond pas à la taille du peptide.
Compte tenu de la dégénérescence du code génétique, un même micropeptide peut être codé par plusieurs séquences nucléotidiques. De telles séquences nucléotidiques, différentes entre elles d'au moins un nudéotide mais codant un même peptide, sont appelées « séquences dégénérées ».
Les termes « cadre ouvert de lecture » ou « ORF » (open reading frame) sont équivalents et peuvent être utilisés l 'un pour l 'autre. Us correspondent à une séquence de nucléotides dans une molécule d'ADN ou d'ARN pouvant potentiellement coder un peptide ou une protéine: ledit cadre ouvert de lecture débute par un codon start, suivi d'une série de codons, et se termine par un codon stop.
Dans la demande FR 13 60727, les ORFs peuvent être dénommés de manière spécifique « miORFs » lorsque ceux-ci sont présents sur les transcrits primaires de microARN Dans la demande FR 13 60727, par « accumulation », on entend la production d'une molécule, telle qu 'un microARN ou un micropeptide, dans la cellule.
Ainsi, la « modulation » de l'accumulation d'une molécule dans une cellule correspond à une modification de la quantité de cette molécule présente dans la cellule.
Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un miPEP tel que défini ci-dessus, dans lequel la modulation de l'accumulation dudit microARN est une diminution ou une augmentation de l'accumulation dudit microARN, en particulier une augmentation.
Une « diminution de l 'accumulation » correspond à une baisse de la quantité de ladite molécule dans la cellule.
A l 'inverse, une « augmentation de l 'accumulation » correspond à une hausse de la quantité de ladite molécule dans la cellule.
Dans un mode de réalisation avantageux, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un miPEP tel que défini ci-dessus, dans lequel la modulation de l'accumidation dudit microARN est une augmentation de l'accumulation dudit microARN.
Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un miPEP tel que défini ci-dessus, dans lequel la présence dudit peptide dans la cellule résulte :
- de l 'introduction dans la cellule d 'un acide nucléique codant ledit peptide, ou
- de l 'introduction dans la cellule dudit peptide
De manière à caractériser un miPEP, il est nécessaire de disposer d'un modèle cellulaire exprimant un microARN et dans lequel ledit peptide à tester est présent. Pour cela, il est possible d'introduire un peptide dans la cellule, soit en mettant la cellule en contact avec le dit peptide, soit en introduisant dans la cellule un acide nucléique codant ledit peptide, lequel acide nucléique sera alors traduit en peptide à l 'intérieur de la cellule. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un miPEP tel que défini ci-dessus, dans lequel le dit cadre ouvert de lecture de l'étape a) est contenu dans la partie 5 ' ou 3 ' dudit transcrit primaire du microARN, de préférence dans la partie 5 '.
Les parties 5 ' ou 3 ' du transcrit primaire du microARN correspondent aux parties terminales de la molécule de l'ARN qui sont clivées au cours de la maturation du microARN. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un miPEP tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit microARN est présent dans une cellule végétale sauvage.
Dans la demande FR 13 60727, une cellule végétale sauvage correspond à une cellule végétale qui n 'a pas été modifiée génétiquement par l'homme.
Dans un mode de réalisation, l 'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un miPEP tel que défini ci-dessus, dans lequel ladite cellule eucaryote déterminée, et ladite cellule eucaryote de même type que la susdite cellule eucaryote déterminée, utilisées à l 'étape b, sont des cellules végétales, de préférence des cellules de Medicago truncatula ou d'Arabidopsis thaliana.
Dans le procédé de détection et d'identification d'un micropeptide tel que défini ci-dessus, après avoir identifié un ORF susceptible de coder un peptide sur le transcrit primaire d'un microARN, il est nécessaire de disposer d'un modèle cellulaire possédant ledit microARN et ledit peptide, pour pouvoir démontrer un effet éventuel du peptide sur ledit microARN.
Deux options sont donc envisageables :
- le modèle cellulaire dans lequel a été identifié le miORF et celui dans lequel est mis en évidence l'effet du peptide sur le miR sont identiques, ou
- le modèle cellulaire dans lequel a été identifié le miORF et celui dans lequel est mis en évidence l'effet du peptide sur le miR sont différents. Dans la première option, le modèle cellulaire utilisé pour observer un effet du peptide est le même que celui dans lequel le transcrit primaire dudit microARN a été isolé. Dans ce modèle cellulaire, les cellules eucaryotes déterminées contiennent naturellement ledit microARN et seul le peptide à tester doit être introduit dans ces cellules. Dans ce contexte, ledit microARN est qualifié « d'origine endogène » car celui-ci existe naturellement dans les cellules. Néanmoins, dans une cellule, d'autres copies d'un microARN d'origine endogène peuvent être ajoutées, comme par exemple en introduisant dans la cellule un vecteur codant ledit microARN d'origine endogène. Dans la deuxième option, le modèle cellulaire utilisé pour observer un effet du peptide est différent de celui dans lequel le transcrit primaire dudit microARN a été isolé. Dans ce modèle cellulaire, les cellules eucaryotes déterminées ne contiennent ni le microARN, ni le peptide à tester. Ces deux éléments doivent donc être introduits dans ces cellules. Dans ce contexte, ledit microARN est qualifié « d'origine exogène » car celui-ci n 'existe pas naturellement dans les cellules.
Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un miPEP tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit microARN est d'origine endogène dans ladite cellule eucaryote et dans ladite cellule eucaryote de même type que la susdite cellule eucaryote déterminée, utilisées à l'étape b).
Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un miPEP tel que défini ci-dessus dans lequel ledit microARN est d'origine exogène dans ladite cellule eucaryote et dans ladite cellule eucaryote de même type que la susdite cellule eucaryote déterminée, utilisées à l'étape b), lesdites cellules eucaryotes contenant un vecteur permettant l'expression dudit microARN.
Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un miPEP tel que défini ci-dessus, dans lequel l'accumulation dudit microARN est déterminée en mettant en œuvre une RT-PCR quantitative ou un Northern blot.
Dans un mode de réalisation, l 'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un miPEP tel que défini ci-dessus, dans lequel 5 l'accumulation dudit microARN est déterminée en mettant en œuvre une puce à ADN ou à ARN.
L 'accumulation dudit microARN peut être déterminée à l'aide des techniques de biologie moléculaire permettant le dosage de molécules d'acides nucléiques spécifiques.
Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne également un procédé de détection et d'identification d'un microARN dont la séquence du transcrit primaire contient une séquence nucléotidique codant un miPEP,
comprenant :
- a) une étape de détection d'un cadre ouvert de lecture de 15 à 303 nucléotides contenu dans la séquence du transcrit primaire dudit microARN, puis
- b) une étape de comparaison entre :
• 'accumulation dudit microARN dans une cellule eucaryote déterminée exprimant ledit microARN,
en présence d'un peptide codé par une séquence nucléotidique identique ou dégénérée par rapport à celle dudit cadre ouvert de lecture, ledit peptide étant présent dans la cellule indépendamment de la transcription du transcrit primaire dudit microARN, et
* l'acc mulation dudit microARN dans une cellule eucaryote, de même type que la susdite cellule eucaryote déterminée exprimant ledit microARN,
en absence dudit peptide,
dans lequel, une modulation de l 'accumulation dudit microARN en présence dudit peptide par rapport à l'accumulation dudit microARN en absence dudit peptide indique l 'existence d'un microARN dont le transcrit primaire contient une séquence nucléotidique codant un micropeptide.
Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un microARN tel que défini ci-dessus, dans lequel la modulation de l 'accumulation dudit microARN est une diminution ou une augmentation de l 'accumulation dudit microARN, en particulier une augmentation. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un microARN tel que défini ci-dessus, dans lequel la présence dudit peptide dans la cellule résulte :
- de l'introduction dans la cellule d'un acide nucléique codant ledit peptide, ou - de l 'introduction dans la cellule de ledit peptide.
Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un microARN tel que défini ci-dessus, dans lequel le dit cadre ouvert de lecture de l'étape a) est contenu dans la partie 5 ' ou 3 ' dudit transcrit primaire du microARN, de préférence dans la partie 5'.
Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un microARN tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit microARN est présent dans une cellule végétale sauvage.
Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un microARN tel que défini ci-dessus, dans lequel ladite cellule eucaryote, et ladite cellule eucaryote de même type que la susdite cellule eucaryote déterminée, utilisées à l'étape b) sont des cellules végétales, de préférence des cellules de Medicago truncatula.
Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un microARN tel que défini ci-dessus, dans lequel ledit microARN est d'origine endogène dans ladite cellule eucaryote et dans ladite cellule eucaryote de même type que la susdite cellule eucaryote déterminée, utilisées à l 'étape b).
Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un microARN tel que défini ci-dessus dans lequel ledit microARN est d'origine exogène dans ladite cellule eucaryote et dans ladite cellule eucaryote de même type que la susdite cellule eucaryote déterminée, utilisées à l'étape b), lesdites cellules eucaryotes contenant un vecteur permettant l'expression dudit microARN.
Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un microARN tel que défini ci-dessus, dans lequel l'acc mulation dudit microARN est déterminée en mettant en œuvre une RT-PCR quantitative ou un Northern blot.
Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de détection et d'identification d'un microARN tel que défini ci-dessus, dans lequel l 'accumulation dudit microARN est déterminée en mettant en œuvre une puce à ADN ou à ARN.
Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un miPEP tel qu Obtenu par la mise en œuvre du procédé tel que défini ci-dessus.
Un autre aspect de l'objet de la demande FR 13 60727 concerne également un miPEP de 4 à 100 acides aminés, de préférence de 4 à 40 acides aminés, codé par une séquence nucléotidique contenue dans le transcrit primaire d'un microARN, ledit miPEP étant capable de moduler l 'accumulation dudit microARN dans une cellule eucaryote.
Par ailleurs, il convient de noter que plusieurs miORFS peuvent être identifiés sur le transcrit primaire d'un microARN, indiquant qu 'un transcrit primaire de microARN peut potentiellement coder plusieurs miPEPs.
II convient également de noter que l'effet d'un miPEP est généralement spécifique d'un seul microARN, à savoir celui résultant du transcrit primaire codant ledit miPEP.
Dans un mode de réalisation, l 'objet de la demande FR 13 60727 concerne un miPEP tel que défini ci-dessus, ladite séquence nucléotidique étant contenue dans la partie 5 ' ou 3 ' dudit transcrit primaire d'un microARN, de préférence dans la partie 5 '.
Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un miPEP tel que défini ci-dessus, ladite séquence nucléotidique correspondant au premier cadre ouvert de lecture présent sur ledit transcrit primaire d'un microARN. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un miPEP tel que défini ci-dessus, ledit miPEP possédant un point isoélectrique basique, de préférence supérieur à 8. Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une molécule d'acide nucléique codant un miPEP tel que défini ci-dessus.
Dans autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un vecteur comprenant au moins une molécule d'acide nucléique tel que définie ci-dessus.
Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne également l'utilisation d'au moins :
- un miPEP tel que défini ci-dessus,
- un acide nucléique codant ledit miPEP, ou
- un vecteur contenant ledit acide nucléique,
pour moduler l'expression d'au moins un gène dans une cellule eucaryote déterminée, ladite cellule eucaryote déterminée étant capable d'exprimer un microARN, dont le transcrit primaire contient au moins une séquence nucléotidique codant ledit au moins un miPEP et dont l'accumulation est modulée par ledit au moins un miPEP,
'expression dudit au moins un gène étant régulée par ledit microARN.
Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne également l'utilisation d'au moins :
- un miPEP de 4 à 100 acides aminés, de préférence de 4 à 40 acides aminés, codé par une séquence nucléotidique contenue dans le transcrit primaire d'un microARN, ledit miPEP étant capable de moduler l 'accumulation dudit microARN dans une cellule eucaryote,
- un acide nucléique codant ledit miPEP, ou
- un vecteur contenant ledit acide nucléique,
pour moduler l'expression d'au moins un gène dans une cellule eucaryote déterminée, ladite cellule eucaryote déterminée étant capable d'exprimer un microARN, dont le transcrit primaire contient au moins une séquence nucléotidique codant ledit au moins un miPEP et dont l'accumulation est modulée par ledit au moins un miPEP,
l'expression dudit a moins un gène étant régulée par ledit microARN. L 'objet de la demande FR 13 60727 repose sur l'observation surprenante faite par les Inventeurs qu'il est possible de moduler l'expression d'un ou plusieurs gènes cibles d'un même microARN en modulant l'accumulation dudit micro ARN à l'aide d'un miPEP.
Dans un mode de réalisation, l 'ob et de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus dans laquelle ladite cellule eucaryote déterminée est une cellule végétale. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus dans laquelle ledit microARN et ledit gène sont d'origine endogène dans ladite cellule eucaryote déterminée.
Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation telle que définie ci-dessus dans laquelle ledit microARN et ledit gène sont d'origine exogène dans ladite cellule eucaryote déterminée, ladite cellule eucaryote déterminée contenant au moins un vecteur permettant l 'expression dudit microARN et dudit gène.
Dans la demande FR 13 60727, les expressions « d'origine endogène » et « d'origine exogène » sont utilisées pour distinguer lesdiis microARNs et/ou les gènes d'espèces différentes, étant donné la conservation des séquences entre espèces.
Ainsi, le terme « d'origine endogène » indique que le microARN et/ou le gène peuvent être présents de manière naturelle dans la cellule en question. De manière artificielle, d'autres copies du microARN et/ou du gène d'origine endogène peuvent néanmoins être ajoutées dans la cellule en question, comme par exemple par clonage.
A l'inverse, le terme « d'origine exogène » indique que le microARN et/ou le gène ne sont jamais présents naturellement dans la cellule en question. Il s 'agit d'un microARN et/ou d'un gène identifié dans un autre type cellulaire ou dans un organisme d'une autre espèce, ce microARN et/ou ce gène sont donc nécessairement introduits artificiellement dans la cellule en question.
Dans la demande FR 13 60727, une cellule transformée génétiquement peut donc contenir 2 groupes de microARNs et/ou de gènes potentiellement proches en termes de séquence, l'un d'origine endogène et l'autre d'origine exogène. Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de modulation de l'expres ion d'un gène régulée par un microÀRN dans une cellule eucaryote,
comprenant la mise en œuvre d'une étape d'accumulation d'un miPEP dans ladite cellule eucaryote,
ledit miPEP ayant :
une taille de 4 à 100 acides aminés, de préférence 4 à 20 acides aminés, et une séquence peptidique identique à celle codée par une séquence nucléotidique contenue dans le transcrit primaire d'un microARN régulant l'expression dudit gène, et
- étant capable de moduler l'accumulation dudit microARN,
dans lequel, l'acc mulation dudit miPEP dans ladite cellule eucaryote induit une modulation de l'expression dudit gène par rapport à l'expression dudit gène sans accumulation dudit miPEP.
Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de modulation de l'expression d'un gène tel que défini ci-dessus, dans lequel l'accumulation dudit miPEP dans la cellule résulte :
- de l'introduction dans la cellule d'un acide nucléique codant ledit miPEP, ou
- de l 'introduction dans la cellule dudit miPEP.
Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de modulation de l'expression d'un gène tel que défini ci-dessus dans lequel ladite cellule eucaryote est une cellule végétale.
Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de modulation de l'expression d'un gène tel que défini ci-dessus dans lequel ledit microARN et ledit gène sont d'origine endogène dans ladite cellule eucaryote.
Dans un mode de réalisation, l 'objet de la demande FR 13 60727 concerne un procédé de modulation de l'expression d'un gène tel que défini ci-dessus dans lequel ledit microARN et ledit gène sont d'origine exogène dans ladite cellule eucaryote, ladite cellule eucaryote contenant au moins un vecteur permettant l'expression dudit microARN et dudit gène. Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une cellule eucaryote modifiée contenant un peptide identique à un miPEP tel que défini ci-dessus, lequel peptide est présent dans ladite cellule eucaryote indépendamment de la transcription du transcrit primaire du microÀRN portant la séquence nucléotidique codant ledit miPEP.
Dans la demande FR 13 60727, le terme « cellule eucaryote modifiée » signifie que ladite cellule eucaryote contient un miPEP introduit artificiellement dans la cellule, que ce soit en tant que peptide, ou par l 'intermédiaire d'un vecteur codant ledit miPEP.
Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une cellule eucaryote modifiée telle que définie ci-dessus, dans laquelle ledit microÀRN est d'origine endogène. Dans un autre mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une cellule eucaryote modifiée telle que définie ci-dessus dans laquelle ledit microARN est d'origine exogène, ladite cellule eucaryote modifiée contenant un vecteur permettant l 'expression dudit microÀRN. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une cellule eucaryote modifiée telle que définie ci-dessus, ladite cellule étant une cellule végétale. Dans un autre aspect, l 'objet de la demande FR 13 60727 concerne une plante comprenant au moins une cellule eucaryote modifiée telle que définie ci-dessus. Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une composition comprenant au moins :
- un miPEP tel que défini ci-dessus,
- un acide nucléique codant ledit miPEP, ou
- un vecteur contenant ledit acide nucléique.
Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une composition pesticide comprenant au moins :
- un miPEP tel que défini ci-dessus,
- un acide nucléique codant ledit miPEP, ou un vecteur contenant ledit acide nucléique.
Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une composition phytopharmaceutique comprenant au moins :
- un miPEP tel que défini ci-dessus,
- un acide nucléique codant ledit miPEP, ou
- un vecteur contenant ledit acide nucléique.
Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une composition élicitrice comprenant au moins :
- un miPEP tel que défini ci-dessus,
- un acide nucléique codant ledit miPEP, ou
- un vecteur contenant ledit acide nucléique. Par « composition élicitrice », on désigne une composition capable de conférer à la plante une meilleure aptitude à la symbiose ou une meilleure résistance à différents stress, qu 'ils soient de nature thermiques, hydriques ou chimiques.
A cet effet, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne également des compositions agissant sur la croissance (inhibition de la croissance ou au contraire augmentation de la croissance) et la physiologie (meilleure aptitude à mycorhizer, noduler, meilleure tolérance à différents stress) de la plante.
Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une composition herbicide comprenant au moins :
- un miPEP tel que défini ci-dessus,
- un acide nucléique codant ledit miPEP, ou
- un vecteur contenant ledit acide nucléique.
Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne une composition insecticide comprenant au moins :
- un miPEP tel que défini ci-dessus,
- un acide nucléique codant ledit miPEP, ou
- un vecteur contenant ledit acide nucléique. Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, en tant qu 'herbicide pour éliminer les plantes ou ralentir leur croissance, de préférence en tant qu 'herbicide spécifique d'une espèce ou d'un genre de plantes.
Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l 'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, en tant qu 'agent phytopharmaceutique,
- pour favoriser la croissance et/ou le développement des plantes,
notamment pour la modulation des paramètres physiologiques d'une plante, en particulier la biomasse, la surface foliaire, la floraison, le calibre du fruit, la production et/ou la sélection de semence végétales, en particulier pour contrôler la parthénocarpie ou la monoecie d'une plante, ou pour la modification des paramètres physiologiques de semences végétales, en particulier la germination, l 'implantation racinaire et la résistance au stress hydrique,
- ou pour prévenir ou traiter les maladies des plantes,
en particulier pour favoriser la résistance aux maladies infectieuses.
Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, pour moduler les paramètres physiologiques d'une plante, en particulier la biomasse, la surface foliaire, ou le calibre du fruit.
Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, pour l 'éclair issage de vergers afin d'augmenter le calibre des fruits.
Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, pour la production et/ou la sélection de semences végétales, ladite composition étant utilisée pour contrôler la parthénocarpie ou la monœcie d'une plante.
Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d 'une composition telle que définie ci-dessus, ladite composition étant administrée à ladite plante par la voie foliaire ou par la voie racinaire. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, pour la production et/ou la sélection de semences végétales. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, dans laquelle ladite composition est utilisée pour modifier les paramètres physiologiques desdites semences végétales, en particulier l 'implantation racinaire, la germination et la résistance au stress hydrique. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, dans laquelle ladite composition est appliquée par enrobage ou pelliculage sur lesdites semences végétales.
Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l 'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, en tant que pesticide, pour éliminer les organismes nuisibles des plantes ou susceptibles d'être classés comme tels,
notamment en tant qu 'insecticide, arachnicide, Umacide ou rodonticide.
Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, en tant qu 'insecticide. Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, pour éliminer les insectes ravageurs.
Dans un mode de réalisation, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, pour éliminer les espèces animales classées nuisibles ou susceptibles d'être classées comme telles, en particulier les muridae, notamment le rat.
Dans un autre aspect, l'objet de la demande FR 13 60727 concerne l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus, dam laquelle ladite composition est appliquée sur une plante pour la protéger d'insectes ravageurs. Les figures et les exemples suivants illustreront mieux l'invention, sans pour autant en limiter sa portée.
LEGENDES DES FIGURES
FIGURE 1. Effets d'un traitement avec le miPEP164a sur l'expression du miR164a chez A. thaliana.
Les photographies représentent les résultats d'une analyse par Northern blot de l'accumulation du miR164a dans des racines traitées avec de l'eau (contrôle, photographie de gauche) ou avec 0,1 μΜ d'un peptide synthétique, ayant une séquence identique à celle du miPEP164a, dissout dans de l'eau (0,1 μΜ miPEP164a). L'ARN U6 est utilisé comme témoin de charge permettant de quantifier la quantité de miRl 64a.
Cette expérience a été répétée 4 fois de manière indépendante et a abouti à des résultats similaires.
Le traitement des pousses d'A. thaliana avec 0,1 μΜ de miPEP164a entraîne une augmentation de l'accumulation du miRl 64a.
FIGURE 2. Effets d'un traitement avec le miPEP164a sur la croissance Arabidopsis thaliana.
Les photographies présentent deux plantes (vues de dessus et vues de côté) après 3 semaines de croissance : une plante contrôle arrosée et vaporisée avec de l'eau (A) et une plante aixosée et vaporisée avec une composition de 0,1 μΜ de peptide synthétique dont la séquence est identique miPEP164a (B). L'arrosage des plantes d'Arabidopsis thaliana avec le miPEP164a augmente significativement la croissance de la plante.
FIGURE 3. Effets d'un traitement avec le miPEP164a sur la date de floraison chez Arabidopsis thaliana
Les photographies présentent deivx plantes après 39 jours de croissance : une plante contrôle arrosée et vaporisée avec de l'eau (photographie de gauche) et une plante arrosée et vaporisée avec une composition de 1 μΜ de peptide synthétique dont la séquence est identique miPEP164a (photographie de droite). L'arrosage des plantes d' Arabidopsis thaliana avec le miPEP164a augmente significativement la croissance et le nombre de fleurs de la plante. FIGURE 4. Effets d'un traitement avec le miPEP164a sur la date de floraison chez Arabidopsis thaliana
L'axe des ordonnées indique le nombre de jours après mise en germination à la date de floraison chez une plante traitée avec de l'eau (barre de gauche) ou avec une composition contenant 1 μΜ de miPEP164a (barre du milieu) et 1 μΜ de miPEP165a (barre de droite). La barre d'erreur correspond à l'erreur standard à la moyenne (nombre d'individus = 12 plantes contrôles, 12 plantes traitées).
Cette expérience a été répétée de manière indépendante et a abouti à des résultats similaires.
FIGURE 5. Effets d'un traitement avec le miPEP164a sur la taille des hampes florales chez Arabidopsis thaliana
L'axe des ordonnées indique la hauteur de la hampe florale chez une plante traitée avec de l'eau (barre de gauche) ou avec une composition contenant 0,1 μΜ de miPEP164a (barre de droite).
La barre d'erreur correspond à l'erreur standard à la moyenne (nombre d'individus = 12 plantes contrôles, 12 plantes traitées).
FIGURE 6. Effets d'un traitement avec le miPEP164a sur le nombre de fleurs chez Arabidopsis thaliana
L'axe des ordonnées indique le nombre de fleurs après 39 jours de culture chez une plante traitée avec de l'eau (barre de gauche) ou avec une composition contenant 0,1 μΜ de miPEP164a (barre de droite).
La barre d'erreur correspond à l'erreur standard à la moyenne (nombre d'individus = 12 plantes contrôles, 12 plantes traitées).
FIGURE 7. Effets de la surexpression du ÂtmiPEP319a sur l'expression du AtmiR319a chez thaliana.
L'axe des ordonnées indique l'expression relative du AtmiR319a chez une plante témoin (colonne de gauche) ou chez une plante dans laquelle est surexprimé AtmiPEP319a (colonne de droite). La barre d'erreur correspond à l'erreur standard à la moyenne (nombre d'individus = 10). La surexpression de AtmiPEP319a induit une augmentation de l'accumulation de Atmir319a. FIGURE 8. Effets d'un traitement avec le miPEP319a sur la croissance Arabidopsîs thaliana.
Les photographies présentent deux plantes (vues de dessus et vues de côté) après 3 semaines de croissance : une plante contrôle arrosée et vaporisée avec de l'eau (A) et une plante arrosée et vaporisée avec une composition de 0,1 μΜ de peptide synthétique dont la séquence est identique miPEP319a (B). L'arrosage des plantes d'Arabidopsis thaliana avec le miPEP319a augmente significativement la croissance de la plante.
EXEMPLES
Exemple Al - Identification et caractérisation du miPEP164a
Pour identifier des miPEPs codés par des pri-miRNAs de plantes, des ORFS ont été recherchés dans des données de RACE-PCR (Xie et al., Plant Physioï, 138:2145-54, 2005), dans lesquelles les séquences de l'extrémité 5' du pri-miR de 50 miRs d'A. thaliana est disponible.
Des ORFs susceptibles de coder des peptides de 4 à 59 acides aminés ont été identifiés dans chacun des pri-miRs, et notamment un miORF, identifié sur le pri-miR du miR164a, susceptible de coder un peptide miPEP 164a.
Pour tester si ce peptide est réellement un miPEP, celui-ci a été synthétisé et a été utilisé pour rechercher une augmentation de l'accumulation du miR164a chez des racines d'A thaliana traitées avec le peptide synthétique. Les analyses par Northen blot indiquent que le traitement de la plante avec le peptide miPEP164a entraîne une augmentation de l'accumulation du miR164a (Figure 1).
Par ailleurs, des expériences de croissance ont également été réalisées sur des plantes A. thaliana et indiquent que l'arrosage des plantes d'A. thaliana avec le miPEP164a augmente significativement la croissance de la plante (Figure 2). Exemple A2 - Matériel et méthodes
Plantes
Les plantes A. thaliana Col-0 sont cultivées sur un milieu de base MS complété avec 10 g/1 de sucrose.
Peptides
Les peptides ont été synthétisés par Smartox et dissous dans de l'eau. Northern blot
L'analyse par Northern blot a été réalisée selon le protocole décrit dans Lauressergues et al. Plant J, 72(3):512-22, 2012.
Les échantillons biologiques ont été homogénéisés dans un tampon contenant 0,1 M de NaCl, 2% de SDS, 50 mM de Tris-HCl (pH 9), 10 mM de EDTA (PH 8) et 20 mM de mercaptoéthanol, et l'ARN a été extrait 2 fois avec un mélange phénol/chlorofonne et précipité à l'éthanol.
L'ARN a été chargé sur gel PAGE 15% et transféré sur une membrane de nylon (HybondNX, Amersham). L'ARN a été hybridé avec une sonde d'oligonucléotides, radioactive marquée à son extrémité, pour détecter l'ARN U6 ou pour le miR164a.
Les hybridations ont été réalisées à 55°c. Les signaux d'hybridation ont été quantifiés en utilisant un phophorimager (Fuji) et normalisés avec le signal de la sonde spécifique de l'ARN U6.
Test de croissance ά'Α. thaliana
Les graines d'Arabidopsis thaliana ont germé sur GiFi, puis ont été repiquées en terreau et cultivées pendant 3 semaines.
L'arrosage a été réalisé tous les 2-3 jours avec de l'eau pour les plantes contrôles et avec de l'eau contenant 0,1 μΜ ou 1 μΜ de peptide synthétique (dont la séquence est identique miPEP164a ou au miPEP165a) pour les plantes tests.
Exemple Bl - Identification et caractérisation du miPEP319a
Pour identifier des miPEPs codés par des pri-miRNAs de plantes, des ORFS ont été recherchés dans des données de RACE-PCR (Xie et al. } Plant Physiol, 138:2145-54, ^
2005), dans lesquelles les séquences de l'extrémité 5' du pri-miR de 50 miRs d'A. thaliana est disponible, Des ORFs susceptibles de coder des peptides de 4 à 59 acides aminés ont été identifiés dans chacun des pri-miRs, et notamment un miORF, identifié sur le pri-miR du miR319a, susceptible de coder un peptide miPEP319a.
Pour tester si ce peptide est réellement un miPEP, celui-ci a été synthétisé et a été utilisé pour rechercher une augmentation de l'accumulation du miR319a chez des racines à' A. thaliana traitées avec le peptide synthétique. Les analyses par qPCR indiquent que la surexpression de AtmiPEP319a induit une augmentation de l'accumulation de Atmir319a (Figure 7).
Par ailleurs, des expériences de croissance ont également été réalisées sur des plantes A. thaliana et indiquent que l'arrosage et la vaporisation des plantes d'A. thaliana avec le miPEP319a augmente significativement la croissance de la plante (Figure 8).
Exemple B2 - Matériel et méthodes
Plantes
Les plantes A. thaliana Col-0 sont cultivées sur un milieu de base MS complété avec 10 g/1 de sucrose.
Peptides
Les peptides ont été synthétisés par Smartox et dissous dans une solution d'eau 40%/ acétonitrile 50%/ acide acétique 10% (v/v/v).
Transcription inverse des microRNAs
L'ARN a été extrait en utilisant le réactif Tri-Reagent (MRC) selon les instructions du fabricant, à l'exception de la précipitation de TARN qui a été réalisée avec 3 volumes d'éthanol. La transcription inverse de TARN a été réalisée en utilisant l'amorce spécifique RTprimer tige boucle en combinaison avec des hexamères pour effectuer la transcription inverse de TARN de haut poids moléculaire. En bref, 1 μg de RNA a été ajouté à l'amorce tige boucle spécifique (0,2 μΜ), l'héxamère (500 ng), le tampon RT (IX), l'enzyme SuperScript Reverse transcriptase (SSIII) (une unité), les dNTPs (0,2 mM chacun), le DTT (0,8 mM) dans un mélange réactionnel final de 25 μΐ. Pour effectuer la transcription inverse, une réaction de transcription inverse puisée a été réalisée (40 répétitions du cycle suivant : 16°C pendant 2 minutes, 42°C pendant une minute et 50°C pendant une seconde, suivies d'une inactivation finale de la transcription inverse à 85°C pendant 5 minutes). Analyses par RT-PCR quantitative fqRT-PCR
L'ARN total des racines de M. truncainla ou des feuilles de tabac a été extrait en utilisant le kit d'extraction RNeasy Plant Mini Kit (Qiagen). La transcription inverse a été réalisée en utilisant la transcriptase inverse SuperScript II (Invitrogen) à partir de 500 ng d'ARN total. Trois répétitions (n=3) ont été réalisées avec deux répétitions techniques chacune. Chaque expérience a été répétée de deux à trois fois. Les amplifications par qPCR ont été réalisées en utilisant un thermocycleur LightCycler 480 System (Roche Diagnostics) selon la méthode décrite dans Lauressergues et al. (Plant J., 72(3):512-22, 2012).
Constructions plasmidiques
Les fragments d'ADN d'intérêt ont été amplifiés avec la Pfu polymerase (Promega). Les fragments d'ADN ont été clonés pour une surexpression sous le contrôle du promoteur fort constitutif 35S selon la méthode décrite dans Combier et al. (Gènes & Dev, 22: 1549-1559, 200%). Le miORF319a a été cloné dans pBB 9 selon la méthode décrite dans Combier et al (Gènes & Dev, 22: 1549-1559, 200%).
Analyses statistiques
Les valeurs moyennes de l'expression relative des gènes ou de la production de racines latérales ont été analysées en utilisant le test de Student ou le test de Kruskal-Wallis. Les barres d'erreurs représentent l'écart type de la moyenne (SEM, Standard Error of the Mean). Les astérisques indiquent une différence significative (p<0}05).
Test de croissance ά'Α. thaliana
Les graines &Arabidopsis thaliana ont germé sur GiFi, puis ont été repiquées en terreau et cultivées pendant 3 semaines.
L'arrosage a été réalisé tous les 2-3 jours et la vaporisation a été réalisée tous les jours avec de l'eau pour les plantes contrôles et avec de l'eau contenant 0,1 μΜ de peptide synthétique (dont la séquence est identique miPEP319a) pour les plantes tests.

Claims

REVENDICATIONS
1. Utilisation d'un miPEP introduit par voie exogène dans une plante pour en favoriser la croissance,
ledit miPEP introduit par voie exogène étant un peptide comprenant, ou consistant en, une séquence identique à celle d'un miPEP naturellement présent dans ladite plante, lequel miPEP naturellement présent est un peptide de 3 à 100 acides aminés, dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire d'un miR,
ledit miPEP étant capable de moduler accumulation dudit miR dans ladite plante, lequel miR régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, notamment les racines, la tige, les feuilles ou les fleurs,
la somme de la quantité dudit miPEP introduit par voie exogène et de celle dudit miPEP naturellement présent étant strictement supérieure à la quantité dudit miPEP naturellement présent.
notamment, ledit gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante étant choisi parmi le groupe consistant en : NAC1, NAC4, NAC5, CUC1 et CUC2, le groupe consistant en : REVOLUTA, PHABULOSA, PHAVOLUTA, ATHB-8 etATHB-15 ou le groupe consistant en : TCP3 et TCP4.
2. Utilisation selon la revendication 1, dans laquelle ledit miARN est :
- le miR 164a, en particulier, dans laquelle ledit miR164a possède une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 1,
- le miR165a, en particulier, dans laquelle ledit miR165a possède une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO ; 5, ou
- le miR319a, en particulier, dans laquelle ledit miR164a possède une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 9.
3. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle ledit miPEP est :
- le miPEP164a, en particulier, dans laquelle ledit miPEP164a possède une séquence d'acides aminés consistant en SEQ ID NO : 2, - le miPEP165a, en particulier, dans laquelle ledit miPEP165a possède une séquence d'acides aminés consistant en SEQ ID NO : 6, ou
- le miPEP31 a, en particulier, dans laquelle ledit miPEP319a possède une séquence d'acides aminés consistant en SEQ ID NO : 10.
4. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle ladite plante est une plante crucifère, telle qa Arabidopsis thaliana, une plante solanacée ou une plante légumineuse. S. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, pour favoriser la croissance d'une plante Arabidopsis thaliana, dans laquelle le miPEP164a est introduit par voie exogène dans ladite plante Arabidopsis thaliana, ledit miPEP164a étant également naturellement présent dans ladite plante Arabidopsis thaliana,
ledit miPEP164a introduit par voie exogène étant un peptide dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle dudit miPEP164a naturellement présent, ladite séquence du miPEP164a naturellement présent étant codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire du miR164a, lequel miR164a régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices à! Arabidopsis thaliana,
la somme de la quantité dudit miPEP164a introduit par voie exogène et de celle dudit miPEP164a naturellement présent étant strictement supérieure à la quantité dudit miPEPl 64a naturellement présent chez ladite plante Arabidopsis thaliana.
6. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, pour favoriser la croissance d'une plante Arabidopsis thaliana, dans laquelle le miPEP165a est introduit par voie exogène dans ladite plante Arabidopsis thaliana, ledit miPEP165a étant également naturellement présent dans ladite plante Arabidopsis thaliana,
ledit miPEP165a introduit par voie exogène étant un peptide dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle dudit miPEP165a naturellement présent, ladite séquence du miPEP165a naturellement présent étant codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire du miR165a, lequel miR165a régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices ^Arabidopsis thaliana,
la somme de la quantité dudit miPEP165a introduit par voie exogène et de celle dudit miPEP165a naturellement présent étant strictement supérieure à la quantité dudit miPEP165a naturellement présent chez ladite plante Arabidopsis thaliana.
7. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, pour favoriser la croissance d'une plante Arabidopsis thaliana, dans laquelle le miPEP319a est introduit par voie exogène dans ladite plante Arabidopsis thaliana, ledit miPEP319a étant également naturellement présent dans ladite plante Arabidopsis thaliana,
ledit miPEP319a introduit par voie exogène étant un peptide dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle dudit miPEP319a naturellement présent, ladite séquence du miPEP319a naturellement présent étant codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire du miR319a, lequel miR319a régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices Arabidopsis thaliana,
la somme de la quantité dudit miPEP319a introduit par voie exogène et de celle dudit miPEP 19a naturellement présent étant strictement supérieure à la quantité dudit miPEP319a naturellement présent chez ladite plante Arabidopsis thaliana.
8. Procédé pour favoriser la croissance d'une plante, comprenant une étape d'introduction d'un miPEP dans une plante par voie exogène, ledit miPEP étant également présent naturellement dans ladite plante,
ledit miPEP introduit par voie exogène étant un peptide de 3 à 100 acides aminés dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle dudit miPEP naturellement présent, laquelle séquence du miPEP naturellement présent est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire d'un miR, ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit miR, lequel miR régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, notamment les racines, la tige, les feuilles ou les fleurs, la somme de la quantité dudit miPEP introduit par voie exogène et de celle dudit miPEP naturellement présent étant strictement supérieure à la quantité dudit miPEP naturellement présent,
notamment, ledit gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante étant choisi parmi le groupe consistant en : NAC1, NAC4, NAC5, CUC1 et CUC2, le groupe consistant en : REVOLUTA, PHÀBULOSA, PHA VOLUTA, ATHB-8 etATHB-15 ou le groupe consistant en : TCP3 et TCP4.
9. Procédé selon la revendication 8, dans lequel ledit miR est :
- le miR164a, ledit miR164a possédant en particulier une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 1,
ledit miPEP étant notamment le miPEP164a, ledit miPEP164a possédant en particulier une séquence d'acides aminés consistant en SEQ ID NO : 2,
- le miR165a, ledit miR165a possédant en particulier une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 5,
ledit miPEP étant notamment le miPEP165a, ledit miPEP165a possédant en particulier une séquence d'acides aminés consistant en SEQ ID NO : 6,
ladite plante étant notamment une plante crucifère, une plante solanacée ou une plante légumineuse, ou
- le miR319a, ledit miR319a possédant en particulier une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 9,
ledit miPEP étant notamment le miPEP319a, ledit miPEP319a possédant en particulier une séquence d'acides aminés consistant en SEQ ID NO : 10,
ladite plante étant notamment une plante crucifère, une plante solanacée ou une plante légumineuse.
10. Procédé selon l'une quelconque des revendications 8 à 9, pour favoriser la croissance d'une plante Àrabidopsis thaliana, dans lequel :
- le miPEP164a est introduit par voie exogène dans ladite plante Arabidopsis thaliana, ledit miPEP164a étant également naturellement présent dans ladite plante Arabidopsis thaliana,
ledit miPEP164a introduit par voie exogène étant un peptide comprenant ou consistant en une séquence identique à celle dudit miPEP164a naturellement présent, lequel miPEP164a naturellement présent est un peptide de 3 à 100 acides aminés dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire du miR164a,
ledit miPEP164a étant capable d'augmenter l'accumulation dudit miR164a, lequel miR164a régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices à' Arabidopsis thaliana,
la somme de la quantité dudit miPEP164a introduit par voie exogène et de celle dudit miPEP164a naturellement présent étant strictement supérieure à la quantité dudit miPEP164a naturellement présent, - le miPEP165a est introduit par voie exogène dans ladite plante Arabidopsis thaliana, ledit miPEP165a étant également naturellement présent dans ladite plante Arabidopsis thaliana,
ledit miPEP165a introduit par voie exogène étant un peptide comprenant ou consistant en une séquence identique à celle dudit miPEP165a naturellement présent, lequel miPEP165a naturellement présent est un peptide de 3 à 100 acides aminés dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire du miR165a,
ledit miPEP165a étant capable d'augmenter l'accumulation dudit miR165a, lequel miR165a régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices d' Arabidopsis thaliana,
la somme de la quantité dudit miPEP165a introduit par voie exogène et de celle dudit miPEP165a naturellement présent étant strictement supérieure à la quantité dudit miPEP 165a naturellement présent,
ou
- le miPEP319a est introduit par voie exogène dans ladite plante Arabidopsis thaliana, ledit miPEP319a étant également naturellement présent dans ladite plante Arabidopsis thaliana,
ledit miPEP319a introduit par voie exogène étant un peptide comprenant ou consistant en une séquence identique à celle dudit miPEP319a naturellement présent, lequel miPEP319a naturellement présent est un peptide de 3 à 100 acides aminés dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire du miR319a,
ledit miPEP319a étant capable d'augmenter l'accumulation dudit miR319a, lequel miR319a régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices ^Arabidopsis thaliana,
la somme de la quantité dudit miPEP319a introduit par voie exogène et de celle dudit miPEP319a naturellement présent étant strictement supérieure à la quantité dudit miPEP319a naturellement présent.
11. Procédé selon l'une quelconque des revendications 8 à 10, dans lequel ledit miPEP est introduit dans la plante :
- par voie externe de préférence par arrosage, par pulvérisation ou par l'ajout d'un engrais, d'un terreau, d'un substrat de culture ou d'un support en contact avec la plante, 60
ledit miPEP étant notamment administré à la plante sous la forme d'une composition comprenant 10"9 M à 10"4 M dudit miPEP, en particulier 1(T9, 10'8, 10"7, 10"6, 10"5 ou 10-4 M dudit miPEP,
- par voie externe de préférence par arrosage, par pulvérisation ou par l'ajout d'un engrais, d'un terreau, d'un substrat de culture ou d'un support en contact avec la plante, ledit miPEP étant notamment administré à une graine ou une semence sous la forme d'une composition comprenant 10"9 M à 10"4 M dudit miPEP, en particulier 10"9, 1Û~8, 10"7, 10'6, ÎO"5 ou lCr4 M dudit miPEP, ou
- par le biais d'un acide nucléique codant ledit miPEP, ledit acide nucléique étant introduit dans la plante.
12. Procédé de production d'une plante transgénique comprenant:
a) une étape d'introduction d'un acide nucléique codant un miPEP de 3 à 100 acides aminés dans une plante, ou dans au moins une cellule de ladite plante, dans des conditions permettant l'expression dudit miPEP,
ledit miPEP étant également naturellement présent dans ladite plante, ledit miPEP naturellement présent étant un peptide dont la séquence est codée par un cadre ouvert de lecture situé en 5' sur le transcrit primaire d'un miR, ledit miPEP étant capable de moduler l'accumulation dudit miR dans la plante, lequel miR régule l'expression d'au moins un gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante, notamment les racines, la tige, les feuilles ou les fleurs, et b) une étape de culture de la plante, ou d'au moins une cellule de ladite plante, obtenues à l'étape a) dans des conditions permettant l'obtention d'une plante transgénique,
- ledit gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante étant notamment choisi parmi le groupe consistant en : NAC1, NAC4, NAC5, CUC1 et CUC 2,
ledit miARN étant notamment le miR164a, ledit miR164a possédant en particulier une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 1,
ledit miPEP étant notamment le miPEP164a, ledit miPEP164a possédant en particulier une séquence d'acides aminés consistant en SEQ ID NO : 2,
- ledit gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante étant notamment choisi parmi le groupe consistant en : REVOLUTÀ, PHABULOSA, PHA VOLUTA, ATHB-8 et ATHB-15, ledit miARN étant notamment le miR165a, ledit miR165a possédant en particulier une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 5,
ledit miPEP étant notamment le miPEP165a, ledit miPEP165a possédant en particulier une séquence d'acides aminés consistant en SEQ ID NO : 6,
ou
- ledit gène impliqué dans le développement des parties végétatives ou reproductrices de la plante étant notamment choisi parmi le groupe consistant en : TCP3 et TCP 4, ledit miARN étant notamment le miR319a, ledit miR319a possédant en particulier une séquence nucléotidique consistant en SEQ ID NO : 9,
ledit miPEP étant notamment le miPEP319a, ledit miPEP319a possédant en particulier une séquence d'acides aminés consistant en SEQ ID NO : 10,
13. Plante transgénique telle qu'obtenue par le procédé tel que défini selon la revendication 12.
14. Composition comprenant :
- le miPEP164a en tant que substance active, ledit miPEP164a consistant de préférence en SEQ ID NO : 2, ledit miPEP164a étant notamment à une concentration de 10"9 M à 10"4 M, en particulier 10"9, 10"8, 10"7, 10"6, 10"5 ou 10"4 M,
- le miPEP165a en tant que substance active, ledit miPEP165a consistant de préférence en SEQ ID NO : 6, ledit miPEP165a étant notamment à une concentration de 10"9 M à 10"4 M, en particulier 10"9, 10"s, 10"7, 10"6, 10"5 ou 10"4 M, ou
- le miPEP319a en tant que substance active, ledit miPEP319a consistant de préférence en SEQ ID NO : 10, ledit miPEP319a étant notamment à une concentration de 10"9 M à
10"4 M, en particulier 10"9, 10"8, 10"7, 10"6, 10"5 ou 10"4 M,
en particulier, ladite composition comprenant de plus un excipient, un diluant ou un solvant,
en particulier, ladite composition étant formulée de façon à former un enrobé.
15. Composition comprenant en combinaison une quantité de semences d'une plante et une quantité d'un peptide dont la séquence comprend ou consiste en une séquence identique à celle d'un miPEP naturellement présent chez ladite plante, 6»
ledit peptide ayant notamment une séquence comprenant ou consistant en une séquence identique à celle du miPEP164a, du miPEP165a ou du miPEP319a,
en particulier, ladite composition étant formulée de façon à former une semence enrobée.
PCT/FR2015/051472 2014-06-03 2015-06-03 Utilisation de micropeptides pour favoriser la croissance des plantes WO2015185861A1 (fr)

Priority Applications (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ES15774647T ES2834576T3 (es) 2014-06-03 2015-06-03 Uso de micropéptidos para favorecer el crecimiento de las plantas
EP15774647.0A EP3152309B1 (fr) 2014-06-03 2015-06-03 Utilisation de micropeptides pour favoriser la croissance des plantes
CA2950848A CA2950848C (fr) 2014-06-03 2015-06-03 Utilisation de micropeptides pour favoriser la croissance des plantes
DK15774647.0T DK3152309T3 (da) 2014-06-03 2015-06-03 Anvendelse af mikropeptider til at fremme plantevækst
US15/314,519 US10563214B2 (en) 2014-06-03 2015-06-03 Use of micropeptides for promoting plant growth

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR14/55045 2014-06-03
FR1455046A FR3021503A1 (fr) 2014-06-03 2014-06-03 Utilisation de micropeptides pour favoriser la croissance des plantes
FR1455045A FR3021502A1 (fr) 2014-06-03 2014-06-03 Utilisation de micropeptides pour favoriser la croissance des plantes
FR14/55046 2014-06-03
FR1552469 2015-03-24
FR15/52469 2015-03-24

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2015185861A1 true WO2015185861A1 (fr) 2015-12-10

Family

ID=54249516

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/FR2015/051472 WO2015185861A1 (fr) 2014-06-03 2015-06-03 Utilisation de micropeptides pour favoriser la croissance des plantes

Country Status (6)

Country Link
US (1) US10563214B2 (fr)
EP (1) EP3152309B1 (fr)
CA (1) CA2950848C (fr)
DK (1) DK3152309T3 (fr)
ES (1) ES2834576T3 (fr)
WO (1) WO2015185861A1 (fr)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112301029B (zh) * 2019-07-31 2023-02-24 上海交通大学医学院附属仁济医院 靶向调节miRNA的功能性小肽、其获得方法及其应用
US20210251224A1 (en) * 2020-02-18 2021-08-19 Ethox Chemicals, Llc Alkylamine Ethoxylates as Adjuvants and Compatibilizers for Plant Biostimulants
CN117683103B (zh) * 2023-11-24 2024-05-14 南京林业大学 一种小肽miPEP166i及其在植物组织培养中的应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR1360727A (fr) 1964-08-21 Ibm Support connectable
WO2015063431A1 (fr) * 2013-10-31 2015-05-07 Universite Paul Sabatier Toulouse Iii Micropeptides et leur utilisation pour moduler l'expression de gènes

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR1360727A (fr) 1964-08-21 Ibm Support connectable
WO2015063431A1 (fr) * 2013-10-31 2015-05-07 Universite Paul Sabatier Toulouse Iii Micropeptides et leur utilisation pour moduler l'expression de gènes

Non-Patent Citations (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BARDOU FLORIAN ET AL: "Dual RNAs in plants", BIOCHIMIE (PARIS),, vol. 93, no. 11, 1 November 2011 (2011-11-01), pages 1950 - 1954, XP002734738 *
BLEIN ET AL., SCIENCE, vol. 322, no. 5909, 2008, pages 1835 - 9
CHUNHUA YANG ET AL: "Overexpression of microRNA319 impacts leaf morphogenesis and leads to enhanced cold tolerance in rice ( O ryza sativa L.)", PLANT, CELL & ENVIRONMENT, vol. 36, no. 12, 30 May 2013 (2013-05-30), pages 2207 - 2218, XP055164112, ISSN: 0140-7791, DOI: 10.1111/pce.12130 *
COMBIER ET AL., GENE DEV, vol. 22, 2008, pages 1549 - 1559
COMBIER ET AL., GENES & DEV, vol. 22, 2008, pages 1549 - 1559
CRAPPE J ET AL: "Little things make big things happen: A summary of micropeptide encoding genes", EUPA OPEN PROTEOMICS 2014 ELSEVIER NLD,, vol. 3, 1 January 2014 (2014-01-01), pages 128 - 137, XP002734739, ISSN: 2212-9685 *
DE CONINCK BARBARA ET AL: "Mining the genome of Arabidopsis thaliana as a basis for the identification of novel bioactive peptides involved in oxidative stress tolerance", JOURNAL OF EXPERIMENTAL BOTANY,, vol. 64, no. 17, 1 December 2013 (2013-12-01), pages 5297 - 5307, XP002734740 *
DOMINIQUE LAURESSERGUES ET AL: "Primary transcripts of microRNAs encode regulatory peptides", NATURE, vol. 520, no. 7545, 25 March 2015 (2015-03-25), United Kingdom, pages 90 - 93, XP055225397, ISSN: 0028-0836, DOI: 10.1038/nature14346 *
GUO H S ET AL: "MicroRNA directs mRNA cleavage of the transcription factor NAC1 to downregulate auxin signals for arabidopsis lateral root development", THE PLANT CELL, AMERICAN SOCIETY OF PLANT BIOLOGISTS, US, vol. 17, no. 5, 1 May 2005 (2005-05-01), pages 1376 - 1386, XP002734737, ISSN: 1040-4651, [retrieved on 20050413], DOI: 10.1105/TPC.105.030841 *
GUTTMAN; RINN, NATURE, vol. 482, no. 7385, 2012, pages 339 - 46
INGOLIA ET AL., CELL, vol. 147, no. 4, 2011, pages 789 - 802
JAW, PALATNIK ET AL., NATURE, vol. 425, no. 6955, 2003, pages 257 - 63
LAUFS ET AL., DEVELOPMENT, vol. 131, no. 17, 2004, pages 4311 - 22
LAUFS P ET AL: "MicroRNA regulation of the CUC genes is required for boundary size control in Arabidopsis meristems", DEVELOPMENT, THE COMPANY OF BIOLOGISTS LTD, GB, vol. 131, no. 17, 1 September 2004 (2004-09-01), pages 4311 - 4322, XP002394624, ISSN: 0950-1991, DOI: 10.1242/DEV.01320 *
LAURESSERGUES ET AL., PLANT J, vol. 72, no. 3, 2012, pages 512 - 22
LAURESSERGUES ET AL., PLANT.J, vol. 72, no. 3, 2012, pages 512 - 22
M. ZHOU ET AL: "Constitutive Expression of a miR319 Gene Alters Plant Development and Enhances Salt and Drought Tolerance in Transgenic Creeping Bentgrass", PLANT PHYSIOLOGY, vol. 161, no. 3, 4 January 2013 (2013-01-04), pages 1375 - 1391, XP055164113, ISSN: 0032-0889, DOI: 10.1104/pp.112.208702 *
NAG ET AL., PROC NATL ACAD SEI USA, vol. I06, no. 52, 2009, pages 22534 - 9
NIKOVICS ET AL., PLANT CELL, vol. 18, no. 11, 2006, pages 2929 - 45
SCHWAB ET AL., EMBO REP., vol. 14, no. 7, 2013, pages 615 - 21
XIE ET AL., PLANT PHYSIOL, vol. 138, 2005, pages 2145 - 54
Y. MAO ET AL: "microRNA319a-Targeted Brassica rapa ssp. pekinensis TCP Genes Modulate Head Shape in Chinese Cabbage by Differential Cell Division Arrest in Leaf Regions", PLANT PHYSIOLOGY, vol. 164, no. 2, 18 December 2013 (2013-12-18), pages 710 - 720, XP055164109, ISSN: 0032-0889, DOI: 10.1104/pp.113.228007 *
YAO X ET AL: "Two types of cis-acting elements control the abaxial epidermis-specific transcription of the MIR165a and MIR166a genes", FEBS LETTERS, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 583, no. 22, 19 November 2009 (2009-11-19), pages 3711 - 3717, XP026782232, ISSN: 0014-5793, [retrieved on 20091029], DOI: 10.1016/J.FEBSLET.2009.10.076 *
ZHOU GONG-KE ET AL: "Overexpression of miR165 affects apical meristem formation, organ polarity establishment and vascular development in Arabidopsis", PLANT AND CELL PHYSIOLOGY, vol. 48, no. 3, March 2007 (2007-03-01), pages 391 - 404, XP002750170, ISSN: 0032-0781 *

Also Published As

Publication number Publication date
ES2834576T3 (es) 2021-06-17
US20170211080A1 (en) 2017-07-27
EP3152309B1 (fr) 2020-09-02
CA2950848A1 (fr) 2015-12-10
CA2950848C (fr) 2023-11-14
US10563214B2 (en) 2020-02-18
EP3152309A1 (fr) 2017-04-12
DK3152309T3 (da) 2020-11-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3536804B1 (fr) Micropeptides et leur utilisation pour moduler l&#39;expression de genes
EP3152228B1 (fr) Utilisation de micropeptides pour favoriser la symbiose mycorhizienne
EP3505634B1 (fr) Methode de production d&#39;allergenes recombinants de haute qualite dans une plante
WO2019219015A1 (fr) Gène cible d&#39;arni hautement létal pour les aphidiens et utilisation associée
EP3152309B1 (fr) Utilisation de micropeptides pour favoriser la croissance des plantes
EP0626014B1 (fr) Plante portant des genes codant pour des enzymes de la voie de biosynthese des phytosterols, et procede d&#39;obtention
FR3021503A1 (fr) Utilisation de micropeptides pour favoriser la croissance des plantes
EP3274362A1 (fr) Nouveau procede permettant de favoriser la nodulation chez les plantes
CA2320401A1 (fr) Acide nucleique comprenant la sequence d&#39;un promoteur inductible par un stress et une sequence d&#39;un gene codant pour une stilbene synthase
FR3021502A1 (fr) Utilisation de micropeptides pour favoriser la croissance des plantes
FR3012471A1 (fr) Micropeptides et leur utilisation pour moduler l&#39;expression de genes
WO2024083985A1 (fr) Nouveaux peptides et leur utilisation pour moduler l&#39;accumulation d&#39;une proteine
FR3021504A1 (fr) Utilisation de micropeptides pour favoriser la symbiose mycorhizienne
WO2024083986A1 (fr) Nouveaux peptides et leur utilisation pour moduler l&#39;accumulation d&#39;une proteine
CN114230649A (zh) 水稻分蘖力相关的Tn1蛋白及其相关生物材料与应用

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 15774647

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

REEP Request for entry into the european phase

Ref document number: 2015774647

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2015774647

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 15314519

Country of ref document: US

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2950848

Country of ref document: CA

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE