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WO2011105568A1 - 学習・記憶障害および運動障害などを伴う中枢神経変性疾患を改善する乾燥植物組織および植物組織抽出物ならびにこれらを含有する医薬品および食品 - Google Patents

学習・記憶障害および運動障害などを伴う中枢神経変性疾患を改善する乾燥植物組織および植物組織抽出物ならびにこれらを含有する医薬品および食品 Download PDF

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WO2011105568A1
WO2011105568A1 PCT/JP2011/054358 JP2011054358W WO2011105568A1 WO 2011105568 A1 WO2011105568 A1 WO 2011105568A1 JP 2011054358 W JP2011054358 W JP 2011054358W WO 2011105568 A1 WO2011105568 A1 WO 2011105568A1
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WO
WIPO (PCT)
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plant tissue
extract
weight
nobiletin
disease
Prior art date
Application number
PCT/JP2011/054358
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English (en)
French (fr)
Inventor
康 大泉
徹 山國
伊知郎 川畑
雅昭 吉田
Original Assignee
小太郎漢方製薬株式会社
国立大学法人東北大学
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 小太郎漢方製薬株式会社, 国立大学法人東北大学 filed Critical 小太郎漢方製薬株式会社
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Priority to JP2012501889A priority patent/JP5503726B2/ja
Publication of WO2011105568A1 publication Critical patent/WO2011105568A1/ja
Priority to HK13105841.5A priority patent/HK1178792A1/xx

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    • A61K36/752—Citrus, e.g. lime, orange or lemon
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
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    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
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    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
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    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Definitions

  • the present invention relates to a dried plant tissue and a plant tissue extract that improve central neurodegenerative diseases associated with learning / memory disorders and movement disorders.
  • the present invention also relates to pharmaceuticals and foods containing the dried plant tissue or plant tissue extract.
  • Non-Patent Document 1 N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptor function, which is important for learning / memory Neurodegeneration due to polymerization and accumulation of amyloid ⁇ peptide is considered (see Non-Patent Document 1).
  • NMDA N-methyl-D-aspartate
  • memory In general, memory consists of three processes: memory acquisition, retention, and recall, and the mechanisms of these three processes are considered different. It is understood that learning and memory impairment, which is a core symptom of Alzheimer's disease, is particularly markedly impaired in memory retention and recall processes.
  • the formula (I) See Patent Document 1 or Non-Patent Document 1 or 2), and nobiletin is also known to have a neurite outgrowth action on nerve cells (Patent Document 1). 2).
  • Nobiletin is contained in the skin of various citrus plants, but is usually contained in a very small amount.
  • Chen which is one of the herbal medicines derived from the peels of citrus plants, usually exhibits a gastric action, expectorant action, antitussive action, etc., and it is considered that nobiletin is not involved in these actions.
  • Parkinson's disease one of the central neurodegenerative diseases, is characterized by four major motor signs such as tremor, slow movement, muscle rigidity, and postural reflex disorder, and the dopaminergic nervous system degenerates due to some factor. This is because of motor dysfunction.
  • dopamine replacement therapy is currently performed. Many drugs that increase the transcriptional activity of the enzyme in the dopamine biosynthetic pathway, that is, the expression level of its mRNA, are known, but few drugs that increase the production of dopamine itself are known.
  • a dried citrus plant tissue exhibiting a dopamine synthesis ability promoting action and a dopamine secretion promoting action and an extract thereof are not known.
  • the present inventors have found a dried citrus plant tissue and a plant tissue extract that have a remarkable effect of improving central nervous degenerative diseases.
  • the present inventors have found dried plant tissues and plant tissue extracts of citrus fruits that can be applied as a fundamental therapeutic agent for Alzheimer's disease and Parkinson's disease among central neurodegenerative diseases.
  • the inventors have further discovered dried citrus plant tissues and plant tissue extracts that enhance not only memory recall but also memory acquisition and retention in memory impairment, a core symptom of Alzheimer's disease.
  • the present invention includes the following embodiments: (1) Dry plant tissue of citrus peel for improving central neurodegenerative diseases, containing 0.4% by weight or more of nobiletin with respect to 100% by weight of dry plant tissue; (2) Dry plant tissue of citrus leaves for improving central neurodegenerative diseases, containing 0.3% by weight or more of nobiletin with respect to 100% by weight of dry plant tissue; (3) The dry plant tissue according to any one of (1) and (2), wherein the weight ratio of nobiletin / nariltin is 1.0 or more; (4) The dried plant tissue according to any one of (1) and (2), wherein the central neurodegenerative disease is Alzheimer's disease and / or Parkinson's disease; (5) Improvement of central neurodegenerative diseases is increased cAMP response element (CRE) -dependent transcriptional activity, memory acquisition, retention and enhanced recall ability, tyrosine hydroxylase (TH) transcriptional activity, TH expression level The dried plant tissue according to any one of (1) and (2), which is brought about by an increase, promotion of dopamine synthesis ability, or promotion
  • Citrus plant tissue extract for improving central neurodegenerative diseases containing 0.6% by weight or more of nobiletin with respect to 100% by weight of plant tissue extract; (7) The plant tissue extract according to (6), wherein the content weight ratio of nobiletin / nariltin is 2.0 or more; (8) The plant tissue extract according to (6) obtained by water extraction from the dried plant tissue according to any of (1) or (2), preferably 60 to 100 ° C water extraction; (9) The plant tissue extract according to (6), wherein the central neurodegenerative disease is Alzheimer's disease and / or Parkinson's disease; (10) Improvement of central neurodegenerative diseases may increase CRE-dependent transcriptional activity, acquire memory, enhance retention and recall ability, promote TH transcriptional activity, increase TH expression, promote dopamine synthesis, or dopamine secretion The plant tissue extract according to (6), which is caused by the promotion of
  • 10% to 100% by weight of the dry plant tissue according to (1) or (2) or 10% to 90% by weight of the plant tissue extract according to (6) is effective with respect to 100% by weight of the pharmaceutical product A drug for treating Alzheimer's disease as an ingredient
  • 10% to 100% by weight of the dry plant tissue according to (1) or (2) or 10% to 90% by weight of the plant tissue extract according to (6) is effective with respect to 100% by weight of the pharmaceutical product A drug for treating Parkinson's disease as an ingredient
  • a therapeutic drug for treating a central neurodegenerative disease preferably comprising an extract obtained by water extraction at 60 to 100 ° C.
  • the content of nobiletin is 0.3 to 2.0% by weight with respect to 100% by weight of the dry plant tissue, and the content weight ratio of nobiletin / nariltin is 1.0 to 23.0.
  • Dry plant tissue of (24) The dried plant tissue according to (4), which is obtained by heating and drying citrus plant tissue at 50 to 100 ° C. for 1 to 3 hours, and the yield is 20 to 50%; (25) The content of nobiletin is 0.6 to 3.0% by weight with respect to 100% by weight of the plant tissue extract, and the content weight ratio of nobiletin / nariltin is 2.0 to 14.0.
  • Plant tissue extracts as described; (26) The pharmaceutical according to (19), which is in the form of a fine granule, tea, decoction, capsule, tablet, granule, jelly, powder, liquid, syrup or extract preparation.
  • the citrus dried plant tissue and plant tissue extract of the present invention show a significant central neurodegenerative disease improving effect as compared with the conventional citrus dried plant tissue.
  • the dried plant tissue and plant tissue extract of the present invention also have the effect of activating PKA / ERK / CREB signaling and improving learning / memory impairment, which is one of the symptoms of Alzheimer's disease.
  • the dried plant tissue and plant tissue extract of the present invention particularly show the effect of acquiring, maintaining and recalling memory among the learning / memory impairment improving effects.
  • the dried plant tissue and plant tissue extract of the present invention further have a strong phosphorylation promoting effect and a PKA / ERK signal transduction promoting effect as compared with nobiletin alone having the same amount of nobiletin contained therein.
  • the dried plant tissue and plant tissue extract of the present invention exhibit an improvement effect on Parkinson's disease by CRE transcription activity and TH transcription activity, TH expression level increasing action, dopamine synthesis ability promoting action or dopamine secretion promoting action. .
  • the dried plant tissue and plant tissue extract of the present invention further has a central neurodegenerative disease ameliorating effect exceeding that predicted from its nobiletin-containing concentration, in particular, an effect of increasing CRE-dependent transcriptional activity, memory acquisition, retention and recall ability.
  • a central neurodegenerative disease ameliorating effect exceeding that predicted from its nobiletin-containing concentration in particular, an effect of increasing CRE-dependent transcriptional activity, memory acquisition, retention and recall ability.
  • the effect of promoting TH transcriptional activity and the effect of increasing the TH expression level the effect of promoting dopamine biosynthesis and the effect of promoting dopamine secretion are shown. These effects are considered to be due to a synergistic effect of nobiletin and other components contained in the dried plant tissue and plant tissue extract.
  • FIG. 1A shows a three-dimensional chromatogram of flavonoids contained in the skin of the present invention.
  • FIG. 1B shows a three-dimensional chromatogram of flavonoids contained in a conventional skin.
  • FIG. 2A shows CREB phosphorylation promoting activity of a skin extract in hippocampal neurons.
  • FIG. 2B shows the PKA substrate phosphorylation promoting activity of the skin extract in hippocampal neurons.
  • FIG. 2C shows the ERK1 / 2 phosphorylation promoting activity of the skin extract in hippocampal neurons.
  • FIG. 2D shows the PKA signal transduction promoting effect of the skin extract in hippocampal neurons.
  • FIG. 2E shows the ERK signal transduction promoting effect of the skin extract in hippocampal neurons.
  • FIG. 1A shows CREB phosphorylation promoting activity of a skin extract in hippocampal neurons.
  • FIG. 2B shows the PKA substrate phosphorylation promoting activity of the skin extract in hippocampal
  • FIG. 2F shows the CRE-dependent transcriptional activity of extracts from the present skin 1 and conventional skin 7 and nobiletin in hippocampal neurons.
  • FIG. 2G shows the CRE-dependent transcriptional activity of extracts from the skin 2-4 of the present invention and the conventional skin 8-10 and nobiletin in hippocampal neurons.
  • FIG. 3A shows the effect of improving the learning / memory impairment of crustacean extract, that is, the effect of acquiring, retaining, and recalling memory.
  • FIG. 3B shows the effect of nobiletin on MK801-induced learning / memory impairment.
  • FIG. 4A shows the TH transcriptional activity promoting effect of the skin extract in PC12D cells.
  • FIG. 4B shows the effect of increasing the TH expression level of the crust extract in PC12D cells.
  • FIG. 4C shows the effect of increasing the dopamine content of the skin extract in PC12D cells.
  • FIG. 5A shows CRE transcriptional activity of Tachibana peel extract in hippocampal neurons.
  • FIG. 5B shows the improvement effect of learning impairment of Tachibana peel extract.
  • Two-way ANOVA including post Bonferroni test for all pairs of learning-promoting effects. Numerical values in the figure show mean ⁇ standard error; n 5 for all tests. ** p ⁇ 0.01 compared to control ( ⁇ ), *** p ⁇ 0.001, ### p ⁇ 0.01 compared to MK-801 ( ⁇ ), ⁇ p ⁇ 0.05.
  • FIG. 5C shows the effect of improving the memory impairment of Tachibana peel extract.
  • One-way ANOVA including post Tukey test for all pairs of memory improvement effects.
  • FIG. 5D shows CRE transcriptional activity of Tachibana peel extract in PC12D cells.
  • FIG. 5E shows TH transcriptional activity of Tachibana peel extract in PC12D cells.
  • FIG. 5F shows the GCH I expression level increasing effect of Tachibana bark extract in PC12D cells.
  • FIG. 6A shows CRE transcriptional activity of the extract derived from the leaf of Tachibana in hippocampal neurons.
  • FIG. 6B shows CRE transcriptional activity of Tachibana leaf-derived extract in PC12D cells.
  • FIG. 7A shows the CRE transcriptional activity of the extract derived from citrus pericarp in hippocampal neurons.
  • FIG. 7B shows the CRE transcriptional activity of the extract derived from the citrus pericarp in PC12D cells.
  • FIG. 7C shows the TH transcriptional activity of the extract derived from the citrus pericarp in PC12D cells.
  • the citrus fruits used in the present invention are: Citrus tachibana, C. nipponokoreana, Hanayu, Shikitsu, Pheasant, Daidai, Mediterranean Mandarin, Dancy Tangerine, Obenimikan, Kobenimikan, Nucleus Kishu, Fukurimuta, Ponkan, Hirakishu, Sankitsu, Cleopatra, Koji, Giri Mikan, Ichan Lemon, Unshu Mikan (Citrus unshiu Markovich), Citrus reticulata Blanco (Rutaceae), Sikhwasa, Yuzu, Bungtan, Hyuganatsu, Ponkan, Natsumikan, Bunyo Among plants selected from the group consisting of those having a high nobiletin content, preferably Citrus reticulata Blanco (Rutaceae), Japanese tachibana (Citrus tachibana), Kourai tachibana (C. nip ponokoreana) or Gi
  • the yield of the citrus peel or leaf is 20 to 50% in the case of the peel and 20 to 50% in the case of the leaf. It means a substance dried under such conditions.
  • the heating and drying conditions include a temperature of 50 to 100 ° C. for 1 to 3 hours, and a temperature of 60 ° C. for 2 hours.
  • Preferred dry plant tissues of the present invention are Chen, Tachibana and Tachibana leaves.
  • Tachibana peel refers to the mature pericarp of Japanese Tachibana or Tachibana, particularly Tachibana.
  • the leaf means a leaf of Tachibana such as Japanese Tachibana or Kourai Tachibana.
  • the plant tissue extract of the present invention is an extract from the above-mentioned dry plant tissue, preferably an extract obtained by water extraction.
  • the preferred water extraction herein is extraction with water at 60-100 ° C.
  • components contained in the dried plant tissue and plant tissue extract of the present invention include flavonoids such as nobiletin, nariltin, tangeretin, and hesperidin.
  • flavonoids such as nobiletin, nariltin, tangeretin, and hesperidin.
  • the activity of the dried plant tissue and plant tissue extract of the present invention is remarkable as compared with the medicinal effect of nobiletin alone due to the synergistic effect due to the content and content ratio of the components contained therein.
  • the dry plant tissue of the present invention comprises 0.3 or 0.4% by weight or more, preferably 0.3 to 2.0% by weight, more preferably 0.4 to 2.0% by weight of nobiletin based on the total weight. 0.7% by weight or less, preferably 0.4% by weight or less of nariltin, 0.1 to 0.8% by weight of tangeretin and 0.4 to 12% by weight of hesperidin.
  • the dry plant tissue of the present invention also has a nobiletin / nariltin content weight ratio of 1.0 or more, preferably 1.5 to 23.0, more preferably 2.0 to 15.0, still more preferably 5.0 to 15.0.
  • the dry plant tissue of the present invention can be derived from any plant as long as the proportion of each component contained in the dry tissue is within the above range, that is, the drug effect of the present invention, that is, the central neurodegenerative disease improving effect (anti Alzheimer's disease activity, anti-Parkinson disease activity, etc., learning / memory impairment improvement effect, phosphorylation promotion effect and PKA / ERK signaling promotion effect, CRE transcription activity and TH transcription activity, TH expression level increase effect, dopamine synthesis ability promotion effect Or show dopamine secretion promoting action.
  • the drug effect of the present invention that is, the central neurodegenerative disease improving effect (anti Alzheimer's disease activity, anti-Parkinson disease activity, etc., learning / memory impairment improvement effect, phosphorylation promotion effect and PKA / ERK signaling promotion effect, CRE transcription activity and TH transcription activity, TH expression level increase effect, dopamine synthesis ability promotion effect Or show dopamine secretion promoting action.
  • the plant tissue extract of the present invention is 0.6 to 2.0% by weight or more, preferably 0.6 to 3.0% by weight of nobiletin, 0.7% by weight or less, preferably 0. Contains no more than 4% by weight nariltin, 0.1-1.0% by weight tangeretin and 1.8-6.0% by weight hesperidin.
  • the plant tissue extract of the present invention also has a nobiletin / nariltin content weight ratio of 2.0 or more, preferably 2.0 to 14.0, more preferably 2.5 to 10.0.
  • the plant tissue extract of the present invention can be derived from any plant as long as the ratio of each component contained therein is within the above-mentioned range.
  • central neurodegenerative disease includes Alzheimer's disease, particularly learning / memory impairment, and Parkinson's disease.
  • Examples of the anti-Alzheimer's disease activity and / or anti-Parkinson's disease activity of the dried plant tissue and plant tissue extract of the present invention include improvement of learning / memory impairment related to the onset mechanism of central neurodegenerative diseases or promotion of dopamine synthesis. .
  • the dried plant tissue and plant tissue extract of the present invention may exhibit different activities depending on the type of plant tissue.
  • the skin or skin extract may exhibit a dopamine content increasing activity
  • the tachibana skin or citrus skin extract may exhibit a dopamine secretion promoting activity.
  • learning / memory failure is a failure that reduces the following three abilities in the memory process: memory acquisition (encoding), retention (retention), and recall (recall) abilities.
  • acquisition refers to capturing information into memory
  • retention refers to storing captured information
  • recalling refers to recalling stored information.
  • therapeutic agents for central neurodegenerative diseases include anti-Alzheimer's disease agents and / or anti-Parkinson's disease agents, that is, pharmaceuticals having anti-Alzheimer's disease activity and / or anti-Parkinson disease activity.
  • the term “pharmaceutical” means a substance for diagnosis, treatment or prevention of diseases in humans and animals, and includes pharmaceuticals including herbal medicines, such as herbal medicines and herbal medicines.
  • a preferred pharmaceutical is an oral dosage form, more preferably a fine granule, tea, decoction, capsule, tablet, granule, jelly, powder, liquid, syrup or extract.
  • the term “herbal medicine” is a general term for substances used for improving the constitution of a subject without purifying active ingredients from naturally occurring products having medicinal effects, and includes one or more herbal ingredients.
  • the term “Chinese medicine” means a medicine prescribed on the basis of Chinese medicine theory.
  • the term “food” refers to so-called health foods and health functional foods such as foods for specified health use and functional nutritional foods that are distinguished by the presence or absence of permission from the authorities and the purpose and function of the food. Including. Preferred foods herein are fine granules, jelly sauce, peel, jam or tea, more preferably fine granules or tea.
  • the blending amount of each component in the pharmaceutical and food in the present specification can be appropriately adjusted according to the intended purpose of use, sex, symptoms, etc., for example, 10 to 100% by weight of the dried plant tissue of the present invention or plant 10-90% by weight of tissue extract and 0-90% by weight of other carriers or additives.
  • the daily intake amount of the dried plant tissue or plant tissue extract of the present invention per adult is preferably 3 to 50 g or 1 to 20 g, and more preferably 5 to 30 g or 2 to 10 g.
  • compositions herein include those commonly used in the art, such as pharmaceutically or food hygienically acceptable herbal ingredients, ascorbic acid, aspartame, apple flavor, orange flavor, carrageenan. , Caramel, carnauba wax, carmellose, carmellose calcium, reduced maltose liquid sugar, reduced maltose starch syrup, hydrous silicon dioxide, xylitol, citric acid, trisodium citrate, granulated sugar, light anhydrous silicic acid, gelling agent (FG-2266, Nitta Gelatin Co., Ltd.), synthetic aluminum silicate, hydroxypropyl starch, crystalline cellulose, beeswax, titanium oxide, salt, sucrose fatty acid ester, magnesium stearate, cellulose, talc, dextrin, corn starch, lactose, honey, hydro Xylpropylmethylcellulose, fine silicon dioxide, pullulan, pectin, maltose, magnesium aluminate metasilicate,
  • the pharmacologically or food hygienically acceptable herbal medicine components in this specification include those commonly used in the art.
  • Chen 1 to 6, Tachibana 1 to 6, Tachibana leaves 1 to 3 and Obenimikan 1 are the dry plant tissue of the present invention, and Chen 7 to 12 are conventional.
  • the plant tissue of the same degree can be obtained from Kotaro Hanpo Pharmaceutical Co., Ltd. from the viewpoint of the samples and the components used in the following examples.
  • Example 1 Production of dried plant tissue
  • the peels and leaves collected from various citrus fruits were shade-dried, sun-dried or heat-dried to obtain dried bodies of the peel, tachibana peels, tachibana leaves, and the fruit of periwinkle.
  • Heat drying is carried out until the yield (ratio of mass after drying / mass before drying) is 20-50% for Chen and Tachibana peels, 20-50% for Tachibana leaves, and 20-50% for Prunus pericarp. Specifically, it was dried by heating at a temperature of 60 ° C. for 2 hours.
  • Example 2 Production of plant tissue extract 400 mL of pure water was added to about 10 g of the cut skin, tachibana bark, leaves of tachibana or persimmon bark obtained in Example 1 and heated (tachibana bark) For 6), 1000 mL of pure water was added to about 20 g of the minced and heated. After the mixture boiled, it was extracted at 100 ° C. for 1 hour. Subsequently, it filtered through gauze (2 sheets), and the filtrate was freeze-dried to obtain a plant tissue extract. The production results of the plant tissue extract are shown in Table 1 below.
  • Example 3 Analysis of contained components The contained components of the dried plant tissues and plant tissue extracts obtained in Examples 1 and 2 were measured as follows. Below, the analysis method about a crust and a crust extract is shown.
  • a standard solution used for quantification of nobiletin and tangeretin was prepared as follows. Nobiletin (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) was dried with a desiccator (silica gel) for 24 hours or more. About 5 mg of dried nobiletin was dissolved in a methanol / water mixture (7: 3) to make 100 mL, and used as a nobiletin standard solution. Further, tangeretin (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) was dried with a desiccator (silica gel) for 24 hours or more. About 3 mg of dry tangeretin was dissolved in a methanol / water mixture (7: 3) to make 100 mL, and used as a tangeretin standard solution.
  • a standard solution used for quantification of hesperidin and nariltin was prepared as follows. Hesperidin (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) was dried with a desiccator (silica gel) for 24 hours or more. About 10 mg of dry hesperidin was dissolved in 50% methanol to make 50 mL, and used as a hesperidin standard solution. Also, Nariltin (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) was dried with a desiccator (silica gel) for 24 hours or more. About 10 mg of dry narilutin was dissolved in 50% methanol to make 500 mL, which was used as a narilutin standard solution.
  • a skin sample solution As a skin sample solution, 30 mL of methanol was added to about 0.1 g of skin powder. The mixture was irradiated with ultrasonic waves for 20 minutes (UT-305HS, Sharp Corporation), extracted, and then centrifuged (KUBOTA KN-70, Kubota Corporation) to collect the supernatant. 20 mL of methanol was added to the residue, and extraction was performed by irradiating with ultrasonic waves for 20 minutes, followed by centrifugation. This was combined with the collected supernatant to obtain a skin sample solution.
  • the peel extract As a sample solution of the peel extract, about 0.1 g of the peel extract was placed in a 50 mL stoppered centrifugal sedimentation tube, and 50 mL of a methanol / water mixture (1: 1) was added thereto. The mixture was extracted with ultrasonic waves (UT-305HS, Sharp Corporation) and then centrifuged (KUBOTA KN-70, Kubota Corporation). Then, it filtered and it was set as the sample solution of the crust extract.
  • ultrasonic waves UT-305HS, Sharp Corporation
  • KUBOTA KN-70 centrifuged
  • FIGS. 1A and 1B show three-dimensional chromatograms of flavonoids contained in the skin of the present invention and the conventional skin, respectively.
  • each component may vary depending on the sampling location and timing of the citrus plants used.
  • the blue peel of tachibana has some nobiletin content of about 1.60% by weight, but about 1.1% by weight of yellow peel.
  • Test Example 1 The general test procedure used in Test Example 1 below is as follows. (Culture of rat fetal primary hippocampal neurons) Pregnant Sprague-Dawley (SD) rats were bred by feeding and watering in a 12-hour light / dark cycle. The uterus was aseptically removed from the rat (E18) on day 18 of gestation by a midline abdominal incision under deep ether anesthesia. Under a stereomicroscope, remove the fetal hippocampus in ice-cold phosphate buffered saline (PBS), disperse the tissue with papain enzyme (SUMILON), and centrifuge at 1000 rpm for 4 minutes. Removed.
  • PBS ice-cold phosphate buffered saline
  • SUMILON ice-cold phosphate buffered saline
  • the cell pellet was dispersed in a dispersion liquid (SUMILON), and then the removal liquid (SUMILON) was added to the cells sufficiently dispersed by pipetting, followed by centrifugation at 900 rpm for 5 minutes, and then the supernatant was removed. .
  • the pellet is suspended using Neurobasal Medium (Neurobasal Medium 500 mL / Phenol Red-free, 50 x B27 Supplement 10 ml, 0.5 mM L-glutamine, 0.005% penicillin-streptomycin) and added with poly-L-lysine. Seeded on coated dishes or plates. One day after the culture, the medium was changed, and then half of the medium was changed every 3 to 4 days.
  • Neurobasal Medium Neurobasal Medium 500 mL / Phenol Red-free, 50 x B27 Supplement 10 ml, 0.5 mM L-glutamine, 0.005% penicillin-streptomycin
  • the medium was cultured in a medium containing 10 ⁇ M AraC at 37 ° C. in a 5% CO 2 incubator for 14 days.
  • Neurobasal Medium containing 10 ⁇ M AraC was used as a test medium for drug treatment experiments.
  • Rat fetal primary hippocampal neurons were seeded at 1 ⁇ 10 6 cells / dish in a 35 mm dish, cultured in a growth medium for 14 days in a 5% CO 2 incubator, and then treated with the drug for 10 minutes. Each cell was treated with drugs and then washed with ice-cold PBS.
  • Cell lysate (1 mM EDTA, 1% SDS, 10 mM NaF, 10 nM caliculin, 320 nM okadaic acid, 1 mM sodium orthovanadate, 1 mM p-APMSF, 10 ⁇ g / mL pepstatin A, 10 ⁇ g / mL Antipine, 10 ⁇ g / mL leupeptin, 10 ⁇ g / mL chymostatin, 10 ⁇ g / mL phosphoramidon, 10 mM HEPES, pH 7.5). Thereafter, it was immediately boiled at 95 ° C. for 5 minutes to denature the protein, and then the DNA was sonicated to prepare a sample for SDS-PAGE.
  • the PVDF membrane is placed in a stripping buffer (62.5 mm Tris-HCl, 2% SDS, 100 mm mM ⁇ -mercaptoethanol, pH 7.4) pre-warmed to 50 ° C and incubated for 30 minutes at 50 ° C. Was removed and washed with TBST. Thereafter, the internal standard protein was detected by reprobing.
  • a stripping buffer (62.5 mm Tris-HCl, 2% SDS, 100 mm mM ⁇ -mercaptoethanol, pH 7.4) pre-warmed to 50 ° C and incubated for 30 minutes at 50 ° C. Was removed and washed with TBST. Thereafter, the internal standard protein was detected by reprobing.
  • 7.2 g of the skin extract from the skin 1 was weighed and placed in a 50 ml centrifuge tube, and dimethyl sulfoxide (DMSO) was added thereto to make 30 mL. Then, it was sonicated for 30 minutes and centrifuged at 3000 rpm for 10 minutes, and the supernatant was collected and used as a skin extract.
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • Extracellular signal-regulated kinase (ERK) 1/2 phosphorylation-promoting effect of skin extract in primary cultured hippocampal neurons About the effect of various concentrations of skin extract or nobiletin on ERK1 / 2 phosphorylation Blotting was used (contains nobiletin 1 ⁇ M in 60 ⁇ g / ml of skin extract). E18 rat hippocampal neurons grown at a density of 1 ⁇ 10 6 cells / 35-mm plastic dish were cultured for 14 days. Cells were treated for 10 minutes with crushed extract (30, 60, 120, 240 and 480 ⁇ g / ml) or nobiletin (4, 8 and 30 ⁇ M).
  • crushed extract (30, 60, 120, 240 and 480 ⁇ g / ml) or nobiletin (4, 8 and 30 ⁇ M).
  • rat hippocampal neurons were primarily cultured and then a reporter gene assay was performed.
  • Hippocampal neurons were seeded in a 48-well plate at 8 ⁇ 10 4 cells / well and cultured in Neurobasal medium for 10-14 days.
  • Reporter plasmid (0.1 ⁇ g / well) and Renilla pRG-TK plasmid (0.01 ⁇ g / well) were transfected by lipofection and cultured for 16 hours. It was diluted with Neurobasal medium without AraC (containing B-27 Supplement, L-glutamine, penicillin-streptomycin) and treated with a crust extract at a concentration of 300 ⁇ g / ml for 8 hours.
  • the skin extract was a 150 mg / ml DMSO solution as a stock solution, dispensed, and stored at -20 ° C.
  • Transcriptional activity was measured using Promega's Dual-Luciferase (registered trademark) Reporter Assay System. Hippocampal neurons were solubilized with Passive Lysis Buffer (Promega), then mixed with Luciferase Assay Regent II (Promega) and Stop & Glo (registered trademark) Reagent (Promega), and the fluorescence value was measured with a luminometer.
  • the reporter gene assay and RT-PCR results were evaluated using one-way ANOVA (Tukey). The significance level was tested at 5% on both sides, and p ⁇ 0.05 was considered significant.
  • the concentration of nobiletin in the skin extract used in this test example is 2.5 ⁇ M, and its CRE-dependent transcriptional activity is 1 / 12th that of 30 ⁇ M nobiletin. More than 30 ⁇ M nobiletin. That is, it was found that in the multi-component system of the skin extract of the present invention, the presence of components other than nobiletin significantly and synergistically increases the CRE-dependent transcription promoting activity of nobiletin than the activity expected from nobiletin alone. In addition, the skin extract of the present invention showed a CRE-dependent transcriptional activity stronger than that of conventional skin extracts, so it showed an action to improve learning and memory impairment and more effectively improved the recognition function of Alzheimer's disease. It has been shown.
  • mice were divided into 4 groups, each with a skin extract of 1.48 g / kg or 3.69 g / kg (nobiletin content: 10 mg / kg or 25 mg / kg, respectively), and 2 groups with physiological saline for 7 consecutive days Orally. On the 7th day, 90 minutes after administration of these, MK801 (0.08 mg / kg) or physiological saline was administered subcutaneously. Thirty minutes later, a fear conditioning learning test was conducted. In the horror learning test, mice were placed in a transparent box and allowed to explore freely for 2 minutes, followed by 0.7 mA, 2 s electrical stimulation.
  • Comparative Test 1 Examination of learning / memory impairment improving effect of nobiletin
  • Comparative Example 1-1 a comparative test was conducted by replacing oral administration of crust extract with intraperitoneal administration of nobiletin (10, 50 mg / kg). It was. The results are shown in FIG. 3B.
  • the freezing action was significantly reduced by the treatment with MK801.
  • the administration of the crustacean extract showed an improvement effect on the reduction in a dose-dependent manner in both the learning trial and the confirmation trial. It was.
  • the mice administered with the skin extract of the present invention received the MK801 treatment, and the learning / memory function was hindered and easily forgotten.
  • the ratio was about 1.5 times that of the control mouse and about 4.4 times that of the MK801-treated mouse skin extract-untreated mouse (FIG. 3A).
  • Such a result was not recognized by administration of nobiletin (Comparative Test 1, FIG. 3B). That is, it has been found that the skin extract of the present invention has an effect of acquiring memory and enhancing retention ability, which is not recognized by administration of nobiletin alone.
  • Test Example 4 The general test procedure used in Test Example 4 below is as follows. (PC12D cell culture) Dulbecco's modified Eagle medium (DMEM) (9.5 g) was dissolved in MilliQ water (800 mL), and glucose (3.5 g) was added thereto to make 1 L with MilliQ water. 830 mL of the product sterilized by autoclave was taken, and 17 mL of 10% aqueous sodium hydrogen carbonate solution and 16.5 mL of 3% L-glutamine aqueous solution were added. Next, equine serum (HS) to 10% and fetal calf serum (FCS) to 5% were prepared as growth media and cultured in a 5% CO 2 incubator at 37 ° C. . The test medium used was hDMEM containing 2% HS and 1% FCS.
  • DMEM Dulbecco's modified Eagle medium
  • PC12D cells were seeded on a 48-well plate at 8 ⁇ 10 4 cells / well and cultured in a growth medium for 24 hours, followed by lipofection with 0.1 ⁇ g / well of pRTH plasmid and 0.01 ⁇ g / well of Renilla pRG-TK plasmid.
  • the medium was replaced with a test medium in which the compound was dissolved 19 hours after transfection. After incubation for 24 hours, the medium was aspirated and collected with Passive Lysis Buffer. Firefly shiitake and Renilla luciferase were measured with a luminometer using Dual-Luciferase Reporter Assay System (Promega).
  • PC12D cells were seeded at 0.67 ⁇ 10 6 cells / dish in a 35 mm dish, cultured in a growth medium for 2 days in a 5% CO 2 incubator, and then treated with the drug for 24 hours. Each cell was treated and then washed with ice-cold PBS.
  • Cell lysate (1 mM EDTA, 1% SDS, 10 mM NaF, 10 nM caliculin, 320 nM okadaic acid, 1 mM sodium orthovanadate, 1 mM p-APMSF, 10 ⁇ g / mL pepstatin A, 10 ⁇ g / mL Antipine, 10 ⁇ g / mL leupeptin, 10 ⁇ g / mL chymostatin, 10 ⁇ g / mL phosphoramidon, 10 mM HEPES, pH 7.5). Thereafter, the mixture was immediately boiled at 95 ° C. for 5 minutes to denature the protein, and then the DNA was sonicated and the centrifuged supernatant was prepared as a sample for SDS-PAGE.
  • TBST containing 5% skim milk (10 mm Tris-HCl, 100 mm mM NaCl) , 0.05% Tween-20, pH 7.4; hereinafter referred to as blocking buffer) for 1 hour at room temperature. Samples were then washed with TBST and incubated overnight at 4 ° C. with primary antibody diluted 1000-fold with blocking buffer. Further, the sample was washed with TBST, incubated with an HRP-labeled IgG antibody diluted 2000 times with a blocking buffer at room temperature for 1 hour, and washed with TBST.
  • the ECL method was used to detect antibody-positive bands.
  • the antibody was peeled off using a stripping buffer (62.5 mM Tris-HCl, SDS 2% SDS, 100 mM mM ⁇ -mercaptoethanol, pH 7.4), the blot was washed with TBST, and the internal standard protein was detected.
  • PC12D cells were seeded at 1.0 ⁇ 10 6 cells / dish in a 35 mm dish and cultured in a 5% CO 2 incubator on a growth medium for 24 hours, and then the cell culture solution supplemented with skin 1 and skin 7 was further added for 24 hours. Cultured.
  • a low K + buffer 140 mM NaCl, 4.7 mM KCl, 1.2 mM KH 2 PO 4 , 2.5 mM CaCl 2 , 1.2 mM MgSO 4 , 11 mM glucose and 15 mM HEPES-Tris, pH 7 heated to 37 ° C.
  • the cells were washed in .4), a perchloric acid solution was added so that the final concentration was 0.4 N, and the cells were disrupted with ultrasonic waves for 1 minute.
  • the obtained solution was centrifuged, and dopamine was separated and quantified by high performance liquid chromatography using an electrochemical detector.
  • the skin 1 extract of the present invention increased the dopamine content at both 24 and 48 hours treatment compared to the control and conventional skin 7 extract.
  • the skin extract of the present invention increases the TH transcriptional activity, TH expression level and dopamine content in PC12D cells in a concentration-dependent manner, and its action is unexpected and exceptional compared to nobiletin at an equal concentration. It was powerful. That is, it was revealed that the skin extract of the present invention exhibits a dopamine synthesis promoting activity more markedly than nobiletin. Since the activity is not recognized in the conventional extract derived from dermis, it is considered that the dermis extract of the present invention exhibited a dopamine synthesis promoting activity due to a synergistic effect of a high content of nobiletin and other components other than nobiletin. As described above, the skin extract of the present invention is expected to have a medicinal effect as a therapeutic agent for Parkinson's disease.
  • Test Example 5 CRE Transcriptional Activity of Tachibana Skin Extract in Hippocampal Nerve Cells Using the extract extracted from Tachibana Skin 3 obtained in Example 2 by the method described herein, CRE transcriptional activity in hippocampal neurons is controlled And compared with nobiletin.
  • the test procedure was the same as in Test Example 2. The result is shown in FIG. 5A.
  • the Tachibana peel 3 extract 300 ⁇ g / mL used in this test example contained about 9.4 ⁇ M nobiletin.
  • the extract of Tachibana peel 3 showed significant CRE transcriptional activity in hippocampal neurons compared to control and nobiletin. From this, the tachibana peel extract of the present invention is expected to have a medicinal effect as a therapeutic agent for Alzheimer's disease.
  • Tachibana peel extract learning / memory impairment improving effect (in vivo test) Using the extract extracted from Tachibana bark 6 obtained in Example 2 by the method described in this specification, the effect of the Tachibana bark extract of the present invention on learning / memory impairment was examined. The test procedure was the same as in Test Example 3. The results are shown in FIGS. 5B and 5C. Tachibana peel extract 1.87 g / kg or 3.73 g / kg (nobiletin content: 25 mg / kg or 50 mg / kg, respectively) was orally administered to each group continuously for 7 days. As shown in FIG. 5B and FIG. 5C, in addition to significantly improving learning / memory impairment by chronic administration of the tachibana peel extract of the present invention, it is possible to enhance the ability to acquire and retain memory that is not observed with nobiletin. It became clear.
  • the tachibana peel extract of the present invention is expected to have a medicinal effect as a therapeutic agent for Alzheimer's disease.
  • Test Example 8 TH transcription activity of Tachibana peel extract in PC12D cells Using the extract extracted from Tachibana peel 3 obtained in Example 2 by the method described in this specification, the TH transcription activity in PC12D cells was compared with control and nobiletin. And compared. The test procedure was the same as in Test Example 4-1. The result is shown in FIG. 5E. As shown in FIG. 5E, Tachibana peel 3 extract showed significant TH transcriptional activity in PC12D cells compared to control and nobiletin.
  • GTP cyclohydrolase I (GCH I) level-increasing action of Tachibana bark extract in PC12D cells
  • GPC I level-increasing action was examined in PC12D cells.
  • GCH I is a rate-limiting enzyme in the biosynthesis of the coenzyme tetrahydrobiopterin (BH 4 ) essential for TH.
  • PC12D cells were treated with Tachibana peel extract, Chen peel extract and DMSO (control) at a concentration of 120 ⁇ g / mL for 48 hours, washed with PBS, and cell lysate (1 mM EDTA, 1% SDS, 10 mM HEPES, 10 mM NaF) , 1 mM p-APMSF, 1 mM sodium orthovanadate, 10 nM calyculin, 320 ⁇ M okadaic acid, 10 ⁇ g / mL pepstatin, 10 ⁇ g / mL antipine, 10 ⁇ g / mL leupeptin, 10 ⁇ g / mL chymostatin, 10 ⁇ g / mL phosphoramidon, 240 pM cypermethrin).
  • the Tachibana peel extract 120 ⁇ g / mL used in this test example contained about 3.76 ⁇ M nobiletin, and the cuticle extract 120 ⁇ g / mL contained about 2.02 ⁇ M nobiletin.
  • Tachibana peel extract and Chen peel extract significantly increased the expression level of GCH I compared to the control.
  • Tachibana peel extract significantly increased the expression level of GCH I compared to Chen peel extract.
  • Coenzyme BH4 which is essential for the expression of TH activity, increases the amount of TH protein, increases the TH enzyme activity, and promotes dopamine synthesis when the intracellular BH4 content is higher than the amount indicated by the Michaelis constant. .
  • the Tachibana peel extract of the present invention significantly increases the expression level of GCH I, and therefore increases the amount of GCH I, which is the rate-determining enzyme of coenzyme BH4 synthesis that is essential for the expression of TH activity.
  • GCH I is the rate-determining enzyme of coenzyme BH4 synthesis that is essential for the expression of TH activity.
  • TH activity is increased, and as a result, production and secretion of dopamine are presumed to be promoted, and a medicinal effect as a Parkinson's disease therapeutic agent is expected.
  • Test Example 12 CRE Transcriptional Activity of Citrus Citrus Skin Extract in Hippocampal Nerve Cells Using the extract extracted from Citrus mandarin 1 obtained in Example 2 by the method described herein, CRE transcriptional activity in hippocampal neurons is controlled And compared with nobiletin. The test procedure was the same as in Test Example 2. The results are shown in FIG. 7A. In addition, 100 ⁇ g / mL of the extract derived from 1 pericarp used in this test example contained about 3.4 ⁇ M nobiletin, and about 10.1 ⁇ M nobiletin in 300 ⁇ g / mL. As shown in FIG. 7A, the extract derived from the citrus pericarp showed significant CRE transcriptional activity in hippocampal neurons as compared to the control and nobiletin.
  • the extract derived from the fruit peel of the present invention shows a remarkable CRE transcriptional activity exceeding the activity predicted from the content of nobiletin, and is expected to be effective as a therapeutic agent for Alzheimer's disease.
  • Fine granules A A total of 200 to 200 g in proportions of 3.0 g of leather, 3.0 g of touki, 3.0 g of butterfly, 3.0 g of cucumber, 4.0 g of peanuts, 4.0 g of bakuryo, 2.0 g of psycho, 1.5 g of licorice and 5.0 g of hanger Herbal medicine was blended to 800 kg and extracted (extracted can) with water 2000-8000 L at 60-100 ° C for 30-180 minutes. After filtration (centrifugation) at a rotational speed of 1000 to 5000 rpm, solid-liquid separation was performed, followed by concentration to a concentration of about 10 to 40% under reduced pressure of 8 kPa or less (coil rotation type concentrator).
  • the concentrated solution was spray-dried (spray dryer) at a rotational speed of 10000-20000 rpm, a supply temperature of 130-180 ° C, and an exhaust temperature of 60-120 ° C to obtain an extract formulation (Yokukansanka-Chanka summer extract). .
  • a total amount of 50-400 kg is obtained at a ratio of 2.9 g of an additive consisting of magnesium stearate, corn starch, lactose, pullulan and magnesium aluminate metasilicate to 6.1 g of the obtained yokukansan kachu semi-summer extract.
  • the resulting fine granule A 9.0 g contains 6.1 g of Yokukansan Kashide semi-summer extract containing 3.0 g of skin and other herbal medicines. Take 2 to 3 times a day.
  • additive consisting of magnesium stearate, corn starch, lactose, pullulan and magnesium aluminate metasilicate
  • the resulting fine granule B 6.0 g contains 3.7 ⁇ g Kumisoto extract containing 3.0 tachibana peel and other herbal medicines.
  • the fine granule B 6.0 g per day Take 2 to 3 times.
  • Chotosan extract obtained in a ratio of 1.52 g of additive consisting of hydrous silicon dioxide, magnesium stearate and corn starch in a total amount of 50-400 kg, 4 rpm for 20 minutes Mix (container rotating type mixer), mold at roll pressure of 490-2500 Pa, adjust particle size (dry granulator), classify particles between sieves 30-50 (cassette screen), fine granules C was obtained.
  • the obtained fine granule C 6.0 g contains 4.48 g Chotosan extract containing 2.4 g Chen and other herbal medicines.
  • the fine granule C 6.0 g 3 times a day for adults Take in divided doses.
  • the ratio of 9.2 g of additive consisting of hydrous silicon dioxide, magnesium stearate and corn starch to 10 g of the crude or powdered raw material of cinnamon bark is blended in a total amount of 50 to 400 kg, and the number of rotations Mix at 4 rpm for 20 minutes (container rotation type mixer), mold at roll pressure 490-2500 Pa, adjust size (dry granulator), and classify particles between sieves 30-42 (cassette screen) As a result, a fine granule D was obtained.
  • the resulting fine granule D (19.2 g) contains 10 g of crusted or tachibana peel, and as a guideline, the fine granule D (19.2 to 38.4 g) should be taken 2 to 3 times a day for adults.
  • Decoction 10-30 g of decoction or tachibana peel was decocted with 200-600 mL of 20 times the amount of water at 100 ° C. for 1 hour, and the water was halved, followed by filtration to obtain a decoction.
  • the resulting decoction (100-300 mL) contains 10-30 g of decoction or tachibana peel.
  • 100-300 mL of decoction is taken in three divided doses per day for adults.
  • the resulting fine granule E 9.0 g contains 7.2 g of cinnamon extract or citrus peel extract equivalent to 20 g of cinnamon or tachibana peel. Take 3 divided doses.
  • the 13 capsules obtained (470 to 480 mg / piece) contain 3.6 kg of crust or extract of tachibana, equivalent to 10 g of crust or tachibana, and 13 to 26 capsules as a guide. Take 2 to 3 times a day for adults.
  • Coated tablets 50 kg of peel or tachibana peel was extracted (extracted can) with 500 to 2000 L of water at 60 to 100 ° C for 30 to 180 minutes. After filtration (centrifugation) at a rotational speed of 1000 to 2500 rpm, solid-liquid separation was performed, and the solution was concentrated to a concentration of about 10 to 40% under reduced pressure of 8 kPa or less (coil rotation type concentrator). The concentrate was spray-dried (spray dryer) at a rotational speed of 10000 to 20000 rpm, an air supply temperature of 130 to 180 ° C., and an exhaust temperature of 60 to 120 ° C. to obtain an extract of crust or tachibana peel.
  • 10 g of the resulting extract is blended in a ratio of 9.1 g of an additive consisting of maltose, lactose, magnesium aluminate metasilicate and magnesium stearate in a total amount in the range of 50 to 400 kg, with a rotation speed of 4 rpm, Mix for 20 minutes (container rotation type mixer), tablet at a rotation speed of 20-55 rpm, primary compression 0.6 mm or more, secondary compression 0.4 mm or more (high-speed rotary tableting machine), 1 tablet 350 mg I got a tablet.
  • an additive consisting of maltose, lactose, magnesium aluminate metasilicate and magnesium stearate in a total amount in the range of 50 to 400 kg, with a rotation speed of 4 rpm, Mix for 20 minutes (container rotation type mixer), tablet at a rotation speed of 20-55 rpm, primary compression 0.6 mm or more, secondary compression 0.4 mm or more (high-speed rotary tableting machine), 1 tablet 350 mg
  • the obtained 20 coated tablets contain 3.6 g of peel or tachibana peel equivalent to 10 g of peel or tachibana, and as a guideline, 20 to 40 coated tablets 2-3 times a day for adults Take in divided doses.
  • Fine granule F 50 kg of peel or tachibana peel was extracted (extraction can) at 500 to 2000 L of water at 60 to 100 ° C. for 30 to 180 minutes. After filtration (centrifugation) at a rotational speed of 1000 to 2500 rpm, solid-liquid separation was performed, and the solution was concentrated to a concentration of about 10 to 40% under reduced pressure of 8 kPa or less (coil rotation type concentrator). The concentrate was spray-dried (spray dryer) at a rotational speed of 10000 to 20000 rpm, an air supply temperature of 130 to 180 ° C., and an exhaust temperature of 60 to 120 ° C. to obtain an extract of crust or tachibana peel.
  • 10 g of the resulting extract is blended in a ratio of 15 g of an additive consisting of corn starch, maltose, hydrous silicon dioxide and magnesium stearate in a total amount in the range of 50 to 400 kg, rotating at 4 rpm, 20 Mix for a minute (container rotation type mixer), mold at roll pressure of 490-2500 Pa, adjust the size (dry granulator), classify particles between sieves 30-42 (cassette screen), fine particles Agent F was obtained.
  • the obtained fine granule F 4.5 g contains 1.8 g of the skin extract or tachibana peel equivalent to 5 g of crust or tachibana skin, and as a guideline, the fine granule F 4.5 ⁇ 9.0 g per day for adults Take 2 to 3 times.
  • 10 g of the resulting extract is blended in a ratio of 40 g of an additive consisting of calcium carmellose, hydrous silicon dioxide, magnesium aluminate metasilicate and magnesium stearate in a total amount of 50 to 400 kg and rotated.
  • an additive consisting of calcium carmellose, hydrous silicon dioxide, magnesium aluminate metasilicate and magnesium stearate in a total amount of 50 to 400 kg and rotated.
  • Mix at several 4 rpm for 20 minutes (container rotating type mixer), mold at roll pressure 490-2500 Pa, adjust particle size (dry granulator), and classify particles between sieves 12-42 (cassette screen) ) To obtain granules.
  • the obtained granule (18 g) contains 3.6 ⁇ g of peel or citrus peel extract equivalent to 10 g of cinnamon or tachibana peel.
  • 18 to 36 g of granule (2 to 3 times a day for adults) Take in divided doses.
  • 10 g of the resulting extract is added in a ratio of 40 g of additives consisting of carrageenan, locust bean gum, reduced maltose liquid sugar, xylitol, apple fragrance, lecithin and citric acid in a total amount of 10-30 kg
  • the mixture was mixed at a rotational speed of 50 to 150 rpm (mixing stirrer), and an equal amount of hot water of 80 ° C. or higher was added with stirring and cooled to 15 ° C. or lower to obtain a jelly agent.
  • the obtained jelly preparation (18 g) contains 3.6 g of cinnamon extract or tachibana peel extract equivalent to 10 g of peel or tachibana peel.
  • 18 to 36 g of jelly preparation is used 2-3 times per day Take in divided doses.
  • the resulting extract (3.6 g) is blended at a ratio of 0.9 g of additive consisting of finely divided silicon dioxide and sucrose fatty acid ester in a total amount of 50 to 400 kg and mixed for 20 minutes at 4 rpm.
  • Rotating mixer molded at a roll pressure of 490-2500 Pa, sized (dry granulator), classified between sieves 30-42 (cassette screen) to obtain fine granules.
  • the obtained 4.5g of fine grain contains 3.6g of Chen or Tachibana bark extract equivalent to 10g of Chen or Tachibana, and as a guideline, take 4.5g of fine per day for adults.
  • Ratio of 15.9 g of additive consisting of lecithin, reduced maltose starch syrup, aspartame, ascorbic acid, trisodium citrate, gelling agent (FG-2266, Nitta Gelatin Co., Ltd.) and orange flavor to 10 g of the obtained extract Then, the total amount was blended in the range of 50 to 400 kg, and mixed at a rotational speed of 4 rpm for 20 minutes (container rotating type mixer) to obtain a jelly base.
  • gelling agent FG-2266, Nitta Gelatin Co., Ltd.
  • the resulting jelly base of 9.3 g contains 3.6 g of cinnamon extract or citrus peel extract equivalent to 10 g of crust or tachibana, and as a guideline, ingest 9.3 to 18.6 g of jelly per day for adults .
  • the dried plant tissue or plant tissue extract of the present invention is useful as a pharmaceutical or food for improving central neurodegenerative diseases such as Alzheimer's disease and Parkinson's disease, and is also used as a component of a promising fundamental therapeutic agent for the disease Is possible.
  • the dried plant tissue or plant tissue extract of the present invention is particularly useful for memory acquisition, retention and enhanced recall ability.

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Abstract

　本発明の課題は、中枢神経変性疾患、特にアルツハイマー病およびパーキンソン病の従来にない顕著な改善効果を有する乾燥植物組織または植物組織抽出物の開発である。本発明は、従来にない顕著な抗アルツハイマー病活性および／または抗パーキンソン病活性を有する乾燥植物組織および植物組織抽出物を提供する。本発明はまた、上記乾燥植物組織または植物組織抽出物を含有する、中枢神経変性疾患の改善、特に記憶の獲得、保持および想起能力を増強するための医薬品および食品も提供する。

Description

学習・記憶障害および運動障害などを伴う中枢神経変性疾患を改善する乾燥植物組織および植物組織抽出物ならびにこれらを含有する医薬品および食品
　本発明は、学習・記憶障害および運動障害などを伴う中枢神経変性疾患を改善する乾燥植物組織および植物組織抽出物に関する。本発明はまた、上記乾燥植物組織または植物組織抽出物を含有する、医薬品および食品にも関する。
　現代の高齢化社会において、アルツハイマー病およびパーキンソン病などの中枢神経変性疾患の患者が増大し、社会問題となっている。中でもアルツハイマー病は認知機能障害、学習・記憶障害などを伴う進行性中枢神経変性疾患であり、その原因として学習・記憶に重要なＮ－メチル－Ｄ－アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体の機能を低下させるアミロイドβペプチドの重合および蓄積による神経変性が考えられている（非特許文献１を参照のこと）。
　一般に、記憶は３つの過程、すなわち記憶の獲得（encoding）、保持（retention）および想起（recall）の過程からなり、これら３つの過程のメカニズムは異なると考えられている。アルツハイマー病の中核症状である学習・記憶障害では、特に記憶の保持および想起過程に顕著な障害が起こっていると理解されている。このうち、想起能力を改善する作用を有する天然フラボノイド類の一つとして、式（Ｉ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
 で示されるノビレチンが知られており（特許文献１または非特許文献１もしくは２を参照のこと）、ノビレチンはまた、神経細胞に対して神経突起伸長作用を有することも知られている（特許文献２を参照のこと）。ノビレチンは種々の柑橘類植物の果皮などに含まれるが、通常極めて微量しか含まれていない。そのため、柑橘類植物の果皮由来の生薬の一つである陳皮は通常、健胃作用、去痰作用または鎮咳作用などを示し、これらの作用にはノビレチンは関与していないと考えられる。これまでにノビレチン特有の薬効を凌駕する、つまりノビレチンを上回る中枢神経変性疾患改善作用を示す柑橘類の乾燥植物組織およびその抽出物は知られていない。
　また、柑橘類の全果由来の搾汁液またはその抽出物を含有する学習・記憶障害改善作用を示す機能性食品が知られているが（特許文献３を参照のこと）、ここで用いられた柑橘類の全果にはノビレチンが微量しか含まれておらず、その薬効はノビレチン単体の想起能力の増強効果を超えるものではない。
　一方、中枢神経変性疾患の一つであるパーキンソン病は、振戦、動作緩慢、筋固縮、姿勢反射障害などの四大運動徴候を特徴とし、ドーパミン作動性神経系が何らかの要因で変性脱落するために起こる運動野の機能障害である。その治療方法の一つとして、現在、ドーパミン補充療法などが行われている。ドーパミン生合成経路における酵素の転写活性、つまりそのｍＲＮＡの発現量を上昇させる薬物は多く知られているが、ドーパミン自体の生成量を増大させる薬物はほとんど知られていない。また、ドーパミン合成能促進作用およびドーパミン分泌促進作用を示す柑橘類の乾燥植物組織およびその抽出物も知られていない。
国際公開２００５／０８２３５１号公報 特開２００２－６０３４０号公報 特開２００７－６１０２８号公報
日薬理誌 (Folia Pharmacol. Jpn.) 132, 155-159 (2008) The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 2007, Vol. 321, No. 2, pp.784-790
　このような状況下、中枢神経変性疾患、特にアルツハイマー病およびパーキンソン病の改善効果を有する乾燥植物組織または植物組織抽出物が開発されれば、中枢神経変性疾患における有望な根本治療薬の開発の実現が期待できる。その結果、我が国が抱えている高齢化社会における認知症などの難治進行性神経疾患の克服や医療保険制度の問題の解決に向けて大きく前進できる。さらに、学習・記憶障害のうち記憶の想起能力だけでなく、記憶の獲得および保持能力を増強させる乾燥植物組織または植物組織抽出物が開発されれば、医薬品および食品への応用についてより有用なものとなる。
　本発明者らは、鋭意研究の結果、顕著な中枢神経変性疾患改善効果を有する、柑橘類の乾燥植物組織および植物組織抽出物を見出した。本発明者らは特に、中枢神経変性疾患のうちアルツハイマー病およびパーキンソン病の根本治療薬として応用可能な柑橘類の乾燥植物組織および植物組織抽出物を見出した。本発明者らはさらに、アルツハイマー病の中核症状である記憶障害において記憶の想起能力のみならず、記憶の獲得および保持能力をも増強させる、柑橘類の乾燥植物組織および植物組織抽出物を見出した。
　具体的には、本発明は以下の態様を含む：
（１）乾燥植物組織１００重量％に対してノビレチンを０．４重量％以上含有する、中枢神経変性疾患の改善のための柑橘類の果皮の乾燥植物組織；
（２）乾燥植物組織１００重量％に対してノビレチンを０．３重量％以上含有する、中枢神経変性疾患の改善のための柑橘類の葉の乾燥植物組織；
（３）ノビレチン／ナリルチンの含有重量比が１．０以上である、（１）または（２）のいずれか記載の乾燥植物組織；
（４）中枢神経変性疾患がアルツハイマー病および／またはパーキンソン病である、（１）または（２）のいずれか記載の乾燥植物組織；
（５）中枢神経変性疾患の改善がｃＡＭＰ応答配列（ＣＲＥ）依存的転写活性の増大、記憶の獲得、保持および想起能力の増強、チロシン・ヒドロキシラーゼ（ＴＨ）転写活性の促進、ＴＨ発現量の上昇、ドーパミン合成能の促進、またはドーパミン分泌の促進によりもたらされる、（１）または（２）のいずれか記載の乾燥植物組織；
（６）植物組織抽出物１００重量％に対してノビレチンを０．６重量％以上含有する、中枢神経変性疾患の改善のための柑橘類の植物組織抽出物；
（７）ノビレチン／ナリルチンの含有重量比が２．０以上である、（６）記載の植物組織抽出物；
（８）（１）または（２）のいずれか記載の乾燥植物組織から水抽出、好ましくは６０～１００℃の水抽出により得られる、（６）記載の植物組織抽出物；
（９）中枢神経変性疾患がアルツハイマー病および／またはパーキンソン病である、（６）記載の植物組織抽出物；
（１０）中枢神経変性疾患の改善がＣＲＥ依存的転写活性の増大、記憶の獲得、保持および想起能力の増強、ＴＨ転写活性の促進、ＴＨ発現量の上昇、ドーパミン合成能の促進、またはドーパミン分泌の促進によりもたらされる、（６）記載の植物組織抽出物；
（１１）柑橘類がCitrus reticulata Blanco (Rutaceae)である、（１）または（２）のいずれか記載の乾燥植物組織；
（１２）柑橘類がCitrus reticulata Blanco (Rutaceae)である、（６）記載の植物組織抽出物；
（１３）柑橘類がタチバナ、好ましくはニホンタチバナである、（１）または（２）のいずれか記載の乾燥植物組織；
（１４）柑橘類がタチバナ、好ましくはニホンタチバナである、（６）記載の植物組織抽出物；
（１５）柑橘類がオオベニミカンである、（１）または（２）のいずれか記載の乾燥植物組織；
（１６）柑橘類がオオベニミカンである、（６）記載の植物組織抽出物；
（１７）医薬品１００重量％に対して、１０～１００重量％の（１）もしくは（２）のいずれか記載の乾燥植物組織または１０～９０重量％の（６）記載の植物組織抽出物を有効成分とする、アルツハイマー病治療用医薬品；
（１８）医薬品１００重量％に対して、１０～１００重量％の（１）もしくは（２）のいずれか記載の乾燥植物組織または１０～９０重量％の（６）記載の植物組織抽出物を有効成分とする、パーキンソン病治療用医薬品；
（１９）（１）または（２）のいずれか記載の乾燥植物組織と医薬的に許容される生薬成分とを１：５～１：１０の重量比率で配合して得られる配合物から水抽出、好ましくは６０～１００℃の水抽出により得られる抽出物を有効成分とする、中枢神経変性疾患の治療用医薬品；
（２０）食品１００重量％に対して、１０～１００重量％の（１）もしくは（２）のいずれか記載の乾燥植物組織または１０～９０重量％の（６）記載の植物組織抽出物を含有する、中枢神経変性疾患の改善のための食品；
（２１）中枢神経変性疾患がアルツハイマー病および／またはパーキンソン病である、（２０）記載の食品；
（２２）中枢神経変性疾患の改善が記憶の獲得、保持および想起能力の増強メカニズムによりもたらされる、（２０）記載の食品；
（２３）乾燥植物組織１００重量％に対してノビレチンを０．３～２．０重量％含有し、かつ、ノビレチン／ナリルチンの含有重量比が１．０～２３．０である、（４）記載の乾燥植物組織；
（２４）柑橘類の植物組織を５０～１００℃にて１～３時間加熱乾燥することにより得られ、歩留まりが２０～５０％である、（４）記載の乾燥植物組織；
（２５）植物組織抽出物１００重量％に対してノビレチンを０．６～３．０重量％含有し、かつ、ノビレチン／ナリルチンの含有重量比が２．０～１４．０である、（９）記載の植物組織抽出物；
（２６）細粒剤、茶剤、煎剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、ゼリー剤、散剤、液剤、シロップ剤またはエキス製剤の形態である、（１９）記載の医薬品。
　本発明の柑橘類の乾燥植物組織および植物組織抽出物は、従来の柑橘類の乾燥植物組織と比較して有意な中枢神経変性疾患改善効果を示す。
　本発明の乾燥植物組織および植物組織抽出物はまた、ＰＫＡ／ＥＲＫ／ＣＲＥＢシグナル伝達を活性化し、アルツハイマー病の症状の一つである学習・記憶障害を改善する効果を有する。本発明の乾燥植物組織および植物組織抽出物は特に、学習・記憶障害改善効果のうち、記憶の獲得、保持および想起能力の増強効果を示す。本発明の乾燥植物組織および植物組織抽出物はさらに、これに含まれるノビレチン含有量と同量のノビレチン単体と比較して強力なリン酸化促進作用およびＰＫＡ／ＥＲＫシグナル伝達促進効果を有する。これらに加えて、本発明の乾燥植物組織および植物組織抽出物は、ＣＲＥ転写活性およびＴＨ転写活性、ＴＨ発現量上昇作用またはドーパミン合成能促進作用もしくはドーパミン分泌促進作用によるパーキンソン病の改善効果を示す。
　本発明の乾燥植物組織および植物組織抽出物はさらに、そのノビレチン含有濃度から予測される効果を超える中枢神経変性疾患改善効果、特にＣＲＥ依存的転写活性の増大効果、記憶の獲得、保持および想起能力の増強効果、ＴＨ転写活性の促進効果ならびにＴＨ発現量の上昇作用のみならずドーパミン生合成の促進効果やドーパミン分泌促進効果を示す。これらの効果は、当該乾燥植物組織および植物組織抽出物に含まれるノビレチンとその他の成分との相乗効果に起因すると考えられる。
　ノビレチン単体では上記記憶の獲得、保持および想起能力の増強効果のうち記憶の獲得および保持能力の増強効果は認められないため、本発明の乾燥植物組織および植物組織抽出物はノビレチン単体とは全く異なる新規なメカニズムにより上記効果を奏すると考えられる。
図１Ａは、本発明の陳皮に含まれるフラボノイド類の三次元クロマトグラムを示す。 図１Ｂは、従来の陳皮に含まれるフラボノイド類の三次元クロマトグラムを示す。 図２Ａは、海馬神経細胞における陳皮エキスのＣＲＥＢリン酸化促進活性を示す。 図２Ｂは、海馬神経細胞における陳皮エキスのＰＫＡ基質リン酸化促進活性を示す。 図２Ｃは、海馬神経細胞における陳皮エキスのＥＲＫ１／２リン酸化促進活性を示す。 図２Ｄは、海馬神経細胞における陳皮エキスのＰＫＡシグナル伝達促進効果を示す。 図２Ｅは、海馬神経細胞における陳皮エキスのＥＲＫシグナル伝達促進効果を示す。 図２Ｆは、海馬神経細胞における本発明の陳皮１および従来の陳皮７からのエキスならびにノビレチンのＣＲＥ依存的転写活性を示す。 図２Ｇは、海馬神経細胞における本発明の陳皮２～４および従来の陳皮８～１０からのエキスならびにノビレチンのＣＲＥ依存的転写活性を示す。 図３Ａは、陳皮エキスの学習・記憶障害の改善効果、すなわち記憶の獲得、保持および想起能力の増強効果を示す。 図３Ｂは、ＭＫ８０１誘発性学習・記憶障害に対するノビレチンの作用を示す。 図４Ａは、ＰＣ１２Ｄ細胞における陳皮エキスのＴＨ転写活性促進効果を示す。 図４Ｂは、ＰＣ１２Ｄ細胞における陳皮エキスのＴＨ発現量上昇効果を示す。 図４Ｃは、ＰＣ１２Ｄ細胞における陳皮エキスのドーパミン含量上昇効果を示す。
図５Ａは、海馬神経細胞における橘皮エキスのＣＲＥ転写活性を示す。 図５Ｂは、橘皮エキスの学習障害の改善効果を示す。学習促進効果の全ペアについて、post Bonferroni試験を含むツーウェイANOVA。図面中の数値は平均値±標準誤差を示し；全試験についてn = 5である。対照（■）と比較して** p<0.01, *** p<0.001, MK-801（▲）と比較して###p<0.01, ★p<0.05。 図５Ｃは、橘皮エキスの記憶障害の改善効果を示す。記憶改善効果の全ペアについて、post Tukey試験を含むワンウェイANOVA。図面中の数値は平均値±標準誤差を示し；全試験についてn = 5である。対照と比較して*** p<0.001, MK-801と比較して#p<0.05および###p<0.01。 図５Ｄは、ＰＣ１２Ｄ細胞における橘皮エキスのＣＲＥ転写活性を示す。 図５Ｅは、ＰＣ１２Ｄ細胞における橘皮エキスのＴＨ転写活性を示す。 図５Ｆは、ＰＣ１２Ｄ細胞における橘皮エキスのＧＣＨ　Ｉ発現量上昇効果を示す。全ペアについて、post Tukey試験を含むワンウェイANOVA。図面中の数値は平均値±標準誤差を示し；全試験についてn = 3である。対照と比較して* p<0.05, ** p<0.01, *** p<0.001。陳皮エキスと比較して# p<0.05, ## p<0.01, ### p<0.001。
図６Ａは、海馬神経細胞におけるタチバナの葉由来エキスのＣＲＥ転写活性を示す。 図６Ｂは、ＰＣ１２Ｄ細胞におけるタチバナの葉由来エキスのＣＲＥ転写活性を示す。 図７Ａは、海馬神経細胞におけるオオベニミカン果皮由来エキスのＣＲＥ転写活性を示す。 図７Ｂは、ＰＣ１２Ｄ細胞におけるオオベニミカン果皮由来エキスのＣＲＥ転写活性を示す。 図７Ｃは、ＰＣ１２Ｄ細胞におけるオオベニミカン果皮由来エキスのＴＨ転写活性を示す。
　本発明に用いられる柑橘類は、ニホンタチバナ（Citrus tachibana）、コウライタチバナ（C. nipponokoreana）、ハナユ、シキキツ、キジツ、ダイダイ、地中海マンダリン、ダンシータンジェリン、オオベニミカン、コベニミカン、無核キシュウ、フクレミカン、カプチー、太田ポンカン、ヒラキシュウ、サンキツ、クレオパトラ、コウジ、ギリミカン、イーチャンレモン、ウンシュウミカン（Citrus unshiu Markovich）、Citrus reticulata Blanco (Rutaceae)、シークワーサー、ユズ、ブンタン、ヒュウガナツ、ポンカン、ナツミカン、ネーブルオレンジ、ハッサク、イヨおよびカボスからなる群から選択される植物のうちノビレチン含有量が高いものであり、好ましくはCitrus reticulata Blanco (Rutaceae)、ニホンタチバナ（Citrus tachibana）、コウライタチバナ（C. nipponokoreana）またはオオベニミカンである。本明細書において用語「タチバナ」は、ニホンタチバナまたはコウライタチバナを意味する。
　本発明の乾燥植物組織は、上記柑橘類の果皮または葉を歩留まり（乾燥後質量／乾燥前質量の割合）が、果皮の場合には２０～５０％、葉の場合には２０～５０％となるような条件にて乾燥した物質を意味する。加熱乾燥条件としては、温度５０～１００℃にて１～３時間が挙げられ、好ましくは温度６０℃にて２時間である。本発明の好ましい乾燥植物組織は、陳皮、橘皮およびタチバナの葉である。陳皮とは、柑橘類植物（例えば、Citrus reticulata Blanco (Rutaceae)、オオベニミカンなど）の成熟した果皮を意味し、橘皮とは、特にニホンタチバナまたはコウライタチバナなどのタチバナの成熟した果皮を意味し、タチバナの葉とは、ニホンタチバナまたはコウライタチバナなどのタチバナの葉を意味する。
　本発明の植物組織抽出物は、上記乾燥植物組織からの抽出物であり、好ましくは水抽出により得られるエキスである。本明細書における好ましい水抽出は、６０～１００℃における水による抽出である。
　本発明の乾燥植物組織および植物組織抽出物に含まれる成分としては、フラボノイド類、例えばノビレチン、ナリルチン、タンゲレチンおよびヘスペリジンなどが挙げられる。本発明の乾燥植物組織および植物組織抽出物の活性は、これらに含まれる成分の含有量および含有比率に起因する相乗効果のために、ノビレチン単体の薬効と比較して顕著である。
　本発明の乾燥植物組織は、総重量に対して０．３または０．４重量％以上、好ましくは０．３～２．０重量％、より好ましくは０．４～２．０重量％のノビレチン、０．７重量％以下、好ましくは０．４重量％以下のナリルチン、０．１～０．８重量％のタンゲレチンおよび０．４～１２重量％のヘスペリジンを含有する。本発明の乾燥植物組織はまた、ノビレチン／ナリルチンの含有重量比が１．０以上、好ましくは１．５～２３．０、より好ましくは２．０～１５．０、さらに好ましくは５．０～１５．０である。
　本発明の乾燥植物組織は、これに含まれる各成分の割合が上記範囲内であれば、いずれの植物に由来するものであっても、本発明の薬効、すなわち中枢神経変性疾患改善効果（抗アルツハイマー病活性、抗パーキンソン病活性など）、学習・記憶障害改善効果、リン酸化促進作用およびＰＫＡ／ＥＲＫシグナル伝達促進効果、ＣＲＥ転写活性およびＴＨ転写活性、ＴＨ発現量上昇作用、ドーパミン合成能促進作用、またはドーパミン分泌促進作用を示す。
　本発明の植物組織抽出物は、総重量に対して０．６～２．０重量％以上、好ましくは０．６～３．０重量％のノビレチン、０．７重量％以下、好ましくは０．４重量％以下のナリルチン、０．１～１．０重量％のタンゲレチンおよび１．８～６．０重量％のヘスペリジンを含有する。本発明の植物組織抽出物はまた、ノビレチン／ナリルチンの含有重量比が２．０以上、好ましくは２．０～１４．０、より好ましくは２．５～１０．０である。
　本発明の植物組織抽出物は、これに含まれる各成分の割合が上記範囲内であれば、いずれの植物に由来するものであっても、本発明の薬効、すなわち中枢神経変性疾患改善効果（抗アルツハイマー病活性、抗パーキンソン病活性など）、学習・記憶障害改善効果、リン酸化促進作用およびＰＫＡ／ＥＲＫシグナル伝達促進効果、ＣＲＥ転写活性およびＴＨ転写活性、ＴＨ発現量上昇作用、ドーパミン合成能促進作用、またはドーパミン分泌促進作用を示す。
　本明細書において用語「中枢神経変性疾患」としては、アルツハイマー病、特に学習・記憶障害、およびパーキンソン病が挙げられる。
　本発明の乾燥植物組織および植物組織抽出物の抗アルツハイマー病活性および／または抗パーキンソン病活性としては、中枢神経変性疾患の発症メカニズムに関与する学習・記憶障害の改善またはドーパミン合成の促進が挙げられる。具体的には、シナプス可塑性促進活性およびＣＲＥ（ｃＡＭＰ応答配列）依存的転写活性、またはチロシン・ヒドロキシラーゼ（ＴＨ）転写活性促進活性、ＴＨ発現量上昇活性、ドーパミン含量上昇活性、ドーパミン分泌促進活性などである。
　より詳細には、本発明の乾燥植物組織および植物組織抽出物は、植物組織の種類に応じて異なる活性を示してもよい。例えば、ドーパミンが関連する活性について、陳皮または陳皮エキスはドーパミン含量上昇活性を示し得、橘皮または橘皮エキスはドーパミン分泌促進活性を示し得る。
　本明細書において学習・記憶障害は、記憶過程における以下の三つの能力を低下させる障害である：記憶の獲得（encoding）、保持（retention）および想起（recall）能力。本明細書において用語「獲得」とは情報を記憶に取り込むことであり、「保持」とは取り込まれた情報を保存することであり、「想起」とは保存された情報を思い出すことを意味する。
　本発明の乾燥植物組織または植物組織抽出物を当分野にて通常用いられる方法に従って処理することにより、中枢神経変性疾患用治療薬を製造することができる。本明細書において中枢神経変性疾患用治療薬としては、抗アルツハイマー病薬および／または抗パーキンソン病薬、すなわち抗アルツハイマー病活性および／または抗パーキンソン病活性を有する医薬品が挙げられる。
　本明細書において用語「医薬品」は、ヒトおよび動物における疾患の診断、治療または予防のための物質を意味し、生薬を含む医薬品、例えば生薬製剤および漢方薬を含む。好ましい医薬品は、経口投与形態であり、より好ましくは細粒剤、茶剤、煎剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、ゼリー剤、散剤、液剤、シロップ剤またはエキス製剤である。
　本明細書において用語「生薬」は、天然に存在する薬効を有する産物から有効成分を精製することなく、対象の体質改善のために用いる物質の総称であり、１以上の生薬成分を含む。本明細書において用語「漢方薬」は、漢方医学の理論に基づいて処方される医薬品を意味する。
　本明細書において用語「食品」は、いわゆる健康食品と、当局の許可等の有無や食品の目的、機能等の違いによって区別される、特定保健用食品および栄養機能食品などの保健機能食品とを含む。本明細書における好ましい食品は、細粒、ゼリーの素、ピール、ジャムまたは茶であり、より好ましくは細粒または茶である。
　本明細書における医薬品および食品への各成分の配合量は、対象の使用目的、性別、症状等に応じて適宜調整することができるが、例えば本発明の乾燥植物組織１０～１００重量％または植物組織抽出物１０～９０重量％、および他の担体または添加物０～９０重量％である。本発明の乾燥植物組織または植物組織抽出物の成人１日あたりの摂取量は、それぞれ３～５０ｇまたは１～２０ｇであるのが好ましく、より好ましくは５～３０ｇまたは２～１０ｇである。
　本明細書における他の担体および添加物としては、当分野で通常用いられるものが挙げられ、例えば医薬的または食品衛生的に許容される生薬成分、アスコルビン酸、アスパルテーム、アップル香料、オレンジ香料、カラギナン、カラメル、カルナウバロウ、カルメロース、カルメロースカルシウム、還元麦芽糖液糖、還元麦芽糖水飴、含水二酸化ケイ素、キシリトール、クエン酸、クエン酸三ナトリウム、グラニュー糖、軽質無水ケイ酸、ゲル化剤（FG-2266、新田ゼラチン株式会社）、合成ケイ酸アルミニウム・ヒドロキシプロピルスターチ・結晶セルロース、サラシミツロウ、酸化チタン、食塩、ショ糖脂肪酸エステル、ステアリン酸マグネシウム、セルロース、タルク、デキストリン、トウモロコシデンプン、乳糖、ハチミツ、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微粒二酸化ケイ素、プルラン、ペクチン、マルトース、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、メチルセルロース、レシチンおよびローカストビーンガムが挙げられる。
　本明細書における医薬的または食品衛生的に許容される生薬成分としては、当分野で通常用いられるものが挙げられ、例えばイレイセン、ウヤク、エンゴサク、オウギ、オウゴン、オウバク、オンジ、カッコウ、カッコン、カンキョウ、カンゾウ、キキョウ、キクカ、キジツ、キョウニン、ケイヒ、コウカ、コウブシ、コウボク、ゴシツ、ゴシュユ、ゴミシ、サイコ、サンシシ、ジオウ、シャクヤク、ショウキョウ、ショウマ、シンキク、セッコウ、センキュウ、ゼンコ、ソウジュツ、ソボク、ソヨウ、ダイオウ、タイソウ、ダイフクヒ、タクシャ、チクジョ、チモ、チョウトウコウ、テンマ、テンモンドウ、トウキ、トウニン、ニンジン、バクガ、バクモンドウ、ハンゲ、ビャクシ、ビャクジュツ、ビンロウジ、ブクリョウ、ボウイ、ボウショウ、ボウフウ、ボタンピ、マオウ、モクツウ、モッコウ、ヤクモソウ、リュウタンおよびワキョウカツが挙げられる。
　以下の実施例において、陳皮1～6、橘皮1～6、タチバナの葉1～3およびオオベニミカン1（果皮）は本発明の乾燥植物組織であり、陳皮7～12は従来のものである。また、以下の実施例にて用いたサンプルと含有成分の観点から同程度の植物組織は、小太郎漢方製薬株式会社から入手可能である。
［実施例１］乾燥植物組織の製造
　本実施例において、種々の柑橘類から採取した果皮および葉を陰干し、日干しまたは加熱乾燥することにより陳皮、橘皮、タチバナの葉およびオオベニミカンの果皮の乾燥体を製造した。加熱乾燥は、歩留まり（乾燥後質量／乾燥前質量の割合）が陳皮および橘皮について20～50%、タチバナの葉について20～50%、オオベニミカンの果皮について20～50%となるまで行い、具体的には温度60℃にて2時間加熱乾燥した。
［実施例２］植物組織抽出物の製造
　実施例１で得られた陳皮、橘皮、タチバナの葉またはオオベニミカンの果皮を細切りしたもの約10 gに純水400 mLを加えて加熱した（橘皮6については、細切りしたもの約20 gに純水1000 mLを加えて加熱した）。混合物が沸騰した後、100℃にて1時間かけて抽出した。次いで、ガーゼ（２枚）を通してろ過し、ろ液を凍結乾燥して植物組織抽出物を得た。植物組織抽出物の製造結果を以下の表１に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
［実施例３］含有成分の分析
　実施例１および２で得られた乾燥植物組織および植物組織抽出物の含有成分を以下のようにして測定した。以下に、陳皮および陳皮エキスについての分析方法を示す。
（ノビレチンおよびタンゲレチンの定量）
　ノビレチンおよびタンゲレチンの定量に用いた標準溶液を以下のように調製した。ノビレチン（和光純薬工業株式会社）をデシケーター（シリカゲル）で24時間以上乾燥した。乾燥ノビレチン約5 mgをメタノール／水混液（7:3）に溶解して100 mLとし、ノビレチン標準溶液とした。また、タンゲレチン（和光純薬工業株式会社）をデシケーター（シリカゲル）で24時間以上乾燥した。乾燥タンゲレチン約3 mgをメタノール／水混液（7:3）に溶解して100 mLとし、タンゲレチン標準溶液とした。
　陳皮の試料溶液として、陳皮の粉末約0.3 gを50 mLの共栓遠心沈殿管に入れ、これにメタノール50 mLを加えた。混合物に超音波を照射して（UT-305HS、シャープ株式会社）抽出を行った後、遠心分離した（KUBOTA KN-70、株式会社久保田製作所）。その後ろ過し、陳皮の試料溶液とした。
　陳皮エキスの試料溶液として、陳皮エキス約0.3 gを50 mLの共栓遠心沈殿管に入れ、これにメタノール／水混液（7:3）50 mLを加えた。混合物に超音波を照射して（UT-305HS、シャープ株式会社）抽出を行った後、遠心分離した（KUBOTA KN-70、株式会社久保田製作所）。その後ろ過し、陳皮エキスの試料溶液とした。
　以上のようにして調製した標準溶液および試料溶液を以下の分析条件下にて定量した。
　検出器: 紫外吸光光度計（測定波長: 338 nm）
　カラム: Mightysil RP-18 4.6 mm x 15 cm（関東化学株式会社）
　移動相: 水／アセトニトリル混液（3:2）
　流速: 1.0 mL/分（ノビレチンの保持時間を約10分とした）
　カラム温度: 40℃
　注入量: 10μL
（ヘスペリジンおよびナリルチンの定量）
　ヘスペリジンおよびナリルチンの定量に用いた標準溶液を以下のように調製した。ヘスペリジン（和光純薬工業株式会社）をデシケーター（シリカゲル）で24時間以上乾燥した。乾燥ヘスペリジン約10 mgを50%メタノールに溶解して50 mLとし、ヘスペリジン標準溶液とした。また、ナリルチン（和光純薬工業株式会社）をデシケーター（シリカゲル）で24時間以上乾燥した。乾燥ナリルチン約10 mgを50%メタノールに溶解して500 mLとし、ナリルチン標準溶液とした。
　陳皮の試料溶液として、陳皮の粉末約0.1 gにメタノール30 mLを加えた。混合物に超音波を20分間照射して（UT-305HS、シャープ株式会社）抽出を行った後、遠心分離し（KUBOTA KN-70、株式会社久保田製作所）上清を分取した。残留物にメタノール20 mLを加えて超音波を20分間照射して抽出を行った後、遠心分離した。これを分取した上清と合わせて陳皮の試料溶液とした。
　陳皮エキスの試料溶液として、陳皮エキス約0.1 gを50 mLの共栓遠心沈殿管に入れ、これにメタノール／水混液（1:1）50 mLを加えた。混合物に超音波を照射して（UT-305HS、シャープ株式会社）抽出を行った後、遠心分離した（KUBOTA KN-70、株式会社久保田製作所）。その後ろ過し、陳皮エキスの試料溶液とした。
　以上のようにして調製した標準溶液および試料溶液を以下の分析条件下にて定量した。
　検出器: 紫外吸光光度計（測定波長: 285 nm）
　カラム: L-column2 ODS 4.6 mm x 25 cm（化学物質評価研究機構）
　移動相: 水／アセトニトリル／酢酸混液（40:10:1）
　流速: 0.8 mL/分（ヘスペリジンの保持時間を約15分とした）
　カラム温度: 30℃
　注入量: 10μL
　実施例１および２で得られた陳皮、橘皮、タチバナの葉およびオオベニミカンの果皮の分析結果を以下の表２に、これら植物組織抽出物の分析結果を表３に示す。また、本発明の陳皮および従来の陳皮に含まれるフラボノイド類の三次元クロマトグラムをそれぞれ図１ＡおよびＢに示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
 *: 各成分の含量は、用いる柑橘類の植物体の採取場所や採取時期などによって変化することがある。例えば、橘皮の青色果皮では約1.60重量%のノビレチン含量のものもあったが、黄色果皮になると約1.1重量%であった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
 *: 各成分の含量は、用いる柑橘類の植物体の採取場所や採取時期などによって変化することがある。
［試験例］
　上記実施例で得られた陳皮エキスについて以下のインビトロおよびインビボ試験を行った。
［一般的試験手順１］
　以下の試験例１で用いた一般的試験手順は以下のとおりである。
（ラット胎仔初代海馬神経細胞の培養）
　妊娠Sprague-Dawley（SD）ラットを12時間周期の明暗サイクルにて給餌・給水して飼育した。妊娠18日目のラット（E18）からエーテル深麻酔下にて腹部正中切開により無菌的に子宮を摘出した。実体顕微鏡下、氷冷リン酸緩衝生理食塩水（PBS）中にて胎仔の海馬を摘出し、パパイン酵素（SUMILON）で組織を分散させ、1000 rpmにて4分間遠心分離した後、上清を除去した。次いで、細胞ペレットを分散液（SUMILON）中にて分散させ、さらにピペッティングにより十分分散させた細胞に除去液（SUMILON）を加えて900 rpmにて5分間遠心分離した後、上清を除去した。
　次に、ペレットをNeurobasal Medium（Neurobasal Medium 500 mL/フェノール・レッド不含, 50 x B27 Supplement 10 ml, 0.5 mM L-グルタミン, 0.005%ペニシリン-ストレプトマイシン）を用いて懸濁し、ポリ-L-リジンでコーティングした皿またはプレートに播種した。培養1日後に培地交換し、その後3～4日おきに培地を半量交換し、10μM AraCを含有する培地中37℃にて5% CO2インキュベーター内で14日間培養した。
　なお、薬物処置実験用試験培地は、10μM AraCを含有するNeurobasal Mediumを用いた。
（SDS-PAGEおよびウェスタン・ブロット分析１）
　ラット胎仔初代海馬神経細胞を35 mm皿に1×106細胞／皿にて播種し、成長培地中14日間5% CO2インキュベーターで培養した後、薬物を10分間処置した。
　各細胞を薬物処置した後、氷冷したPBSで洗浄した。次いで、細胞可溶化液（1 mM EDTA, 1% SDS, 10 mM NaF, 10 nMカリキュリン, 320 nMオカダ酸, 1 mMオルトバナジウム酸ナトリウム, 1 mM p-APMSF, 10μg/mLペプスタチンA, 10μg/mLアンチパイン, 10μg/mLロイペプチン, 10μg/mLキモスタチン, 10μg/mLホスホラミドン, 10 mM HEPES, pH7.5）で回収した。その後すみやかに95℃にて5分間煮沸し、タンパク質を変性させた後、DNAを超音波破砕してSDS-PAGE用サンプルを調製した。
　SDS-PAGEの分離ゲルとして12.5%ポリアクリルアミドゲルを用い、35 V, 10 mAにて泳動した後、ゲルからPVDF膜へタンパク質を転写し、5%スキムミルクを含むTBST（10 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, 0.05% Tween 20, pH7.4; 以下、ブロッキングバッファと称する）を用いて室温にて1または2時間ブロッキングした。次いで、サンプルをTBSTで洗浄し、ブロッキングバッファで1000倍に希釈した一次抗体と4℃にて一晩インキュベートした。さらにサンプルをTBSTで洗浄し、ブロッキングバッファで2000倍に希釈したHRP標識IgG抗体と室温にて2時間インキュベートし、TBSTで洗浄した。抗体陽性のバンドの検出にはECL法を用いた。リプロービングは予め50℃に温めたストリッピング・バッファ（62.5 mM Tris-HCl, 2% SDS, 100 mMβ-メルカプトエタノール, pH7.4）にPVDF膜を入れて50℃にて30分間インキュベートして抗体を剥がし、TBSTで洗浄した。その後、リプロービングにより内部標準タンパク質を検出した。
（統計学的解析１）
　実験結果はワンウェイANOVA（Student-Newman-Keuls）を用いて評価した。有意水準を両側5%として検定し、p＜0.05を有意とした。
［試験例１］陳皮エキスの学習・記憶障害改善作用（インビトロ試験）
　本試験例において、学習・記憶障害に対する本発明の陳皮エキスの作用を検討した。インビトロ試験において、陳皮エキスの海馬ニューロンにおける核内タンパク質CREBのリン酸化促進作用を検討し、初代培養海馬神経細胞におけるNMDA受容体遮断薬（MK801）によるPKA/ERKシグナル伝達抑制への陳皮エキスの影響を検討した。
　なお、本明細書において用いるMK801は、グルタミン酸受容体のサブタイプの一つであるNMDA受容体の非選択的アンタゴニストであり、ジゾシルピン（dizocilpine）とも称される。
　本試験例で用いた陳皮エキスは以下のように調製した。すなわち、インビトロ試験では、陳皮1からの陳皮エキス7.2 gを秤量し、50 ml遠心チューブに入れ、これにジメチルスルホキシド（DMSO）を加えて30 mLとした。その後、30分間超音波処理し、3000 rpmで10分間遠心分離し、上清を回収して陳皮エキスとして用いた。
［試験例１－１］初代培養海馬神経細胞における陳皮エキスのCREBリン酸化促進効果
　種々の濃度の陳皮エキスによるCREBリン酸化に対する効果についてウェスタン・ブロット法を用いて検討した。1×106細胞／35-mmプラスチックシャーレの密度にて増殖させたE18ラット海馬神経細胞を14日間培養した。細胞を陳皮エキス（30, 60, 120, 240および480μg/ml）で10分間処理した。抗リン酸化CREB抗体を用いてウェスタン・ブロット法を行った。次いで、ブロットを剥ぎ取り、抗14-3-3-β抗体について再度試験し、等量のタンパク質が各レーンにて電気泳動されたことを確認した。
　図２Ａに示されるように、陳皮エキスは濃度依存的にCREBリン酸化を促進した。
［試験例１－２］初代培養海馬神経細胞における陳皮エキスのPKA基質リン酸化促進効果
　種々の濃度の陳皮エキスによるPKA基質リン酸化に対する効果についてウェスタン・ブロット法を用いて検討した。1×106細胞／35-mmプラスチックシャーレの密度にて播種したE18ラット海馬神経細胞を14日間培養した。細胞を異なる濃度の陳皮エキスで10分間処理した。抗リン酸化PKA基質抗体を用いてウェスタン・ブロット法を行った。次いで、ブロットを剥ぎ取り、抗14-3-3-β抗体について再度試験し、等量のタンパク質が各レーンにて電気泳動されたことを確認した。
　図２Ｂに示されるように、陳皮エキスは濃度依存的にPKA基質リン酸化を促進した。
［試験例１－３］初代培養海馬神経細胞における陳皮エキスの細胞外シグナル制御キナーゼ（ERK）1/2リン酸化促進効果
　種々の濃度の陳皮エキスまたはノビレチンのERK1/2リン酸化に対する効果についてウェスタン・ブロット法を用いて検討した（陳皮エキス60μg/ml中にノビレチン1μMを含有）。1×106細胞／35-mmプラスチックシャーレの密度にて増殖させたE18ラット海馬神経細胞を14日間培養した。細胞を陳皮エキス（30, 60, 120, 240および480μg/ml）またはノビレチン（4, 8および30μM）で10分間処理した。抗リン酸化ERK1/2抗体を用いてウェスタン・ブロット法を行った。次いで、ブロットを剥ぎ取り、抗ERK1/2抗体について再度試験し、等量のタンパク質が各レーンにて電気泳動されたことを確認した。
　図２Ｃに示されるように、陳皮エキスは濃度依存的にERK1/2リン酸化を促進した。また、陳皮エキスはノビレチンと比較して、強い作用を示した。すなわち、ノビレチン4μMを含有する本発明の陳皮エキス240μg/mlのリン酸化促進効果は、ブロットの大きさによりノビレチン4μMの効果より強いことが示唆された。
［試験例１－４］初代培養海馬神経細胞における陳皮エキスのPKA/ERKシグナル伝達促進効果
　初代培養ラット海馬神経細胞においてMK801によるPKA/ERKシグナル伝達抑制に及ぼす陳皮エキスの影響を検討した。初代培養ラット海馬神経細胞に、陳皮エキスまたはノビレチンを1時間前処置した後、MK801を30分間処置し、さらに15分間N-メチル-D-アスパラギン酸（NMDA）で処置した。抗リン酸化PKA基質抗体を用いてウェスタン・ブロット法を行った。次いで、ブロットを剥ぎ取り、抗14-3-3-β抗体について再度試験し、等量のタンパク質が各レーンにて電気泳動されたことを確認した（図２Ｄを参照のこと）。また、抗リン酸化ERK1/2抗体を用いてウェスタン・ブロット法を行った。次いで、ブロットを剥ぎ取り、抗ERK1/2抗体について再度試験し、等量のタンパク質が各レーンにて電気泳動されたことを確認した（図２Ｅを参照のこと）。
　その結果、MK801はNMDAによるPKA/ERKシグナル伝達を抑制した。しかし、陳皮エキスは濃度依存的にMK801によるシグナル伝達抑制に対して拮抗作用を示し、陳皮エキス（陳皮エキス480μg/ml中にノビレチン8μMを含有）の作用はノビレチン8μMのものよりも強力であった。
（考察１）
　上記試験例の結果から、シナプス形成および長期記憶の形成に深く関与することが知られている核内タンパク質であるCREB、さらにその上流にあるPKA基質およびERK1/2のリン酸化において、本発明の陳皮エキスは有意なリン酸化促進作用を有することが明らかとなった。本発明の陳皮エキスはまた、ERK1/2においてノビレチンよりも強いリン酸化促進作用を示した。
　さらに、本発明の陳皮エキスは、MK801によるPKA/ERKシグナル伝達抑制に対して有意に拮抗作用を示し、その作用はノビレチンよりも強力であった。これにより本発明の陳皮エキスは、これに含まれるノビレチンとノビレチン以外の成分との相乗的作用を有することが示された。
［試験例２］海馬神経細胞における陳皮エキスのCRE依存的転写活性（インビトロ試験）
　本試験例において、本発明の陳皮エキスのCRE依存的転写活性作用を従来の陳皮エキスおよびノビレチンと比較した。
　上記一般的試験手順１に記載のように、ラット海馬神経細胞を初代培養した後、レポータージーンアッセイを行った。海馬神経細胞を48ウェルプレートに8 x 104細胞／ウェルで播種し、Neurobasal mediumで10～14日間培養した。レポータープラスミド（0.1μg/ウェル）、ウミシイタケpRG-TKプラスミド（0.01μg/ウェル）をリポフェクション法にてトランスフェクトし、16時間培養。AraC無添加のNeurobasal medium（B-27 Supplement、L-グルタミン、ペニシリン-ストレプトマイシンを含む）で希釈し、300μg/mlの濃度の陳皮エキスで8時間処置した。なお、陳皮エキスは150 mg/ml DMSO溶液をストック溶液とし、分注して-20℃にて保存した。転写活性の測定はPromega社製のDual-Luciferase（登録商標）Reporter Assay Systemを用いて行った。海馬神経細胞をPassive Lysis Buffer（Promega）で可溶化後、Luciferase Assay Regent II（Promega）およびStop ＆ Glo（登録商標）Reagent（Promega）を混和し、ルミノメーターで蛍光値を測定した。
　統計学的解析のために、レポータージーンアッセイ、RT-PCRで得られた結果はone-way ANOVA（Tukey）を用いて評価した。有意水準を両側5%として検定し、p＜0.05を有意とした。
（考察２）
　図２Ｆおよび２Ｇに示されるように、本試験例で用いた陳皮エキスにおけるノビレチン濃度は2.5μMであり、30μMノビレチンの12分の1の濃度であるにもかかわらず、そのCRE依存的転写活性は30μMノビレチンを超えるものであった。すなわち、多成分系の本発明の陳皮エキスでは、ノビレチン以外の成分の存在によりノビレチンのCRE依存的転写促進活性がノビレチン単体から想定される活性よりも顕著かつ相乗的に増大することが判明した。さらに、本発明の陳皮エキスは、従来の陳皮エキスよりも強いCRE依存的転写活性が認められたことから、学習・記憶障害改善作用を示し、より効果的にアルツハイマー病の認識機能を改善することが示された。
［試験例３］陳皮エキスの学習・記憶障害改善作用（インビボ試験）
　次に、インビボ試験において、MK801誘発性記憶障害モデルマウスを用いて、行動薬理学的に学習・記憶障害に対する本発明の陳皮エキスの作用を検討した。
　本試験例で用いた陳皮エキスは以下のように調製した。すなわち、陳皮1からの陳皮エキス5.54 gを秤量し、50 ml遠心チューブに入れ、これに生理食塩水を加えて30 mLとした。その後、30分間超音波処理した。
　マウスへの陳皮エキスの投与用量は、ノビレチン含量を基に調製した。ここで、ノビレチン含量は、予めノビレチン標準物質を用いたHPLC法の絶対検量線法により測定した。
　MK801誘発性学習・記憶障害に対する陳皮エキスの慢性投与による作用を検討した。マウスを４群に分け、それぞれ陳皮エキス1.48 g/kgまたは3.69 g/kg（ノビレチン含量: それぞれ10 mg/kgまたは25 mg/kg）を１群ずつに、２群に生理食塩水を7日間連続的に経口投与した。7日目にこれらを投与した90分後にMK801（0.08 mg/kg）または生理食塩水を皮下投与した。その30分後に恐怖条件付け学習試験を行った。
　恐怖付け学習試験において、マウスを透明なボックスに入れ、2分間自由に探索させた後、0.7 mA、2 sの電気刺激を与えた。これを3回繰り返して学習試行を行い、記憶の獲得および保持能力を評価した。24時間後に、マウスを再び透明なボックスに入れ、マウスのすくみ行動、すなわち呼吸以外のすべての動作が停止した状態を指標とした確認試行を行い、学習・記憶行動として5分間の測定により保持および想起能力を評価した。結果を図３Ａに示す。
［比較試験１］ノビレチンによる学習・記憶障害改善作用の検討
　上記試験例１－１にて、陳皮エキスの経口投与をノビレチン（10, 50 mg/kg）の腹腔内投与に代えて比較試験を行った。結果を図３Ｂに示す。
　図３ＡおよびＢに示されるように、MK801の処置により、すくみ行動が有意に減少したが、陳皮エキスの投与により学習試行および確認試行のいずれの場合も用量依存的にその減少について改善効果が認められた。特に学習試行では、本発明の陳皮エキスを投与したマウスは、MK801の処置を受けることにより学習・記憶機能が阻害されて忘却しやすくなっているにもかかわらず、3回目の条件付けにおける記憶時間が対照マウスに対して約1.5倍であり、MK801処置の陳皮エキス未投与マウスに対して約4.4倍であった（図３Ａ）。このような結果は、ノビレチンの投与では認められなかった（比較試験１、図３Ｂ）。すなわち、本発明の陳皮エキスは、ノビレチンのみの投与では認められない記憶の獲得および保持能力の増強効果を有することが判明した。
　さらに、確認試行において、本発明の陳皮エキスによる試験では、経口投与であるにもかかわらず、ノビレチン腹腔内投与による結果と比較して有意差は認められなかった。
（考察３）
　上記試験例の結果から、インビボにおいても、本発明の陳皮エキスの慢性投与により学習・記憶障害を有意に改善することに加え、ノビレチンでは認められない記憶の獲得および保持能力を増強することが明らかとなった。
　以上より、本発明の陳皮エキスは、シナプス可塑性促進作用およびPKA/ERK保護作用により、学習・記憶障害を改善し、さらに記憶の獲得能力を増強することが示された。すなわち、本発明の陳皮エキスは、ノビレチンよりもアルツハイマー病の中核症状である学習・記憶障害を改善し、特にノビレチンには認められない記憶の獲得および保持能力を増強および／または改善することが示された。
［一般的試験手順２］
　以下の試験例４で用いた一般的試験手順は以下のとおりである。
（PC12D細胞の培養）
　ダルベッコ改変イーグル培地（DMEM）9.5 gをMilliQ水800 mLに溶解し、これにグルコース3.5 gを加えMilliQ水で1 Lにした。オートクレーブで滅菌したものを830 mLとり、10%炭酸水素ナトリウム水溶液17 mLおよび3% L-グルタミン水溶液16.5 mLを加えた。次いで、10%となるようにウマ血清（HS）、5%となるようにウシ胎仔血清（FCS）を加えて調製したものを成長培地とし、37℃にて5% CO2インキュベーター内で培養した。
　試験培地は、2% HS, 1% FCSを含有するhDMEMを使用した。
（プラスミドの導入およびレポータージーンアッセイ）
　PC12D細胞を48ウェルプレートに8×104細胞／ウェルで播種し、成長培地にて24時間培養した後、pRTHプラスミドを0.1μg/ウェル、ウミシイタケpRG-TKプラスミドを0.01μg/ウェルリポフェクションした。トランスフェクション19時間後に化合物を溶解した試験培地で培地交換した。24時間インキュベートした後、培地を吸引し、Passive Lysis Bufferにて回収した。
　ホタルシイタケおよびウミシイタケルシフェラーゼはDual-Luciferase Reporter Assay System（Promega）を用い、ルミノメーターで測定した。
（SDS-PAGEおよびウェスタン・ブロット分析２）
　PC12D細胞を35 mm皿に0.67×106細胞／皿にて播種し、成長培地中2日間5% CO2インキュベーターで培養した後、薬物を24時間処置した。
　各細胞を処置した後、氷冷したPBSで洗浄した。次いで、細胞可溶化液（1 mM EDTA, 1% SDS, 10 mM NaF, 10 nMカリキュリン, 320 nMオカダ酸, 1 mMオルトバナジウム酸ナトリウム, 1 mM p-APMSF, 10μg/mLペプスタチンA, 10μg/mLアンチパイン, 10μg/mLロイペプチン, 10μg/mLキモスタチン, 10μg/mLホスホラミドン, 10 mM HEPES, pH7.5）で回収した。その後すみやかに95℃にて5分間煮沸し、タンパク質を変性させた後、DNAを超音波破砕して遠心上清をSDS-PAGE用サンプルとして調製した。
　SDS-PAGEの分離ゲルとして12.5%ゲルを用い、35 V, 10 mAにて泳動した後、ゲルからPVDF膜へタンパク質を転写し、5%スキムミルクを含むTBST（10 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, 0.05% Tween 20, pH7.4; 以下、ブロッキングバッファと称する）を用いて室温にて1時間ブロッキングした。次いで、サンプルをTBSTで洗浄し、ブロッキングバッファで1000倍に希釈した一次抗体と4℃にて一晩インキュベートした。さらにサンプルをTBSTで洗浄し、ブロッキングバッファで2000倍に希釈したHRP標識IgG抗体と室温にて1時間インキュベートし、TBSTで洗浄した。抗体陽性のバンドの検出にはECL法を用いた。リプロービングはストリッピング・バッファ（62.5 mM Tris-HCl, 2% SDS, 100 mMβ-メルカプトエタノール, pH7.4）を用いて抗体を剥がし、ブロットをTBSTで洗浄した後、内部標準タンパク質を検出した。
（統計学的解析２）
　実験結果はワンウェイANOVA（Bonferroni）を用いて評価した。有意水準を両側5%として検定し、p＜0.05を有意とした。
［試験例４］陳皮エキスのドーパミン合成促進作用
　本試験例において、本発明の陳皮エキスのパーキンソン病の症状改善作用として、ドーパミン生合成系への影響を指標にして検討した。具体的には、陳皮エキスによるチロシン・ヒドロキシラーゼ（TH）転写活性への影響についてドーパミン産生細胞であるPC12D細胞において、TH遺伝子プロモーター領域DNAレポータージーンを導入して、ルシフェラーゼ活性を測定して検討した。また、THタンパク質への影響を検討するために陳皮エキスで処置したPC12D細胞におけるTHタンパク質の発現をウェスタン・ブロット法で検討した。さらに、パーキンソン病モデルマウスにおいて黒質－線条体ドーパミン神経の変性による線条体でのドーパミン含有量の低下に対する陳皮エキスまたはノビレチンの薬効を検討するため、陳皮エキスまたはノビレチンの投与後にドーパミン含量を測定した。
［試験例４－１］PC12D細胞における陳皮エキスのTH転写活性促進作用
　8×104細胞／48ウェルプレートの密度にて増殖させたPC12D細胞を24時間培養した。細胞をルシフェラーゼレポーター構築体で19時間トランスフェクションし、次いで対照、陳皮1からの本発明の陳皮エキス（30, 60および120μg/ml）および従来の陳皮7のエキス（120μg/ml）またはノビレチン（2, 10および30μM）で24時間処理した。
　図４Ａに示されるように、PC12D細胞において、本発明の陳皮1のエキスは対照および従来の陳皮7のエキスと比較して、TH転写活性を顕著に上昇させた。また、ノビレチン換算2μMの陳皮1のエキス120μg/mlは、2μMおよび10μMのノビレチンよりも強力にTH転写活性を促進することが示された。
［試験例４－２］PC12D細胞における陳皮エキスのTH発現量上昇作用
　PC12D細胞において、THタンパク質の発現の促進作用を検討した。0.67×106細胞／皿の密度にて増殖させたPC12D細胞を48時間培養した。細胞を対照または陳皮1からの陳皮エキス（60, 120, 240および480μg/ml）で24時間処理した。抗THおよび抗PKAα抗体を用いてウェスタン・ブロット分析を行った。ブロットは、最初に抗TH抗体について調べた後、剥ぎ取り、抗PKAα抗体で再度試験して等量のタンパク質が各レーンにて電気泳動されたことを確認した。
　図４Ｂに示されるように、PC12D細胞において、陳皮エキスはTHタンパク質の発現を濃度依存的に上昇させた。
［試験例４－３］PC12D細胞における陳皮エキスのドーパミン含量上昇作用
　THがドーパミン合成の律速酵素であり、PC12D細胞がドーパミン合成分泌細胞であることから、ドーパミンの上昇作用を検討した。
　PC12D細胞を35 mm皿に1.0×106細胞／皿で播種し、増殖培地上5%CO2インキュベーター中にて24時間培養した後、陳皮1および陳皮7を添加した細胞培養液をさらに24時間培養した。その後、37℃に加温した低K+緩衝液（140 mM NaCl, 4.7 mM KCl, 1.2 mM KH2PO4, 2.5 mM CaCl2, 1.2 mM MgSO4, 11 mMグルコースおよび15 mM HEPES-Tris, pH7.4）にて細胞を洗浄し、最終濃度が0.4Nになるように過塩素酸溶液を加え、1分間超音波にて細胞を破砕した。得られた溶液を遠心分離し、電気化学検出器を用いた高速液体クロマトグラフィー法によりドーパミンを分離定量した。
　図４Ｃに示されるように、本発明の陳皮1のエキスは対照および従来の陳皮7のエキスと比較して、24時間および48時間のいずれの処置においてもドーパミン含有量を増加させた。
（考察４）
　上記試験例において、本発明の陳皮エキスはPC12D細胞にてTH転写活性、TH発現量およびドーパミン含量をいずれも濃度依存的に上昇させ、その作用は等濃度のノビレチンと比較して予想外かつ格別に強力であった。
　すなわち、本発明の陳皮エキスは、ノビレチンより顕著にドーパミン合成促進活性を示すことが明らかとなった。従来の陳皮由来のエキスでは当該活性は認められていないことから、本発明の陳皮エキスは高含有量のノビレチンとノビレチン以外の他の成分との相乗効果によりドーパミン合成促進活性を示したと考えられる。以上により本発明の陳皮エキスは、パーキンソン病治療薬としての薬効が期待される。
［試験例５］海馬神経細胞における橘皮エキスのCRE転写活性
　実施例２で得られた橘皮3から本明細書記載の方法により抽出したエキスを用いて、海馬神経細胞におけるCRE転写活性を対照およびノビレチンと比較検討した。試験手順は試験例２と同様とした。結果を図５Ａに示す。
　なお、本試験例で用いた橘皮3エキス300μg/mLには、ノビレチンが約9.4μM含まれていた。
　図５Ａに示されるように、橘皮3のエキスは対照およびノビレチンと比較して、海馬神経細胞において顕著なCRE転写活性を示した。このことから、本発明の橘皮エキスは、アルツハイマー病治療薬としての薬効が期待される。
［試験例６］橘皮エキスの学習・記憶障害改善作用（インビボ試験）
　実施例２で得られた橘皮6から本明細書記載の方法により抽出したエキスを用いて、学習・記憶障害に対する本発明の橘皮エキスの作用を検討した。試験手順は試験例３と同様とした。結果を図５Ｂおよび図５Ｃに示す。
　なお、橘皮エキス1.87 g/kgまたは3.73 g/kg（ノビレチン含量: それぞれ25 mg/kgまたは50 mg/kg）を１群ずつに、7日間連続的に経口投与した。
　図５Ｂおよび図５Ｃに示されるように、本発明の橘皮エキスの慢性投与により学習・記憶障害を有意に改善することに加え、ノビレチンでは認められない記憶の獲得および保持能力を増強することが明らかとなった。
（考察５）
　上記試験例の結果から、本発明の橘皮エキスは、アルツハイマー病治療薬としての薬効が期待される。
［試験例７］PC12D細胞における橘皮エキスのCRE転写活性
　実施例２で得られた橘皮3から本明細書記載の方法により抽出したエキスを用いて、PC12D細胞におけるCRE転写活性を対照およびノビレチンと比較検討した。試験手順は試験例２と同様とした。結果を図５Ｄに示す。
　なお、本試験例で用いた橘皮3エキス300μg/mLには、ノビレチンが約9.4μM含まれていた。
　図５Ｄに示されるように、橘皮3のエキスは対照およびノビレチンと比較して、PC12D細胞において顕著なCRE転写活性を示した。
［試験例８］PC12D細胞における橘皮エキスのTH転写活性
　実施例２で得られた橘皮3から本明細書記載の方法により抽出したエキスを用いて、PC12D細胞におけるTH転写活性を対照およびノビレチンと比較検討した。試験手順は試験例４－１と同様とした。結果を図５Ｅに示す。
　図５Ｅに示されるように、橘皮3のエキスは対照およびノビレチンと比較して、PC12D細胞において顕著なTH転写活性を示した。
［試験例９］PC12D細胞における橘皮エキスのGTPシクロヒドロラーゼI（GTP cyclohydrolase I; GCH I）量上昇作用
　PC12D細胞において、GCH I量上昇作用を検討した。GCH Iは、THに必須の補酵素テトラヒドロビオプテリン（BH4）の生合成における律速酵素である。
　PC12D細胞は120 μg/mL濃度の橘皮エキス、陳皮エキスおよびDMSO（対照）で48時間処理後、PBSで洗浄し、細胞溶解液（1 mM EDTA, 1% SDS, 10 mM HEPES, 10 mM NaF, 1 mM p-APMSF, 1 mMオルトバナジウム酸ナトリウム, 10 nMカリキュリン（calyculin）, 320 μMオカダ酸, 10 μg/mLペプスタチン（pepstatin）, 10 μg/mLアンチパイン, 10 μg/mLロイペプチン, 10 μg/mLキモスタチン（chymostatin）, 10 μg/mLホスホラミドン, 240 pMシペルメトリン）中で溶解した。その後５分間95℃で煮沸し、ソニケート後、10000 x gで10分間遠心を行い、上清を用いてSDS-PAGEを行った。10 μgサンプルをゲル濃度12.5%のゲルにアプライした。その後PVDFメンブレンに36Vで2時間転写を行い、メンブレンは5%スキムミルクで1時間ブロッキングした。その後GCH I抗体（ABBIOTEC、1000倍希釈）を用い、それぞれ4℃で一晩反応させ、洗浄後さらにペルオキシダーゼ標識抗ウサギ2次抗体（CST、2000倍希釈）と反応させ、ECL法でバンドを検出した。結果を陳皮エキスと比較して図５Ｆに示す。
　なお、本試験例で用いた橘皮エキス120μg/mLにはノビレチンが約3.76μM含まれており、陳皮エキス120μg/mLにはノビレチンが約2.02μM含まれていた。
　図５Ｆに示されるように、PC12D細胞において、橘皮エキスおよび陳皮エキスは対照に比べてGCH Iの発現量を有意に上昇させた。さらに、橘皮エキスは陳皮エキスに比べてもGCH Iの発現量を有意に上昇させた。
（考察６）
　THの活性発現に必須な補酵素BH4は、ミカエリス定数が示す量より細胞内のBH4量が高くなると、THタンパク量が上昇して、THの酵素活性が増大し、ドーパミンの合成が促進される。
　上記試験例の結果から、本発明の橘皮エキスは、GCH Iの発現量を有意に上昇させることから、THの活性発現に必須な補酵素BH4合成の律速酵素であるGCH I量を増加させることで、TH活性の増大を引き起こし、その結果として、ドーパミンの産生および分泌の促進が推測され、パーキンソン病治療薬としての薬効が期待される。
［試験例１０］海馬神経細胞におけるタチバナの葉由来エキスのCRE転写活性
　実施例２で得られたタチバナの葉1～3から本明細書記載の方法により抽出したエキスを用いて、海馬神経細胞におけるCRE転写活性を対照およびノビレチンと比較検討した。試験手順は試験例２と同様とした。結果を図６Ａに示す。
　なお、本試験例で用いたタチバナの葉1由来エキス300μg/mLにはノビレチンが約4.9μM、タチバナの葉2由来エキス300μg/mLにはノビレチンが約8.5μM、タチバナの葉3由来エキス300μg/mLにはノビレチンが約6.9μM含まれていた。
　図６Ａに示されるように、タチバナの葉由来エキスは対照およびノビレチンと比較して、海馬神経細胞において顕著なCRE転写活性を示した。
［試験例１１］PC12D細胞におけるタチバナの葉由来エキスのCRE転写活性
　実施例２で得られたタチバナの葉1～3から本明細書記載の方法により抽出したエキスを用いて、PC12D細胞におけるCRE転写活性を対照およびノビレチンと比較検討した。試験手順は試験例２と同様とした。結果を図６Ｂに示す。
　なお、本試験例で用いたタチバナの葉1由来エキス300μg/mLにはノビレチンが約4.9μM、タチバナの葉2由来エキス300μg/mLにはノビレチンが約8.5μM、タチバナの葉3由来エキス300μg/mLにはノビレチンが約6.9μM含まれていた。
　図６Ｂに示されるように、タチバナの葉由来エキスは対照およびノビレチンと比較して、PC12D細胞において顕著なCRE転写活性を示した。
（考察７）
　上記試験例の結果から、本発明のタチバナの葉由来エキスは、ノビレチン含有量から予測される活性を超えた顕著なCRE転写活性を示しており、アルツハイマー病治療薬およびパーキンソン病治療薬としての薬効が期待される。
［試験例１２］海馬神経細胞におけるオオベニミカン果皮由来エキスのCRE転写活性
　実施例２で得られたオオベニミカン1から本明細書記載の方法により抽出したエキスを用いて、海馬神経細胞におけるCRE転写活性を対照およびノビレチンと比較検討した。試験手順は試験例２と同様とした。結果を図７Ａに示す。
　なお、本試験例で用いたオオベニミカン1果皮由来エキス100μg/mLにはノビレチンが約3.4μM、300μg/mLにはノビレチンが約10.1μM含まれていた。
　図７Ａに示されるように、オオベニミカン果皮由来エキスは対照およびノビレチンと比較して、海馬神経細胞において顕著なCRE転写活性を示した。
（考察６）
　上記試験例の結果から、本発明のオオベニミカン果皮由来エキスは、ノビレチン含有量から予測される活性を超えた顕著なCRE転写活性を示しており、アルツハイマー病治療薬としての薬効が期待される。
［試験例１３］PC12D細胞におけるオオベニミカン果皮由来エキスのCRE転写活性
　実施例２で得られたオオベニミカン1から本明細書記載の方法により抽出したエキスを用いて、PC12D細胞におけるCRE転写活性を対照およびノビレチンと比較検討した。試験手順は試験例２と同様とした。結果を図７Ｂに示す。
　なお、本試験例で用いたオオベニミカン果皮由来エキス100μg/mLにはノビレチンが約3.4μM含まれていた。
　図７Ｂに示されるように、オオベニミカン果皮由来エキスは対照およびノビレチンと比較して、PC12D細胞において顕著なCRE転写活性を示した。
［試験例１４］PC12D細胞におけるオオベニミカン果皮由来エキスのTH転写活性
　実施例２で得られたオオベニミカン1から本明細書記載の方法により抽出したエキスを用いて、PC12D細胞におけるTH転写活性を対照およびノビレチンと比較検討した。試験手順は試験例４－１と同様とした。結果を図７Ｃに示す。
　なお、本試験例で用いたオオベニミカン果皮由来エキス100μg/mLにはノビレチンが約3.4μM含まれていた。
　図７Ｃに示されるように、オオベニミカン果皮由来エキスは対照およびノビレチンと比較して、PC12D細胞において顕著なTH転写活性を示した。
（考察７）
　上記試験例の結果から、本発明のオオベニミカン果皮由来エキスは、ノビレチン含有量から予測される活性を超えた顕著なCRE転写活性およびTH転写活性を示しており、パーキンソン病治療薬としての薬効が期待される。
［製造例］本発明の医薬品および食品の製造
　以下の手順により、本発明の陳皮、橘皮またはタチバナの葉を含有する医薬品または食品を製造した。
［製造例１］細粒剤Ａ
　陳皮3.0 g、トウキ3.0 g、チョウトウコウ3.0 g、センキュウ3.0 g、ビャクジュツ4.0 g、ブクリョウ4.0 g、サイコ2.0 g、カンゾウ1.5 gおよびハンゲ5.0 g（合計28.5 g）の比率で、合計量が200～800 kgになるよう生薬を配合し、水2000～8000 Lにて、60～100℃、30～180分間抽出（抽出缶）した。回転数1000～5000 rpmでろ過（遠心分離機）して固液分離した後、8 kPa以下の減圧下で濃度約10～40%まで濃縮（コイル回転型濃縮機）した。濃縮液を、回転数10000～20000 rpm、給気温度130～180℃、排気温度60～120℃で噴霧乾燥（噴霧乾燥機）し、エキス製剤（抑肝散加陳皮半夏エキス）を得た。得られた抑肝散加陳皮半夏エキス6.1 gに対し、ステアリン酸マグネシウム、トウモロコシデンプン、乳糖、プルランおよびメタケイ酸アルミン酸マグネシウムからなる添加物2.9 gの比率で、合計量が50～400 kgの範囲で配合し、4 rpm、20分間混合（容器回転型混合機）し、ロール圧490～2500 Paで成型して整粒（乾式造粒装置）し、篩30号～50号間にて粒子分級（カセットスクリーン）し、細粒剤Ａを得た。
　得られた細粒剤Ａ 9.0 gには、陳皮3.0 gと他の生薬とを配合した抑肝散加陳皮半夏エキスが6.1 g含有されており、目安として細粒剤Ａ 9.0 gを成人1日あたり２～３回に分けて服用する。
［製造例２］細粒剤Ｂ
　橘皮3.0 g、ビンロウジ4.0 g、コウボク3.0 g、ケイヒ3.0 g、ソヨウ1.5 g、カンゾウ1.0 g、ダイオウ1.0 g、ショウキョウ1.0 g、モッコウ1.0 g、ゴシュユ1.0 gおよびブクリョウ3.0 g（合計22.5 g）の比率で、合計量が200～800 kgになるよう生薬を配合し、水2000～8000 Lにて、60～100℃、30～180分間抽出（抽出缶）した。回転数1000～5000 rpmでろ過（遠心分離機）して固液分離した後、8 kPa以下の減圧下で濃度約10～40%まで濃縮（コイル回転型濃縮機）した。濃縮液を、回転数10000～20000 rpm、給気温度130～180℃、排気温度60～120℃で噴霧乾燥（噴霧乾燥機）し、エキス製剤（九味檳榔湯エキス）を得た。得られた九味檳榔湯エキス3.7 gに対し、ステアリン酸マグネシウム、トウモロコシデンプン、乳糖、プルランおよびメタケイ酸アルミン酸マグネシウムからなる添加物2.3 gの比率で、合計量が50～400 kgの範囲で配合し、4 rpm、20分間混合（容器回転型混合機）し、ロール圧490～2500 Paで成型して整粒（乾式造粒装置）し、篩30号～50号間にて粒子分級（カセットスクリーン）し、細粒剤Ｂを得た。
　得られた細粒剤Ｂ 6.0 gには、橘皮3.0 gと他の生薬とを配合した九味檳榔湯エキスが3.7 g含有されており、目安として細粒剤B 6.0 gを成人1日あたり２～３回に分けて服用する。
［製造例３］細粒剤Ｃ
　陳皮2.4 g、チョウトウコウ2.4 g、ハンゲ2.4 g、バクモンドウ2.4 g、ブクリョウ2.4 g、ニンジン1.6 g、ボウフウ1.6 g、キクカ1.6 g、カンゾウ0.8 g、ショウキョウ0.8 gおよびセッコウ4.0 g（合計22.4 g）の比率で、合計量が200～800 kgになるよう生薬を配合し、水2000～8000 Lにて、60～100℃、30～180分間抽出（抽出缶）した。回転数1000～5000 rpmでろ過（遠心分離機）して固液分離した後、8 kPa以下の減圧下で濃度約10～40%まで濃縮（コイル回転型濃縮機）した。濃縮液を、回転数10000～20000 rpm、給気温度130～180℃、排気温度60～120℃で噴霧乾燥（噴霧乾燥機）し、エキス製剤（釣藤散エキス）を得た。得られた釣藤散エキス4.48 gに対し、含水二酸化ケイ素、ステアリン酸マグネシウムおよびトウモロコシデンプンからなる添加物1.52 gの比率で、合計量が50～400 kgの範囲で配合し、4 rpm、20分間混合（容器回転型混合機）し、ロール圧490～2500 Paで成型して整粒（乾式造粒装置）し、篩30号～50号間にて粒子分級（カセットスクリーン）し、細粒剤Ｃを得た。
　得られた細粒剤Ｃ 6.0 gには、陳皮2.4 gと他の生薬とを配合した釣藤散エキスが4.48 g含有されており、目安として細粒剤Ｃ 6.0 gを成人1日あたり３回に分けて服用する。
［製造例４］茶剤
　陳皮または橘皮を850～4750μm角に切断し、切断した陳皮または橘皮3～7 gを紙または布の袋に入れて茶剤とした。
　得られた茶剤を成人1日あたり３回（１袋／回）で浸出して服用する。
［製造例５］生薬末-細粒剤Ｄ
　陳皮または橘皮を回転数2000～3500 rpm、目開き0.5～3.0 mmで粗砕（粉砕機）し、さらに回転数5000～8000 rpm、目開き150μmで粉砕（製粉機）し、生薬末とした。得られた陳皮または橘皮の生薬末10 gに対し、含水二酸化ケイ素、ステアリン酸マグネシウムおよびトウモロコシデンプンからなる添加物9.2 gの比率で、合計量が50～400 kgの範囲で配合し、回転数4 rpm、20分間混合（容器回転型混合機）し、ロール圧490～2500 Paで成型して整粒（乾式造粒装置）し、篩30号～42号間にて粒子分級（カセットスクリーン）し、細粒剤Ｄを得た。
　得られた細粒剤Ｄ 19.2 gには、陳皮または橘皮10 gが含有されており、目安として細粒剤Ｄ 19.2～38.4 gを成人1日あたり２～３回に分けて服用する。
［製造例６］煎剤
　陳皮または橘皮10～30 gを20倍量の水200～600 mLで、100℃1時間煎じて水を半量にし、ろ過して煎剤とした。
　得られた煎剤100～300 mLには、陳皮または橘皮10～30 gが含有されており、目安として煎剤100～300 mLを成人1日あたり３回に分けて服用する。
［製造例７］細粒剤Ｅ
　陳皮または橘皮50 kgを水500～2000 Lにて、60～100℃、30～180分間抽出（抽出缶）した。回転数1000～2500 rpmでろ過（遠心分離機）して固液分離した後、8 kPa以下の減圧下で濃度約10～40%まで濃縮（コイル回転型濃縮機）した。濃縮液を、回転数10000～20000 rpm、給気温度130～180℃、排気温度60～120℃で噴霧乾燥（噴霧乾燥機）し、陳皮または橘皮のエキスを得た。得られたエキス7.2 gに対し、微粒二酸化ケイ素およびショ糖脂肪酸エステルからなる添加物1.8 gの比率で、合計量が50～400 kgの範囲で配合し、回転数4 rpm、20分間混合（容器回転型混合機）し、ロール圧490～2500 Paで成型して整粒（乾式造粒装置）し、篩30号～42号間にて粒子分級（カセットスクリーン）し、細粒剤Ｅを得た。
　得られた細粒剤Ｅ 9.0 gには、陳皮または橘皮20 gに相当する陳皮エキスまたは橘皮エキスが7.2 g含有されており、目安として細粒剤Ｅ 9.0 gを成人1日あたり２～３回に分けて服用する。
［製造例８］カプセル剤
　陳皮または橘皮50 kgを水500～2000 Lにて、60～100℃、30～180分間抽出（抽出缶）した。回転数1000～2500 rpmでろ過（遠心分離機）して固液分離した後、8 kPa以下の減圧下で濃度約10～40%まで濃縮（コイル回転型濃縮機）した。濃縮液を、回転数10000～20000 rpm、給気温度130～180℃、排気温度60～120℃で噴霧乾燥（噴霧乾燥機）し、陳皮または橘皮のエキスを得た。得られたエキス10 gに対し、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、合成ケイ酸アルミニウム・ヒドロキシプロピルスターチ・結晶セルロース、トウモロコシデンプン、軽質無水ケイ酸、ステアリン酸マグネシウムおよびカルメロ－スカルシウムからなる添加物4.75 gの比率で、合計量が50～400 kgの範囲で配合し、回転数4 rpm、20分間混合（容器回転型混合機）し、ロール圧490～2500 Paで成型して整粒（乾式造粒装置）し、篩30号～42号間にて粒子分級（カセットスクリーン）し、細粒を得た。この細粒400 mgを当分野にて通常用いられる市販のカプセルに充填（カプセル充填機）し、カプセル剤を得た。
　得られたカプセル剤13個（470～480 mg／個）には、陳皮または橘皮10 gに相当する陳皮エキスまたは橘皮エキスが3.6 g含有されており、目安としてカプセル剤13～26個を成人1日あたり２～３回に分けて服用する。
［製造例９］コート錠剤
　陳皮または橘皮50 kgを水500～2000 Lにて、60～100℃、30～180分間抽出（抽出缶）した。回転数1000～2500 rpmでろ過（遠心分離機）して固液分離した後、8 kPa以下の減圧下で濃度約10～40%まで濃縮（コイル回転型濃縮機）した。濃縮液を、回転数10000～20000 rpm、給気温度130～180℃、排気温度60～120℃で噴霧乾燥（噴霧乾燥機）し、陳皮または橘皮のエキスを得た。得られたエキス10 gに対し、マルトース、乳糖、メタケイ酸アルミン酸マグネシウムおよびステアリン酸マグネシウムからなる添加物9.1 gの比率で、合計量が50～400 kgの範囲で配合し、回転数4 rpm、20分間混合（容器回転型混合機）し、回転数20～55 rpm、一次圧縮0.6 mm以上、二次圧縮0.4 mm以上で打錠（高速回転式打錠機）し、1錠350 mgの素錠を得た。ヒドロキシプロピルメチルセルロース、タルク、酸化チタンおよびカラメルからなるコーティング剤1.1 gを水／エタノール混液（3:7～10:0）に溶解または懸濁し、排気温40～55℃、流量200～400 g/mL、回転数4～6 rpmでコーティング（コーティング機）し、微量のカルナウバロウとサラシミツロウを用いて回転数1 rpm、排気温20～30℃で艶出し（コーティング機）を行い、1錠370 mgのコート錠剤とした。
　得られたコート錠剤20錠には、陳皮または橘皮10 gに相当する陳皮エキスまたは橘皮エキスが3.6 g含有されており、目安としてコート錠剤20～40錠を成人1日あたり２～３回に分けて服用する。
［製造例１０］細粒剤Ｆ
　陳皮または橘皮50 kgを水500～2000 Lにて、60～100℃、30～180分間抽出（抽出缶）した。回転数1000～2500 rpmでろ過（遠心分離機）して固液分離した後、8 kPa以下の減圧下で濃度約10～40%まで濃縮（コイル回転型濃縮機）した。濃縮液を、回転数10000～20000 rpm、給気温度130～180℃、排気温度60～120℃で噴霧乾燥（噴霧乾燥機）し、陳皮または橘皮のエキスを得た。得られたエキス10 gに対し、トウモロコシデンプン、マルトース、含水二酸化ケイ素およびステアリン酸マグネシウムからなる添加物15 gの比率で、合計量が50～400 kgの範囲で配合し、回転数4 rpm、20分間混合（容器回転型混合機）し、ロール圧490～2500 Paで成型して整粒（乾式造粒装置）し、篩30号～42号間にて粒子分級（カセットスクリーン）し、細粒剤Ｆを得た。
　得られた細粒剤Ｆ 4.5 gには、陳皮または橘皮5 gに相当する陳皮エキスまたは橘皮エキスが1.8 g含有されており、目安として細粒剤Ｆ 4.5～9.0 gを成人1日あたり２～３回に分けて服用する。
［製造例１１］顆粒剤
　陳皮または橘皮50 kgを水500～2000 Lにて、60～100℃、30～180分間抽出（抽出缶）した。回転数1000～2500 rpmでろ過（遠心分離機）して固液分離した後、8 kPa以下の減圧下で濃度約10～40%まで濃縮（コイル回転型濃縮機）した。濃縮液を、回転数10000～20000 rpm、給気温度130～180℃、排気温度60～120℃で噴霧乾燥（噴霧乾燥機）し、陳皮または橘皮のエキスを得た。得られたエキス10 gに対し、カルメロースカルシウム、含水二酸化ケイ素、メタケイ酸アルミン酸マグネシウムおよびステアリン酸マグネシウムからなる添加物40 gの比率で、合計量が50～400 kgの範囲で配合し、回転数4 rpm、20分間混合（容器回転型混合機）し、ロール圧490～2500 Paで成型して整粒（乾式造粒装置）し、篩12号～42号間にて粒子分級（カセットスクリーン）し、顆粒剤を得た。
　得られた顆粒剤18 gには、陳皮または橘皮10 gに相当する陳皮エキスまたは橘皮エキスが3.6 g含有されており、目安として顆粒剤18～36 gを成人1日あたり２～３回に分けて服用する。
［製造例１２］ゼリー剤
　陳皮または橘皮50 kgを水500～2000 Lにて、60～100℃、30～180分間抽出（抽出缶）した。回転数1000～2500 rpmでろ過（遠心分離機）して固液分離した後、8 kPa以下の減圧下で濃度約10～40%まで濃縮（コイル回転型濃縮機）した。濃縮液を、回転数10000～20000 rpm、給気温度130～180℃、排気温度60～120℃で噴霧乾燥（噴霧乾燥機）し、陳皮または橘皮のエキスを得た。得られたエキス10 gに対し、カラギナン、ローカストビーンガム、還元麦芽糖液糖、キシリトール、アップル香料、レシチンおよびクエン酸からなる添加物40 gの比率で、合計量が10～30 kgの範囲で配合し、回転数50～150 rpmで混合（混合攪拌機）し、等量の80℃以上の温水を攪拌しながら加え、15℃以下に冷却してゼリー剤とした。
　得られたゼリー剤18 gには、陳皮または橘皮10 gに相当する陳皮エキスまたは橘皮エキスが3.6 g含有されており、目安としてゼリー剤18～36 gを成人1日あたり２～３回に分けて服用する。
［製造例１３］細粒
　陳皮または橘皮50 kgを水500～2000 Lにて、60～100℃、30～180分間抽出（抽出缶）した。回転数1000～2500 rpmでろ過（遠心分離機）して固液分離した後、8 kPa以下の減圧下で濃度約10～40%まで濃縮（コイル回転型濃縮機）した。濃縮液を、回転数10000～20000 rpm、給気温度130～180℃、排気温度60～120℃で噴霧乾燥（噴霧乾燥機）し、陳皮または橘皮のエキスを得た。得られたエキス3.6 gに対し、微粒二酸化ケイ素およびショ糖脂肪酸エステルからなる添加物0.9 gの比率で、合計量が50～400 kgの範囲で配合し、回転数4 rpm、20分間混合（容器回転型混合機）し、ロール圧490～2500 Paで成型して整粒（乾式造粒装置）し、篩30号～42号間にて粒子分級（カセットスクリーン）し、細粒を得た。
　得られた細粒4.5 gには、陳皮または橘皮10 gに相当する陳皮エキスまたは橘皮エキスが3.6 g含有されており、目安として成人1日あたり細粒4.5 gを摂取する。
［製造例１４］ゼリーの素
　陳皮または橘皮50 kgを水500～2000 Lにて、60～100℃、30～180分間抽出（抽出缶）した。回転数1000～2500 rpmでろ過（遠心分離機）して固液分離した後、8 kPa以下の減圧下で濃度約10～40%まで濃縮（コイル回転型濃縮機）した。濃縮液を、回転数10000～20000 rpm、給気温度130～180℃、排気温度60～120℃で噴霧乾燥（噴霧乾燥機）し、陳皮または橘皮のエキスを得た。得られたエキス10 gに対し、レシチン、還元麦芽糖水飴、アスパルテーム、アスコルビン酸、クエン酸三ナトリウム、ゲル化剤（FG-2266、新田ゼラチン株式会社）およびオレンジ香料からなる添加物15.9 gの比率で、合計量が50～400 kgの範囲で配合し、回転数4 rpm、20分間混合（容器回転型混合機）してゼリーの素とした。
　得られたゼリーの素9.3 gには、陳皮または橘皮10 gに相当する陳皮エキスまたは橘皮エキスが3.6 g含有されており、目安として成人1日あたりゼリーの素9.3～18.6 gを摂取する。
［製造例１５］茶
　タチバナの葉を850～4750μm角に切断し、切断したタチバナの葉3～7 gを紙または布の袋に入れるか、またはそのままの状態で茶とした。
　目安として、得られた茶を成人1日あたり３回～５回（1袋または3～7 g／回）にてお湯で淹れて摂取する。
［製造例１６］ピール
　陳皮または橘皮200 gおよび食塩2 gを十分に浸る程度の水に入れ、蓋をして15分間沸騰させた後、お湯を捨て、冷水にくぐらせた。グラニュー糖200 gおよび水100 mLを混ぜ合わせて沸騰させた混合溶液に、水分をきった前記陳皮または橘皮を入れ、時々混ぜながら皮に透明感が出てくるまで煮た。蓋をせず、ごく弱火で40～50分間焦げ付かないように、時々混ぜながら煮詰めた。煮汁を除いて水分をよくきった後、熱いうちに取り出して、広げて乾かした。得られた皮にグラニュー糖20 gをまぶしてピールとした。
　得られたピール21.1 gには、陳皮または橘皮10 gが含有されており、目安として成人1日あたりピール21.1～42.2 gを摂取する。
［製造例１７］ジャム
　陳皮または橘皮100 gに100 mLのお湯（100℃）をかけ、一晩容器に入れて蒸らし、ミキサーで粉砕した。1 Lの水を加え、強火で1時間30分煮込んだ。グラニュー糖25～30 gを加え、中火で10～15分間煮込んだ後、弱火にし、グラニュー糖25～30 gを加えて溶解させた。さらに、グラニュー糖25～30 gを加えて溶解させ、70℃以下まで冷却した後、ハチミツ60 g、ペクチン1.7 gおよびアスコルビン酸1.7 gを加え攪拌してジャムとした。
　得られたジャム100 gには、陳皮または橘皮20 gが含有されており、目安として成人1日あたりジャム25～50 gを摂取する。
［製造例１８］茶
　タチバナの葉30 kgを水300 Lにて、60～100℃、5～30分間抽出（抽出缶）した。回転数1000～2500 rpmでろ過（遠心分離機）して固液分離し、ろ液に0.2 g/Lのアスコルビン酸を添加し、茶とした。
　得られた茶500 mLには、タチバナの葉5 gが含有されており、目安として成人1日あたり茶500 mLを摂取する。
　本発明の乾燥植物組織または植物組織抽出物は、アルツハイマー病およびパーキンソン病などの中枢神経変性疾患を改善する、医薬品または食品として有用であり、該疾患の有望な根本治療薬の含有成分としても利用可能である。本発明の乾燥植物組織または植物組織抽出物は特に、記憶の獲得、保持および想起能力の増強に有用である。

Claims (21)

  1. 　乾燥植物組織１００重量％に対してノビレチンを０．４重量％以上含有する、中枢神経変性疾患の改善のための柑橘類の果皮の乾燥植物組織。
  2. 　乾燥植物組織１００重量％に対してノビレチンを０．３重量％以上含有する、中枢神経変性疾患の改善のための柑橘類の葉の乾燥植物組織。
  3. 　ノビレチン／ナリルチンの含有重量比が１．０以上である、請求項１または２のいずれか記載の乾燥植物組織。
  4. 　中枢神経変性疾患がアルツハイマー病および／またはパーキンソン病である、請求項１または２のいずれか記載の乾燥植物組織。
  5. 　乾燥植物組織１００重量％に対してノビレチンを０．３～２．０重量％含有し、かつ、ノビレチン／ナリルチンの含有重量比が１．０～２３．０である、請求項４記載の乾燥植物組織。
  6. 　中枢神経変性疾患の改善がｃＡＭＰ応答配列依存的転写活性の増大、記憶の獲得、保持および想起能力の増強、チロシン・ヒドロキシラーゼ転写活性の促進、チロシン・ヒドロキシラーゼ発現量の上昇、ドーパミン合成能の促進、またはドーパミン分泌の促進によりもたらされる、請求項１または２のいずれか記載の乾燥植物組織。
  7. 　植物組織抽出物１００重量％に対してノビレチンを０．６重量％以上含有する、中枢神経変性疾患の改善のための柑橘類の植物組織抽出物。
  8. 　ノビレチン／ナリルチンの含有重量比が２．０以上である、請求項７記載の植物組織抽出物。
  9. 　請求項１または２のいずれか記載の乾燥植物組織から水抽出により得られる、請求項７記載の植物組織抽出物。
  10. 　中枢神経変性疾患がアルツハイマー病および／またはパーキンソン病である、請求項７記載の植物組織抽出物。
  11. 　植物組織抽出物１００重量％に対してノビレチンを０．６～３．０重量％含有し、かつ、ノビレチン／ナリルチンの含有重量比が２．０～１４．０である、請求項１０記載の植物組織抽出物。
  12. 　中枢神経変性疾患の改善がｃＡＭＰ応答配列依存的転写活性の増大、記憶の獲得、保持および想起能力の増強、チロシン・ヒドロキシラーゼ転写活性の促進、チロシン・ヒドロキシラーゼ発現量の上昇、ドーパミン合成能の促進、またはドーパミン分泌の促進によりもたらされる、請求項７記載の植物組織抽出物。
  13. 　柑橘類がCitrus reticulata Blanco（Rutaceae）、タチバナまたはオオベニミカンである、請求項１または２のいずれか記載の乾燥植物組織。
  14. 　柑橘類がCitrus reticulata Blanco（Rutaceae）、タチバナまたはオオベニミカンである、請求項７記載の植物組織抽出物。
  15. 　医薬品１００重量％に対して、１０～１００重量％の請求項１もしくは２のいずれか記載の乾燥植物組織または１０～９０重量％の請求項７記載の植物組織抽出物を有効成分とする、アルツハイマー病治療用医薬品。
  16. 　医薬品１００重量％に対して、１０～１００重量％の請求項１もしくは２のいずれか記載の乾燥植物組織または１０～９０重量％の請求項７記載の植物組織抽出物を有効成分とする、パーキンソン病治療用医薬品。
  17. 　請求項１または２のいずれか記載の乾燥植物組織と医薬的に許容される生薬成分とを１：５～１：１０の重量比率で配合して得られる配合物から水抽出により得られる抽出物を有効成分とする、中枢神経変性疾患の治療用医薬品。
  18. 　細粒剤、茶剤、煎剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、ゼリー剤、散剤、液剤、シロップ剤またはエキス製剤の形態である、請求項１７記載の医薬品。
  19. 　食品１００重量％に対して、１０～１００重量％の請求項１もしくは２のいずれか記載の乾燥植物組織または１０～９０重量％の請求項７記載の植物組織抽出物を含有する、中枢神経変性疾患の改善のための食品。
  20. 　中枢神経変性疾患がアルツハイマー病および／またはパーキンソン病である、請求項１９記載の食品。
  21. 　中枢神経変性疾患の改善が記憶の獲得、保持および想起能力の増強メカニズムによりもたらされる、請求項１９記載の食品。
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Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013191236A1 (ja) * 2012-06-21 2013-12-27 小太郎漢方製薬株式会社 中枢神経変性疾患の改善および／または治療用組成物
JP2014230509A (ja) * 2013-05-29 2014-12-11 要 有持 生産方法、加工方法、加工品及び茶
JP2015053939A (ja) * 2013-09-10 2015-03-23 久子 松野 みかんの果皮の加工食品
WO2015199118A1 (ja) * 2014-06-26 2015-12-30 日本ゼオン株式会社 培養細胞内のｅｒｋまたはａｋｔのリン酸化亢進方法、細胞の培養方法、およびリン酸化亢進剤
WO2016075960A1 (ja) * 2014-11-12 2016-05-19 株式会社沖縄リサーチセンター 排尿障害を予防又は改善させる医薬組成物、排尿障害関連受容体に関する拮抗剤又はその医薬組成物又は拮抗剤を用いた排尿障害を予防又は改善させる方法
JP2017214330A (ja) * 2016-06-01 2017-12-07 株式会社三協ホールディングス 医薬組成物および食品
WO2019102602A1 (ja) * 2017-11-27 2019-05-31 康 大泉 スクリーニング方法

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103479743B (zh) * 2013-01-28 2015-07-08 钱昌美 治疗老年痴呆的药物组合物及其制备方法
JP2016056149A (ja) * 2014-09-11 2016-04-21 日油株式会社 皮膚化粧料
JP6898628B2 (ja) * 2016-06-15 2021-07-07 国立大学法人広島大学 神経変性疾患治療剤
CN107648349A (zh) * 2017-10-30 2018-02-02 江西中医药大学 代代花在制备改善睡眠障碍或改善记忆力减退或治疗阿尔茨海默病药物或保健食品中的应用
KR101894491B1 (ko) * 2018-04-30 2018-09-04 주식회사 뉴트라팜텍 지각 초임계 추출물을 유효성분으로 함유하는 기억력 또는 인지 기능 개선용 조성물
CN112402409A (zh) * 2020-12-11 2021-02-26 江汉大学 橘皮素在制备抑制β分泌酶活性药物中的应用
CN115886258B (zh) * 2022-12-30 2024-07-05 上海交大昂立股份有限公司 一种改善生理性记忆力衰减的复合益生菌组合物

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002053152A1 (en) * 2001-01-08 2002-07-11 Imperial College Of Science, Technology & Medicine Composition containing flavonoids for treatment brain disorders
JP2008127325A (ja) * 2006-11-20 2008-06-05 Tokyoto Koreisha Kenkyu Fukushi Shinko Zaidan リン酸化ｍｂｐ産生促進剤

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002053152A1 (en) * 2001-01-08 2002-07-11 Imperial College Of Science, Technology & Medicine Composition containing flavonoids for treatment brain disorders
JP2008127325A (ja) * 2006-11-20 2008-06-05 Tokyoto Koreisha Kenkyu Fukushi Shinko Zaidan リン酸化ｍｂｐ産生促進剤

Non-Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DATLA KRISHNA P. ET AL.: "Short-Term Supplementation with Plant Extracts Rich in Flavonoids Protect Nigrostriatal Dopaminergic Neurons in a Rat Model of Parkinson's Disease", J AM COLL NUTR, vol. 26, no. 4, 2007, pages 341 - 349 *
HWANG SAM-LONG ET AL.: "Neuroprotective Effects of the Citrus Flavanones against H202-Induced Cytotoxicity in PC12 Cells", J AGRIC FOOD CHEM, vol. 56, no. 3, 2008, pages 859 - 864 *
NAGASE HIROYUKI ET AL.: "Nobiletin and its related flavonoids with CRE-dependent transcription-stimulating and neuritegenic activities", BIOCHEM BIOPHYS RES COMMUN, vol. 337, no. 4, 2005, pages 1330 - 1336 *
OSAKA NAOYA ET AL.: "Protective effects of the extract from AURANTII NOBILIS PERICARPIUM on NMDA receptor antagonist MK-801-induced learning and memory deficits", J PHARMACOL SCI, vol. 106, no. 1, 2008, pages 176P *
TADANOBU ITO: "Regulatory Effects of Yoku-Kan- San-Ka-Chimpi-Hange and Saiko-Ka-Ryukotsu- Borei-To on Function of the Central Nervous System in Mice", PROG MED, vol. 17, no. 4, 1997, pages 823 - 830 *
TETSUO MAEKAWA ET AL.: "Chiiki Jisei Kankitsu 'Niihime' to 'Tachibana' ni Fukumareru Flavonoid no Ganryo", KANTO TOKAI HOKURIKU NOGYO KENKYU SEIKA JOHO, vol. 2003, no. 2, 2004, pages 46 - 47 *
TORU YAMAKUNI ET AL.: "Rinsho ni Hitsuyo na Shinkei Yakuri-Kagaku Chinpi Seibun nobiletin no Ko Alzheimer's Disease Sayo", CLIN NEUROSCI, vol. 26, no. 11, 2008, pages 1178 - 1179 *
XU G.H. ET AL: "Minerals, Phenolic Compounds, and Antioxidant Capacity of Citrus Peel Extract by Hot Water", J FOOD SCI, vol. 73, no. 1, 2008, pages C11 - C18 *
YUMIKO SAKAI ET AL.: "Dokuji Brand Soshutsu no Tameno Kinosei, Hokosei ni Sugureta Kankitsu Shinhinshu no Ikusei 2) Kinosei Seibun Ko Gan'yu Keito no Soki Senbatsu Hoho no Kaihatsu (1) Nobiletin Ko Gan'yu Keito Sakushutsu no Tameno Iden Kaiseki", SAGA-KEN KAJU SHIKENJO GYOMU NENPO, vol. 2006, 2006, pages 23 - 24 *

Cited By (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPWO2013191236A1 (ja) * 2012-06-21 2016-05-26 小太郎漢方製薬株式会社 中枢神経変性疾患の改善および／または治療用組成物
WO2013191236A1 (ja) * 2012-06-21 2013-12-27 小太郎漢方製薬株式会社 中枢神経変性疾患の改善および／または治療用組成物
JP2014230509A (ja) * 2013-05-29 2014-12-11 要 有持 生産方法、加工方法、加工品及び茶
JP2015053939A (ja) * 2013-09-10 2015-03-23 久子 松野 みかんの果皮の加工食品
JP5958658B2 (ja) * 2014-06-26 2016-08-02 日本ゼオン株式会社 培養細胞内のｅｒｋまたはａｋｔのリン酸化亢進方法、細胞の培養方法、およびリン酸化亢進剤
WO2015199118A1 (ja) * 2014-06-26 2015-12-30 日本ゼオン株式会社 培養細胞内のｅｒｋまたはａｋｔのリン酸化亢進方法、細胞の培養方法、およびリン酸化亢進剤
JP2016146819A (ja) * 2014-06-26 2016-08-18 日本ゼオン株式会社 培養細胞内のｅｒｋまたはａｋｔのリン酸化亢進方法、および細胞の培養方法
JPWO2015199118A1 (ja) * 2014-06-26 2017-04-20 日本ゼオン株式会社 培養細胞内のｅｒｋまたはａｋｔのリン酸化亢進方法、細胞の培養方法、およびリン酸化亢進剤
WO2016075960A1 (ja) * 2014-11-12 2016-05-19 株式会社沖縄リサーチセンター 排尿障害を予防又は改善させる医薬組成物、排尿障害関連受容体に関する拮抗剤又はその医薬組成物又は拮抗剤を用いた排尿障害を予防又は改善させる方法
JP2017214330A (ja) * 2016-06-01 2017-12-07 株式会社三協ホールディングス 医薬組成物および食品
WO2017208868A1 (ja) * 2016-06-01 2017-12-07 株式会社三協ホールディングス 医薬組成物および食品
EP3466436A4 (en) * 2016-06-01 2020-01-01 Sankyo Holdings Co., Ltd. PHARMACEUTICAL COMPOSITION AND FOOD
WO2019102602A1 (ja) * 2017-11-27 2019-05-31 康 大泉 スクリーニング方法

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